CN116196389A

CN116196389A - 用于预防和治疗杜氏肌肉萎缩症的方法和组合物

Info

Publication number: CN116196389A
Application number: CN202211642922.3A
Authority: CN
Inventors: D·特拉维斯·威尔逊
Original assignee: Kant Biomedical Co ltd
Current assignee: Kant Biomedical Co ltd
Priority date: 2016-01-06
Filing date: 2017-01-06
Publication date: 2023-06-02
Also published as: CN116196388A; EP3895722A1; EP4085920A1; WO2017120470A1; US20190022167A1; CN109152810A; CA3010599A1; EP3399993B1; US20230109564A1; EP3399993A1; EP3399993A4; EP4233887A1; HK1257247A1

Abstract

本发明涉及用于预防和治疗杜氏肌肉萎缩症的方法和组合物。提供了肽Phe‑D‑Arg‑Phe‑Lys‑NH₂或其医药学上可接受的盐在制备用于以下的药物中的用途：(a)治疗或预防有需要个体的杜氏肌肉萎缩症(DMD)；(b)降低有需要个体的DMD风险；或(c)降低患有或疑似患有DMD的哺乳动物个体中由假性肥大症表征的渐进性肌肉萎缩症。

Description

用于预防和治疗杜氏肌肉萎缩症的方法和组合物

本申请是申请日为2017年01月06日、申请号为201780014931.9、发明名称为“用于预防和治疗杜氏肌肉萎缩症的方法和组合物”的中国专利申请的分案申请。

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年1月6日申请的美国临时申请第62/275,369号的优先权，其公开内容以全文引用的方式并入本文中。

技术领域

本发明技术大体上涉及用于预防、减缓或治疗杜氏肌肉萎缩症(Duchennemuscular dystrophy)和/或降低与杜氏肌肉萎缩症相关的一种或多种风险因子、体症或症状的严重度的组合物和方法。另外，本发明技术涉及向患有杜氏肌肉萎缩症或处于杜氏肌肉萎缩症风险的个体投与有效量的芳香族-阳离子肽，例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂。

背景技术

提供以下描述来帮助读者理解。提供的信息或引用的参考文献中没有被认为是本文公开的组合物和方法的背景技术。

肌肉萎缩症(MD)是一群不具有中枢性或周边型神经异常的遗传非发炎性但渐进性的肌肉病症。杜氏肌肉萎缩症(DMD)是影响全世界范围出生的3500个年轻男性中的1个的最常见肌肉萎缩症。DMD是由位于X染色体的短臂上的基因座Xp21处的肌缩蛋白基因中的突变造成的。肌缩蛋白编码在肌纤维的结构稳定性中发挥整合作用的427-kD蛋白质。在无肌缩蛋白的情况下，肌肉纤维易受机械损伤影响，经受坏死且最终被脂肪和结缔组织替换。

DMD是一种最终影响所有随意肌以及后期心脏肌和呼吸肌的渐进性疾病。晚期心脏纤维化可以导致共同引起死亡的输出故障和肺部充血。另外，心脏纤维化可以包括可诱导致死性心律不齐的心肌病和传导异常。罹患DMD的个体的预期平均寿命为大约25年。

尽管已在理解病症的分子基础中取得显著进展，但DMD仍为一种不可治愈的疾病。

发明内容

在一个方面，本发明提供治疗或预防DMD，和/或治疗或预防有需要个体的DMD的体症或症状的方法，其包含向所述个体投与治疗有效量的芳香族-阳离子肽，例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂或其医药学上可接受的盐，其中所述个体具有干扰肌缩蛋白的产生或功能的基因改变。在方法的一些实施例中，基因改变是肌缩蛋白的缺失、复制、移码或无义突变。在本发明技术的方法的一些实施例中，医药学上可接受的盐包含乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。

在本发明技术的方法的一些实施例中，DMD的体症或症状包括以下中的一种或多种：伴随腿部和骨盘发病的进行性近端无力、伴有宽阔步态的脊柱前凸过度、薄弱肌肥大、假性肥大(小腿和三角肌经脂肪和纤维化组织的扩大)、在疾病晚期对电刺激的肌肉收缩性减少、延缓的运动里程、渐进性不能行走、足跟跟腱挛缩、瘫痪、疲劳、包括脊柱侧凸的骨架变形、肌肉纤维变形、心肌病、充血性心脏衰竭或心律不齐、肌肉萎缩、呼吸紊乱，以及不存在膀胱或肠道功能障碍、感觉紊乱或发热性疾病。

在本发明技术的方法的一些实施例中，与正常对照个体相比，个体显示升高的肌酸磷酸激酶的血液含量。在本发明技术的方法的某些实施例中，用芳香族-阳离子肽的治疗使肌酸磷酸激酶血液含量正常化。

在方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽的投与使得与未治疗的DMD对照个体相比，肌营养相关蛋白表达量和/或活性增加。在某些实施例中，芳香族-阳离子肽的投与使得与未治疗的DMD对照个体相比，IGF-1表达量和/或活性增加。在方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽的投与使得与未治疗的DMD对照个体相比，卵泡抑素表达量和/或活性增加。

在方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽的投与使得与未治疗的DMD对照个体相比，Galgt2表达量和/或活性增加。在方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽的投与使得与未治疗的DMD对照个体相比，钙蛋白酶抑制蛋白表达量和/或活性增加。在方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽的投与使得与未治疗的DMD对照个体相比，钙蛋白酶表达量和/或活性减小。

在本发明技术的方法的一些实施例中，个体为人类。

在本发明技术的方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽经口、局部、全身性、经静脉内、皮下、经皮、离子透入、鼻内、腹膜内或肌内投与。

在本发明技术的方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽每日投与维持1周或更久。在本发明技术的方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽每日投与维持2周或更久。在本发明技术的方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽每日投与维持3周或更久。在本发明技术的方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽每日投与维持4周或更久。在本发明技术的方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽每日投与维持6周或更久。在本发明技术的方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽每日投与维持12周或更久。

在一些实施例中，除了投与芳香族-阳离子肽以外，方法进一步包含单独地、依序地或同时向个体投与选自由以下组成的群组中的一种或多种额外治疗剂：皮质类固醇、氧甲氢龙、ACE抑制剂、泊洛沙姆188(Poloxamer 188(P188))、β-阻断剂、利尿剂、血管紧张素受体阻断剂(ARB)、艾地苯醌(idebenone)、阿仑膦酸盐、钙与维生素D、沙丁胺醇、丹曲林、己酮可可碱、肉碱、辅酶Q10、肌酸、鱼油、绿茶提取物、维生素E、PTC-124(PTC治疗剂有限公司，南普莱恩菲尔德，新泽西州)、AVI-4658二氨基磷酸盐吗啉基寡聚物、硫唑嘌呤以及环孢灵。

在一些实施例中，除了投与芳香族-阳离子肽之外，方法进一步包含向个体单独地、依序地或同时投与选自由以下组成的群组的一种或多种ACE抑制剂(血管紧张素II转换酶抑制剂)：卡托普利(captopril)、阿拉普利(alacepril)、赖诺普利(lisinopril)、咪达普利(imidapril)、喹那普利(quinapril)、替莫普利(temocapril)、地拉普利(delapril)、贝那普利(benazepril)、西拉普利(cilazapril)、群多普利(trandolapril)、依那普利(enalapril)、西罗普利(ceronapril)、福辛普利(fosinopril)、吗达普利(imadapril)、莫呗普利(mobertpril)、培哚普利(perindopril)、雷米普利(ramipril)、螺普利(spirapril)、群多普利(randolapril)和这类化合物的医药学上可接受的盐。在本发明技术的方法的一些实施例中，在预防或治疗DMD方面，在芳香族-阳离子肽与ACE抑制剂之间存在协同效应。

在一些实施例中，除了投与芳香族-阳离子肽之外，方法进一步包含单独地、依序地或同时向个体投与选自由以下组成的群组的一种或多种ARB：氯沙坦(losartan)、坎地沙坦(candesartan)、维沙坦(valsartan)、依普罗沙坦(eprosartan)、替米沙坦(telmisartan)和依贝沙坦(irbesartan)。在本发明技术的方法的一些实施例中，在预防或治疗DMD方面，在芳香族-阳离子肽与ARB之间存在协同效应。

在另一方面，本发明技术提供一种降低患有或疑似患有DMD的哺乳动物个体中由假性肥大表征的渐进性肌肉萎缩症的方法，所述方法包含：向所述个体投与治疗有效量的芳香族-阳离子肽2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂或其医药学上可接受的盐。在本发明技术的方法的一些实施例中，医药学上可接受的盐包含乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。

在本发明技术的方法的一些实施例中，与正常对照个体相比，哺乳动物个体显示出肌纤维中的肌缩蛋白含量减少。在本发明技术的方法的某些实施例中，个体在肌缩蛋白基因中具有突变。在另一实施例中，个体在肌缩蛋白基因中具有缺失、复制、移码或无义突变。

在本发明技术的方法的一些实施例中，与正常对照个体相比，哺乳动物个体具有升高的肌酸磷酸激酶的血液含量。

在本发明技术的方法的一些实施例中，个体为人类。在本发明技术的方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽经口、局部、全身性、经静脉内、皮下、经皮、离子透入、鼻内、腹膜内或肌内投与。

在方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽的投与使得与未治疗的DMD对照个体相比，肌营养相关蛋白表达量和/或活性增加。在某些实施例中，芳香族-阳离子肽的投与使得与未治疗的DMD对照个体相比，IGF-1表达量和/或活性增加。在方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽的投与使得与未治疗的DMD对照个体相比，卵泡抑素表达量和/或活性增加。在方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽的投与使得与未治疗的DMD对照个体相比，Galgt2表达量和/或活性增加。在方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽的投与使得与未治疗的DMD对照个体相比，钙蛋白酶抑制蛋白表达量和/或活性增加。在方法的一些实施例中，芳香族-阳离子肽的投与使得与未治疗的DMD对照个体相比，钙蛋白酶表达量和/或活性减小。

在一个方面，本发明技术提供用于降低与正常对照个体相比肌缩蛋白表达减小的哺乳动物个体中的DMD的风险、体症或症状的方法。在一些实施例中，方法包括向个体投与治疗有效量的芳香族-阳离子肽2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂或其医药学上可接受的盐，由此使得预防或延缓DMD的一种或多种风险、体症或症状的发病。在本发明技术的方法的一些实施例中，医药学上可接受的盐包含乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。

在本发明技术的方法的某些实施例中，个体在肌缩蛋白基因中具有突变。在本发明技术的方法的一些实施例中，个体为人类。

在一些实施例中，除了投与芳香族-阳离子肽以外，方法进一步包含单独地、依序地或同时向个体投与选自由以下组成的群组中的一种或多种额外治疗剂：皮质类固醇、氧甲氢龙、ACE抑制剂、泊洛沙姆188(P188)、β-阻断剂、利尿剂、血管紧张素受体阻断剂(ARB)、艾地苯醌、阿仑膦酸盐、钙与维生素D、沙丁胺醇、丹曲林、己酮可可碱、肉碱、辅酶Q10、肌酸、鱼油、绿茶提取物、维生素E、PTC-124(PTC治疗剂有限公司，南普莱恩菲尔德，新泽西州)、AVI-4658二氨基磷酸盐吗啉基寡聚物、硫唑嘌呤以及环孢灵。

在一些实施例中，除了投与芳香族-阳离子肽之外，方法进一步包含向个体单独地、依序地或同时投与选自由以下组成的群组的一种或多种ACE抑制剂(血管紧张素II转换酶抑制剂)：卡托普利、阿拉普利、赖诺普利、咪达普利、喹那普利、替莫普利、地拉普利、贝那普利、西拉普利、群多普利、依那普利、西罗普利、福辛普利、吗达普利、莫呗普利、培哚普利、雷米普利、螺普利、群多普利和这类化合物的医药学上可接受的盐。在本发明技术的方法的一些实施例中，在降低DMD的风险、体症或症状方面，在芳香族-阳离子肽与ACE抑制剂之间存在协同效应。

在一些实施例中，除了投与芳香族-阳离子肽之外，方法进一步包含单独地、依序地或同时向个体投与选自由以下组成的群组的一种或多种ARB：氯沙坦、坎地沙坦、维沙坦、依普罗沙坦、替米沙坦和依贝沙坦。在本发明技术的方法的一些实施例中，在降低DMD的风险、体症或症状方面，在芳香族-阳离子肽与ARB之间存在协同效应。

具体实施方式

应了解，本发明技术的某些方面、模式、实施例、变型和特征在下文以各种水平的细节描述，以便提供本发明技术的基本理解。如本说明书中所使用的某些术语的定义提供在下文中。除非另外定义，否则本文中所用的所有技术和科学术语通常具有与本发明技术所属领域的一般技术人员通常所了解相同的含义。

除非内容另外明确规定，否则如本说明书和所附权利要求书所使用的单数形式“一个(种)(a/an)”和“所述(the)”包括复数形式指示物。举例来说，提及“一个细胞”包含两个或更多个细胞的组合等。

如本文中所使用，向个体“投与”药剂、药物或肽包括将化合物引入或递送到个体以执行其预期功能的任何途径。投药可以通过任何适合途径进行，包括经口、鼻内、肠胃外(经静脉内、肌肉内、腹膜内或皮下)或表面投予。投药包括自我投药和由另一者投药。

如本文所用，术语“氨基酸”包含天然存在的氨基酸和合成氨基酸，以及以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸，以及后来被修饰的那些氨基酸，例如羟基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸以及O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构(即，与氢、羧基、氨基以及R基团结合的α碳)的化合物，例如高丝氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亚砜、蛋氨酸甲基锍。这类类似物具有经修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或经修饰的肽主链，但保持与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指具有与氨基酸的一般化学结构不同的结构但以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的化合物。氨基酸在本文中可以由其通常已知的三字母符号或由IUPAC-IUB生物化学命名法委员会(BiochemicalNomenclature Commission)所推荐的单字母符号来提及。

如本文中所使用，术语“有效量”是指足以获得所需治疗性和/或防治性效果的量，例如使得DMD的一种或多种症状部分或全部改善的量。在治疗或防治性应用的情形下，在一些实施例中，向个体投与的组合物的量将取决于疾病的类型、程度和严重程度，并且取决于受试者的特征，如一般健康状况、年龄、性别、体重和耐药性。所属领域的技术人员将能够取决于这些和其它因素确定适当剂量。所述组合物还可以与一种或多种其它治疗性化合物组合投予。在本文所描述的方法中，芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐、氢氯酸盐或三氟乙酸盐)可投与具有DMD的一种或多种体症、症状或风险因子的个体，包括(但不限于)伴随腿部和骨盘发病的进行性近端无力、伴有宽阔步态的脊柱前凸过度、薄弱肌肥大、假性肥大(小腿和三角肌经脂肪和纤维化组织的扩大)、在疾病晚期对电刺激的肌肉收缩性减少、延缓的运动里程、渐进性不能行走、足跟跟腱挛缩、瘫痪、疲劳、包括脊柱侧凸的骨架变形、肌肉纤维变形、心肌病、充血性心脏衰竭或心律不齐、肌肉萎缩、呼吸紊乱，以及不存在膀胱或肠道功能障碍、感觉紊乱或发热性疾病。举例来说，芳香族-阳离子肽的“治疗有效量”包括DMD的一种或多种体症、症状或风险因子的存在、频率或严重度以最低限度被改善的含量。在一些实施例中，治疗有效量减小或改善DMD的生理学效应，和/或DMD的风险因子，和/或罹患DMD的可能性。治疗有效量可在一次或更多次投药中给予。

如本文所用，“经分离”或“经纯化”的多肽或肽是指基本上不含细胞材料或来自试剂所衍生的细胞或组织来源的其它污染多肽，或在化学合成时基本上不含化学前驱体或其它化学物质的多肽或肽。举例来说，分离的芳香族-阳离子肽将不含会干扰药剂的诊断性或治疗性用途的物质。这类干扰物质可以包括酶、激素以及其它蛋白质和非蛋白质溶解物。

如本文所使用，术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换地使用，意指包含通过肽键或修饰的肽键(即，肽电子等排物)彼此接合的两个或两个以上氨基酸的聚合物。多肽是指短链，通常被称为肽、糖肽或寡聚物，而且还指较长链，一般称为蛋白质。多肽可以含有除20种基因编码氨基酸以外的氨基酸。多肽包括通过如翻译后加工的自然过程或通过本领域中众所周知的化学修饰技术修饰的氨基酸序列。

如本文中所使用，术语“个体”和“患者”可互换地使用。

如本文所使用，术语“同时”治疗应用是指通过相同途径并且在相同时间或实质上相同的时间投与至少两种活性成分。

如本文所使用，术语“单独的”治疗应用是指在相同时间或在实质上相同的时间通过不同途径投与至少两种活性成分。

如本文所使用，术语“依序”治疗应用是指不同时间投与至少两种活性成分，投药途径相同或不同。更确切地说，依序使用是指全部投与一种活性成分，随后开始投与另一种或其它活性成分。因此，有可能经数分钟、数小时或数天投与一种活性成分，随后投与另一种或其它活性成分。在此情况下不存在同时治疗。

“协同治疗效果”是指通过至少两种治疗剂的组合产生比添加剂治疗效果高，并且超出将另外由试剂单独投药产生的治疗效果。举例来说，一种或多种治疗剂的较低剂量可用于治疗DMD，产生增加的治疗效果和减小的副作用。

如本文所使用的“治疗(Treating/treatment)”涵盖治疗个体(例如人类)的DMD，且包括：(i)抑制DMD，即，遏制其发展；(ii)缓解DMD，即，致使病症消退；(iii)减缓DMD进展；和/或(iv)抑制、缓解或减缓DMD的一种或多种症状的进展。

如本文所使用，病症或病况的“预防(prevention/preventing)”是指在统计样品中相对于未经处理的对照样品降低经处理样品的病症或病况的出现，或相对于未经处理的对照样品延迟病症或病况的一种或多种症状的开始的化合物。如本文中所使用，预防DMD包括预防或延缓DMD的起始。如本文中所使用，预防DMD亦包括还包括预防DMD的一种或多种体症或症状的复发。

还应该了解，如本文中所述的医学病况的各种处理或预防模式打算指“基本上”处理或预防，它包括全部以及小于全部的处理或预防，并且其中实现了一些生物学或医学相关结果。治疗可以是用于慢性疾病的连续长期治疗或用于治疗急性病况的单一或少时间投药。

芳香族-阳离子肽

本发明技术的芳香族-阳离子肽优选地包括通过肽键共价接合的最少三个氨基酸。

本发明技术的芳香族-阳离子肽中存在的最大氨基酸数是通过肽键共价接合的约二十个氨基酸。在一些实施例中，氨基酸总数为约十二个。在一些实施例中，氨基酸总数为约九个。在一些实施例中，氨基酸总数为约六个。在一些实施例中，氨基酸总数为约四个。

在一些方面，本发明技术提供芳香族-阳离子肽或其医药学上可接受的盐，例如乙酸盐、酒石酸盐、反丁烯二酸盐、氢氯酸盐或三氟乙酸盐。在一些实施例中，肽包含至少一个净正电荷；最少三个氨基酸；最大约二十个氨基酸；

最少净正电荷数(p_m(与氨基酸残基总数(r)之间的关系，其中3p_m为小于或等于r+1的最大数；且

最少芳香族基团数(a)与净正电荷总数(p_t)之间的关系，其中2a为小于或等于p_t+1的最大数，但当a为1时，p_t还可以1。

在一些实施例中，所述肽是由式I定义：

其中：

A和J中的一个为

且A和J中的另一个为

B、C、D、E和G各自为：

或B、C、D、E和G各自为/>

限制条件是

当f为0且J不为端基时，端基为G、E、D或C中的一个，以使得A和端基中的一个为

且

A和端基中的另一个为

R¹⁰¹为

R¹⁰²为

或氢；R¹⁰³为

R¹⁰⁴为

R¹⁰⁵为

或氢；

R¹⁰⁶为

或氢；

限制条件为当R¹⁰²、R¹⁰⁴和R¹⁰⁶相同时，则R¹⁰¹、R¹⁰³和R¹⁰⁵不相同；

其中

R¹、R²、R³、R⁴和R⁵各自独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、饱和或不饱和环烷基、环烷基烷基、芳香基、芳烷基、5或6员饱和或不饱和杂环基、杂芳香基或氨基保护基；或R¹和R²一起形成3、4、5、6、7或8员经取代或未经取代的杂环基环；

R⁶和R⁷在每次出现时独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；

R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁸、R¹⁹、R²⁰、R²¹、R²²、R²⁴、R²⁵、R²⁶、R²⁷、R²⁸、R²⁹、R³⁰、R³¹、R³²、R³³、R³⁴、R³⁵、R³⁶、R³⁷、R³⁹、R⁴⁰、R⁴¹、R⁴²、R⁴³、R⁴⁴、R⁴⁵、R⁴⁶、R⁴⁷、R⁴⁸、R⁴⁹、R⁵⁰、R⁵¹、R⁵²、R⁵⁴、R⁵⁵、R⁵⁶、R⁵⁷、R⁵⁸、R⁶⁰、R⁶¹、R⁶²、R⁶³、R⁶⁴、R⁶⁵、R⁶⁷、R⁶⁹、R⁷¹和R⁷²各自独立地为氢、氨基、酰胺基、-NO₂、-CN、-OR^a、-SR^a、-NR^aR^a、-F、-Cl、-Br、-I或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、-C(O)-烷基、-C(O)-芳香基、-C(O)-芳烷基、-C(O)₂R^a、C₁-C₄烷氨基、C₁-C₄二烷基氨基或全卤烷基；

R⁶⁶、R⁶⁸、R⁷⁰和R⁷³各自独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；

R¹⁷、R²³、R³⁸、R⁵³和R⁵⁹各自独立地为氢、-OR^a、-SR^a、-NR^aR^a、-NR^aR^b、-CO₂R^a、-(CO)NR^aR^a、-NR^a(CO)R^a、-NR^aC(NH)NH₂、-NR^a-丹酰基或经取代或未经取代的烷基、芳香基或芳烷基；

AA、BB、CC、DD、EE、FF、GG和HH各自独立地为不存在、-NH(CO)-或-CH₂-；

R^a在每次出现时独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；

R^b在每次出现时独立地为C₁-C₆亚烷基-NR^a-丹酰基或C₁-C₆亚烷基-NR^a-邻氨基苯甲酰基；

a、b、c、d、e和f各自独立地为0或1，

限制条件为a+b+c+d+e+f≥2；

g、h、k、m和n各自独立地为1、2、3、4或5；且

i、j和l各自独立地为2、3、4或5；

限制条件为

当i为4且R²³为-SR^a，或j为4且R³⁸为-SR^a，或l为4且R⁵³为-SR^a时，则-SR^a的R^a为经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；

当J为-NH₂，b和d为0，a、c、e、f为1时，则R¹⁰³为

在式I的肽的一些实施例中，

R¹、R²、R³、R⁴和R⁵各自独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；

R⁶和R⁷在每次出现时独立地为氢或甲基；

R⁸、R¹²、R¹⁸、R²²、R²⁴、R²⁸、R³³、R³⁷、R³⁹、R⁴³、R⁴⁸、R⁵²、R⁵⁴、R⁵⁸、R⁶⁰和R⁶⁴各自独立地为氢或甲基；

R¹⁰、R²⁰、R²⁶、R³⁵、R⁴¹、R⁵⁰、R⁵⁶和R⁶²各自独立地为氢或-OR^a；

R⁹、R¹¹、R¹⁹、R²¹、R²⁵、R²⁷、R³⁴、R³⁶、R⁴⁰、R⁴²、R⁴⁹、R⁵¹、R⁵⁵、R⁵⁷、R⁶¹、R⁶³、R⁶⁵、R⁶⁶、R⁶⁷、R⁶⁸、R⁶⁹、R⁷⁰、R⁷¹、R⁷²和R⁷³各自为氢；

R¹⁷、R²³、R³⁸、R⁵³和R⁵⁹各自独立地为氢、-OH、-SH、-SCH₃、-NH₂、-NHR^b、-CO₂H、-(CO)NH₂、-NH(CO)H或-NH-丹酰基；

AA、BB、CC、DD、EE、FF、GG和HH各自独立地为不存在或-CH₂-；

R^b在每次出现时独立地为亚乙基-NH-丹酰基或亚乙基-NH-邻氨基苯甲酰基。

在式I的一些实施例中，

A为

J为

B、C、D、E和G各自独立地为

或不存在；条件是当f为0时，G为/>

当e和f为0时，E为

当d、e和f为0时，D为

且当c、d、e和f为0时，C为

在式I的另一个实施例中，

A为

J为

B、C、D、E和G各自独立地为

或不存在；

条件是当f为0时，G为

当e和f为0时，E为

当d、e和f为0时，D为

且

当c、d、e和f为0时，C为

在式I的一些实施例中，R¹⁰¹、R¹⁰²、R¹⁰⁴、R¹⁰⁵和R¹⁰⁶中的至少一种为如上文所定义的碱基，且R¹⁰¹、R¹⁰³、R¹⁰⁴、R¹⁰⁵和R¹⁰⁶中的至少一种为如上文所定义的中性基。在一些这类实施例中，中性基为如上文所定义的芳香族、杂环或环烷基。在式I的一些实施例中，肽含有至少一种精氨酸，例如(但不限于)D-精氨酸，和至少一种2',6'-二甲基酪氨酸、酪氨酸或苯丙氨酸。在式I的一些实施例中，R¹⁰¹为烷基胍基。

在一些实施例中，本发明技术的肽选自表A或B中所展示的肽。

/>

/>

/>

/>

/>

/>

/>

/>

2'-甲基酪氨酸(Mmt)；二甲基酪氨酸(Dmt)；2',6'-二甲基酪氨酸(2'6'-Dmt)；

3',5'-二甲基酪氨酸(3'5'Dmt)；N,2',6'-三甲基酪氨酸(Tmt)；2'-羟基-6'-甲基酪氨酸(Hmt)；2'-甲基苯丙胺酸(Mmp)；二甲基苯丙氨酸(Dmp)

2',6'-二甲基苯丙氨酸(2',6'-Dmp)；N,2',6'-三甲基苯丙氨酸(Tmp)；2'-羟基-6'-甲基苯丙胺酸(Hmp)；环己基丙氨酸(Cha)；二氨基丁酸(Dab)；二氨基丙酸(Dap)；β-丹酰基-L-α,β-二氨基丙酸(dnsDap)；β-邻氨基苯甲酰基-L-α,β-二氨基丙酸(atnDap)；生物素bio)；正亮氨酸(Nle)；2-氨基庚酸(Ahp)；β-(6'-二甲氨基-2'-萘甲酰基)丙氨酸(Ald)；肌氨酸(Sar)

在另一个实施例中，肽是由式II定义：

其中：

K和Z中的一个为

且K和Z中的另一个为

L、M、N、P、Q、R、T、U、V、W、X和Y各自为

或L、M、N、P、Q、R、T、U、V、W、X和Y各自为/>

限制条件是

当aa为0且Z不为端基时，端基为L、M、N、P、Q、R、T、U、V、W、X或Y中的一个，以使得K和端基中的一个为

且K和端基中的另一个选自

R²⁰¹为

R²⁰²为

R²⁰³为

或氢；

R²⁰⁴为

R²⁰⁵为

R²⁰⁶为

R²⁰⁷为

或氢；

R²⁰⁸为

R²⁰⁹为

R²¹⁰为

或氢；

R²¹¹为

R²¹²为

R²¹³为

其中

R²¹⁴、R²¹⁵、R²¹⁶、R²¹⁷和R²¹⁸各自独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、饱和或不饱和环烷基、环烷基烷基、芳香基、芳烷基、5或6员饱和或不饱和杂环基、杂芳香基或氨基保护基；或R²¹⁴和R²¹⁵一起形成3、4、5、6、7或8员经取代或未经取代的杂环基环；

R²¹⁹和R²²⁰在每次出现时独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；

R²²²、R²²³、R²²⁴、R²²⁵、R²²⁶、R²²⁷、R²²⁸、R²²⁹、R²³⁰、R²³²、R²³⁴、R²³⁶、R²³⁷、R²³⁸、R²³⁹、R²⁴¹、R²⁴²、R²⁴³、R²⁴⁴、R²⁴⁵、R²⁴⁶、R²⁴⁸、R²⁴⁹、R²⁵⁰、R²⁵¹、R²⁵²、R²⁵⁴、R²⁵⁶、R²⁵⁸、R²⁵⁹、R²⁶⁰、R²⁶¹、R²⁶²、R²⁶³、R²⁶⁴、R²⁶⁶、R²⁶⁷、R²⁶⁸、R²⁶⁹、R²⁷²、R²⁷⁴、R²⁷⁵、R²⁷⁷、R²⁷⁸、R²⁷⁹、R²⁸⁰、R²⁸²、R²⁸³、R²⁸⁴、R²⁸⁵、R²⁸⁶、R²⁸⁸、R²⁸⁹、R²⁹⁰、R²⁹¹、R²⁹²、R²⁹³、R²⁹⁴、R²⁹⁵、R²⁹⁶、R²⁹⁷、R²⁹⁹、R³⁰¹、R³⁰²、R³⁰³、R³⁰⁴、R³⁰⁵、R³⁰⁷、R³⁰⁸、R³⁰⁹、R³¹⁰、R³¹¹、R³¹²、R³¹³和R³¹⁵各自独立地为氢、氨基、酰胺基、-NO₂、-CN、-OR^c、-SR^c、-NR^cR^c、-F、-Cl、-Br、-I或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、-C(O)-烷基、-C(O)-芳香基、-C(O)-芳烷基、-C(O)₂R^c、C₁-C₄烷氨基、C₁-C₄二烷基氨基或全卤烷基；

R²²¹、R²³⁵、R²⁴⁷、R²⁵³、R²⁵⁷、R²⁶⁵、R²⁷³、R²⁷⁶、R³⁰⁰、R³⁰⁶和R³¹⁴各自独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；

R²³¹、R²⁴⁰、R²⁵⁵、R²⁷⁰、R²⁷¹、R²⁸¹、R²⁸⁷、R²⁹⁸、R³¹⁶和R³¹⁷各自独立地为氢、-OR^c、-SR^c、-NR^cR^c、-NR^cR^d、-CO₂R^c、-(CO)NR^cR^c、-NR^c(CO)R^c、-NR^cC(NH)NH₂、-NR^c-丹酰基，或经取代或未经取代的烷基、芳香基或芳烷基；

JJ、KK、LL、MM、NN、QQ和RR各自独立地为不存在、-NH(CO)-或-CH₂-；

R^c在每次出现时独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；

R^d在每次出现时独立地为C₁-C₆亚烷基-NR^c-丹酰基或C₁-C₆亚烷基-NR^c-邻氨基苯甲酰基；

O、p、q、r、s、t、u、v、w、x、y、z和aa各自独立地为0或1，

限制条件为o+p+q+r+s+t+u+v+w+x+y+z+aa等于6、7、8、9、10或11；

cc为0、1、2、3、4或5；且

bb、cc、ee、ff、gg、hh、ii、jj、kk、ll、mm、nn、oo、pp和qq各自独立地为1、2、3、4或5。

在式II的肽的一些实施例中，

R²¹⁴、R²¹⁵、R²¹⁶、R²¹⁷和R²¹⁸各自独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；

R²¹⁹和R²²⁰在每次出现时独立地为氢或甲基；

R²²²、R²²³、R²²⁴、R²²⁵、R²²⁶、R²²⁷、R²²⁸、R²²⁹、R²³⁰、R²³²、R²³⁴、R²³⁶、R²³⁷、R²³⁸、R²³⁹、R²⁴¹、R²⁴²、R²⁴³、R²⁴⁴、R²⁴⁵、R²⁴⁶、R²⁴⁸、R²⁴⁹、R²⁵⁰、R²⁵¹、R²⁵²、R²⁵⁴、R²⁵⁶、R²⁵⁸、R²⁵⁹、R²⁶⁰、R²⁶¹、R²⁶²、R²⁶³、R²⁶⁴、R²⁶⁶、R²⁶⁷、R²⁶⁸、R²⁶⁹、R²⁷²、R²⁷⁴、R²⁷⁵、R²⁷⁷、R²⁷⁸、R²⁷⁹、R²⁸⁰、R²⁸²、R²⁸³、R²⁸⁴、R²⁸⁵、R²⁸⁶、R²⁸⁸、R²⁸⁹、R²⁹⁰、R²⁹¹、R²⁹²、R²⁹³、R²⁹⁴、R²⁹⁵、R²⁹⁶、R²⁹⁷、R²⁹⁹、R³⁰¹、R³⁰²、R³⁰³、R³⁰⁴、R³⁰⁵、R³⁰⁷、R³⁰⁸、R³⁰⁹、R³¹⁰、R³¹¹、R³¹²、R³¹³和R³¹⁵各自独立地为氢、甲基或-OR^c基；

R²³¹为-(CO)NR^cR^c、-OR^c或C₁-C₆烷基，任选地被羟基或甲基取代；

R²⁴⁰和R²⁵⁵各自独立地为-CO₂R^c或-NR^cR^c；

R²⁷⁰和R²⁷¹各自独立地为-CO₂R^c；

R²⁸¹为-SR^c或-NR^cR^c；

R²⁸⁷为-(CO)NR^cR^c或-OR^c；

R²⁹⁸为-NR^cR^c、-CO₂R^c或-SR^c；

R³¹⁶为-NR^cR^c；

R³¹⁷为氢或-NR^cR^c；

JJ、KK、LL、MM、NN、QQ和RR各自独立地为不存在或-CH₂-；

o、p、q、r、s、t、u、v、w、x、y、z和aa各自独立地为0或1，

限制条件为o+p+q+r+s+t+u+v+w+x+y+z+aa等于6、7、8、9、10或11；

cc为0、1、2、3、4或5；且

bb、cc、dd、ee、ff、gg、hh、ii、jj、kk、ll、mm、nn、oo、pp和qq各自独立地为1、2、3、4或5。

在式II的肽的一些实施例中，

R²²¹、R²²²、R²²³、R²²⁴、R²²⁵、R²²⁶、R²²⁷、R²²⁸、R²²⁹、R²³⁰、R²³²、R²³⁴、R²³⁵、R²³⁶、R²³⁷、R²³⁸、R²³⁹、R²⁴²、R²⁴⁴、R²⁴⁶、R²⁴⁷、R²⁴⁸、R²⁴⁹、R²⁵⁰、R²⁵¹、R²⁵²、R²⁵³、R²⁵⁴、R²⁵⁶、R²⁵⁷、R²⁵⁸、R²⁵⁹、R²⁶⁰、R²⁶²、R²⁶³、R²⁶⁴、R²⁶⁵、R²⁶⁶、R²⁶⁷、R²⁶⁸、R²⁶⁹、R²⁷²、R²⁷³、R²⁷⁴、R²⁷⁵、R²⁷⁶、R²⁷⁷、R²⁷⁸、R²⁷⁹、R²⁸⁰、R²⁸²、R²⁸³、R²⁸⁵、R²⁸⁶、R²⁸⁸、R²⁸⁹、R²⁹¹、R²⁹²、R²⁹³、R²⁹⁴、R²⁹⁶、R²⁹⁷、R²⁹⁹、R³⁰⁰、R³⁰¹、R³⁰²、R³⁰³、R³⁰⁴、R³⁰⁵、R³⁰⁶、R³⁰⁷、R³⁰⁸、R³⁰⁹、R³¹¹、R³¹²、R³¹³、R³¹⁴和R³¹⁵各自为氢；

R²⁴¹和R²⁴⁵各自独立地为氢或甲基；

R²⁴³、R²⁶¹、R²⁸⁴、R²⁹⁰、R²⁹⁵、R³¹⁰各自独立地为氢或OH；

R²³¹为-(CO)NH₂、被羟基取代的乙基，或异丙基；

R²⁴⁰和R²⁵⁵各自独立地为-CO₂H或-NH₂；

R²⁷⁰和R²⁷¹各自独立地为-CO₂H；

R²⁸¹为-SH或-NH₂；

R²⁸⁷为-(CO)NH₂或-OH；

R²⁹⁸为-NH₂、-CO₂H或-SH；

R³¹⁶为-NH₂；

R³¹⁷为氢或-NH₂；

JJ、KK、LL、MM、NN、QQ和RR各自独立地为-CH_2-；

o、p、q、r、s、t、u、v、w、x、y、z和aa各自独立地为0或1，

限制条件为o+p+q+r+s+t+u+v+w+x+y+z+aa等于6、7、8、9、10或11；

cc为0、1、2、3、4或5；且

在式II的某些实施例中，

K为

Z为

L、M、N、P、Q、R、T、U、V、W、X和Y各自独立地为

限制条件是

当aa为0且Z不为端基时,则端基为L、M、N、P、Q、R、T、U、V、W、X或Y中的一个，以使得L、M、N、P、Q、R、T、U、V、W、X或Y中的一个为

在式II的另一个实施例中，

K为

Z为

L、M、N、P、Q、R、T、U、V、W、X和Y各自独立地为

限制条件是

当aa为0且Z不为端基时，端基为L、M、N、P、Q、R、T、U、V、W、X或Y中的一个，以使得L、M、N、P、Q、R、T、U、V、W、X或Y中的一个为

在一些实施例中，式II的肽选自表C中所展示的肽。

表C
	D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Glu-Cys-Gly-NH₂
Phe-D-Arg-Phe-Lys-Glu-Cys-Gly-NH₂
	Phe-D-Arg-Dmt-Lys-Glu-Cys-Gly-NH₂
Ala-D-Phe-D-Arg-Tyr-Lys-D-Trp-His-D-Tyr-Gly-Phe
	Asp-D-Trp-Lys-Tyr-D-His-Phe-Arg-D-Gly-Lys-NH₂
D-His-Glu-Lys-Tyr-D-Phe-Arg
	D-His-Lys-Tyr-D-Phe-Glu-D-Asp-D-Asp-D-His-D-Lys-Arg-Trp-NH₂
Lys-D-Gln-Tyr-Arg-D-Phe-Trp-NH₂
	Lys-Trp-D-Tyr-Arg-Asn-Phe-Tyr-D-His-NH₂
Phe-D-Arg-Lys-Trp-Tyr-D-Arg-His
	Thr-Gly-Tyr-Arg-D-His-Phe-Trp-D-His-Lys
Trp-Lys-Phe-D-Asp-Arg-Tyr-D-His-Lys
	Val-D-Lys-His-Tyr-D-Phe-Ser-Tyr-Arg-NH₂
Gly-D-Phe-Lys-Tyr-His-D-Arg-Tyr-NH₂
	Asp-D-Trp-Lys-Tyr-D-His-Phe-Arg-D-Gly-Lys-NH₂
D-His-Lys-Tyr-D-Phe-Glu-D-Asp-D-His-D-Lys-Arg-Trp-NH₂
	H-Phe-D-Arg-Phe-Lys-Glu-Cys-Gly-NH₂
Phe-Arg-Phe-Lys-Glu-Cys-Gly
	H-D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Sar-Gly-Cys-NH₂

在另一个实施例中，肽由式III定义：

其中：

SS和XX中的一个为

且另一个为

TT、UU、VV和WW各自为

或TT、UU、VV和WW各自为/>

条件是当vv为0且uu为1时，SS和WW中的一个为/>

且SS和WW中的另一个为

R⁴⁰¹为

R⁴⁰²为

R⁴⁰³为

R⁴⁰⁴为

R⁴⁰⁵为

其中

R⁴⁰⁶、R⁴⁰⁷、R⁴⁰⁸、R⁴⁰⁹和R⁴¹⁰各自独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、饱和或不饱和环烷基、环烷基烷基、芳香基、芳烷基、5或6员饱和或不饱和杂环基、杂双环基、杂芳香基或氨基保护基；或R⁴⁰⁶和R⁴⁰⁷一起形成3员、4员、5员、6员、7员或8员经取代或未经取代的杂环基环；

R⁴⁵⁵和R⁴⁶⁰在每次出现时独立地为氢、C(O)R^e或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；

R⁴⁵⁶和R⁴⁵⁷各自独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；或R⁴⁵⁶和R⁴⁵⁷一起为C＝O；

R⁴⁵⁸和R⁴⁵⁹各自独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；或R⁴⁵⁸和R⁴⁵⁹一起为C＝O；

R⁴¹¹、R⁴¹²、R⁴¹³、R⁴¹⁴、R⁴¹⁵、R⁴¹⁸、R⁴¹⁹、R⁴²⁰、R⁴²¹、R⁴²²、R⁴²³、R⁴²⁴、R⁴²⁵、R⁴²⁶、R⁴²⁷、R⁴²⁸、R⁴²⁹、R⁴³⁰、R⁴³¹、R⁴³²、R⁴³³、R⁴³⁴、R⁴³⁵、R⁴³⁶、R⁴³⁷、R⁴³⁸、R⁴³⁹、R⁴⁴⁰、R⁴⁴¹、R⁴⁴³、R⁴⁴⁴、R⁴⁴⁵、R⁴⁴⁶、R⁴⁴⁷、R⁴⁴⁸、R⁴⁴⁹、R⁴⁵⁰、R⁴⁵¹、R⁴⁵²、R⁴⁵³和R⁴⁵⁴各自独立地为氢、氘、氨基、酰胺基、-NO₂、-CN、-OR^e、-SR^e、-NR^eR^e、-F、-Cl、-Br、-I或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、-C(O)-烷基、-C(O)-芳香基、-C(O)-芳烷基、-C(O)₂R^e、C₁-C₄烷氨基、C₁-C₄二烷基氨基或全卤烷基；

R⁴¹⁶和R⁴¹⁷各自独立地为氢、-C(O)R^e或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；

R⁴⁴²为氢、-OR^e、-SR^e、-NR^eR^e、-NR^eR^f、-CO₂R^e、-C(O)NR^eR^e、-NR^eC(O)R^e、-NR^eC(NH)NH₂、-NR^e-丹酰基或经取代或未经取代的烷基、芳香基或芳烷基；

YY、ZZ和AE各自独立地为不存在、-NH(CO)-或-CH₂-；

AB、AC、AD和AF各自独立地为不存在或C₁-C₆亚烷基；

R^e在每次出现时独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；

R^f在每次出现时独立地为C₁-C₆亚烷基-NR^e-丹酰基或C₁-C₆亚烷基-NR^e-邻氨基苯甲酰基；

rr、ss和vv各自独立地为0或1；tt和uu各自为1，限制条件为rr+ss+tt+uu+vv等于4或5；且

ww和xx各自独立地为1、2、3、4或5。

在式III的肽的一些实施例中，

R⁴⁰⁶为氢、经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；

其中R⁴⁶¹为-C₁-C₁₀亚烷基-CO₂-或-CO₂-C₁-C₁₀亚烷基-CO₂-；且

R⁴⁶²为C₁-C₁₀亚烷基或C₁-C₁₀亚烷基-CO₂-；

R⁴⁰⁷、R⁴⁰⁸、R⁴⁰⁹和R⁴¹⁰各自独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；

R⁴⁵⁵和R⁴⁶⁰各自独立地为氢、-C(O)-C₁-C₆烷基或甲基；

R⁴⁵⁶和R⁴⁵⁷各自为氢或R⁴⁵⁶和R⁴⁵⁷一起为C＝O；

R⁴⁵⁸和R⁴⁵⁹各自为氢或R⁴⁵⁸和R⁴⁵⁹一起为C＝O；

R⁴¹⁶和R⁴¹⁷各自独立地为氢或-C(O)R^e；

R⁴¹¹、R⁴¹²、R⁴¹³、R⁴¹⁴、R⁴¹⁵、R⁴¹⁸、R⁴¹⁹、R⁴²⁰、R⁴²¹、R⁴²²、R⁴⁴³、R⁴⁴⁴、R⁴⁴⁵、R⁴⁴⁶和R⁴⁴⁷各自独立地为氢、氘、甲基或-OR^e基；

R⁴²³、R⁴²⁴、R⁴²⁵、R⁴²⁶、R⁴²⁷、R⁴²⁸、R⁴²⁹、R⁴³⁰、R⁴³¹、R⁴³²、R⁴³³、R⁴³⁴、R⁴³⁵、R⁴³⁶、R⁴³⁷、R⁴³⁸、R⁴³⁹、R⁴⁴⁰、R⁴⁴¹、R⁴⁴⁸、R⁴⁴⁹、R⁴⁵⁰、R⁴⁵¹、R⁴⁵²、R⁴⁵³和R⁴⁵⁴各自独立地为氢、NR^eR^e，或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；

R⁴⁴²为-NR^eR^e；

YY、ZZ和AE各自独立地为不存在或-CH₂-；

AB、AC、AD和AF各自独立地为不存在或C₁-C₄亚烷基；

rr、ss和vv各自独立地为0或1；tt和uu各自为1

限制条件为rr+ss+tt+uu+vv等于4或5；且

ww和xx各自独立地为1、2、3、4或5。

在式III的肽的一些实施例中，

R⁴⁰⁶为

氢或甲基；

其中R⁴⁶¹为-(CH₂)₃-CO₂-、-(CH₂)₉-CO₂-或-CO₂-(CH₂)₂-CO2-且R⁴⁶²为-(CH₂)₄-CO₂-；

R⁴⁰⁷、R⁴⁰⁸、R⁴⁰⁹和R⁴¹⁰各自为氢或甲基；

R⁴⁵⁵和R⁴⁶⁰各自独立地为氢、C(O)CH₃或甲基；

R⁴⁵⁶和R⁴⁵⁷各自为氢或R⁴⁵⁶和R⁴⁵⁷一起为C＝O；

R⁴⁵⁸和R⁴⁵⁹各自为氢或R⁴⁵⁸和R⁴⁵⁹一起为C＝O；

R⁴¹⁶和R⁴¹⁷各自独立地为氢或-C(O)CH₃；

R⁴²⁶、R⁴³⁸和R⁴⁵¹各自为-N(CH₃)₂；

R⁴³⁴和R⁴⁴²各自为-NH₂；

R⁴²³、R⁴²⁴、R⁴²⁵、R⁴²⁷、R⁴²⁸、R⁴²⁹、R⁴³⁰、R⁴³¹、R⁴³²、R⁴³³、R⁴³⁵、R⁴³⁶、R⁴³⁷、R⁴³⁹、R⁴⁴⁰、R⁴⁴¹、R⁴⁴³、R⁴⁴⁴、R⁴⁴⁵、R⁴⁴⁶、R⁴⁴⁷、R⁴⁴⁸、R⁴⁴⁹、R⁴⁵⁰、R⁴⁵²、R⁴⁵³和R⁴⁵⁴各自为氢；

R⁴¹²、R⁴¹⁴、R⁴¹⁹和R⁴²¹各自独立地为氢或氘；

R⁴¹¹、R⁴¹⁵、R⁴¹⁸和R⁴²²各自独立地为氢、氘或甲基；

R⁴¹³和R⁴²⁰各自独立地为氢、氘或OR^e；

YY、ZZ和AE各自独立地为-CH₂-；

AB、AC、AD和AF各自为-CH₂-或亚丁基；

R^e在每次出现时独立地为氢或经取代或未经取代的C₁-C₆烷基；rr、ss和vv各自独立地为0或1；tt和uu各自为1

限制条件为rr+ss+tt+uu+vv等于4或5；且ww和xx各自独立地为3或4。

在式III的某些实施例中，

SS为

XX为

TT、UU、VV和WW各自独立地为

限制条件为当vv为0且uu为1时，WW为

/>

在一些实施例中，式III的肽选自表D中所展示的肽。

在一些实施例中，肽选自表E中所展示的肽。

在一些实施例中，本发明技术的芳香族-阳离子肽具有交替的芳香族和阳离子氨基酸的核心结构基序。举例来说，肽可为由以下列举的式A到F中的任一个定义的四肽：

芳香族-阳离子-芳香族-阳离子(式A)

阳离子-芳香族-阳离子-芳香族(式B)

芳香族-芳香族-阳离子-阳离子(式C)

阳离子-阳离子-芳香族-芳香族(式D)

芳香族-阳离子-阳离子-芳香族(式E)

阳离子-芳香族-芳香族-阳离子(式F)

其中，芳香族为选自由以下组成的群组的残基：Phe(F)、Tyr(Y)和Trp(W)。在一些实施例中，芳香族基团可经芳香族残基例如环己基丙氨酸(Ch)的饱和类似物取代。在一些实施例中，阳离子为选自由以下组成的群组的残基：Arg(R)、Lys(K)和His(H)。

本发明技术的芳香族-阳离子肽的氨基酸可以为任何氨基酸。如本文所使用，术语“氨基酸”用于指含有至少一个氨基和至少一个羧基的任何有机分子。在一些实施例中，至少一个氨基位于相对于羧基的α位置处。

氨基酸可以天然存在的。天然存在的氨基酸包括例如通常在哺乳动物蛋白质中发现的二十种最常见的左旋性(L,)氨基酸，即，丙氨酸(Ala、精氨酸(Arg)、天冬酰胺(Asn)、天冬氨酸(Asp)、半胱氨酸(Cys)、谷氨酰胺(Gln)谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、赖氨酸(Lys)、甲硫氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和缬氨酸(Val)。

其它天然存在的氨基酸包括例如以与蛋白质合成无关的代谢方法合成的氨基酸。举例来说，在哺乳动物代谢中在尿素制造期间合成氨基酸鸟氨酸和瓜氨酸。

适用于本发明技术中的肽可以含有一种或多种非天然存在的氨基酸。非天然存在的氨基酸可以是左旋(L-)氨基酸、右旋(D-)氨基酸或其混合物。最佳地，所述肽不具有天然存在的氨基酸。

非天然存在的氨基酸是通常不在存活生物体的正常代谢过程中合成并且不天然存在于蛋白质中的那些氨基酸。在某些实施例中，适用于本发明技术中的非天然存在的氨基酸也不能由常见蛋白酶识别。

非天然存在的氨基酸可以存在于所述肽中的任何位置。举例来说，非天然存在的氨基酸可以位于N末端、C末端或在N末端与C末端之间的任何位置。

非天然氨基酸可以例如包含烷基、芳香基或烷芳基。烷基氨基酸的一些实例包括α-氨基丁酸、β-氨基丁酸、γ-氨基丁酸、δ-氨基戊酸和ε-氨基己酸。芳香基氨基酸的一些实例包括邻氨基苯甲酸、间氨基苯甲酸和对氨基苯甲酸。烷芳基氨基酸的一些实例包括邻氨基苯基乙酸、间氨基苯基乙酸和对氨基苯基乙酸，以及γ-苯基-β-氨基丁酸。

非天然存在的氨基酸还包括天然存在的氨基酸的衍生物。天然存在的氨基酸的衍生物可以例如包括将一种或多种化学基团添加到天然存在的氨基酸中。

举例来说，可以将一种或多种化学基团添加到以下中的一种或多种中：苯丙氨酸或酪氨酸残基的芳香族环的2'、3'、4'、5'或6'位置，或色氨酸残基的苯并环的4'、5'、6'或7'位置。所述基团可以是能添加到芳香族环中的任何化学基团。这类基团的一些实例包括支链或非支链C₁-C₄烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基；C₁-C₄烷基氧基(即，烷氧基)；氨基；C₁-C₄烷基氨基；及C₁-C₄二烷基氨基(例如甲氨基、二甲氨基)；硝基；羟基；卤基(即，氟、氯、溴或碘)。天然存在的氨基酸的非天然存在的衍生物的一些特定实例包括正缬氨酸(Nva)、正亮氨酸(Nle)和羟基脯氨酸(Hyp)。

适用于本发明方法中的肽中的胺基酸的修饰的另一实例为肽的天冬氨酸或谷氨酸残基的羧基的衍生化。衍生化的一个实例是用氨或用伯胺或仲胺(例如甲胺、乙胺、二甲胺或二乙胺)进行酰胺化。衍生化的另一个实例包括用例如甲醇或乙醇进行酯化。

另一种这类修饰包括赖氨酸、精氨酸或组氨酸残基的氨基的衍生化。举例来说，这类氨基可以烷基化或酰基化。一些适合的酰基包括例如苯甲酰基或包含上述任何C₁-C₄烷基的烷酰基，如乙酰基或丙酰基。

在一些实施例中，非天然存在的氨基酸对常见蛋白酶具有抗性，且在在一些实施例中，对常见蛋白酶不敏感。对蛋白酶具有抗性或不敏感的非天然存在的氨基酸的实例包括任何上述天然存在的L-氨基酸的右旋(D-)形式，以及L-和/或D-非天然存在氨基酸。D-氨基酸通常并不出现在蛋白质中，尽管在通过除细胞的正常核糖体蛋白质合成机制外的方式合成的某些肽抗生素中发现所述D-氨基酸，如本文中所使用，但认为D-氨基酸为非天然存在的氨基酸。

为使蛋白酶敏感性最小化，适用于本发明技术的方法中的肽应具有由常见蛋白酶识别的小于五个、小于四个、小于三个或小于两个相邻L-氨基酸，无论所述氨基酸是否为天然存在的或非天然存在的。在一些实施例中，所述肽仅具有D-氨基酸，并且无L-氨基酸。

如果所述肽含有蛋白酶敏感性氨基酸序列，那么至少一个氨基酸是非天然存在的D-氨基酸，由此赋予蛋白酶抗性。蛋白酶敏感性序列的一个实例包括易于被如肽链内切酶和胰蛋白酶等常见蛋白酶裂解的两个或更多个连续碱性氨基酸。碱性氨基酸的实例包括精氨酸、赖氨酸及组氨酸。在一些实施例中，肽主链中的至少一个酰胺经烷基化，由此赋予蛋白酶抗性。

至关重要的是芳香族-阳离子肽相比于肽中的氨基酸残基总数在生理pH下具有最少的净正电荷数。在生理pH下最少的净正电荷数将在下文称为(p_m)。所述肽中氨基酸残基的总数将在下文中称为(r)。

下文论述的最少净正电荷数全部是在生理pH下。如本文所使用的术语“生理pH”是指哺乳动物身体的组织和器官的细胞中的正常pH。举例来说，人类的生理pH值通常是约7.4，但哺乳动物的正常生理pH值可以是从约7.0到约7.8的任何pH值。

通常，肽具有带正电的N末端氨基和带负电的C末端羧基。这些电荷在生理pH下彼此抵消。作为计算净电荷的实例，肽Tyr-Arg-Phe-Lys-Glu-His-Trp-D-Arg具有一个带负电的氨基酸(即，Glu)和四个带正电的氨基酸(即，两个Arg残基，一个Lys和一个His)。因此，以上肽具有三个净正电荷。

在一个实施例中，芳香族-阳离子肽在生理pH下的最少净正电荷数(p_m)与氨基酸残基总数(r)之间具有一种关系，其中3p_m是小于或等于r+1的最大数。在这个实施例中，最少净正电荷数(p_m)与氨基酸残基总数(r)之间的关系如下：

在另一个实施例中，芳香族-阳离子肽在最少净正电荷数量(p_m)与氨基酸残基总数(r)之间具有一种关系，其中2p_m是小于或等于r+1的最大数量。在这个实施例中，最少净正电荷数(p_m)与氨基酸残基总数(r)之间的关系如下：

在一个实施例中，最少净正电荷数量(p_m)与氨基酸残基总数(r)是相同的。在另一个实施例中，肽具有三个或四个氨基酸残基和最少一个净正电荷，或最少两个净正电荷或最少三个净正电荷。

重要的是芳香族-阳离子肽相较于净正电荷总数(p_t)具有最少数量的芳香族基团。最少数量的芳香族基团将在下文称为(a)。具有芳香族基团的天然存在的氨基酸包括氨基酸组氨酸、色氨酸、酪氨酸及苯丙氨酸。举例来说，六肽Lys-Gln-Tyr-D-Arg-Phe-Trp的净正电荷是二(由赖氨酸和精氨酸残基贡献)且具有三个芳香族基团(由酪氨酸、苯丙氨酸及色氨酸残基贡献)。

芳香族-阳离子肽还应当在最少芳香族基团数量(a)与在生理pH下的净正电荷总数(p_t)之间具有一种关系，其中3a是小于或等于p_t+1的最大数量，但当p_t为1时，a也可以为1。在这个实施例中，最少芳香族基团数(a)与净正电荷总数(p_t)之间的关系如下：

在另一个实施例中，芳香族-阳离子肽在最少芳香族基团数量(a)与净正电荷总数(p_t)之间具有一种关系，其中2a是小于或等于p_t+1的最大数量。在这个实施例中，最少芳香族氨基酸残基数量(a)与净正电荷总数(p_t)之间的关系如下：

在另一个实施例中，芳香族基团数量(a)与净正电荷总数(p_t)相同。

在一些实施例中，羧基，尤其是C末端氨基酸的末端羧基用例如氨进行酰胺化以形成C末端酰胺。或者，C末端氨基酸的末端羧基可以用任何伯胺或仲胺酰胺化。伯胺或仲胺可例如是烷基胺，尤其是支链或非支链C₁-C₄烷基胺，或芳香基胺。因此，在肽的C末端的氨基酸可以转化成酰胺基、N-甲酰胺基、N-乙酰胺基、N,N-二甲酰胺基、N,N-二乙酰胺基、N-甲基-N-乙酰胺基、N-苯酰胺基或N-苯基-N-乙酰胺基。

不出现在本发明技术的芳香族-阳离子肽的C末端处的天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸和谷氨酸残基的游离羧酸酯基团还可以在其出现在所述肽内时经酰胺化。在这些内部位置处的酰胺化可以用氨或上述任何伯胺或仲胺进行。

在一个实施例中，适用于本发明技术的方法中的芳香族-阳离子肽为具有两个净正电荷和至少一个芳香族氨基酸的三肽。在一特定实施例中，适用于本发明技术的方法中的芳香族-阳离子肽为具有两个净正电荷和两个芳香族氨基酸的三肽。

在一些实施例中，芳香族-阳离子肽是一种具有以下的肽：

至少一个净正电荷；

最少四个氨基酸；

最多约二十个氨基酸；

最少净正电荷数量(p_m)与氨基酸残基总数(r)之间的关系，其中3p_m是小于或等于r+1的最大数量；以及最少芳香族基团数量(a)与净正电荷总数(p_t)之间的关系，其中2a是小于或等于p_t+1的最大数量，但当a为1时，p_t也可以为1。

在一个实施例中，2p_m是小于或等于r+1的最大数量，a可以等于p_t。芳香族阳-离子肽可以为具有最少两个或最少三个正电荷的水溶性肽。

在一个实施例中，所述肽包含一种或多种非天然存在的氨基酸，例如一种或多种D-氨基酸。在一些实施例中，在C末端的氨基酸的C末端羧基被酰胺化。在某些实施例中，所述肽具有最少四个氨基酸。所述肽可具有总共约6个、总共约9个或总共约12个氨基酸。

在一个实施例中，肽在N末(即，第一个氨基酸位置)端处具有酪氨酸残基或酪氨酸衍生物。合适的酪氨酸的衍生物包括2'-甲基酪氨酸(Mmt)；2',6'-二甲基酪氨酸(2',6'-Dmt)；3',5'-二甲基酪氨酸(3',5'-Dmt)；N,2',6'-三甲基酪氨酸(Tmt)；以及2'-羟基-6'-甲基酪氨酸(Hmt)。

在一个实施例中，肽具有式Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH₂。Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH₂具有由氨基酸酪氨酸、精胺酸和赖氨酸提供三个净正电荷，并且具有由氨基酸苯丙胺酸和酪氨酸提供的两个芳香族基团。Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH₂的酪氨酸可经酪氨酸的衍生物修饰，如以2',6'-二甲基酪氨酸形式，以产生具有式2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂的化合物。2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂具有640的分子量并且在生理pH下携带净三个正电荷。2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂容易以能量独立方式渗透若干哺乳动物细胞类型的质膜(Zhao等人，《药理学实验治疗学期刊(J.Pharmacol Exp Ther.)》，304：425-432，2003)。

或者，在一些实施例中，芳香族-阳离子肽在N末端(即，氨基酸位置1)处不具有酪氨酸残基或酪氨酸的衍生物。N端处的氨基酸可以是任何天然产生的或除酪氨酸外的非天然产生的氨基酸。在一个实施例中，N末端处的氨基酸为苯丙氨酸或其衍生物。苯丙氨酸的示例性衍生物包括2'-甲基苯丙氨酸(Mmp)、2',6'-二甲基苯丙氨酸(2',6'-Dmp)、N,2',6'-三甲基苯丙氨酸(Tmp)，和2'-羟基-6'-甲基苯丙氨酸(Hmp)。

在N末端处不具有酪氨酸残基或酪氨酸的衍生物的芳香族-阳离子肽的实例为具有式Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂的肽。或者，N末端苯丙氨酸可为苯丙氨酸的衍生物，如2',6'-二甲基苯丙氨酸(2'6'-Dmp)。在一个实施例中，重新排列2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂的氨基酸序列，使得Dmt不在N末端处。这类芳香族-阳离子肽的实例为具有式D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂的肽。

本文中列出的肽的适合取代变体包括保守氨基酸取代。氨基酸可以根据其物理化学特征分组如下：

(a)非极性氨基酸：Ala(A)Ser(S)Thr(T)Pro(P)Gly(G)Cys(C)；

(b)酸性氨基酸：Asn(N)Asp(D)Glu(E)Gln(Q)；

(c)碱性氨基酸：His(H)Arg(R)Lys(K)；

(d)疏水性氨基酸：Met(M)Leu(L)Ile(I)Val(V)；以及

(e)芳香族氨基酸：Phe(F)Tyr(Y)Trp(W)。

肽中的氨基酸被同一组中的另一个氨基酸取代称为保守取代并且可以保持原始肽的物理化学特征。相比之下，肽中的氨基酸被在不同组中的另一个氨基酸取代一般更可能改变原始肽的特征。

本文中所公开的肽的氨基酸可以呈L-配置或D-配置。

所述肽可以通过本领域中众所周知的任何方法合成。以化学方式合成蛋白质的适合方法包括例如Stuart和Young在《固相肽合成(Solid Phase Peptide Synthesis)》,第二版,皮尔斯化学公司(Pierce Chemical Company)(1984)中以及在《酶学方法(MethodsEnzymol.)》,289,学术出版社(Academic Press,Inc),纽约(New York)(1997)中所描述的那些方法。

DMD

DMD是迄今为止最常见的儿童发病的肌肉萎缩症，3500个男孩中有1个患病，总发病率为每百万63个病例。这些病例中的三分之一是由于自发性突变，而其余部分是以X连锁方式遗传的。性腺嵌合占新DMD病例的大约20％。

DMD由肌缩蛋白基因中的突变造成，所述肌缩蛋白基因编码在肌纤维的结构稳定性中发挥整合作用的427-kD蛋白质。肌缩蛋白主要表达在平滑肌、心脏肌肉和骨架肌肉中，以低水平表达在大脑中。由79个外显子和8个启动子组成的肌缩蛋白基因扩散于基因组DNA的2.2百万碱基对中。缺失和复制分别造成所有肌缩蛋白的大约59％和5％突变。剩余三分之一的肌缩蛋白突变由子外显子组成，其中34％为无义突变、33％为移码，29％为剪接位点突变，且4％为错义突变。

发病机理

肌缩蛋白在肌肉中表达为由2个具有柔性杆状中心的球状头部组成的427-kD蛋白质，所述柔性杆状中心通过肌缩蛋白聚糖(dystroglycan)复合物(或与肌缩蛋白相关的醣蛋白复合物)将细胞内肌动蛋白细胞骨架连接到细胞外基质。所述蛋白质组织成包含氨基端肌动蛋白结合域、中心杆域、富含半胱氨酸域和羧基端域的4个结构域。其氨基端末端与肌原纤维的肌膜下肌动蛋白丝相互作用，而羧基端末端定富含半胱氨酸域与β-肌缩蛋白聚糖以及肌聚糖复合物的成分结合，其所有包含于肌纤维膜内。β-肌缩蛋白聚糖继而经由层粘连蛋白将整个复合物锚定到基底层。

干扰读取范围(包括过早终止密码子)的缩蛋白基因的缺失或复制产生严重地截断、完全地功能异常蛋白质产物或根本无蛋白质。肌缩蛋白蛋白质的功能性损耗引发一连串的事件，包括与肌缩蛋白相关的醣蛋白复合物的其它组分的损耗、伴随钙离子流入的肌膜分解、高含量的肌酸磷酸激酶、磷脂酶活化和最终地肌坏死。

在疾病早期阶段中的显微镜评估显示具有纤维分裂的广泛肌坏死。可以在肌肉活检体的特定侵蚀性区域中观测到坏死纤维的发炎性细胞浸润。继续存在的纤维呈现相当大的变异性且通常显示内部细胞核。随着疾病进展，死亡的肌纤维通过巨噬细胞被清除掉且被脂肪和结缔组织成分替换，将看似健康的形态递送到肌肉(假性肥大)，尤其牛犊和前臂。

临床表现

DMD的体症或症状包括以下中的一种或多种：伴随腿部和骨盘发病的进行性近端无力、伴有宽阔步态的脊柱前凸过度、薄弱肌肥大、假性肥大(小腿和三角肌经脂肪和纤维化组织的扩大)、在疾病晚期对电刺激的肌肉收缩性减少、延缓的运动里程、渐进性不能行走、足跟跟腱挛缩、瘫痪、疲劳、包含脊柱侧凸的骨架变形、肌肉纤维变形、心肌病、充血性心脏衰竭或心律不齐、肌肉萎缩、呼吸障碍，以及不存在膀胱或肠道功能障碍、感觉紊乱或发热性疾病。骨骼肌虛弱可以促成心肺併发症。由于脊椎旁肌肉不对称萎缩的脊柱侧凸变形损害肺部和胃肠功能，使个体易感染肺炎、呼吸衰竭和营养不良。由于肌缩蛋白异常或缺失的平滑肌功能障碍，以及不活动导致胃肠蠕动异常，进而造成便秘和腹泻。

DMD进展以5个阶段出现：症状发生前、早期可走动、晚期可走动、早期不能走动和晚期不能走动。

诊断

DMD可以若干方式诊断。可以在男性儿童具有渐进性对称肌肉虛弱时进行临床诊断。所述症状在年龄5岁之前显现。如果不治疗，则受影响的患者将在年龄13岁之前依赖于轮椅。

肌肉活检是用于量化肌肉肌缩蛋白量以及用于检测DMD的无症状女性携带者的重要手段。针对肌缩蛋白的杆域、羧基端和氨基端使用抗体对肌肉的免疫染色显示出在患有DMD的男孩中不存在常用的肌膜染色。

可以使用分子生物学中的各种技术检测到肌缩蛋白中的基因变异，所述技术例如直接定序分析、多重PCR放大、DNA印迹、定量PCR、多重可扩增探针杂交(MAPH)、多重连接依赖的探针(MLPA)、变性高效液相层析(dHPLC)、单条件扩增内部引物的单链构象多态性分析(SCAIP)，或变性梯度凝胶电泳。

对于剩余个体，临床发现、家族病史、肌酸磷酸激酶的血液浓度和在肌缩蛋白研究下跌的肌肉活检的组合证实了诊断。肌酸磷酸激酶通常以高浓度存在于肌肉细胞中。然而，DMD患者在疾病早期阶段期间呈现为参考范围(高达20,000mU/mL)的50-100倍的肌酸磷酸激酶含量。肌电描记术、心电图和超声心动图，以及肺监测测试可以用于确认DMD的诊断。

当前治疗

不存在针对DMD的治愈。治疗通常旨在控制症状的发病以上生活品质最大化且包括皮质类固醇(例如，泼尼松(prednisone)、地夫可特(deflazacort))、氧甲氢龙、ACE抑制剂(例如，培哚普利)、P188(泊洛沙姆188)、β-阻断剂、利尿剂、血管紧张素受体阻断剂(例如，氯沙坦)、艾地苯醌、阿仑膦酸盐、钙与维生素D、沙丁胺醇、丹曲林、己酮可可碱、肉碱、辅酶Q10、肌酸、鱼油、绿茶提取物、维生素E、PTC-124(PTC治疗剂有限公司，南普莱恩菲尔德，新泽西州)、AVI-4658二氨基磷酸盐吗啉基寡聚物、硫唑嘌呤以及环孢灵。不利的是，长期每天使用皮质类固醇可以引起体重增加、白内障、骨质疏松、高血压、多尿症、青少年期延缓、竖直生长发育不良，以及行为/睡眠问题。

物理疗法有助于维持肌肉强度、柔性和功能。骨科器具(例如矫正器和轮椅)可以改进运动性和自我照顾的能力。在睡眠期间在原位固持脚踝的形状相称可去除腿部矫正器可以推迟挛缩的发病。随着疾病进展适当的呼吸支持是至关重要的。

肌肉质量的调控剂

如成长因子(IGF-1)的胰岛素是肌肉生长的正调节剂且对肌肉前体活化和增殖具有深远的影响。在DMD的小鼠模型中IGF-1的上调呈现功能性改进、肌肉强度的恢复和纤维化减少。

肌肉抑制素的调节是保持肌肉质量和功能的另一种替代方案。肌肉抑制素是转化生长因子β(TGF-β)家族的成员且是功能性肌肉质量的强效负调节剂。卵泡抑素的过度表达抑制肌肉抑制素且显示以增加动物模型中的肌肉质量。C.Colussi等人，《基因疗法(GeneTherapy)》15:1075-1076(2008)。

位于染色体6的长臂上的基因座6q24处的肌营养相关蛋白基因共有与肌缩蛋白基因的结构和功能相似性。肌营养相关蛋白含有肌动蛋白结合N端、三重卷曲螺旋的重复中心区和由与肌缩蛋白聚糖蛋白质组分相互作用的蛋白质-蛋白质相互作用基序组成的C端。肌营养相关蛋白在神经肌肉突触和肌腱接合部处表达，其中所述肌营养相关蛋白参与突触后膜修护和乙酰胆碱受体聚类。小鼠研究提出肌营养相关蛋白可用作肌缩蛋白基因的功能性替代品且因此可用作DMD的可能治疗性替代方案。酶Galgt2的上调在动物模型中显示适用于刺激肌营养相关蛋白-醣蛋白复合物的组装。Rodino-Klapac LR等人，《神经病学档案(Arch Neurol)》，64(9):1236-41(2007)。

钙激活中性蛋白酶的抑制也可以保护肌肉质量。钙激活中性蛋白酶的活性可以通过钙蛋白酶抑制蛋白(一种钙激活中性蛋白酶的内源性抑制剂)来阻碍。钙蛋白酶抑制蛋白的表达可以在存在α2-肾上腺素促效剂的情况下增加。

治疗方法

以下论述仅借助于实例呈现，并且不旨在限制以下论述。

本发明技术的一个方面包括治疗诊断为患有DMD、疑似患有DMD，或处于患有DMD风险的个体的DMD的方法。在治疗应用中，以足以治愈或至少部分地遏制疾病症状(包括其併发症和在疾病发展中的中间病理性表现型)的量向疑似或已经患有这类疾病的个体(例如与正常对照个体相比呈现升高的肌酸磷酸激酶的血液含量的个体或含有干扰肌缩蛋白蛋白质的产生和/或功能的基因改变的个体)投与包含芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐、氢氯酸盐或三氟乙酸盐)的组合物或药剂。

患有DMD的个体可以通过本领域中已知的诊断或预测分析中任一个或其组合识别。举例来说，DMD的典型体症或症状包括(但不限于)：伴随腿部和骨盘发病的进行性近端无力、伴有宽阔步态的脊柱前凸过度、薄弱肌肥大、假性肥大(小腿和三角肌经脂肪和纤维化组织的扩大)、在疾病晚期对电刺激的肌肉收缩性减少、延缓的运动里程、渐进性不能行走、足跟跟腱挛缩、瘫痪、疲劳、包含脊柱侧凸的骨架变形、肌肉纤维变形、心肌病、充血性心脏衰竭或心律不齐、肌肉萎缩、呼吸障碍，以及不存在膀胱或肠道功能障碍、感觉紊乱或发热性疾病。

在一些实施例中，所述个体与正常对照个体相比可以呈现升高的肌酸磷酸激酶的血液含量，其可使用本领域中已知的技术测量。在一些实施例中，所述个体可以呈现一种或多种干扰肌缩蛋白的产生或功能的基因变异，所述肌缩蛋白参与肌缩蛋白相关的醣蛋白复合物的组装且与肌纤维的结构稳定性是一体的。在一个特定实施例中，基因改变为可使用本领域中已知技术检测到的肌缩蛋白的缺失、复制、移码或无义突变。

在一些实施例中，用芳香族-阳离子肽治疗的DMD个体将展示改善或除去以下症状中的一种或多种：伴随腿部和骨盘发病的进行性近端无力、伴有宽阔步态的脊柱前凸过度、薄弱肌肥大、假性肥大(小腿和三角肌经脂肪和纤维化组织的扩大)、在疾病晚期对电刺激的肌肉收缩性减少、延缓的运动里程、渐进性不能行走、足跟跟腱挛缩、瘫痪、疲劳、包含脊柱侧凸的骨架变形、肌肉纤维变形、心肌病、充血性心脏衰竭或心律不齐、肌肉萎缩，以及呼吸障碍。

在某些实施例中，与未治疗的DMD个体相比，用芳香族-阳离子肽治疗的DMD个体将展示使肌酸磷酸激酶血液含量正常化至少5％、至少10％、至少25％、至少50％、至少75％或至少90％。在某些实施例中，用芳香族-阳离子肽治疗的DMD个体将展示与在正常对照个体中观测到的肌酸磷酸激酶血液含量类似的肌酸磷酸激酶血液含量。

在方法的一些实施例中，与未治疗的DMD对照个体相比，用芳香族-阳离子肽治疗的DMD个体将展示肌营养相关蛋白表达量和/或活性增加至少5％、至少10％、至少25％、至少50％、至少75％或至少90％。在某些实施例中，与未治疗的DMD对照个体相比，用芳香族-阳离子肽治疗的DMD个体将展示IGF-1表达量和/或活性增加至少5％、至少10％、至少25％、至少50％、至少75％或至少90％。在方法的一些实施例中，与未治疗的DMD对照个体相比，用芳香族-阳离子肽治疗的DMD个体将展示卵泡抑素表达量和/或活性增加至少5％、至少10％、至少25％、至少50％、至少75％或至少90％。

在方法的一些实施例中，与未治疗的DMD对照个体相比，用芳香族-阳离子肽治疗的DMD个体将展示Galgt2表达量和/或活性增加至少5％、至少10％、至少25％、至少50％、至少75％或至少90％。在方法的一些实施例中，与未治疗的DMD对照个体相比，用芳香族-阳离子肽治疗的DMD个体将展示钙蛋白酶抑制蛋白表达量和/或活性增加至少5％、至少10％、至少25％、至少50％、至少75％或至少90％。在方法的一些实施例中，与未治疗的DMD对照个体相比，用芳香族-阳离子肽治疗的DMD个体将展示钙蛋白酶表达量和/或活性减小至少5％、至少10％、至少25％、至少50％、至少75％或至少90％。

防治方法

在一个方面，本发明技术提供一种用于预防或延缓处于患有DMD风险的个体的DMD发病或DMD症状的方法。在一些实施例中，所述个体可以在肌缩蛋白中呈现一个或多个突变，所述肌缩蛋白参与肌缩蛋白-相关的醣蛋白复合物的组装。

与正常对照个体相比处于肌酸磷酸激酶血液含量升高的风险或处于DMD风险的个体可以通过例如本领域中已知诊断或预测分析中的任一种或其组合识别。在防治应用中，以足以除去或减小风险或延缓疾病发病(包括疾病的生物化学、组织学和/或行为症状，其併发症和在疾病发展期间呈现的中间病理性表现型)的量向易患或另外处于疾病或病况(例如DMD)风险下的个体投与芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐、氢氯酸盐或三氟乙酸盐)的医药组合物或药剂。防治性芳香族-阳离子肽的投与可在疾病或失调症的症状特征的表现之前出现，使得预防疾病或失调症或另选地延迟其发展。

与正常对照个体相比处于肌酸磷酸激酶血液含量升高或DMD风险下的个体包括(但不限于)肌缩蛋白中含有突变的个体，所述肌缩蛋白参与肌缩蛋白相关醣蛋白复合物的组装。

针对治疗性和/或防治性应用，向个体投与包含芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐、氢氯酸盐或三氟乙酸盐)的组合物。在一些实施例中，肽组合物每天投与一次、两次、三次、四次或五次。在一些实施例中，肽组合物每天投与大于五次。另外地或可替代地，在一些实施例中，肽组合物每天投与、每隔一天投与投与、每隔两天投与、每隔三天投与、每隔四天投与，或每隔五天投与。在一些实施例中，肽组合物每周投与、每两周投与、每三周投与或每月投与。在一些实施例中，肽组合物投与维持一周、两周、三周、四周或五周的时间。在一些实施例中，肽投与维持六周或更久。在一些实施例中，肽投与维持十二周或更久。在一些实施例中，肽投与维持小于一年的时间。在一些实施例中，肽投与维持多于一年的时间。

在一些实施例中，用芳香族-阳离子肽治疗将预防或延缓以下症状中的一种或多种发病：伴随腿部和骨盘发病的进行性近端无力、伴有宽阔步态的脊柱前凸过度、薄弱肌肥大、假性肥大(小腿和三角肌经脂肪和纤维化组织的扩大)、在疾病晚期对电刺激的肌肉收缩性减少、延缓的运动里程、渐进性不能行走、足跟跟腱挛缩、瘫痪、疲劳、包含脊柱侧凸的骨架变形、肌肉纤维变形、心肌病、充血性心脏衰竭或心律不齐、肌肉萎缩，以及呼吸障碍。在某些实施例中，用芳香族-阳离子肽治疗的DMD个体中肌酸磷酸激酶的血液含量将类似于在健康对照个体中观测到的彼等。

在一些实施例中，用芳香族-阳离子肽治疗将使得肌营养相关蛋白表达量和/或活性相对于在未治疗的DMD对照个体中观测到的增加。在某些实施例中，用芳香族-阳离子肽治疗将使得IGF-1表达量和/或活性相对于在未治疗的DMD对照个体中观测到的增加。在一些实施例中，用芳香族-阳离子肽治疗将使得卵泡抑素表达量和/或活性相对于在未治疗的DMD对照个体中观测到的增加。

在一些实施例中，用芳香族-阳离子肽治疗将使得Galgt2表达量和/或活性相对于在未治疗的DMD对照个体中观测到的增加。在某些实施例中，用芳香族-阳离子肽治疗将使得钙蛋白酶抑制蛋白表达量和/或活性相对于在未治疗的DMD对照个体中观测到的增加。在一些实施例中，用芳香族-阳离子肽治疗将使得钙蛋白酶表达量和/或活性相对于在未治疗的DMD对照个体中观测到的减小。

芳香族-阳离子肽类治疗的生物效果的确定

在各种实施例中，进行合适的体外或体内测定以确定特定芳香族-阳离子肽类治疗的效果和其投与是否指定用于治疗。在各种实施例中，可以利用代表性动物模型执行活体外测定，以确定给定芳香族-阳离子肽类治疗是否在减少或消除DMD体症和/或症状上发挥期望的作用。在人类个体中进行测试之前，用于疗法中的化合物可以在适合动物模型系统中进行测试，包括(但不限于)大鼠、小鼠、鸡、猪、母牛、猴、兔及类似物。类似地，用于体内测试，可在向人个体投与之前使用本领域中已知的动物模型系统中的任一个。在一些实施例中，活体外或活体内测试是针对2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂，或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐、氢氯酸盐或三氟乙酸盐)的生物功能。

DMD的动物模型在本领域中为已知的，包括例如金毛猎犬肌肉萎缩症(GRMD)犬、CXMDJ比格犬、肥大性猫肌肉萎缩症(hfmd)猫和mdx小鼠。参见Spurney C.，《肌肉神经(Muscle Nerve)》44(1):8-19(2011)；Willmann R.等人，《神经肌肉疾病(NeuromuscularDisorders)》19:241-249(2009)；Partridge TA，《FEBS J》.280(17):4177-86(2013)。这类模型可以用于显示本发明技术的芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)在预防和治疗由特定基因破裂产生的病况中的生物效果，且用于确定包含给定上下文中的治疗有效量的肽的物质。

投与模式和有效剂量

可以采用本领域的普通技术人员已知的使细胞、器官或组织与本发明技术的芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐、氢氯酸盐或三氟乙酸盐)接触的任何方法。适合的方法包括体外、离体或体内方法。体内方法通常包括向哺乳动物(适当地人类)投与芳香族-阳离子肽(如上述那些)。当用于活体内疗法时，芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐、氢氯酸盐或三氟乙酸盐)以有效量(即，具有期望治疗效果的量)向个体投与。剂量和给药方案将取决于个体的感染程度、使用的特定芳香族-阳离子肽的特征(例如其治疗指数)、个体和个体的病史。

有效量可以在临床前试验和临床试验期间通过医生和临床医师熟悉的方法测定。用于所述方法的有效量的肽可通过用于投与药类化合物的多个众所周知的方法中的任一个向有需要的哺乳动物投与。所述肽可以全身性地或局部投予。

肽可调配成医药学上可接受的盐。术语“医药学上可接受的盐”意谓由碱或酸制备的可接受投与患者(如哺乳动物)的盐(例如对给定剂量方案具有可接受的哺乳动物安全性的盐)。然而，应理解所述盐未必是医药学上可接受的盐，如不打算投与患者的中间化合物的盐。医药学上可接受的盐可以衍生自医药学上可接受的无机碱或有机碱以及医药学上可接受的无机酸或有机酸。另外，当肽同时含有碱性部分(如胺、吡啶或咪唑)和酸性部分(如羧酸或四唑)时，可以形成两性离子，并且包括在如本文中所使用的术语“盐”范围内。衍生自医药学上可接受的无机碱的盐包括铵盐、钙盐、铜盐、正铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、六价锰盐、二价锰盐、钾盐、钠盐以及锌盐等。衍生自医药学上可接受的有机碱的盐包括伯胺盐、仲胺盐以及叔胺盐，包括经取代的胺、环状胺、天然存在的胺等，如精氨酸、甜菜碱、咖啡碱、胆碱、N,N'-二苯甲基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、还原葡糖胺、葡糖胺、组氨酸、海卓胺(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基还原葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因(procaine)、嘌呤、可可豆碱(theobromine)、三乙胺、三甲胺、三丙胺、缓血酸胺(tromethamine)等。衍生自医药学上可接受的无机酸的盐包括硼酸盐、碳酸盐、氢卤酸盐(氢溴酸盐、盐酸盐、氢氟酸盐或氢碘酸盐)、硝酸盐、磷酸盐、氨基磺酸盐及硫酸盐。衍生自医药学上可接受的有机酸的盐包括以下各者的盐：脂肪族羟基酸(例如柠檬酸、葡萄糖酸、乙醇酸、乳酸、乳糖酸、苹果酸及酒石酸)、脂肪族一元羧酸(例如乙酸、丁酸、甲酸、丙酸及三氟乙酸)、氨基酸(例如天冬氨酸和谷氨酸)、芳香族羧酸(例如苯甲酸、对氯苯甲酸、二苯基乙酸、龙胆酸、马尿酸及三苯基乙酸)、芳香族羟基酸(例如邻羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、1-羟基萘-2-甲酸及3-羟基萘-2-甲酸)、抗坏血酸、二羧酸(例如反丁烯二酸、顺丁烯二酸、草酸及丁二酸)、葡糖醛酸、扁桃酸、粘液酸、烟碱酸、乳清酸、双羟萘酸、泛酸、磺酸(例如苯磺酸、樟脑磺酸、乙二磺酸、乙磺酸、羟乙基磺酸、甲烷磺酸、萘磺酸萘-1,5-二磺酸、萘-2,6-二磺酸及对甲苯磺酸)、羟萘甲酸及类似物。在一些实施例中，盐为乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。

本文所述的芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐、氢氯酸盐或三氟乙酸盐)可并入到医药组合物中以用于向个体单独或组合投与以治疗或预防本文所述的病症。这类组合物通常包括活性剂和医药学上可接受的载剂。如本文所使用，术语“医药学上可接受的载剂”包括与投药相容的生理盐水、溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂，及类似物。还可以将补充活性化合物并入组合物中。

医药物组合物通常被调配成与其预定投药途径相容。投药途径的实例包括肠胃外(例如静脉内、皮内、腹膜内或皮下)、经口、吸入、透皮(表面)、眼内、离子导入疗法及透粘膜投与。用于肠胃外、皮内或皮下施用的溶液或悬浮液可以包括以下组分：无菌稀释剂，如注射用水、生理盐水溶液、非挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗细菌剂，如苯甲醇或对羟苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调整张力的药剂，如氯化钠或右旋糖。pH可以用酸或碱调整，例如盐酸或氢氧化钠。可以将非经肠制剂密封在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。为患者或治疗医师方便起见，剂量配方可在含有用于治疗过程(例如7天的治疗)所有必需设备(例如药物的小瓶、稀释剂的小瓶、针筒和针)的套件中提供。

适合于注射使用的医药物组合物可以包括用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌水溶液(在水溶性情况下)或分散液和无菌粉末。对于静脉内投药，适合的载剂包括生理盐水、抑菌水、Cremophor EL^TM(新泽西州派西派尼的巴斯夫(BASF,Parsippany,N.J.))或磷酸盐缓冲胜利盐水(PBS)。在所有情况下，供肠胃外投与的组合物必须是无菌的并且其流动性应当使得容易注射。它应当在制造和存储条件下稳定并且必须被保存以免微生物(如细菌和真菌)的污染活动。

芳香族-阳离子肽组合物可以包括载剂(其可为含有例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇和液体聚乙二醇等)的溶剂或分散介质)和其合适的混合物。可以例如通过使用涂层(如卵磷脂)、在分散液情况下通过维持所需粒度以及通过使用表面活性剂来维持适当流动性。微生物活动的预防可以通过各种抗细菌和抗真菌化合物实现，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞及类似物。可以包括谷胱甘肽和其它抗氧化剂以防止氧化。在许多情况下，有利的在组合物中包括等张剂，例如糖、多元醇(如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)实现。

无菌可注射溶液可以通过如下方法来制备：视需要将所需量的活性化合物与上文列举的成分中的一种或其组合并入适当溶剂中，接着过滤灭菌。通常，通过将活性化合物并入含有碱性分散介质和来自上文所列举的那些成分的所需其它成分的无菌媒剂中来制备分散液。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，典型的制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，由此可以得到活性成分加上来自其先前经无菌过滤的溶液的任何其它期望成分的粉末。

口服组合物一般包括惰性稀释剂或可食用载剂。出于经口治疗性投与的目的，活性化合物可以结合有赋形剂并且以锭剂、糖衣锭或胶囊(例如明胶胶囊)形式使用。口服组合物还可以使用流体载剂来制备以便用作漱口剂。可以包括医药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料作为组合物的一部分。锭剂、丸剂、胶囊、糖衣锭等可以含有以下成分或具有类似性质的化合物中的任一者：粘合剂，如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，如淀粉或乳糖；崩解剂，如海藻酸、普利莫吉尔(Primogel)或玉米淀粉；润滑剂，如硬脂酸镁或斯特罗特斯(Sterotes)；滑动剂，如胶状二氧化硅；甜味剂，如蔗糖或糖精；或调味剂，如胡椒薄荷、水杨酸甲酯或橙调味剂。

对于通过吸入投药，化合物可以气雾剂喷雾形式由含有适合推进剂(例如气体，如二氧化碳)的加压容器或分配器，或者由喷雾器递送。这类方法包括描述于美国专利第6,468,798号中的那些。

如本文中所述的治疗性化合物也可以通过经粘膜或经皮方式全身投与。关于经粘膜或经皮投药，在调配物中使用适于渗透屏障的渗透剂。这类渗透剂在所属领域中通常已知，并且对于经粘膜投药来说，包括例如清洁剂、胆汁盐以及梭链孢酸衍生物。经粘膜投药可以通过使用鼻喷雾实现。如所属领域中通常已知，对于经皮投药来说，活性化合物调配成软膏、药膏、凝胶或乳膏。在一个实施例中经透皮投药可以通过离子导入疗法进行。

治疗蛋白或肽可在载剂系统中调配。载剂可以是一种胶态系统。胶态系统可以是脂质体、磷脂双层媒剂。在一个实施例中，治疗肽被囊封在脂质体中，同时保持肽的完整性。本领域技术人员应理解，存在多种制备脂质体的方法。(参见Lichtenberg,等人，《生物化学分析方法(Methods Biochem.Anal.)》,33:337-462(1988)；Anselem等人，《脂质体技术(Liposome Technology)》,CRC出版(1993))。脂质体调配物可以延迟清除且增加细胞吸收(参见Reddy，《药物疗法年鉴(Ann.Pharmacother)》,34(7-8):915-923(2000))。活性剂还可以装载到由医药学上可接受的成分制备的颗粒中，包括(但不限于)可溶性、不溶性、可渗透、不可渗透、可生物降解或胃滞留聚合物或脂质体。这类颗粒包括(但不限于)纳米颗粒、可生物降解的纳米颗粒、微米颗粒、可生物降解的微米颗粒、纳米球、可生物降解的纳米球、微米球、可生物降解的微米球、胶囊、乳液、脂质体、胶束及病毒载体系统。

载剂还可以是一种聚合物，例如可生物降解的生物相容性聚合物基质。在一个实施例中，治疗肽可以包埋于聚合物基质中，同时维持蛋白质完整性。所述聚合物可以是天然的，如多肽、蛋白质或多糖，或是合成的，如聚α-羟基酸。实例包括由例如胶原蛋白、纤维结合蛋白、弹性蛋白、乙酸纤维素、硝酸纤维素、多糖、纤维蛋白、明胶及其组合制成的载剂。在一个实施例中，所述聚合物是聚乳酸(PLA)或共聚乳酸/乙醇酸(PGLA)。聚合物基质可以制备及分离成多种形式和大小，包括微米球和纳米球。聚合物调配物可以使治疗效果的持续时间延长。(参见Reddy,《药物疗法年鉴(Ann.Pharmacother)》,34(7-8):915-923(2000))。人类生长激素(hGH)的聚合物调配物已经用于临床试验中。(参见Kozarich和Rich,《化学生物学(Chemical Biology)》,2:548-552(1998))。

聚合物微球持续释放调配物的实例描述于PCT公开案WO 99/15154(Tracy等人)、美国专利第5,674,534号和第5,716,644号(Zale等人)PCT公开案WO 96/40073(Zale等人)以及PCT公开案WO 00/38651(Shah等人)中。美国专利第5,674,534号和第5,716,644号以及PCT公开案WO 96/40073描述一种含有稳定防止与盐聚集的促红细胞生成素颗粒的聚合基质。

在一些实施例中，治疗性化合物是用会保护治疗性化合物免于从体内快速消除的载剂来制备，如控制释放调配物，包括植入剂和微封装的递送系统。可以使用生物可降解的生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯以及聚乳酸。这类调配物可以使用已知技术制备。这些材料还可以在商业上从例如西安杨森制药有限公司(Alza Corporation)和诺瓦制药公司(Nova Pharmaceuticals,Inc.)获得。脂质体悬浮液(包括靶向具有针对细胞特异性抗原的单克隆抗体的特异性细胞的脂质体)也可用作医药学上可接受的载剂。这些物质可根据所属领域的技术人员已知的方法制备，例如如美国专利第4,522,811号中所描述。

治疗性化合物还可以调配用于增强细胞内递送。举例来说，脂质体递送系统是本领域中已知的，参见例如，Chonn和Cullis,“脂质体药物递送系统研究进展(RecentAdvances in Liposome Drug Delivery Systems)”,《生物技术新见(Current Opinion inBiotechnology)》6:698-708(1995)；Weiner,“用于蛋白质递送的脂质体：选择制造和开发方法(Liposomes for Protein Delivery:Selecting Manufacture and DevelopmentProcesses)”,《免疫方法(Immunomethods)》,4(3):201-9(1994)；以及Gregoriadis,“用于药物递送的工程改造的脂质体：进展及问题(Engineering Liposomes for DrugDelivery:Progress and Problems)”,《生物技术趋势(Trends Biotechnol.)》,13(12):527-37(1995)。Mizguchi等人,《癌症快报(Cancer Lett.)》,100:63-69(1996)描述了在体内和体外使用膜融合脂质体将蛋白质递送到细胞。

任何治疗剂的剂量、毒性及疗效可以通过细胞培养或实验动物中的标准制药程序，例如通过测定LD50(群体中50％死亡的剂量)和ED50(对于群体中50％治疗有效的剂量)来测定。毒性与治疗作用之间的剂量比为治疗指数并且它可以表示为比率LD50/ED50。呈现高治疗指数的化合物为有利的。尽管可以使用展现毒副作用的化合物，但应小心设计递送系统，由此使这类化合物靶向受影响组织的部位，以便使对于未感染细胞的潜在损害降到最低并且由此降低副作用。

从细胞培养分析和动物研究获得的数据可以用于调配适用于人类的多种剂量。这类化合物的剂量可在包括ED50在内的循环浓度范围内，并且具有极低毒性或无毒性。剂量可以根据所用剂型和所用投与路径而在这个范围内变化。关于所述方法中所用的任何化合物，治疗有效剂量最初可以细胞培养分析估计。可在动物模型中调配剂量以获得如在细胞培养中所测定的包括IC50(即，测试化合物实现症状的半数最大抑制的浓度)的循环血浆浓度范围。这类信息可用于准确地确定人类适用剂量。可以例如通过高效液相色谱法(HPLC)测量血浆中的含量。

典型地，足以实现治疗性或防治性效果的芳香族-阳离子肽的有效量介于每天每千克体重约0.000001毫克到每天每千克体重约10,000毫克内。合适地，剂量范围是每天每千克体重约0.0001mg到每天每千克体重约100mg。举例来说，剂量可以是每天、每两天或每三天每千克体重1mg或每千克体重10mg，或在每周、每两周或每三周1-10mg/kg范围内。在一个实施例中，肽的单次剂量在每千克体重0.001-10,000微克的范围内。在一个实施例中，载剂中的芳香族-阳离子肽浓度在0.2到2000微克/递送的毫升范围内。示范性治疗方案需要一天一次或一周一次投药。在治疗性应用中，有时需要以相对较短的时间间隔的相对较高的剂量直到疾病进展减小或终止为止，或直到个体显示疾病症状的部分或完全改善为止。其后，可按预防性方案投与患者。

在一些实施例中，芳香族-阳离子肽的治疗有效量可被定义为在10^-12到10^-6摩尔例如大约10^-7摩尔的目标组织肽的浓度。此浓度可通过0.001mg/kg到100mg/g全身剂量或以体表面积计的等效剂量递送。将优化剂量的计划表以维持目标组织的治疗浓度，如通过每日或每周一次投药，而且包括连续投药(例如不经肠灌注或经皮施加)。

熟练技术人员应理解，某些因素可能影响有效治疗个体所需的剂量和时间安排，包括(但不限于)疾病或病症的严重程度、先前治疗、个体的一般健康状况和/或年龄，以及存在的其它疾病。此外，用治疗有效量的本文所描述的治疗组合物治疗个体可以包括单一治疗或一系列治疗。

根据本发明方法治疗的哺乳动物可以是任何哺乳动物，包括例如农畜，如绵羊、猪、母牛及马；宠物，如狗和猫；实验动物，如大鼠、小鼠及兔。在一些实施例中，哺乳动物是人类。

与芳香族-阳离子肽的组合疗法

在一些实施例中，芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐、氢氯酸盐或三氟乙酸盐)可与一种或多种额外治疗剂组合用于预防或治疗DMD。额外治疗剂包括(但不限于)：皮质类固醇、氧甲氢龙(Oxandrolone)、ACE抑制剂、泊洛沙姆188(Poloxamer 188(P188))、β-阻断剂、利尿剂、血管收缩素受体阻断剂(ARB)、艾地苯醌(idebenone)、阿仑膦酸盐(alendronate)、钙与维生素D、沙丁胺醇(albuterol)、丹曲林(dantrolene)、己酮可可碱(pentoxifylline)、肉碱(carnitine)、辅酶Q10、肌酸、鱼油、绿茶提取物、、PTC-124、AVI-4658二氨基磷酸盐吗啉基寡聚物、硫唑嘌呤以及环孢灵。

在一些实施例中，皮质类固醇选自由泼尼松和地夫可特组成的群组。在一些实施例中，ACE抑制剂选自由以下组成的群组：卡托普利、阿拉普利、赖诺普利、咪达普利、喹那普利、替莫普利、地拉普利、贝那普利、西拉普利、群多普利、依那普利、西罗普利、福辛普利、吗达普利、莫呗普利、培哚普利、雷米普利、螺普利、群多普利和此类化合物的药学上可接受的盐。在一些实施例中，ARB选自由以下组成的群组：氯沙坦、坎地沙坦、维沙坦、依普罗沙坦、替米沙坦和依贝沙坦。

在一个实施例中，额外治疗剂与阳离子肽组合向个体投与，使得产生协同治疗效果。举例来说，肽与一种或多种额外治疗剂一起投与用于预防或治疗DMD将具有比预防或治疗疾病中更大的添加剂效应。因此，任何个别治疗剂中的一种或多种的较低剂量可用于治疗或预防DMD，使得治疗效果增加且副作用减小。在一些实施例中，芳香族-阳离子肽与选自由以下组成的群组的一种或多种额外治疗剂组合投与以使得在预防或治疗DMD产生协同效应：皮质类固醇、氧甲氢龙、ACE抑制剂、泊洛沙姆188(P188)、β-阻断剂、利尿剂、ARB、艾地苯醌、阿仑膦酸盐、钙与维生素D、沙丁胺醇、丹曲林、己酮可可碱、肉碱、辅酶Q10、肌酸、鱼油、绿茶提取物、维生素E、PTC-124(PTC治疗剂有限公司，南普莱恩菲尔德，新泽西州)、AVI-4658二氨基磷酸盐吗啉基寡聚物、硫唑嘌呤以及环孢灵。

在任何情况下可以任何顺序或甚至同时投与多个治疗剂。如果同时，那么可以单个统一形式或以多种形式提供多种治疗剂(仅借助于实例，如单个丸或如两个单独的丸)治疗剂中的一种可以多种剂量给定，或两者都可以多种剂量给定。如果不同时，那么在多种剂量之间的时序可在大于零周小于四周的范围内变化。此外，组合方法、组合物和调配物将不限于仅使用两种试剂。

实例

通过以下实例进一步说明本发明技术，不应以任何方式将这些实例理解为限制性的。对于以下实例中的每一个，可使用本文所述的任何芳香族-阳离子肽。通过实例但不限制，以下实例中所使用的芳香族-阳离子肽可为2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂或表A、B、C、D和/或E中所展示的肽中的任何一种或多种。

实例1-芳香族-阳离子肽在治疗人类DMD中的用途

此实例证实芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐、氢氯酸盐或三氟乙酸盐)在治疗DMD中的用途。

方法

疑似患有或诊断患有DMD的个体接受每天单独或与一种或多种额外治疗剂组合投与芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐、氢氯酸盐或三氟乙酸盐)的1％、5％或10％熔液以用于治疗或预防DMD。肽和/或选自由以下组成的群组中的额外治疗剂根据本领域中已知的方法经口、局部地、全身性地、经静脉内、皮下、腹膜内或肌内投与：皮质类固醇、氧甲氢龙、ACE抑制剂、泊洛沙姆188(P188)、β-阻断剂、利尿剂、血管紧张素受体阻断剂(ARB)、艾地苯醌、阿仑膦酸盐、钙与维生素D、沙丁胺醇、丹曲林、己酮可可碱、肉碱、辅酶Q10、肌酸、鱼油、绿茶提取物、维生素E、PTC-124(PTC治疗剂有限公司，南普莱恩菲尔德，新泽西州)、AVI-4658二氨基磷酸盐吗啉基寡聚物、硫唑嘌呤以及环孢灵。一种或多种额外治疗剂的剂量将介于0.1mg/kg到50mg/kg范围内。将每周评估个体与DMD相关的体症和症状的存在和/或严重度，包括(但不限于)例如伴随腿部和骨盘发病的进行性近端无力、伴有宽阔步态的脊柱前凸过度、薄弱肌肥大、假性肥大(小腿和三角肌经脂肪和纤维化组织的扩大)、在疾病晚期对电刺激的肌肉收缩性减少、延缓的运动里程、渐进性不能行走、足跟跟腱挛缩、瘫痪、疲劳、包括脊柱侧凸的骨架变形、肌肉纤维变形、心肌病、充血性心脏衰竭或心律不齐、肌肉萎缩以及呼吸紊乱。维持治疗直到DMD的一种或多种体症或症状被改善或除去的时间。

结果

预测疑似患有或诊断患有DMD且接受治疗有效量的芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐)的个体将显示严重度减小或与DMD相关的症状被除去。还预期用芳香族-阳离子肽治疗的DMD个体与未治疗的DMD对照个体相比将展示使肌酸磷酸激酶血液含量正常化至少5％。进一步预期：相比于在用芳香族-阳离子肽或额外治疗剂单独治疗的个体中所观测到的此效应，与一种或多种额外治疗剂组合投与2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂将具有协同效应。

这些结果将展示芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐)适用于治疗DMD。这些结果将展示芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐)适用于减轻以下症状中的一种或多种：伴随腿部和骨盘发病的进行性近端无力、伴有宽阔步态的脊柱前凸过度、薄弱肌肥大、假性肥大(小腿和三角肌经脂肪和纤维化组织的扩大)、在疾病晚期对电刺激的肌肉收缩性减少、延缓的运动里程、渐进性不能行走、足跟跟腱挛缩、瘫痪、疲劳、包括脊柱侧凸的骨架变形、肌肉纤维变形、心肌病、充血性心脏衰竭或心律不齐、肌肉萎缩以及呼吸紊乱。因此，肽适用于包含向有需要的个体投与芳香族-阳离子肽以治疗DMD的方法。

实例2-芳香族-阳离子肽在预防人类DMD中的用途

此实例证实芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐、氢氯酸盐或三氟乙酸盐)在预防DMD中的用途。

方法

处于患有DMD风险下的个体接受每天单独或与一种或多种额外治疗剂组合投与芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐、氢氯酸盐或三氟乙酸盐)的1％、5％或10％熔液以用于治疗或预防DMD。肽和/或选自由以下组成的群组中的额外治疗剂根据本领域中已知的方法经口、局部地、全身性地、经静脉内、皮下、腹膜内或肌内投与：皮质类固醇、氧甲氢龙、ACE抑制剂、泊洛沙姆188(P188)、β-阻断剂、利尿剂、血管紧张素受体阻断剂(ARB)、艾地苯醌、阿仑膦酸盐、钙与维生素D、沙丁胺醇、丹曲林、己酮可可碱、肉碱、辅酶Q10、肌酸、鱼油、绿茶提取物、维生素E、PTC-124(PTC治疗剂有限公司，南普莱恩菲尔德，新泽西州)、AVI-4658二氨基磷酸盐吗啉基寡聚物、硫唑嘌呤以及环孢灵。一种或多种额外治疗剂的剂量将介于0.1mg/kg到50mg/kg范围内。将每周评估个体与DMD相关的体症和症状的存在和/或严重度，包括(但不限于)：伴随腿部和骨盘发病的进行性近端无力、伴有宽阔步态的脊柱前凸过度、薄弱肌肥大、假性肥大(小腿和三角肌经脂肪和纤维化组织的扩大)、在疾病晚期对电刺激的肌肉收缩性减少、延缓的运动里程、渐进性不能行走、足跟跟腱挛缩、瘫痪、疲劳、包含脊柱侧凸的骨架变形、肌肉纤维变形、心肌病、充血性心脏衰竭或心律不齐、肌肉萎缩以及呼吸紊乱。

结果

预测处于患有DMD风险下或诊断患有DMD且接受治疗有效量的芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐)的个体将显示DMD发病延迟或预防DMD发病。还预期用芳香族-阳离子肽治疗的DMD个体中的肌酸磷酸激酶血液含量将类似于健康对照个体。进一步预期：相比于在用芳香族-阳离子肽或额外治疗剂单独治疗的个体中所观测到的此效应，与一种或多种额外治疗剂组合投与2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂将具有协同效应。

这些结果将展示芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐)适用于预防DMD。这些结果将展示芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐)适用于预防或延迟以下症状中的一种或多种的发病：伴随腿部和骨盘发病的进行性近端无力、伴有宽阔步态的脊柱前凸过度、薄弱肌肥大、假性肥大(小腿和三角肌经脂肪和纤维化组织的扩大)、在疾病晚期对电刺激的肌肉收缩性减少、延缓的运动里程、渐进性不能行走、足跟跟腱挛缩、瘫痪、疲劳、包括脊柱侧凸的骨架变形、肌肉纤维变形、心肌病、充血性心脏衰竭或心律不齐、肌肉萎缩以及呼吸紊乱。

因此，肽适用于包含向有需要的个体投与芳香族-阳离子肽以预防DMD的方法。

实例3-芳香族-阳离子肽在治疗小鼠模型DMD中的用途

此实例证实芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐、氢氯酸盐或三氟乙酸盐)在治疗小鼠模型DMD中的用途。

将3-4周龄雄性C57BL/10ScSn-Dmd^mdx/J(mdx)和C57BL/10ScSn(野生型)小鼠容纳于在12小时亮-暗循环下单独通风的笼状系统中并将随意接受标准鼠食和纯化水。将mdx小鼠随机地分配到假治疗(未治疗)组或经芳香族-阳离子肽治疗组(mdx-肽)。mdx-肽组中的小鼠每天腹膜内注射肽(1-16mg/kg)，而假治疗组将接受每天腹膜内注射媒剂。所有治疗将在开始锻炼方案之前几天开始，且将继续直到处死当天。

运动方案和体内研究。野生型和mdx(假治疗和肽治疗两种)小鼠将在12m/min下的水平跑步机(哥伦布仪器(Columbus Instruments)，哥伦布，俄亥俄州)上经历30min跑步，一周两次，持续4到8周(Granchelli等人，2000)。在3到4周小鼠年龄时开始训练方案。约一半mdx小鼠将显示对锻炼的逃避行为，具有较高的疲劳倾向，并且将必须受温和地刺激或保持休息以完成30min跑步时段。这种行为在野生型动物中不存在。每一周，监测所有锻炼小鼠的体重。在每一次训练部分之前借助于握力强度仪表(哥伦布仪器)评估锻炼小鼠(野生型对照和mdx两种)的力。对于此测量，使小鼠握紧连接到力传感器的三角形环，随后温和地拉动小鼠直到抓握断开为止。传感器将保存此时的力值，所述力值是动物可以与其前肢一起使用的最大阻力的测量值。在2min内从每一只动物取得五个测量值，并将最大值用于统计分析。在第4周锻炼结束时，将动物处死。

组织结构。将胫骨前(TA)肌在标准生理熔液中快速冲洗且紧接着冷冻在液氮中冷却的异戊烷中。将样本存储在-80℃下直到用于组织学测定。将冷冻肌肉切成10mm厚切片，且从肌肉体的中点取出低温恒温器并用苏木精-曙红染色。半定量方式将用于评估组织病理学指数且允许统计分析。具体来说，在针对每一种条件采用的每个切片大的相当数量的纤维内，计算显示坏死、中央成核现象，和/或属于发炎性浸润的细胞数量。

结果。预测未治疗的mdx小鼠将呈现与年龄相符的野生型对照组相比较弱的前肢强度。还预测mdx小鼠的TA肌肉将在组织学上可区别于野生型-由于存在坏死、中央成核纤维、再生纤维，和单核发炎性细胞的浸润而造成更错乱的结构。还预见到经肽治疗的mdx小鼠的TA肌肉的前肢强度和组织结构将类似于在年龄相符的野生型对照组中所观测的前肢强度和组织结构。

这些结果将展示芳香族-阳离子肽(例如2'6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH₂、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH₂)或其医药学上可接受的盐(例如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐)适用于治疗小鼠模型中的DMD。因此，肽适用于包含向有需要的个体投与芳香族-阳离子肽以治疗DMD的方法。

实例4-芳香族-阳离子肽在治疗DBA/2J-mdx小鼠模型DMD中的用途

此实例证实Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂在治疗小鼠模型DMD中的用途。

方法：DBA/2J-mdx(又称为D2.B10-DMD^mdx/2J)小鼠呈现若干DMD肌肉病理学的人类特征(后肢肌肉重量较低、肌纤维较少、纤维化和脂肪积累增加，以及肌肉虛弱)。在来自约4周龄的DBA/2J-mdx小鼠(DMD小鼠)、约4周龄的DBA/2J野生型小鼠(wt小鼠)、每天皮下注射Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂(5mg/kg)治疗12周的DMD小鼠(经治疗DMD小鼠)，以及每天皮下注射(0.9％)治疗12周的DMD小鼠(未治疗DMD小鼠)的经渗透肌肉光纤束(PmFB)中评定左心室线粒体H₂O₂排放(通过分光荧光法测量；安普莱克司红外荧光团(Amplex UltraRedfluorophore))和呼吸(通过高分辨率呼吸测定法测量；Oroboros Oxygraph)。在生理ADP(25μM)存在下测量H₂O₂排放。ADP是在呼吸期间H₂O₂排放的抑制因子且受线粒体肌酸激酶(mtCK)的磷酸根穿梭活性的影响。通过活体外使肌酸(Cr)饱和来评定mtCK的作用。

结果：在4周龄时，在Cr(+Cr：当根据消耗的O₂表达时，在DMD小鼠中以0μM ADP排放36+/-4％对比在wt小鼠中以0μM ADP排放12+/-1％；p<0.01)存在的情况下，复合物I负载的H₂O₂(5mM丙酮酸盐/2mm苹果酸盐)的ADP抑制在DMD小鼠中减弱。在4周时，在Cr(-Cr：当根据消耗的O₂表达时，在DMD小鼠中以0μM ADP排放36+/-4％对比在wt小鼠中以0μM ADP排放17+/-2％；p<0.01)存在的情况下，还在DMD小鼠中观测到复合物I负载的H₂O₂的ADP抑制。此数据显示出与依赖mtCK的磷酸根穿梭无关，H₂O₂排放在DMD小鼠中提高。

另外，在4周龄时，在+Cr(在DMD小鼠中的30.8+/-5.0pmol·s^-1·mg wet wt^-1对比在wt小鼠中的54.2+/-10.2pmol·s^-1·mg wet wt^-1；p<0.05)和-Cr(在DMD小鼠中的35.0+/-1.2pmol·s^-1·mg wet wt^-1对比在wt小鼠中的52.0+/-5.4pmol·s^-1·mg wet wt^-1；p<0.01)中相比于wt小鼠，DMD小鼠中的ADP、复合物I负载的呼吸降低。

在用Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或生理盐水治疗DMD小鼠12周之后，经治疗DMD小鼠相比于未治疗的DMD小鼠在+Cr(以0μM ADP/消耗的O₂排放12+/-1％(经治疗DMD小鼠)对比15+/-0％(未治疗DMD小鼠)，p<0.01)中具有对复合物I负载的H₂O₂更大的ADP抑制。在-Cr(40+/-11％(经治疗DMD小鼠)对比42+/-13％(未治疗DMD小鼠)的0μM ADP/消耗的O₂)中不存在差异。此数据显示出与未治疗DMD小鼠相比，用Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂治疗在经治疗DMD小鼠中提高了对H₂O₂排放的依赖mtCK的ADP抑制。

在+Cr(111.4+/-12.0pmol·s^-1·mg wet wt^-1(经治疗DMD小鼠)对比82.1+/-11.2pmol·s^-1·mg wet wt^-1(未治疗DMD小鼠)；p＝0.10)或-Cr(59.6+/-7.4(经治疗DMD小鼠)对比65.3+/-6.8pmol·s^-1·mg wet wt^-1(未治疗DMD小鼠)中，与未治疗DMD小鼠相比，用Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂治疗并不改变经治疗DMD小鼠的呼吸。

这些结果展示Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂适用于治疗DMD。结果展示与未治疗DMD小鼠相比，Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂增加了经治疗DMD小鼠中mtCK调节对H₂O₂的ADP抑制的能力。因此，本文中所公开的芳香族-阳离子肽适用于治疗DMD。

等效内容

本发明技术不限于在本申请中所描述的特定实施例，所述实施例旨在说明本发明技术的个别方面。如本领域的技术人员将显而易见的，可在不脱离本技术的精神和范围的情况下进行本技术的许多修改和改变。除了本文中列举的方法和设备以外，本领域的技术人员从上述描述还将清楚在本发明技术范围内的功能上等效的方法和设备。这类修改和改变旨在属于所附权利要求书的范围内。本发明技术仅受限于以上权利要求书的术语以及所述权利要求书所授予的等效物的整个范围。应理解，本发明技术不限于特定方法、试剂、化合物组合物或生物体系，其当然可变化。还应理解本文所用的术语仅出于描述具体实施例的目的，并且并不打算为限制性的。

此外，当根据马库什组(Markush groups)描述本发明的特征或方面时，本领域的普通技术人员应认识到本发明也由此根据马库什组中成员的任何个别成员或子组描述。

如所属领域的技术人员将理解，出于任何和所有目的，特别是就提供书面说明来说，本文所公开的的所有范围还涵盖其任何和所有可能的子范围和子范围组合。任何列举的范围可以因充分说明而易于识别，并且能够将同一个范围分解为至少相同的两份、三份、四份、五份、十份等。作为非限制性实例，本文中论述的每个范围可以容易分解为下部三分之一、中间三分之一和上部三分之一等。所属领域的技术人员还将理解，所有语言，例如“高达”、“至少”、“超过”、“低于”等都包括所列举的数字并且指可以随后如上文所论述而分解为子范围的范围。最后，所属领域的技术人员将理解，范围包括每一个别成员。因此，举例来说，具有1-3个细胞的群组是指具有1、2或3个细胞的群组。类似地，具有1-5个细胞的群组是指具有1、2、3、4或5个细胞的群组等等。

本文参考或引用的所有专利、专利申请、临时申请及公开案都是以引用的方式整体并入，包括所有图式和表格，以致其不会与本说明书的明确教示不一致。

其它实施例阐述于以上权利要求书内。

Claims

1.肽Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂或其医药学上可接受的盐在制备用于以下的药物中的用途：

(a)治疗或预防有需要个体的杜氏肌肉萎缩症(DMD)；

(b)降低有需要个体的DMD风险；或

(c)降低患有或疑似患有DMD的哺乳动物个体中由假性肥大症表征的渐进性肌肉萎缩症。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述个体显示与正常对照个体相比升高的肌酸磷酸激酶的血液含量，且其中所述肽使肌酸磷酸激酶的血液含量正常化。

3.根据权利要求1到2中任一项所述的用途，其中所述肽每日投与维持6周或更久。

4.根据权利要求1到2中任一项所述的用途，其中所述肽每日投与维持12周或更久。

5.根据权利要求1到2中任一项所述的用途，其中所述个体已被诊断为患有DMD。

6.根据权利要求5所述的用途，其中DMD的体症或症状包含以下中的一种或多种：伴随腿部和骨盘发病的进行性近端无力、伴有宽阔步态的脊柱前凸过度、薄弱肌肥大、假性肥大、在疾病晚期对电刺激的肌肉收缩性减少、延缓的运动里程、渐进性不能行走、足跟跟腱挛缩、瘫痪、疲劳、包括脊柱侧凸的骨架变形、肌肉纤维变形、心肌病、充血性心脏衰竭或心律不齐、肌肉萎缩，以及呼吸紊乱；其中，所述假性肥大是小腿和三角肌经脂肪和纤维化组织的扩大。

7.根据权利要求1到2中任一项所述的用途，其中所述个体为人类。

8.根据权利要求1到2中任一项所述的用途，其中所述肽经口、局部、全身性、经静脉内、皮下、经皮、离子透入、鼻内、腹膜内或肌内投与。

9.根据权利要求1到2中任一项所述的用途，其进一步包含向所述个体单独地、依序地或同时投与额外治疗剂。

10.根据权利要求9所述的用途，其中所述额外治疗剂选自由以下组成的群组：皮质类固醇、氧甲氢龙、ACE抑制剂、泊洛沙姆188、β-阻断剂、利尿剂、血管收缩素受体阻断剂、艾地苯醌、阿仑膦酸盐、钙与维生素D、沙丁胺醇、丹曲林、己酮可可碱、肉碱、辅酶Q10、肌酸、鱼油、绿茶提取物、维生素E、PTC-124、AVI-4658二氨基磷酸盐吗啉基寡聚物、硫唑嘌呤以及环孢灵。

11.根据权利要求10所述的用途，其中所述肽和所述额外治疗剂的组合在预防或治疗DMD中具有协同效应。

12.根据权利要求1到2中任一项所述的用途，其中所述医药学上可接受的盐包含乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。

13.根据权利要求1到2中任一项所述的用途，其中肽投与使得与未治疗的DMD对照个体相比，肌营养相关蛋白、IGF-1、卵泡抑素、Galgt2和钙蛋白酶抑制蛋白中的一种或多种的表达量和/或活性增加，或其中肽投与使得与未治疗的DMD对照个体相比，钙蛋白酶表达量和/或活性减小。

14.根据权利要求1到2中任一项所述的用途，其中所述哺乳动物个体显示出与正常对照个体相比，肌纤维中的肌缩蛋白蛋白质水平降低。

15.根据权利要求1到2中任一项所述的用途，其中所述个体在肌缩蛋白基因中具有缺失、复制、移码或无义突变。