CN116159184A - 一种人工血管及其体外制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种人工血管及其体外制备方法，属于医用材料领域。本发明发现高乙酰化长分子链壳聚糖或其衍生物和低乙酰化长分子链壳聚糖或其衍生物可作为骨架载体制备人工血管。本发明还依托壳聚糖或其衍生物材料提供了一种体外制备人工血管的方法，所得人工血管为细胞结构，具有较好的组织相容性、柔韧性和自我更新能力，能够适应于人或动物术后较为剧烈的运动，不易引发排斥性。

Description

一种人工血管及其体外制备方法
技术领域
本发明属于医用材料领域，具体涉及一种人工血管及其体外制备方法。
背景技术
心血管疾病是危害人类健康的常见疾病之一。心血管疾病比较严重的患者，其主要的和辅助的治疗手段为血管移植，然而自体血管来源有限，因此，临床上需要大量的人工血管作为移植替代物。人工血管是许多严重狭窄或闭塞性血管的替代品，多是以尼龙(Nylon)、涤纶(Dacron)、聚四氟乙稀(PTFE)等合成材料人工制造的，适用于全身各处的血管转流术，大、中口径人工血管应用于临床已取得满意的效果。
目前，人工血管的制造，国外的研究，绝大多数是采取医用高分子材料进行编织。我国在50年代末，60年代初，才开始进行研究，起初是用尼龙织成，后因尼龙降解，在身体内植入后发生破裂而被淘汰。现在多采用涤纶纤维编织人工血管，己大量应用于临床，如治疗主动脉瘸，主动脉狭窄，上下腔静脉切除更换术等。然而，上述材料制备的人工血管存在较多的问题，如易引起血栓、慢性炎症反应，易引发排斥、内膜增生，远期通畅率低，组织相容性差，无自我更新能力等。因此，对安全性更高的人工血管的研制仍是本领域亟需解决的关键问题。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种壳聚糖组合物在人工血管体外制备中的应用，所述壳聚糖组合物可作为人工血管体外制备时的骨架载体，制备得到细胞结构的人工血管。
本发明的目的还在于提供一种人工血管的体外制备方法，制备得到的血管与人或动物血管组织结构完全相同，具有较好的组织相容性、柔韧性和自我更新能力，不易引发排斥性，安全性更高。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种壳聚糖组合物在人工血管体外制备中的应用，所述壳聚糖组合物作为人工血管体外制备时的骨架载体，所述壳聚糖组合物包括两组乙酰度不同的长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物。
优选的，所述壳聚糖组合物中，两组长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物的乙酰度分别为20～45％、5～15％。
本发明还提供了一种人工血管的体外制备方法，包括以下步骤：
(1)在弹性胶管表面喷涂壳聚糖溶液，形成壳聚糖膜；
(2)将覆有壳聚糖膜的胶管浸没于混悬有血管内皮细胞的培养体系中，培养至形成血管内皮细胞网膜结构；
(3)将覆有血管内皮细胞网膜结构的胶管浸没于混悬有平滑肌细胞的培养体系中，培养至形成平滑肌细胞网膜结构；
(4)将覆有平滑肌细胞网膜结构的胶管浸没于混悬有成纤维细胞的培养体系中，培养至形成成纤维细胞网膜结构；
(5)继续培养至血管内皮细胞网膜、平滑肌细胞网膜、成纤维细胞网膜分别生长成完整的血管内膜、中膜、外膜后，向胶管内冲压；
(6)抽掉乳胶软管，得到人工血管。
优选的，所述步骤(1)中，弹性胶管表面喷涂一层无细胞毒性的油膜，再喷涂壳聚糖溶液。
优选的，所述步骤(1)中，壳聚糖溶液为上述壳聚糖组合物的溶液；所述壳聚糖溶液浓度为1～10％。
优选的，所述步骤(1)中，壳聚糖溶液分两层喷涂，第一层喷涂乙酰度20～45％的长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物的溶液，第二层喷涂乙酰度5～15％的长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物的溶液。
优选的，所述步骤(1)中，第一层壳聚糖溶液喷涂后，30～45℃风干成膜；第二层壳聚糖溶液在-10～0℃条件下喷涂，成膜后低温干燥。
优选的，所述步骤(1)中，第一层壳聚糖溶液成膜厚度为100～200μm；第二层壳聚糖溶液成膜厚度为200～400μm。
优选的，所述步骤(2)培养时间为2～10h；所述步骤(3)培养时间为24～48h；所述步骤(4)培养时间为24～48h。
本发明还提供了上述制备方法制备得到的人工血管。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明以高乙酰化长分子链壳聚糖或其衍生物和低乙酰化长分子链壳聚糖或其衍生物共同作为人工血管体外制备时的骨架载体，可以用于制备细胞结构的人工血管。壳聚糖分子在人工血管制备完成后可被细胞吸收，使得制备得到的人工血管与人或动物的血管组织结构完全相同，在被用于血管修复或连接手术后，可较快与伤者血管融为一体，发挥作用。
本发明制备得到的人工血管有别于其他材料制成的人造血管，具有较好的组织相容性、柔韧性和自我更新能力，能够适应人或动物术后较为剧烈的运动，不易引发排斥性。并且由于本发明人工血管特殊的制备工艺，使其在使用前就已经具备良好的抗张性，从而进一步确保了其在使用后的安全性。
附图说明
图1：人工血管成品图片。
具体实施方式
本发明提供了一种壳聚糖组合物在人工血管体外制备中的应用，所述壳聚糖组合物作为人工血管体外制备时的骨架载体，所述壳聚糖组合物包括两组乙酰度不同的长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物。
本发明所述壳聚糖组合物可以为：高乙酰化长分子链壳聚糖+低乙酰化长分子链壳聚糖；高乙酰化长分子链壳聚糖衍生物+低乙酰化长分子链壳聚糖；高乙酰化长分子链壳聚糖+低乙酰化长分子链壳聚糖衍生物；高乙酰化长分子链壳聚糖衍生物+低乙酰化长分子链壳聚糖衍生物。
本发明所述长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物包括磺酸化壳聚糖、磺酸化甲壳素、琥珀酰壳聚糖、氨基葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖、壳寡糖、几丁寡糖、羧甲基甲壳素、羧甲基壳聚糖、羟丙基壳聚糖、羟丙基甲壳素、羟乙基壳聚糖、羟乙基甲壳素和低聚壳聚糖。
优选的，本发明所述壳聚糖组合物选自下列任一项组合：
羧甲基壳聚糖+琥珀酰壳聚糖；
羟乙基壳聚糖+磺酸化壳聚糖；
羟丙基壳聚糖+羧甲基壳聚糖。
本发明所述壳聚糖组合物中，两组长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物的乙酰度分别为20～45％、5～15％。所述高乙酰化长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物的乙酰度为20～45％，优选为25～35％，更优选为27～32％；所述低乙酰化长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物的乙酰度为5～15％，优选为6～10％，更优选为8％。
本发明还提供了一种人工血管的体外制备方法，包括以下步骤：
(1)在弹性胶管表面喷涂壳聚糖溶液，形成壳聚糖膜；
(2)将覆有壳聚糖膜的胶管浸没于混悬有血管内皮细胞的培养体系中，培养至形成血管内皮细胞网膜结构；
(3)将覆有血管内皮细胞网膜结构的胶管浸没于混悬有平滑肌细胞的培养体系中，培养至形成平滑肌细胞网膜结构；
(4)将覆有平滑肌细胞网膜结构的胶管浸没于混悬有成纤维细胞的培养体系中，培养至形成成纤维细胞网膜结构；
(5)继续培养至血管内皮细胞网膜、平滑肌细胞网膜、成纤维细胞网膜分别生长成完整的血管内膜、中膜、外膜后，向胶管内冲压；
(6)抽掉乳胶软管，得到人工血管。
本发明所述弹性胶管为商品化医用无细胞毒性乳胶或其他具有纵向弹性、横向伸展性材料制成的中空软管，所述外管直径3～30mm，管壁厚度0.8～2.5mm，一般管长50～500mm(长度可视需求而定)，管腔可承受400mmHg的膨胀恒压或脉冲压。
本发明上述步骤(1)中，弹性胶管表面先喷涂一层无细胞毒性的油膜，再喷涂壳聚糖溶液，本发明所述油膜优选为医用级甘油三酸酯。本发明对油膜喷涂厚度不做限定，在弹性胶管表面喷涂油膜可以使人工血管制备完成后乳胶软管更易于抽离。
本发明上述步骤(1)中，所述壳聚糖溶液为上述壳聚糖组合物的溶液；即为乙酰度20～45％的长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物(高乙酰化长分子链壳聚糖或其衍生物)的溶液和乙酰度5～15％的长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物(低乙酰化长分子链壳聚糖或其衍生物)的溶液。
本发明所述长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物包括磺酸化壳聚糖、磺酸化甲壳素、琥珀酰壳聚糖、氨基葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖、壳寡糖、几丁寡糖、羧甲基甲壳素、羧甲基壳聚糖、羟丙基壳聚糖、羟丙基甲壳素、羟乙基壳聚糖、羟乙基甲壳素和低聚壳聚糖。
优选的，本发明所述壳聚糖组合物选自下列任一项组合：
羧甲基壳聚糖+琥珀酰壳聚糖；
羟乙基壳聚糖+磺酸化壳聚糖；
羟丙基壳聚糖+羧甲基壳聚糖。
本发明所述长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物的溶液浓度为1～10％，优选为3～7％，更优选为4～5％。
本发明上述步骤(1)中，由内而外，壳聚糖溶液分两层喷涂，先喷涂第一层壳聚糖溶液，待风干成膜后，再喷涂第二层壳聚糖溶液。所述第一层喷涂乙酰度20～45％的长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物的溶液，第二层喷涂乙酰度5～15％的长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物的溶液。所述喷涂方式优选为雾化均匀喷涂。
本发明所述第一层壳聚糖溶液喷涂后，30～45℃风干成膜；所述风干温度优选为35～41℃，更优选为37～39℃；所述第一层壳聚糖溶液成膜厚度为100～200μm，优选为120～170μm，更优选为145～155μm。
本发明所述第二层壳聚糖溶液在喷涂过程中，保持低温-10～0℃冷冻，待新喷涂的壳聚糖膜厚度为200～400μm后，进行低温干燥，以形成多孔海绵状壳聚糖膜；所述第二层壳聚糖溶液喷涂过程中温度优选为-7～-3℃，更优选为-6～-5℃；所述成膜厚度优选为240～350μm，更优选为290～300μm。本发明所述低温干燥温度优选为-6～-5℃，干燥方式优选为真空风干。
本发明制备得到的覆有壳聚糖膜的胶管密封、灭菌后备用。所述灭菌方式可选为辐照灭菌。
本发明将胶管依次放入混悬有血管内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞的培养体系中培养，本发明所述培养温度为36.5±0.5℃，二氧化碳细胞培养箱内培养，所述步骤(2)培养时间为2～10h，以上述壳聚糖膜表面长成一层内皮细胞膜为结果；所述步骤(3)培养时间为24～48h，以上述壳聚糖膜表面长成2～10层血管平滑肌细胞膜状结构为结果；所述步骤(4)培养时间为24～48h，以上述壳聚糖膜表面长成2～10层血管成纤维细胞膜状结构为结果。
本发明将得到的胶管继续培养至血管内皮细胞网膜、平滑肌细胞网膜、成纤维细胞网膜分别生长成完整的血管内膜、中膜、外膜。所述培养体系可选为等比例混合内皮细胞完全培养基、平滑肌细胞完全培养基、成纤维细胞完全培养基的混合培养体系中。
本发明在得到完整的血管内膜、中膜、外膜后，向胶管内冲压，采用缓慢、梯次冲压/释压方式。作为可选的实施方式，本发明将乳胶管一头与小型冲压泵对接，并加固，防止在冲压过程中乳胶管脱落，另一头插入阻压阀，并加固，防止冲压时阻压阀脱落；冲压泵中注入去离子水(水温36.5±0.5℃)，打开水阀，让去离子水进入乳胶管中，接入电源，梯次增压至53千帕，此过程持续10分钟，然后释压；间隔10分钟，阶梯式增压至53千帕，如此循环操作5～15次后。操作过程中，观察血管膨胀及恢复能力，如有胀裂或释压过程中，不能恢复原有形状，视为不合格，抗张性≥53千帕的膨胀恒压或脉冲压的人工血管为合格产品。
本发明将乳胶软管抽离后，即得到人工血管。本发明所述乳胶软管在培养体系中直接抽离，所述培养体系可选为等比例混合内皮细胞完全培养基、平滑肌细胞完全培养基、成纤维细胞完全培养基的混合培养体系中。所述抽离时，冲压泵释负压，使乳胶管与人工血管剥离，直接抽出即可。
本发明还提供了上述制备方法制备得到的人工血管，即完整的拥有人或动物静脉、动脉血管天然外膜、中膜、内膜三层膜结构的人造血管。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
下述实施例中，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明具体实施例中，内皮细胞培养体系采用普诺赛内皮细胞完全培养基(货号：CM-ZY001)培养，细胞浓度为105个/mL；平滑肌细胞培养体系采用普诺赛人动脉血管平滑肌细胞完全培养基(货号：CM-H116)培养，细胞浓度为105个/mL；成纤维细胞培养体系采用普诺赛人血管外膜成纤维细胞完全培养基(货号：CM-H200)培养，细胞浓度为105个/mL。
本发明具体实施例中，弹性胶管规格为外管直径8mm，管壁厚度1.0mm，管长500mm，管腔可承受上限为53千帕的膨胀恒压或脉冲压。
实施例1
一种人工血管的体外制备方法，包括以下步骤：
(1)在弹性胶管表面均匀喷涂一层无细胞毒性的医用级甘油三酸酯，使其成膜，待用；
(2)在管面喷涂壳聚糖溶液，由内而外分两层，第一层为溶液浓度5％的羧甲基壳聚糖溶液(乙酰度30％)，雾化均匀喷涂，常温30℃，风干，待形成150μm左右厚度壳聚糖膜后，改用溶液浓度5％的琥珀酰壳聚糖溶液(乙酰度10％)进行雾化喷涂，喷涂过程中，保持低温(0℃)冷冻，待新喷涂的壳聚糖溶液成膜厚度达到300μm左右后，进行低温干燥，以形成多孔海绵状壳聚糖膜；密封、辐照灭菌、待用。
(3)将上述覆有壳聚糖膜的胶管水平浸没于混悬有血管内皮细胞的细胞培养体系中固定并匀速旋转，在36.5±0.5℃，二氧化碳细胞培养箱内培养，培养时间4小时，以上述壳聚糖膜表面长成一层内皮细胞膜为结果；
(4)将上述附有血管内皮细胞网膜的胶管，浸没于混悬有成纤维细胞的细胞培养体系中固定并匀速旋转，在36.5±0.5℃，二氧化碳细胞培养箱内培养，培养时间24小时，以上述壳聚糖膜表面长成2～10层血管平滑肌细胞膜状结构为结果；
(5)将上述附有血管内皮细胞网膜及平滑肌细胞网膜的胶管，浸没于混悬有成纤维细胞的细胞培养体系中固定并匀速旋转，在36.5±0.5℃，二氧化碳细胞培养箱内培养，培养时间24小时，以上述壳聚糖膜表面长成2～10层血管成纤维细胞膜状结构为结果。
(6)将上述附有三层结构(由内而外内皮细胞膜、平滑肌细胞膜及成纤维细胞膜)人造血管的乳胶管，放入等比例混合内皮细胞完全培养基、平滑肌细胞完全培养基、成纤维细胞完全培养基的混合培养体系中，在36.5±0.5℃，二氧化碳细胞培养箱内培养，培养时间24小时。
(7)将乳胶管一头与小型冲压泵对接，并加固，防止在冲压过程中乳胶管脱落，另一头插入阻压阀，并加固，防止冲压时阻压阀脱落；冲压泵中注入去离子水(水温36.5±0.5℃)，打开水阀，让去离子水进入乳胶管中，接入电源，梯次增压至53千帕，此过程持续10分钟，然后释压；间隔10分钟，阶梯式增压至53千帕，如此循环操作5次后，操作过程中，观察血管膨胀及恢复能力，如有胀裂或释压过程中，不能恢复原有形状，视为不合格。
(8)停止冲压，去掉冲压泵和阻压阀；合格产品抽掉乳胶软管，截取一段人造血管(见图1)，并测量其口径。
实施例2
一种人工血管的体外制备方法，包括以下步骤：
(1)在弹性胶管表面均匀喷涂一层无细胞毒性的医用级甘油三酸酯，使其成膜，待用；
(2)在管面喷涂壳聚糖溶液，由内而外分两层，第一层为溶液浓度5％的羟乙基壳聚糖溶液(乙酰度40％)，雾化均匀喷涂，常温45℃，风干，待形成120μm左右厚度壳聚糖膜后，改用溶液浓度5％的磺酸化壳聚糖溶液(乙酰度15％)进行雾化喷涂，喷涂过程中，保持低温(-10℃)冷冻，待新喷涂的壳聚糖溶液成膜厚度达到260μm左右后，进行低温干燥，以形成多孔海绵状壳聚糖膜；密封、辐照灭菌、待用。
(3)将上述覆有壳聚糖膜的胶管水平浸没于混悬有血管内皮细胞的细胞培养体系中固定并匀速旋转，在36.5±0.5℃，二氧化碳细胞培养箱内培养，培养时间10小时，以上述壳聚糖膜表面长成一层内皮细胞膜为结果；
(4)将上述附有血管内皮细胞网膜的胶管，浸没于混悬有成纤维细胞的细胞培养体系中固定并匀速旋转，在36.5±0.5℃，二氧化碳细胞培养箱内培养，培养时间48小时，以上述壳聚糖膜表面长成2～10层血管平滑肌细胞膜状结构为结果；
(5)将上述附有血管内皮细胞网膜及平滑肌细胞网膜的胶管，浸没于混悬有成纤维细胞的细胞培养体系中固定并匀速旋转，在36.5±0.5℃，二氧化碳细胞培养箱内培养，培养时间48小时，以上述壳聚糖膜表面长成2～10层血管成纤维细胞膜状结构为结果。
(6)将上述附有三层结构(由内而外内皮细胞膜、平滑肌细胞膜及成纤维细胞膜)人造血管的乳胶管，放入等比例混合内皮细胞完全培养基、平滑肌细胞完全培养基、成纤维细胞完全培养基的混合培养体系中，在36.5±0.5℃，二氧化碳细胞培养箱内培养，培养时间48小时。
(7)将乳胶管一头与小型冲压泵对接，并加固，防止在冲压过程中乳胶管脱落，另一头插入阻压阀，并加固，防止冲压时阻压阀脱落；冲压泵中注入去离子水(水温36.5±0.5℃)，打开水阀，让去离子水进入乳胶管中，接入电源，梯次增压至53千帕，此过程持续10分钟，然后释压；间隔10分钟，阶梯式增压至53千帕，如此循环操作15次后，操作过程中，观察血管膨胀及恢复能力，如有胀裂或释压过程中，不能恢复原有形状，视为不合格。
(8)停止冲压，去掉冲压泵和阻压阀；合格产品抽掉乳胶软管，截取一段人造血管，并测量其口径。
实施例3
一种人工血管的体外制备方法，包括以下步骤：
(1)在弹性胶管表面均匀喷涂一层无细胞毒性的医用级甘油三酸酯，使其成膜，待用；
(2)在管面喷涂壳聚糖溶液，由内而外分两层，第一层为溶液浓度5％的羟丙基壳聚糖溶液(乙酰度35％)，雾化均匀喷涂，常温35℃，风干，待形成160μm左右厚度壳聚糖膜后，改用溶液浓度5％的羧甲基壳聚糖溶液(乙酰度8％)进行雾化喷涂，喷涂过程中，保持低温(-5℃)冷冻，待新喷涂的壳聚糖溶液成膜厚度达到350μm左右后，进行低温干燥，以形成多孔海绵状壳聚糖膜；密封、辐照灭菌、待用。
(3)将上述覆有壳聚糖膜的胶管水平浸没于混悬有血管内皮细胞的细胞培养体系中固定并匀速旋转，在36.5±0.5℃，二氧化碳细胞培养箱内培养，培养时间4小时，以上述壳聚糖膜表面长成一层内皮细胞膜为结果；
(4)将上述附有血管内皮细胞网膜的胶管，浸没于混悬有成纤维细胞的细胞培养体系中固定并匀速旋转，在36.5±0.5℃，二氧化碳细胞培养箱内培养，培养时间30小时，以上述壳聚糖膜表面长成2～10层血管平滑肌细胞膜状结构为结果；
(5)将上述附有血管内皮细胞网膜及平滑肌细胞网膜的胶管，浸没于混悬有成纤维细胞的细胞培养体系中固定并匀速旋转，在36.5±0.5℃，二氧化碳细胞培养箱内培养，培养时间28小时，以上述壳聚糖膜表面长成2～10层血管成纤维细胞膜状结构为结果。
(6)将上述附有三层结构(由内而外内皮细胞膜、平滑肌细胞膜及成纤维细胞膜)人造血管的乳胶管，放入等比例混合内皮细胞完全培养基、平滑肌细胞完全培养基、成纤维细胞完全培养基的混合培养体系中，在36.5±0.5℃，二氧化碳细胞培养箱内培养，培养时间30小时。
(7)将乳胶管一头与小型冲压泵对接，并加固，防止在冲压过程中乳胶管脱落，另一头插入阻压阀，并加固，防止冲压时阻压阀脱落；冲压泵中注入去离子水(水温36.5±0.5℃)，打开水阀，让去离子水进入乳胶管中，接入电源，梯次增压至53千帕，此过程持续10分钟，然后释压；间隔10分钟，阶梯式增压至53千帕，如此循环操作11次后，操作过程中，观察血管膨胀及恢复能力，如有胀裂或释压过程中，不能恢复原有形状，视为不合格。
(8)停止冲压，去掉冲压泵和阻压阀；合格产品抽掉乳胶软管，截取一段人造血管，并测量其口径。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种壳聚糖组合物在人工血管体外制备中的应用，其特征在于，所述壳聚糖组合物作为人工血管体外制备时的骨架载体，所述壳聚糖组合物包括两组乙酰度不同的长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述壳聚糖组合物中，两组长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物的乙酰度分别为20～45％、5～15％。
3.一种人工血管的体外制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在弹性胶管表面喷涂壳聚糖溶液，形成壳聚糖膜；
(2)将覆有壳聚糖膜的胶管浸没于混悬有血管内皮细胞的培养体系中，培养至形成血管内皮细胞网膜结构；
(3)将覆有血管内皮细胞网膜结构的胶管浸没于混悬有平滑肌细胞的培养体系中，培养至形成平滑肌细胞网膜结构；
(4)将覆有平滑肌细胞网膜结构的胶管浸没于混悬有成纤维细胞的培养体系中，培养至形成成纤维细胞网膜结构；
(5)继续培养至血管内皮细胞网膜、平滑肌细胞网膜、成纤维细胞网膜分别生长成完整的血管内膜、中膜、外膜后，向胶管内冲压；
(6)抽掉乳胶软管，得到人工血管。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，弹性胶管表面喷涂一层无细胞毒性的油膜，再喷涂壳聚糖溶液。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，壳聚糖溶液为权利要求1或2所述壳聚糖组合物的溶液；所述壳聚糖溶液浓度为1～10％。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，壳聚糖溶液分两层喷涂，第一层喷涂乙酰度20～45％的长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物的溶液，第二层喷涂乙酰度5～15％的长分子链壳聚糖或长分子链壳聚糖衍生物的溶液。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，第一层壳聚糖溶液喷涂后，30～45℃风干成膜；第二层壳聚糖溶液在-10～0℃条件下喷涂，成膜后低温干燥。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，第一层壳聚糖溶液成膜厚度为100～200μm；第二层壳聚糖溶液成膜厚度为200～400μm。
9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)培养时间为2～10h；所述步骤(3)培养时间为24～48h；所述步骤(4)培养时间为24～48h。
10.权利要求3～9任意一项所述的制备方法制备得到的人工血管。
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