CN116179757B - 嗅觉受体在识别γ-十一内酯中的用途和检测γ-十一内酯的方法 - Google Patents

嗅觉受体在识别γ-十一内酯中的用途和检测γ-十一内酯的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提出了一种嗅觉受体在识别γ‑十一内酯中的用途和检测γ‑十一内酯的方法。所述方法包括：将待测样品与嗅觉受体进行接触，确定接触后的所述嗅觉受体的响应值；基于所述响应值，确定所述待测样品中是否含有γ‑十一内酯；在上述方法和用途中，所述嗅觉受体包括OR10A3和/或OR4C5。本发明采用γ‑十一内酯刺激OR10A3和/或OR4C5嗅觉受体后，可有效激活OR10A3和/或OR4C5，由此，采用上述两种嗅觉受体可识别γ‑十一内酯，可用于检测样品中是否含有γ‑十一内酯，为γ‑十一内酯的鉴定以及含有γ‑十一内酯的样品检测奠定基础。

Description

嗅觉受体在识别γ-十一内酯中的用途和检测γ-十一内酯的 方法
技术领域
本发明属于化学检测技术领域，具体地，本发明涉及一种嗅觉受体在识别γ-十一内酯中的用途和检测γ-十一内酯的方法，更具体地，本发明涉及一种嗅觉受体在识别γ-十一内酯中的用途、γ-十一内酯在激活嗅觉受体中的用途、检测γ-十一内酯的方法、检测鲜榨果汁的方法和评估香水或香精品质的方法。
背景技术
γ-十一内酯(CAS号104-67-6)，是一种极其重要的内酯类香料，具有强烈的桃子和杏仁样香气，故又称为桃醛。桃醛在常温下为无色至淡黄色略粘稠透明液体，天然存在于桃子、杏子、桂花、鸡蛋果花等中，其主要用于配制樱桃、桃子、杏子、梅子等香型食用香精以及调配桂花、紫罗兰、茉莉等花香型香精，是一种应用非常广泛的香料。
目前主要采用气相色谱与质谱联用（GC-MS）和顶空进样-气相色谱串联三重四级杆质谱（HS-GC-MS/MS）对样品中的γ-十一内酯进行检测，但GC-MS和HS-GC-MS/MS检测具有成本高和检测时间长等缺点。
因此，亟需开发一种操作简单且可有效检测γ-十一内酯的产品和方法。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本发明提供了一种嗅觉受体在识别γ-十一内酯中的用途，γ-十一内酯可有效激活OR10A3和/或OR4C5嗅觉受体，采用上述两种嗅觉受体的至少之一可用于识别γ-十一内酯，还可用于检测样本中的γ-十一内酯。
在本发明的一个方面，本发明提出了一种嗅觉受体在识别γ-十一内酯中的用途，所述嗅觉受体包括OR10A3和/或OR4C5。发明人经过试验发现，采用γ-十一内酯刺激OR10A3和/或OR4C5嗅觉受体后，可有效激活OR10A3和/或OR4C5，由此，采用上述两种嗅觉受体可识别γ-十一内酯，可用于检测样品中是否含有γ-十一内酯，为γ-十一内酯的鉴定以及含有γ-十一内酯的样品检测奠定基础。
根据本发明的实施例，上述用途还可以进一步包括如下技术特征的至少之一：
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体为OR10A3。
根据本发明的实施例，所述识别是通过嗅觉受体的活性变化体现的。
根据本发明的实施例，所述活性变化包括如下信号变化的至少之一：荧光素酶、分泌性碱性磷酸酶、荧光蛋白、荧光探针、cAMP、IP3、钙离子、电流和pH。
根据本发明的实施例，所述识别是通过嗅觉受体下游的cAMP增加体现的。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种γ-十一内酯在激活嗅觉受体中的用途，所述嗅觉受体包括OR10A3和/或OR4C5。发明人经过试验发现，采用γ-十一内酯刺激OR10A3和/或OR4C5嗅觉受体后，可有效激活OR10A3和/或OR4C5，由此，采用γ-十一内酯可激活上述两种嗅觉受体，可用于检测样品中是否含有γ-十一内酯，为γ-十一内酯的鉴定以及含有γ-十一内酯的样品检测奠定基础。
根据本发明的实施例，上述用途还可以进一步包括如下技术特征的至少之一：
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体为OR10A3。
根据本发明的实施例，所述激活是通过嗅觉受体的活性变化体现的。
根据本发明的实施例，所述活性变化包括如下信号变化的至少之一：荧光素酶、分泌性碱性磷酸酶、荧光蛋白、荧光探针、cAMP、IP3、钙离子、电流和pH。
根据本发明的实施例，所述激活是通过嗅觉受体下游的cAMP增加体现的。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种检测γ-十一内酯的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将待测样品与嗅觉受体进行接触，确定接触后的所述嗅觉受体的响应值；基于所述响应值，确定所述待测样品中是否含有γ-十一内酯；其中，所述嗅觉受体包括OR10A3和/或OR4C5。由前可知，γ-十一内酯可激活OR10A3和OR4C5嗅觉受体，由此，将待测样品与上述两种嗅觉受体的至少之一接触，若待测样品中含有γ-十一内酯，上述嗅觉受体可被激活，并得到嗅觉受体激活后的响应值，根据响应值可确定待测样品中是否含有γ-十一内酯。
根据本发明的实施例，上述方法还可以进一步包括如下技术特征的至少之一：
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体为OR10A3。
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体存在响应值是所述待测样品中含有γ-十一内酯的指示；或者，所述嗅觉受体不存在响应值是所述待测样品中不含有γ-十一内酯的指示。
根据本发明的实施例，所述方法进一步包括：基于标准曲线，确定所述待测样品中γ-十一内酯的含量，所述标准曲线为预定量γ-十一内酯与嗅觉受体响应值的对应曲线。
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体是表达所述嗅觉受体的细胞或转基因细胞提供的。
根据本发明的实施例，所述细胞或转基因细胞为真核细胞或原核细胞。
根据本发明的实施例，所述响应值是通过检测所述嗅觉受体的活性变化获得。
根据本发明的实施例，所述活性变化是通过如下检测方法的至少之一确定的：荧光素酶检测法、分泌性碱性磷酸酶检测法、荧光蛋白检测法、荧光探针检测法、Ca2+浓度检测法、电流检测法、同位素标记法、抗体检测法和pH检测法。
根据本发明的实施例，所述响应值是通过检测所述细胞中cAMP浓度的变化获得的。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种检测鲜榨果汁的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将待测果汁与嗅觉受体进行接触，确定接触后所述嗅觉受体的响应值；基于所述响应值，确定所述待测果汁是否为鲜榨果汁；其中，所述嗅觉受体包括选自OR10A3和/或OR4C5；所述鲜榨果汁包括鲜榨桃汁和鲜榨杏汁中的至少之一。由前可知，γ-十一内酯可激活OR10A3和OR4C5嗅觉受体，由此，将待测果汁与上述两种嗅觉受体的至少之一接触，若待测样品中含有γ-十一内酯，上述嗅觉受体可被激活，并得到嗅觉受体激活后的响应值，基于响应值可确定待测果汁中γ-十一内酯的含量，并根据γ-十一内酯的含量可判断待测果汁是否为鲜榨果汁。
根据本发明的实施例，上述方法还可以进一步包括如下技术特征的至少之一：
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体为OR10A3。
根据本发明的实施例，所述响应值高于第一预定阈值，是待测果汁为鲜榨果汁的指示。
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体是表达所述嗅觉受体的细胞或转基因细胞提供的。
根据本发明的实施例，所述细胞或转基因细胞为真核细胞或原核细胞。
根据本发明的实施例，所述响应值是通过检测所述嗅觉受体的活性变化获得。
根据本发明的实施例，所述活性变化是通过如下检测方法的至少之一确定的：荧光素酶检测法、分泌性碱性磷酸酶检测法、荧光蛋白检测法、荧光探针检测法、Ca2+浓度检测法、电流检测法、同位素标记法、抗体检测法和pH检测法。
根据本发明的实施例，所述响应值是通过检测所述细胞中cAMP浓度的变化获得的。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种评估香水或香精品质的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将待测香水或待测香精与嗅觉受体进行接触，确定接触后所述嗅觉受体的响应值；基于所述响应值，确定所述待测香水或待测香精的品质；其中，所述嗅觉受体包括选自OR10A3和/或OR4C5；所述待测香水或待测香精包括桃香精、杏香精、桂花香精、鸡蛋果花香精、樱桃香精、梅子香精、紫罗兰香精和茉莉香精中的至少之一。由前可知，γ-十一内酯可激活OR10A3和OR4C5嗅觉受体，由此，将待测香水或待测香精与上述两种嗅觉受体的至少之一接触，若待测样品中含有γ-十一内酯，上述嗅觉受体可被激活，并得到嗅觉受体激活后的响应值，基于响应值可确定待测香水或待测香精中γ-十一内酯的含量，并根据γ-十一内酯的含量可判断待测香水或待测香精的品质。
根据本发明的实施例，上述方法还可以进一步包括如下技术特征的至少之一：
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体为OR10A3。
根据本发明的实施例，所述响应值高于第二预定阈值，是所述待测香水或待测香精中含有天然萃取香精的指示。
根据本发明的实施例，所述天然萃取香精包括天然萃取桃香精、天然萃取杏香精、天然萃取桂花香精、天然萃取鸡蛋果花香精、天然萃取樱桃香精、天然萃取梅子香精、天然萃取紫罗兰香精和天然萃取茉莉香精中的至少之一。
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体是表达所述嗅觉受体的细胞或转基因细胞提供的。
根据本发明的实施例，所述细胞或转基因细胞为真核细胞或原核细胞。
在本发明的一些可选实施例中，所述真核细胞包括但不限于从嗅觉基板分离的细胞群组中选出的细胞、HEK293细胞、CHO细胞、爪蟾卵母细胞、Hela细胞、COS细胞和酵母细胞等。
根据本发明的实施例，所述原核细胞选自细菌。
根据本发明的实施例，所述响应值是通过检测所述嗅觉受体的活性变化获得。
根据本发明的实施例，所述活性变化是通过如下检测方法的至少之一确定的：荧光素酶检测法、分泌性碱性磷酸酶检测法、荧光蛋白检测法、荧光探针检测法、Ca2+浓度检测法、电流检测法、同位素标记法、抗体检测法和pH检测法。
根据本发明的实施例，所述响应值是通过检测所述细胞中cAMP浓度的变化获得的。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1为本发明实施例1中γ-十一内酯刺激人类396个嗅觉受体（OR）的响应图谱；
图2为本发明实施例1中OR10A3和OR4C5响应γ-十一内酯的剂量依赖曲线；
图3为本发明实施例2中OR10A3响应三种桃汁样品的剂量依赖曲线；
图4为本发明实施例3中OR10A3响应三种不同品牌的水蜜桃香精的剂量依赖曲线。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
为了更容易理解本发明，以下具体定义了某些技术和科学术语。除显而易见在本文件中的它处另有明确定义，否则本文中使用的所有其它技术和科学术语都具有本发明所属领域的一般技术人员通常理解的含义。
在本文中，术语“包含”或“包括”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
在本文中，术语“任选地”、“任选的”或“任选”通常是指随后所述的事件或状况可以但未必发生，并且该描述包括其中发生该事件或状况的情况，以及其中未发生该事件或状况的情况。
本发明提出了一种嗅觉受体在识别γ-十一内酯中的用途、γ-十一内酯在激活嗅觉受体中的用途、检测γ-十一内酯的方法、检测鲜榨果汁的方法和评估香水或香精品质的方法，下面将分别对其进行详细描述。
用途
在本发明的一个方面，本发明提出了一种嗅觉受体在识别γ-十一内酯中的用途，所述嗅觉受体包括OR10A3和/或OR4C5。发明人经过试验发现，采用γ-十一内酯刺激OR10A3和/或OR4C5嗅觉受体后，可有效激活OR10A3和/或OR4C5，由此，采用上述两种嗅觉受体可识别γ-十一内酯，可用于检测样品中是否含有γ-十一内酯，为γ-十一内酯的鉴定以及含有γ-十一内酯的样品检测奠定基础。
需要说明的是，若γ-十一内酯刺激嗅觉受体后，嗅觉受体被激活，即为“嗅觉受体可识别γ-十一内酯”；若γ-十一内酯刺激嗅觉受体后，嗅觉受体未被激活，即为“嗅觉受体不可识别γ-十一内酯”。
根据本发明的实施例，上述用途还可以进一步包括如下技术特征的至少之一：
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体为OR10A3。
根据本发明的实施例，所述识别是通过嗅觉受体的活性变化体现的。
根据本发明的实施例，所述活性变化包括如下信号变化的至少之一：荧光素酶、分泌性碱性磷酸酶、荧光蛋白、荧光探针、cAMP、IP3、钙离子、电流和pH。
根据本发明的实施例，所述识别是通过嗅觉受体下游的cAMP增加体现的。发明人经过实验发现，γ-十一内酯刺激表达嗅觉受体的细胞，嗅觉受体被激活后，细胞内的cAMP浓度升高，通过检测cAMP浓度变化，即可确定嗅觉受体是否能够识别γ-十一内酯。
示例性地，所述细胞中cAMP浓度的变化通过采用GloSensorTMcAMP检测试剂盒获得。GloSensor-20F cAMP基因构建物可预先表达一种荧光素酶变体，cAMP浓度升高可引起荧光素酶变体的构象变化，使得荧光素酶从无活性状态转变为活性状态，GloSensorTMcAMP检测试剂盒提供了荧光素酶变体的底物，该方法可实时测定cAMP的浓度变化，可快速、灵敏地检测待测样品中γ-十一内酯的含量。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种γ-十一内酯在激活嗅觉受体中的用途，所述嗅觉受体包括OR10A3和/或OR4C5。发明人经过试验发现，采用γ-十一内酯刺激OR10A3和/或OR4C5嗅觉受体后，可有效激活OR10A3和/或OR4C5，由此，采用γ-十一内酯可激活上述两种嗅觉受体，可用于检测样品中是否含有γ-十一内酯，为γ-十一内酯的鉴定以及含有γ-十一内酯的样品检测奠定基础。
根据本发明的实施例，上述用途还可以进一步包括如下技术特征的至少之一：
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体为OR10A3。
根据本发明的实施例，所述激活是通过嗅觉受体的活性变化体现的。
根据本发明的实施例，所述活性变化包括如下信号变化的至少之一：荧光素酶、分泌性碱性磷酸酶、荧光蛋白、荧光探针、cAMP、IP3、钙离子、电流和pH。
根据本发明的实施例，所述激活是通过嗅觉受体下游的cAMP增加体现的。发明人经过实验发现，γ-十一内酯刺激表达嗅觉受体的细胞，嗅觉受体被激活后，细胞内的cAMP浓度升高，通过检测cAMP浓度变化，即可确定嗅觉受体是否能够识别γ-十一内酯。
示例性地，所述细胞中cAMP浓度的变化通过采用GloSensorTMcAMP检测试剂盒获得。GloSensor-20F cAMP基因构建物可预先表达一种荧光素酶变体，cAMP浓度升高可引起荧光素酶变体的构象变化，使得荧光素酶从无活性状态转变为活性状态，GloSensorTMcAMP检测试剂盒提供了荧光素酶变体的底物，该方法可实时测定cAMP的浓度变化，可快速、灵敏地检测待测样品中γ-十一内酯的含量。
方法
在本发明的又一方面，本发明提出了一种检测γ-十一内酯的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将待测样品与嗅觉受体进行接触，确定接触后的所述嗅觉受体的响应值；基于所述响应值，确定所述待测样品中是否含有γ-十一内酯；其中，所述嗅觉受体包括OR10A3和/或OR4C5。由前可知，γ-十一内酯可激活OR10A3和OR4C5嗅觉受体，由此，将待测样品与上述两种嗅觉受体的至少之一接触，若待测样品中含有γ-十一内酯，上述嗅觉受体可被激活，并得到嗅觉受体激活后的响应值，根据响应值可确定待测样品中是否含有γ-十一内酯。
需要说明的是，本文中的“接触”应做广义理解，可为直接接触，也可为间接接触，具体不受限制。
示例性地，通过液体状态的待测样品（本身为液体或采用溶剂制备成液体）和嗅觉受体混合后进行接触（即为待测样品和嗅觉受体进行直接接触）；也可为直接将待测样品和嗅觉受体放置于同一空间内，待测样品中自身释放的气味分子（γ-十一内酯）与嗅觉受体进行接触（即为待测样品和嗅觉受体进行间接接触）。
根据本发明的实施例，所述待测样品包括但不限于饮料（如果汁、碳酸饮料）、香水或香精等。
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体为OR10A3。
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体存在响应值是所述待测样品中含有γ-十一内酯的指示；或者，所述嗅觉受体不存在响应值是所述待测样品中不含有γ-十一内酯的指示。
需要说明的是，“不含有γ-十一内酯的指示”是指待测样品中完全不存在γ-十一内酯；或者待测样品中存在少量的γ-十一内酯，但不能被检测出来。
示例性地，所述嗅觉受体为OR10A3，所述嗅觉受体不存在响应值是所述待测样品中γ-十一内酯的浓度低于30 μM；所述嗅觉受体为OR4C5，所述嗅觉受体不存在响应值是所述待测样品中γ-十一内酯的浓度低于30 μM。
根据本发明的实施例，所述方法进一步包括：基于标准曲线，确定所述待测样品中γ-十一内酯的含量，所述标准曲线为预定量γ-十一内酯与嗅觉受体响应值的对应曲线。
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体是表达所述嗅觉受体的细胞或转基因细胞提供的。
根据本发明的实施例，所述细胞或转基因细胞为真核细胞或原核细胞。
在本发明的一些可选实施例中，所述真核细胞包括但不限于从嗅觉基板分离的细胞群组中选出的细胞、HEK293细胞、CHO细胞、爪蟾卵母细胞、Hela细胞、COS细胞和酵母细胞等。
根据本发明的实施例，所述原核细胞选自细菌。
根据本发明的实施例，所述响应值是通过检测所述嗅觉受体的活性变化获得。
根据本发明的实施例，所述活性变化是通过如下检测方法的至少之一确定的：荧光素酶检测法、分泌性碱性磷酸酶检测法、荧光蛋白检测法、荧光探针检测法、Ca2+浓度检测法、电流检测法、同位素标记法、抗体检测法和pH检测法。
示例性地，荧光素酶检测法的检测为，采用γ-十一内酯或含有γ-十一内酯的样品刺激含有嗅觉受体的细胞时，若嗅觉受体被激活，则细胞内cAMP浓度升高，cAMP结合CRE-luciferase的启动子区，并促使荧光素酶的转录和翻译，因此，通过检测荧光素酶的活性，即可表征嗅觉受体的响应情况，确定待测样品中是否含有γ-十一内酯。
根据本发明的实施例，所述响应值是通过检测所述细胞中cAMP浓度的变化获得的。发明人经过实验发现，γ-十一内酯刺激表达嗅觉受体的细胞，嗅觉受体被激活后，细胞内的cAMP浓度升高，通过检测cAMP浓度变化，即可确定嗅觉受体是否能够识别γ-十一内酯。
示例性地，所述细胞中cAMP浓度的变化通过采用GloSensorTMcAMP检测试剂盒获得。GloSensor-20F cAMP基因构建物可预先表达一种荧光素酶变体，cAMP浓度升高可引起荧光素酶变体的构象变化，使得荧光素酶从无活性状态转变为活性状态，GloSensorTMcAMP检测试剂盒提供了荧光素酶变体的底物，该方法可实时测定cAMP的浓度变化，可快速、灵敏地检测待测样品中γ-十一内酯的含量。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种检测鲜榨果汁的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将待测果汁与嗅觉受体进行接触，确定接触后所述嗅觉受体的响应值；基于所述响应值，确定所述待测果汁是否为鲜榨果汁；其中，所述嗅觉受体包括选自OR10A3和/或OR4C5；所述鲜榨果汁包括鲜榨桃汁和鲜榨杏汁中的至少之一。由前可知，γ-十一内酯可激活OR10A3和OR4C5嗅觉受体，由此，将待测果汁与上述两种嗅觉受体的至少之一接触，若待测样品中含有γ-十一内酯，上述嗅觉受体可被激活，并得到嗅觉受体激活后的响应值，基于响应值可确定待测果汁中γ-十一内酯的含量，并根据γ-十一内酯的含量可判断待测果汁是否为鲜榨果汁，进而可区分鲜榨果汁和经过加工处理的果汁。
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体为OR10A3。
根据本发明的实施例，所述响应值高于第一预定阈值，是待测果汁为鲜榨果汁的指示。
在本文中，“第一预定阈值”可通过采用本发明的嗅觉受体对大量果汁产品（例如20种、50种、100种、150种、200种及以上）进行检测，基于大量果汁产品获得的响应值进行统计得到的。其中，“第一预定阈值”可为直接获得的响应值，可以为相对于对照组的相应倍数，具体类型不受限制。
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体是表达所述嗅觉受体的细胞或转基因细胞提供的。
根据本发明的实施例，所述细胞或转基因细胞为真核细胞或原核细胞。
在本发明的一些可选实施例中，所述真核细胞包括但不限于从嗅觉基板分离的细胞群组中选出的细胞、HEK293细胞、CHO细胞、爪蟾卵母细胞、Hela细胞、COS细胞和酵母细胞等。
根据本发明的实施例，所述原核细胞选自细菌。
根据本发明的实施例，所述响应值是通过检测所述嗅觉受体的活性变化获得。
根据本发明的实施例，所述活性变化是通过如下检测方法的至少之一确定的：荧光素酶检测法、分泌性碱性磷酸酶检测法、荧光蛋白检测法、荧光探针检测法、Ca2+浓度检测法、电流检测法、同位素标记法、抗体检测法和pH检测法。
根据本发明的实施例，所述响应值是通过检测所述细胞中cAMP浓度的变化获得的。发明人经过实验发现，γ-十一内酯刺激表达嗅觉受体的细胞，嗅觉受体被激活后，细胞内的cAMP浓度升高，通过检测cAMP浓度变化，即可确定嗅觉受体是否能够识别γ-十一内酯。
示例性地，所述细胞中cAMP浓度的变化通过采用GloSensorTMcAMP检测试剂盒获得。GloSensor-20F cAMP基因构建物可预先表达一种荧光素酶变体，cAMP浓度升高可引起荧光素酶变体的构象变化，使得荧光素酶从无活性状态转变为活性状态，GloSensorTMcAMP检测试剂盒提供了荧光素酶变体的底物，该方法可实时测定cAMP的浓度变化，可快速、灵敏地检测待测样品中γ-十一内酯的含量。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种评估香水或香精品质的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将待测香水或待测香精与嗅觉受体进行接触，确定接触后所述嗅觉受体的响应值；基于所述响应值，确定所述待测香水或待测香精的品质；其中，所述嗅觉受体包括选自OR10A3和/或OR4C5；所述待测香水或待测香精包括桃香精、杏香精、桂花香精、鸡蛋果花香精、樱桃香精、梅子香精、紫罗兰香精和茉莉香精中的至少之一。由前可知，γ-十一内酯可激活OR10A3和OR4C5嗅觉受体，由此，将待测香水或待测香精与上述两种嗅觉受体的至少之一接触，若待测样品中含有γ-十一内酯，上述嗅觉受体可被激活，并得到嗅觉受体激活后的响应值，基于响应值可确定待测香水或待测香精中γ-十一内酯的含量，并根据γ-十一内酯的含量可判断待测香水或待测香精的品质。
需要说明的是，在香水或香精产品中，其含有天然萃取香精的品质优于不含天然萃取香精的品质，且天然萃取香精含量越高、香水或香精产品的品质越好。
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体为OR10A3。
根据本发明的实施例，所述响应值高于第二预定阈值，是所述待测香水或待测香精中含有天然萃取香精的指示。
在本文中，“第二预定阈值”可通过采用本发明的嗅觉受体对大量香水产品或香精产品（例如20种、50种、100种、150种、200种及以上）进行检测，基于大量香水产品或香精产品获得的响应值进行统计得到的。其中，“第二预定阈值”可为直接获得的响应值，可以为相对于对照组的相应倍数，具体类型不受限制。
根据本发明的实施例，所述天然萃取香精包括天然萃取桃香精、天然萃取杏香精、天然萃取桂花香精、天然萃取鸡蛋果花香精、天然萃取樱桃香精、天然萃取梅子香精、天然萃取紫罗兰香精和天然萃取茉莉香精中的至少之一。
在本发明的一些可选实施例中，将多个所述待测香水或待测香精分别与嗅觉受体接触，确定接触后所述嗅觉受体的多个响应值；基于多个所述响应值，确定所述待测香水或待测香精的品质；其中，所述响应值更高，是所述待测香水或待测香精中含有天然萃取香精或其更接近天然萃取香精品质的指示。
根据本发明的实施例，所述嗅觉受体是表达所述嗅觉受体的细胞或转基因细胞提供的。
根据本发明的实施例，所述细胞或转基因细胞为真核细胞或原核细胞。
在本发明的一些可选实施例中，所述真核细胞包括但不限于从嗅觉基板分离的细胞群组中选出的细胞、HEK293细胞、CHO细胞、爪蟾卵母细胞、Hela细胞、COS细胞和酵母细胞等。
根据本发明的实施例，所述原核细胞选自细菌。
根据本发明的实施例，所述响应值是通过检测所述嗅觉受体的活性变化获得。
根据本发明的实施例，所述活性变化是通过如下检测方法的至少之一确定的：荧光素酶检测法、分泌性碱性磷酸酶检测法、荧光蛋白检测法、荧光探针检测法、Ca2+浓度检测法、电流检测法、同位素标记法、抗体检测法和pH检测法。
根据本发明的实施例，所述响应值是通过检测所述细胞中cAMP浓度的变化获得的。发明人经过实验发现，γ-十一内酯刺激表达嗅觉受体的细胞，嗅觉受体被激活后，细胞内的cAMP浓度升高，通过检测cAMP浓度变化，即可确定嗅觉受体是否能够识别γ-十一内酯。
示例性地，所述细胞中cAMP浓度的变化通过采用GloSensorTMcAMP检测试剂盒获得。GloSensor-20F cAMP基因构建物可预先表达一种荧光素酶变体，cAMP浓度升高可引起荧光素酶变体的构象变化，使得荧光素酶从无活性状态转变为活性状态，GloSensorTMcAMP检测试剂盒提供了荧光素酶变体的底物，该方法可实时测定cAMP的浓度变化，可快速、灵敏地检测待测样品中γ-十一内酯的含量。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：嗅觉受体的筛选
1、利用双荧光素酶法（Dual-Glo™ Luciferase Assay System, Promega）测定嗅觉受体的活性。首先，从人嗅觉受体库中选择了全部嗅觉受体库及小鼠的部分嗅觉受体库，共计396个嗅觉受体，然后制备含有嗅觉受体、Golf、CRE-Luciferase以及pRL-SV40的基因构建物，并利用转染试剂Lipofectamine2000 (Invitrogen)将基因构建物转染至HEK293T细胞中。培养24小时后，用培养基将γ-十一内酯稀释至浓度为300μM，用稀释后的γ-十一内酯刺激细胞，并孵育3-4小时。若嗅觉受体被激活后，细胞内cAMP浓度升高，cAMP将结合CRE-luciferase的启动子区，并促使荧光素酶的转录和翻译，通过检测荧光素酶的活性，即可表征嗅觉受体的响应情况，396个嗅觉受体的响应结果具体参见图1，结果显示最终获得了2个产生响应的人类嗅觉受体，分别是OR10A3（Genbank的Gene ID：26496）和OR4C5（Genbank的Gene ID：79346）。
2、进一步地，采用不同浓度的γ-十一内酯刺激分别含有OR10A3和OR4C5嗅觉受体的HEK293T细胞（具体细胞的制备参见本实施例的步骤1），并观察不同浓度下，OR10A3和OR4C5嗅觉受体响应γ-十一内酯的剂量曲线，结果如图2所示，其中，横轴为γ-十一内酯浓度（M）的对数，纵轴为相对于空白对照（不加γ-十一内酯）的响应变化倍数。
结果发现，OR10A3对γ-十一内酯的响应最强，响应变化倍数为空白对照组的25倍左右，灵敏度可在30μM时起始反应；OR4C5响应略弱，响应变化倍数为空白对照组的10倍左右，且灵敏度可在30 μM时起始反应。
因此，采用OR10A3嗅觉受体进行后续试验。
实施例2：OR10A3对不同桃汁中γ-十一内酯的检测
双荧光素酶法（Dual-Glo™ Luciferase Assay System, Promega）在筛选单一化合物和嗅觉受体的激活情况时使用广泛，但是待测物需与细胞孵育3-4小时，使得荧光素酶充分转录和翻译。因此，由于其检测时间过长，无法发展为应用行业中快速检测方法。
本实施例采用GloSensorTM cAMP Assay（Promega）测定嗅觉受体的活性。具体为，与实施例1构建的含有OR10A3嗅觉受体的细胞相比，区别仅在于采用GloSensorTM cAMPAssay（Promega）代替了原有的双荧光素酶，即为向细胞中共转染pGloSensor-20F cAMP（Promega）构建物，该细胞可预先表达一种荧光素酶变体，cAMP浓度升高可引起荧光素酶变体的构象变化，使得荧光素酶从无活性状态转变为活性状态，可实时快速地测定cAMP的浓度变化。然后将鲜榨桃汁、100%汇源桃汁和魔奇桃汁三种样品分别刺激含有OR10A3嗅觉受体的细胞，并孵育15min左右，然后通过检测荧光素酶的活性，并表征嗅觉受体的响应情况，上述三种样品的相对响应强度参见图3。
结果显示，上述三种样品均可以被检测到稳定的信号，且三种样品的相对响应强度为鲜榨桃汁>100%汇源桃汁>魔奇桃汁。由此可说明上述三种样品中，鲜榨桃汁中γ-十一内酯含量最高，而经过处理的桃汁，即使是汇源的100%桃汁，其处理过程也会损失桃子的香气成分；而魔奇桃汁是经过稀释的桃浆，果汁含量仅为25%左右，其γ-十一内酯的含量降低更为明显。
实施例3：OR10A3对不同水蜜桃香精中γ-十一内酯的检测
采用实施例2的方法，通过表达OR10A3的细胞对3种不同品牌水蜜桃香精中γ-十一内酯的含量进行检测。3种不同品牌水蜜桃香精分别是孔雀牌水蜜桃香精、飘香园牌水蜜桃香精及澳洲昆特臣牌水蜜桃香精（天然萃取），首先分别将3种香精均用培养基进行1/150的稀释（体积比）。将上述三种香精分别刺激含有OR10A3嗅觉受体的细胞，并孵育15min左右，然后通过检测荧光素酶的活性，并表征嗅觉受体的响应情况，上述三种香精的相对响应强度参见图4。
本领域技术人员均可知，针对水蜜桃香精，不论是天然萃取还是合成的香精，γ-十一内酯都是一个非常重要的组成成分。由图4可知，三种香精的相对响应强度为澳洲昆特臣牌水蜜桃香精>=飘香园牌水蜜桃香精>孔雀牌水蜜桃香精。由此可说明上述三种香精中，澳洲昆特臣牌水蜜桃香精的γ-十一内酯的含量>=飘香园牌水蜜桃香精的γ-十一内酯的含量>孔雀牌水蜜桃香精的γ-十一内酯的含量。
因此，以上结果表明，利用表达OR10A3和/或OR4C5嗅觉受体的细胞组，结合GloSensorTM cAMP Assay（Promega）的快速检测方法可以快速灵敏地检测食物或其他物质中γ-十一内酯的含量。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、 “示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (16)

1.嗅觉受体在识别γ-十一内酯中的用途，所述嗅觉受体为OR4C5。
2. γ-十一内酯在非疾病诊断和治疗目的激活嗅觉受体中的用途，所述嗅觉受体为OR4C5。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述识别或激活是通过嗅觉受体的活性变化体现的；
所述嗅觉受体的活性变化基于cAMP、IP3、钙离子、电流、pH和分泌性碱性磷酸酶至少之一的浓度或数值变化获得。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述cAMP的浓度变化通过检测荧光蛋白或荧光探针的信号变化获得。
5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述cAMP的浓度变化是通过荧光素酶系统进行检测的。
6.一种检测γ-十一内酯的方法，其特征在于，包括：
将待测样品与嗅觉受体进行接触，确定接触后的所述嗅觉受体的响应值；
基于所述响应值，确定所述待测样品中是否含有γ-十一内酯；
其中，所述嗅觉受体为OR4C5。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述嗅觉受体存在响应值是所述待测样品中含有γ-十一内酯的指示；或者
所述嗅觉受体不存在响应值是所述待测样品中不含有γ-十一内酯的指示。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括：
基于标准曲线，确定所述待测样品中γ-十一内酯的含量，所述标准曲线为预定量γ-十一内酯与嗅觉受体响应值的对应曲线。
9.一种检测鲜榨果汁中γ-十一内酯的方法，其特征在于，包括：
将待测果汁与嗅觉受体进行接触，确定接触后所述嗅觉受体的响应值；
基于所述响应值，确定所述待测果汁是否含有γ-十一内酯；
其中，所述嗅觉受体为OR4C5。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述鲜榨果汁包括鲜榨桃汁和鲜榨杏汁中的至少之一。
11.一种检测香水或香精中γ-十一内酯的方法，其特征在于，包括：
将待测香水或待测香精与嗅觉受体进行接触，确定接触后所述嗅觉受体的响应值；
基于所述响应值，确定所述待测香水或待测香精是否含有γ-十一内酯；
其中，所述嗅觉受体为OR4C5。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述待测香水或待测香精包括桃香精、杏香精、桂花香精、鸡蛋果花香精、樱桃香精、梅子香精、紫罗兰香精和茉莉香精中的至少之一。
13.根据权利要求6~12任一项所述的方法，其特征在于，所述嗅觉受体是表达所述嗅觉受体的细胞提供的；
所述响应值是通过检测所述细胞中cAMP浓度的变化获得的；
所述细胞为真核细胞或原核细胞。
14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述细胞是转基因细胞。
15.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述cAMP的浓度变化通过检测荧光蛋白或荧光探针的信号变化获得。
16.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述cAMP的浓度变化是通过荧光素酶系统进行检测的。
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