CN116139157B

CN116139157B - 红景天苷在促进卵巢卵泡生长发育及制备促排卵药物中的用途

Info

Publication number: CN116139157B
Application number: CN202310417094.1A
Authority: CN
Inventors: 张华�; 牟璐; 杨雪冰
Original assignee: China Agricultural University
Current assignee: China Agricultural University
Priority date: 2023-04-19
Filing date: 2023-04-19
Publication date: 2023-07-04
Anticipated expiration: 2043-04-19
Also published as: CN116139157A

Abstract

本发明提供一种红景天苷在促进卵巢卵泡生长发育及制备促排卵药物中的用途；本发明证实了红景天苷，可以有效促进青年及老年卵巢内的卵泡发育，提升卵巢的排卵能力，最终达到促进排卵，提升生育能力的目的。

Description

红景天苷在促进卵巢卵泡生长发育及制备促排卵药物中的用途

技术领域

本发明涉及医药领域，尤其涉及红景天苷及其衍生物以及结构类似物在辅助生殖领域的用途。

背景技术

卵巢是包括人类在内的雌性哺乳动物获得自己遗传学后代的最重要器官，其主要功能包括：排出生育后代所需的卵母细胞，以及产生维持女性正常内分泌平衡的激素。然而，作为机体中最早发生衰老的器官，卵巢的功能在女性30岁之后逐渐下降，并伴随着女性绝经期（约48岁）的到来而终止。与之相悖的是，现代社会生活条件及医疗水平的进步使得人类机体寿命逐渐延长，因此，卵巢功能的提前衰退为女性绝经后的生理及心理均带来了诸多隐患。

女性卵巢衰老的主要原因是卵泡数量随着年龄的增大而显著减少，并且卵巢内有限的卵泡资源的发育能力显著下降。在卵巢中，促进生长卵泡发育为优势卵泡的重要物质为促性腺激素(FSH)， FSH通过卵巢中的血管系统，被不断的运输至卵巢，促进颗粒细胞增殖，进而促进卵泡发育以及排卵。

在人类临床中，伴随着生理性的卵巢衰老以及病理性的卵巢疾病发生，大量女性存在着卵泡发育障碍所导致的排卵障碍，进而导致不孕不育。同时，在临床辅助生殖中，对于促性腺激素卵巢低反应 (poor ovarian response, POR)的人群，目前所存在的促排卵策略往往效果不佳，因而，开发提升卵泡发育促进卵泡激素响应的药物，有着显著的社会经济价值。

不同于大多数成年器官的血管系统以稳态的方式存在，雌性哺乳动物卵巢存在着成年后持续性的血管新生，而通过血管新生所构建的卵泡血管，直接介导并促进了卵泡发育以及最终的排卵。因而，卵泡发育过程中，血管新生所产生的卵泡血管网络是否健全高效，直接决定了女性的排卵及生育力。红景天苷作为一种小分子天然化合物，在多种缺血性疾病中有良好的促进血管生长的效果。化学式如下：

然而红景天苷否能够提升卵巢血管相关功能，进而提升卵巢对促性腺激素的响应，促进卵泡发育，进而改善卵巢功能依然是未知的。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供红景天苷 (C₁₄H₂₀O₇)的生殖相关应用。具体为：

提供一种促性腺激素响应能力提升的药剂、颗粒细胞增殖激动剂以及血管功能提升药剂；还可以提供一种在改善卵巢功能、提升雌性生殖健康以及雌性生育力中的应用。

本发明提供红景天苷在制备改善卵巢功能，提高雌性生育力，提升雌性健康的药物中的应用；在一个优选的实施例中，所述改善卵巢功能包括：提升颗粒细胞增殖效率，促进生长卵泡发育，增加卵巢血管新生比率，提升卵泡血管通透性；在另外一个优选的实施例中，所述改善卵巢功能包括：提高卵巢对促性腺激素的敏感度。

在另外一个具体的实施例中，所述提升雌性生殖健康包括：提升卵巢对促性腺激素的响应能力，促进颗粒细胞增殖以及增加生长卵泡血管新生，提升卵泡血管通透性。

在另外一个具体的实施例中，所述的所述提高生育力包括提高高龄雌性怀孕率及后代出生率。

本发明的目的还在于提供红景天苷在制备辅助促排卵辅助药物相关方法中的应用；在一个优选的实施例中，所述辅助促排卵包括增加超数排卵后卵母细胞排出数量。

本发明一些具体实施例中，以红景天苷为实验对象，验证其具有促进颗粒细胞增殖，进而生长卵泡发育以改善高龄雌性卵巢功能，提高生育力的作用，并主要通过促进卵巢血管新生，提升卵泡血管通透性来实现。同时还验证了红景天苷可以辅助促排卵相关激素，提升排卵效率。

具体的，本发明提供的技术方案包括：

提供一种红景天苷在制备改善卵巢功能，提高雌性生育力，提升雌性健康的药物中的应用。

进一步的，提高生育力包括提高高龄雌性怀孕率及后代出生率。

另一方面，提供红景天苷在制备提升卵巢颗粒细胞增殖效率的制剂中的应用。

另一方面，提供红景天苷在制备促进生长卵泡发育的制剂中的应用。

另一方面，提供红景天苷在制备增加卵巢血管新生比率的制剂中的应用。

另一方面，提供红景天苷在制备提升卵泡血管通透性的制剂中的应用。

另一方面，提供红景天苷在制备提高卵巢对促性腺激素的敏感度的制剂中的应用。

另一方面，提供红景天苷在制备促排卵辅助药物中的应用。

优选的，所述辅助促排卵包括增加超数排卵后卵母细胞排出数量。

更优选的，上述应用中所述制剂或药物还包括药学上可接受的载体。

本发明的有益效果为：

1）首次发现天然小分子化合物红景天苷，一种卵巢对促性腺激素响应能力的提升药剂，颗粒细胞增殖激动剂以及血管功能提升剂促进生长卵泡发育至排卵前卵泡从而改善卵巢衰老，提升高龄雌性怀孕率及其后代出生率，并改善雌性健康中的应用。

2）本发明还公开了红景天苷在制备促排卵辅助药物中的应用。

附图说明

图1所示为红景天苷促进年老小鼠颗粒细胞增殖，主要表现为注射红景天苷(300mg/kg.BW)后，给予促性腺激素(0.5 IU/g)处理，颗粒细胞的增殖率显著增加；

图2所示为红景天苷显著提升年老小鼠生育能力，主要表现为体内注射红景天苷(300 mg/kg.BW)一周，与壮年雄鼠合笼5天后，怀孕率增加(A)，以及后代出生数量增加(B)；

图3所示为红景天苷促进年老小鼠卵巢血管新生，主要表现为体内注射红景天苷(300 mg/kg.BW)后，卵泡血管新生能力显著增强，尖端细胞的数量显著增多(A和B)，尖端细胞伪足的长度及数量均显著增加(C)；

图4所示为红景天苷提升年老小鼠卵泡血管通透性，主要表现为体内注射红景天苷(300 mg/kg.BW)后，进入卵泡内的伊文思蓝量显著增加(A和B)。

图5所示为红景天苷提升促性腺激素促排卵效率，主要表现为：青春期前小鼠注射红景天苷 (200 mg/kg.BW)后，卵泡发育速度加快(A)，黄体数量增多(B和C)，超数排卵后，小鼠的排卵数量显著增多 (D)，且小鼠体重无明显变化 (E)；

具体实施方式

以下内容为本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

本发明采用红景天苷，其分子结构式为C₁₄H₂₀O₇，通过在体注射后检测了药物对卵巢卵泡发育、颗粒细胞增殖、卵巢排卵率以及卵巢血管生长的影响。结果显示，红景天苷处理可显著地促进卵泡颗粒细胞增殖进而促进卵泡发育，提高排卵率，同时促进了卵巢血管的生长。

上述结果预示着红景天苷参与了调控卵巢血管新生相关通路介导了卵泡血管的新生过程调控卵泡发育，因此进一步地，本发明利用血管特异性内源荧光示踪小鼠，选取红景天苷并采用腹腔注射的方式，对其对卵巢生长卵泡的影响进行了相关的探索。

我们的实验结果表明，腹腔注射适量的红景天苷，能够显著促进卵泡发育并促进卵巢血管新生。通过内源性荧光报告小鼠结合组织透明化技术，我们发现，红景天苷处理后，卵巢血管密度显著上升，出芽比率显著增加。

在使用高龄小鼠开展小鼠临床验证试验时，我们发现红景天苷处理后的小鼠怀孕率及产仔数均显著高于对照组。在本发明具体实施例中，涉及到对比试验，各试验组除了应有的区别外，其余试验环境和原材料等均保持一致。

以下就本发明所提供的红景天苷在改善卵巢衰老，提升高龄雌性怀孕率及其后代出生率，并改善雌性健康中的应用以及红景天苷在制备促排卵辅助药物中的应用做进一步说明。

实施例1：红景天苷改善改善卵巢功能，提高雌性生育力，提升雌性健康

试剂1：H₂O

试剂2：红景天苷(粉末)

本发明所述试剂可将红景天苷和无机溶剂分别包装，使用时将红景天苷溶解于无机溶剂H₂O中配制浓度为200 - 400 mg/ml的工作液置于-20 ℃冰箱分装避光保存，具体应用时采用100 mg/ml。

实验操作如下：

1) 将实验小鼠分为两组，分别为对照组和红景天苷组，每组各10只11月龄C57BL/6背景的雌性小鼠。

2) 将工作试剂从-20 ℃冰箱中取出并置于室温待其充分溶解方可使用；

3) 通过腹腔注射的方式进行药物处理，给药剂量为300 mg/kg.BW，每天给药一次，可持续1周；

4) 药物处理后，通过定期称量受试鼠体重确定实验小鼠的健康状况。当受试鼠体重保持不变或低速增加则表明受试鼠状态良好，如果受试鼠体重明显减轻则可适度降低药物剂量。

5) 药物处理1周后，给与促性腺激素(0.5 IU/g)，46小时后收取小鼠卵巢，统计卵泡颗粒细胞增殖率，结果显示卵泡颗粒细胞增殖率显著增加(图1)。

6) 药物处理1周后，与健康壮年雄鼠合笼5天(一个发情周期)，红景天苷组小鼠怀孕率及产仔数量均显著增加(图2)。

实验表明经过适量红景天苷处理后，能够显著促进卵巢卵泡颗粒细胞增殖，进而帮助老年小鼠的生长卵泡发育为排卵前卵泡，从而提升老龄雌性哺乳动物的生殖能力，提高怀孕率及后代出生数量，改善生殖衰老。

实施例2：红景天苷改善卵巢血管功能

试剂1：H₂O

试剂2：红景天苷(粉末)

实验操作如下：

1) 将实验小鼠分为两组，分别为对照组和红景天苷组，每组各10只11月龄C57BL/6背景Tek-Cre;mTmG的雌性小鼠。

5) 药物处理1周后，收取小鼠卵巢，结合组织透明化技术及高分辨率3D成像技术对卵巢血管进行分析。

6) 药物处理1周后，小鼠卵巢血管新生能力显著增强，主要表现为卵泡及间质的尖端细胞密度显著增加，尖端细胞伸出伪足的数量及长度也显著增加(图3)。

7) 药物处理1周后，对小鼠进行尾静脉注射伊文思蓝(50 mg/kg.BW)，15分钟后收取卵巢并分离单个卵泡，荧光显微镜下记录卵泡形态并统计其荧光强度，结果显示，红景天苷显著提高了老年小鼠卵泡血管的通透性(图4)。

实验表明经过适量红景天苷处理后，能够显著促进卵巢血管新生并改善卵泡血管通透性，从而促进卵泡对促性腺激素的响应能力，促进卵泡发育。

实施例3：红景天苷促排卵

试剂1：H₂O

试剂2：红景天苷 (粉末)

本发明所述试剂可将红景天苷无机溶剂分别包装，使用时将红景天苷溶解于无机溶剂H₂O中配制浓度为100-300 mg/ml的工作液置于-20 ℃冰箱分装保存，具体应用时采用50 mg/ml。

实验操作如下：

1) 将实验小鼠分为两组，分别为对照组和红景天苷组，每组各5只18 dppC57BL/6背景雌性小鼠。

2)将工作试剂从-20 ℃冰箱中取出并置于室温待其充分溶解后方可使用；

3)通过腹腔注射的方式进行药物处理，给药剂量为200 mg/kg .BW，每天药物处理一次，药物处理持续7天后收取卵巢，对卵巢形态及卵泡数目进行统计，或停药后进行超数排卵，即给予促性腺激素(0.5 IU/g)，46小时后给予人绒毛膜促性腺激素(0.5 IU/g)，16小时后收取小鼠输卵管壶腹部卵母细胞进行形态检测及计数统计；

4)药物处理后，通过定期称量受试鼠体重确定实验小鼠的健康状况。当受试鼠体重保持不变或低速增加则表明受试鼠状态良好(图5)，如果受试鼠体重明显减轻则可适度降低药物剂量。

5) 药物处理7天后，原始卵泡和初级卵泡数目显著下降，但次级卵泡、有腔卵泡及总卵泡数目显著增多，表明红景天苷可以促进卵泡发育(图5)。

6) 药物处理7天且超排后，可见处理组黄体数目增多，排卵数显著增多且卵母细胞形态正常 (图5)。

实验表明经过适量红景天苷处理后，可以显著提高育龄小鼠促排卵效果，即增加排卵数目，且卵母细胞形态正常。

本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述处理策略及其相关应用已经通过实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述处理策略及其相关应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

Claims

1.红景天苷在制备促排卵辅助药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述辅助促排卵是增加超数排卵后卵母细胞排出数量。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的载体。