CN116171283A - Glp-1受体拮抗剂 - Google Patents

Glp-1受体拮抗剂 Download PDF

Info

Publication number
CN116171283A
CN116171283A CN202180053052.3A CN202180053052A CN116171283A CN 116171283 A CN116171283 A CN 116171283A CN 202180053052 A CN202180053052 A CN 202180053052A CN 116171283 A CN116171283 A CN 116171283A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
syndrome
group
ser
lysr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202180053052.3A
Other languages
English (en)
Inventor
贾尔斯·阿尔贝特·布朗
迈尔斯·斯图尔特·康格里夫
康纳·斯库利
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hepares Treatment Co ltd
Original Assignee
Hepares Treatment Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hepares Treatment Co ltd filed Critical Hepares Treatment Co ltd
Publication of CN116171283A publication Critical patent/CN116171283A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/57563—Vasoactive intestinal peptide [VIP]; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本文的公开内容涉及式(1)的新的内环肽化合物及其盐：
Figure DDA0004096896760000011
以及它们在治疗、预防、改善、控制与胰高血糖素样肽‑1(GLP‑1)受体相关的疾病或降低与胰高血糖素样肽‑1(GLP‑1)受体相关的疾病的风险中的用途，其中R1、AA1、AA2、LysR、X和Y如本文所定义。

Description

GLP-1受体拮抗剂
技术领域
本发明涉及一类含有内内酰胺桥的新的肽化合物、它们的盐、含有它们的药物组合物以及它们在人体治疗中的用途。具体而言，本发明涉及一类化合物，它们是胰高血糖素样肽(GLP)受体的拮抗剂。更具体地，本发明涉及作为胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体拮抗剂的化合物。本发明还涉及这些化合物和组合物的制备及其在预防或治疗涉及GLP受体的疾病中的用途。
背景技术
胃肠激素胰高血糖素样肽-1(GLP-1)在餐后(饭后)从肠道L细胞中释放，并对胰腺b细胞产生直接和有效的葡萄糖依赖性促胰岛素作用。
GLP-1通过肠中胰高血糖素原的翻译后加工合成。仅在肠L细胞中表达的激素原转化酶1/3对胰高血糖素原的切割释放肠促胰岛素肽GLP-1和GLP-2。分泌的GLP-1被普遍存在的二肽基肽IV酶快速降解，导致GLP-1的半衰期极短，约为2分钟。
GLP-1通过一种特异性受体，胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)发挥作用，该受体属于B类G蛋白偶联受体家族。GLP-1受体广泛分布于胰岛、脑、心脏、肾和胃肠道。GLP-1与其相应受体的结合通过激动型G蛋白Gas引发激活，从而激活腺苷酸环化酶，引起细胞内cAMP水平的形成、膜去极化、细胞内钙浓度的升高和位于胰腺b细胞中的含胰岛素颗粒的增强的胞吐作用。GLP-1介导的cAMP浓度的持续升高也刺激胰腺b细胞增殖，并增强胰管上皮中新的β细胞从祖细胞的分化。
GLP-1还直接影响对控制血浆葡萄糖至关重要的其他激素的分泌。胰腺a细胞受GLP-1的紧张抑制性控制，GLP-1通过生长抑素的旁分泌作用强烈抑制胰高血糖素的分泌。通过GLP-1活性抑制胰高血糖素可引起肝脏葡萄糖生成减少，这有助于GLP-1对控制餐后葡萄糖波动的总体作用。
总之，已经证明GLP-1通过增加胰腺葡萄糖刺激的胰岛素分泌，引起外周组织中葡萄糖摄取增加，具有显著的抗糖尿病作用。GLP-1还在抑制胃排空和胃窦十二指肠运动、减少饱腹感和食物摄入以及体重减轻中起关键作用。
上述GLP-1的显著作用引起了这样一种假设，即与GLP-1的血浆浓度过高、GLP-1信号传导增加和/或GLP-1R水平增加相关的临床指征将导致高胰岛素血症(过度的葡萄糖依赖性胰岛素分泌)，从而导致低血糖症以及出现胃肠功能障碍迹象。因此，可以通过阻断/拮抗GLP-1R的活化来治疗诸如高胰岛素血症和低血糖症等病症。
特异性GLP-1受体拮抗剂exendin(9-39)酰胺[Ex(9-39)]最初从吉拉毒蜥(Heloderma suspectum)的毒液中分离，并与GLP-1具有一定程度的序列同源性。Ex(9-39)是GLP-1受体的选择性、竞争性肽拮抗剂，其在体外和体内阻断GLP-1介导的胰岛素分泌，并在人和啮齿动物模型中响应于GLP-1的内源性和外源性施用而削弱葡萄糖耐量。在没有增加的GLP-1水平的情况下，Ex(9-39)也抑制胰岛素分泌，这表明Ex(9-39)是GLP-1受体的反向激动剂。这些数据表明，GLP-1受体的单独存在对于维持胰腺β细胞的葡萄糖能力状态是重要的。
GLP-1对胰岛β细胞的影响是深远的。GLP-1促进胰岛素释放、胰岛素原表达、胰岛素生物合成和mRNA稳定性。GLP-1还会触发胰岛δ细胞的生长抑素分泌，并抑制胰岛α细胞的胰高血糖素分泌。胰高血糖素的作用与胰岛素相反，它通过直接作用于肝脏，增加糖原分解和糖异生，从而提高血液中的葡萄糖浓度。这表明阻断GLP-1系统不仅会对胰岛素分泌产生直接影响，而且还会解除对胰高血糖素分泌的抑制，从而促使肝脏产生更多的葡萄糖。
在健康状况下，GLP-1的胰岛素分泌作用通常是高度葡萄糖依赖性的，因此过量的GLP-1分泌或敏感性不会导致低血糖。然而，在存在非葡萄糖依赖性胰岛素促分泌素(例如作用于KATP通道的磺酰脲)的情况下，施用GLP-1或者甚至直接将超生理水平的GLP-1输注到正常受试者中的临床研究显示与低血糖症的风险增加相关。
不伴有糖尿病的低血糖症是一种不常见的临床疾病。通常在静脉血浆葡萄糖<55mg/ml，并存在惠普尔三联征时诊断患者患有该病。本申请主题的GLP-1R拮抗剂将具有治疗一系列与GLP-1血浆浓度过高、GLP-1信号传导增加和/或GLP-1R水平增加而导致高胰岛素血症和/或低血糖症和/或胃肠功能障碍迹象相关的病症的潜力。这些条件将包括低血糖症的症状治疗，以及基于GLP-1对细胞生长和分化的作用，包括影响疾病进程的可能性。
在超过20年的时间里，没有新的药物获得监管批准以用于治疗高胰岛素血症低血糖症(HH)，并且目前所有的治疗方法都存在明显的缺点。这就产生了大量未满足的医疗需求，从罕见病适应症，到约10％的足月新生儿病房的短期需求，再到0.2-1％的接受胃旁路手术的成人。最近在两个不同的临床人群中使用GLP-1受体拮抗剂肽Ex9-39在临床上验证了特异性靶向该机制的有效性。
先天性高胰岛素血症(CHI)是英国新生儿和儿童严重、持续HH的最常见原因，发病率约为活产婴儿的1/40,000。GLP-1R拮抗剂在CHI中的潜在益处在高胰岛素血症的啮齿动物模型中得到证实。由于KATP通道中的失活突变，这些发现已经扩展到在患有CHI的成人受试者中测试Ex9-39。预计引入GLP-1受体拮抗剂治疗将减轻许多CHI患者进行不可逆胰腺切除术的压力。这将包括CHI患者，其中有越来越多的证据表明GLP-1分泌过多是不适当的胰岛素释放的根本原因。预计GLP-1拮抗剂治疗具有持续的反应特征，对所有患者都有效，并且可以在成人中持续使用，而不需要剂量滴定或对于由引入其他药理学治疗引起的药物相互作用进行调整。
减肥手术后低血糖(PBHS)。胃旁路手术越来越多地用于治疗病态肥胖的2型糖尿病，并已被证明能显著提高GLP-1分泌水平。在相对较少但临床上相当数量的患者中，这种治疗可导致严重的餐后高胰岛素血症性低血糖状态，该状态会在手术后出现，葡萄糖浓度低至(20-40mg/dL)足以导致癫痫发作、精神状态改变、意识丧失、认知功能障碍、残疾和死亡的水平。对于那些表现出严重症状的患者没有有效的治疗方法。本发明提供了一种治疗性干预的机会，如果患者患有治疗肥胖症后的高胰岛素血症，该机会可以在很大程度上保护这些患者。最近，萨利希和他的同事报道了胃旁路术患者的这种严重餐后低血糖可以通过输注GLP-1拮抗剂Ex(9-39)来纠正，这与GLP-1及其受体在该机制中的基本作用一致。
低血糖症的症状治疗的未满足的医疗需求不止CHI和PBSH。高胰岛素血症诱导的低血糖症包括多种异质性疾病，主要特征为胰岛素分泌失调和由胰腺β细胞引起的低血糖症，它们可用GLP1-R拮抗剂有效治疗。这些疾病包括但不限于儿童低血糖症(如新生儿低血糖症、胃造口插入术后继发性低血糖症、病因不明的餐后低血糖症)和成人低血糖症(如胰岛素瘤、胃旁路手术诱发的低血糖症)。
原因不明的暂时性低血糖症是新生儿科最常见和最重要的医疗保障问题之一。在英国，我们治疗中心的内部检查表明，大约10％的足月新生儿入院仅仅是由于不明原因的低血糖症。鉴于2012年活产婴儿数为800,000，这意味着每年约有8,000例新病例。类似的数据也可以从美国一项关于极端体重婴儿的新生儿低血糖症的研究中得出。如本发明所述的安全有效的治疗将在该患者群体中提供潜在的治疗益处。
在部分“倾倒综合征”患者中观察到高胰岛素血症和/或低血糖症(例如，胃旁路手术和胃/食管手术等外科手术的并发症)，这些患者表现出非常快速的胃排空和过度的胰岛素释放，目前的假设表明餐后快速葡萄糖波动、GLP-1分泌和高胰岛素血症之间存在联系。
肿瘤诱导的低血糖症(TH)是一种罕见的临床疾病，可能是由于胰岛b细胞瘤(胰岛素瘤)的正位胰岛素分泌或非胰岛细胞瘤(实例包括但不限于支气管类癌和胃肠间质肿瘤)的异位肿瘤胰岛素分泌而发生的。胰岛素瘤是一种罕见的肿瘤，发病率约为0.4/100,000人/年，通常是小规模、偶发的胰腺内良性肿瘤。
最后，使用拮抗剂Ex(9-39)的临床数据一致证明了阻断GLP-1水平和胰岛素水平升高的后果的能力。本发明的其他实施方案包括治疗在如下病症范围内的原因不明的症状性高胰岛素血症和/或相关的低血糖症，例如由于与亮氨酸敏感性相关的高胰岛素血症引起的低血糖症、由于与非恶性胰岛素瘤、不可手术的胰岛细胞瘤或癌、或胰腺外恶性肿瘤相关的高胰岛素血症引起的低血糖症、多囊卵巢综合征中的高胰岛素血症和低血糖症、T2DM中磺酰脲诱导的毒性、普拉德-威利综合征、肾上腺机能不全和爱迪森氏病、贝克威思-威德曼综合征、索托氏综合征、克斯提洛综合征、蒂莫西综合征、歌舞伎综合征、先天性糖蛋白糖基化缺陷症、晚期倾倒综合征、糖尿病母亲的婴儿的反应性低血糖症、13-三体性综合症、中枢性换气不足综合征、矮妖精貌综合征(胰岛素抵抗综合征)、嵌合型特纳综合征、乌舍尔综合征、非胰岛素瘤性胰源性低血糖症、人为低血糖症、胰岛素基因受体突变、胰岛素自身免疫综合征、非胰岛细胞肿瘤低血糖症(NICTH)以及酒精和其他成瘾物质戒断。
发明内容
本发明涉及对GLP-1受体具有拮抗活性的新化合物、包含这些化合物的药物组合物以及这些化合物在制备用于治疗疾病的药物中的用途。
因此，在一个实施方案中，本发明提供了式(1)的化合物：
一种包括式(1)的序列的化合物：
Figure BDA0004096896720000051
其中；
R1是H、NHR2或CH2R2；其中R2选自：H、C1-6烷基、(CH2)n芳基和(CH2)n杂芳基；其中n为1至6；
AA1是-Leu-或-Nle-；
AA2是-NHCR3aR3bCO-；其中R3a是氢或C1-3烷基基团，或者R3a与R3b连接形成任选地包含一个或以上选自N和O的杂原子的3-6元环；并且R3b是C1-6烷基、(CH2)n烷基、(CH2)nOH或(CH2)nOR4，或者R3b与R3a连接形成任选地包含一个或以上选自N和O的杂原子的3-6元环；其中R4是C1-6烷基，并且n为1至6；
LysR是任选被N-取代的取代赖氨酸残基；
X是序列-Gln-AA3-Glu-AA4-Glu-AA5-Val-AA6-Leu-Phe-AA7-AA8-Trp-Leu-Lys-AA9-AA10-；
其中AA3是-Met-或-Nle-；其中当AA3是-Met-时，LysR是N-取代的赖氨酸残基；
AA4是-Glu-或-Gln-；
AA5是-Ser-或-Ala-；
AA6是-Arg-或-DArg-；
AA7是基团-NHCHR5CO-；其中R5是C1-6烷基基团；
AA8是通过内酰胺桥连接到AA9的-Glu-；
AA9是通过内酰胺桥连接到AA8的-Lys-；
AA10是-Gly-、-Ser-、-DAla-或-βAla-；
Y不存在或者是序列-AA11-AA12-AA13-AA14-AA15-AA16-AA17-AA18-AA19-AA20-AA21-
其中AA11是-Gly-或-Ser-；
AA12是-Pro-或-Ser-；
AA13是-Ser-、-DSer-或-Lys-；
AA14是-Ser-、-DSer-、-Lys-或-Phe-；
AA15不存在或者是-Ser-、-DSer-、-Gly-、-Glu-或-Lys-；
AA16不存在或者是-Ser-、-DSer-、-Ala-、-Lys-或-Tyr-；
AA17不存在或者是-Ser-、-DSer-、-Pro-、-Glu-或-Lys-；
AA18不存在或者是-Ser-、-DSer-、-Pro-、-Lys-或-LysR-；
AA19不存在或者是-Pro-或-Glu-；
AA20不存在或者是-Ser-或-Tyr-；
AA21不存在或者是-Glu-；
其中X或Y的C末端是羧基基团或羧酰胺基团，或者与任何天然或非天然氨基酸序列或任何其他部分、官能团或基团连接；
或其互变异构体或立体化学异构形式或其前药、盐或两性离子。
特定的化合物还包括式(1a)的化合物：
Figure BDA0004096896720000071
或其互变异构体或立体化学异构形式或其前药、盐或两性离子，其中AA1、AA2、LysR、X和Y如上定义。
特定的化合物还包括式(1b)的化合物：
Figure BDA0004096896720000072
或其互变异构体或立体化学异构形式或其前药、盐或两性离子，其中AA1、AA2、LysR、X和Y如上定义。
特定的化合物还包括式(1c)的化合物：
Figure BDA0004096896720000073
或其互变异构体或立体化学异构形式或其前药、盐或两性离子，其中AA1、AA2、LysR、X和Y如上定义。
特定的化合物还包括式(1d)的化合物：
Figure BDA0004096896720000081
或其互变异构体或立体化学异构形式或其前药、盐或两性离子，其中AA1、AA2、LysR、X和Y如上定义。
本文的化合物可用作胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体的拮抗剂。这些化合物可用于制造药物。所述化合物或药物可用于治疗、预防、改善、控制与GLP-1受体相关的疾病或降低与GLP-1受体相关的疾病的风险，所述疾病包括在如下病症范围内的原因不明的症状性高胰岛素血症和/或相关的低血糖症，例如由于与亮氨酸敏感性相关的高胰岛素血症引起的低血糖症、由于与非恶性胰岛素瘤、不可手术的胰岛细胞瘤或癌、或胰腺外恶性肿瘤相关的高胰岛素血症引起的低血糖症、多囊卵巢综合征中的高胰岛素血症和低血糖症、T2DM中磺酰脲诱导的毒性、普拉德-威利综合征、肾上腺机能不全和爱迪森氏病、贝克威思-威德曼综合征、索托氏综合征、克斯提洛综合征、蒂莫西综合征、歌舞伎综合征、先天性糖蛋白糖基化缺陷症、晚期倾倒综合征、糖尿病母亲的婴儿的反应性低血糖症、13-三体性综合症、中枢性换气不足综合征、矮妖精貌综合征(胰岛素抵抗综合征)、嵌合型特纳综合征、乌舍尔综合征、非胰岛素瘤性胰源性低血糖症、人为低血糖症、胰岛素基因受体突变、胰岛素自身免疫综合征、非胰岛细胞肿瘤低血糖症(NICTH)以及酒精和其他成瘾物质戒断。
具体实施方式
本发明涉及新化合物。本发明还涉及新化合物作为GLP-1受体拮抗剂的用途。本发明还涉及新化合物在制备用作GLP-1受体拮抗剂或用于治疗与GLP-1受体相关的疾病的药物中的用途。本发明还涉及相对于其他GLP受体亚型而言为GLP-1受体选择性拮抗剂的化合物、组合物和药物。
本发明还涉及化合物、组合物和药物，其用于治疗原因不明的症状性高胰岛素血症病症和/或相关的低血糖症症状，例如由于与亮氨酸敏感性相关的高胰岛素血症引起的低血糖症、由于与非恶性胰岛素瘤、不可手术的胰岛细胞瘤或癌、或胰腺外恶性肿瘤相关的高胰岛素血症引起的低血糖症、多囊卵巢综合征中的高胰岛素血症和低血糖症、T2DM中磺酰脲诱导的毒性、普拉德-威利综合征、肾上腺机能不全和爱迪森氏病、贝克威思-威德曼综合征、索托氏综合征、克斯提洛综合征、蒂莫西综合征、歌舞伎综合征、先天性糖蛋白糖基化缺陷症、晚期倾倒综合征、糖尿病母亲的婴儿的反应性低血糖症、13-三体性综合症、中枢性换气不足综合征、矮妖精貌综合征(胰岛素抵抗综合征)、嵌合型特纳综合征、乌舍尔综合征、非胰岛素瘤性胰源性低血糖症、人为低血糖症、胰岛素基因受体突变、胰岛素自身免疫综合征、非胰岛细胞肿瘤低血糖症(NICTH)以及酒精和其他成瘾物质戒断。
因此，在一个实施方案中，本发明提供了包括式(1)的序列的化合物：
Figure BDA0004096896720000091
其中；
R1是H、NHR2或CH2R2；其中R2选自：H、C1-6烷基、(CH2)n芳基和(CH2)n杂芳基；其中n为1至6；
AA1是-Leu-或-Nle-；
AA2是-NHCR3aR3bCO-；其中R3a是氢或C1-3烷基基团，或者R3a与R3b连接形成任选地包含一个或以上选自N和O的杂原子的3-6元环；并且R3b是C1-6烷基、(CH2)n烷基、(CH2)nOH或(CH2)nOR4，或者R3b与R3a连接形成任选地包含一个或以上选自N和O的杂原子的3-6元环；其中R4是C1-6烷基，并且n为1至6；
LysR是任选被N-取代的取代赖氨酸残基；
X是序列-Gln-AA3-Glu-AA4-Glu-AA5-Val-AA6-Leu-Phe-AA7-AA8-Trp-Leu-Lys-AA9-AA10-；
其中AA3是-Met-或-Nle-；其中当AA3是-Met-时，LysR是N-取代的赖氨酸残基；
AA4是-Glu-或-Gln-；
AA5是-Ser-或-Ala-；
AA6是-Arg-或-DArg-；
AA7是基团-NHCHR5CO-；其中R5是C1-6烷基基团；
AA8是通过内酰胺桥连接到AA9的-Glu-；
AA9是通过内酰胺桥连接到AA8的-Lys-；
AA10是-Gly-、-Ser-、-DAla-或-βAla-；
Y不存在或者是序列-AA11-AA12-AA13-AA14-AA15-AA16-AA17-AA18-AA19-AA20-AA21-
其中AA11是-Gly-或-Ser-；
AA12是-Pro-或-Ser-；
AA13是-Ser-、-DSer-或-Lys-；
AA14是-Ser-、-DSer-、-Lys-或-Phe-；
AA15不存在或者是-Ser-、-DSer-、-Gly-、-Glu-或-Lys-；
AA16不存在或者是-Ser-、-DSer-、-Ala-、-Lys-或-Tyr-；
AA17不存在或者是-Ser-、-DSer-、-Pro-、-Glu-或-Lys-；
AA18不存在或者是-Ser-、-DSer-、-Pro-、-Lys-或-LysR-；
AA19不存在或者是-Pro-或-Glu-；
AA20不存在或者是-Ser-或-Tyr-；
AA21不存在或者是-Glu-；
其中X或Y的C末端是羧基基团或羧酰胺基团，或者与任何天然或非天然氨基酸序列或任何其他部分、官能团或基团连接；
或其互变异构体或立体化学异构形式或其前药、盐或两性离子。
R1可以是H、NH2、NHBn或CH2Bn。R1可以是H。R1可以是氢。R1可以是NH2。R1可以是NHBn。R1可以是CH2Bn。R1可以是NH-苄基。R1可以是CH2-苄基。
R2可以是H。R2可以是氢。R2可以是Bn。R2可以是苄基。
AA1可以是-Leu-。AA1可以是-Nle-。
AA2可以是-NHCR3aR3bCO-；其中R3a是氢或甲基，并且R3b选自甲基、乙基、异丁基、正丁基、CH2OH、CH2CH2OH、CH2OCH3、CH2-环丙基、Bn、CH2Bn或CH2CH2Bn。
R3a可以是氢或甲基。R3a可以是氢。R3a可以是甲基。
R3b可以选自甲基、乙基、异丁基、正丁基、CH2OH、CH2CH2OH、CH2OCH3、CH2-环丙基、Bn、CH2Bn或CH2CH2Bn。
R3a和R3b可以连接形成环。R3a和R3b可以连接形成环丁基或氧杂环丁环。
AA2可以选自：
Figure BDA0004096896720000111
AA2可以选自：
Figure BDA0004096896720000121
LysR可以是未取代的赖氨酸残基。
LysR可以是N-取代的赖氨酸残基，其中N-取代基选自：-CO(CH2)qCH3；-CO(CH2)qCO2H；-CO(CH2)qCHCH2；-COO(CH2)qCH3；-COO(CH2)qCO2H和-COO(CH2)qCHCH2；其中q为1至22。
LysR可以是N-取代的赖氨酸残基，其中N-取代基是-COO(CH2)qCHCH2；其中q为1至22。
LysR可以是N-取代的赖氨酸残基，其中N-取代基是-COO(CH2)qCHCH2；其中q为1。
LysR可以是N-取代的赖氨酸残基，其中N-取代基是-COOCH2CHCH2。
Lys R可以是
Figure BDA0004096896720000122
LysR可以是N-取代的赖氨酸残基，其中N-取代基是基团-L-G；
其中L选自由以下组成的组中：
Figure BDA0004096896720000131
/>
Figure BDA0004096896720000141
并且G选自选自由以下组成的组中：
Figure BDA0004096896720000142
其中m为1至23；
p为1至3；
r为1至20；
s为0至3；
t为0至4；
并且w为0至4。
LysR可以是
Figure BDA0004096896720000143
LysR可以是
Figure BDA0004096896720000144
AA3可以是-Met-。AA3可以是-Nle-。当AA3是-Met-时,LysR是N-取代的赖氨酸残基。
AA4可以是-Glu-。AA4可以是-Gln-。
AA5可以是-Ser-。AA5可以是-Ala-。
AA6可以是-Arg-。AA6可以是-DArg-。
AA7可以是基团-NHCHR5CO-；其中R5选自异丙基、仲丁基和新戊基。R5可以是异丙基。R5可以是仲丁基、R5可以是新戊基。
AA7可以是-Ile-。AA7可以是-Val-。AA7可以是叔丁基丙氨酸残基。
AA10可以是-Gly-。AA10可以是-Ser-。AA10可以是-DAla-。AA10可以是-βAla-。
AA8和AA9可以通过内酰胺桥连接。
Y可以存在或不存在。Y可以不存在。Y可以存在。
AA11可以是-Gly-。AA11可以是-Ser-。
AA12可以是-Pro-。AA12可以是-Ser-。
AA13可以是-Ser-。AA13可以是-DSer-。AA13可以是-Lys-。
AA14可以是-Ser-。AA14可以是-DSer-。AA14可以是-Lys-。AA14可以是-Phe-。
AA15可以不存在。AA15可以是-Ser-。AA15可以是-DSer-。AA15可以是-Gly-。AA15可以是-Glu-。AA15可以是-Lys-。
AA16可以不存在。AA16可以是-Ser-。AA16可以是-DSer-。AA16可以是-Ala-。AA16可以是-Lys-。AA16可以是-Tyr-。
AA17可以不存在。AA17可以是-Ser-。AA17可以是-DSer-。AA17可以是-Pro-。AA17可以是-Glu-。AA17可以是-Lys-。
AA18可以不存在。AA18可以是-Ser-。AA18可以是-DSer-。AA18可以是-Pro-。AA18可以是-Lys-。AA18可以是-LysR-。
AA19可以不存在。AA19可以是-Pro-。AA19可以是-Glu-。
AA20可以不存在。AA20可以是-Ser-。AA20可以是-Tyr-。
AA21可以不存在。AA21可以是-Glu-。
当Y不存在时，X的C末端可以是羧酰胺基团。当Y不存在时，X的C末端可以是羧基基团。当Y不存在时，X的C末端可以与任何天然或非天然的氨基酸序列或任何其他部分、官能团或基团连接。
Y的C末端可以是羧酰胺基团。Y的C末端可以是羧基基团。Y的C末端可以与任何天然或非天然的氨基酸序列或任何其他部分、官能团或基团连接。
化合物可以是这样的化合物，其中R1是NHBn，AA1是-Leu-，AA2是-D-HomoPhe-，LysR是-Lys-，AA3是-Nle-，AA4是-Glu-，AA5是-Ala-，AA6是-DArg-，AA7是-Ile-并且AA10是-Gly-，其中X的C末端是羧酰胺基团。
化合物可以是这样的化合物，其中R1是NHBn，AA1是-Nle-，AA2是-Aib-，LysR是-Lys-，AA3是-Nle-，AA4是-Glu-，AA5是-Ala-，AA6是-DArg-，AA7是-Ile-并且AA10是-Gly-，其中X的C末端是羧酰胺基团。
化合物可以是这样的化合物，其中R1是NHBn，AA1是-Leu-，AA2是-D-Ala-，LysR是-Lys-，AA3是-Nle-，AA4是-Glu-，AA5是-Ala-，AA6是-DArg-，AA7是-Ile-，AA10是-Gly-，AA11是-Gly-，AA12是-Pro-，AA13是-Ser-，AA14是-Ser-，AA15是-Ser-，AA16是-Ser-，AA17是-Ser-并且AA18是-Ser-，其中Y的C末端是羧酰胺基团。
该化合物可以是式(1a)的化合物：
Figure BDA0004096896720000161
或其互变异构体或立体化学异构形式或其前药、盐或两性离子，其中AA1、AA2、LysR、X和Y如上定义。
该化合物可以是式(1b)的化合物：
Figure BDA0004096896720000162
或其互变异构体或立体化学异构形式或其前药、盐或两性离子，其中AA1、AA2、LysR、X和Y如上定义。
该化合物可以是式(1c)的化合物：
Figure BDA0004096896720000171
或其互变异构体或立体化学异构形式或其前药、盐或两性离子，其中AA1、AA2、LysR、X和Y如上定义。
该化合物可以是式(1d)的化合物：
Figure BDA0004096896720000172
或其互变异构体或立体化学异构形式或其前药、盐或两性离子，其中AA1、AA2、LysR、X和Y如上定义。
Figure BDA0004096896720000181
/>
Figure BDA0004096896720000191
/>
Figure BDA0004096896720000201
/>
化合物的具体实例包括具有GLP-1受体拮抗剂活性的化合物。
本发明的化合物可以用于包含本发明的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物中。
本发明的化合物可用于医药。
本发明的化合物可用于治疗与GLP-1受体相关的疾病。
本发明的化合物可用于治疗原因不明的症状性高胰岛素血症病症和/或相关的低血糖症病症，例如由于与亮氨酸敏感性相关的高胰岛素血症引起的低血糖症、由于与非恶性胰岛素瘤、不可手术的胰岛细胞瘤或癌、或胰腺外恶性肿瘤相关的高胰岛素血症引起的低血糖症、多囊卵巢综合征中的高胰岛素血症和低血糖症、T2DM中磺酰脲诱导的毒性、普拉德-威利综合征、肾上腺机能不全和爱迪森氏病、贝克威思-威德曼综合征、索托氏综合征、克斯提洛综合征、蒂莫西综合征、歌舞伎综合征、先天性糖蛋白糖基化缺陷症、晚期倾倒综合征、糖尿病母亲的婴儿的反应性低血糖症、13-三体性综合症、中枢性换气不足综合征、矮妖精貌综合征(胰岛素抵抗综合征)、嵌合型特纳综合征、乌舍尔综合征、非胰岛素瘤性胰源性低血糖症、人为低血糖症、胰岛素基因受体突变、胰岛素自身免疫综合征、非胰岛细胞肿瘤低血糖症(NICTH)以及酒精和其他成瘾物质戒断。
定义
在本申请中，除非另有说明，否则适用以下定义。
除非另有说明，否则术语“烷基”、“芳基”和“杂芳基”以其常规含义使用(例如，如IUPAC Gold Book中所定义的)。
与本文所述的任何化合物(包括式(1)的化合物)的用途相关的术语“治疗”用于描述任何形式的干预，其中将化合物施用于患有所述疾病或病症、或有患所述疾病或病症的风险、或有患所述疾病或病症的潜在风险的受试者。因此，术语“治疗”包括预防性(预防)治疗和显示疾病或病症的可测量或可检测症状的治疗。
本文所用的术语“有效治疗量”(例如与治疗病症、疾病或病情的方法相关)是指有效产生所需治疗效果的化合物的量。例如，如果病症是疼痛，那么有效治疗量是足以提供所需程度的疼痛缓解的量。所需程度的疼痛缓解可以是，例如，完全消除疼痛或降低疼痛的严重程度。
就所描述的任何化合物具有手性中心而言，本发明的适用范围扩及这些化合物的所有光学异构体，无论是外消旋体形式还是拆分的对映体形式。本文描述的发明涉及任何公开的化合物的所有晶体形式、溶剂化物和水合物，无论如何制备。就本文公开的任何化合物具有酸或碱中心如羧酸盐或氨基而言，所述化合物的所有盐形式都包括在本文中。在药物用途的情况下，该盐应被视为药学上可接受的盐。
可以提及的盐或药学上可接受的盐包括酸加成盐和碱加成盐。此类盐可以通过常规方法形成，例如通过游离酸或游离碱形式的化合物与一或多当量的合适的酸或碱反应，任选在溶剂中，或在盐不溶的介质中进行反应，然后使用标准技术(例如在真空中，通过冷冻干燥或过滤)除去所述溶剂或所述介质。盐也可以通过用另一种抗衡离子交换盐形式的化合物的抗衡离子来制备，例如使用合适的离子交换树脂。
药学上可接受的盐的实例包括衍生自无机酸和有机酸的酸加成盐，以及衍生自金属如钠、镁、钾和钙的盐。
酸加成盐的实例包括与以下酸形成的酸加成盐：乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、藻酸、芳基磺酸(例如苯磺酸、2-萘磺酸、1,5-萘二磺酸和对甲苯磺酸)、抗坏血酸(例如L抗坏血酸)、L-天冬氨酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、丁酸、(+)樟脑酸、樟脑磺酸、(+)-(1S)-樟脑-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环己基氨基磺酸、十二烷基硫酸、1,2-乙二磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸(例如D-葡萄糖酸)、葡萄糖醛酸(例如D-葡萄糖醛酸)、谷氨酸(例如L-谷氨酸)、α-氧戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、羟乙磺酸、乳酸(例如(+)-L-乳酸和(±)-DL-乳酸)、乳糖酸、马来酸、苹果酸(例如(-)-L-苹果酸)、丙二酸、(±)-DL-扁桃酸、偏磷酸、甲磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、帕莫酸、磷酸、丙酸、L-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、鞣酸、酒石酸(例如，(+)-L-酒石酸)、硫氰酸、十一烯酸和戊酸。
还包括这些化合物及其盐的任何溶剂化物。优选的溶剂化物是通过向本发明化合物的固态结构(例如晶体结构)中掺入无毒的药学上可接受的溶剂分子(以下称为溶剂化溶剂)而形成的溶剂化物。此类溶剂的例子包括水、醇类(如乙醇、异丙醇和丁醇)和二甲亚砜。溶剂化物可以通过用含有溶剂化溶剂的溶剂或溶剂混合物重结晶本发明的化合物来制备。在任何给定的情况下是否已经形成溶剂化物可以通过使用众所周知的标准技术如热重分析(TGA)、差示扫描量热法(DSC)和X射线结晶学对化合物的晶体进行分析来确定。
溶剂化物可以是化学计量或非化学计量的溶剂化物。特定的溶剂化物可以是水合物，并且水合物的例子包括半水合物、一水合物和二水合物。关于溶剂化物和用于制备和表征它们的方法的更详细的讨论，参见Bryn等，Solid-State Chemistry of Drugs,SecondEdition,published by SSCI,Inc of West Lafayette,IN,USA,1999,ISBN0-967-06710-3。
本发明上下文中的术语“药物组合物”是指包含活性剂且另外包含一种或以上药学上可接受的载体的组合物。根据施用方式和剂型的性质，组合物可以进一步包含选自以下的成分：例如稀释剂、佐剂、赋形剂、载体、防腐剂、填充剂、崩解剂、湿润剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂。所述组合物可以采取以下形式：例如片剂、糖衣丸、粉剂、酏剂、糖浆、包括悬浮液的液体制剂、喷雾剂、吸入剂、片剂、锭剂、乳剂、溶液剂、扁囊剂、颗粒剂、胶囊剂和栓剂，以及注射用液体制剂，包括脂质体制剂。
本发明的化合物可以包含一个或以上同位素取代，并且提及特定元素在其范围内包括该元素的所有同位素。例如，提及氢在其范围内包括1H、2H(D)和3H(T)。类似地，提及碳和氧在其范围内分别包括12C、13C和14C以及16O和18O。以类似的方式，除非上下文另有说明，否则提及特定官能团在其范围内也包括同位素变体。例如，提及烷基如乙基或烷氧基如甲氧基时，也包括基团中一个或以上氢原子为氘或氚同位素形式的变体，例如乙基中所有五个氢原子均为氘同位素形式(全氘乙基)或甲氧基中所有三个氢原子均为氘同位素形式(三氘甲氧基)。同位素可以是放射性的或非放射性的。
治疗剂量可以根据患者的要求、所治疗病情的严重程度和所用的化合物而变化。确定特定情况下的适当剂量在本领域的技术范围内。通常，治疗以小于化合物最佳剂量的较小剂量开始。此后，以小增量增加剂量，直到达到最佳效果的情况。为了方便起见，如果需要的话，总的日剂量可以在一天中分成几份施用。
当然，化合物有效剂量的大小将随着所治疗病情的严重程度以及特定化合物及其施用途径而变化。合适剂量的选择在本领域普通技术人员的能力范围内，不存在不适当的负担。通常，日剂量范围可以是人和非人动物每千克体重约10μg至约30mg，优选人和非人动物每千克体重约50μg至约30mg，例如人和非人动物每千克体重约50μg至约10mg，例如人和非人动物每千克体重约100μg至约30mg，例如人和非人动物每千克体重约100μg至约10mg，并且最优选人和非人动物每千克体重约100μg至约1mg。
药物制剂
虽然活性化合物可以单独施用，但优选以药物组合物(例如制剂)的形式存在。
因此，在本发明的另一个实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含至少一种如上定义的式(1)化合物以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
该组合物可以是适于用于注射的组合物。注射可以是静脉内(IV)注射或皮下注射。该组合物可以以无菌缓冲溶液形式提供，或者作为可以悬浮或溶解在注射用无菌缓冲液中的固体提供。
药学上可接受的赋形剂可选自例如载体(例如固体、液体或半固体载体)、佐剂、稀释剂(例如固体稀释剂，如填料或填充剂；和液体稀释剂，如溶剂和助溶剂)、成粒剂、粘合剂、助流剂、包衣剂、控释剂(例如延迟释放或延缓释放的聚合物或蜡状物)、结合剂、崩解剂、缓冲剂、润滑剂、防腐剂、抗真菌剂和抗细菌剂、抗氧化剂、缓冲剂、张力调节剂、增稠剂、调味剂、增甜剂、色素、增塑剂、掩味剂、稳定剂或药物组合物中常规使用的任何其他赋形剂。
本文所用术语“药学上可接受的”是指化合物、材料、组合物和/或剂型，其在合理的医学判断范围内，适合用于与受试者(例如人类受试者)的组织接触，而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，具有合理的效益/风险比。每种赋形剂还必须是“可接受的”，即与制剂的其他成分相容。
含有式(1)化合物的药物组合物可以根据已知技术配制，参见例如Remington'sPharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company,Easton,PA,USA。
合适的制剂通常包含0-20％(w/w)缓冲剂、0-50％(w/w)助溶剂和/或0-99％(w/w)注射用水(WFI)(取决于剂量和是否冻干)。肌内长效制剂也可以含有0-99％(w/w)的油。
式(1)化合物通常以单位剂量形式存在，因此通常含有足够的化合物以提供所需水平的生物活性。例如，制剂可以包含1纳克至2克的活性成分，例如1纳克至2毫克的活性成分。在这些范围内，化合物的特定子范围为0.1毫克至2克活性成分(更通常为10毫克至1克，例如50毫克至500毫克)，或1微克至20毫克(例如1微克至10毫克，例如0.1毫克至2毫克活性成分)。
活性化合物将以足以达到所需治疗效果的量(有效量)施用给有需要的患者(例如人或动物患者)。施用化合物的精确量可由主管医师根据标准程序确定。
实施例
现在将通过参考以下实施例中描述的具体实施方案来说明本发明，但不限于此。
实施例1至33
已经制备了上表1中所示的实施例1至33的化合物。在表2中列出了它们的LCMS特性和用于制备它们的方法。除非另有说明，否则每个实施例的原料都是市售的。
一般程序
如果没有包括制备路线，则相关的中间体是可商购的。使用未经进一步纯化的商业试剂。室温(rt)是指大约20℃至27℃。
分析方法
在电喷雾条件下进行化合物的LCMS分析。
分析方法A
使用以下LCMS方法在电喷雾条件下测定MS离子，使用以下HPLC方法测定HPLC保留时间(RT)，除非另有说明，否则HPLC纯度＞95％。
LCMS：Agilent 1200HPLC&6410B Triple Quad，柱：Xbridge C18，3.5μm，2.1*30mm。梯度[时间(min)/溶剂B(％)]：0.0/10、0.9/80、1.5/90、8.5/5、1.51/10。(溶剂A＝1mLTFA在1000mL水中的溶液，溶剂B＝1mL TFA在1000mL MeCN中的溶液；进样量5μL(可变)；紫外检测：220nm、254nm、210nm；柱温：25℃；1.0mL/min。
HPLC：Agilent Technologies 1200，柱：Gemini-NX C18，5μm，110A，150*4.6mm。梯度[时间(min)/溶剂B(％)]：0.0/30、20/60、20.1/90、23/90。(溶剂A＝1mL TFA在1000mL水中的溶液，溶剂B＝1mL TFA在1000mL MeCN中的溶液；进样量5μL(可变)；紫外检测：220nm、254nm；柱温：25℃；1.0mL/min。
分析方法B
仪器：Thermo Scientific Orbitrap Fusion：柱：Phenomenex Kinetex Biphenyl
Figure BDA0004096896720000261
2.6μm，2.1x 50mm；梯度[时间(min)/溶剂B的A溶液(％)]：0.00/10、0.30/10、0.40/60、1.10/90、1.70/90、1.75/10、1.99/10、2.00/10；溶剂：溶剂A＝0.1％甲酸的水溶液；溶剂B＝0.1％甲酸的乙腈溶液；进样量5μL；柱温25℃；流量：0.8mL/min。
中间体和化合物的合成
提供以下实施例来说明本发明的优选方面，并且不旨在限制本发明的范围。所有的Fmoc-氨基酸都是可商购的。
实施例1-33的合成
使用标准Fmoc固相肽合成(SPPS)合成线型肽，然后从树脂上切割并纯化。
肽合成的一般方法：
方法a–以实施例25的合成为例
肽合成
1)向装有Rink Amide MBHA树脂(sub：0.35mmol/g，0.3mmol，0.86g)的容器中添加DCM并溶胀2小时。
2)沥干，然后用DMF清洗(5次，每次清洗之间沥干)。
3)添加20％哌啶的DMF溶液，用N2鼓泡搅拌30分钟。
4)沥干并用DMF清洗(5次，每次清洗之间沥干)。
5)添加Fmoc-氨基酸溶液(DMF溶液，3.0当量)并混合30秒，然后添加活化缓冲液(HBTU(2.85当量)和DIEA(6当量)的DMF溶液)，用N2鼓泡搅拌1小时。
6)通过茚三酮试验监控偶联反应。
7)如果需要，在发生低效偶联时，对相同的氨基酸偶联重复步骤4至6。
8)对下一个氨基酸偶联重复步骤2至6。
注意：对于下表中的酸，使用了不同的保护基团和/或偶联剂。
Figure BDA0004096896720000271
肽侧链脱保护环化：
1)向树脂中添加DCM，并用N2鼓泡搅拌，然后添加PhSiH3(10当量)、Pd(PPh3)4(0.2当量)，用N2搅拌15分钟，共3次。
2)将树脂用DCM洗涤三次，然后用DMF洗涤三次。
3)用0.5％二乙基二硫代氨基甲酸钠三水合物DMF和0.5％DIEA的DMF溶液洗涤树脂十次。
4)将HATU(2当量)和DIEA(4当量)添加到DMF中的树脂中，并在N2鼓泡下搅拌1小时。
5)将树脂用MeOH洗涤三次，并真空干燥。
肽切割和纯化：
1)在室温下，将切割缓冲液(92.5％TFA/2.5％EDT/2.5％TIS/2.5％H2O)添加到含有侧链保护肽的树脂的烧瓶中，并搅拌3小时。
2)过滤并收集肽溶液。
3)用冷的叔丁基甲基醚沉淀肽，并离心(以3000rpm进行3分钟)。
4)用叔丁基甲基醚洗涤残余物(2次)。
5)将粗肽在真空下干燥2小时。
6)通过制备型HPLC纯化粗肽。制备型HPLC条件：仪器：Gilson281。溶剂：A-0.1％TFA的水溶液，B-乙腈，柱：Luna C18(200×25mm；10μm)和Gemini C18(150*30mm；5μm)串联。梯度[时间(min)/溶剂B(％)]：0.0/15、60.0/55、60.1/90、70/90、70.1/10，以20mL/min，紫外检测(波长＝215/254nm)，然后冻干得到实施例25(32.1mg，收率4.06％)。
表2-由实施例1-33表示的纯化肽的HRMS和LCMS性质
Figure BDA0004096896720000281
/>
Figure BDA0004096896720000291
/>
Figure BDA0004096896720000301
ND–未测定
生物活性
提供以下实施例来说明本发明的优选方面，并且不旨在限制本发明的范围。
实施例A.GLP-1肽的体外药理学表征-人GLP1受体的功能拮抗作用，cAMP累积测定
使用HiRange cAMP试剂盒(Cisbio)评估用激动剂配体(GLP-1(7-36)酰胺肽，Tocris)刺激GLP-1R时对cAMP产生的拮抗剂抑制。该方法遵循试剂盒中提供的两步方案。简言之，使用细胞解离液(Gibco)收获用1％v/v GLP-1R Bacmam感染24小时的HEK细胞，离心并重悬于测定缓冲液(补充有0.5mM IBMX(Tocris)的HBSS(Lonza))中。试验化合物的DMSO储备液在测定缓冲液中连续稀释，并添加到96孔半面积白板(Costar)中。测定中DMSO的最终浓度为0.3％。以每孔20K个细胞添加至板中，然后孵育30分钟(湿润空气(5％ CO2)、37℃)。然后，通过添加相当于EC80浓度的GLP-1(7-36)肽再刺激细胞30分钟(湿润空气(5％CO2)，37℃)。通过添加试剂盒中提供的裂解缓冲液中的HTRF检测试剂终止细胞内cAMP的累积。在室温下孵育1小时后，在Pherastar FS
(BMG Labtech,Inc.)上读取板。Dotmatics研究软件用于将数据拟合到四参数浓度响应曲线。使用Cheng-Prusoff方程的修改来校正激动剂浓度的计算IC50值，以产生pKb函数值：
Figure BDA0004096896720000302
Figure BDA0004096896720000311
/>
实施例B.GLP-1肽的体外药理学表征-小鼠GLP1受体的功能性拮抗作用，cAMP累积测定：
使用HitHunter cAMP测定(DiscoverX)评估用激动剂配体刺激GLP-1R时对cAMP产生的拮抗剂抑制。该方法遵循试剂盒中提供的拮抗剂程序步骤。简言之，将稳定表达小鼠GLP-1R的CHO-K1细胞解冻，并以10K细胞/孔将总体积为20μl的在CP05试剂中的细胞接种于白壁384孔板中，并在Cytomat中于37℃孵育过夜。在测定当天，用15μl的HBSS/10mM HEPES更换培养基。将试验化合物的DMSO储备液在DMSO中连续稀释，然后在HBSS/10mM HEPES中进一步稀释，将每种浓度的5μl溶液添加至板中，随后在37℃孵育30分钟。测定中的最终DMSO浓度为1％。通过添加相当于EC80浓度的Exendin-4，在37℃再刺激细胞30分钟。通过添加试剂盒中提供的裂解缓冲液中的HTRF检测试剂终止细胞内cAMP的累积。在黑暗中室温孵育1小时后，在Envision(Perkin Elmer)上读取板。Dotmatics研究软件用于将数据拟合为四参数浓度响应曲线。使用Cheng-Prusoff方程的修改来校正激动剂浓度的计算IC50值，以产生pKb函数值：
Figure BDA0004096896720000312
Figure BDA0004096896720000321
实施例C：正常小鼠IPGTT激发试验
本研究的目的是评估静脉注射先导GLP1拮抗肽对瘦的健康雄性C57BL/6J小鼠中exendin-4诱导的(GLP1受体激动剂)葡萄糖耐量改善的阻断/减少/拮抗作用。通过腹膜内途径施用葡萄糖。
材料和方法
将瘦的健康雄性C57BL/6J JAX小鼠在到达后和整个研究过程中单独关在聚丙烯笼中，处于正常的12小时光暗周期(07:00开灯)。相对湿度通常为55±15％，避免长时间低于40％RH或高于70％RH。除非另有说明，否则在研究过程中，动物可以自由获得标准维持饮食和自来水。
实验程序
为了让动物熟悉(familiarise)给药方案，在研究前的5天中，使动物习惯于动物住所和饮食约2周，每天处理。根据体重对动物进行随机分组，确保各组的平均体重尽可能接近平衡。
在ipGTT前一天，确保所有动物禁食(保持自由饮水)。实验当天，动物被转移到一个单独的房间。在治疗1之前(葡萄糖前20分钟)，从所有动物中采集基线血样。五分钟后，通过静脉途径给小鼠施用治疗1(葡萄糖前15分钟)。治疗2(Exendin-4或载体)在葡萄糖负荷前10分钟施用(所有组)。治疗2给药后10分钟，通过腹膜内途径给动物施用葡萄糖负荷的D葡萄糖(2.0g/kg，体积为5ml/kg，浓度为400mg/ml)。在施用葡萄糖前3分钟和施用葡萄糖后10分钟、30分钟、60分钟、90分钟和120分钟采集血样。随后，在10分钟时间以单次重复方式测定血浆样品的葡萄糖和胰岛素，并且通过稳健回归分析数据，通过梯形法则计算葡萄糖数据的0至120分钟的AUC(总AUC和来自基线的AUC)，并通过相同的方法进行分析。
附图说明
图1示出了实施例12的结果。葡萄糖施用后0至120分钟的葡萄糖AUC。通过Williams检验比较Exendin-4与实施例化合物的效果。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
图2示出了实施例12的结果。葡萄糖施用后10分钟的血浆胰岛素(ng/ml)。通过Williams检验比较Exendin-4与实施例化合物的效果。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

Claims (25)

1.一种包括式(1)的序列的化合物：
Figure FDA0004096896710000011
其中；
R1是H、NHR2或CH2R2；其中R2选自：H、C1-6烷基、(CH2)n芳基和(CH2)n杂芳基；其中n为1至6；
AA1是-Leu-或-Nle-；
AA2是-NHCR3aR3bCO-；其中R3a是氢或C1-3烷基基团，或者R3a与R3b连接形成任选地包含一个或以上选自N和O的杂原子的3-6元环；并且R3b是C1-6烷基、(CH2)n烷基、(CH2)nOH或(CH2)nOR4，或者R3b与R3a连接形成任选地包含一个或以上选自N和O的杂原子的3-6元环；其中R4是C1-6烷基，并且n为1至6；
LysR是任选被N-取代的取代赖氨酸残基；
X是序列-Gln-AA3-Glu-AA4-Glu-AA5-Val-AA6-Leu-Phe-AA7-AA8-Trp-Leu-Lys-AA9-AA10-；
其中AA3是-Met-或-Nle-；其中当AA3是-Met-时，LysR是N-取代的赖氨酸残基；
AA4是-Glu-或-Gln-；
AA5是-Ser-或-Ala-；
AA6是-Arg-或-DArg-；
AA7是基团-NHCHR5CO-；其中R5是C1-6烷基基团；
AA8是通过内酰胺桥连接到AA9的-Glu-；
AA9是通过内酰胺桥连接到AA8的-Lys-；
AA10是-Gly-、-Ser-、-DAla-或-βAla-；
Y不存在或者是序列-AA11-AA12-AA13-AA14-AA15-AA16-AA17-AA18-AA19-AA20-AA21-
其中AA11是-Gly-或-Ser-；
AA12是-Pro-或-Ser-；
AA13是-Ser-、-DSer-或-Lys-；
AA14是-Ser-、-DSer-、-Lys-或-Phe-；
AA15不存在或者是-Ser-、-DSer-、-Gly-、-Glu-或-Lys-；
AA16不存在或者是-Ser-、-DSer-、-Ala-、-Lys-或-Tyr-；
AA17不存在或者是-Ser-、-DSer-、-Pro-、-Glu-或-Lys-；
AA18不存在或者是-Ser-、-DSer-、-Pro-、-Lys-或-LysR-；
AA19不存在或者是-Pro-或-Glu-；
AA20不存在或者是-Ser-或-Tyr-；
AA21不存在或者是-Glu-；
其中X或Y的C末端是羧基基团或羧酰胺基团，或者与任何天然或非天然氨基酸序列或任何其他部分、官能团或基团连接；
或其互变异构体或立体化学异构形式或其前药、盐或两性离子。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1选自H、NH2、NHBn或CH2Bn。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中R1是NHBn。
4.根据权利要求1所述的化合物，其为式(1a)的化合物：
Figure FDA0004096896710000021
或其互变异构体或立体化学异构形式或其前药、盐或两性离子，其中AA1、AA2、LysR、X和Y如权利要求1所定义。
5.根据权利要求1所述的化合物，其为式(1b)的化合物：
Figure FDA0004096896710000031
或其互变异构体或立体化学异构形式或其前药、盐或两性离子，其中AA1、AA2、LysR、X和Y如权利要求1所定义。
6.根据权利要求1所述的化合物，其为式(1c)的化合物：
Figure FDA0004096896710000032
或其互变异构体或立体化学异构形式或其前药、盐或两性离子，其中AA1、AA2、LysR、X和Y如权利要求1所定义。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中AA1是-Leu-。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中R3a是氢或甲基，并且R3b选自甲基、乙基、异丁基、正丁基、CH2OH、CH2CH2OH、CH2OCH3、CH2-环丙基、Bn、CH2Bn或CH2CH2Bn。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中R3a和R3b形成环丁基或氧杂环丁环。
10.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中AA2选自：
Figure FDA0004096896710000041
11.根据权利要求10所述的化合物，其中AA2选自：
Figure FDA0004096896710000042
12.根据权利要求11所述的化合物，其中AA2为：
Figure FDA0004096896710000051
13.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物，其中基团LysR是未取代的赖氨酸残基。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物，其中LysR是N-取代的赖氨酸残基，其中N-取代基选自：-CO(CH2)qCH3；-CO(CH2)qCO2H；-CO(CH2)qCHCH2；-COO(CH2)qCH3；-COO(CH2)qCO2H和-COO(CH2)qCHCH2；其中q为1至22。
15.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物，其中LysR是N-取代的赖氨酸残基，其中N-取代基是基团-L-G；
其中L选自由以下组成的组中：
Figure FDA0004096896710000052
/>
Figure FDA0004096896710000061
并且G选自由以下组成的组中：
Figure FDA0004096896710000062
其中m为1至23；
p为1至3；
r为1至20；
s为0至3；
t为0至4；
并且w为0至4。
16.根据权利要求14所述的化合物，其中基团LysR是：
Figure FDA0004096896710000071
17.根据权利要求14所述的化合物，其中基团LysR选自：
Figure FDA0004096896710000072
18.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物，其中AA8和AA9经由内酰胺桥连接。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物，其中所述X或Y的C末端为羧酰胺基团。
20.根据权利要求1所述的化合物，其为选自实施例1至33中的任一者。
21.根据权利要求1所述的化合物，其选自
实施例15：
Figure FDA0004096896710000081
实施例30：
Figure FDA0004096896710000082
实施例32：
Figure FDA0004096896710000083
22.根据权利要求1到21中任一项所述的化合物，其具有GLP-1受体拮抗剂活性。
23.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至22中任一项所定义的化合物和药学上可接受的赋形剂。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物或组合物，其用于治疗原因不明的症状性高胰岛素血症病症和/或相关的低血糖症病症。
25.根据权利要求24所述的化合物，其中所述病症选自在如下病症范围内的原因不明的症状性高胰岛素血症和/或相关的低血糖症：例如由于与亮氨酸敏感性相关的高胰岛素血症引起的低血糖症，由于与非恶性胰岛素瘤、不可手术的胰岛细胞瘤或癌、或胰腺外恶性肿瘤相关的高胰岛素血症引起的低血糖症，多囊卵巢综合征中的高胰岛素血症和低血糖症，T2DM中磺酰脲诱导的毒性，普拉德-威利综合征，肾上腺机能不全和爱迪森氏病，贝克威思-威德曼综合征，索托氏综合征，克斯提洛综合征，蒂莫西综合征，歌舞伎综合征，先天性糖蛋白糖基化缺陷症，晚期倾倒综合征，糖尿病母亲的婴儿的反应性低血糖症，13-三体性综合症，中枢性换气不足综合征，矮妖精貌综合征(胰岛素抵抗综合征)，嵌合型特纳综合征，乌舍尔综合征，非胰岛素瘤性胰源性低血糖症，人为低血糖症，胰岛素基因受体突变，胰岛素自身免疫综合征，非胰岛细胞肿瘤低血糖症(NICTH)以及酒精和其他成瘾物质戒断。
CN202180053052.3A 2020-07-27 2021-07-27 Glp-1受体拮抗剂 Pending CN116171283A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB2011604.2 2020-07-27
GBGB2011604.2A GB202011604D0 (en) 2020-07-27 2020-07-27 GLP-1 receptor antagonists
PCT/GB2021/051921 WO2022023723A1 (en) 2020-07-27 2021-07-27 Glp-1 receptor antagonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116171283A true CN116171283A (zh) 2023-05-26

Family

ID=72339360

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202180053052.3A Pending CN116171283A (zh) 2020-07-27 2021-07-27 Glp-1受体拮抗剂

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20230279053A1 (zh)
EP (1) EP4188409A1 (zh)
JP (1) JP2023535476A (zh)
CN (1) CN116171283A (zh)
AU (1) AU2021319051A1 (zh)
CA (1) CA3190422A1 (zh)
GB (1) GB202011604D0 (zh)
WO (1) WO2022023723A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3204051A1 (en) 2021-01-20 2022-07-28 Brian Lian Compositions and methods for the treatment of metabolic and liver disorders

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201816639D0 (en) * 2018-10-12 2018-11-28 Heptares Therapeutics Ltd GLP-1 Receptor Antagonist

Also Published As

Publication number Publication date
JP2023535476A (ja) 2023-08-17
AU2021319051A1 (en) 2023-03-16
US20230279053A1 (en) 2023-09-07
EP4188409A1 (en) 2023-06-07
WO2022023723A1 (en) 2022-02-03
CA3190422A1 (en) 2022-02-03
GB202011604D0 (en) 2020-09-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110684082B (zh) Gip和glp-1双激动多肽化合物及药学上可接受的盐与用途
CN112409460B (zh) 一类glp-1/胰高血糖素受体双重激动剂及其应用
US9546205B2 (en) Peptide analogues of glucagon and GLP1
EP2565205B1 (en) Glucagon-like peptide-1 analogue and use thereof
AU2015225945B2 (en) Peptides hormone analogues derivable from preproglucagon
JP2006501820A (ja) 修飾ｇｌｐ−１受容体アゴニストおよびそれらの薬理学的使用法
TW201427992A (zh) 作為雙重ｇｌｐ１／升糖素激動劑之艾塞那肽－４衍生物
WO2008056155A1 (en) Selective glucagon-like-peptide-2 (glp-2) analogues
KR20110069779A (ko) 신경펩티드-2 수용체(ｙ-2ｒ) 작용제 및 이의 용도
JP7492507B2 (ja) Ｇｌｐ－１受容体アンタゴニスト
CN116171283A (zh) Glp-1受体拮抗剂
US11987648B2 (en) Cyclohexapeptides as selective somatostatin SST5 receptor agonists
US20230295260A1 (en) Glp receptor agonists
EP4121094A1 (en) Oral glp receptor agonists

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination