CN116134049A - 变体actriib蛋白及其用途 - Google Patents

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B·赫林
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Abstract

在某些方面，本发明提供新型ActRIIB变体(呈同多聚体形式或异多聚体形式)，以及用于使用那些变体治疗与一种或多种TGFβ超家族配体的不期望的活性相关的适应证的组合物和方法。本发明还提供筛选调节ActRIIB蛋白和/或ActRIIB配体的活性的化合物的方法。本文提供的组合物和方法可用于治疗与ActRIIB蛋白和/或ActRIIB配体的异常活性相关的疾病。

Description

变体ACTRIIB蛋白及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年2月3日提交的美国临时申请号62/969,635和2020年9月4日提交的美国临时申请号63/074,742的权益和优先权。将前述申请通过引用以其整体并入本文。
背景技术
转化生长因子-β(TGF-β)超家族含有多种生长因子，所述生长因子共有共同的序列元件和结构基序。已知这些蛋白质对脊椎动物和无脊椎动物中的各种各样的细胞类型发挥生物学作用。所述超家族的成员在模式形成和组织特化中在胚胎发育期间执行重要功能，并且可以影响多种分化过程，包括脂肪生成、肌生成、软骨形成、心脏发生、造血作用、神经发生和上皮细胞分化。所述家族分为两个一般分支：BMP/GDF分支和TGF-β/激活素/BMP10分支，其成员具有多种多样的、通常互补的效应。通过操纵TGF-β家族成员的活性，通常可以在生物体中引起明显生理变化。例如，皮埃蒙特牛和比利时蓝牛品种在GDF8(也称为肌生成抑制蛋白)基因中携带功能丧失性突变，从而引起肌肉质量显著增加。Grobet等人,NatGenet.1997,17(1):71-4。此外，在人体中，GDF8的无活性等位基因与增加的肌肉质量相关，并且据报道与异常强度相关。Schuelke等人,N Engl J Med 2004,350:2682-8。
红细胞水平、肾、肺、心脏、骨、软骨和其他组织的变化可以通过激动或拮抗由适当的TGF-β家族成员介导的信号传导来实现。因此，需要充当TGF-β信号传导的有效调节剂的药剂。
发明内容
在某些方面，本公开文本提供多肽，特别是变体ActRIIB多肽、变体ActRIIB同多聚体蛋白和变体ActRIIB异多聚体蛋白。特别地，本公开文本提供变体ActRIIB多肽，其具有降低的与BMP9的结合亲和力，同时保留与激活素B、激活素A、GDF11、GDF8和BMP10中的一种或多种的结合亲和力。因此，这些变体ActRIIB多肽可能在这样的选择性拮抗作用有利的某些应用中比未修饰的ActRIIB多肽更有用。例子包括治疗性应用，其中期望保留激活素A、激活素B、GDF8、GDF11和BMP10中的一种或多种的拮抗作用，同时降低BMP9的拮抗作用。
部分地，本公开文本提供多肽，特别是变体ActRIIB多肽、变体ActRIIB同多聚体蛋白和变体ActRIIB异多聚体蛋白，所述多肽可以用于治疗肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征(Alport syndrome)、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)。在UUO和Col4a3(-/-)奥尔波特综合征模型中对于包含位置F82处的K突变的变体ActRIIB多肽观察到积极效果。本公开文本确立，可以使用ActRII(例如，ActRIIA和ActRIIB)信号传导通路的拮抗剂来降低肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的严重性，并且合意的治疗剂可以基于ActRII信号传导拮抗剂活性来选择。因此，在一些实施方案中，本公开文本提供使用多肽，特别是变体ActRIIB多肽、变体ActRIIB同多聚体蛋白和变体ActRIIB异多聚体蛋白，用于治疗肾脏疾病或病症(包括但不限于奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病和慢性肾脏病)的方法，所述多肽包括例如抑制一种或多种ActRIIA或ActRIIB配体[例如，激活素A、激活素B、GDF11、GDF8、GDF3、BMP6、BMP5和BMP10]的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)。
在某些方面，本公开文本涉及一种多肽，其包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ IDNO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，并且其中所述多肽包含在SEQ ID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：N35、E50、E52、K55、L57、Y60、G68、K74、W78、L79、F82、N83和E94。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸29-109至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸25-131至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸20-134至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽是融合蛋白，其还包含第一多肽结构域和一个或多个异源多肽结构域。在一些实施方案中，所述多肽是ActRIIB-Fc融合蛋白。在一些实施方案中，所述融合蛋白还包含定位于所述第一多肽结构域与所述一个或多个异源结构域或Fc结构域之间的接头结构域。在一些实施方案中，所述接头结构域选自：TGGG、TGGGG、SGGGG、GGGGS、GGG、GGGG、SGGG和GGGGS。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:519的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含关于SEQ ID NO:2的氨基酸序列的选自以下的一个或多个氨基酸取代：L38N、E50L、E52N、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79F、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。在一些实施方案中，所述多肽包含关于SEQ ID NO:2的氨基酸序列的选自以下的一个或多个氨基酸取代：L38N、E50L、E52D、E52N、E52Y、K55A、K55E、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79E、L79F、L79H、L79R、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。在一些实施方案中，所述多肽包含关于SEQ ID NO:2的氨基酸序列的选自以下的一个或多个氨基酸取代：A24、S26、N35、E37、L38、R40、S44、L46、E50、E52、Q53、D54、K55、R56、L57、Y60、R64、N65、S67、G68、K74、W78、L79、D80、F82、N83、T93、E94、Q98、V99、E105、E106、F108、E111、R112、A119、G120、E123、P129、P130和A132。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E50的位置处的L取代。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L38的位置处的N取代。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的V99的位置处的G取代。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的T取代。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的H取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:522的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:524的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的K取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:276的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:278的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的I取代和在对应于N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:279的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:332的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的K取代和在对应于N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:333的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:335的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的T取代和在对应于N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:336的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQID NO:338的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的T取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:339的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:341的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的H取代和在对应于F82的位置处的I取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:342的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQID NO:344的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的H取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:345的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:347的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的H取代和在对应于F82的位置处的K取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:348的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQID NO:350的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E50的位置处的L取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:351的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:353的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L38的位置处的N取代和在对应于L79的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:354的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQID NO:356的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的V99的位置处的G取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:366的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:368的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N35的位置处的E取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:369的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:371的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的N取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:372的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:374的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的Y60的位置处的D取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:375的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:377的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:378的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQID NO:380的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的K74的位置处的E取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:381的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:383的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的W78的位置处的Y取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:384的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:386的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的A取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:387的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ IDNO:389的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的K取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:390的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:392的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的S取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:393的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQID NO:395的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的W取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:396的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:398的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:399的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:401的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的E取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:402的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:404的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的L取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:405的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:407的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的S取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:408的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQID NO:410的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的Y取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:411的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:413的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E94的位置处的K取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:414的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:416的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的D取代和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ IDNO:417的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:419的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的D取代和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的T取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:420的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:422的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的R取代和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:423的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:425的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的R取代和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的S取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:426的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:428的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的R取代和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的T取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:429的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:431的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的F取代和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:432的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:434的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的F取代和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的T取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:435的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:437的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:438的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:440的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的E取代和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:441的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:443的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的S取代和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:444的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:446的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的W取代和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的A取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:447的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:449的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的I取代和在对应于SEQ ID NO:2的E94的位置处的K取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:450的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:452的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E50的位置处的L取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:453的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:455的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的D取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:456的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:458的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的D取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的E取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:459的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:461的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的D取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的T取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:462的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:464的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的N取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的I取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:465的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:467的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的N取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的Y取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:468的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:470的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的Y取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:471的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:473的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的E取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的E取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:474的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:476的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的I取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:477的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:479的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的I取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的E取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:480的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:482的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:483的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:485的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的E取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:486的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:488的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的L取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:489的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:491的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的T取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的Y取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:492的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:494的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的V取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:495的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:497的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的V取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的Y取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:498的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:500的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的W78的位置处的Y取代以及在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的Y取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:501的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:503的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的S取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:504的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:506的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的N取代、在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的Y取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQID NO:507的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ IDNO:509的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的G68的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的E取代、在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的T取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:510的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:512的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的E取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的Y取代以及在对应于SEQ IDNO:2的N83的位置处的R取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:513的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:515的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的T取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的T取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的显著降低、GDF11结合的显著降低、无检测到的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的显著降低、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、和BMP6结合的略微增加以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的显著降低、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的轻微降低、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的轻微降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的适度降低。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的显著降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的适度降低。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、最小BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、最小BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的适度降低。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、最小BMP10结合、BMP6结合的适度降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、BMP10结合的适度降低、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、BMP10结合的适度降低、最小BMP6结合以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、BMP10结合的适度降低、最小BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的适度降低。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的适度降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的轻微降低。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的略微增加以及接近WT水平的BMP9结合。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的略微增加以及接近WT水平的BMP9结合。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的适度降低。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的轻微降低、GDF11结合的适度降低、BMP10结合的适度降低、BMP6结合的显著降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的适度降低、BMP6结合的适度降低以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的轻微降低。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、与BMP6的最小结合以及BMP9结合的轻微降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的轻微降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、接近WT水平的BMP6结合以及接近WT水平的BMP9结合。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的轻微降低。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的轻微降低、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的轻微降低。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的轻微降低、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
在本公开文本的一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的轻微降低。
在本公开文本的一些实施方案中，所述多肽是同二聚体蛋白。
在某些方面，本公开文本涉及一种包含变体ActRIIB多肽和ALK4多肽的异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB多肽包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，以及在SEQ ID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：L38N、E50L、E52N、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79F、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。在某些方面，本公开文本涉及一种包含变体ActRIIB多肽和ALK7多肽的异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB多肽包含与在SEQID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，以及在SEQ ID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：L38N、E50L、E52N、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79F、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。在某些方面，本公开文本涉及一种包含变体ActRIIB多肽和ALK4多肽的异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB多肽包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，以及在SEQ ID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：L38N、E50L、E52D、E52N、E52Y、K55A、K55E、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79E、L79F、L79H、L79R、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。在某些方面，本公开文本涉及一种包含变体ActRIIB多肽和ALK7多肽的异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB多肽包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，以及在SEQ ID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：L38N、E50L、E52D、E52N、E52Y、K55A、K55E、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79E、L79F、L79H、L79R、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。
在某些方面，本公开文本涉及一种包含变体ActRIIB多肽和ALK4多肽的异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB多肽包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，以及在SEQ ID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。
在某些方面，本公开文本涉及一种包含变体ActRIIB多肽和ALK7多肽的异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB多肽包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，以及在SEQ ID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。56.根据权利要求52-55中任一项所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸29-109至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸29-109至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸25-131至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸20-134至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含与SEQ IDNO:53的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含关于SEQ ID NO:2的氨基酸序列的选自以下的一个或多个氨基酸取代：L38N、E50L、E52D、E52N、E52Y、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79E、L79F、L79H、L79R、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含关于SEQ ID NO:2的氨基酸序列的选自以下的一个或多个氨基酸取代：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。
在一些实施方案中，所述ALK4多肽包含与选自SEQ ID NO:84、85、86、87、88、89、92、93、247和249的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述ALK7多肽包含与选自SEQ ID NO:120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、133和134的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽是包含ActRIIB多肽结构域和一个或多个异源结构域的融合蛋白。在一些实施方案中，所述ALK4多肽是包含ALK4多肽结构域和一个或多个异源结构域的融合蛋白。在一些实施方案中，所述ALK7多肽是包含ALK7多肽结构域和一个或多个异源结构域的融合蛋白。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽是ActRIIB-Fc融合蛋白。在一些实施方案中，所述ALK4多肽是ALK4-Fc融合蛋白。在一些实施方案中，所述ALK7多肽是ALK7-Fc融合蛋白。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白还包含定位于所述ActRIIB多肽结构域与所述一个或多个异源结构域或Fc结构域之间的接头结构域。在一些实施方案中，所述ALK4-Fc融合蛋白还包含定位于所述ALK4多肽结构域与所述一个或多个异源结构域或Fc结构域之间的接头结构域。在一些实施方案中，所述ALK7-Fc融合蛋白还包含定位于所述ALK7多肽结构域与所述一个或多个异源结构域或Fc结构域之间的接头结构域。在一些实施方案中，所述接头结构域选自：TGGG、TGGGG、SGGGG、GGGGS、GGG、GGGG、SGGG和GGGGS。在一些实施方案中，所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：(a)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；(b)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；(c)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；(d)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及(e)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：(a)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；(b)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；(c)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；(d)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及(e)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：(a)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及(b)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：(a)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ IDNO:19的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及(b)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ IDNO:19的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：(a)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及(b)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：(a)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及(b)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：(a)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及(b)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：(a)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及(b)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：(a)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ IDNO:25的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及(b)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ IDNO:25的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：(a)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及(b)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：(a)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及(b)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：(a)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及(b)所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置138处的谷氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置217处的天冬氨酸，并且其中所述ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、位置146处的丙氨酸、氨基酸位置162处的精氨酸、氨基酸位置179处的精氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置138处的谷氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置217处的天冬氨酸，并且其中所述ALK7-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、位置146处的丙氨酸、氨基酸位置162处的精氨酸、氨基酸位置179处的精氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置138处的谷氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置217处的天冬氨酸，并且其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、位置146处的丙氨酸、氨基酸位置162处的精氨酸、氨基酸位置179处的精氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述ALK7-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置138处的谷氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置217处的天冬氨酸，并且其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、位置146处的丙氨酸、氨基酸位置162处的精氨酸、氨基酸位置179处的精氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置435处的精氨酸，并且其中所述ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、氨基酸位置146处的丙氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置435处的精氨酸，并且其中所述ALK7-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、氨基酸位置146处的丙氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置435处的精氨酸，并且其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、氨基酸位置146处的丙氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述ALK7-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置435处的精氨酸，并且其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、氨基酸位置146处的丙氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述异多聚体是异二聚体。
在某些方面，本公开文本涉及分离的和/或重组的核酸，其包含一种或多种本文所述的ALK4多肽的编码序列。例如，在一些实施方案中，本公开文本涉及一种分离的和/或重组的核酸，其与对应于SEQ ID No:221、222、223和224中的任一个的核酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。在一些实施方案中，本公开文本涉及分离的和/或重组的核酸，其包含一种或多种本文所述的ALK7多肽的编码序列。例如，在一些实施方案中，本公开文本涉及一种分离的和/或重组的核酸，其与对应于SEQ ID NO:233、234、235、236、237、238、239、240和255中的任一个的核酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。在一些实施方案中，本公开文本涉及分离的和/或重组的核酸，其包含一种或多种本文所述的多肽的编码序列。例如，在一些实施方案中，本公开文本涉及一种分离的和/或重组的核酸，其与对应于SEQ ID No:3、10、32、35、38、41、44、47、277、331、334、337、340、343、346、349、352、355、367、370、373、376、379、382、385、388、391、394、397、400、403、406、409、412、415、418、421、424、427、430、433、436、439、442、445、448、451、454、457、460、463、466、469、472、475、478、481、484、487、490、493、496、499、502、505、508、511、514、517、521和523中的任一个的核酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。在一些实施方案中，本公开文本的分离的和/或重组的多核苷酸序列包含本文所述的异多聚体(例如，ActRIIB-Fc:ALK4-Fc异多聚体或ActRIIB-Fc:ALK7-Fc异多聚体)的编码序列。在一些实施方案中，本公开文本的分离的和/或重组的多核苷酸序列包含与本文所述的编码序列(例如，与对应于SEQ ID No:3、10、32、35、38、41、44、47、277、331、334、337、340、343、346、349、352、355、367、370、373、376、379、382、385、388、391、394、397、400、403、406、409、412、415、418、421、424、427、430、433、436、439、442、445、448、451、454、457、460、463、466、469、472、475、478、481、484、487、490、493、496、499、502、505、508、511、514、517、521和523中的任一个的核酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的核酸)可操作地连接的启动子序列。在一些实施方案中，本公开文本涉及一种载体，其包含本文所述的分离的核酸(例如，与对应于SEQ ID No:3、10、32、35、38、41、44、47、277、331、334、337、340、343、346、349、352、355、367、370、373、376、379、382、385、388、391、394、397、400、403、406、409、412、415、418、421、424、427、430、433、436、439、442、445、448、451、454、457、460、463、466、469、472、475、478、481、484、487、490、493、496、499、502、505、508、511、514、517、521和523中的任一个的核酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的核酸)。在一些实施方案中，本公开文本涉及一种细胞，其包含本文所述的重组多核苷酸序列或载体。
在某些方面，本公开文本涉及制备多肽的方法，所述方法包括在适合于多肽表达的条件下培养细胞，其中所述细胞包含含有本文所述的多肽的编码序列的核酸。这样的方法可以包括在适合的细胞(例如，CHO细胞或COS细胞)中表达任何本文公开的核酸。在一些实施方案中，本公开文本涉及制备包含变体ActRIIB多肽和ALK4多肽的异多聚体的方法，所述方法包括在适合于变体ActRIIB多肽和所述ALK4多肽的表达的条件下培养细胞，其中所述细胞包含含有本文所述的变体ActRIIB多肽的编码序列的第一核酸和含有本文所述的ALK4多肽的编码序列的第二核酸。在一些实施方案中，本公开文本涉及制备包含变体ActRIIB多肽和ALK7多肽的异多聚体的方法，所述方法包括在适合于变体ActRIIB多肽和所述ALK7多肽的表达的条件下培养细胞，其中所述细胞包含含有本文所述的变体ActRIIB多肽的编码序列的第一核酸和含有本文所述的ALK7多肽的编码序列的第二核酸。在一些实施方案中，所述方法包括回收所述异多聚体的另一步骤。在一些实施方案中，本公开文本涉及制备包含变体ActRIIB多肽和ALK4多肽的异多聚体的方法，所述方法包括：(a)在适合于变体ActRIIB多肽的表达的条件下培养第一细胞，其中所述细胞包含含有变体ActRIIB多肽的编码序列的核酸；(b)回收所述变体ActRIIB多肽；(c)在适合于ALK4多肽的表达的条件下培养第二细胞，其中所述细胞包含含有ALK4多肽的编码序列的核酸；(d)回收所述ALK4多肽；(e)在适合于异多聚体形成的条件下组合所述回收的变体ActRIIB多肽与所述ALK4多肽。在一些实施方案中，本公开文本涉及制备包含变体ActRIIB多肽和ALK7多肽的异多聚体的方法，所述方法包括：(a)在适合于变体ActRIIB多肽的表达的条件下培养第一细胞，其中所述细胞包含含有变体ActRIIB多肽的编码序列的核酸；(b)回收所述变体ActRIIB多肽；(c)在适合于ALK7多肽的表达的条件下培养第二细胞，其中所述细胞包含含有ALK7多肽的编码序列的核酸；(d)回收所述ALK7多肽；(e)在适合于异多聚体形成的条件下组合所述回收的变体ActRIIB多肽与所述ALK7多肽。在一些实施方案中，所述方法还包括回收表达的异多聚体多肽。
在一些实施方案中，本公开文本涉及用于增加患者的红细胞水平或血红蛋白水平的方法，所述方法包括向有需要的患者施用本文所述的多肽或异多聚体。在一些实施方案中，本公开文本涉及用于治疗患者的贫血或与贫血相关的障碍的方法，所述方法包括向有需要的患者施用本文所述的多肽或异多聚体。在一些实施方案中，所述贫血或与贫血相关的障碍选自MDS、地中海贫血症和骨髓纤维化。在一些实施方案中，本公开文本涉及用于增加患者的肌肉质量和/或肌肉强度的方法，所述方法包括向有需要的患者施用本文所述的多肽或异多聚体。在一些实施方案中，本公开文本涉及用于治疗患者的肌肉相关障碍的方法，所述方法包括向有需要的患者施用本文所述的多肽或异多聚体。在一些实施方案中，所述肌肉相关障碍与不期望的低肌肉生长和/或肌无力相关。在一些实施方案中，所述肌肉相关障碍选自迪谢内肌营养不良(DMD)、贝克肌营养不良(BMD)、夏科-马里-图思病(CMT)、面肩胛肱型肌营养不良(FSH或FSHD)、肌萎缩侧索硬化(ALS)和脊髓性肌萎缩(SMA)。
在一些实施方案中，本公开文本涉及用于治疗患者的肺动脉高压的方法，所述方法包括向有需要的患者施用本文所述的多肽或异多聚体。在一些实施方案中，本公开文本涉及用于治疗患者的肺高血压的方法，所述方法包括向有需要的患者施用本文所述的多肽或异多聚体。在一些实施方案中，本公开文本涉及用于治疗患者的间质性肺疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用本文所述的多肽或异多聚体。在一些实施方案中，本公开文本涉及用于治疗患者的肾相关疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用本文所述的多肽或异多聚体。在一些实施方案中，所述肾相关疾病选自奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化、多囊肾病或慢性肾脏病。在一些实施方案中，本公开文本涉及用于治疗患者的骨相关障碍的方法，所述方法包括向有需要的患者施用本文所述的多肽或异多聚体。在一些实施方案中，所述骨相关障碍选自骨质疏松症、甲状旁腺功能亢进症、库欣病、甲状腺毒症、慢性腹泻状态或吸收不良、肾小管性酸中毒、神经性厌食或进行性骨化性纤维结构不良(FOP)。
在一些实施方案中，本公开文本的多肽与选自激活素A、激活素B、GDF11、GDF8、GDF3、BMP5、BMP6和BMP10的一种或多种配体结合。在一些实施方案中，本公开文本的多肽与激活素A、GDF8、GDF11和BMP10结合。在一些实施方案中，本公开文本的多肽在基于细胞的测定中抑制一种或多种配体的活性。
在一些实施方案中，本公开文本的异多聚体蛋白与选自激活素A、激活素B、GDF11、GDF8、GDF3、BMP5、BMP6和BMP10的一种或多种配体结合。在一些实施方案中，本公开文本的异多聚体蛋白与激活素A、GDF8、GDF11和BMP10结合。在一些实施方案中，本公开文本的异多聚体蛋白在基于细胞的测定中抑制一种或多种配体的活性。
在某些方面，本公开文本涉及治疗肾脏疾病或病症的方法，所述方法包括将多肽施用至有需要的受试者，其中所述多肽包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，并且其中所述多肽包含在SEQ ID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：N35、E50、E52、K55、L57、Y60、G68、K74、W78、L79、F82、N83、E94。
在一些实施方案中，任何本文所述的多肽(包括其异多聚体)可以根据本公开文本的方法来使用。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:31的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:33的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的K55的位置处的A取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:34的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的K55的位置处的E取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:40的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:42的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的K取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ IDNO:37的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:39的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的I取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:43的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:45的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的E取代。在一些实施方案中，所述多肽包含本公开文本的多肽(例如，对应于以下中的任一个的氨基酸序列：SEQ ID NO:366、368、369、371、372、374、375、377、378、380、381、383、384、386、387、389、390、392、393、395、396、398、399、401、402、404、405、407、408、410、411、413、414、416、417、419、420、422、423、425、426、428、429、431、432、434、435、437、438、440、441、443、444、446、447、449、450、452、453、455、456、458、459、461、462、464、465、467、468、470、471、473、474、476、477、479、480、482、483、485、486、488、489、491、492、494、495、497、498、500、501、503、504、506、507、509、510、512、513、515、522和524)。
在本公开文本的一些实施方案中，所述肾脏疾病或病症是奥尔波特综合征。在本公开文本的一些实施方案中，所述肾脏疾病或病症是局灶节段性肾小球硬化(FSGS)。在本公开文本的一些实施方案中，所述肾脏疾病或病症是多囊肾病。在本公开文本的一些实施方案中，所述肾脏疾病或病症是常染色体显性遗传多囊肾病(ADPKD)。在本公开文本的一些实施方案中，所述肾脏疾病或病症是常染色体隐性遗传多囊肾病(ARPKD)。在本公开文本的一些实施方案中，所述肾脏疾病或病症是慢性肾脏病(CKD)。在一些实施方案中，所述受试者患有肾功能下降。在一些实施方案中，所述方法显示肾功能下降。
在一些实施方案中，本公开文本的方法还包括向所述受试者施用用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法。在一些实施方案中，所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法选自：血管紧张素受体阻滞药(ARB)(例如，氯沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、坎地沙坦、缬沙坦、非马沙坦、阿齐沙坦、沙普沙坦和替米沙坦)、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂(例如，贝那普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、培哚普利、雷米普利、群多普利和佐芬普利)、糖皮质激素(例如，倍氯米松、倍他米松、布地奈德、可的松、地塞米松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、甲基强的松、泼尼松和曲安西龙)、钙调磷酸酶抑制剂(例如，环孢菌素、他罗利姆)、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、JAK激酶抑制剂(例如，托法替尼)、mTOR抑制剂(例如，西罗莫司、依维莫司)、IMDH抑制剂(例如，硫唑嘌呤、来氟米特、麦考酚酯)、生物制品(例如，阿巴西普、阿达木单抗、阿那白滞素、巴利昔单抗、赛妥珠单抗、达克珠单抗、依那西普、非苏木单抗、戈利木单抗、英利昔单抗、依奇珠单抗、那他珠单抗、利妥昔单抗、苏金单抗、托珠单抗、优特克单抗、维多珠单抗)、他汀(例如，贝那普利、缬沙坦、氟伐他汀、普伐他汀)、甲基巴多索隆、Achtar凝胶、托伐普坦、阿巴西普联合斯派森坦、阿利吉仑、别嘌呤醇、ANG-3070、阿托伐他汀、布来鲁单抗、博舒替尼、CCX140-B、CXA-10、D6-25-羟维生素D3、达格列净、地塞米松联合MMF、大黄素、FG-3019、FK506、FK-506和MMF、FT-011、半乳糖、GC1008、GFB-887、异维甲酸、拉德梅森(lademirsen)、兰瑞肽、左旋咪唑、利希普坦、洛批莫德、二甲双胍、咪唑立宾、N-乙酰甘露糖胺、奥曲肽、帕立骨化醇、PF-06730512、吡格列酮、丙帕锗、丙帕锗和厄贝沙坦、雷帕鸣、雷帕霉素、RE-021(例如，斯派森坦)、RG012、罗格列酮(例如，Avandia)、沙奎那韦、SAR339375、促生长素抑制素、螺内酯、特泊替尼(KD019)、替可克肽、雷公藤(tripterygium wilfordii)(TW)、丙戊酸、VAR-200、文格司他(venglustat)(GZ402671)、维立诺雷、伏环孢素(voclosporin)、VX-417、肾透析、肾移植、间充质干细胞疗法、骨髓干细胞、脂蛋白清除、Liposorber LA-15装置、血浆去除术、血浆置换和饮食改变(例如，膳食钠摄入量)。在一些实施方案中，所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法是选自以下的血管紧张素受体阻滞药(ARB)：氯沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、坎地沙坦、缬沙坦、非马沙坦、阿齐沙坦、沙普沙坦和替米沙坦。在一些实施方案中，所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法是选自以下的血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂：贝那普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、培哚普利、雷米普利、群多普利和佐芬普利。在一些实施方案中，所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法是ARB与ACE抑制剂的组合。
在本公开文本的一些实施方案中，所述受试者患有蛋白尿。在一些实施方案中，所述受试者患有白蛋白尿。在一些实施方案中，所述受试者患有中度白蛋白尿。在一些实施方案中，所述受试者患有重度白蛋白尿。在一些实施方案中，所述方法降低有需要的受试者的白蛋白尿、蛋白尿、微量白蛋白尿和大量白蛋白尿中的一种或多种的严重性、发生率和/或持续时间。
在本公开文本的一些实施方案中，所述受试者的白蛋白-肌酐比率(ACR)在约30与约300mg白蛋白/24小时尿收集之间。在一些实施方案中，所述受试者的ACR在约30与约300mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，所述受试者的白蛋白-肌酐比率(ACR)高于约300mg白蛋白/24小时。在一些实施方案中，所述受试者的ACR高于约300mg白蛋白/g肌酐。在一些实施方案中，所述受试者患有A1期白蛋白尿。在一些实施方案中，所述受试者患有A2期白蛋白尿。在一些实施方案中，所述受试者患有A3期白蛋白尿。在本公开文本的一些实施方案中，所述方法降低A1期白蛋白尿的严重性、发生率和/或持续时间。在一些实施方案中，所述方法降低A2期白蛋白尿的严重性、发生率和/或持续时间。在一些实施方案中，所述方法降低A3期白蛋白尿的严重性、发生率和/或持续时间。在一些实施方案中，所述方法延迟或预防患有A1期白蛋白尿的受试者进展至A2期白蛋白尿。在一些实施方案中，所述方法延迟或预防患有A2期的受试者进展至A3期白蛋白尿。在一些实施方案中，本公开文本的方法延迟和/或预防有需要的受试者的白蛋白尿阶段进展的恶化。在本公开文本的一些实施方案中，本公开文本的方法使受试者的白蛋白尿分类改进一个或多个阶段。在一些实施方案中，本公开文本的方法减小所述受试者的ACR。在一些实施方案中，本公开文本的方法使所述受试者的ACR减小约0.1与约100.0mg白蛋白/g肌酐之间(例如，约0.1与约2.5mg白蛋白/g之间、约2.5与约3.5mg白蛋白/g肌酐之间、约3.5与约5.0mg白蛋白/g肌酐之间、约5.0与约7.5mg白蛋白/g肌酐之间、约7.5与约10.0mg白蛋白/g肌酐之间、约10.0与约15.0mg白蛋白/g肌酐之间、约15.0与约20.0mg白蛋白/g肌酐之间、约20.0与约25.0mg白蛋白/g肌酐之间、约30.0与约35.0mg白蛋白/g肌酐之间、约40.0与约45.0mg白蛋白/g肌酐之间、约45.0与约50.0mg白蛋白/g肌酐之间、约50.0与约60.0mg白蛋白/g肌酐之间、约60.0与约70.0mg白蛋白/g肌酐之间、约70.0与约80.0mg白蛋白/g肌酐之间、约80.0与约90.0mg白蛋白/g肌酐之间、约90.0与约100.0mg白蛋白/g肌酐之间)。
在一些实施方案中，与基线测量相比，本公开文本的方法使所述受试者的ACR减小至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。
在一些实施方案中，本公开文本的方法减小所述受试者的尿蛋白-肌酐比率(UPCR)。在一些实施方案中，本公开文本的方法使所述受试者的UPCR减小约0.1与约100.0mg尿蛋白/mg肌酐之间(例如，约0.1与约2.5mg尿蛋白/mg肌酐之间、约2.5与约3.5mg尿蛋白/mg肌酐之间、约3.5与约5.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约5.0与约7.5mg尿蛋白/mg肌酐之间、约7.5与约10.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约10.0与约15.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约15.0与约20.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约20.0与约25.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约30.0与约35.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约40.0与约45.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约45.0与约50.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约50.0与约60.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约60.0与约70.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约70.0与约80.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约80.0与约90.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约90.0与约100.0mg尿蛋白/mg肌酐之间)。在一些实施方案中，与基线测量相比，本公开文本的方法使所述受试者的UPCR减小至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。
在一些实施方案中，本公开文本的方法增加所述受试者的估算肾小球滤过率(eGFR)和/或肾小球滤过率(GFR)。在一些实施方案中，所述eGFR是使用血清肌酐、年龄、民族性和性别变量来测量的。在一些实施方案中，所述eGFR是使用以下中的一种或多种来测量的：Cockcroft-Gault公式、肾病饮食调整(MDRD)公式、CKD-EPI公式、Mayo二次公式以及Schwartz公式。在一些实施方案中，与基线测量相比，使所述eGFR和/或GFR增加至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。在一些实施方案中，与基线测量相比，使所述GFR增加约1mL/min/1.73m2(例如，3、5、7、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100mL/min/1.73m2)。
在一些实施方案中，所述肾脏疾病或病症按慢性肾脏病(CKD)的阶段来评价。在一些实施方案中，所述受试者患有一期慢性肾脏病(CKD)。在一些实施方案中，所述受试者患有二期慢性肾脏病(CKD)。在一些实施方案中，所述受试者患有三期慢性肾脏病(CKD)。在一些实施方案中，所述受试者患有四期慢性肾脏病(CKD)。在一些实施方案中，所述受试者患有五期慢性肾脏病(CKD)。在一些实施方案中，本公开文本的方法降低1期CKD的严重性、发生率和/或持续时间。在一些实施方案中，本公开文本的方法降低2期CKD的严重性、发生率和/或持续时间。在一些实施方案中，本公开文本的方法降低3期CKD的严重性、发生率和/或持续时间。在一些实施方案中，本公开文本的方法降低3a期CKD的严重性、发生率和/或持续时间。在一些实施方案中，本公开文本的方法降低3b期CKD的严重性、发生率和/或持续时间。在一些实施方案中，本公开文本的方法降低4期CKD的严重性、发生率和/或持续时间。在一些实施方案中，本公开文本的方法降低5期CKD的严重性、发生率和/或持续时间。在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟患有1期CKD的受试者进展至2期CKD。在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟患有2期CKD的受试者进展至3期CKD。在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟患有2期CKD的受试者进展至3a期CKD。在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟患有3a期CKD的受试者进展至3b期CKD。在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟患有3期CKD的受试者进展至4期CKD。在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟患有3b期CKD的受试者进展至4期CKD。在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟患有4期CKD的受试者进展至5期CKD。在一些实施方案中，本公开文本的方法延迟和/或预防有需要的受试者的CKD阶段进展的恶化。在一些实施方案中，本公开文本的方法使受试者的肾损伤CKD分类改进一个或多个阶段。在一些实施方案中，本公开文本的方法减小受试者的总肾体积。在一些实施方案中，与基线测量相比，使所述总肾体积减小至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。在一些实施方案中，本公开文本的方法减少所述受试者的血尿素氮(BUN)。在一些实施方案中，与基线测量相比，使所述BUN减少至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟肾脏疾病或病症的临床恶化。在一些实施方案中，本公开文本的方法降低与肾脏疾病或病症相关的一种或多种并发症的住院风险。在一些实施方案中，所述多肽通过皮下注射来施用。在一些实施方案中，所述异多聚体蛋白通过皮下注射来施用。
在某些方面，本公开文本涉及治疗肾脏疾病或病症的方法，所述方法包括将多肽施用至有需要的受试者，其中所述多肽包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，并且其中所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的K取代。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸29-109至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸25-131至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸20-134至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽是融合蛋白，其还包含第一多肽结构域和一个或多个异源多肽结构域。在一些实施方案中，所述多肽是ActRIIB-Fc融合蛋白。在一些实施方案中，所述融合蛋白还包含定位于所述第一多肽结构域与所述一个或多个异源结构域或Fc结构域之间的接头结构域。在一些实施方案中，所述接头结构域选自：TGGG、TGGGG、SGGGG、GGGGS、GGG、GGGG、SGGG和GGGGS。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:40的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与SEQ ID NO:42的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽与选自激活素A、激活素B、GDF11、GDF8、GDF3、BMP5、BMP6和BMP10的一种或多种配体结合。在一些实施方案中，所述多肽与激活素A、GDF8、GDF11和BMP10结合。在一些实施方案中，所述多肽在基于细胞的测定中抑制一种或多种配体的活性。
在本公开文本的一些实施方案中，所述肾脏疾病或病症是奥尔波特综合征。在本公开文本的一些实施方案中，所述肾脏疾病或病症是局灶节段性肾小球硬化(FSGS)。在一些实施方案中，所述受试者患有肾功能下降。在一些实施方案中，所述方法显示肾功能下降。
在一些实施方案中，本公开文本的方法还包括向所述受试者施用用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法。在一些实施方案中，所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法选自：血管紧张素受体阻滞药(ARB)(例如，氯沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、坎地沙坦、缬沙坦、非马沙坦、阿齐沙坦、沙普沙坦和替米沙坦)、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂(例如，贝那普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、培哚普利、雷米普利、群多普利和佐芬普利)、糖皮质激素(例如，倍氯米松、倍他米松、布地奈德、可的松、地塞米松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、甲基强的松、泼尼松和曲安西龙)、钙调磷酸酶抑制剂(例如，环孢菌素、他罗利姆)、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、JAK激酶抑制剂(例如，托法替尼)、mTOR抑制剂(例如，西罗莫司、依维莫司)、IMDH抑制剂(例如，硫唑嘌呤、来氟米特、麦考酚酯)、生物制品(例如，阿巴西普、阿达木单抗、阿那白滞素、巴利昔单抗、赛妥珠单抗、达克珠单抗、依那西普、非苏木单抗、戈利木单抗、英利昔单抗、依奇珠单抗、那他珠单抗、利妥昔单抗、苏金单抗、托珠单抗、优特克单抗、维多珠单抗)、他汀(例如，贝那普利、缬沙坦、氟伐他汀、普伐他汀)、甲基巴多索隆、Achtar凝胶、托伐普坦、阿巴西普联合斯派森坦、阿利吉仑、别嘌呤醇、ANG-3070、阿托伐他汀、布来鲁单抗、博舒替尼、CCX140-B、CXA-10、D6-25-羟维生素D3、达格列净、地塞米松联合MMF、大黄素、FG-3019、FK506、FK-506和MMF、FT-011、半乳糖、GC1008、GFB-887、异维甲酸、拉德梅森、兰瑞肽、左旋咪唑、利希普坦、洛批莫德、二甲双胍、咪唑立宾、N-乙酰甘露糖胺、奥曲肽、帕立骨化醇、PF-06730512、吡格列酮、丙帕锗、丙帕锗和厄贝沙坦、雷帕鸣、雷帕霉素、RE-021(例如，斯派森坦)、RG012、罗格列酮(例如，Avandia)、沙奎那韦、SAR339375、促生长素抑制素、螺内酯、特泊替尼(KD019)、替可克肽、雷公藤(TW)、丙戊酸、VAR-200、文格司他(GZ402671)、维立诺雷、伏环孢素、VX-147、肾透析、肾移植、间充质干细胞疗法、骨髓干细胞、脂蛋白清除、Liposorber LA-15装置、血浆去除术、血浆置换和饮食改变(例如，膳食钠摄入量)。在一些实施方案中，所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法是选自以下的血管紧张素受体阻滞药(ARB)：氯沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、坎地沙坦、缬沙坦、非马沙坦、阿齐沙坦、沙普沙坦和替米沙坦。在一些实施方案中，所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法是选自以下的血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂：贝那普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、培哚普利、雷米普利、群多普利和佐芬普利。在一些实施方案中，所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法是ARB与ACE抑制剂的组合。
在本公开文本的一些实施方案中，所述受试者患有蛋白尿。在本公开文本的一些实施方案中，所述受试者患有白蛋白尿。在一些实施方案中，本公开文本的方法减小所述受试者的白蛋白-肌酐比率(ACR)。在一些实施方案中，本公开文本的方法使所述受试者的ACR减小约0.1与约100.0mg白蛋白/g肌酐之间(例如，约0.1与约2.5mg白蛋白/g之间、约2.5与约3.5mg白蛋白/g肌酐之间、约3.5与约5.0mg白蛋白/g肌酐之间、约5.0与约7.5mg白蛋白/g肌酐之间、约7.5与约10.0mg白蛋白/g肌酐之间、约10.0与约15.0mg白蛋白/g肌酐之间、约15.0与约20.0mg白蛋白/g肌酐之间、约20.0与约25.0mg白蛋白/g肌酐之间、约30.0与约35.0mg白蛋白/g肌酐之间、约40.0与约45.0mg白蛋白/g肌酐之间、约45.0与约50.0mg白蛋白/g肌酐之间、约50.0与约60.0mg白蛋白/g肌酐之间、约60.0与约70.0mg白蛋白/g肌酐之间、约70.0与约80.0mg白蛋白/g肌酐之间、约80.0与约90.0mg白蛋白/g肌酐之间、约90.0与约100.0mg白蛋白/g肌酐之间)。在一些实施方案中，与基线测量相比，本公开文本的方法使所述受试者的ACR减小至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。在一些实施方案中，本公开文本的方法减小所述受试者的尿蛋白-肌酐比率(UPCR)。在一些实施方案中，本公开文本的方法使所述受试者的UPCR减小约0.1与约100.0mg尿蛋白/mg肌酐之间(例如，约0.1与约2.5mg尿蛋白/mg肌酐之间、约2.5与约3.5mg尿蛋白/mg肌酐之间、约3.5与约5.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约5.0与约7.5mg尿蛋白/mg肌酐之间、约7.5与约10.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约10.0与约15.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约15.0与约20.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约20.0与约25.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约30.0与约35.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约40.0与约45.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约45.0与约50.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约50.0与约60.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约60.0与约70.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约70.0与约80.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约80.0与约90.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约90.0与约100.0mg尿蛋白/mg肌酐之间)。在一些实施方案中，与基线测量相比，本公开文本的方法使所述受试者的UPCR减小至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。在一些实施方案中，本公开文本的方法增加所述受试者的估算肾小球滤过率(eGFR)和/或肾小球滤过率(GFR)。在一些实施方案中，所述eGFR是使用血清肌酐、年龄、民族性和性别变量来测量的。在一些实施方案中，所述eGFR是使用以下中的一种或多种来测量的：Cockcroft-Gault公式、肾病饮食调整(MDRD)公式、CKD-EPI公式、Mayo二次公式以及Schwartz公式。在一些实施方案中，与基线测量相比，使所述eGFR和/或GFR增加至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。在一些实施方案中，与基线测量相比，使所述GFR增加约1mL/min/1.73m2(例如，3、5、7、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100mL/min/1.73m2)。
在本公开文本的一些实施方案中，所述肾脏疾病或病症按慢性肾脏病(CKD)的阶段来评价。在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟患有1期CKD的受试者进展至2期CKD。在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟患有2期CKD的受试者进展至3期CKD。在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟患有2期CKD的受试者进展至3a期CKD。在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟患有3a期CKD的受试者进展至3b期CKD。在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟患有3期CKD的受试者进展至4期CKD。在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟患有3b期CKD的受试者进展至4期CKD。在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟患有4期CKD的受试者进展至5期CKD。
在一些实施方案中，本公开文本的方法减小受试者的总肾体积。在一些实施方案中，与基线测量相比，使所述总肾体积减小至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。
在一些实施方案中，本公开文本的方法减少所述受试者的血尿素氮(BUN)。在一些实施方案中，与基线测量相比，使所述BUN减少至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。
在一些实施方案中，本公开文本的方法预防或延迟肾脏疾病或病症的临床恶化。在一些实施方案中，本公开文本的方法降低与肾脏疾病或病症相关的一种或多种并发症的住院风险。在本公开文本的一些实施方案中，所述多肽通过皮下注射来施用。
附图说明
图1A和图1B显示包含变体ActRIIB多肽(表示为“X”)和ALK4多肽(表示为“Y”)或ALK7多肽(表示为“Y”)的异聚蛋白复合物的示意性例子。在所说明的实施方案中，所述变体ActRIIB多肽是包含相互作用对的第一成员(“C1”)的融合多肽的一部分，并且ALK4多肽或ALK7多肽是包含相互作用对的第二成员(“C2”)的融合多肽的一部分。合适的相互作用对包括例如重链和/或轻链免疫球蛋白相互作用对、截短及其变体，如本文所述的那些[例如，Spiess等人(2015)Molecular Immunology 67(2A):95-106]。在每种融合多肽中，接头可以定位于变体ActRIIB多肽、ALK4多肽或ALK7多肽与相互作用对的相应成员之间。相互作用对的第一成员和第二成员可能是无指导的，意味着所述对的成员可以彼此缔合或自缔合，没有明显的偏好，并且它们可以具有相同或不同的氨基酸序列。参见图1A。可替代地，相互作用对可能是指导的(不对称的)对，意味着所述对的成员优先彼此缔合而不是自缔合。参见图1B。
图2显示不含其细胞内结构域的多种脊椎动物ActRIIB前体蛋白(SEQ ID NO:358-363)、不含其细胞内结构域的人ActRIIA前体蛋白(SEQ ID NO:364)和共有ActRII前体蛋白(SEQ ID NO:365)的多序列比对。共有序列中的大写字母指示保守的位置。共有序列中的小写字母指示作为该位置的主要形式但并非普遍存在的氨基酸残基。
图3显示使用Clustal 2.1对来自人IgG同种型的Fc结构域进行的多序列比对。铰链区由虚线下划线指示。双下划线指示在IgG1(SEQ ID NO:13)Fc中工程化以促进不对称链配对的位置和关于其他同种型IgG4(SEQ ID NO:17)、IgG2(SEQ ID NO:14)和IgG3(SEQ IDNO:15)的相应位置的例子。
图4显示人ActRIIB前体蛋白的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)；NCBI参考序列NP_001097.2)。信号肽加下划线，细胞外结构域呈粗体(也称为SEQ ID NO:1)，并且潜在N-连接的糖基化位点加框。在本公开文本中使用SEQ ID NO:2作为人ActRIIB的野生型参考序列，并且本文所述变体的编号是基于SEQ ID NO:2中的编号。
图5显示人ActRIIB细胞外结构域多肽的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)，其中编号是基于天然人ActRIIB前体序列(参见SEQ ID NO:2)。
图6显示编码人ActRIIB前体蛋白的核酸序列。SEQ ID NO:4由NCBI参考序列NM_001106.4的核苷酸434-1972组成。
图7显示编码人ActRIIB(20-134)细胞外结构域多肽的核酸序列(SEQ ID NO:3)。
图8A和图8B显示包含变体或未修饰的ActRIIB结构域的同二聚Fc-融合蛋白的配体结合动力学的值，如在37℃通过表面等离子体共振所确定。氨基酸编号是基于SEQ IDNO:2。ND#表明，所述值在所测试的浓度范围内无法检测。短暂*表明，所述值由于相互作用的短暂性而是不确定的。对照样品是ActRIIB-G1Fc(SEQ ID NO:5)。
图9显示包含变体或未修饰的ActRIIB结构域的同二聚Fc-融合蛋白的配体结合动力学的值，如在37℃通过表面等离子体共振所确定。氨基酸编号是基于SEQ ID NO:2。ND#表明，所述值在所测试的浓度范围内无法检测。短暂结合*表明，所述值由于相互作用的短暂性而是不确定的。对照样品是ActRIIB-G1Fc(SEQ ID NO:5)。
图10显示包含变体或未修饰的ActRIIB结构域的同二聚Fc-融合蛋白的配体结合动力学的值，如在25℃通过表面等离子体共振所确定。ND#表明，所述值在所测试的浓度范围内无法检测。氨基酸编号是基于SEQ ID NO:2。
图11显示变体ActRIIB F82K mFc融合物(“ActRIIB(F82K)-mFc”)在UUO模型中的治疗效果。十六只小鼠在肾下极的水平面上经历两次左侧单侧输尿管结扎，并且在3天后，将它们随机化为两组：i)“UUO/PBS”(在手术后第3天、第7天、第10天和第14天，向八只小鼠皮下注射媒介物对照，即磷酸盐缓冲盐水(PBS))，以及ii)“UUO/F82K”(在手术后第3天、第7天、第10天和第14天，以10mg/kg的剂量向八只小鼠皮下注射变体ActRIIB F82K mFc融合物)。“CTRL”是没有经历过单侧输尿管梗阻手术的对侧肾。图11A-图11E显示对纤维化基因标记(分别为纤维粘连蛋白、PAI-I、Col-I、Col-III、a-SMA)的基因表达分析，图11F-图11G显示对炎症基因标记(分别为MCP-1、TNFa)的基因表达分析，图11H显示对肾损伤标记(NGAL)的基因表达分析，并且图11I-图11J显示对TGFβ配体(分别为Tgfb1和激活素A)的基因表达分析。相对于“UUO/PBS”治疗的小鼠，“UUO/F82K”治疗的小鼠显示显著更低的纤维化和炎症基因的表达、降低的TGFβ1和激活素A的上调以及降低的肾损伤基因表达。对于“CTRL”与样品“UUO/PBS”之间的比较，将统计显著性(p值)描绘为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001以及****p<0.0001。对于“UUO/PBS”与样品“UUO/F82K”之间的比较，将统计显著性(p值)描绘为#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001以及####p<0.0001。“B.D.L.”意指测量值低于检测限，并且对于与“B.D.L.”值相比的值，没有计算统计信息。
图12显示变体ActRIIB F82K mFc融合物(“ActRIIB(F82K)-mFc”)在Col4a3(-/-)奥尔波特综合征模型中的治疗效果。将十四只Col4a3-/-小鼠随机化为两组：i)“Col4a3-Veh”(向八只小鼠皮下注射媒介物对照，即磷酸盐缓冲盐水(PBS)，一周两次)，以及ii)“Col4a3-F82K”(以10mg/kg的剂量向六只小鼠皮下注射变体ActRIIB F82K mFc融合物(“ActRIIB(F82K)-mFc”)，一周两次)。还在第49天(7周)与上文小鼠一起分析“WT”小鼠，即未治疗的Col4a3+/+小鼠。相对于Col4a3-Veh小鼠，用ActRIIB(F82K)-mFc(“Col4a3-F82K”)治疗小鼠显著减少白蛋白尿(描绘为白蛋白-肌酐比率(ACR))，在7周减少约38.9％(p<0.05)，并且在9周减少约45.1％(p<0.001)(图12A)。为了评价ActRIIB(F82K)-mFc在血管紧张素转换酶抑制剂(ACEi)存在下在Alport模型中的治疗益处，在用雷米普利治疗的Col4a3-/-小鼠中进一步评估ActRIIB(F82K)-mFc。在整个研究中向三十一只Col4a3-/-小鼠饲喂饮用水中的雷米普利(10mg/kg/天)，并将其随机化为两组：i)向十六只小鼠皮下注射媒介物对照，即磷酸盐缓冲盐水(PBS)，一周两次(“Col4a3-ACEi/Veh”)，以及ii)以10mg/kg的剂量向十五只小鼠皮下注射ActRIIB(F82K)-mFc，一周两次(“Col4a3-ACEi/F82K”)。还在第49天(7周)与上文小鼠一起分析“WT”小鼠，即未治疗的Col4a3+/+小鼠，以测量白蛋白与肌酐的比率(ACR，图12B)。在用雷米普利治疗的Col4a3-/-小鼠中，白蛋白尿从4周至17周显著增加，但是在Col4a3-/-小鼠中用ActRIIB(F82K)-mFc治疗这些小鼠显著减少白蛋白尿，分别在12周减少76.7％(p<0.05)，在15周减少59％(p<0.05)，并且在17周减少86％(p<0.001)，这与Col4a3-/-小鼠中降低的BUN相关(图12C)。在用雷米普利治疗的Col4a3-/-小鼠中，ActRIIB(F82K)-mFc显著延长寿命(p<0.05)，中值存活时间在用ActRIIB(F82K)-mFc治疗的小鼠(“Col4a3-ACEi/F82K”)中为141天，并且在用PBS治疗的群组(“Col4a3-ACEi/Veh”)中为119天(图12D)。将统计显著性(p值)描绘为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001以及****p<0.0001。
图13显示变体ActRIIB-(K55A)-mFc、ActRIIB(K55E)-mFc和ActRIIB(F82I)-mFc在UUO模型中的治疗效果。三十二只小鼠在肾下极的水平面上经历两次左侧单侧输尿管结扎，并且在3天后，将它们随机化为四组：i)在手术后第3天、第7天、第10天和第14天向八只小鼠皮下注射媒介物对照，即磷酸盐缓冲盐水(PBS)(“UUO/PBS”)，ii)在手术后第3天、第7天、第10天和第14天以10mg/kg的剂量向八只小鼠皮下注射ActRIIB(K55A)-mFc，iii)在手术后第3天、第7天、第10天和第14天以10mg/kg的剂量向八只小鼠皮下注射ActRIIB(K55E)-mFc，以及iv)在手术后第3天、第7天、第10天和第14天以10mg/kg的剂量向八只小鼠皮下注射ActRIIB(F82I)-mFc。“CTRL”是没有经历过单侧输尿管梗阻手术的对侧肾。图13A-图13E显示对纤维化基因标记(分别为纤维粘连蛋白、PAI-I、Col-I、Col-III、a-SMA)的基因表达分析，图13F-图13G显示对炎症基因标记(分别为MCP-1、TNFa)的基因表达分析，图13H显示对肾损伤标记(NGAL)的基因表达分析，并且图13I-图13J显示对TGFβ配体(分别为Tgfb1和激活素A)的基因表达分析。相对于“UUO/PBS”治疗的小鼠，用ActRIIB(K55A)-mFc治疗小鼠显著抑制纤维化和炎症基因的表达，抑制TGFβ1和激活素A的上调，并且减少肾损伤。相对于“UUO/PBS”治疗的小鼠，用ActRIIB(K55E)-mFc治疗小鼠显著抑制PAI-1和a-SMA，而非Col1a1、Col3a1和纤维粘连蛋白的表达。另外，用ActRIIB(K55E)-mFc治疗小鼠没有显著抑制炎症基因表达，也没有减少肾损伤。相对于“UUO/PBS”治疗的小鼠，用ActRIIB(F82I)-mFc治疗小鼠显著抑制PAI-1和a-SMA，而非Col1a1、Col3a1和纤维粘连蛋白的表达。另外，用ActRIIB(F82I)-mFc治疗小鼠显著抑制TGFβ1和激活素A的上调，并且减少肾损伤。然而，ActRIIB(F82I)-mFc没有显著抑制炎症基因表达。对于“CTRL”与样品“UUO/PBS”之间的比较，将统计显著性(p值)描绘为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001以及****p<0.0001。对于“UUO/PBS”与样品“UUO/K55A”、“UUO/K55E”或“UUO/F82I”之间的比较，将统计显著性(p值)描绘为#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001以及####p<0.0001。“B.D.L.”意指测量值低于检测限，并且对于与“B.D.L.”值相比的值，没有计算统计信息。
图14显示来自基于A204细胞的测定的变体ActRIIB-Fc蛋白的活性，所述测定用于针对对通过激活素A、激活素B、GDF8、GDF11、BMP6、BMP9和BMP10的细胞信号传导的抑制作用筛选变体ActRIIB-Fc蛋白。将在人ActRIIB细胞外结构域中掺入氨基酸取代的同二聚Fc融合蛋白的效力与包含未修饰的人ActRIIB细胞外结构域的Fc融合蛋白(SEQ ID NO:519)的效力进行比较。ND意指无法检测，短横线(-)意指未测试和/或未计算，并且*意指值是外推的，其中没有进入平台期的曲线的IC50通过以下方式来估计：将曲线根据其斜率向外延伸，达到在最高或最低浓度下一个另外的浓度内的阳性和阴性对照。
图15A和图15B显示包含变体或未修饰的ActRIIB结构域的同二聚Fc-融合蛋白的配体结合动力学的值，如在37℃通过表面等离子体共振所确定。氨基酸编号是基于SEQ IDNO:2。N.B.意指无结合(信号小于5个共振单位(RU))，M.B.意指最小结合(信号小于10RU)，并且短暂结合表明，所述值由于相互作用的短暂性而是不确定的。对照样品是ActRIIB-G1Fc(SEQ ID NO:519)。
图16A和图16B显示包含变体或未修饰的ActRIIB结构域的同二聚Fc-融合蛋白的配体结合动力学的值，如在37℃通过表面等离子体共振所确定。氨基酸编号是基于SEQ IDNO:2。N.B.意指无结合(信号小于5个共振单位(RU))，M.B.意指最小结合(信号小于10RU)，并且短暂结合表明，所述值由于相互作用的短暂性而是不确定的。对照样品是ActRIIB-G1Fc(SEQ ID NO:519)。
具体实施方式
1.概述
在某些方面，本公开文本涉及ActRIIB多肽。如本文所用，术语“ActRIIB”是指源自任何物种的激活素受体IIB型(ActRIIB)蛋白和ActRIIB相关蛋白的家族。ActRIIB家族的成员通常是由具有富半胱氨酸区域的配体结合细胞外结构域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶特异性的胞质结构域构成的所有跨膜蛋白。人ActRIIB前体蛋白的氨基酸序列示于图4中(SEQ ID NO:2)。变体ActRIIB多肽的例子在整个本公开文本中以及以下申请中提供：国际专利申请公开号WO 2006/012627、WO 2008/097541、WO 2010/151426、WO2011/020045、WO 2018/009624和WO 2018/067874，所述申请通过引用以其整体并入本文。
术语“ActRIIB多肽”用于指包含ActRIIB家族成员的任何天然存在的多肽以及其保留有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和肽模拟物形式)的多肽。例如，ActRIIB多肽包括源自任何已知ActRIIB的序列的多肽，所述多肽具有与ActRIIB多肽的序列至少约80％相同，并且优选地至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列。
在具体实施方案中，本公开文本涉及可溶性ActRIIB多肽。如本文所述，术语“可溶性ActRIIB多肽”通常是指包含ActRIIB蛋白的细胞外结构域的多肽。如本文所用，术语“可溶性ActRIIB多肽”包括ActRIIB蛋白的任何天然存在的细胞外结构域以及其保留有用活性的任何变体(包括突变体、片段和肽模拟物形式)。例如，ActRIIB蛋白的细胞外结构域与配体结合并且通常是可溶的。可溶性ActRIIB多肽的例子包括图5中所示的ActRIIB细胞外结构域(SEQ ID NO:1)以及SEQ ID NO:53。此截短的ActRIIB细胞外结构域(SEQ ID NO:53)基于SEQ ID NO:2中的编号表示为ActRIIB(25-131)。除ActRIIB蛋白的细胞外结构域外，可溶性ActRIIB多肽的其他例子还包含信号序列(参见实施例1)。所述信号序列可以是ActRIIB的天然信号序列，或来自另一种蛋白质的信号序列，如组织纤溶酶原激活物(TPA)信号序列或蜜蜂褪黑素(melatin)信号序列。
TGF-β信号由I型和II型丝氨酸/苏氨酸激酶受体的异聚复合物介导，所述异聚复合物在配体刺激后磷酸化并激活下游Smad蛋白(Massagué,2000,Nat.Rev.Mol.CellBiol.1:169-178)。这些I型和II型受体是由具有富半胱氨酸区域的配体结合细胞外结构域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸特异性的胞质结构域构成的所有跨膜蛋白。I型受体对于信号传导是必需的，并且II型受体是结合配体所需的。I型和II型激活素受体在配体结合后形成稳定的复合物，从而导致II型受体将I型受体磷酸化。
两种相关的II型受体ActRIIA和ActRIIB已被鉴定为激活素的II型受体(Mathews和Vale,1991,Cell 65:973-982；Attisano等人,1992,Cell 68:97-108)。除了激活素，ActRIIA和ActRIIB可以与几种其他TGF-β家族蛋白发生生化相互作用，包括BMP7、Nodal、GDF8和GDF11(Yamashita等人,1995,J.Cell Biol.130:217-226；Lee和McPherron,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.98:9306-9311；Yeo和Whitman,2001,Mol.Cell 7:949-957；Oh等人,2002,Genes Dev.16:2749-54)。申请人已经发现可溶性ActRIIA-Fc融合蛋白和ActRIIB-Fc融合蛋白在体内具有显著不同的作用，其中ActRIIA-Fc对骨具有主要作用，并且ActRIIB-Fc对骨骼肌具有主要作用。
在某些实施方案中，本公开文本涉及用主题ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB多肽)拮抗ActRIIB受体的配体(也称为ActRIIB配体)。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽是同多聚体(例如，同二聚体)的成员。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽是异多聚体(例如，异二聚体)的成员。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽与任何本文公开的其他可溶性受体异多聚化。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽与任何本文公开的蛋白质(任何本文公开的可溶性受体)融合。因此，本公开文本的组合物和方法可用于治疗与ActRIIB受体的一种或多种配体的异常活性相关的障碍。ActRIIB受体的示例性配体包括一些TGF-β家族成员，如激活素A、激活素B、GDF3、GDF8、GDF11、BMP6、BMP9和BMP10。在一些实施方案中，如与任何本文公开的ActRIIB同多聚体(例如，同二聚体)相比，任何本文公开的异多聚体具有不同的结合谱。
激活素是二聚多肽生长因子并且属于TGF-β超家族。存在三种激活素(A、B和AB)，其为两种密切相关的β亚基的同二聚体/异二聚体(βAβA、βBβB和βAβB)。在TGF-β超家族中，激活素是能够刺激卵巢和胎盘细胞中的激素产生、支持神经元细胞存活、根据细胞类型积极地或消极地影响细胞周期进展并且至少在两栖动物胚胎中诱导中胚层分化的独特且多功能的因子(DePaolo等人,1991,Proc SocEp Biol Med.198:500-512；Dyson等人,1997,CurrBiol.7:81-84；Woodruff,1998,Biochem Pharmacol.55:953-963)。此外，发现从刺激的人单核细胞白血病细胞分离的红细胞分化因子(EDF)与激活素A相同(Murata等人,1988,PNAS,85:2434)。提出激活素A充当骨髓中红细胞生成的天然调节剂。在几种组织中，激活素信号传导被其相关的异二聚体抑制素拮抗。例如，在从垂体释放卵泡刺激素(FSH)期间，激活素促进FSH分泌和合成，而抑制素阻止FSH分泌和合成。可以调节激活素生物活性和/或与激活素结合的其他蛋白质包括卵泡抑素(FS)、卵泡抑素相关蛋白(FSRP)、α2-巨球蛋白、Cerberus和内皮联蛋白。
生长和分化因子-8(GDF8)也被称为肌生成抑制蛋白。GDF8是骨骼肌质量的负调节剂。GDF8在发育中的骨骼肌和成年骨骼肌中高度表达。转基因小鼠中的GDF8无效突变的特征在于骨骼肌的显著肥大和增生(McPherron等人,Nature,1997,387:83-90)。在牛中(Ashmore等人,1974,Growth,38:501-507；Swatland和Kieffer,J.Anim.Sci.,1994,38:752-757；McPherron和Lee,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1997,94:12457-12461；以及Kambadur等人,Genome Res.,1997,7:910-915)以及引人注意地在人中(Schuelke等人,NEngl J Med 2004；350:2682-8)，骨骼肌质量的类似增加在GDF8的天然存在的突变中是明显的。研究还显示，与人HIV感染相关的肌肉消耗伴随GDF8蛋白表达的增加(Gonzalez-Cadavid等人,PNAS,1998,95:14938-43)。另外，GDF8可以调节肌肉特异性酶(例如，肌酸激酶)的产生并调节成肌细胞增殖(WO 00/43781)。GDF8前肽可以与成熟的GDF8结构域二聚体非共价结合，从而使其生物活性失活(Miyazono等人(1988)J.Biol.Chem.,263:6407-6415；Wakefield等人(1988)J.Biol.Chem.,263；7646-7654；以及Brown等人(1990)GrowthFactors,3:35-43)。与GDF8或结构相关蛋白结合并抑制其生物活性的其他蛋白质包括卵泡抑素以及可能的卵泡抑素相关蛋白(Gamer等人(1999)Dev.Biol.,208:222-232)。
生长和分化因子-11(GDF11，也称为BMP11)是分泌的蛋白质(McPherron等人,1999,Nat.Genet.22:260-264)。GDF11在小鼠发育期间在尾芽、肢芽、上颌弓和下颌弓以及背根神经节中表达(Nakashima等人,1999,Mech.Dev.80:185-189)。GDF11在使中胚层和神经组织模式化中起独特作用(Gamer等人,1999,Dev Biol.,208:222-32)。显示GDF11是发育中的小鸡肢体中软骨形成和肌生成的负调节剂(Gamer等人,2001,Dev Biol.229:407-20)。GDF11在肌肉中的表达也表明其在以与GDF8类似的方式调节肌肉生长中的作用。另外，GDF11在脑中的表达表明，GDF11也可以具有与神经系统功能相关的活性。令人感兴趣的是，发现GDF11抑制嗅上皮中的神经发生(Wu等人,2003,Neuron.37:197-207)。因此，GDF11可以在诸如肌肉疾病和神经系统变性疾病(例如，肌萎缩侧索硬化和脊髓性肌萎缩)的疾病的治疗中具有体外和体内应用。
在某些方面，本公开文本涉及某些ActRIIB多肽(例如，可溶性ActRIIB多肽)在与ActRIIB活性相关的任何过程中通常拮抗ActRIIB配体的信号传导的用途。任选地，本公开文本的ActRIIB多肽可以拮抗ActRIIB受体的一种或多种配体，如激活素A、激活素B、GDF8、GDF11或BMP10，并且因此可以用于另外的障碍的治疗中。特别地，本公开文本提供具有降低的与BMP9的结合亲和力，同时保留与激活素A、激活素B、GDF8、GDF11和BMP10中的一种或多种的结合亲和力的变体ActRIIB多肽。因此，这些变体ActRIIB多肽可能在这样的选择性拮抗作用有利的某些应用中比未修饰的ActRIIB多肽更有用。例子包括治疗性应用，其中期望保留激活素A、激活素B、GDF8、GDF11和BMP10中的一种或多种的拮抗作用，同时降低BMP9的拮抗作用。在一些实施方案中，可以将任何本文公开的ActRIIB多肽与任何本文公开的其他多肽组合。在一些实施方案中，ActRIIB多肽是与任何本文公开的蛋白质的异多聚体(例如，异二聚体)的成员。
因此，本公开文本考虑在治疗或预防与ActRIIB或ActRIIB配体的异常活性相关的疾病或病症中使用ActRIIB多肽及其变体。在许多关键生物过程的调节中涉及ActRIIB配体。由于它们在这些过程中的关键功能，所以它们可能是治疗干预的合意靶标。例如，ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB多肽)可以用于治疗人或动物的障碍或病症。这样的障碍或病症的例子包括但不限于肺部障碍(例如，肺高血压、间质性肺疾病、特发性肺纤维化)、肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)、周围神经病、夏科-马里-图思病、贫血(例如，与骨髓增生异常综合征、地中海贫血症或骨髓纤维化相关的贫血)、代谢障碍(如2型糖尿病、糖耐量减低、代谢综合征(例如，综合征X)和创伤(例如，烧伤或氮不平衡)引起的胰岛素抵抗)；脂肪组织障碍(例如，肥胖症)；肌肉和神经肌肉障碍，如肌营养不良(包括迪谢内肌营养不良)；肌萎缩侧索硬化(ALS)；脊髓性肌萎缩(SMA)；肌肉萎缩；器官萎缩；衰弱；腕管综合征；充血性阻塞性肺疾病；以及肌少症、恶病质和其他肌肉消耗综合征。其他例子包括骨质疏松症，尤其是老年人和/或绝经后妇女；糖皮质激素诱导的骨质疏松症；骨质减少；骨关节炎；以及骨质疏松症相关的骨折。另外的例子包括由于长期糖皮质激素治疗所致的低骨量、过早性腺衰竭、雄激素抑制、维生素D缺乏、继发性甲状旁腺机能亢进、营养缺乏和神经性厌食症。这些障碍和病症在下文“示例性治疗用途”中论述。
本说明书中使用的术语在本公开文本的上下文中以及在使用每个术语的特定上下文中通常具有它们在本领域中的普通含义。某些术语在下文或本说明书的其他地方进行讨论，以向从业者提供关于描述本公开文本的组合物和方法以及如何制备和使用它们的额外指导。术语的任何使用的范围或含义将从使用该术语的具体上下文变得清楚。
“约”和“大约”通常应意指给定测量的性质或准确度，所测量的量的可接受的误差程度。典型地，示例性误差程度在给定的值或值的范围的百分之20(％)内，优选在10％内，并且更优选在5％内。
可替代地，并且特别是在生物系统中，术语“约”和“大约”可以意指在给定值的一个数量级内，优选在给定值的5倍内且更优选在2倍内的值。除非另有说明，否则本文给出的数字量是近似的，意味着在没有特意说明时可以意指术语“约”和“大约”。
本公开文本的方法可以包括将序列相互比较的步骤，包括比较未修饰的(野生型)序列与一种或多种突变体(序列变体)。此类比较典型地包括聚合物序列的比对，例如，使用本领域中熟知的序列比对程序和/或算法(例如，BLAST、FASTA和MEGALIGN，仅举几例)。熟练的技术人员可以容易地理解，在此类比对中，当突变含有残基插入或缺失时，序列比对将在不含该插入的或缺失的残基的聚合物序列中引入“空位”(典型地用短划线或“A”表示)。
“同源”在所有其语法形式和拼写变型中是指具有“共同进化起源”的两种蛋白质之间的关系，包括来自相同生物体物种中的超家族的蛋白质，以及来自不同生物体物种的同源蛋白质。此类蛋白质(以及它们的编码核酸)具有如通过它们的序列相似性而反映的序列同源性，所述序列相似性是就相似性百分比而论，或是就特定残基或基序和保守位置的存在而论。
术语“序列相似性”在其所有语法形式中是指核酸或氨基酸序列之间的同一性或对应性程度，所述核酸或氨基酸序列可以或可以不具有共同的进化起源。
然而，在通常的用法和本申请中，术语“同源的”当用诸如“高度”的副词修饰时，可以指序列相似性，并且可以或可以不涉及共同的进化起源。
“激动”在所有其语法形式中是指激活蛋白质和/或基因的过程(例如，通过激活或扩增该蛋白质的基因表达或通过诱导无活性蛋白质进入活性状态)或增加蛋白质和/或基因的活性。
“拮抗”在所有其语法形式中是指抑制蛋白质和/或基因的过程(例如，通过抑制或减少该蛋白质的基因表达或通过诱导活性蛋白质进入无活性状态)或降低蛋白质和/或基因的活性。
在说明书和权利要求书通篇中与数值结合使用的术语“约”和“大约”表示本领域技术人员熟知并可接受的精确度区间。一般来说，这种精确度区间是±10％，可替代地，并且特别是在生物系统中，术语“约”和“大约”可以意指在给定值的一个数量级内，优选≤5倍且更优选≤2倍的值。
本文公开的数字范围包括定义所述范围的数字。
除非使用术语的上下文另外明确规定，否则术语“一个/一种(a)”和“一个/一种(an)”包括复数指示物。术语“一个/一种(a)”(或“一个/一种(an)”)以及术语“一个或多个/一种或多种”和“至少一个/至少一种”可以在本文中互换使用。此外，当在本文中使用时，“和/或”被视为对两个或更多个指定特征或组分中的每一个与或不与其他特征或组分一起的具体公开。因此，在本文中诸如“A和/或B”的短语中使用的术语“和/或”意图包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独)和“B”(单独)。同样地，在诸如“A、B和/或C”的短语中使用的术语“和/或”意图涵盖以下方面中的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；以及C(单独)。
2.ActRIIB多肽
在某些具体实施方案中，本公开文本考虑在ActRIIB多肽的细胞外结构域(也称为配体结合结构域)中进行突变，使得变体(或突变体)ActRIIB多肽具有改变的配体结合活性(例如，结合亲和力或结合选择性)。在某些情况下，此类变体ActRIIB多肽对特定配体具有改变的(升高的或降低的)结合亲和力。在其他情况下，变体ActRIIB多肽对它们的配体具有改变的结合选择性。例如，本公开文本提供多种变体ActRIIB多肽，其具有与未修饰的ActRIIB多肽相比降低的与BMP9的结合亲和力，但是保留对激活素A、激活素B、GDF8、GDF11和BMP10中的一种或多种的结合亲和力。任选地，变体ActRIIB多肽具有其相应野生型ActRIIB多肽的类似或相同的生物活性。例如，本公开文本的变体ActRIIB多肽可以与ActRIIB配体(例如，激活素A、激活素B、GDF8、GDF11或BMP10)结合并抑制其功能。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽治疗人或动物的障碍或病症，如肺部障碍(例如，肺高血压、间质性肺疾病、特发性肺纤维化)、肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)、周围神经病、夏科-马里-图思病以及贫血(例如，与骨髓增生异常综合征、地中海贫血症或骨髓纤维化相关的贫血)。ActRIIB多肽的例子包括人ActRIIB前体多肽(SEQ ID NO:2)以及可溶性人ActRIIB多肽(例如，SEQ IDNO:1、5、6、12、276、278、279、332、333、335、336、338、339、341、342、344、345、347、348、350、351、353、354、356、357、366、368、369、371、372、374、375、377、378、380、381、383、384、386、387、389、390、392、393、395、396、398、399、401、402、404、405、407、408、410、411、413、414、416、417、419、420、422、423、425、426、428、429、431、432、434、435、437、438、440、441、443、444、446、447、449、450、452、453、455、456、458、459、461、462、464、465、467、468、470、471、473、474、476、477、479、480、482、483、485、486、488、489、491、492、494、495、497、498、500、501、503、504、506、507、509、510、512、513、515、516、518、519、520、522和524)。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽是同多聚体(例如，同二聚体)的成员。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽是异多聚体(例如，异二聚体)的成员。在一些实施方案中，可以将任何变体ActRIIB多肽与任何本文公开的蛋白质组合(例如，异多聚化和/或融合)。
ActRIIB几乎在所有脊椎动物中都非常保守，其中大段的细胞外结构域完全保守。参见图2。许多与ActRIIB结合的配体也是高度保守的。因此，来自各种脊椎动物生物体的ActRIIB序列的比较提供了对可以改变的残基的见解。因此，活性人ActRIIB变体可以包括在来自另一种脊椎动物ActRIIB的序列的相应位置处的一个或多个氨基酸，或者可以包括与人或其他脊椎动物序列中的残基类似的残基。
本公开文本鉴定ActRIIB的功能活性部分和变体。申请人先前已经确定，具有Hilden等人(Blood.1994年4月15日；83(8):2163-70)披露的序列的Fc融合蛋白(其具有在对应于SEQ ID NO:2的氨基酸64的位置处的丙氨酸(A64))对激活素和GDF11具有相对低的亲和力。相比之下，具有位置64处的精氨酸(R64)的相同Fc融合蛋白具有在低纳摩尔至高皮摩尔范围内的对激活素和GDF-11的亲和力。因此，在本公开文本中使用具有R64的序列(SEQID NO:2)作为人ActRIIB的野生型参考序列，并且本文所述变体的编号是基于SEQ ID NO:2中的编号。另外地，本领域技术人员可以在A64背景中制备任何本文所述的ActRIIB变体。
处理的细胞外ActRIIB多肽序列显示于SEQ ID NO:1中(参见例如，图5)。在一些实施方案中，可以产生在N末端具有“SGR…”序列的处理的ActRIIB多肽。在一些实施方案中，可以产生在N末端具有“GRG…”序列的处理的ActRIIB多肽。例如，预期一些构建体如果用TPA前导序列表达，将会缺少N末端丝氨酸。因此，本文所述的成熟ActRIIB序列可以以N末端丝氨酸或N末端甘氨酸开始(缺少N末端丝氨酸)。
Attisano等人(Cell.1992年1月10日；68(1):97-108)显示，在ActRIIB的细胞外结构域的C末端处的脯氨酸结的缺失降低了受体对激活素的亲和力。WO 2008097541中披露的数据显示，相对于包含脯氨酸结区域和完整近膜结构域的ActRIIB(20-134)-Fc，含有SEQID NO:2的氨基酸20-119的ActRIIB-Fc融合蛋白“ActRIIB(20-119)-Fc”具有降低的与GDF11和激活素的结合。然而，即使脯氨酸结区域被破坏，ActRIIB(20-129)-Fc蛋白质仍保留相对于野生型类似的但略微降低的活性。因此，预期在氨基酸134、133、132、131、130和129处终止的ActRIIB细胞外结构域都具有活性，但是在134或133处终止的构建体可能是活性最高的。类似地，预期残基129-134中任一个处的突变不会大幅改变配体结合亲和力。为了支持这一点，P129和P130的突变基本上不会降低配体结合。因此，ActRIIB-Fc融合蛋白可以早于氨基酸109(最终的半胱氨酸)结束，然而，预期在109和119处或其间结束的形式具有降低的配体结合。氨基酸119保守性较差，并且因此易于被改变或截短。结束于128或更晚处的形式保留配体结合活性。结束于119和127处或其间的形式将具有中间结合能力。根据临床或实验环境，可能需要使用这些形式中的任一种。
在ActRIIB的N末端，预期始于氨基酸29或之前的蛋白质将保留配体结合活性。氨基酸29表示初始半胱氨酸。位置24处的丙氨酸至天冬酰胺突变引入N-连接的糖基化序列而实质上不影响配体结合。这证实了对应于氨基酸20-29的在信号切割肽与半胱氨酸交联区域之间的区域中的突变是良好耐受的。具体地说，在位置20、21、22、23和24处开始的构建体将保留活性，并且预期在位置25、26、27、28和29处开始的构建体也会保留活性。WO2008097541中显示的数据证实，令人惊讶地，在22、23、24或25处开始的构建体将具有最高活性。
总之，ActRIIB的活性部分包含SEQ ID NO:2的氨基酸29-109，并且构建体可以例如在对应于氨基酸20-29的残基处开始并且在对应于氨基酸109-134的位置处结束。其他例子包括在20-29或21-29的位置处开始并在119-134、119-133或129-134、129-133的位置处结束的构建体。其他例子包括在20-24(或21-24或22-25)的位置处开始并在109-134(或109-133)、119-134(或119-133)或129-134(或129-133)的位置处结束的构建体。还考虑在这些范围内的变体，特别是具有与SEQ ID NO:1的相应部分至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的那些。
在某些实施方案中，变体ActRIIB多肽具有与选自SEQ ID NO:1、2和53的氨基酸序列至少75％相同的氨基酸序列。在某些情况下，变体ActRIIB多肽具有与选自SEQ ID NO:1、2和53的氨基酸序列至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些情况下，变体ActRIIB多肽具有与SEQ ID NO:1至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些情况下，变体ActRIIB多肽具有与SEQ ID NO:2至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些情况下，变体ActRIIB多肽具有与SEQ ID NO:53至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与以下中任一个的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成：SEQ ID NO:1、2、5、6、12、31、33、34、36、37、39、40、42、43、45、46、48、49、50、51、52、53、276、278、279、332、333、335、336、338、339、341、342、344、345、347、348、350、351、353、354、356、357、366、368、369、371、372、374、375、377、378、380、381、383、384、386、387、389、390、392、393、395、396、398、399、401、402、404、405、407、408、410、411、413、414、416、417、419、420、422、423、425、426、428、429、431、432、434、435、437、438、440、441、443、444、446、447、449、450、452、453、455、456、458、459、461、462、464、465、467、468、470、471、473、474、476、477、479、480、482、483、485、486、488、489、491、492、494、495、497、498、500、501、503、504、506、507、509、510、512、513、515、516、518、519、520、522和524。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ IDNO:1的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:5的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:6的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:519的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:519的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:520的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:520的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:12的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:31的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:31的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:33的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:33的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:34的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:34的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:36的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:37的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:37的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:39的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:39的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:40的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:40的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:42的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:42的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:43的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:43的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:45的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:45的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:46的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:46的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:48的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:48的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:49的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:49的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:50的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:50的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:51的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:51的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:52的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:276的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:276的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:278的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:278的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:279的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:279的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:332的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:332的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:333的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:333的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:335的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:335的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:336的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:336的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:338的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:338的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:339的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:339的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:341的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:341的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:342的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:342的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:344的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:344的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:345的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:345的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:347的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:347的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:348的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:348的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:350的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:350的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:351的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:351的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:353的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:353的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:354的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:354的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:356的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:356的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:357的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:366的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:366的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:368的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:368的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:369的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:369的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:371的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:371的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:372的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:372的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:374的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:374的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:375的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:375的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:377的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:377的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:378的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:378的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:380的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:380的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:381的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:381的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:383的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:383的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:384的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:384的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:386的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:386的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:387的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:387的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:389的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:389的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:390的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:390的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:392的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:392的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:393的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:393的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:395的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:395的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:396的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:396的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:398的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:398的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:399的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:399的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:401的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:401的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:402的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:402的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:404的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:404的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:405的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:405的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:407的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:407的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:408的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:408的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:410的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:410的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:411的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:411的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:413的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:413的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:414的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:414的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:416的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:416的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:417的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:417的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:419的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:419的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:420的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:420的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:422的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:422的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:423的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:423的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:425的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:425的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:426的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:426的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:428的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:428的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:429的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:429的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:431的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:431的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:432的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:432的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:434的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:434的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:435的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:435的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:437的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:437的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:438的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:438的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:440的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:440的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:441的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:441的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:443的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:443的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:444的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:444的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:446的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:446的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:447的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:447的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:449的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:449的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:450的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:450的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:452的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:452的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:453的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:453的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:455的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:455的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:456的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:456的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:458的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:458的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:459的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:459的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:461的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:461的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:462的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:462的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:464的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:464的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:465的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:465的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:467的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:467的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:468的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:468的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:470的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:470的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:471的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:471的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:473的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:473的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:474的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:474的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:476的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:476的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:477的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:477的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:479的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:479的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:480的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:480的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:482的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:482的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:483的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:483的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:485的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:485的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:486的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:486的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:488的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:488的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:489的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:489的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:491的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:491的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:492的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:492的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:494的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:494的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:495的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:495的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:497的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:497的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:498的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:498的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:500的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:500的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:501的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:501的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:503的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:503的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:504的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:504的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:506的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:506的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:507的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:507的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:509的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:509的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:510的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:510的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:512的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:512的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:513的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:513的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:515的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:515的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:516的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:516的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:518的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:518的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:522的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:522的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽或变体ActRIIB-Fc融合多肽包含与SEQ ID NO:524的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。SEQ ID NO:524的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
在某些方面，本公开文本涉及变体ActRIIB多肽,其包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，并且其中所述多肽包含在SEQ ID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：A24、S26、N35、E37、L38、R40、S44、L46、E50、E52、Q53、D54、K55、R56、L57、Y60、R64、N65、S67、G68、K74、W78、L79、D80、F82、N83、T93、E94、Q98、V99、E105、E106、F108、E111、R112、A119、G120、E123、P129、P130和A132，以及包含一种或多种这样的变体ActRIIB多肽的异多聚体复合物。在某些方面，本公开文本涉及变体ActRIIB多肽，其包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，并且其中所述多肽包含在SEQ ID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：N35、E50、E52、K55、L57、Y60、G68、K74、W78、L79、F82、N83、E94，以及包含一种或多种这样的变体ActRIIB多肽的异多聚体复合物。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸29-109至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸25-131至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸20-134至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的A24的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是A24N。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQID NO:2的S26的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是S26T。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N35的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是N35E。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E37的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是E37A。在一些实施方案中，所述取代是E37D。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQID NO:2的L38的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是L38N。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的R40的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是R40A。在一些实施方案中，所述取代是R40K。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的S44的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是S44T。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQID NO:2的L46的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是L46A。例如，在一些实施方案中，所述取代是L46I。例如，在一些实施方案中，所述取代是L46F。例如，在一些实施方案中，所述取代是L46V。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQID NO:2的E50的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是E50K。在一些实施方案中，所述取代是E50L。在一些实施方案中，所述取代是E50P。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是E52A。在一些实施方案中，所述取代是E52D。在一些实施方案中，所述取代是E52G。在一些实施方案中，所述取代是E52H。在一些实施方案中，所述取代是E52K。在一些实施方案中，所述取代是E52N。在一些实施方案中，所述取代是E52P。在一些实施方案中，所述取代是E52R。在一些实施方案中，所述取代是E52S。在一些实施方案中，所述取代是E52T。在一些实施方案中，所述取代是E52Y。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的Q53的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是Q53R。例如，在一些实施方案中，所述取代是Q53K。例如，在一些实施方案中，所述取代是Q53N。例如，在一些实施方案中，所述取代是Q53H。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的D54的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是D54A。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的K55的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是K55A。在一些实施方案中，所述取代是K55E。在一些实施方案中，所述取代是K55D。在一些实施方案中，所述取代是K55R。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的R56的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是R56A。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L57的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是L57R。在一些实施方案中，所述取代是L57E。在一些实施方案中，所述取代是L57I。在一些实施方案中，所述取代是L57T。在一些实施方案中，所述取代是L57V。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的Y60的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是Y60F。在一些实施方案中，所述取代是Y60D。在一些实施方案中，所述取代是Y60K。在一些实施方案中，所述取代是Y60P。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的R64的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是R64K。在一些实施方案中，所述取代是R64N。在一些实施方案中，所述取代是R64A。在一些实施方案中，所述取代是R64H。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N65的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是N65A。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的S67的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是S67N。在一些实施方案中，所述取代是S67T。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是G68R。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的K74的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是K74A。在一些实施方案中，所述取代是K74E。在一些实施方案中，所述取代是K74F。在一些实施方案中，所述取代是K74I。在一些实施方案中，所述取代是K74Y。在一些实施方案中，所述取代是K74R。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的W78的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是W78A。在一些实施方案中，所述取代是W78Y。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是L79D。在一些实施方案中，所述取代不包括在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的酸性氨基酸。在一些实施方案中，所述取代不包括在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的天冬氨酸(D)。在一些实施方案中，所述取代是L79A。在一些实施方案中，所述取代是L79E。在一些实施方案中，所述取代是L79F。在一些实施方案中，所述取代是L79H。在一些实施方案中，所述取代是L79K。在一些实施方案中，所述取代是L79P。在一些实施方案中，所述取代是L79R。在一些实施方案中，所述取代是L79S。在一些实施方案中，所述取代是L79T。在一些实施方案中，所述取代是L79W。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的D80的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是D80A。在一些实施方案中，所述取代是D80F。在一些实施方案中，所述取代是D80K。在一些实施方案中，所述取代是D80G。在一些实施方案中，所述取代是D80M。在一些实施方案中，所述取代是D80I。在一些实施方案中，所述取代是D80N。在一些实施方案中，所述取代是D80R。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是F82I。在一些实施方案中，所述取代是F82K。在一些实施方案中，所述取代是F82A。在一些实施方案中，所述取代是F82W。在一些实施方案中，所述取代是F82D。在一些实施方案中，所述取代是F82Y。在一些实施方案中，所述取代是F82E。在一些实施方案中，所述取代是F82L。在一些实施方案中，所述取代是F82T。在一些实施方案中，所述取代是F82S。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是N83A。在一些实施方案中，所述取代是N83R。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的T93的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是T93D。在一些实施方案中，所述取代是T93E。在一些实施方案中，所述取代是T93H。在一些实施方案中，所述取代是T93G。在一些实施方案中，所述取代是T93K。在一些实施方案中，所述取代是T93P。在一些实施方案中，所述取代是T93R。在一些实施方案中，所述取代是T93S。在一些实施方案中，所述取代是T93Y。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E94的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是E94K。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的Q98的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是Q98D。在一些实施方案中，所述取代是Q98E。在一些实施方案中，所述取代是Q98K。在一些实施方案中，所述取代是Q98R。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的V99的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是V99E。在一些实施方案中，所述取代是V99G。在一些实施方案中，所述取代是V99K。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E105的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是E105N。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E106的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是E106N。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F108的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是F108I。在一些实施方案中，所述取代是F108L。在一些实施方案中，所述取代是F108V。在一些实施方案中，所述取代是F108Y。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E111的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是E111K。在一些实施方案中，所述取代是E111D。在一些实施方案中，所述取代是E111R。在一些实施方案中，所述取代是E111H。在一些实施方案中，所述取代是E111Q。在一些实施方案中，所述取代是E111N。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的R112的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是R112H。在一些实施方案中，所述取代是R112K。在一些实施方案中，所述取代是R112N。在一些实施方案中，所述取代是R112S。在一些实施方案中，所述取代是R112T。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的A119的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是A119P。在一些实施方案中，所述取代是A119V。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G120的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是G120N。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E123的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是E123N。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的P129的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是P129S。在一些实施方案中，所述取代是P129N。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的P130的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是P130A。在一些实施方案中，所述取代是P130R。在一些实施方案中，所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的A132的氨基酸位置处的氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述取代是A132N。
在一些实施方案中，任何本文公开的变体ActRIIB多肽包含在SEQ ID NO:2中选自以下的位置处的取代：A24、S26、N35、E37、L38、R40、S44、L46、E50、E52、Q53、D54、K55、R56、L57、Y60、R64、N65、S67、G68、K74、W78、L79、D80、F82、N83、T93、E94、Q98、V99、E105、E106、F108、E111、R112、A119、G120、E123、P129、P130和A132。在一些实施方案中，任何本文公开的变体ActRIIB多肽包含在SEQ ID NO:2中选自以下的位置处的取代：N35、E50、E52、K55、L57、Y60、G68、K74、W78、L79、F82、N83、E94。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置A24处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置S26处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置N35处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置E37处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置L38处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置R40处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置S44处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置D54处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置K55处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置L46处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置E50处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置E52处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置Q53处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置R56处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置L57处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置Y60处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置R64处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置N65处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置S67处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置G68处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置K74处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置W78处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置L79处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置D80处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置F82处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置N83处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置T93处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置E94处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置Q98处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置V99处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置E105处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置E106处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置F108处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置E111处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置R112处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置A119处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置G120处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置E123处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置P129处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置P130处的取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在关于SEQ ID NO:2的位置A132处的取代。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:31的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQID NO:2的K55的位置处的丙氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:31的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:33的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQID NO:2的K55的位置处的丙氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:33的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:34的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQID NO:2的K55的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:34的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQID NO:2的K55的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:36的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:37的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:37的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:39的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:39的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:40的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:40的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:42的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:42的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:43的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQID NO:2的L79的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:43的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:45的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQID NO:2的L79的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:45的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:336的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:336的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:338的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:338的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:342的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的组氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:342的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:344的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的组氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:344的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:348的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E50的位置处的亮氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:348的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:350的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E50的位置处的亮氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:350的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:354的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的V99的位置处的甘氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:354的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:356的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的V99的位置处的甘氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:356的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:366的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N35的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:366的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:368的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N35的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:368的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:369的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺。在一些实施方案中，SEQ ID NO:369的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:371的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺。在一些实施方案中，SEQ ID NO:371的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:372的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的Y60的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:372的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:374的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的Y60的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:374的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:375的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:375的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:377的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:377的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:378的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的K74的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:378的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:380的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的K74的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:380的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:381的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的W78的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:381的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:383的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的W78的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:383的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:384的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的丙氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:384的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:386的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的丙氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:386的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:387的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:387的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:389的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:389的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:390的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:390的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:392的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:392的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:393的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的色氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:393的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:395的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的色氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:395的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:396的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:396的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:398的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:398的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:399的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:399的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:401的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:401的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:402的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的亮氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:402的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:404的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的亮氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:404的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:405的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:405的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:407的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:407的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:408的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:408的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:410的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:410的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:411的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E94的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:411的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:413的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E94的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:413的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:522的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:522的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:524的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:524的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
在一些实施方案中，任何本文公开的变体ActRIIB多肽包含任何本文公开的氨基酸取代中的至少2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在一些实施方案中，任何本文公开的变体ActRIIB多肽包含任何本文公开的氨基酸取代中的2个。在一些实施方案中，任何本文公开的变体ActRIIB多肽包含任何本文公开的氨基酸取代中的3个。在一些实施方案中，任何本文公开的变体ActRIIB多肽包含任何本文公开的氨基酸取代中的4个。在一些实施方案中，任何本文公开的变体ActRIIB多肽包含任何本文公开的氨基酸取代中的5个。在一些实施方案中，任何本文公开的变体ActRIIB多肽包含任何本文公开的氨基酸取代中的6个。在一些实施方案中，任何本文公开的变体ActRIIB多肽包含任何本文公开的氨基酸取代中的7个。在一些实施方案中，任何本文公开的变体ActRIIB多肽包含任何本文公开的氨基酸取代中的8个。在一些实施方案中，任何本文公开的变体ActRIIB多肽包含任何本文公开的氨基酸取代中的9个。在一些实施方案中，任何本文公开的变体ActRIIB多肽包含任何本文公开的氨基酸取代中的10个。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，如与SEQ ID NO:2的参考氨基酸序列相比，其包含两个或更多个氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含A24N取代和K74A取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L79P取代和K74A取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含P129S取代和P130A取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L38N取代和L79R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含F82I取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含F82K取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含F82T取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L79H取代和F82K取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L79H取代和F82I取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含F82D取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含F82E取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L79F取代和F82D取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L79F取代和F82T取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含E52D取代和F82D取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含E52D取代和F82T取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L57R取代和F82D取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L57R取代和F82T取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含F82I取代和E94K取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含F82S取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L57R取代和F82S取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含K74A取代和L79P取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含K55A取代和F82I取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L79K取代和F82K取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含F82W取代和N83A取代。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:276的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:276的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:278的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:278的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:279的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的赖氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:279的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:332的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的赖氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:332的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:333的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:333的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:335的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:335的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:339的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的组氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的组氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:339的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:341的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的组氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的组氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:341的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:345的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的组氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的组氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:345的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:347的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的组氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的组氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:347的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:351的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L38的位置处的天冬酰胺。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L38的位置处的天冬酰胺和在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:351的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:353的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L38的位置处的天冬酰胺。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L38的位置处的天冬酰胺和在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:353的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:414的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:414的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:416的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:416的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:417的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:417的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:419的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:419的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:420的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:420的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:422的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:422的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:423的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:423的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:425的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:425的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:426的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:426的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:428的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:428的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:429的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苯丙氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苯丙氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:429的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:431的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苯丙氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苯丙氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:431的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:432的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苯丙氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苯丙氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:432的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:434的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苯丙氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苯丙氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:434的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:435的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:435的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:437的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:437的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:438的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:438的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:440的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:440的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:441的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:441的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:443的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:443的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:444的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的色氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的丙氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的色氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的丙氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:444的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:446的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的色氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的丙氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的色氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的丙氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:446的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:447的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E94的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的E94的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:447的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:449的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E94的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的E94的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:449的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，如与SEQ ID NO:2的参考氨基酸序列相比，其包含三个或更多个氨基酸取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含G68R取代、F82S取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含G68R取代、W78Y取代和F82Y取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含E52D取代、F82D取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含E52Y取代、F82D取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含E52D取代、F82E取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含E52D取代、F82T取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含E52N取代、F82I取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含E52N取代、F82Y取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含E50L取代、F82D取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L57I取代、F82D取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L57V取代、F82D取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L57R取代、F82D取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L57E取代、F82E取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L57R取代、F82E取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L57I取代、F82E取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L57R取代、F82L取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L57T取代、F82Y取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含L57V取代、F82Y取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽可以包含任何上文变体ActRIIB多肽中所述的氨基酸取代中的至少两个。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:450的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E50的位置处的亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E50的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:450的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:452的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E50的位置处的亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E50的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:452的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:453的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:453的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:455的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:455的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:456的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:456的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:458的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:458的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:459的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:459的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:461的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:461的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:462的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:462的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:464的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:464的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:465的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:465的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:467的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:467的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:468的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的酪氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:468的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:470的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的酪氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:470的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:471的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的谷氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:471的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:473的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的谷氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:473的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:474的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的异亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:474的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:476的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的异亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:476的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:477的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的异亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:477的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:479的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的异亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:479的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:480的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:480的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:482的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:482的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:483的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:483的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:485的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:485的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:486的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的亮氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:486的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:488的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的亮氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:488的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:489的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:489的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:491的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:491的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:492的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的缬氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:492的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:494的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的缬氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:494的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:495的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的缬氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:495的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:497的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的缬氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:497的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:498的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的W78的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的W78的位置处的酪氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:498的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:500的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的W78的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的W78的位置处的酪氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:500的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:501的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:501的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:503的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:503的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，如与SEQ ID NO:2的参考氨基酸序列相比，其包含四个或更多个氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含G68R取代、L79E取代、F82Y取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含G68R取代、L79E取代、F82T取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含G68R取代、L79T取代、F82T取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含E52N取代、G68R取代、F82Y取代和N83R取代。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽可以包含任何上文变体ActRIIB多肽中所述的氨基酸取代中的至少两个。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽可以包含任何上文变体ActRIIB多肽中所述的氨基酸取代中的至少三个。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:504的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸以及在对应于SEQID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:504的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:506的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸以及在对应于SEQID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:506的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:507的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的谷氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:507的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:509的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的谷氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:509的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:510的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的谷氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:510的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:512的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的谷氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:512的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:513的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:513的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:515的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:515的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与包含未修饰的ActRIIB细胞外结构域的Fc融合蛋白相比，变体ActRIIB-Fc蛋白展示变化的配体结合谱。因此，在本公开文本的一些实施方案中，在这样的选择性拮抗作用谱有利的应用中，变体ActRIIB蛋白比未修饰的ActRIIB更有用。例如，在一些实施方案中，可能期望使用本公开文本的ActRIIB变体以保留激活素A、激活素B、GDF8、GDF11、BMP6和/或BMP10中的一种或多种的拮抗作用，同时降低BMP9的拮抗作用。
在一些实施方案中，本公开文本的ActRIIB变体的结合谱与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的配体结合谱不同。在一些实施方案中，如本文所用的配体结合的“显著降低”是指WT的配体结合的超过30倍的降低。在某些实施方案中，如本文所用的配体结合的“显著降低”是指显著到检测不到结合的降低。在一些实施方案中，如本文所用的配体结合的“适度降低”是指WT的配体结合的10倍与30倍之间的降低。在一些实施方案中，如本文所用的配体结合的“轻微降低”是指WT的配体结合的3倍与10倍之间的降低。在一些实施方案中，如本文所用的“接近WT水平”的配体结合是指WT的配体结合的3倍或更小的降低。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的显著降低、GDF11结合的显著降低、无检测到的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素B结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E50、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的显著降低、GDF11结合的显著降低、无检测到的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E50、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现接近WT水平的激活素B结合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:437的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸和在对应于SEQ IDNO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:437的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:452的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E50的位置处的亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E50的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:452的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的显著降低、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的略微增加以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素B结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L79和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的显著降低、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的略微增加以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L79和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现接近WT水平的激活素B结合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQID NO:434的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苯丙氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苯丙氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:434的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的显著降低、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的轻微降低、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的轻微降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素B结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L79处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的显著降低、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的轻微降低、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的轻微降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L79处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现接近WT水平的激活素B结合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:392的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:392的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素B结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现接近WT水平的激活素B结合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:488的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸、在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的亮氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:488的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素B结合的适度降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现激活素B结合的适度降低。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:494的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的缬氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:494的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的显著降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素B结合的适度降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的显著降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现激活素B结合的适度降低。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:482的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:482的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:485的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:485的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素B结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现接近WT水平的激活素B结合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:443的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸和在对应于SEQ IDNO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:443的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:467的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:467的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、最小BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素B结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、最小BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现接近WT水平的激活素B结合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:491的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:491的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、最小BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素B结合的适度降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、最小BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现激活素B结合的适度降低。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:455的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的E52的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:455的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、最小BMP10结合、BMP6结合的适度降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素B结合的适度降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、最小BMP10结合、BMP6结合的适度降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现激活素B结合的适度降低。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:476的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L57的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的异亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQID NO:476的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、BMP10结合的适度降低、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素B结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、BMP10结合的适度降低、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现接近WT水平的激活素B结合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:461的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸、在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的苏氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:461的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、BMP10结合的适度降低、最小BMP6结合以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素B结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、BMP10结合的适度降低、最小BMP6结合以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现接近WT水平的激活素B结合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:464的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:464的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、BMP10结合的适度降低、最小BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素B结合的适度降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、BMP10结合的适度降低、最小BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现激活素B结合的适度降低。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:470的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的E52的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的酪氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:470的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的适度降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素B结合的轻微降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52、L57、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的适度降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52、L57、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现激活素B结合的轻微降低。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:440的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸和在对应于SEQID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:440的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:458的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:458的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:479的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQID NO:2的L57的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的异亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ IDNO:479的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:473的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的谷氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:473的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的适度降低、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的略微增加以及接近WT水平的BMP9结合。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素B结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L79处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的适度降低、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的略微增加以及接近WT水平的BMP9结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L79处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现接近WT水平的激活素B结合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:395的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的色氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:395的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的适度降低、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的略微增加以及接近WT水平的BMP9结合。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素B结合的适度降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L79和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的适度降低、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的略微增加以及接近WT水平的BMP9结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L79和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现激活素B结合的适度降低。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:431的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苯丙氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的苯丙氨酸和在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:431的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素A结合的轻微降低、GDF11结合的适度降低、BMP10结合的适度降低、BMP6结合的显著降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素B结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示激活素A结合的轻微降低、GDF11结合的适度降低、BMP10结合的适度降低、BMP6结合的显著降低以及BMP9结合的显著降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57、F82和/或N83中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现接近WT水平的激活素B结合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:497的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的缬氨酸、在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的酪氨酸以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:497的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的适度降低、BMP6结合的适度降低以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素B结合的轻微降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的适度降低、BMP6结合的适度降低以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现激活素B结合的轻微降低。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ IDNO:422的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:422的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、与BMP6的最小结合以及BMP9结合的轻微降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素B结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E94处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、与BMP6的最小结合以及BMP9结合的轻微降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E94处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现接近WT水平的激活素B结合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:413的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E94的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:413的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的轻微降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素B结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的轻微降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现接近WT水平的激活素B结合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:398的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:398的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:401的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:401的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:407的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:407的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:404的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的亮氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:404的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:419的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:419的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、接近WT水平的BMP6结合以及接近WT水平的BMP9结合。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素B结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、接近WT水平的BMP6结合以及接近WT水平的BMP9结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现接近WT水平的激活素B结合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:371的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬酰胺。在一些实施方案中，SEQ ID NO:371的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:410的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的酪氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:410的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素B结合的轻微降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置E52和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现激活素B结合的轻微降低。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:416的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E52的位置处的天冬氨酸和在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的天冬氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:416的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的轻微降低、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素B结合的轻微降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的轻微降低、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现激活素B结合的轻微降低。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:428的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸和在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:428的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的轻微降低、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素B结合。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的轻微降低、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置L57和/或F82中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现接近WT水平的激活素B结合。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:425的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L57的位置处的精氨酸和在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:425的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，本公开文本的ActRIIB变体展示激活素B结合的轻微降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置F82和/或E94中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的适度降低。在一些实施方案中，ActRIIB变体包含在位置F82和/或E94中的任一个处的突变，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，WT)的结合谱相比，所述变体展现激活素B结合的轻微降低。在某些方面，本公开文本涉及一种变体ActRIIB多肽，其包含与SEQ ID NO:449的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E94的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的异亮氨酸和在对应于SEQ IDNO:2的E94的位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:449的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
在某些实施方案中，本公开文本考虑变体ActRIIB多肽的其他突变，以改变所述多肽的糖基化。变体ActRIIB多肽中的示例性糖基化位点显示于图4中。可以选择这样的突变以引入或消除一个或多个糖基化位点，如O-连接或N-连接糖基化位点。天冬酰胺连接的糖基化识别位点通常包含由适当的细胞糖基化酶特异性识别的三肽序列，即天冬酰胺-X-苏氨酸(其中“X”是任何氨基酸)。也可以通过野生型ActRIIB多肽的序列中一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基的添加或取代来进行改变(对于O-连接的糖基化位点)。在糖基化识别位点的第一或第三氨基酸位置中的一个或两个处的多种氨基酸取代或缺失(和/或在第二位置处的氨基酸缺失)导致在修饰的三肽序列处的非糖基化。增加变体ActRIIB多肽上的碳水化合物部分的数量的另一种手段是通过将糖苷化学或酶促偶联至所述变体ActRIIB多肽。根据所用的偶联模式，可以使一种或多种糖附接至(a)精氨酸和组氨酸；(b)游离羧基；(c)游离巯基，如半胱氨酸的游离巯基；(d)游离羟基，如丝氨酸、苏氨酸或羟基脯氨酸的游离羟基；(e)芳族残基，如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸的芳族残基；或(f)谷氨酰胺的酰胺基。这些方法描述于1987年9月11日公开的WO 87/05330以及Aplin和Wriston(1981)CRCCrit.Rev.Biochem.,第259-306页中，所述参考文献通过引用并入本文。变体ActRIIB多肽上存在的一个或多个碳水化合物部分的去除可以通过化学方式和/或酶促方式来完成。化学去糖基化可以涉及例如使变体ActRIIB多肽暴露于化合物三氟甲磺酸或等效化合物。此处理导致除了连接糖(N-乙酰葡糖胺或N-乙酰半乳糖胺)外大部分或所有糖的切割，同时氨基酸序列保持完整。化学去糖基化进一步描述于以下文献中：Hakimuddin等人(1987)Arch.Biochem.Biophys.259:52以及Edge等人(1981)Anal.Biochem.118:131。变体ActRIIB多肽上的碳水化合物部分的酶促切割可以通过使用多种内切糖苷酶和外切糖苷酶来实现，如Thotakura等人(1987)Meth.Enzymol.138:350所述。适当时，可以根据所用表达系统的类型调节变体ActRIIB多肽的序列，因为哺乳动物、酵母、昆虫和植物细胞都可以引入可能受所述肽的氨基酸序列影响的不同糖基化模式。一般来说，用于人的变体ActRIIB蛋白将在提供适当糖基化的哺乳动物细胞系(如HEK293或CHO细胞系)中表达，但是预期其他哺乳动物表达细胞系也是有用的。
本公开文本还考虑一种生成变体、特别是ActRIIB多肽的组合变体的集合(包括任选地截短变体)的方法；组合突变体的库对于鉴定功能性变体序列尤其有用。筛选这样的组合文库的目的可能是生成例如具有改变的特性(如改变的药代动力学或改变的配体结合)的变体ActRIIB多肽。下文提供多种筛选测定，并且可以使用这样的测定来评价变体。例如，可以针对与ActRIIB多肽结合，以防止ActRIIB配体与ActRIIB多肽结合的能力来筛选变体ActRIIB多肽。
也可以在基于细胞的测定或体内测定中测试ActRIIB多肽或其变体的活性。例如，可以评估变体ActRIIB多肽对成骨细胞或前体中参与骨产生的基因的表达的作用。如果需要，这可以在一种或多种重组ActRIIB配体蛋白(例如BMP7)的存在下进行，并且可以转染细胞以产生ActRIIB多肽和/或其变体，以及任选的ActRIIB配体。同样地，可以将ActRIIB多肽施用至小鼠或其他动物，并且可以评估一种或多种骨特性，如密度或体积。还可以评价骨折的愈合率。类似地，可以例如通过如下文描述的测定在肌肉细胞、脂肪细胞和神经元细胞中测试ActRIIB多肽或其变体的活性对这些细胞的生长的任何作用。此类测定是本领域中熟知的和常规的。SMAD反应性报告基因可以用于此类细胞系中以监测对下游信号传导的影响。
可以生成组合衍生的变体，所述变体相对于天然存在的ActRIIB多肽具有选择性效力。此类变体蛋白在从重组DNA构建体表达时可以用于基因治疗方案中。同样地，诱变可以产生具有与相应的野生型ActRIIB多肽显著不同的细胞内半衰期的变体。例如，改变的蛋白质可以变得对蛋白水解降解或导致天然ActRIIB多肽的破坏或以其他方式失活的其他过程更稳定或更不稳定。此类变体和编码它们的基因可以用于通过调节ActRIIB多肽的半衰期来改变ActRIIB多肽水平。例如，短半衰期可以产生更短暂的生物学效应，并且当诱导型表达系统的一部分时，可以允许更严格地控制细胞内的重组ActRIIB多肽水平。
在某些实施方案中，除了在变体ActRIIB多肽中天然存在的任何修饰外，本公开文本的变体ActRIIB多肽还可以包含翻译后修饰。这样的修饰包括但不限于乙酰化、羧基化、糖基化、磷酸化、脂化和酰化。因此，修饰的变体ActRIIB多肽可以含有非氨基酸元件，如聚乙二醇、脂质、多糖或单糖和磷酸盐。这样的非氨基酸元件对变体ActRIIB多肽的功能性的作用可以如本文针对其他变体ActRIIB多肽所述来测试。当通过切割变体ActRIIB多肽的新生形式在细胞中产生变体ActRIIB多肽时，翻译后加工对于蛋白质的正确折叠和/或功能也可能是重要的。不同的细胞(如CHO、HeLa、MDCK、293、WI38、NIH-3T3或HEK293)具有用于这样的翻译后活性的特定细胞机构和特有机制，并且可以进行选择以确保变体ActRIIB多肽的正确修饰和加工。
在某些方面，变体ActRIIB多肽包括具有变体ActRIIB多肽的至少一部分和一个或多个融合结构域的融合蛋白。这样的融合结构域的熟知的例子包括但不限于多组氨酸、Glu-Glu、谷胱甘肽S转移酶(GST)、硫氧还蛋白、蛋白A、蛋白G、免疫球蛋白重链恒定区(例如，Fc)、麦芽糖结合蛋白(MBP)或人血清白蛋白。可以选择融合结构域以赋予所需的特性。例如，一些融合结构域特别适用于通过亲和色谱分离融合蛋白。出于亲和纯化的目的，使用亲和色谱的相关基质，如谷胱甘肽、淀粉酶和镍或钴缀合的树脂。许多这样的基质可以“试剂盒”形式获得，如可与(HIS6)融合配偶体一起使用的Pharmacia GST纯化系统和QIAexpressTM系统(Qiagen)。作为另一个例子，可以选择融合结构域以便于检测变体ActRIIB多肽。这样的检测结构域的例子包括各种荧光蛋白(例如，GFP)以及通常是可获得特异性抗体的短肽序列的“表位标签”。易于获得特异性单克隆抗体的公知表位标签包括FLAG、流感病毒血凝素(HA)和c-myc标签。在一些情况下，融合结构域具有蛋白酶切割位点，如用于因子Xa或凝血酶的切割位点，其允许相关蛋白酶部分消化融合蛋白，从而从中释放重组蛋白。然后可以通过后续色谱分离使释放的蛋白质与融合结构域分离。在某些优选实施方案中，使变体ActRIIB多肽与在体内稳定变体ActRIIB多肽的结构域(“稳定剂”结构域)融合。“稳定”是指增加血清半衰期的任何物质，无论这是因为破坏减少、肾脏清除率降低还是因为其他药代动力学效应。已知与免疫球蛋白Fc部分的融合可赋予众多种蛋白质期望的药代动力学特性。同样地，与人血清白蛋白融合可以赋予期望的特性。可以选择的融合结构域的其他类型包括多聚化(例如，二聚化、四聚化)结构域和功能结构域(赋予另外的生物学功能，如进一步刺激肌肉生长)。
在某些方面，本文公开的多肽可以形成同聚变体ActRIIB多肽。在一些实施方案中，蛋白质复合物中的每条融合多肽链包含与所述复合物中的任何其他这样的链相同的变体ActRIIB多肽。在某些方面，本文公开的多肽可以形成异多聚体，其包含与至少一种未修饰的ActRIIB多肽或与第一变体ActRIIB多肽不同的至少一种变体ActRIIB多肽共价或非共价缔合的至少一种变体ActRIIB多肽。例如，在一些实施方案中，本公开文本提供一种ActRIIB异多聚体(例如，二聚体)，其中所述异多聚体包含：a)包含任何本文公开的氨基酸取代中的一个或多个的第一变体ActRIIB多肽，其多聚化(例如，二聚化)，以及b)具有与第一ActRIIB多肽不同的氨基酸取代或不同的氨基酸取代组合的第二变体ActRIIB多肽。
在某些方面，本文公开的多肽可以形成异多聚体，其包含与至少一种ALK4多肽(包括其片段和变体)共价或非共价缔合的至少一种变体ActRIIB多肽。在一些实施方案中，本文公开的多肽可以形成异多聚体，其包含与至少一种ALK7多肽(包括其片段和变体)共价或非共价缔合的至少一种变体ActRIIB多肽。在一些实施方案中，本文公开的异聚多肽形成异二聚体，但是也包括更高阶的异多聚体，例如但不限于异三聚体、异四聚体和其他寡聚结构。
在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽包含至少一个多聚化结构域。如本文所公开的，术语“多聚化结构域”是指促进至少第一多肽与至少第二多肽之间的共价或非共价相互作用的氨基酸或氨基酸序列。本文公开的变体ActRIIB多肽可以与多聚化结构域共价或非共价接合。优选地，多聚化结构域促进第一多肽(例如，变体ActRIIB多肽)与第二多肽(例如，ALK4多肽或ALK7多肽)之间的相互作用以促进异多聚体形成(例如，异二聚体形成)，并且任选地妨碍或以其他方式不利于同多聚体形成(例如，同二聚体形成)，从而增加所需异多聚体的产量(参见例如，图1B)。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽形成同二聚体。在一些实施方案中，变体ActRIIB多肽可以通过共价相互作用形成异二聚体。在一些实施方案中，变体ActRIIB多肽可以通过非共价相互作用形成异二聚体。在一些实施方案中，变体ActRIIB多肽可以通过共价和非共价相互作用二者形成异二聚体。
在某些方面，变体ActRIIB多肽(包括其同多聚体(例如，同二聚体))与一种或多种TGF-β超家族配体结合。在一些实施方案中，变体ActRIIB多肽(包括其同多聚体)以至少1x10-7M的KD与一种或多种TGF-β超家族配体结合。在一些实施方案中，所述一种或多种TGF-β超家族配体选自：激活素A、激活素B、GDF8、GDF11和BMP10。
在某些方面，变体ActRIIB多肽(包括其同多聚体(例如同二聚体)抑制一种或多种TGF-β超家族配体。在一些实施方案中，变体ActRIIB多肽(包括其同多聚体)抑制一种或多种TGF-β超家族配体的信号传导。在一些实施方案中，变体ActRIIB多肽(包括其同多聚体)抑制一种或多种TGF-β超家族配体的Smad信号传导。在一些实施方案中，变体ActRIIB多肽(包括其同多聚体)在基于细胞的测定中抑制一种或多种TGF-β超家族配体的信号传导。在一些实施方案中，变体ActRIIB多肽(包括其同多聚体)抑制选自以下的一种或多种TGF-β超家族配体：激活素A、激活素B、GDF8、GDF11和BMP10。
在某些实施方案中，本公开文本涉及一种包含第一变体ActRIIB-Fc融合蛋白和第二变体ActRIIB-Fc融合蛋白的异多聚体，其中所述第一变体ActRIIB多肽不包含所述第二变体ActRIIB多肽的氨基酸序列。在一些实施方案中，ActRIIB-Fc:ActRIIB-Fc异多聚体与一种或多种TGF-β超家族配体(如本文所述的那些)结合。在一些实施方案中，ActRIIB-Fc:ActRIIB-Fc异多聚体抑制一种或多种TGF-β超家族配体(如本文所述的那些)的信号传导。在一些实施方案中，ActRIIB-Fc:ActRIIB-Fc异多聚体是异二聚体。
在一些实施方案中，第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的N35、E50、E52、K55、L57、Y60、G68、K74、W78、L79、F82、N83和E94。在一些实施方案中，第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78、D80和F82。在一些实施方案中，第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L38N、E50L、E52N、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79F、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、K74A、R64K、R64N、K74A、L79A、L79D、L79E、L79P、P129S、P130A、P130R、E37A、R40A、D54A、R56A、K74F、K74I、K74Y、W78A、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80M、D80N、D80R和F82A。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：L38N、E50L、E52N、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79F、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。在一些实施方案中，第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代A24、S26、N35、E37、L38、R40、S44、L46、E50、E52、Q53、D54、K55、R56、L57、Y60、R64、N65、S67、G68、K74、W78、L79、D80、F82、N83、T93、E94、Q98、V99、E105、E106、F108、E111、R112、A119、G120、E123、P129、P130和A132。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78、D80和F82。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、K74A、R64K、R64N、K74A、L79A、L79D、L79E、L79P、P129S、P130A、P130R、E37A、R40A、D54A、R56A、K74F、K74I、K74Y、W78A、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80M、D80N、D80R和F82A。在一些实施方案中，第二ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L38N、E50L、E52N、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79F、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：L38N、E50L、E52N、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79F、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。在一些实施方案中，第二ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代A24、S26、N35、E37、L38、R40、S44、L46、E50、E52、Q53、D54、K55、R56、L57、Y60、R64、N65、S67、G68、K74、W78、L79、D80、F82、N83、T93、E94、Q98、V99、E105、E106、F108、E111、R112、A119、G120、E123、P129、P130和A132。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽和/或所述第二ActRIIB多肽包含促进异多聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽和/或所述第二ActRIIB多肽包含抑制异多聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述异多聚体是异二聚体。
在某些方面，本公开文本涉及一种异多聚体，其包含与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的第一ActRIIB多肽，以及与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的第二ActRIIB多肽，其中所述第一ActRIIB多肽不包含所述第二ActRIIB多肽的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的55的氨基酸位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽不包含在对应于SEQ ID NO:2的55的氨基酸位置处的谷氨酸。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的55的氨基酸位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的F82、L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78和D80。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、K74A、R64K、R64N、K74A、L79A、L79D、L79E、L79P、P129S、P130A、P130R、E37A、R40A、D54A、R56A、K74F、K74I、K74Y、W78A、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80M、D80N、D80R和F82A。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78、D80和F82。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、K74A、R64K、R64N、K74A、L79A、L79D、L79E、L79P、P129S、P130A、P130R、E37A、R40A、D54A、R56A、K74F、K74I、K74Y、W78A、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80M、D80N、D80R和F82A。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的A24、S26、N35、E37、L38、R40、S44、L46、E50、E52、Q53、D54、K55、R56、L57、Y60、R64、N65、S67、G68、K74、W78、L79、D80、F82、N83、T93、E94、Q98、V99、E105、E106、F108、E111、R112、A119、G120、E123、P129、P130和A132。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78、D80和F82。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽和/或所述第二ActRIIB多肽包含促进异多聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽和/或所述第二ActRIIB多肽包含抑制异多聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述异多聚体是异二聚体。
在某些方面，本公开文本涉及一种异多聚体，其包含与SEQ ID NO:39的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的第一ActRIIB多肽，以及与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的第二ActRIIB多肽，其中所述第一ActRIIB多肽不包含所述第二ActRIIB多肽的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的82的氨基酸位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽不包含在对应于SEQ ID NO:2的82的氨基酸位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的82的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78以及D80。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、K74A、R64K、R64N、K74A、L79A、L79D、L79E、L79P、P129S、P130A、P130R、E37A、R40A、D54A、R56A、K74F、K74I、K74Y、W78A、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80M、D80N和D80R。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78以及D80。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、K74A、R64K、R64N、K74A、L79A、L79D、L79E、L79P、P129S、P130A、P130R、E37A、R40A、D54A、R56A、K74F、K74I、K74Y、W78A、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80M、D80N和D80R。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的A24、S26、N35、E37、L38、R40、S44、L46、E50、E52、Q53、D54、K55、R56、L57、Y60、R64、N65、S67、G68、K74、W78、L79、D80、F82、N83、T93、E94、Q98、V99、E105、E106、F108、E111、R112、A119、G120、E123、P129、P130和A132。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78、D80和F82。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽和/或所述第二ActRIIB多肽包含促进异多聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽和/或所述第二ActRIIB多肽包含抑制异多聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述异多聚体是异二聚体。
在某些方面，本公开文本涉及一种异多聚体，其包含与SEQ ID NO:42的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的第一ActRIIB多肽，以及与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的第二ActRIIB多肽，其中所述第一ActRIIB多肽不包含所述第二ActRIIB多肽的氨基酸序列。在一些实施方案中，第一ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的82的氨基酸位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽不包含在对应于SEQ ID NO:2的82的氨基酸位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的82的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78以及D80。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、K74A、R64K、R64N、K74A、L79A、L79D、L79E、L79P、P129S、P130A、P130R、E37A、R40A、D54A、R56A、K74F、K74I、K74Y、W78A、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80M、D80N和D80R。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78以及D80。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、K74A、R64K、R64N、K74A、L79A、L79D、L79E、L79P、P129S、P130A、P130R、E37A、R40A、D54A、R56A、K74F、K74I、K74Y、W78A、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80M、D80N和D80R。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQID NO:2的A24、S26、N35、E37、L38、R40、S44、L46、E50、E52、Q53、D54、K55、R56、L57、Y60、R64、N65、S67、G68、K74、W78、L79、D80、F82、N83、T93、E94、Q98、V99、E105、E106、F108、E111、R112、A119、G120、E123、P129、P130和A132。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78、D80和F82。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、
111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽和/或所述第二ActRIIB多肽包含促进异多聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽和/或所述第二ActRIIB多肽包含抑制异多聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述异多聚体是异二聚体。
在某些方面，本公开文本涉及一种异多聚体，其包含与SEQ ID NO:524的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的第一ActRIIB多肽，以及与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的第二ActRIIB多肽，其中所述第一ActRIIB多肽不包含所述第二ActRIIB多肽的氨基酸序列。在一些实施方案中，第一ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的82的氨基酸位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽不包含在对应于SEQ ID NO:2的82的氨基酸位置处的赖氨酸。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的82的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78以及D80。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、K74A、R64K、R64N、K74A、L79A、L79D、L79E、L79P、P129S、P130A、P130R、E37A、R40A、D54A、R56A、K74F、K74I、K74Y、W78A、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80M、D80N和D80R。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78以及D80。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、K74A、R64K、R64N、K74A、L79A、L79D、L79E、L79P、P129S、P130A、P130R、E37A、R40A、D54A、R56A、K74F、K74I、K74Y、W78A、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80M、D80N和D80R。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQID NO:2的A24、S26、N35、E37、L38、R40、S44、L46、E50、E52、Q53、D54、K55、R56、L57、Y60、R64、N65、S67、G68、K74、W78、L79、D80、F82、N83、T93、E94、Q98、V99、E105、E106、F108、E111、R112、A119、G120、E123、P129、P130和A132。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78、D80和F82。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽和/或所述第二ActRIIB多肽包含促进异多聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽和/或所述第二ActRIIB多肽包含抑制异多聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述异多聚体是异二聚体。
在某些方面，本公开文本涉及一种异多聚体，其包含与SEQ ID NO:45的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的第一ActRIIB多肽，以及与SEQ ID NO:48的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的第二ActRIIB多肽，其中所述第一ActRIIB多肽不包含所述第二ActRIIB多肽的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含对应于SEQ ID NO:2的79的酸性氨基酸位置。在一些实施方案中，所述酸性氨基酸是天冬氨酸。在一些实施方案中，所述酸性氨基酸是谷氨酸。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽不包含在对应于SEQ ID NO:2的79的氨基酸位置处的酸性酸(例如，天冬氨酸或谷氨酸)。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于SEQID NO:2的79的氨基酸位置处的亮氨酸。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的F82、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78、D80以及F82。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、K74A、R64K、R64N、K74A、L79P、P129S、P130A、P130R、E37A、R40A、D54A、R56A、K74F、K74I、K74Y、W78A、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80M、D80N、D80R和F82A。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的F82、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78、D80以及F82。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、K74A、R64K、R64N、K74A、P129S、P130A、P130R、E37A、R40A、D54A、R56A、K74F、K74I、K74Y、W78A、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80M、D80N、D80R和F82A。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQID NO:2的A24、S26、N35、E37、L38、R40、S44、L46、E50、E52、Q53、D54、K55、R56、L57、Y60、R64、N65、S67、G68、K74、W78、L79、D80、F82、N83、T93、E94、Q98、V99、E105、E106、F108、E111、R112、A119、G120、E123、P129、P130和A132。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78、D80和F82。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽和/或所述第二ActRIIB多肽包含促进异多聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽和/或所述第二ActRIIB多肽包含抑制异多聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述异多聚体是异二聚体。
在某些方面，本公开文本涉及一种异多聚体，其包含与SEQ ID NO:50的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的第一ActRIIB多肽，以及与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的第二ActRIIB多肽，其中所述第一ActRIIB多肽不包含所述第二ActRIIB多肽的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含对应于SEQ ID NO:2的79的酸性氨基酸位置。在一些实施方案中，所述酸性氨基酸是天冬氨酸。在一些实施方案中，所述酸性氨基酸是谷氨酸。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽不包含在对应于SEQ ID NO:2的79的氨基酸位置处的酸性酸(例如，天冬氨酸或谷氨酸)。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于SEQID NO:2的79的氨基酸位置处的亮氨酸。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的F82、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78、D80以及F82。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、K74A、R64K、R64N、K74A、L79P、P129S、P130A、P130R、E37A、R40A、D54A、R56A、K74F、K74I、K74Y、W78A、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80M、D80N、D80R和F82A。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的F82、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78、D80以及F82。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、K74A、R64K、R64N、K74A、P129S、P130A、P130R、E37A、R40A、D54A、R56A、K74F、K74I、K74Y、W78A、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80M、D80N、D80R和F82A。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQID NO:2的A24、S26、N35、E37、L38、R40、S44、L46、E50、E52、Q53、D54、K55、R56、L57、Y60、R64、N65、S67、G68、K74、W78、L79、D80、F82、N83、T93、E94、Q98、V99、E105、E106、F108、E111、R112、A119、G120、E123、P129、P130和A132。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。在一些实施方案中，所述第二ActRIIB多肽包含在对应于以下中的任一个的氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：SEQ ID NO:2的L79、A24、K74、R64、P129、P130、E37、R40、D54、R56、W78、D80和F82。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽和/或所述第二ActRIIB多肽包含促进异多聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述第一ActRIIB多肽和/或所述第二ActRIIB多肽包含抑制异多聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述异多聚体是异二聚体。在某些实施方案中，本公开文本涉及一种包含第一变体ActRIIB-Fc融合蛋白和第二变体ActRIIB-Fc融合蛋白的异多聚体，其中所述第二变体ActRIIB-Fc融合蛋白与所述第一多肽中存在者不同。在一些实施方案中，ActRIIB-Fc:ActRIIB-Fc异多聚体与一种或多种TGF-β超家族配体(如本文所述的那些)结合。在一些实施方案中，ActRIIB-Fc:ActRIIB-Fc异多聚体抑制一种或多种TGF-β超家族配体(如本文所述的那些)的信号传导。在一些实施方案中，ActRIIB-Fc:ActRIIB-Fc异多聚体是异二聚体。
在某些实施方案中，本公开文本涉及一种包含至少一种ALK7-Fc融合蛋白和至少一种ActRIIB-Fc融合蛋白的异多聚体。在一些实施方案中，ALK7-Fc:ActRIIB-Fc异多聚体与一种或多种TGF-β超家族配体(如本文所述的那些)结合。在一些实施方案中，ALK7-Fc:ActRIIB-Fc异多聚体抑制一种或多种TGF-β超家族配体(如本文所述的那些)的信号传导。在一些实施方案中，ALK7-Fc:ActRIIB-Fc异多聚体是异二聚体。
在某些实施方案中，本公开文本涉及一种包含至少一种ALK4-Fc融合蛋白和至少一种ActRIIB-Fc融合蛋白的异多聚体。在一些实施方案中，ALK4-Fc:ActRIIB-Fc异多聚体与一种或多种TGF-β超家族配体(如本文所述的那些)结合。在一些实施方案中，ALK4-Fc:ActRIIB-Fc异多聚体抑制一种或多种TGF-β超家族配体(如本文所述的那些)的信号传导。在一些实施方案中，ALK4-Fc:ActRIIB-Fc异多聚体是异二聚体。
在某些方面，本公开文本涉及包含ALK4多肽的蛋白质复合物。如本文所用，术语“ALK4”是指来自任何物种的激活素受体样激酶-4蛋白的家族以及通过诱变或其他修饰源自此类ALK4蛋白的变体。本文中对ALK4的提及应理解为对当前鉴定的形式中的任一种的提及。ALK4家族的成员通常是由具有富半胱氨酸区域的配体结合细胞外结构域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域构成的跨膜蛋白。
术语“ALK4多肽”包括包含ALK4家族成员的任何天然存在的多肽以及其保留有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和肽模拟物形式)的多肽。
人ALK4前体蛋白序列(NCBI Ref Seq NP_004293)如下：
Figure GDA0004158550890001051
Figure GDA0004158550890001061
信号肽由单下划线指示，并且细胞外结构域以粗体字体指示。
加工的细胞外人ALK4多肽序列如下：
SGPRGVQALLCACTSCLQANYTCETDGACMVSIFNLDGMEHHVRTCIPKVELVPAGKPFYCLSSEDLRNTHCCYTDYCNRIDLRVPSGHLKEPEHPSMWGPVE(SEQ ID NO:86)
编码ALK4前体蛋白的核酸序列显示于SEQ ID NO:221中，对应于Genbank参考序列NM_004302.4的核苷酸78-1592。编码细胞外ALK4多肽的核酸序列显示于SEQ ID NO:222中。
人ALK4前体蛋白序列的替代异形体，异形体C(NCBI RefSeq NP_064733.3)如下：
Figure GDA0004158550890001062
信号肽由单下划线指示，并且细胞外结构域以粗体字体指示。
加工的细胞外ALK4多肽序列(异形体C)如下：
SGPRGVQALLCACTSCLQANYTCETDGACMVSIFNLDGMEHHVRTCIPKVELVPAGKPFYCLSSEDLRNTHCCYTDYCNRIDLRVPSGHLKEPEHPSMWGPVE(SEQ ID NO:87)
编码ALK4前体蛋白(异形体C)的核酸序列显示于SEQ ID NO:223中，对应于Genbank参考序列NM_020328.3的核苷酸78-1715。编码细胞外ALK4多肽(异形体C)的核酸序列显示于SEQ ID NO:224中。
在某些实施方案中，本公开文本涉及包含至少一种ALK4多肽的异多聚体，所述至少一种ALK4多肽包括其片段、功能变体和修饰的形式。优选地，用于如本文所公开使用的ALK4多肽(例如，包含ALK4多肽的异多聚体及其用途)是可溶的(例如，ALK4的细胞外结构域)。在其他优选实施方案中，用于如本文所公开使用的ALK4多肽与一种或多种TGF-β超家族配体结合和/或抑制(拮抗)所述配体的活性(例如，诱导Smad信号传导)。在一些实施方案中，本公开文本的异多聚体包含与SEQ ID NO:84、85、86、87、88、89、92或93的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的至少一种ALK4多肽。在一些实施方案中，本公开文本的异多聚体由与SEQ IDNO:84、85、86、87、88、89、92或93的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的至少一种ALK4多肽组成或基本上由其组成。
在某些方面，本公开文本涉及一种包含ALK4-Fc融合蛋白的异多聚体。在一些实施方案中，所述ALK4-Fc融合蛋白包含ALK4结构域，所述ALK4结构域包含与在SEQ ID NO:84或85的氨基酸23-34中的任一个(例如，氨基酸残基23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34)处开始并且在SEQ ID NO:84或85的氨基酸101-126中的任一个(例如，氨基酸残基101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125和126)处结束的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述ALK4-Fc融合蛋白包含ALK4结构域，所述ALK4结构域包含与SEQ ID NO:84或85的氨基酸34-101至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述ALK4-Fc融合蛋白包含ALK4结构域，所述ALK4结构域包含与SEQ ID No:84或85的氨基酸23-126至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述ALK4-Fc融合蛋白包含ALK4结构域，所述ALK4结构域包含与SEQ ID No:84、86、85、87、88、89、90、91、92、93、94和95中的任一个的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在某些实施方案中，所述多肽包含如下的ALK4-Fc融合多肽(SEQ ID NO:88)：
Figure GDA0004158550890001071
前导序列和接头序列加下划线。为了用本公开文本的某些Fc融合多肽指导异二聚体形成，可以将两个氨基酸取代(用天冬氨酸替代赖氨酸)引入ALK4-Fc融合多肽的Fc结构域中，如上文由
Figure GDA0004158550890001074
所指示。SEQ ID NO:88的氨基酸序列可以任选地提供有在C末端添加的赖氨酸。
该ALK4-Fc融合蛋白由以下核酸(SEQ ID NO:243)编码：
Figure GDA0004158550890001072
成熟ALK4-Fc融合蛋白序列(SEQ ID NO:89)如下，并且可以任选地提供有在C末端添加的赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001073
在一些实施方案中，ALK4-Fc融合多肽(或本文公开的任何Fc融合多肽)采用组织纤溶酶原激活物(TPA)前导序列：MDAMKRGLCCVLLLCGAVFVSP(SEQ ID NO:246)。
在一些实施方案中，ALK4-Fc融合多肽(SEQ ID NO:92)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001081
前导序列和接头加下划线。为了用本文公开的某些Fc融合多肽指导异二聚体形成，可以将四个氨基酸取代引入ALK4融合多肽的Fc结构域中，如上文由
Figure GDA0004158550890001087
所指示。SEQ ID NO:92的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
成熟ALK4-Fc融合蛋白序列如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001082
各种ActRIIB-Fc:ALK4-Fc复合物的纯化可以通过一系列柱色谱步骤实现，所述步骤包括例如以下中按任何顺序的三种或更多种：蛋白A色谱、Q琼脂糖色谱、苯基琼脂糖色谱、尺寸排阻色谱和阳离子交换色谱。所述纯化可以通过病毒过滤和缓冲液交换来完成。
在一些实施方案中，ALK4-Fc融合多肽(SEQ ID NO:247)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001083
前导序列和接头加下划线。为了用本文公开的某些Fc融合多肽指导异二聚体形成，可以将四个氨基酸取代(用半胱氨酸替代酪氨酸、用丝氨酸替代苏氨酸、用丙氨酸替代亮氨酸以及用缬氨酸替代酪氨酸)引入ALK4融合多肽的Fc结构域中，如上文由
Figure GDA0004158550890001085
所指示的。为了促进ALK4-Fc:ActRIIB-Fc异二聚体的纯化，也可以将两个氨基酸取代(用精氨酸替代天冬酰胺和用精氨酸替代天冬氨酸)引入ALK4融合多肽的Fc结构域中，如上文由
Figure GDA0004158550890001086
所指示。SEQ ID NO:247的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
该ALK4-Fc融合多肽由以下核酸(SEQ ID NO:248)编码：
 
Figure GDA0004158550890001084
Figure GDA0004158550890001091
成熟ALK4-Fc融合多肽序列如下(SEQ ID NO:249)，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001092
该ALK4-Fc融合多肽由以下核酸(SEQ ID NO:250)编码：
Figure GDA0004158550890001093
在某些实施方案中，所述ALK4-Fc融合多肽是SEQ ID NO:92(以上所示)，其含有四个氨基酸取代以指导本文公开的某些Fc融合多肽的异二聚体形成，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
该ALK4-Fc融合多肽由以下核酸(SEQ ID NO:251)编码：
 
Figure GDA0004158550890001094
Figure GDA0004158550890001101
成熟ALK4-Fc融合多肽序列是SEQ ID NO:93(上文显示)，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
该ALK4-Fc融合多肽由以下核酸(SEQ ID NO:252)编码：
Figure GDA0004158550890001102
各种ALK4-Fc:ActRIIB-Fc复合物的纯化可以通过一系列柱色谱步骤实现，包括例如以下中按任何顺序的三种或更多种：蛋白A色谱、Q琼脂糖色谱、苯基琼脂糖色谱、尺寸排阻色谱和基于表位的亲和色谱(例如，用针对ALK4或ActRIIB上的表位的抗体或功能等效的配体)和多元色谱(例如，用含有静电配体和疏水性配体的树脂)。所述纯化可以通过病毒过滤和缓冲液交换来完成。
在某些方面，本公开文本涉及包含ALK7多肽的蛋白质复合物。如本文所用，术语“ALK7”是指来自任何物种的激活素受体样激酶-7蛋白家族和通过诱变或其他修饰源自此类ALK7蛋白的变体。本文中对ALK7的提及应理解为对当前鉴定的形式中的任一种的提及。ALK7家族的成员通常是由具有富半胱氨酸区域的配体结合细胞外结构域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域构成的跨膜蛋白。
术语“ALK7多肽”包括包含ALK7家族成员的任何天然存在的多肽以及其保留有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和肽模拟物形式)的多肽。
已经描述了人ALK7的四种天然存在的异形体。人ALK7异形体1前体蛋白(NCBI RefSeq NP_660302.2)的序列如下：
Figure GDA0004158550890001103
信号肽由单下划线指示，并且细胞外结构域以粗体字体指示。
加工的细胞外ALK7异形体1多肽序列如下：
ELSPGLKCVCLLCDSSNFTCQTEGACWASVMLTNGKEQVIKSCVSLPELNAQVFCHSSNNVTKTECCFTDFC NNITLHLPTASPNAPKLGPME(SEQ ID NO:123)
编码人ALK7异形体1前体蛋白的核酸序列显示于下文SEQ ID NO:233中，对应于Genbank参考序列NM_145259.2的核苷酸244-1722。编码加工的细胞外ALK7多肽(异形体1)的核酸序列显示于SEQ ID NO:234中。
人ALK7的替代异形体，异形体2(NCBI Ref Seq NP_001104501.1)的氨基酸序列以其加工形式显示如下(SEQ ID NO:124)，其中细胞外结构域以粗体字体指示。
Figure GDA0004158550890001111
细胞外ALK7多肽(异形体2)的氨基酸序列如下：
MLTNGKEQVIKSCVSLPELNAQVFCHSSNNVTKTECCFTDFCNNITLHLPTASPNAPKLGPME(SEQID NO:125).
编码加工的ALK7多肽(异形体2)的核酸序列显示于下文SEQ ID NO:235中，对应于NCBI参考序列NM_001111031.1的核苷酸279-1607。
编码细胞外ALK7多肽(异形体2)的核酸序列显示于SEQ ID NO:236中。
替代人ALK7前体蛋白异形体3(NCBI Ref Seq NP_001104502.1)的氨基酸序列显示如下(SEQ ID NO:121)，其中信号肽通过单下划线指示。
Figure GDA0004158550890001112
加工的ALK7多肽(异形体3)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:126)。该异形体缺少跨膜结构域，并且因此提出其为整体可溶的(Roberts等人,2003,Biol Reprod68:1719-1726)。如下所述来预测SEQ ID NO:126的N末端变体。
Figure GDA0004158550890001113
编码未加工的ALK7多肽前体蛋白(异形体3)的核酸序列显示于SEQ ID NO:237中，对应于NCBI参考序列NM_001111032.1的核苷酸244-1482。编码加工的ALK7多肽(异形体3)的核酸序列显示于SEQ ID NO:238中。
替代人ALK7前体蛋白异形体4(NCBI Ref Seq NP_001104503.1)的氨基酸序列显示如下(SEQ ID NO:122)，其中信号肽由单下划线指示。
Figure GDA0004158550890001114
加工的ALK7多肽(异形体4)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:127)。与ALK7异形体3一样，异形体4缺少跨膜结构域，并且因此提出其为整体可溶的(Roberts等人,2003,BiolReprod 68:1719-1726)。如下所述来预测SEQ ID NO:127的N末端变体。
Figure GDA0004158550890001121
编码未加工的ALK7多肽前体蛋白(异形体4)的核酸序列显示于SEQ ID NO:239中，对应于NCBI参考序列NM_001111033.1的核苷酸244-1244。编码加工的ALK7多肽(异形体4)的核酸序列显示于SEQ ID NO:240中。
基于大鼠中全长ALK7(异形体1)的信号序列(参见NCBI参考序列NP_620790.1)以及人ALK7与大鼠ALK7之间的高度序列同一性，预测人ALK7异形体1的加工形式如下(SEQ IDNO:128)。
Figure GDA0004158550890001122
预测加工的ALK7异形体1的活性变体，其中SEQ ID NO:123在N末端截短1、2、3、4、5、6或7个氨基酸，并且SEQ ID NO:128在N末端截短1或2个氨基酸。与SEQ ID NO:128一致，进一步预期亮氨酸是人ALK7异形体3(SEQ ID NO:126)和人ALK7异形体4(SEQ ID NO:127)的加工形式中的N末端氨基酸。
在某些实施方案中，本公开文本涉及包含至少一种ALK7多肽的异多聚体，所述至少一种ALK7多肽包括其片段、功能变体和修饰的形式。优选地，用于如本文所公开使用的ALK7多肽(例如，包含ALK7多肽的异多聚体及其用途)是可溶的(例如，ALK7的细胞外结构域)。在其他优选实施方案中，用于如本文所公开使用的ALK7多肽与一种或多种TGF-β超家族配体结合和/或抑制(拮抗)所述配体的活性(例如，诱导Smad信号传导)。在一些实施方案中，本公开文本的异多聚体包含至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的至少一种ALK7多肽与SEQ ID NO:120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、133或134的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开文本的异多聚体由与SEQ ID NO:120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、133或134的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的至少一种ALK7多肽组成或基本上由其组成。
在某些方面，本公开文本涉及一种包含ALK7-Fc融合蛋白的异多聚体。在一些实施方案中，所述ALK7-Fc融合蛋白包含ALK7结构域，所述ALK7结构域包含与在SEQ ID NO:120、121或122的氨基酸21-28中的任一个(例如，氨基酸残基21、22、23、24、25、26、27和28)处开始并且在SEQ ID NO:120、121或122的氨基酸92-113中的任一个(例如，氨基酸残基92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112和113)处结束的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述ALK7-Fc融合蛋白包含ALK7结构域，所述ALK7结构域包含与SEQ ID NO:120、121或122的氨基酸28-92至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述ALK7-Fc融合蛋白包含ALK7结构域，所述ALK7结构域包含与SEQ ID NO:120、121或122的氨基酸21-113至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述ALK7-Fc融合蛋白包含ALK7结构域，所述ALK7结构域包含与SEQ ID No:120、123、124、125、121、126、122、127、128、129、130、131、132、133、134、135和136中的任一个的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述ALK7-Fc融合蛋白使用TPA前导序列并且如下(SEQ IDNO:129)：
Figure GDA0004158550890001131
信号序列和接头序列加下划线。为了促进ActRIIB-Fc:ALK7-Fc异二聚体的形成而不是任一种可能的同二聚复合物的形成，可以将两个氨基酸取代(用天冬氨酸替代赖氨酸)引入融合蛋白的Fc结构域中，如上文由
Figure GDA0004158550890001135
所指示。SEQ ID NO:129的氨基酸序列可以任选地提供有在C末端添加的赖氨酸。
该ALK7-Fc融合蛋白由以下核酸(SEQ ID NO:255)编码：
Figure GDA0004158550890001132
预期成熟ALK7-Fc融合蛋白序列(SEQ ID NO:130)如下，并且可以任选地提供有在C末端添加的赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001133
ALK7-Fc融合多肽的互补形式(SEQ ID NO:133)如下：
Figure GDA0004158550890001134
前导序列和接头序列加下划线。为了用本文公开的某些Fc融合多肽指导异二聚体形成，可以将四个氨基酸取代引入ALK7融合多肽的Fc结构域中，如上文由
Figure GDA0004158550890001142
所指示。此外，Fc结构域的C末端赖氨酸残基可以缺失。SEQ ID NO:133的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
预期成熟ALK7-Fc融合蛋白序列(SEQ ID NO:134)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001141
在某些实施方案中，本公开文本提供一种异多聚体蛋白，其包含任何本文公开的变体ActRIIB多肽和选自以下的第二多肽：ALK4或ALK7多肽，或其功能片段。在一些实施方案中，所述异多聚体蛋白复合物包含变体ActRIIB多肽和ALK4多肽，或其功能片段。在一些实施方案中，所述异多聚体蛋白复合物包含变体ActRIIB多肽和ALK7多肽，或其功能片段。在一些实施方案中，所述第二多肽是ALK4多肽或其功能片段。在一些实施方案中，所述ALK4多肽或其功能片段包含与SEQ ID NO:84或85或其功能片段的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述ALK4多肽或其功能片段包含至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列与SEQ ID NO:84、85、86、87、88、89、92和93或其功能片段的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述第二多肽是ALK7多肽或其功能片段。在一些实施方案中，所述ALK7多肽或其功能片段包含与SEQ ID NO:120、121或122或其功能片段的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述ALK7多肽或其功能片段包含与SEQ ID NO:120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、133和134或其功能片段的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开文本考虑出于诸如增强治疗功效或稳定性(例如，贮存寿命和对体内蛋白水解降解的抗性)的目的，通过修饰ALK4多肽、ALK7多肽和/或变体ActRIIB多肽的结构来制备功能变体。变体可以通过氨基酸取代、缺失、添加或其组合来产生。例如，合理地预期，用异亮氨酸或缬氨酸孤立地替代亮氨酸、用谷氨酸孤立地替代天冬氨酸、用丝氨酸孤立地替代苏氨酸或者用结构上相关的氨基酸对氨基酸的类似替代(例如，保守突变)不会对所得分子的生物活性产生重大影响。保守替代是在侧链相关的氨基酸家族内发生的那些替代。本公开文本的多肽的氨基酸序列的变化是否会导致功能同系物可以通过以下方式容易地确定：评估变体多肽在细胞中以与野生型多肽类似的方式产生反应的能力，或者与一种或多种TGF-β超家族配体(包括例如激活素A、激活素B、GDF8、GDF11和BMP10)结合的能力。
在一些实施方案中，本公开文本考虑出于诸如增强治疗功效或稳定性(例如，延长的贮存寿命和/或增加的对蛋白水解降解的抗性)的目的，通过修饰ALK4多肽、ALK7多肽和/或变体ActRIIB多肽的结构来制备功能变体。
在某些实施方案中，本公开文本考虑本公开文本的ALK4多肽、ALK7多肽和/或变体ActRIIB多肽的特定突变，以改变所述多肽的糖基化。可以选择这样的突变以引入或消除一个或多个糖基化位点，如O-连接或N-连接糖基化位点。天冬酰胺连接的糖基化识别位点通常包含由适当的细胞糖基化酶特异性识别的三肽序列，即天冬酰胺-X-苏氨酸或天冬酰胺-X-丝氨酸(其中“X”是任何氨基酸)。也可以通过多肽序列中一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基的添加或取代来进行改变(对于O-连接的糖基化位点)。在糖基化识别位点的第一或第三氨基酸位置中的一个或两个处的多种氨基酸取代或缺失(和/或在第二位置处的氨基酸缺失)导致在修饰的三肽序列处的非糖基化。增加多肽上的碳水化合物部分的数量的另一种手段是通过将糖苷化学或酶促偶联至所述多肽。根据所用的偶联模式，可以使一种或多种糖附接至(a)精氨酸和组氨酸；(b)游离羧基；(c)游离巯基，如半胱氨酸的游离巯基；(d)游离羟基，如丝氨酸、苏氨酸或羟基脯氨酸的游离羟基；(e)芳族残基，如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸的芳族残基；或(f)谷氨酰胺的酰胺基。多肽上存在的一个或多个碳水化合物部分的去除可以通过化学方式和/或酶促方式来完成。化学去糖基化可以涉及例如使多肽暴露于化合物三氟甲磺酸或等效化合物。此处理导致除了连接糖(N-乙酰葡糖胺或N-乙酰半乳糖胺)外大部分或所有糖的切割，同时氨基酸序列保持完整。多肽上的碳水化合物部分的酶促切割可以通过使用多种内切糖苷酶和外切糖苷酶来实现，如Thotakura等人[Meth.Enzymol.(1987)138:350]所述。可以根据所用表达系统的类型适当地调节多肽的序列，因为哺乳动物、酵母、昆虫和植物细胞都可以引入不同的糖基化模式，所述糖基化模式可能受肽的氨基酸序列的影响。通常，用于人的本公开文本的ALK4多肽、ALK7多肽和/或变体ActRIIB多肽复合物可以在提供适当糖基化的哺乳动物细胞系(如HEK293或CHO细胞系)中表达，但是预期其他哺乳动物表达细胞系也是有用的。
本公开文本还考虑一种生成突变体、特别是本公开文本的ALK4多肽、ALK7多肽和/或变体ActRIIB多肽的组合突变体的集合以及截短突变体的方法。组合突变体的库尤其可用于鉴定功能活性(例如，配体结合)ALK4、ALK7和/或变体ActRIIB多肽序列。筛选此类组合文库的目的可以是产生例如具有改变的特性(如改变的药代动力学或改变的配体结合)的多肽变体。下文提供多种筛选测定，并且可以使用这样的测定来评价变体。例如，可以针对与TGF-β超家族配体(例如，激活素A、激活素B、GDF8、GDF11和BMP10)结合，以防止TGF-β超家族配体与TGF-β超家族受体结合的能力和/或干扰TGF-β超家族配体引起的信号传导的能力来筛选变体ALK4、ALK7和/或变体ActRIIB多肽序列。
还可以测试本公开文本的ALK4、ALK7和/或变体ActRIIB多肽异多聚体的活性，例如在基于细胞的测定或体内测定中测试。例如，可以评估异多聚体复合物对肌肉细胞中参与肌肉产生的基因表达或蛋白质活性的作用。这可以视需要在一种或多种TGF-β超家族配体蛋白(例如，激活素A、激活素B、GDF8、GDF11和BMP10)的存在下进行，并且可以转染细胞以产生ALK4、ALK7和/或变体ActRIIB多肽复合物以及任选地TGF-β超家族配体。同样地，可以将本公开文本的异多聚体复合物施用至小鼠或其他动物，并且可以使用本领域公认的方法评估一种或多种测量值，如肌肉形成和强度。类似地，可以例如通过如本文描述的测定和本领域中的一般已知的那些测定，在成骨细胞、脂肪细胞和/或神经元细胞中测试异多聚体或其变体的活性对这些细胞的生长的任何作用。SMAD反应性报告基因可以用于此类细胞系中以监测对下游信号传导的影响。
在某些方面，本公开文本的异多聚体与一种或多种TGF-β超家族配体结合。在一些实施方案中，本公开文本的异多聚体以至少1x 10-7M的KD与一种或多种TGF-β超家族配体结合。在一些实施方案中，所述一种或多种TGF-β超家族配体选自：激活素A、激活素B、GDF8、GDF11和BMP10。
在某些方面，本公开文本的异多聚体抑制一种或多种TGF-β超家族配体。在一些实施方案中，本公开文本的异多聚体抑制一种或多种TGF-β超家族配体的信号传导。在一些实施方案中，本公开文本的异多聚体抑制一种或多种TGF-β超家族配体的Smad信号传导。在一些实施方案中，本公开文本的异多聚体在基于细胞的测定中抑制一种或多种TGF-β超家族配体的信号传导。在一些实施方案中，本公开文本的异多聚体抑制选自以下的一种或多种TGF-β超家族配体：激活素A、激活素B、GDF8、GDF11和BMP10。
可以生成组合衍生的变体，相对于参考ALK4、ALK7和/或变体ActRIIB多肽异多聚体，所述变体具有增加的选择性或通常增加的效力。这样的变体在从重组DNA构建体表达时可以用于基因治疗方案中。同样，诱变可以产生细胞内半衰期与相应未修饰的ALK4、ALK7和/或变体ActRIIB多肽异多聚体显著不同的变体。例如，可以使改变的蛋白质对于蛋白水解降解或其他细胞过程更稳定或更不稳定，从而导致未修饰多肽的破坏或其他方式的失活。此类变体和编码它们的基因可以用于通过调节多肽的半衰期来改变多肽复合物水平。例如，短半衰期可以产生更短暂的生物学效应，并且在诱导性表达系统的一部分时，可以允许更严格地控制细胞内的重组多肽复合物水平。在Fc融合蛋白中，可以在接头(如果有的话)和/或Fc部分中进行突变以改变ALK4、ALK7和/或变体ActRIIB多肽异多聚体复合物的一种或多种活性，包括例如免疫原性、半衰期和溶解度。
本领域中已知的许多方法可以用于生成本公开文本的异多聚体。例如，非天然存在的二硫键可以通过以下方式来构建：在第一多肽(例如，变体ActRIIB多肽)上用含有游离硫醇的残基(如半胱氨酸)替代天然存在的氨基酸，使得所述游离硫醇与第二多肽(例如，ALK4多肽或ALK7多肽)上的另一含有游离硫醇的残基相互作用，使得在第一多肽与第二多肽之间形成二硫键。促进异多聚体形成的相互作用的另外的例子包括但不限于离子相互作用，如Kjaergaard等人,WO 2007147901中所述；静电转向效应，如Kannan等人,U.S.8,592,562中所述；卷曲螺旋相互作用，如Christensen等人,U.S.20120302737中所述；亮氨酸拉链，如Pack和Plueckthun,(1992)Biochemistry 31:1579-1584中所述；以及螺旋-转角-螺旋基序，如Pack等人,(1993)Bio/Technology 11:1271-1277中所述。各个区段的连接可以经由例如共价结合(如通过化学交联、肽接头、二硫桥等)或亲和相互作用(如通过亲和素-生物素或亮氨酸拉链技术)获得。
在某些方面中，多聚化结构域可以包含相互作用对的一个组分。在一些实施方案中，本文公开的多肽可以形成包含与第二多肽共价或非共价缔合的第一多肽的蛋白质复合物，其中所述第一多肽包含变体ActRIIB多肽的氨基酸序列和相互作用对的第一成员的氨基酸序列，并且所述第二多肽包含ALK4多肽或ALK7多肽的氨基酸序列和相互作用对的第二成员的氨基酸序列。所述相互作用对可以是相互作用以形成复合物、特别是异二聚复合物的任两个多肽序列，但是操作实施方案也可以采用可以形成同二聚复合物的相互作用对。可以选择相互作用对以赋予改进的特性/活性(如延长的血清半衰期)，或者充当另一部分附接至其上的衔接子以提供改进的特性/活性。例如，聚乙二醇部分可以附接至相互作用对的一种或两种组分上，以提供改进的特性/活性，如改进的血清半衰期。
相互作用对的第一成员和第二成员可以是不对称对，意味着所述对的成员优先彼此缔合而不是自缔合。因此，不对称的相互作用对的第一成员和第二成员可以缔合以形成异二聚复合物(参见例如，图1B)。可替代地，相互作用对可以是无指导的，意味着所述对的成员可以彼此缔合或自缔合，没有明显的偏好，并且因此可以具有相同的或不同的氨基酸序列(参见例如，图1A)。因此，无指导的相互作用对的第一成员与第二成员可以缔合以形成同二聚体复合物或异二聚复合物。任选地，相互作用对(例如，不对称的对或无指导的相互作用对)的第一成员与所述相互作用对的第二成员共价缔合。任选地，相互作用对(例如，不对称的对或无指导的相互作用对)的第一成员与所述相互作用对的第二成员非共价缔合。
作为具体例子，本公开文本提供融合蛋白，所述融合蛋白包含与包含免疫球蛋白的恒定结构域(如免疫球蛋白的CH1、CH2或CH3结构域)或Fc结构域的多肽融合的变体ActRIIB多肽或未修饰的ActRIIB多肽。本文提供了源自人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的Fc结构域。已知降低CDC或ADCC活性的其他突变，并且共同地，这些变体中的任一种都包括在本公开文本中并且可以用作本公开文本的异多聚体的有利组分。任选地，SEQ ID NO:13的IgG1Fc结构域在诸如Asp-265、Lys-322和Asn-434(根据相应的全长IgG1编号)的残基处具有一种或多种突变。在某些情况下，相对于野生型Fc结构域，具有这些突变中的一种或多种(例如，Asp-265突变)的变体Fc结构域具有降低的与Fcγ受体结合的能力。在其他情况下，相对于野生型Fc结构域，具有这些突变中的一种或多种(例如，Asn-434突变)的变体Fc结构域具有增加的与MHC I类相关Fc受体(FcRN)结合的能力。
可以用于人IgG1(G1Fc)的Fc部分的天然氨基酸序列的例子显示于下文中(SEQ IDNO:13)。虚线下划线指示铰链区，并且实线下划线指示关于天然存在的变体的位置。部分地，本公开文本提供多肽，其包含具有与SEQ ID NO:13的70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。根据SEQ IDNO:13中使用的编号系统，G1Fc中天然存在的变体将包括E134D和M136L(参见UniprotP01857)。
Figure GDA0004158550890001171
可以用于人IgG2的Fc部分(G2Fc)的天然氨基酸序列的例子显示于下文中(SEQ IDNO:14)。虚线下划线指示铰链区，并且双下划线指示序列中存在数据库冲突的位置(根据UniProt P01859)。部分地，本公开文本提供多肽，其包含具有与SEQ ID NO:14的70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
Figure GDA0004158550890001172
可以用于人IgG3的Fc部分(G3Fc)的氨基酸序列的两个例子显示于下文中。G3Fc中的铰链区可以是其他Fc链中的最多四倍长，并且含有三个相同的15个残基的区段，其前面是相似的17个残基的区段。下文所示的第一G3Fc序列(SEQ ID NO:15)含有由单一15个残基的区段组成的短铰链区，而第二G3Fc序列(SEQ ID NO:16)含有全长铰链区。在每种情况下，虚线下划线指示铰链区，并且实线下划线指示根据UniProt P01859关于天然存在的变体的位置。部分地，本公开文本提供多肽，其包含具有与SEQ ID NO:15和16的70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ IDNO:16的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
Figure GDA0004158550890001181
在转化为SEQ ID NO:15中使用的编号系统时，G3Fc中天然存在的变体(例如，参见Uniprot P01860)包括E68Q、P76L、E79Q、Y81F、D97N、N100D、T124A、S169N、S169del、F221Y，并且本公开文本提供包含含有这些变异中的一个或多个的G3Fc结构域的融合蛋白。此外，人免疫球蛋白IgG3基因(IGHG3)显示特征为不同铰链长度的结构多态性[参见UniprotP01859]。具体而言，变体WIS缺少大部分V区和全部CH1区。除了铰链区中正常存在的11外，其在位置7处具有额外的链间二硫键。变体ZUC缺少大部分V区、全部CH1区和铰链的一部分。变体OMM可以代表等位基因形式或另一个γ链亚类。本公开文本提供另外的融合蛋白，其包含含有这些变体中的一种或多种的G3Fc结构域。
可以用于人IgG4的Fc部分(G4Fc)的天然氨基酸序列的例子显示于下文中(SEQ IDNO:17)。虚线下划线指示铰链区。部分地，本公开文本提供多肽，其包含具有与SEQ ID NO:17的70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
Figure GDA0004158550890001191
关于G1Fc序列(SEQ ID NO:13)，本文中呈现Fc结构域中的多种工程化突变，并且G2Fc、G3Fc和G4Fc中的类似突变可以源自图3中其与G1Fc的比对。由于不等的铰链长度，基于同种型比对的类似Fc位置(图3)在SEQ ID NO:13、14、15和17中具有不同的氨基酸编号。还可以理解，由铰链、CH2和CH3区域组成的免疫球蛋白序列(例如，SEQ ID NO:13、14、15、16或17)中的给定氨基酸位置将通过与当编号涵盖整个IgG1重链恒定结构域(由CH1、铰链、CH2和CH3区域组成)时(如在Uniprot数据库中)的相同位置不同的编号来鉴定。例如，人G1Fc序列(SEQ ID NO:13)、人IgG1重链恒定结构域(Uniprot P01857)和人IgG1重链中的选定CH3位置之间的对应性如下。
Figure GDA0004158550890001192
Figure GDA0004158550890001201
在从单一细胞系大规模生产不对称的基于免疫球蛋白的蛋白质中出现的问题被称为“链缔合问题”。正如在双特异性抗体的产生中突出地面临的那样，链缔合问题涉及从多种组合中有效产生所需多链蛋白的挑战，所述组合当在单一细胞系中产生不同的重链和/或轻链时固有地产生[参见例如，Klein等人(2012)mAbs 4:653-663]。这个问题当在同一细胞中产生两种不同的重链和两种不同的轻链时最为严重，在这种情况下，当通常只需要一种组合时，存在总共16种可能的链组合(但是其中一些组合是相同的)。然而，相同的原理解释了仅掺入两条不同的(不对称)重链的所需多链融合蛋白降低的产量。
本领域中已知多种方法用来在单一细胞系中增加含Fc融合多肽链的所需配对，而以可接受的产量产生优选的不对称融合蛋白[参见例如，Klein等人(2012)mAbs 4:653-663；以及Spiess等人(2015)Molecular Immunology 67(2A):95-106]。用于获得含Fc链的所需配对的方法包括但不限于基于电荷的配对(静电转向)、“杵臼结构(knobs-into-holes)”空间配对、SEED体配对和基于亮氨酸拉链的配对。参见例如，Ridgway等人(1996)Protein Eng 9:617-621；Merchant等人(1998)Nat Biotech 16:677-681；Davis等人(2010)Protein Eng Des Sel 23:195-202；Gunasekaran等人(2010)；285:19637-19646；Wranik等人(2012)J Biol Chem 287:43331-43339；US5932448；WO 1993/011162；WO 2009/089004以及WO 2011/034605。如本文所描述，这些方法可以用于产生异二聚体，所述异二聚体包含变体ActRIIB多肽和另一种任选地不同的变体ActRIIB多肽或未修饰的ActRIIB多肽。
例如，可以促进特定多肽之间的相互作用的一种手段是通过工程化突起入腔(杵臼结构)互补区域，如Arathoon等人,U.S.7,183,076和Carter等人,U.S.5,731,168中所述。通过用较大的侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替代来自第一多肽(例如第一相互作用对)的界面的小氨基酸侧链来构建“突起”。通过用较小的氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替代大的氨基酸侧链，任选地在第二多肽(例如，第二相互作用对)的界面上产生与突起相同或相似大小的互补“腔”。当在第一或第二多肽的界面处存在适当定位和尺寸的突起或腔时，仅需要在相邻界面处分别工程化相应的腔或突起。
在中性pH(7.0)下，天冬氨酸和谷氨酸带负电，并且赖氨酸、精氨酸和组氨酸带正电。这些带电荷的残基可以用于促进异二聚体形成，并且同时阻碍同二聚体形成。在异性电荷之间发生吸引相互作用，并且在同性电荷之间发生排斥相互作用。部分地，本文公开的蛋白质复合物通过进行带电界面残基的定点诱变利用吸引相互作用来促进异多聚体形成(例如异二聚体形成)，并且任选地利用排斥相互作用来阻碍同二聚体形成(例如同二聚体形成)。
例如，IgG1 CH3结构域界面包含参与结构域-结构域相互作用的四个独特的电荷残基对：Asp356-Lys439'、Glu357-Lys370'、Lys392-Asp399'和Asp399-Lys409'[第二链中的残基编号由(')指示]。应当注意，此处用于指定IgG1 CH3结构域中的残基的编号方案符合Kabat的EU编号方案。由于CH3-CH3结构域相互作用中存在2倍对称性，每种独特的相互作用将在结构中表现两次(例如，Asp-399-Lys409'和Lys409-Asp399')。在野生型序列中，K409-D399'既有利于异二聚体形成也有利于同二聚体形成。第一链中转换电荷极性的单一突变(例如，K409E；正电荷至负电荷)导致对于第一链同二聚体的形成不利的相互作用。由于在同性电荷之间发生的排斥相互作用(负-负；K409E-D399'和D399-K409E')而产生了不利的相互作用。第二链中转换电荷极性的类似突变(D399K'；负电荷至正电荷)导致对于第二链同二聚体形成不利的相互作用(K409'-D399K'和D399K-K409')。但是，与此同时，这两个突变(K409E和D399K')导致对于异二聚体形成有利的相互作用(K409E-D399K'和D399-K409')。
通过另外的带电荷残基的突变可以进一步增强对异二聚体形成和同二聚体阻遏的静电转向效应，所述另外的带电荷残基可以与或可以不与第二链中的带异性电荷的残基(包括例如Arg355和Lys360)配对。下表列出了可以单独或组合使用的可能的电荷变化突变，以增强本文公开的异多聚体的异多聚体形成。
Figure GDA0004158550890001211
在一些实施方案中，用带电荷的氨基酸替代构成本申请的融合蛋白中的CH3-CH3界面的一个或多个残基，使得相互作用变得静电不利。例如，用带负电荷的氨基酸(例如，天冬氨酸或谷氨酸)替代界面中的带正电荷的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸或组氨酸)。可替代地，或与前述取代组合，用带正电荷的氨基酸替代界面中的带负电荷的氨基酸。在某些实施方案中，用具有所需电荷特征的非天然存在的氨基酸替代所述氨基酸。应当注意，使带负电荷的残基(Asp或Glu)突变为His将导致侧链体积增加，这可能引起空间问题。此外，His质子供体和受体形式取决于局部环境。应将这些问题纳入设计策略的考虑范围中。因为界面残基在人和小鼠IgG亚类中是高度保守的，所以本文公开的静电转向效应可以应用于人和小鼠IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。这种策略还可以扩展至将不带电荷的残基修饰为CH3结构域界面处的带电荷残基。
可以通过在氨基酸序列中引入变化来产生具有降低的效应子功能的抗体和Fc融合蛋白，所述变化包括但不限于Bluestone等人描述的Ala-Ala突变(参见WO 94/28027和WO98/47531；还参见Xu等人,2000 Cell Immunol 200；16-26)。因此，在某些实施方案中，可以使用在恒定区内具有突变(包括Ala-Ala突变)的本公开文本的Fc融合蛋白来降低或消除效应子功能。根据这些实施方案，抗体和Fc融合蛋白可以包含在位置234处突变为丙氨酸的突变或在位置235处突变为丙氨酸的突变，或其组合。在一个实施方案中，所述抗体或Fc融合蛋白包含IgG4框架，其中Ala-Ala突变将描述在位置234处从苯丙氨酸到丙氨酸的一个或多个突变和/或在位置235处从亮氨酸到丙氨酸的突变。在另一个实施方案中，所述抗体或Fc融合蛋白包含IgG1框架，其中Ala-Ala突变将描述在位置234处从亮氨酸到丙氨酸的一个或多个突变和/或在位置235处从亮氨酸到丙氨酸的突变。尽管这些位点处的丙氨酸取代在降低人抗体和鼠抗体二者的ADCC方面有效，但是这些取代在降低CDC活性方面不太有效。通过随机诱变方法定位Fc的Clq结合位点来鉴定的另一种单一变体P329A在保留ADCC活性的同时降低CDC活性方面非常有效。已经显示L234A、L235A和P329A的组合(LALA-PG，Kabat位置)取代可有效沉默人IgG1抗体的效应子功能。关于LALA、LALA-PG和其他突变的详细论述，参见Lo等人(2017)1Biol.Chem.292:3900-3908，其内容通过引用以其整体特此并入本文。在一些实施方案中，本公开文本的Fc融合蛋白在重链的Fc区中包含L234A、L235A和P329G突变(LALA-PG；Kabat位置)。所述抗体或Fc融合蛋白可以可替代地或另外地携带其他突变，包括CH2结构域中的点突变K322A(Hezareh等人2001J Virol.75:12161-8)。
在特定的实施方案中，可以修饰所述抗体或Fc融合蛋白以增强或抑制补体依赖性细胞毒性(CDC)。调节的CDC活性可以通过在Fc区中引入一个或多个氨基酸取代、插入或缺失来实现(参见例如,美国专利号6,194,551)。可替代地或另外地，可以在Fc区中引入一个或多个半胱氨酸残基，从而允许在此区域中形成链间二硫键。由此生成的同二聚抗体或Fc融合蛋白可以具有改进的或降低的内化能力和/或增加的或减少的补体介导的细胞杀伤。参见Caron等人,J.Exp Med.176:1191-1195(1992)和Shopes,B.J.Immunol.148:2918-2922(1992)；WO 99/51642；Duncan&Winter Nature 322:738-40(1988)；美国专利号5,648,260；美国专利号5,624,821；以及WO 94/29351。
部分地，本公开文本使用基于电荷配对(静电转向)工程化为互补的Fc序列提供不对称的含Fc多肽链的所需配对。具有静电互补性的一对Fc序列之一可以在有或没有任选接头的情况下任意地与构建体的变体ActRIIB多肽、ALK4多肽或ALK7多肽融合，以生成变体ActRIIB-Fc、ALK4-Fc或ALK7-Fc融合多肽。此单链可以连同与第一Fc序列互补的Fc序列在所选细胞中共表达，以有利于所需多链构建体(例如，变体ActRIIB-Fc:ALK4异多聚体)的生成。在基于静电转向的此例子中，SEQ ID NO:18[人G1Fc(E134K/D177K)]和SEQ ID NO:19[人G1Fc(K170D/K187D)]是互补Fc序列的例子，其中工程化的氨基酸取代加双下划线，并且构建体的变体ActRIIB多肽、ALK4多肽或ALK7多肽可以与SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:19融合，但不会同时与二者融合。鉴于天然hG1Fc、天然hG2Fc、天然hG3Fc与天然hG4Fc之间的高度氨基酸序列同一性，可以了解，在hG2Fc、hG3Fc或hG4Fc中的对应位置处的氨基酸取代(参见图3)将生成互补Fc对，所述互补Fc对可以代替下文的互补hG1Fc对(SEQ ID NO:18和19)来使用。
Figure GDA0004158550890001221
在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ IDNO:19的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ IDNO:19的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ IDNO:19的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
部分地，本公开文本使用针对空间互补性工程化的Fc序列来提供不对称的含Fc多肽链的所需配对。部分地，本公开文本提供杵臼结构配对作为空间互补性的例子。具有空间互补性的一对Fc序列之一可以在有或没有任选接头的情况下任意地与构建体的变体ActRIIB多肽、ALK4多肽或ALK7多肽融合，以生成变体ActRIIB-Fc、ALK4-Fc或ALK7-Fc融合多肽。此单链可以在所选细胞中连同与第一Fc序列互补的Fc序列共表达，以有利于所需多链构建体的生成。在基于杵臼结构配对的此例子中，SEQ ID NO:20[人G1Fc(T144Y)]和SEQID NO:21[人G1Fc(Y185T)]是互补Fc序列的例子，其中工程化的氨基酸取代加双下划线，并且构建体的变体ActRIIB多肽、ALK4多肽或ALK7多肽可以与SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21融合，但不会同时与二者融合。鉴于天然hG1Fc、天然hG2Fc、天然hG3Fc与天然hG4Fc之间的高度氨基酸序列同一性，可以了解，在hG2Fc、hG3Fc或hG4Fc中的对应位置处的氨基酸取代(参见图3)将生成互补Fc对，所述互补Fc对可以代替下文的互补hG1Fc对(SEQ ID NO:20和21)来使用。
Figure GDA0004158550890001231
在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ IDNO:21的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及变体包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ IDNO:21的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
基于杵臼结构配对的Fc互补性与工程化的二硫键组合的例子公开于SEQ ID NO:22[hG1Fc(S132C/T144W)]和SEQ ID NO:23[hG1Fc(Y127C/T144S/L146A/Y185V)]中。这些序列中的工程化的氨基酸取代加双下划线，并且构建体的变体ActRIIB多肽、ALK4多肽或ALK7多肽可以与SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23融合，但不会同时与二者融合。鉴于天然hG1Fc、天然hG2Fc、天然hG3Fc与天然hG4Fc之间的高度氨基酸序列同一性，可以了解，在hG2Fc、hG3Fc或hG4Fc中的对应位置处的氨基酸取代(参见图3)将生成互补Fc对，所述互补Fc对可以代替下文的互补hG1Fc对(SEQ ID NO:22和23)来使用。
Figure GDA0004158550890001241
在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ IDNO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
部分地，本公开文本使用工程化以生成人IgG和IgA CH3结构域的交错突β链区段的Fc序列来提供不对称的含Fc多肽链的所需配对。这样的方法包括使用链交换工程化结构域(SEED)CH3异二聚体，从而允许形成SEED体融合蛋白[参见例如，Davis等人(2010)Protein Eng Design Sel 23:195-202]。具有SEED体互补性的一对Fc序列之一可以在有或没有任选接头的情况下任意地与构建体的第一变体ActRIIB多肽、第二变体ActRIIB多肽或未修饰的ActRIIB多肽融合，以生成变体ActRIIB-Fc或未修饰的ActRIIB-Fc融合多肽。此单链可以在所选细胞中连同与第一Fc序列互补的Fc序列共表达，以有利于所需多链构建体的生成。在基于SEED体(Sb)配对的此例子中，SEQ ID NO:24[hG1Fc(SbAG)]和SEQ ID NO:25[hG1Fc(SbGA)]是互补IgG Fc序列的例子，其中来自IgA Fc的工程化的氨基酸取代加双下划线，并且构建体的第一变体ActRIIB多肽、第二变体ActRIIB多肽或未修饰的ActRIIB多肽可以与SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25融合，但不会同时与二者融合。鉴于天然hG1Fc、天然hG2Fc、天然hG3Fc和天然hG4Fc之间的高度氨基酸序列同一性，可以了解，hG1Fc、hG2Fc、hG3Fc或hG4Fc中对应位置处的氨基酸取代(参见图3)将生成Fc单体，所述Fc单体可以在下文的互补IgG-IgA对(SEQ ID NO:24和25)中使用。
Figure GDA0004158550890001251
在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ IDNO:25的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
部分地，本公开文本提供具有附接在Fc CH3结构域的C末端的可切割亮氨酸拉链结构域的不对称的含Fc多肽链的所需配对。亮氨酸拉链的附接足以引起异二聚抗体重链的优先组装。参见例如，Wranik等人(2012)J Biol Chem 287:43331-43339。如本文所公开，附接至形成亮氨酸拉链的链的一对Fc序列之一可以在有或没有任选接头的情况下任意地与构建体的第一变体ActRIIB多肽、第二变体ActRIIB多肽或未修饰的ActRIIB多肽融合，以生成变体ActRIIB-Fc或未修饰的ActRIIB-Fc融合多肽。此单链可以在所选细胞中连同附接至互补的形成亮氨酸拉链的链的Fc序列共表达，以有利于所需多链构建体的生成。在纯化后用细菌胞内蛋白酶Lys-C对构建体进行蛋白水解消化可以释放亮氨酸拉链结构域，从而产生Fc构建体，所述构建体的结构与天然Fc的结构相同。在基于亮氨酸拉链配对的此例子中，SEQ ID NO:26[hG1Fc-Ap1(酸性)]和SEQ ID NO:27[hG1Fc-Bp1(碱性)]是互补IgG Fc序列的例子，其中工程化的互补亮氨酸拉链序列加下划线，并且构建体的第一变体ActRIIB多肽、第二变体ActRIIB多肽或野生型ActRIIB多肽可以与SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27融合，但不会同时与二者融合。鉴于天然hG1Fc、天然hG2Fc、天然hG3Fc和天然hG4Fc之间的高度氨基酸序列同一性，可以了解，在有或没有任选接头的情况下附接至hG1Fc、hG2Fc、hG3Fc或hG4Fc(参见图3)的形成亮氨酸拉链的序列将生成Fc单体，所述Fc单体可以在下文的互补的形成亮氨酸拉链的对(SEQ ID NO:26和27)中使用。
Figure GDA0004158550890001261
在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ IDNO:27的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
部分地，本公开文本提供通过上述方法进行的不对称的含Fc多肽链的所需配对与Fc结构域中促进所需异聚种类的纯化的另外的突变的组合。一个例子使用与工程化的二硫键组合的基于杵臼结构配对的Fc结构域的互补性，如在SEQ ID NO:22和23中所公开的，加上一个含Fc多肽链中两个带负电荷的氨基酸(天冬氨酸或谷氨酸)以及互补的含Fc多肽链中两个带正电荷的氨基酸(例如精氨酸)的另外的取代(SEQ ID NO:28-29)。这四种氨基酸取代有助于基于等电点或净分子电荷的差异从异质性多肽混合物选择性纯化所需的异聚融合蛋白。这些序列中工程化的氨基酸取代在下文加双下划线,并且构建体的变体ActRIIB多肽、ALK4多肽或ALK7多肽可以与SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:29融合，但不会同时与二者融合。鉴于天然hG1Fc、天然hG2Fc、天然hG3Fc与天然hG4Fc之间的高度氨基酸序列同一性，可以了解，在hG2Fc、hG3Fc或hG4Fc中的对应位置处的氨基酸取代(参见图3)将生成互补Fc对，所述互补Fc对可以代替下文的互补hG1Fc对(SEQ ID NO:28-29)来使用。
Figure GDA0004158550890001271
在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ IDNO:28的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置138处的谷氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置217处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、氨基酸位置146处的丙氨酸、氨基酸位置162处的精氨酸、氨基酸位置179处的精氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述ALK7-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、氨基酸位置146处的丙氨酸、氨基酸位置162处的精氨酸、氨基酸位置179处的精氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。
在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置138处的谷氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置217处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、氨基酸位置146处的丙氨酸、氨基酸位置162处的精氨酸、氨基酸位置179处的精氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述ALK7-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置138处的谷氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置217处的天冬氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、氨基酸位置146处的丙氨酸、氨基酸位置162处的精氨酸、氨基酸位置179处的精氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。
另一个例子涉及与工程化的二硫键组合的基于杵臼结构配对的Fc结构域的互补性，如SEQ ID NO:22-23中所公开，加上在一个含Fc多肽链(SEQ ID NO:30)中位置213处的组氨酸至精氨酸取代。该取代(在Kabat等人的编号系统中表示H435R)促进基于对蛋白A的亲和力的差异将所需异聚体与不期望的同二聚体分离。工程化的氨基酸取代由双下划线来指示，并且构建体的变体ActRIIB多肽、ALK4多肽或ALK7多肽可以与SEQ ID NO:30或SEQ IDNO:23融合，但不会同时与二者融合。鉴于天然hG1Fc、天然hG2Fc、天然hG3Fc与天然hG4Fc之间的高度氨基酸序列同一性，可以了解，在hG2Fc、hG3Fc或hG4Fc中的对应位置处的氨基酸取代(参见图3)将生成互补Fc对，所述互补Fc对可以代替SEQ ID NO:30(下文)和SEQ IDNO:23的互补hG1Fc对来使用。
Figure GDA0004158550890001281
在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ IDNO:30的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置435处的精氨酸。在一些实施方案中，所述ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、氨基酸位置146处的丙氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。在一些实施方案中，所述ALK7-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、氨基酸位置146处的丙氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。
在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK4-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK4异多聚体蛋白，其中所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含变体ActRIIB-Fc融合蛋白和ALK7-Fc融合蛋白的ActRIIB:ALK7异多聚体蛋白，其中所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。在一些实施方案中，所述ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置435处的精氨酸。在一些实施方案中，所述ALK7-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置435处的精氨酸。在一些实施方案中，所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、氨基酸位置146处的丙氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。
关于G1Fc序列(SEQ ID NO:13)，Fc结构域中多种工程化的突变呈现于上文中。G2Fc、G3Fc和G4Fc中的类似突变可能源自图3中其与G1Fc的比对。由于不等的铰链长度，基于同种型比对的类似Fc位置(图3)在SEQ ID NO:13、14、15、16和17中具有不同的氨基酸编号，如下表所总结。
Figure GDA0004158550890001291
应当理解，融合蛋白(例如，免疫球蛋白Fc融合蛋白)的不同元件能以与所需功能一致的任何方式排列。例如，变体ActRIIB多肽结构域可以位于异源结构域的C末端，或者可替代地，异源结构域可以位于变体ActRIIB多肽结构域的C末端。所述变体ActRIIB多肽结构域和所述异源结构域无需在融合蛋白中相邻，并且可以在任一结构域的C末端或N末端或在结构域之间包括另外的结构域或氨基酸序列。
例如，变体ActRIIB多肽可以包含如式A-B-C中所示的氨基酸序列。B部分对应于变体ActRIIB多肽结构域。A部分和C部分可以独立地是零个、一个或超过一个氨基酸，并且A部分和C部分二者在存在时对于B是异源的。A部分和/或C部分可以经由接头序列附接至B部分。在某些实施方案中，变体ActRIIB融合蛋白包含如式A-B-C中所示的氨基酸序列，其中A是前导序列(信号)序列，B由变体ActRIIB多肽结构域组成，并且C是增强以下中的一种或多种的多肽部分：体内稳定性、体内半衰期、摄取/施用、组织定位或分布、蛋白质复合物的形成和/或纯化。在某些实施方案中，变体ActRIIB融合蛋白包含如式A-B-C中所示的氨基酸序列，其中A是TPA前导序列，B由变体ActRIIB多肽结构域组成，并且C是免疫球蛋白Fc结构域。
在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽含有能够稳定变体ActRIIB多肽的一个或多个修饰。例如，这样的修饰延长变体ActRIIB多肽的体外半衰期，延长变体ActRIIB多肽的循环半衰期或减少变体ActRIIB多肽的蛋白水解降解。这样的稳定化修饰包括但不限于融合蛋白(包括例如包含变体ActRIIB多肽和稳定剂结构域的融合蛋白)、糖基化位点的修饰(包括例如将糖基化位点添加至变体ActRIIB多肽)和碳水化合物部分的修饰(包括例如从变体ActRIIB多肽去除碳水化合物部分)。在融合蛋白的情况下，变体ActRIIB多肽与稳定剂结构域如IgG分子(例如，Fc结构域)融合。如本文所用，术语“稳定剂结构域”不仅是指融合结构域(例如，Fc)(如在融合蛋白的情况下)，而且包括非蛋白质性修饰如碳水化合物部分，或非蛋白质性聚合物如聚乙二醇。
在某些实施方案中，本公开文本制备可用的变体ActRIIB多肽的分离的和/或纯化的形式，其与其他蛋白质分离或者以其他方式基本上不含其他蛋白质。
在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽可以通过多种本领域已知的技术来产生。例如，这样的变体ActRIIB多肽可以使用标准的蛋白质化学技术来合成，如以下文献中所述的那些：Bodansky,M.Principles of Peptide Synthesis,SpringerVerlag,柏林(1993)以及Grant G.A.(编辑),Synthetic Peptides:A User's Guide,W.H.Freeman and Company,纽约(1992)。另外，自动化肽合成仪是可商购的(例如，Advanced ChemTech Model 396；Milligen/Biosearch 9600)。可替代地，变体ActRIIB多肽其片段或变体可以使用本领域中熟知的各种表达系统(例如，大肠杆菌(E.coli)、中国仓鼠卵巢细胞、COS细胞、杆状病毒)重组产生(也参见下文)。在另一实施方案中，变体ActRIIB多肽可以通过使用例如蛋白酶(例如，胰蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶或配对碱性氨基酸转化酶(PACE))消化天然存在的或重组产生的全长变体ActRIIB多肽来产生。可以使用计算机分析(使用可商购软件，例如，MacVector、Omega、PCGene，MolecularSimulation,Inc.)来鉴定蛋白水解切割位点。可替代地，这样的变体ActRIIB多肽可以从天然存在的或重组产生的全长变体ActRIIB多肽产生，如通过本领域中已知的标准技术，如通过化学切割(例如，溴化氰、羟胺)。
在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽可以包括纯化子序列，如表位标签、FLAG标签、多组氨酸序列和GST融合物。任选地，变体ActRIIB多肽包括选自以下的一个或多个修饰的氨基酸残基：糖基化氨基酸、PEG化氨基酸、法尼基化氨基酸、乙酰化氨基酸、生物素化氨基酸、与脂质部分缀合的氨基酸和与有机衍生剂缀合的氨基酸。
在一些实施方案中，本公开文本涉及变体ActRIIB多肽，其包括变体ActRIIB多肽以及包含所述变体ActRIIB多肽的同多聚体和异多聚体，所述变体ActRIIB多肽包含选自以下的一个或多个氨基酸修饰：糖基化氨基酸、PEG化氨基酸、法尼基化氨基酸、乙酰化氨基酸、生物素化氨基酸和与脂质部分缀合的氨基酸。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽是糖基化的并且具有可从CHO细胞中的多肽获得的糖基化模式。
3.接头
本公开文本提供可以与任何本文公开的其他多肽融合或者可以与异源部分(例如，Fc部分)融合的变体ActRIIB多肽。在这些实施方案中，多肽部分(例如变体ActRIIB多肽)借助接头与另一多肽(例如，TGFβRII多肽)和/或与异源部分(例如，Fc部分)连接。在一些实施方案中，接头是富含甘氨酸和丝氨酸的接头。在一些实施方案中，接头可以富含甘氨酸(例如，2-10、2-5、2-4、2-3个甘氨酸残基)或者甘氨酸和脯氨酸残基，并且可以例如含有苏氨酸/丝氨酸和甘氨酸的单一序列或者苏氨酸/丝氨酸和/或甘氨酸的重复序列，例如，GGG(SEQ ID NO:261)、GGGG(SEQ ID NO:262)、TGGGG(SEQ ID NO:263)、SGGGG(SEQ ID NO:264)、TGGG(SEQ ID NO:265)或SGGG(SEQ ID NO:266)单重态或重复。其他接近中性的氨基酸，例如但不限于Thr、Asn、Pro和Ala，也可以用于接头序列中。在一些实施方案中，接头包含含有Gly和Ser的氨基酸序列的各种排列。在一些实施方案中，接头的长度大于10个氨基酸。在其他实施方案中，接头具有至少12、15、20、21、25、30、35、40、45或50个氨基酸的长度。在一些实施方案中，接头小于40、35、30、25、22或20个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为10-50、10-40、10-30、10-25、10-21、10-15、10、15-25、17-22、20或21个氨基酸。在优选的实施方案中，接头包含氨基酸序列GlyGlyGlyGlySer(GGGGS)(SEQ ID NO:267)或其重复序列(GGGGS)n，其中n≥2。在特定实施方案中，n≥3，或者n＝3-10。在一些实施方案中，n≥4，或者n＝4-10。在一些实施方案中，n在(GGGGS)n接头中不大于4。在一些实施方案中，n＝4-10、4-9、4-8、4-7、4-6、4-5、5-8、5-7或5-6。在一些实施方案中，n＝3、4、5、6或7。在特定实施方案中，n＝4。在一些实施方案中，包含(GGGGS)n序列的接头还包含N末端苏氨酸。在一些实施方案中，接头是以下中的任一种：
GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:268)
TGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:269)
TGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:270)
TGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:271)
TGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:272)
TGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:273)或
TGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:274)。
在一些实施方案中，接头包含TGGGPKSCDK(SEQ ID NO:275)的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头是缺少N末端苏氨酸的SEQ ID NO:268-275中的任一个。在一些实施方案中，接头不包含SEQ ID NO:273或274的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文所述的多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以包括借助接头与部分融合的多肽。在一些实施方案中，所述部分增加所述多肽的稳定性。在一些实施方案中，所述部分选自Fc结构域单体、野生型Fc结构域、具有氨基酸取代(例如，减少二聚化的一个或多个取代)的Fc结构域、白蛋白结合肽、纤维粘连蛋白结构域或人血清白蛋白。合适的肽接头是本领域中已知的，并且包括例如含有柔性氨基酸残基(如甘氨酸、丙氨酸和丝氨酸)的肽接头。在一些实施方案中，接头可以含有以下的基序(例如，多个基序或重复基序)：GA、GS、GG、GGA、GGS、GGG、GGGA(SEQ ID NO:280)、GGGS(SEQ ID NO:281)、GGGG(SEQ ID NO:262)、GGGGA(SEQ ID NO:282)、GGGGS(SEQ ID NO:267)、GGGGG(SEQID NO:283)、GGAG(SEQ ID NO:284)、GGSG(SEQ ID NO:285)、AGGG(SEQ ID NO:286)或SGGG(SEQ ID NO:266)。在一些实施方案中，接头可以含有包括以下的基序的2至12个氨基酸：GA或GS，例如，GA、GS、GAGA(SEQ ID NO:287)、GSGS(SEQ ID NO:288)、GAGAGA(SEQ ID NO:289)、GSGSGS(SEQ ID NO:290)、GAGAGAGA(SEQ ID NO:291)、GSGSGSGS(SEQ ID NO:292)、GAGAGAGAGA(SEQ ID NO:293)、GSGSGSGSGS(SEQ ID NO:294)、GAGAGAGAGAGA(SEQ ID NO:295)和GSGSGSGSGSGS(SEQ ID NO:296)。在一些实施方案中，接头可以含有包括以下的基序的3至12个氨基酸：GGA或GGS，例如，GGA、GGS、GGAGGA(SEQ ID NO:297)、GGSGGS(SEQ ID NO:298)、GGAGGAGGA(SEQ ID NO:299)、GGSGGSGGS(SEQ ID NO:300)、GGAGGAGGAGGA(SEQ IDNO:301)和GGSGGSGGSGGS(SEQ ID NO:302)。在一些实施方案中，接头可以含有包括以下的基序的4至12个氨基酸：GGAG(SEQ ID NO:303)、GGSG(SEQ ID NO:304)、GGAGGGAG(SEQ IDNO:305)、GGSGGGSG(SEQ ID NO:306)、GGAGGGAGGGAG(SEQ ID NO:307)和GGSGGGSGGGSG(SEQID NO:308)。在一些实施方案中，接头可以含有以下的基序：GGGGA(SEQ ID NO:309)或GGGGS(SEQ ID NO:267)，例如，GGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO:310)和GGGGSGGGGSGGGGS(SEQID NO:311)。在一些实施方案中，部分(例如，Fc结构域单体、野生型Fc结构域、具有氨基酸取代(例如，减少二聚化的一个或多个取代)的Fc结构域、白蛋白结合肽、纤维粘连蛋白结构域或人血清白蛋白)与多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)之间的氨基酸接头可以是GGG、GGGA(SEQ ID NO:280)、GGGG(SEQ ID NO:262)、GGGAG(SEQ ID NO:312)、GGGAGG(SEQ ID NO:313)或GGGAGGG(SEQ ID NO:314)。
在一些实施方案中，接头还可以含有除甘氨酸、丙氨酸和丝氨酸以外的氨基酸，例如，AAAL(SEQ ID NO:315)、AAAK(SEQ ID NO:316)、AAAR(SEQ ID NO:317)、EGKSSGSGSESKST(SEQ ID NO:318)、GSAGSAAGSGEF(SEQ ID NO:319)、AEAAAKEAAAKA(SEQ ID NO:320)、KESGSVSSEQLAQFRSLD(SEQ ID NO:321)、GENLYFQSGG(SEQ ID NO:322)、SACYCELS(SEQ IDNO:323)、RSIAT(SEQ ID NO:324)、RPACKIPNDLKQKVMNH(SEQ ID NO:325)、GGSAGGSGSGSSGGSSGASGTGTAGGTGSGSGTGSG(SEQ ID NO:326)、AAANSSIDLISVPVD SR(SEQ ID NO:327)或GGSGGGSEGGGSEGGGSEGGGSEGGGSEGGGSGGGS(SE Q ID NO:328)。在一些实施方案中，接头可以含有EAAAK(SEQ ID NO:329)的基序，例如，多个基序或重复基序。在一些实施方案中，接头可以含有以下的基序(例如，多个基序或重复基序)：富含脯氨酸的序列，如(XP)n，其中X可以是任何氨基酸(例如，A、K或E)并且n是1-5，以及PAPAP(SEQ ID NO:330)。
可以根据所涉及的两种蛋白质以及在最终蛋白质融合多肽中期望的柔性程度来调整肽接头的长度和所用的氨基酸。可以调整接头的长度以确保适当的蛋白质折叠并避免形成聚集体。
4.编码ActRIIB多肽的核酸
在某些方面，本公开文本提供编码任何变体ActRIIB多肽(例如，可溶性ActRIIB多肽)(包括任何本文公开的变体)的分离的和/或重组的核酸。例如，SEQ ID NO:4编码天然存在的ActRIIB前体多肽，而SEQ ID NO:3编码可溶性ActRIIB多肽。主题核酸可以是单链的或双链的。此类核酸可以是DNA或RNA分子。这些核酸可以用于例如制备ActRIIB多肽的方法中或者用作直接治疗剂(例如，在基因治疗方法中)。
在某些方面，本公开文本涉及包含一种或多种如本文所述的变体ActRIIB多肽的编码序列的分离的和/或重组的核酸。例如，在一些实施方案中，本公开文本涉及一种分离的和/或重组的核酸，其与对应于以下中的任一个的核酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同：SEQ ID No:3、4、10、32、35、38、41、44、47、277、331、334、337、340、343、346、349、352、355、367、370、373、376、379、382、385、388、391、394、397、400、403、406、409、412、415、418、421、424、427、430、433、436、439、442、445、448、451、454、457、460、463、466、469、472、475、478、481、484、487、490、493、496、499、502、505、508、511、514、517、521和523。在一些实施方案中，本公开文本的分离的和/或重组的多核苷酸序列包含与本文所述的编码序列(例如，与对应于以下中的任一个的核酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的核酸：SEQ ID No:3、4、10、32、35、38、41、44、47、277、331、334、337、340、343、346、349、352、355、367、370、373、376、379、382、385、388、391、394、397、400、403、406、409、412、415、418、421、424、427、430、433、436、439、442、445、448、451、454、457、460、463、466、469、472、475、478、481、484、487、490、493、496、499、502、505、508、511、514、517、521和523)可操作地连接的启动子序列。在一些实施方案中，本公开文本涉及包含本文所述的分离的和/或重组的核酸(例如，与对应于以下中的任一个的核酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的核酸：SEQ ID No:3、4、10、32、35、38、41、44、47、277、331、334、337、340、343、346、349、352、355、367、370、373、376、379、382、385、388、391、394、397、400、403、406、409、412、415、418、421、424、427、430、433、436、439、442、445、448、451、454、457、460、463、466、469、472、475、478、481、484、487、490、493、496、499、502、505、508、511、514、517、521和523)的载体。在一些实施方案中，本公开文本涉及一种包含本文所述的分离的和/或重组的多核苷酸序列(例如，与对应于以下中的任一个的核酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的核酸：SEQ ID No:3、4、10、32、35、38、41、44、47、277、331、334、337、340、343、346、349、352、355、367、370、373、376、379、382、385、388、391、394、397、400、403、406、409、412、415、418、421、424、427、430、433、436、439、442、445、448、451、454、457、460、463、466、469、472、475、478、481、484、487、490、493、496、499、502、505、508、511、514、517、521和523)的细胞。在一些实施方案中，所述细胞是CHO细胞。在一些实施方案中，所述细胞是COS细胞。
在某些实施方案中，应理解编码本公开文本的变体ActRIIB(或其同多聚体或异多聚体)、ALK4或ALK7多肽的核酸包括作为以下中的任一个的变体的核酸：SEQ ID NO:3、4、10、32、35、38、41、44、47、221、222、223、224、233、234、235、236、237、238、239、240、255、277、331、334、337、340、343、346、349、352、355、367、370、373、376、379、382、385、388、391、394、397、400、403、406、409、412、415、418、421、424、427、430、433、436、439、442、445、448、451、454、457、460、463、466、469、472、475、478、481、484、487、490、493、496、499、502、505、508、511、514、517、521和523。变体核苷酸序列包括相差一个或多个核苷酸取代、添加或缺失的序列(包括等位基因变体)，并且因此将包括与以下中的任一个指定的核苷酸序列不同的编码序列：SEQ ID NO:3、4、10、32、35、38、41、44、47、221、222、223、224、233、234、235、236、237、238、239、240、255、277、331、334、337、340、343、346、349、352、355、367、370、373、376、379、382、385、388、391、394、397、400、403、406、409、412、415、418、421、424、427、430、433、436、439、442、445、448、451、454、457、460、463、466、469、472、475、478、481、484、487、490、493、496、499、502、505、508、511、514、517、521和523。
在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB(或其同多聚体或异多聚体)、ALK4或ALK7多肽由与以下中的任一个至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码：SEQ ID NO:3、4、10、32、35、38、41、44、47、221、222、223、224、233、234、235、236、237、238、239、240、255、277、331、334、337、340、343、346、349、352、355、367、370、373、376、379、382、385、388、391、394、397、400、403、406、409、412、415、418、421、424、427、430、433、436、439、442、445、448、451、454、457、460、463、466、469、472、475、478、481、484、487、490、493、496、499、502、505、508、511、514、517、521和523。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:3至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ IDNO:4至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:10至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:32至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:35至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:38至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:41至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:44至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:47至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:277至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:331至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:334至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:337至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:340至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:343至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:346至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:349至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:352至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:355至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:367至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:370至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:373至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:376至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:379至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:382至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:385至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:388至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:391至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:394至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:397至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:400至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:403至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:406至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:409至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:412至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:415至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:418至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:421至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:424至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:427至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:430至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:433至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:436至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:439至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:442至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:445至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:448至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:451至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:454至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:457至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:460至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:463至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:466至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:469至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:472至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:475至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:478至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:481至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:484至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:487至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:490至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:493至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:496至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:499至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:502至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:505至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:508至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:511至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:514至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:517至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:521至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽(或其同多聚体或异多聚体)由与SEQ ID NO:523至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。
在某些实施方案中，本公开文本的ALK4多肽由与SEQ ID NO:221至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的ALK4多肽由与SEQ ID NO:222至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的ALK4多肽由与SEQ ID NO:223至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的ALK4多肽由与SEQ ID NO:224至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。
在某些实施方案中，本公开文本的ALK7多肽由与SEQ ID NO:233至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的ALK7多肽由与SEQ ID NO:234至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的ALK7多肽由与SEQ ID NO:235至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的ALK7多肽由与SEQ ID NO:236至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的ALK7多肽由与SEQ ID NO:237至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的ALK7多肽由与SEQ ID NO:238至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的ALK7多肽由与SEQ ID NO:239至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的ALK7多肽由与SEQ ID NO:240至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。
在某些实施方案中，本公开文本的ALK4-Fc融合多肽由与SEQ ID NO:243至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的ALK4-Fc融合多肽由与SEQ ID NO:248至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的ALK4-Fc融合多肽由与SEQ ID NO:250至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的ALK4-Fc融合多肽由与SEQ ID NO:251至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的ALK4-Fc融合多肽由与SEQ ID NO:252至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。在某些实施方案中，本公开文本的ALK7-Fc融合多肽由与SEQ ID NO:255至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组的核酸序列编码。
在某些方面，应进一步理解，编码变体ActRIIB多肽的主题核酸包括作为SEQ IDNO:3的变体的核酸。变体核苷酸序列包括相差一个或多个核苷酸取代、添加或缺失的序列，如等位基因变体；并且因此将包括与SEQ ID NO:4中指定的编码序列的核苷酸序列不同的编码序列。
在某些实施方案中，本公开文本提供与SEQ ID NO:3至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的或重组的核酸序列。本领域普通技术人员将了解，与SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:3的变体互补的核酸序列也在本公开文本的范围内。在其他实施方案中，本公开文本的核酸序列可以与异源核苷酸序列分离、重组和/或融合，或者在DNA文库中。
在其他实施方案中，本公开文本的核酸还包括在高严格度条件下与编码本公开文本的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白、ALK4或ALK7多肽的核酸(例如，SEQ ID NO:3)、其互补体序列或片段杂交的核苷酸序列。如上文所讨论，本领域普通技术人员将容易地理解，可以促进DNA杂交的适当严格度条件可以变化。本领域的普通技术人员应容易地理解，促进DNA杂交的适当严格度条件可以变化。例如，可以在约45℃下在6.0x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)下进行杂交，随后进行在50℃下2.0x SSC的洗涤。例如，洗涤步骤中的盐浓度可以选自在50℃下约2.0x SSC的低严格度至在50℃下约0.2x SSC的高严格度。另外，洗涤步骤中的温度可以从室温(约22℃)下的低严格度条件增加至约65℃下的高严格度条件。温度和盐两者都可以变化；或者温度或盐浓度可以保持恒定而改变另一变量。在一个实施方案中，本公开文本提供核酸，将其在室温下6x SSC的低严格度条件下杂交，之后进行在室温下2xSSC的洗涤。
由于遗传代码的简并性而与SEQ ID NO:3中所示的核酸不同的分离的核酸也在本公开文本的范围内。例如，通过超过一个三联体指定多种氨基酸。指定同一种氨基酸的密码子或同义密码子(例如，CAU和CAC是组氨酸的同义密码子)可以产生“沉默”突变，所述突变不影响蛋白质的氨基酸序列。然而，预期在哺乳动物细胞中存在确实引起主题蛋白质的氨基酸序列变化的DNA序列多态性。本领域技术人员将了解，由于天然等位基因变异，编码特定蛋白质的核酸的一个或多个核苷酸(最高约3％-5％的核苷酸)中的这些变异可能存在于给定物种的个体中。任何和所有此类核苷酸变异和所得氨基酸多态性都在本公开文本的范围内。
在某些实施方案中，本公开文本的重组核酸可以在表达构建体中与一个或多个调节核苷酸序列可操作地连接。调节核苷酸序列通常对于用于表达的宿主细胞将是适当的。对于各种宿主细胞，多种类型的适当表达载体和合适的调节序列是本领域中已知的。通常，所述一个或多个调节核苷酸序列可以包括但不限于启动子序列、前导序列或信号序列、核糖体结合位点、转录起始序列和终止序列、翻译起始序列和终止序列以及增强子或激活子序列。本公开文本涵盖本领域中已知的组成型或诱导型启动子。所述启动子可以是天然存在的启动子或组合超过一种启动子的元件的杂合启动子。表达构建体可以存在于细胞中的附加体如质粒上，或者可以将表达构建体插入染色体中。在优选的实施方案中，表达载体含有可选择的标记基因，以允许选择转化的宿主细胞。可选择的标记基因是本领域中公知的，并且将随着所用宿主细胞而变化。
在某些方面，主题核酸在包含编码变体ActRIIB多肽的核苷酸序列的表达载体中提供，并且与至少一个调节序列可操作地连接。调节序列是本领域所公认的并且被选择以引导变体ActRIIB多肽的表达。因此，术语调节序列包括启动子、增强子和其他表达控制元件。示例性调节序列描述于Goeddel；Gene Expression Technology:Methods inEnzymology,Academic Press,San Diego,CA(1990)中。例如，广泛多种表达控制序列中的任何一种均可以用于这些载体，以表达编码变体ActRIIB多肽的DNA序列，其中当该表达控制序列与DNA序列可操性地连接时，可以控制DNA序列的表达。此类有用的表达控制序列包括例如SV40的早期和晚期启动子、tet启动子、腺病毒或巨细胞病毒即时早期启动子、RSV启动子、lac系统、trp系统、TAC或TRC系统、表达由T7 RNA聚合酶引导的T7启动子、噬菌体λ的主要操纵子和启动子区、fd外壳蛋白的控制区、3-磷酸甘油酸激酶或其他糖分解的酶的启动子、酸性磷酸酶(例如Pho5)的启动子、酵母菌α-配对因子的启动子、杆状病毒系统的多角体启动子和其他已知控制原核细胞或真核细胞或其病毒的基因的表达的序列，和其各种组合。应当理解的是，表达载体的设计可以取决于这样的因素，如将要转化的宿主细胞的选择和/或希望表达的蛋白质的类型。此外，还应当考虑载体的拷贝数、控制拷贝数的能力和由该载体编码的任何其他蛋白质(例如抗生素标记)的表达。
本公开文本的重组核酸可以通过以下方式来产生：将克隆的基因或其部分连接至适合于在原核细胞、真核细胞(酵母、禽类、昆虫或哺乳动物)或二者中表达的载体中。用于产生重组变体ActRIIB多肽的表达媒介物包括质粒和其他载体。例如，适合的载体包括以下类型的质粒：用于在原核细胞(如大肠杆菌)中表达的pBR322来源的质粒、pEMBL来源的质粒、pEX来源的质粒、pBTac来源的质粒以及pUC来源的质粒。
一些哺乳动物表达载体含有促进载体在细菌中增殖的原核序列、以及在真核细胞中表达的一个或多个真核转录单元二者。pcDNAI/amp、pcDNAI/neo、pRc/CMV、pSV2gpt、pSV2neo、pSV2-dhfr、pTk2、pRSVneo、pMSG、pSVT7、pko-neo和pHyg来源的载体为适合用于转染真核细胞的哺乳动物表达载体的例子。这些载体中的一些用来自细菌质粒(如pBR322)的序列修饰，以促进在原核细胞和真核细胞二者中的复制和抗药性选择。可替代地，可以使用病毒的衍生物用于在真核细胞中瞬时表达蛋白质，这些病毒如牛乳头瘤病毒(BPV-1)或EB病毒(Epstein-Barr virus)(pHEBo、pREP来源的和p205)。其他病毒(包括逆转录病毒)表达系统的例子可以在以下基因治疗递送系统的描述中找到。在质粒的制备和宿主生物体的转化中采用的不同方法是本领域中熟知的。对于用于原核细胞和真核细胞两者的其他适合的表达系统以及一般重组程序，参见Molecular Cloning ALaboratory Manual,第2版,Sambrook,Fritsch和Maniatis编辑(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)第16和17章。在一些情况下，可能希望通过使用杆状病毒表达系统来表达重组多肽。这样的杆状病毒表达系统的例子包括pVL来源的载体(如pVL1392、pVL1393和pVL941)、pAcUW来源的载体(如pAcUW1)和pBlueBac来源的载体(如含有β-gal的pBlueBac III)。
在一个优选的实施方案中，将设计载体用于在CHO细胞中产生主题变体ActRIIB多肽，如Pcmv-Script载体(Stratagene,La Jolla,Calif.)、pcDNA4载体(Invitrogen,Carlsbad,Calif.)和pCI-neo载体(Promega,Madison,Wisc.)。将清楚的是，主题基因构建体可以用于在培养物中繁殖的细胞中引起主题变体ActRIIB多肽的表达，例如，以产生用于纯化的蛋白质，包括融合蛋白或变体蛋白。
在某些实施方案中，本公开文本涉及制备如本文所述的ActRIIB多肽的方法，所述ActRIIB多肽包括变体ActRIIB多肽以及包含所述变体ActRIIB多肽的同多聚体和异多聚体。这样的方法可以包括在合适的细胞(例如，CHO细胞或COS细胞)中表达任何本文公开的核酸。这样的方法可以包括：a)在适于表达可溶性ActRIIB多肽的条件下培养细胞，其中所述细胞包含ActRIIB多肽表达构建体。在一些实施方案中，所述方法还包括回收表达的ActRIIB多肽。ActRIIB多肽可以使用任何熟知的用于从细胞培养物获得蛋白质的技术作为粗制、部分纯化或高度纯化的级分回收。
本公开文本还涉及一种用重组基因转染的宿主细胞，所述重组基因包括一种或多种主题变体ActRIIB多肽的的编码序列(例如，SEQ ID NO:4)。所述宿主细胞可以是任何原核细胞或真核细胞。例如，本公开文本的变体ActRIIB多肽可以在细菌细胞如大肠杆菌、昆虫细胞(例如，使用杆状病毒表达系统)、酵母或哺乳动物细胞中表达。其他合适的宿主细胞是本领域技术人员已知的。
因此，本公开文本还涉及产生主题变体ActRIIB多肽的方法。例如，可以在适当条件下培养用编码变体ActRIIB多肽的表达载体转染的宿主细胞以允许ActRIIB多肽进行表达。所述变体ActRIIB多肽可以从含有所述变体ActRIIB多肽的细胞和培养基的混合物分泌和分离。可替代地，所述变体ActRIIB多肽可能保留在胞质或膜级分中，并且收获细胞，裂解并分离蛋白质。细胞培养物包括宿主细胞、培养基和其他副产物。用于细胞培养的合适的培养基是本领域中熟知的。主题变体ActRIIB多肽可以使用本领域中已知用于纯化蛋白质的技术从细胞培养基、宿主细胞或二者分离，所述技术包括离子交换色谱、凝胶过滤色谱、超滤、电泳以及使用对变体ActRIIB多肽的特定表位具有特异性的抗体进行的免疫亲和纯化。在优选的实施方案中，变体ActRIIB多肽是含有促进其纯化的结构域的融合蛋白。
在另一个实施方案中，编码纯化前导序列(如在重组变体ActRIIB多肽的所需部分的N末端处的聚(His)/肠激酶切割位点序列)的融合基因可以允许使用Ni2+金属树脂通过亲和色谱纯化表达的融合蛋白。然后可以随后通过用肠激酶处理去除纯化前导序列以提供纯化的变体ActRIIB多肽(例如，参见Hochuli等人,(1987)J.Chromatography 411:177；和Janknecht等人,PNAS USA 88:8972)。
用于制备融合基因的技术是熟知的。本质上，根据常规技术采用以下来进行编码不同多肽序列的各种DNA片段的接合：用于连接的钝端或交错端末端、用于提供适当末端的限制性酶消化、视需要的粘性末端填入，用于避免不期望的接合的碱性磷酸酶处理以及酶连接。在另一个实施方案中，可以通过常规技术(包括自动化DNA合成仪)来合成融合基因。可替代地，可以使用锚定引物对基因片段进行PCR扩增，所述锚定引物在两个连续基因片段之间产生了互补的单链突出端，随后可以使所述单链突出端退火以生成嵌合基因序列(参见例如，Current Protocols in Molecular Biology,Ausubel等人编辑,John Wiley&Sons:1992)。
5.筛选测定
在某些方面，本公开文本涉及主题变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB多肽)用于鉴定作为所述变体ActRIIB多肽的激动剂或拮抗剂的化合物(药剂)的用途。可以在组织(如肾、肺、心脏、骨、软骨、肌肉、脂肪和/或神经元)中测试通过此筛选鉴定的化合物，以评估其在体外调节组织生长的能力。另外地，可以针对在治疗人或动物的障碍或病症方面的功效来测试通过此筛选鉴定的化合物，所述障碍或病症如肺部障碍(例如，肺高血压、间质性肺疾病、特发性肺纤维化)、肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)、周围神经病、夏科-马里-图思病以及贫血(例如，与骨髓增生异常综合征、地中海贫血症或骨髓纤维化相关的贫血)。任选地，可以在动物模型中进一步测试这些化合物，以评估其在体内调节组织生长的能力。
存在多种方法用于筛选通过靶向变体ActRIIB多肽来调节组织生长的治疗剂。在某些实施方案中，可以进行化合物的高通量筛选以鉴定扰乱ActRIIB介导的对肾组织、肺组织、心脏组织、骨、软骨、肌肉、脂肪和/或神经元的生长的作用的药剂。在某些实施方案中，进行所述测定以筛选并鉴定特异性抑制或降低变体ActRIIB多肽与其结合配偶体(如野生型ActRIIB的配体(例如，激活素A、激活素B、GDF8、GDF11和BMP10))的结合的化合物。可替代地，可以使用所述测定来鉴定增强变体ActRIIB多肽与其结合配偶体如ActRIIB配体的结合的化合物。在另一实施方案中，所述化合物可以通过其与变体ActRIIB多肽相互作用的能力来鉴定。
多种测定形式将能胜任，并且根据本公开文本，本领域普通技术人员仍将理解本文未明确描述的那些测定形式。如本文所述，本公开文本的测试化合物(药剂)可以通过任何组合化学方法来产生。可替代地，主题化合物可以是在体内或体外合成的天然存在的生物分子。要针对用作组织生长调节剂的能力加以测试的化合物(药剂)可以例如由细菌、酵母、植物或其他生物体产生(例如，天然产物)，以化学方式产生(例如，小分子，包括肽模拟物)，或者以重组方式产生。本公开文本考虑的测试化合物包括非肽基有机分子、肽、多肽、肽模拟物、糖、激素和核酸分子。在具体实施方案中，测试药剂是分子量小于约2,000道尔顿的有机小分子。
本公开文本的测试化合物可以作为单一的离散实体来提供，或者在复杂性较高的文库中提供，如通过组合化学来制备。这些文库可以包含例如醇、烷基卤化物、胺、酰胺、酯、醛、醚和其他类别的有机化合物。将测试化合物呈递至测试系统可以呈分离的形式或者作为化合物的混合物，尤其在初始筛选步骤中。任选地，所述化合物可以任选地用其他化合物衍生并具有促进所述化合物分离的衍生基团。衍生基团的非限制性例子包括生物素、荧光素、地高辛(digoxygenin)、绿色荧光蛋白、同位素、多组氨酸、磁珠、谷胱甘肽S转移酶(GST)、可光激活的交联剂或其任何组合。
在测试化合物和天然提取物文库的多种药物筛选程序中；期望高通量测定以使在给定时间段内调查的化合物的数量达到最大。在无细胞系统(如可以用纯化或半纯化的蛋白质衍生的无细胞系统)中进行的测定通常优选作为“主要”筛选，因为其可以被生成以允许通过测试化合物介导的分子靶标中的改变的快速开发和相对容易的检测。此外，测试化合物的细胞毒性或生物利用度的影响通常在体外系统中可以忽略，而是所述测定主要集中于药物对分子靶标的作用，如可以在变体ActRIIB多肽与其结合蛋白(例如，ActRIIB配体)之间的结合亲和力的改变中所表现。
仅为了说明，在本公开文本的示例性筛选测定中，如对于所述测定的意图合适的，使目的化合物与通常能够与ActRIIB配体结合的分离且纯化的ActRIIB多肽接触。然后向化合物和ActRIIB多肽的混合物中添加含有ActRIIB配体的组合物。ActRIIB/ActRIIB配体复合物的检测和定量提供了用于确定化合物在抑制(或增强)ActRIIB多肽与其结合蛋白之间的复合物形成方面的功效的方法。可以通过使用各种浓度的测试化合物获得的数据产生剂量反应曲线来评估化合物的功效。此外，还可以进行对照测定以提供用于比较的基线。例如，在对照测定中，将分离且纯化的ActRIIB配体添加至含有ActRIIB多肽的组合物中，并且在不存在测试化合物的情况下对ActRIIB/ActRIIB配体复合物的形成进行定量。应当理解，一般来说，可以混合反应物的顺序可变，并且可以同时混合反应物。此外，代替纯化的蛋白质，可以使用细胞提取物和溶解产物来提供适合的无细胞测定系统。
可以通过多种技术检测ActRIIB多肽与其结合蛋白之间的复合物形成。例如，可以使用例如可检测标记的蛋白质，如放射性标记的(例如，32P、35S、14C或3H)、荧光标记的(例如，FITC)或酶标记的ActRIIB多肽或其结合蛋白，通过免疫测定或通过色谱检测来对复合物形成的调节进行定量。
在某些实施方案中，本公开文本考虑在直接或间接地测量ActRIIB多肽与其结合蛋白之间的相互作用程度中使用荧光偏振测定和荧光共振能量转移(FRET)测定。此外，其他检测模式，如基于光波导(PCT公开案WO 96/26432和美国专利号5,677,196)、表面等离子体共振(SPR)、表面电荷传感器和表面力传感器的那些，与本文所述的许多实施方案相容。
此外，本公开文本考虑用于鉴定破坏或加强ActRIIB多肽与其结合蛋白之间的相互作用的药剂的相互作用陷阱测定(也称为“双杂交测定”)。参见例如，美国专利号5,283,317；Zervos等人(1993)Cell 72:223-232；Madura等人(1993)J Biol Chem 268:12046-12054；Bartel等人(1993)Biotechniques 14:920-924；以及Iwabuchi等人(1993)Oncogene8:1693-1696。在具体实施方案中，本公开文本考虑使用反向双杂交系统来鉴定解离ActRIIB多肽与其结合蛋白之间的相互作用的化合物(例如，小分子或肽)。参见例如，Vidal和Legrain,(1999)Nucleic Acids Res 27:919-29；Vidal和Legrain,(1999)TrendsBiotechnol 17:374-81；以及美国专利号5,525,490；5,955,280；和5,965,368。
在某些实施方案中，主题化合物是通过其与本公开文本的变体ActRIIB多肽相互作用的能力加以鉴定。化合物与变体ActRIIB多肽之间的相互作用可以是共价的或非共价的。例如，可以使用体外生物化学方法在蛋白质水平上鉴定这种相互作用，所述体外生物化学方法包括光交联、放射性标记的配体结合以及亲和色谱(Jakoby WB等人,1974,Methodsin Enzymology 46:1)。在某些情况下，可以在基于机制的测定(如用于检测与变体ActRIIB多肽结合的化合物的测定)中筛选化合物。这可以包括固相或流体相结合事件。可替代地，编码变体ActRIIB多肽的基因可以用报告系统(例如，β-半乳糖苷酶、荧光素酶或绿色荧光蛋白)转染到细胞中，并且优选通过高通量筛选或用文库的单独成员针对文库进行筛选。可以使用其他基于机制的结合测定，例如，检测自由能变化的结合测定。结合测定可以用固定至孔、珠或芯片的靶标或通过固定化抗体捕获的靶标来进行，或者通过毛细管电泳进行解析。通常可以使用比色或荧光或表面等离子共振来检测结合的化合物。
在某些方面，本公开文本提供用于降低肺高血压和减少促进肺高血压的发病机制的方法和药剂，例如，通过拮抗ActRIIB多肽和/或ActRIIB配体的功能来实现。因此，可以在体外或在体内，在全细胞或组织中测试所鉴定的任何化合物(例如变体ActRIIB多肽)，以确认其降低肺高血压的能力。本领域中已知的各种方法可以用于此目的。例如，进行本公开文本的方法使得通过与ActRIIB配体(例如，激活素A、激活素B、GDF8、GDF11或BMP10)结合而激活的经由ActRIIB蛋白的信号转导已经被减少或被抑制。
本公开文本还考虑体内测定来测量本文所述的任何化合物(例如变体ActRIIB多肽)对肺高血压的作用。本领域中已知的肺高血压(例如肺动脉高压)的多种动物模型可以用于此目的。这些包括如慢性低氧诱导的肺高血压(例如Sugen低氧模型)和野百合碱诱导的肺高血压的动物模型。任何化合物对这些动物模型的作用可以通过测量诸如以下的各种参数来评估：血管肌肉度、肺动脉截面积、右心室每搏输出量、右心室肥大、右心室收缩压和存活率。这些参数部分可以通过去除并测量(例如重量和长度)每只动物的左心室(LV)、隔膜(S)和右心室(RV)来评估。肥大部分可以通过计算RV/LV+S来评估。还可以使用组织病理学评分来测量血管肌肉度。在一些实施方案中，本公开文本的方法和药剂可以与当前用于治疗肺高血压的另外的活性剂和/或支持疗法(例如西地那非)组合进行筛选。在一些实施方案中，可以将本公开文本的方法和药剂与当前用于治疗肺高血压的活性剂和/或支持疗法(例如西地那非)进行比较。
在某些方面，本公开文本提供用于减少肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)和减少促进此类疾病或病症的发病机制的方法和药剂，例如，通过拮抗ActRIIB多肽和/或ActRIIB配体的功能来实现。因此，可以在体外或在体内，在全细胞或组织中测试所鉴定的任何化合物(例如变体ActRIIB多肽)，以确认其减少肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的能力。本领域中已知的各种方法可以用于此目的。例如，进行本公开文本的方法使得通过与ActRIIB配体(例如，激活素A、激活素B、GDF8、GDF11或BMP10)结合而激活的经由ActRIIB蛋白的信号转导已经被减少或被抑制。
本公开文本还考虑体内测定来测量本文所述的任何化合物(例如变体ActRIIB多肽)对肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的作用。本领域中已知的肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的多种动物模型可以用于此目的。这些包括如肾纤维化的单侧输尿管梗阻(UUO)模型和Col4a3-/-Alport模型的动物模型。任何化合物对这些动物模型的作用可以通过测量诸如以下的各种参数来评估：各种纤维化基因(纤维粘连蛋白、PAI-1、CTGF、Col-I、Col-III和a-SMA),炎症基因(MCP-1和TNFα)、血小板应答蛋白1(Thbs1)、肾损伤基因(NGAL)和TGFβ超家族配体(TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3和激活素A)的表达。这些TGFβ超家族配体的上调与肾纤维化/肾功能障碍高度相关，并且它们用作肾损伤的良好指标。通常，几种纤维化基因在纤维化期间被TGFβ上调。Thbs1是TGFβ的直接下游靶标，并且也在调节TGFβ激活方面(包括在纤维化期间)起作用。测量Thbs1的表达水平给出纤维化水平的指示，如Thbs1表达增加可能意指TGFβ表达增加。在一些实施方案中，本公开文本的方法和药剂可以与当前用于治疗肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的另外的活性剂和/或支持疗法组合进行筛选。在一些实施方案中，可以将本公开文本的方法和药剂与当前用于治疗肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的活性剂和/或支持疗法进行比较。
在某些方面，本公开文本提供用于治疗、预防肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)或降低所述疾病或病症的进展速率和/或严重性的方法和药剂，例如，通过拮抗ActRIIB多肽和/或ActRIIB配体的功能来实现。因此，可以在体外或在体内，在全细胞或组织中测试所鉴定的任何化合物(例如变体ActRIIB多肽)，以确认其治疗肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的能力。本领域中已知的各种方法可以用于此目的。例如，进行本公开文本的方法使得通过与ActRIIB配体(例如，激活素A、激活素B、GDF8、GDF11或BMP10)结合而激活的经由ActRIIB蛋白的信号转导已经被减少或被抑制。
在某些方面，本公开文本提供用于刺激肌肉生长和增加肌肉质量的方法和药剂，例如，通过拮抗ActRIIB多肽和/或ActRIIB配体的功能来实现。因此，可以在体外或在体内，在全细胞或组织中测试所鉴定的任何化合物，以确认其调节肌肉生长的能力。本领域中已知的各种方法可以用于此目的。例如，进行本公开文本的方法使得通过与ActRIIB配体(例如，激活素A、激活素B、GDF8、GDF11或BMP10)结合而激活的经由ActRIIB蛋白的信号转导已经被减少或被抑制。将认识到，如与经由ActRIIB蛋白的信号转导尚未受到如此影响的生物体(或生物体群体)的肌肉质量相比，相应生物体中肌肉组织的生长会导致所述生物体中的肌肉质量增加。
例如，变体ActRIIB多肽或测试化合物对肌肉细胞生长/增殖的作用可以通过测量与肌原细胞的增殖相关的Pax-3和Myf-5的基因表达以及与肌肉分化相关的MyoD的基因表达来确定(例如，Amthor等人,Dev Biol.2002,251:241-57)。已知GDF8下调Pax-3和Myf-5的基因表达，并且阻止MyoD的基因表达。预期变体ActRIIB多肽或测试化合物拮抗GDF8的这种活性。基于细胞的测定的另一个例子包括测量成肌细胞如C(2)C(12)成肌细胞在变体ActRIIB多肽或测试化合物存在下的增殖(例如，Thomas等人,J Biol Chem.2000,275:40235-43)。
本公开文本还考虑体内测定来测量肌肉质量和强度。例如，Whittemore等人(Biochem Biophys Res Commun.2003,300:965-71)公开了一种测量小鼠中增加的骨骼肌质量和增加的握力强度的方法。任选地，这种方法可以用于确定测试化合物(例如，变体ActRIIB多肽)对肌肉疾病或病症(例如肌肉质量受限的那些疾病)的治疗作用。
在某些方面，本公开文本提供用于调节(刺激或抑制)骨形成和增加骨量的方法和药剂。因此，可以在体外或在体内，在全细胞或组织中测试所鉴定的任何化合物，以确认其调节骨或软骨生长的能力。本领域中已知的各种方法可以用于此目的。例如，变体ActRIIB多肽或测试化合物对骨或软骨生长的作用可以通过在基于细胞的测定中测量Msx2的诱导或骨原细胞至成骨细胞的分化来确定(参见例如，Daluiski等人,Nat Genet.2001,27(1):84-8；Hino等人,Front Biosci.2004,9:1520-9)。基于细胞的测定的另一个例子包括分析主题变体ActRIIB多肽和测试化合物在间充质祖细胞和成骨细胞中的成骨活性。为了说明，构建表达ActRIIB多肽的重组腺病毒以感染多能间充质祖细胞C3H10T1/2细胞、成骨细胞前体C2C12细胞和成骨细胞TE-85细胞。然后通过测量碱性磷酸酶、骨钙蛋白和基质矿化的诱导来确定成骨活性(参见例如，Cheng等人,J bone Joint Surg Am.2003,85-A(8):1544-52)。
本公开文本还考虑体内测定来测量骨或软骨生长。例如，Namkung-Matthai等人，Bone,28:80-86(2001)披露了一种大鼠骨质疏松症模型，其中研究了骨折后早期的骨修复。Kubo等人,Steroid Biochemistry&Molecular Biology,68:197-202(1999)也披露了一种大鼠骨质疏松症模型，其中研究了骨折后后期期间的骨修复。这些参考文献关于它们的用于研究骨质疏松性骨折的大鼠模型的公开内容通过引用以其整体并入本文。在某些方面，本公开文本利用本领域中已知的骨折愈合测定。这些测定包括骨折技术、组织学分析和生物力学分析，它们描述于例如美国专利号6,521,750中，所述专利关于用于引起骨折以及测量骨折程度的实验方案和修复过程的公开内容通过引用以其整体并入。
在某些方面，本公开文本提供用于控制体重增加和肥胖症的方法和药剂。在细胞水平，脂肪细胞增殖和分化在肥胖症的发展中是关键的，其导致额外的脂肪细胞(脂肪细胞)的生成。因此，可以在体外或在体内，在全细胞或组织中测试所鉴定的任何化合物，以通过测量脂肪细胞增殖或分化来确认其调节脂肪生成的能力。本领域中已知的各种方法可以用于此目的。例如，变体ActRIIB多肽(例如，可溶性变体ActRIIB多肽)或测试化合物对脂肪生成的作用可以通过在基于细胞的测定中测量3T3-L1前脂肪细胞至成熟脂肪细胞的分化来确定，如通过观察油红O染色囊泡中三酰基甘油的累积和某些脂肪细胞标记如FABP(aP2/422)和PPARγ2的出现来测量。参见例如，Reusch等人,2000,Mol Cell Biol.20:1008-20；Deng等人,2000,Endocrinology.141:2370-6；Bell等人,2000,Obes Res.8:249-54。基于细胞的测定的另一个例子包括分析变体ActRIIB多肽和测试化合物在脂肪细胞或脂肪细胞前体细胞(例如，3T3-L1细胞)的增殖中的作用，例如通过监测溴脱氧尿苷(BrdU)阳性细胞。参见例如，Pico等人,1998,Mol Cell Biochem.189:1-7；Masuno等人,2003,Toxicol Sci.75:314-20。
应理解，本公开文本的筛选测定不仅适用于主题变体ActRIIB多肽，也适用于包括ActRIIB多肽的激动剂和拮抗剂在内的任何测试化合物。此外，这些筛选测定可用于药物靶标验证和质量控制目的。
6.示例性治疗用途
在某些实施方案中，本公开文本的组合物(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以用于治疗或预防与TGFβ超家族配体如ActRIIB和/或ActRIIB配体(例如，激活素A、激活素B、GDF8、GDF11或BMP10)的异常活性相关的疾病或病症。这些疾病、障碍或病症在本文中通常称为“ActRIIB相关病症”。在某些实施方案中，本公开文本提供通过向有需要的个体施用治疗有效量的如本文所述的变体ActRIIB蛋白来治疗或预防所述个体的方法。这些方法特别旨在动物且更特别是人的治疗性和预防性治疗。术语“受试者”、“个体”或“患者”在整个说明书中是可互换的，并且是指人或非人动物。这些术语包括哺乳动物，如人、非人灵长类动物、实验室动物、牲畜(包括牛、猪、骆驼等)、伴侣动物(例如，犬、猫、其他家养动物等)和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。在特定实施方案中，患者、受试者或个体是人。
术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”、“减轻”等在本文中通常意指获得期望的药理学和/或生理学作用，并且还可以用于指改进、减轻和/或降低所治疗病症的一种或多种临床并发症的严重性。就完全或部分延迟疾病、病症或其并发症的发作或复发而言，所述作用可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病或病症和/或可归因于所述疾病或病症的不利影响而言，所述作用可以是治疗性的。如本文所用的“治疗”涵盖对哺乳动物、特别是人的疾病或病症的任何治疗。如本文所用，“预防”障碍或病症的治疗剂是指如下化合物，其在统计样本中相对于未治疗的对照样品降低了治疗的样品中所述障碍或病症的发生率，或者相对于未治疗的对照样品延迟了疾病或病症的发作。
通常，如本公开文本中所述对疾病或病症的治疗或预防是通过以“有效量”施用本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)来实现。药剂的有效量是指在必要的剂量和持续必要的时间段的情况下有效实现所需的治疗或预防结果的量。本公开文本药剂的“治疗有效量”可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及药剂在个体中引发所需反应的能力的因素而变化。“预防有效量”是指在剂量和持续时间上有效实现所需预防结果所需要的量。
在某些方面，本公开文本考虑呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白与一种或多种另外的活性剂或其他支持疗法组合用于治疗或预防疾病或病症(例如，贫血、肾脏疾病、肺高血压、肺动脉高压和ILD)的用途。如本文所用，“与……组合(in combination with)”、“……的组合”、“与……组合(combined with)”或“联合”施用是指任何施用形式，使得另外的活性剂或支持疗法(例如，第二、第三、第四等)在体内仍有效(例如，多种化合物在患者体内同时有效持续一定时间段，这可以包括那些化合物的协同效应)。有效性可能与药剂在血液、血清或血浆中的可测量浓度无关。例如，不同的治疗化合物可以在相同的制剂中或在单独的制剂中同时或依次施用，并且可以按不同的时间表施用。因此，接受这样的治疗的受试者可以受益于不同活性剂或疗法的组合作用。本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白可以与一种或多种其他另外的药剂或支持疗法(如本文所公开的那些)同时施用，在所述一种或多种其他另外的药剂或支持疗法之前或之后施用。通常，每种活性剂或疗法将以针对该特定药剂确定的剂量和/或时间表来施用。方案中要用的特定组合将考虑到本公开文本的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白与另外的活性剂或疗法的相容性和/或所需作用。
ActRIIB与ActRIIB配体之间的内源性复合物在组织生长以及早期发育过程中发挥重要作用，如各种结构或一种或多种发育后能力(包括性发育、垂体激素产生以及骨和软骨的产生)的正确形成。因此，ActRIIB相关病症包括异常组织生长和发育缺陷。另外，ActRIIB相关病症包括但不限于细胞生长和分化障碍，如肺部障碍(例如，肺高血压、间质性肺疾病、特发性肺纤维化)、肾脏疾病(例如，奥尔波特综合征和局灶节段性肾小球硬化)、周围神经病、夏科-马里-图思病、贫血(例如，与骨髓增生异常综合征、地中海贫血症或骨髓纤维化相关的贫血)、炎症、过敏、自身免疫性疾病、感染性疾病和肿瘤。在某些实施方案中，本公开文本提供促进人体组织生长或者减少或预防组织损失的方法。示例性组织包括肾组织、肺组织、心脏组织、骨、软骨、肌肉、脂肪和神经组织。
示例性ActRIIB相关病症包括肌肉障碍(例如神经肌肉障碍、肌肉退行性障碍、肌营养不良、肌肉萎缩、与COPD相关的肌肉消耗、肌肉消耗综合征、肌少症和恶病质)、脂肪组织障碍(例如，肥胖症)、2型糖尿病、骨退行性疾病(例如，骨质疏松症)、肺部障碍(例如，肺高血压、肺动脉高压、间质性肺疾病、特发性肺纤维化、充血性阻塞性肺疾病(COPD))、肾脏疾病(例如，奥尔波特综合征和局灶节段性肾小球硬化)、周围神经病以及夏科-马里-图思病。其他示例性ActRIIB相关病症包括贫血(例如，与骨髓增生异常综合征相关的贫血、与地中海贫血症相关的贫血或与骨髓纤维化相关的贫血)、组织修复(例如，伤口愈合)、神经系统变性疾病(例如，肌萎缩侧索硬化、脊髓性肌萎缩)、免疫障碍(例如，与淋巴细胞的异常增殖或功能相关的障碍)以及肥胖症或与脂肪细胞的异常增殖相关的障碍。
在一些实施方案中，本公开文本涉及用于治疗患者的肌肉相关障碍的方法，其包括向有需要的患者施用如本文所述的ActRIIB多肽，包括变体ActRIIB多肽以及包含所述变体ActRIIB多肽的同多聚体和异多聚体。在一些实施方案中，所述障碍与不期望的低肌肉生长和/或肌肉无力相关。这样的障碍包括肌肉萎缩、肌营养不良、肌萎缩侧索硬化(ALS)、脊髓性肌萎缩、肌肉消耗障碍、恶病质、厌食症、DMD综合征、BMD综合征、艾滋病消瘦综合征、肌营养不良、神经肌肉疾病、运动神经元病、神经肌肉接头疾病、面肩胛肱型肌营养不良、夏科-马里-图思病、周围神经病和炎性肌病。
在某些实施方案中，本文所述的ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)用作肌营养不良的治疗的一部分。术语“肌营养不良”是指一组退行性肌肉疾病，其特征为骨骼肌以及有时心肌和呼吸肌逐渐虚弱和衰退。肌营养不良是以进行性肌肉消耗和肌无力为特征的遗传病，其始于肌肉的微观变化。当肌肉随时间退化时，人的肌肉力量下降。可以用包括主题变体ActRIIB蛋白的方案治疗的示例性肌营养不良包括：迪谢内肌营养不良(DMD)、贝克肌营养不良(BMD)、埃默里-德赖弗斯肌营养不良(EDMD)、肢带型肌营养不良(LGMD)、面肩胛肱型肌营养不良(FSH或FSHD)(也称为Landouzy-Dejerine)、强直性肌营养不良(MMD)(也称为施泰纳特病)、眼咽型肌营养不良(OPMD)、远端型肌营养不良(DD)、先天性肌营养不良(CMD)。
迪谢内肌营养不良(DMD)首先由法国神经学家Guillaume Benjamin AmandDuchenne在19世纪60年代描述。贝克肌营养不良(BMD)以德国医生Peter Emil Becker的名字命名，他在20世纪50年代首次描述DMD的这种变体。DMD是男性中最常见的遗传病之一，每3,500名男孩中累及一名。当位于X染色体短臂上的抗肌萎缩蛋白基因被破坏时发生DMD。由于雄性仅携带X染色体的一个拷贝，所以他们只有一个抗肌萎缩蛋白基因拷贝。在没有抗肌萎缩蛋白的情况下，肌肉在收缩和放松的循环中容易受损。虽然在所述疾病的早期，肌肉通过再生进行补偿，但后来肌肉祖细胞无法跟上持续的损伤并且健康的肌肉被非功能性纤维脂肪组织所替代。
BMD由抗肌萎缩蛋白基因的不同突变引起。BMD患者具有一些抗肌萎缩蛋白，但数量不足或质量较差。具有一些抗肌萎缩蛋白保护BMD患者的肌肉免于像DMD患者一样严重或一样快速地退化。
例如，研究表明，在体内阻断或消除GDF8的功能可以有效地治疗DMD和BMD患者中的至少某些症状。因此，主题变体ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以用作GDF8抑制剂(拮抗剂)，并且构成在DMD和BMD患者体内阻断GDF8和/或ActRIIB的功能的替代性手段。
在其他实施方案中，主题ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以用于形成药物组合物，所述药物组合物可以有益地用于预防、治疗或减轻涉及神经变性的疾病宿主的症状。不希望受任何具体理论的束缚，主题ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以拮抗通过I型受体ALK7介导的抑制性反馈机制，从而允许新神经元生长和分化。作为药物组合物的主题ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以有益地用于预防、治疗或减轻具有神经变性的疾病的症状，包括阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)、肌萎缩侧索硬化(ALS)、脊髓性肌萎缩(SMA)和亨廷顿病(HD)。
AD是一种慢性的、不可治愈且不可阻挡的中枢神经系统(CNS)障碍，其逐渐发生，导致记忆丧失、反常行为、人格改变以及思考能力下降。这些损失与特定类型的脑细胞死亡以及它们之间连接的断裂有关。AD已经被描述为儿童逆向发育。在大多数患有AD的人中，症状在60岁之后出现。最早的症状包括近期记忆丧失、错误判断以及人格改变。在疾病后期，患有AD者可能会忘记如何进行简单的任务，比如洗手。最后，患有AD的人丧失所有推理能力，并且变得依赖于他人进行日常护理。最终，所述疾病变得如此令人虚弱，以致于患者卧床不起并且通常患上共存的疾病。AD患者最常在疾病发作后8至20年死于肺炎。
PD是一种慢性的、不可治愈且不可阻挡的CNS障碍，其逐渐发生并且导致失控的身体活动、强直、震颤和步态困难。这些运动系统问题与产生多巴胺的脑区域中的脑细胞死亡有关，多巴胺是一种帮助控制肌肉活动的化学物质。在大多数患有PD的人中，症状在50岁之后出现。PD的初始症状是影响四肢、特别是手或嘴唇的明显震颤。PD的后续特有症状是运动僵硬或缓慢、曳足而行、弓背姿态以及平衡受损。存在众多种继发性症状，如记忆丧失、痴呆、抑郁、情绪改变、吞咽困难、言语异常、性功能障碍以及膀胱和肠问题。这些症状会开始干扰日常活动，如拿叉子或读报。最终，患有PD的人变得如此严重地失能以致于卧床不起。患有PD的人通常死于肺炎。
这些神经疾病的病因仍在很大程度上是未知的。它们通常被定义为不同的疾病，但却在基础过程方面清楚地显示特别的相似性，并且一般显示远大于单凭偶然所预期的重叠症状。当前的疾病定义未能适当地处理重叠问题，并且已经有人呼吁对神经变形障碍的新分类。
HD是另一种神经系统变性疾病，其源自某些脑区域中神经元的遗传程序性变性。这种变形引起失控的运动、智能丧失以及情绪困扰。HD是一种家族性疾病，通过野生型基因中的显性突变从父母传给孩子。HD的一些早期症状是情绪波动、抑郁、易激惹，或者驾驶困难、学习新事物困难、记东西困难或作决定困难。随着疾病进展，集中于智力任务变得越来越困难，并且患者可能难以自己进食和吞咽。疾病进展速率和发作年龄因人而异。
泰-萨克斯病和桑德霍夫病是因缺乏溶酶体β-氨基己糖苷酶而引起的糖脂贮积症(Gravel等人,The Metabolic Basis ofInherited Disease,Scriver等人编辑,McGraw-Hill,纽约,第2839-2879页,1995)。在两种障碍中，GM2神经节苷脂和β-氨基己糖苷酶的相关糖脂底物在神经系统中积累并触发急性神经变性。在大多数严重形式中，症状的发作在婴儿期早期开始。然后接着发生急剧的神经变性过程，受影响的婴儿展现运动功能障碍、癫痫、视力丧失和耳聋。通常截至2-5岁年龄发生死亡。已经证实了经由细胞凋亡机制发生的神经元损失(Huang等人,Hum.Mol.Genet.6:1879-1885,1997)。
众所周知，细胞凋亡在AIDS发病机理中在免疫系统中发挥作用。然而，HIV-1还诱导神经疾病。Shi等人(J.Clin.Invest.98:1979-1990,1996)在体外模型中以及在AIDS患者的脑组织中检查了由中枢神经系统(CNS)的HIV-1感染诱导的细胞凋亡，并且发现原代脑培养物的HIV-1感染在体外诱导神经元和星形胶质细胞的细胞凋亡。在来自10/11名AIDS患者的脑组织中也检测到了神经元和星形胶质细胞的细胞凋亡，所述患者包括5/5名患有HIV-1痴呆的患者和4/5名非痴呆患者。
神经元损失也是朊病毒病的突出特征，所述朊病毒病如人的克罗伊茨费尔特-雅各布病、牛的BSE(疯牛病)、绵羊和山羊的羊瘙痒病以及猫的猫海绵状脑病(FSE)。
主题ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)还可以用于预防、治疗和减轻各种周围神经系统(PNS)障碍的症状，如下文所述的障碍。PNS由通往CNS或从CNS分支的神经构成。周围神经处理体内多种多样的功能，包括感觉、运动和自主功能。在个体患有周围神经病时，PNS的神经已经受损。神经损伤可能因多种原因所致，如疾病、身体损伤、中毒或营养不良。这些因素可能影响传入神经或传出神经。根据损伤原因，神经细胞轴突、其保护性髓鞘或二者可能被损伤或破坏。
术语“周围神经病”涵盖众多种障碍，其中脑和脊髓外部的神经(即周围神经)已经受损。周围神经病还可以被称为周围神经炎，或者如果许多神经受累，可以使用术语多神经病或多神经炎。
周围神经病是一种分布广泛的障碍，并且有许多潜在病因。这些病因中的一些是常见的，如糖尿病，并且其他病因极端罕见，如丙烯酰胺中毒和某些遗传病。世界范围内最常见的周围神经病的病因是麻风。麻风是由细菌麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)引起的，其攻击受影响的人的周围神经。虽然麻风在美国是罕见的，但根据世界卫生组织收集的统计数据，世界范围内估计有115万人患有麻风。
在美国，糖尿病是周围神经病的最常见的已知病因。据估计美国和欧洲有超过1700万人患有糖尿病相关的多神经病。许多神经病是特发性的，未能找到已知病因。美国最常见的遗传性周围神经病是夏科-马里-图思病(CMT)，其影响大约125,000人。
另一种比较出名的周围神经病是吉兰-巴雷综合征，其源自与病毒性疾病(如巨细胞病毒、EB病毒和人免疫缺陷病毒(HIV))或细菌感染(包括空肠弯曲杆菌(Campylobacterjejuni)和莱姆病)相关的并发症。世界范围内的发病率为每年大约1.7例/100,000人。周围神经病的其他熟知病因包括慢性酒精中毒、水痘带状疱疹病毒感染、肉毒中毒和脊髓灰质炎。周围神经病可能作为原发性症状而发展，或者其可能由于另一种疾病而发生。例如，周围神经病仅为诸如淀粉样变性神经病、某些癌症或遗传性神经系统障碍的疾病的一种症状。这样的疾病可能影响周围神经系统(PNS)和中枢神经系统(CNS)以及其他身体组织。
可用主题ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)治疗的其他PNS疾病包括：臂丛神经病(臂丛的颈神经根和第一胸神经根、神经干、神经索和周围神经成分的疾病)。临床表现包括区域性疼痛、感觉异常、肌无力和上肢感觉减退。这些障碍可能与创伤相关，包括产伤；胸廓出口综合征；肿瘤、神经炎、放射疗法；以及其他病症。参见Adams等人,Principles of Neurology,第6版,第1351-2页)；Diabetic Neuropathies(peripheral,autonomic,and cranial nerve disorders that are associated withdiabetes mellitus)。这些病症通常源自涉及为神经供血的小血管(神经滋养血管)的糖尿病性微血管损伤。可能与糖尿病性神经病相关的相对常见的病症包括第三神经麻痹；单神经病；多发性单神经病；糖尿病肌萎缩；痛性多神经病；自主神经病；以及胸腹部神经病(参见Adams等人,Principles of Neurology,第6版,第1325页)；单神经病(孤立地涉及单一周围神经的疾病或创伤，或者与弥漫性周围神经功能障碍的证据不成比例的疾病或创伤)。多发性单神经病是指特征为多处孤立的神经损伤的病症。单神经病可能源自众多种病因，包括缺血；创伤性损伤；压迫；结缔组织病；劳损性功能障碍；以及其他病症)；神经痛(沿周围神经或脑神经的走向或分布发生的剧烈疼痛或酸痛)；周围神经系统肿瘤(源自周围神经组织的肿瘤)。这包括神经纤维瘤；神经鞘瘤；颗粒细胞瘤；以及恶性周围神经鞘瘤。参见DeVita Jr等人,Cancer:Principles and Practice of Oncology,第5版,第1750-1页)；Nerve Compression Syndromes(mechanical compression of nerves or nerve rootsfrom internal or external causes。这些可能导致神经冲动的传导阻滞，例如由于髓鞘功能障碍或轴突损失所致。神经和神经鞘损伤可能由以下引起：缺血；炎症；直接机械影响；或者神经炎(指示周围神经或脑神经的炎症的通用术语)。临床表现可能包括疼痛；感觉异常；轻瘫；或感觉减退(hyperthesia)；多神经病(多个周围神经的疾病)。将各种形式依据以下来分类：受影响神经的类型(例如，感觉、运动或自主)；神经损伤的分布(例如，远端与近端)；主要影响的神经成分(例如，脱髓鞘与轴突)；病因；或者遗传模式。
类似地，主题ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)提供在需要肌肉生长的其他疾病状况中增加肌肉质量的有效手段。例如，ALS(也称为卢伽雷氏病(Lou Gehrig's disease))(运动神经元疾病)是一种慢性、不可治愈且不可阻挡的CNS障碍，其攻击运动神经元(将脑与骨骼肌连接的CNS成分)。在ALS中，运动神经元恶化并最终死亡，并且虽然人的大脑通常保持充分的功能和警觉，但是移动的命令永远不会到达肌肉。大多数患有ALS的人年龄在40与70岁之间。首先减弱的运动神经元是通向手臂或腿的那些运动神经元。患有ALS的人可能具有行走困难，他们可能会掉东西、跌倒、说话含糊以及无法控制地笑或哭。最终，四肢的肌肉开始萎缩而停止使用。这种肌肉无力将变得虚弱，并且个人将需要轮椅或变得无法起床。疾病发作后3-5年，大多数ALS患者死于呼吸衰竭或呼吸机辅助并发症如肺炎。
ActRIIB蛋白使用主题ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)诱导的增加的肌肉质量也可能有益于患有肌肉消耗疾病的那些患者。Gonzalez-Cadavid等人(同上)报道，GDF8表达与人体中的无脂肪质量成反比，并且GDF8基因的表达增加与患有艾滋病消瘦综合征的男性的体重减轻相关。通过抑制AIDS患者中GDF8的功能，即使不能完全消除但至少可以减轻某些AIDS症状，从而显著改善AIDS患者的生活质量。
因为GDF8功能的损失还与在不减少营养摄入的情况下的脂肪损失相关(Zimmers等人，同上；McPherron和Lee，同上)，主题ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以进一步用作减缓或预防肥胖症和2型糖尿病的发展的治疗剂。
癌症厌食症-恶病质综合征是癌症中最令人虚弱且危及生命的方面。癌症厌食症-恶病质综合征的进行性体重减轻是许多类型的癌症的共同特征，并且不仅导致生活质量差和对化学疗法反应差，而且与在没有体重减轻的具有类似肿瘤的患者中发现的相比，存活时间更短。与厌食症、脂肪和肌肉组织消耗、心理困扰和较低的生活质量相关，恶病质起因于癌症与宿主之间的复杂相互作用。它是癌症患者中最常见的死亡原因之一，并且存在于80％死亡病例中。它是代谢紊乱影响蛋白质、碳水化合物和脂肪代谢的复杂例子。肿瘤产生直接和间接异常，从而导致厌食症和体重减轻。目前，没有控制或逆转所述过程的治疗。癌症厌食症-恶病质综合征影响细胞因子产生、脂质动员和蛋白水解诱导因子的释放以及中间代谢的改变。虽然厌食症很常见，但单独食物摄入减少无法解释癌症患者身体成分的变化，并且增加营养摄入无法逆转消耗综合症。如果在六个月时期内发生非自愿体重减轻超过发病前体重的百分之五，则应怀疑在癌症患者中有恶病质。本文公开的ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以用于治疗激活素依赖性癌症，如卵巢癌。
因为发现GDF8在成年小鼠中的全身过表达诱导与在人恶病质综合征中所见类似的明显肌肉和脂肪损失(Zimmers等人，同上)，作为药物组合物的主题ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以有益地用于预防、治疗或减轻其中期望肌肉生长的恶病质综合征的症状。
在其他实施方案中，本公开文本提供诱导骨和/或软骨形成、预防骨损失、增加骨矿化或预防骨去矿化的方法。例如，主题ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可应用于在人和其他动物中治疗骨质疏松症以及骨折和软骨缺损的愈合。ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以用于被诊断患有亚临床低骨密度的患者中，作为抵抗骨质疏松症发展的保护性措施。
在一个具体实施方案中，本公开文本的方法和组合物可以在人和其他动物的骨折和软骨缺损的愈合中具有医疗用途。主题方法和组合物也可以在闭合性以及开放性骨折复位中以及在改进的人工关节固定中具有预防性用途。由成骨剂诱导的从头骨形成有助于修复先天性、创伤诱导的或肿瘤切除诱导的颅面缺损，并且还可用于美容整形手术。此外，本公开文本的方法和组合物可以用于牙周病的治疗中，以及其他牙齿修复过程中。在某些情况下，主题ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以提供吸引成骨细胞、刺激成骨细胞生长或诱导成骨细胞的祖细胞分化的环境。本文所述的ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)还可以用于骨质疏松症的治疗中。此外，ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以用于软骨缺损修复以及骨关节炎的预防/逆转中。
在另一个特定的实施方案中，本公开文本提供用于修复骨折以及与软骨和/或骨缺损或牙周病相关的其他病症的治疗性方法和组合物。本公开文本还提供用于伤口愈合和组织修复的治疗性方法和组合物。伤口的类型包括但不限于烧伤、切口和溃疡。参见例如，PCT公开号WO 84/01106。这样的组合物包含治疗有效量的至少一种本文公开的ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)与药学上可接受的媒介物、载体或基质的混合物。
在另一个具体实施方案中，本文所述的ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以应用于引起骨损失的病症，如骨质疏松症、甲状旁腺功能亢进症、库欣病、甲状腺毒症、慢性腹泻状态或吸收不良、肾小管性酸中毒或神经性厌食。许多人已知，女性、体重低并且久坐不动的生活方式是骨质疏松症的风险因素(骨矿物质密度下降，从而导致骨折风险)。然而，骨质疏松症也可能是由于长期使用某些药物所致。由药物或另一种医学病症引起的骨质疏松症被称为继发性骨质疏松症。在称为库欣病的病症中，由身体产生的过量皮质醇导致骨质疏松症和骨折。与继发性骨质疏松症相关的最常见药物是皮质类固醇，其为一类像皮质醇一样起作用的药物，皮质醇是由肾上腺自然产生的一种激素。尽管骨骼发育需要足够水平的甲状腺激素(其由甲状腺产生)，但过量的甲状腺激素可能随时间推移而减少骨量。当有肾脏问题的人(特别是正在经历透析的人)服用高剂量的含铝抗酸药时，其可能导致骨损失。可能引起继发性骨质疏松症的其他药物包括用于预防癫痫的苯妥英(Dilantin)和巴比妥类药物；甲氨蝶呤(Rheumatrex、Immunex、Folex PFS)，一种用于一些形式的关节炎、癌症和免疫障碍的药物；环孢菌素(Sandimmune、Neoral)，一种用于治疗一些自身免疫疾病和在器官移植患者中抑制免疫系统的药物；促黄体激素释放激素激动剂(Lupron、Zoladex)，其用于治疗前列腺癌和子宫内膜异位症；肝素(Calciparine、Liquaemin)，一种抗凝血药物；以及消胆胺(Questran)和考来替泊(Colestid)，其用于治疗高胆固醇。牙龈疾病引起骨丢失，因为口腔中的这些有害细菌迫使身体抵御它们。细菌在牙龈线下产生毒素和酶，从而引起慢性感染。
在另一实施方案中，本公开文本的ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)提供用于治疗与异常的或不想要的骨生长相关的疾病或障碍的方法和治疗剂。例如，患有称为进行性骨化性纤维发育不良(FOP)的疾病的患者生长异常的“第二骨架”，其阻止任何移动。另外，在髋关节替代手术后可能发生异常骨生长，并且因此破坏手术结果。这是病理性骨生长的更常见的例子，以及主题方法和组合物可以在治疗上有用的情况。相同的方法和组合物也可以适用于治疗其他形式的异常骨生长(例如，创伤、烧伤或脊髓损伤后骨的病理性生长)，以及用于治疗或预防与结合转移性前列腺癌或骨肉瘤观察到的异常骨生长相关的不良病症。
在其他实施方案中，本公开文本的ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)提供用于调节动物的身体脂肪含量以及用于治疗或预防与其相关的病症(并且特别是与其相关的危害健康的病症)的组合物和方法。根据本公开文本，调节(控制)体重可以是指减少或增加体重、减少或增加体重增加的速率或增加或减少体重减轻的速率，并且还包括积极维持或不显著改变体重(例如，抵抗可能以其他方式增加或减少体重的外部或内部影响)。本公开文本的一个实施方案涉及通过向有需要的动物(例如，人)施用ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)来调节体重。
在一些实施方案中，本公开文本涉及用于以下的方法：降低身体脂肪含量或降低身体脂肪含量增加的速率，以及用于治疗与不期望的体重增加相关的障碍，如肥胖症、非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)、心血管疾病、癌症、高血压、骨关节炎、卒中、呼吸问题和胆囊疾病，所述方法包括向有需要的患者施用如本文所述的ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)。
在一个具体实施方案中，本公开文本涉及用于以下的方法和化合物：降低动物的体重和/或降低体重增加，并且更特别地，治疗或改善具有肥胖症风险或患有肥胖症的患者的肥胖症。在另一个具体实施方案中，本公开文本涉及用于治疗不能增加或保持体重的动物(例如，患有消瘦综合征的动物)的方法和化合物。这样的方法可有效增加体重和/或质量，或减轻体重和/或质量损失，或改善与不希望的低(例如，不健康)体重和/或质量相关或由其引起的病症。
在一些实施方案中，本公开文本的ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以用于在有需要的受试者中增加红细胞水平，增加血红蛋白水平，治疗或预防贫血，和/或治疗或预防无效造血。在一些实施方案中，本公开文本的变体ActRIIB多肽以及其同多聚体和异多聚体可以与用于增加红细胞水平的常规治疗方法(特别是用于治疗多因子起源的贫血的那些)组合使用。用于增加红细胞水平的常规治疗方法包括例如红细胞输注、一种或多种EPO受体激活物的施用、造血干细胞移植、免疫抑制生物制剂和药物(例如皮质类固醇)。在某些实施方案中，本公开文本的ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以用于治疗或预防有需要的受试者的贫血。在某些实施方案中，本公开文本的ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以用于治疗或预防有需要的受试者的无效造血和/或与无效造血相关的障碍。在某些方面，本公开文本的ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以与用于治疗或预防贫血或无效造血障碍的常规治疗方法(特别是用于治疗多因子起源的贫血的那些)组合使用。在一些实施方案中，本公开文本涉及用于在患者中增加红细胞水平，增加血红蛋白水平，治疗或预防贫血，和/或治疗或预防无效造血的方法，所述方法包括向有需要的患者施用如本文所述的ActRIIB多肽(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)。
在某些实施方案中，本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)(任选地与EPO受体激活物组合)可以用于在健康个体和选择的患者群体中增加红细胞、血红蛋白或网织红细胞水平。适当的患者群体的例子包括具有不希望的低红细胞或血红蛋白水平的那些，如患有贫血的患者；以及处于发展不希望的低红细胞或血红蛋白水平的风险的那些，如即将经历大手术或其他可能导致大量失血的手术的那些患者。在一个实施方案中，将具有足够红细胞水平的患者用一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)治疗以增加红细胞水平，然后抽血并储存以供以后用于输血。
本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)(任选地与EPO受体激活物组合)可以用于增加患有贫血的患者的红细胞水平、血红蛋白水平和/或血细胞比容水平。当观察人体中的血红蛋白和/或血细胞比容水平时，适当年龄和性别类别的低于正常水平可能指示贫血，尽管将个体差异考虑在内。例如，10-12.5g/dl且典型地约11.0g/dl的血红蛋白水平被认为处于健康成人的正常范围内，但就治疗而言，较低的目标水平可能导致较少的心血管副作用[参见例如，Jacobs等人(2000)NephrolDial Transplant 15,15-19]。可替代地，血细胞比容水平(由细胞占据的血液样品体积的百分比)可以用作贫血的量度。健康个体的血细胞比容水平对于成年男性在约41％-51％的范围内并且对于成年女性在35％-45％的范围内。在某些实施方案中，可以用给药方案治疗患者，所述给药方案意图使患者恢复至红细胞、血红蛋白和/或血细胞比容的目标水平。由于血红蛋白和血细胞比容水平因人而异，所以最佳地，目标血红蛋白和/或血细胞比容水平可以针对每个患者个体化。
在患有组织损伤、感染和/或慢性疾病、特别是癌症的患者中经常观察到贫血。在一些受试者中，贫血的特征在于低促红细胞生成素水平和/或对骨髓中促红细胞生成素的不充分应答[参见例如，Adamson(2008)Harrison's Principles ofInternal Medicine,第17版；McGraw Hill,纽约,第628-634页]。贫血的潜在原因包括例如失血、营养缺乏(例如蛋白质的膳食摄入减少)、药物反应、与骨髓相关的各种问题以及许多疾病。更特别地，贫血与多种障碍和病症有关，所述障碍和病症包括例如骨髓移植；实体瘤(例如，乳腺癌、肺癌和结肠癌)；淋巴系统肿瘤(例如，慢性淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤)；造血系统的肿瘤(例如，白血病、骨髓增生异常综合征和多发性骨髓瘤)；放射疗法；化学疗法(例如，含铂方案)；炎性和自身免疫性疾病，包括但不限于类风湿性关节炎、其他炎性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、急性或慢性皮肤病(例如银屑病)、炎性肠病(例如克罗恩病和溃疡性结肠炎)；急性或慢性肾病或衰竭，包括特发性或先天性病症；急性或慢性肝病；急性或慢性出血；由于患者的异体或自身抗体和/或宗教原因而无法输入红细胞的情况；感染(例如，疟疾和骨髓炎)；血红蛋白病，包括例如镰状细胞病(贫血)、地中海贫血；药物使用或滥用(例如，酒精滥用)；小儿贫血患者因任何原因避免输血；以及老年患者或患有伴随贫血的潜在心肺疾病患者由于担心循环过载而不能接受输血的[参见例如，Adamson(2008)Harrison's Principles of Internal Medicine,第17版；McGraw Hill,纽约,第628-634页]。在一些实施方案中，本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以用于治疗或预防与一种或多种本文公开的障碍或病症相关的贫血。
许多因素都可能促成癌症相关的贫血。一些与疾病过程本身和炎性细胞因子如白细胞介素-1、干扰素-γ和肿瘤坏死因子的产生有关[Bron等人(2001)Semin Oncol 28(增刊8):1-6]。在其作用中，炎症诱导关键的铁调控肽铁调素，从而抑制铁从巨噬细胞输出并且通常限制红细胞生成的铁可利用性[参见例如，Ganz(2007)J Am Soc Nephrol 18:394-400]。通过各种途径失血也可能促成癌症相关的贫血。由于癌症进展所致的贫血的患病率因癌症类型而异，从前列腺癌的5％至多发性骨髓瘤的90％的范围内。癌症相关的贫血对患者具有深远的影响，包括疲劳和生活质量下降、治疗功效降低和死亡率增加。在一些实施方案中，本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)(任选地与EPO受体激活物组合)可以用于治疗癌症相关的贫血。
低增生性贫血可起因于骨髓原发性功能障碍或衰竭。低增生性贫血包括：慢性疾病的贫血、肾病的贫血、与代谢紊乱状态相关的贫血以及与癌症相关的贫血。在这些类型中的每一种中，针对观察到的贫血程度，内源性促红细胞生成素水平是不适当地低的。其他低增生性贫血包括：早期缺铁性贫血和由对骨髓的损伤引起的贫血。在这些类型中，针对观察到的贫血程度，内源性促红细胞生成素水平是适当地升高的。突出的例子将是由癌症和/或化学治疗药物或癌症放射疗法引起的骨髓抑制。对临床试验的广泛综述发现，化疗后100％的患者可出现轻度贫血，而高达80％的此类患者可发生更严重的贫血[参见例如，Groopman等人(1999)J Natl Cancer Inst 91:1616-1634]。骨髓抑制药物包括例如：1)烷基化剂，如氮芥(例如，美法仑)和亚硝基脲(例如，链脲菌素)；2)抗代谢物，如叶酸拮抗剂(例如，甲氨蝶呤)、嘌呤类似物(例如，硫鸟嘌呤)和嘧啶类似物(例如，吉西他滨)；3)细胞毒性抗生素，如蒽环类药物(例如，多柔比星)；4)激酶抑制剂(例如，吉非替尼)；5)有丝分裂抑制剂，如紫杉烷(例如，紫杉醇)和长春花生物碱(例如，长春瑞滨)；6)单克隆抗体(例如，利妥昔单抗)；以及7)拓扑异构酶抑制剂(例如，拓扑替康和依托泊苷)。此外，导致代谢减退速率的病症可以产生轻度至中度的低增生性贫血。在此类病症中具有内分泌不足状态。例如，贫血可在艾迪生病、甲状腺功能减退、甲状旁腺机能亢进、或阉割或用雌激素治疗的男性中发生。在一些实施方案中，本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)(任选地与EPO受体激活物组合)可以用于治疗增生性贫血。
慢性肾病有时与低增生性贫血相关，并且贫血程度的严重性随肾功能损害的水平变化。这种贫血主要是由于促红细胞生成素的产生不足和红细胞的存活率降低。慢性肾病通常在数年或数十年的时间内逐渐进展至终末期(5期)疾病，此时患者存活需要透析或肾移植。贫血通常在这个过程的早期发展，并随着疾病的进展而恶化。肾脏疾病的贫血的临床结果有充分记载并且包括左心室肥大、认知功能受损、生活质量降低和免疫功能改变的发展[参见例如，Levin等人(1999)Am J Kidney Dis 27:347-354；Nissenson(1992)AmJKidney Dis 20(增刊1):21-24；Revicki等人(1995)Am J Kidney Dis 25:548-554；Gafter等人,(1994)Kidney Int 45:224-231]。在一些实施方案中，一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)(任选地与EPO受体激活物组合)可以用于治疗与急性或慢性肾脏病或肾衰竭相关的贫血。
由足够体积的急性失血、如由创伤或产后出血引起的贫血被称为急性出血后贫血。急性失血最初导致血容量不足而无贫血，因为RBC与其他血液成分一起成比例消减。然而，血容量不足将迅速触发生理机制，所述生理机制将流体从血管外转移至血管隔室，其导致血液稀释和贫血。如果是慢性的，则失血逐渐消减体内铁储备，并且最终导致缺铁。在一些实施方案中，一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)(任选地与EPO受体激活物组合)可以用于治疗因急性失血引起的贫血。
缺铁性贫血是缺铁增加的分级进展的最后阶段，其包括负铁平衡和缺铁红细胞生成作为中间阶段。铁缺乏可能是由于铁需求增加、铁摄入减少或铁损失增加所致，例如在诸如妊娠、饮食不足、肠道吸收不良、急性或慢性炎症以及急性或慢性失血的病症中例示。对于这种类型的轻度至中度贫血，骨髓仍然是低增生性的，并且RBC形态大体上是正常的；然而，即使轻度贫血也可能导致一些小红细胞性低色素性RBC，并且向严重缺铁性贫血的过渡伴随着骨髓的过度增生和越来越普遍的小细胞和低色素性RBC[参见例如，Adamson(2008)Harrison's Principles of Internal Medicine,第17版；McGraw Hill,纽约,第628-634页]。对缺铁性贫血的适当治疗取决于其原因和严重性，其中口服铁制品、肠胃外铁制剂和红细胞输注作为主要的常规选择。在一些实施方案中，本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)(任选地与EPO受体激活物组合)可以用于治疗慢性缺铁。
骨髓增生异常综合征(MDS)是血液病症的多样化集合，其特征在于骨髓血细胞的无效产生和转化为急性骨髓性白血病的风险。在MDS患者中，血液干细胞不会成熟为健康的红细胞、白细胞或血小板。MDS障碍包括例如难治性贫血、伴有环形铁粒幼红细胞的难治性贫血、伴有过量胚细胞的难治性贫血、伴有转化中过量胚细胞的难治性贫血、伴有多系发育不良的难治性血细胞减少症以及与孤立的5q染色体异常相关的骨髓增生异常综合征。由于这些障碍表现为造血细胞的数量和质量的不可逆缺陷，因此大多数MDS患者患慢性贫血。因此，MDS患者最终需要输血和/或用生长因子(例如，促红细胞生成素或G-CSF)治疗以增加红细胞水平。然而，由于此类疗法的频率，许多MDS患者发展副作用。例如，接受频繁红细胞输注的患者可能因额外铁累积而展现出组织和器官损伤。因此，本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以用于治疗患有MDS的患者。在某些实施方案中，可以使用本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)(任选地与EPO受体激活物组合)治疗患有MDS的患者。在其他实施方案中，可以使用本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)与用于治疗MDS的一种或多种另外的治疗剂的组合治疗患有MDS的患者，所述另外的治疗剂包括例如沙利度胺、来那度胺、阿扎胞苷、地西他滨、促红细胞生成素、去铁胺、抗胸腺细胞球蛋白和非格司亭(G-CSF)。
最初基于铁动力学研究与再生障碍性贫血、出血或周围溶血不同[参见例如，Ricketts等人(1978)Clin Nucl Med 3:159-164]，无效造血描述一组不同的贫血，其中成熟RBC的产生少于给定骨髓中存在的红细胞前体(成红血细胞)的数量时的预期[Tanno等人(2010)Adv Hematol 2010:358283]。在这样的贫血中，尽管由于成熟RBC的无效产生所致的促红细胞生成素水平升高，组织缺氧仍然存在。最终发展为恶性循环，其中升高的促红细胞生成素水平驱动成红血细胞的大量扩增，潜在地导致由于髓外红细胞发生所致的脾肿大(脾脏肿大)[参见例如，Aizawa等人(2003)Am J Hematol 74:68-72]、成红血细胞诱导的骨病理[参见例如，Di Matteo等人(2008)J Biol Regul Homeost Agents 22:211-216]以及组织铁过载，即使在不存在治疗性RBC输注的情况下[参见例如，Pippard等人(1979)Lancet2:819-821]。因此，通过加强红细胞生成的有效性，本公开文本的ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以打破前述循环，因此不仅减轻潜在的贫血，而且减轻升高的促红细胞生成素水平、脾肿大、骨病理和组织铁过载的相关并发症。在一些实施方案中，一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以用于治疗或预防无效造血，包括贫血和升高度EPO水平以及并发症，如脾肿大、成红血细胞诱导的骨病理、铁过载及其伴随病理。对于脾肿大，这样的病理包括胸痛或腹痛和网状内皮增生。髓外造血不仅可以在脾脏中发生，而且可能以髓外造血假瘤的形式存在于其他组织中[参见例如，Musallam等人(2012)Cold Spring Harb Perspect Med2:a013482]。对于成红细胞诱导的骨病理，伴随的病理包括低骨矿物质密度、骨质疏松症和骨痛[参见例如，Haidar等人(2011)Bone 48:425-432]。对于铁过载，伴随的病理包括铁调素抑制和膳食铁吸收过多[参见例如，Musallam等人(2012)Blood Rev 26(增刊1):S16-S19]、多种内分泌病和肝纤维化/肝硬化[参见例如，Galanello等人(2010)Orphanet J Rare Dis 5:11]以及铁过载心肌病[Lekawanvijit等人,2009,Can J Cardiol 25:213-218]。
无效造血的最常见病因是地中海贫血综合症、遗传性血红蛋白病，其中完整的α-和β-血红蛋白链的产生的不平衡导致成红细胞成熟期间的细胞凋亡增加[参见例如，Schrier(2002)Curr Opin Hematol 9:123-126]。地中海贫血症是世界上最常见的遗传障碍之一，伴随预测的流行病学模式的变化促成美国和全球公共健康问题日益严重[Vichinsky(2005)Ann NY Acad Sci 1054:18-24]。地中海贫血综合征根据其严重性命名。因此，α-地中海贫血症包括轻型α-地中海贫血症(也称为α-地中海贫血性状；两种α-珠蛋白基因受影响)、血红蛋白H病(三种α-珠蛋白基因受影响)和重型α-地中海贫血症(也称为胎儿水肿；四种α-珠蛋白基因受影响)。β-地中海贫血症包括轻型β-地中海贫血症(也称为β-地中海贫血性状；一种β-珠蛋白基因受影响)、中间型β-地中海贫血症(两种β-珠蛋白基因受影响)、血红蛋白E型地中海贫血症(两种β-珠蛋白基因受影响)和重型β-地中海贫血症(也称为库利氏贫血(Cooley's贫血)；两种β-珠蛋白基因受影响导致完全缺乏β-珠蛋白)。β-地中海贫血症影响多个器官，与相当大的发病率和死亡率相关，并且目前需要终身护理。尽管由于常规输血与铁螯合的组合，近年来β-地中海贫血症患者的预期寿命增加，但由于输血和铁的过度胃肠道吸收引起的铁过载可能引起严重的并发症，如心脏病、血栓形成、性腺机能减退、甲状腺机能减退、糖尿病、骨质疏松症和骨质减少[参见例如，Rund等人(2005)N Engl J Med 353:1135-1146]。在某些实施方案中，本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)(任选地与EPO受体激活物组合)可以用于治疗或预防地中海贫血综合征。
在一些实施方案中，除了地中海贫血综合征外，本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)(任选地与EPO受体激活物组合)可以用于治疗无效造血障碍。这样的障碍包括铁粒幼细胞贫血(遗传性或获得性)；红细胞生成障碍性贫血(I型和II型)；镰状细胞性贫血；遗传性球形红细胞增多症；丙酮酸激酶缺乏症；巨成红细胞性贫血，可能由病症诸如叶酸缺乏(由于先天性疾病、摄入量减少或需求增加所致)、钴胺素缺乏(由于先天性疾病、恶性贫血、吸收受损、胰腺功能不全或摄入量减少所致)、某些药物或不明原因(先天性红细胞生成障碍性贫血、难治性巨幼红细胞性贫血或红白血病)引起；骨髓性贫血，包括例如骨髓纤维化(骨髓化生)和骨髓痨；先天性红细胞生成性卟啉症；以及铅中毒。在特定实施方案中，本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以用于治疗骨髓纤维化。
在某些实施方案中，本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以与用于无效造血的支持疗法组合使用。此类疗法包括输注红细胞或全血来治疗贫血。在慢性或遗传性贫血中，铁稳态的正常机制被重复输血所淹没，从而最终导致重要组织(如心脏、肝脏和内分泌腺体)中铁的有毒和潜在致命累积。因此，用于长期患有无效造血的患者的支持疗法还包括用一种或多种铁螯合分子治疗以促进尿液和/或粪便中的铁排泄，并且由此预防或逆转组织铁过载[参见例如，Hershko(2006)Haematologica 91:1307-1312；Cao等人(2011),Pediatr Rep 3(2):e17]。有效的铁螯合剂应该能够选择性地结合并中和三价铁，三价铁是非转铁蛋白结合铁的氧化形式，其可能解释通过催化产生羟基自由基和氧化产物的大多数铁毒性的原因[参见例如，Esposito等人(2003)Blood 102:2670-2677]。这些药剂在结构上是多样的，但都具有能够与化学计量为1:1(六齿剂)、2:1(三齿)或3:1(双齿)的单个铁原子形成中和八面体配位络合物的氧或氮供体原子[Kalinowski等人(2005)Pharmacol Rev 57:547-583]。一般来说，有效的铁螯合剂也是相对低分子量的(例如，小于700道尔顿)，在水和脂质中都具有溶解性以能够进入累及的组织。铁螯合分子的具体例子包括去铁胺(一种需要每日肠胃外施用的细菌起源的六齿剂)和口服活性合成剂去铁酮(双齿)和地拉罗司(三齿)。由同一天施用两种铁螯合剂组成的组合疗法显示在对螯合单一疗法无反应的患者中以及在克服对单独去氧肾上腺素的患者依从性差的问题中的前景[Cao等人(2011)Pediatr Rep 3(2):e17；Galanello等人(2010)Ann NY Acad Sci 1202:79-86]。
在某些实施方案中，本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以与用于无效造血的铁调素或铁调素激动剂组合使用。主要在肝脏中产生的循环多肽铁调素由于其诱导铁转运蛋白(一种定位于吸收性肠细胞、肝细胞和巨噬细胞上的铁输出蛋白)降解的能力而被认为是铁代谢的主要调节剂。一般而言，铁调素降低细胞外铁的可用性，因此铁调素激动剂可以有益于治疗无效造血[参见例如，Nemeth(2010)Adv Hematol 2010:750643]。这种观点得到了β-地中海贫血症小鼠模型中铁调素表达增加的有益作用的支持[Gardenghi等人(2010)J Clin Invest 120:4466-4477]。
本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)(任选地与EPO受体激活物组合)也将适用于治疗无序RBC成熟的贫血，其特征部分在于过小(小红细胞)、过大(大红细胞)、畸形或异常有色(低色素性)的RBC。
在某些实施方案中，本公开文本提供通过向有需要的个体施用治疗有效量的本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)和EPO受体激活物来治疗或预防所述个体的贫血的方法。在某些实施方案中，本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以与EPO受体激活物组合使用，用于降低这些激活物在对EPO的不良影响敏感的患者中的所需剂量。这些方法可以用于患者的治疗性和预防性治疗。
本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以与EPO受体激活物组合使用，用于实现红细胞的增加，特别是在EPO受体激活物的较低剂量范围下。这可能有益于降低已知的脱靶效应和与高剂量EPO受体激活物相关的风险。EPO的主要副作用包括例如血细胞比容或血红蛋白水平的过度增加和红细胞增多症。升高的血细胞比容水平可以导致高血压(更特别是高血压加剧)和血管血栓形成。已经报道的EPO的其他副作用(其中一些与高血压有关)是头痛、流感样综合征、分流阻塞、由于血栓形成所致的心肌梗塞和脑痉挛、高血压性脑病以及红细胞血细胞再生障碍。参见例如，Singibarti(1994)J.Clin Investig 72(增刊6),S36-S43；Horl等人(2000)Nephrol DialTransplant 15(增刊4),51-56；Delanty等人(1997)Neurology 49,686-689；以及Bunn(2002)N Engl J Med 346(7),522-523)。
如果本公开文本的变体ActRIIB蛋白通过与EPO不同的机制起作用，则这些拮抗剂可以用于增加对EPO反应不良的患者的红细胞和血红蛋白水平。例如，本公开文本的拮抗剂可能对患者有益，其中施用正常至增加剂量的EPO(>300IU/kg/周)不会导致血红蛋白水平增加至目标水平。在所有类型的贫血中都发现了EPO应答不足的患者，但在癌症患者和终末期肾病患者中特别频繁地观察到更高数量的无应答者。对EPO的不充分应答可以是组成性的(在首次用EPO治疗时观察到)或获得性的(在用EPO重复治疗时观察到)。
在某些实施方案中，本公开文本提供用于通过测量已经用本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)治疗或作为要用其治疗的候选者的患者的一个或多个血液学参数来管理所述患者的方法。血液学参数可以用于评价作为要用本公开文本的拮抗剂治疗的候选者的患者的适当给药，以监测治疗期间的血液学参数，以评价在用本公开文本的一种或多种拮抗剂治疗期间是否调整剂量和/或评价本公开文本的一种或多种拮抗剂的适当维持剂量。如果一个或多个血液学参数在正常水平之外，则可以减少、延迟或终止用本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)给药。
可以根据本文提供的方法测量的血液学参数包括例如使用本领域公认的方法，红细胞水平、血压、铁储备和在体液中发现的与增加的红细胞水平相关的其他药剂。可以使用来自患者的血液样品来确定此类参数。红细胞水平、血红蛋白水平和/或血细胞比容水平的增加可能导致血压升高。
在一个实施方案中，如果在作为要用本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)治疗的候选者的患者中，一个或多个血液学参数在正常范围之外或在正常水平的高侧，则可以延迟本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白的施用的开始，直至所述血液学参数已经自然地或通过治疗干预回到正常水平或可接受的水平。例如，如果候选患者是高血压或高血压前期，则可以用降血压剂治疗患者以降低患者的血压。可以使用适合于个体患者病症的任何降血压剂，包括例如利尿剂、肾上腺素能抑制剂(包括α阻滞剂和β阻滞剂)、血管舒张剂、钙通道阻滞剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂或血管紧张素II受体阻滞剂。可替代地，可以使用饮食和锻炼方案来治疗血压。类似地，如果候选患者的铁储备低于正常范围或在正常范围的低侧，则患者可以用适当的饮食和/或铁补充剂方案治疗，直到患者的铁储备回到正常水平或可接受的水平。对于具有高于正常的红细胞水平和/或血红蛋白水平的患者，则可以延迟本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)的施用，直至所述水平已经回到正常水平或可接受的水平。
在某些实施方案中，如果在作为要用本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)治疗的候选者的患者中，一个或多个血液学参数在正常范围之外或在正常水平的高侧，则可以不延迟施用的开始。然而，本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白的剂量或给药频率可以设定为能够降低在施用本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白时出现的血液学参数不可接受的增加的风险的量。可替代地，可以为患者开发治疗方案，所述治疗方案将本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白与治疗剂组合，所述治疗剂解决不希望的血液学参数水平。例如，如果患者具有升高的血压，则可以设计涉及施用本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白和降血压剂的治疗方案。对于具有低于所需铁储备的患者，可以开发一种或多种变体ActRIIB蛋白和铁补充剂的治疗方案。
在一个实施方案中，可以针对作为要用本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)治疗的候选者的患者确立一个或多个血液学参数的一个或多个基线参数，并且基于一个或多个基线值确立用于该患者的适当给药方案。可替代地，基于患者病史的确立的基线参数可用于为患者通知适当的拮抗剂给药方案。例如，如果健康患者的确立的基线血压读数高于限定的正常范围，则可能不必将患者的血压纳入一般群体在用本公开文本的一种或多种拮抗剂治疗之前被认为正常的范围内。在用本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)治疗之前的患者的一个或多个血液学参数的基线值也可以用作相关比较值，用于监测所述血液学参数在用本公开文本的一种或多种拮抗剂治疗期间的任何变化。
在某些实施方案中，在正在用本公开文本的一种或多种ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)治疗的患者中测量一个或多个血液学参数。血液学参数可以用于在治疗期间监测患者，并且允许用本公开文本的一种或多种拮抗剂调整或终止给药或用另一种治疗剂额外给药。例如，如果施用本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白导致血压、红细胞水平或血红蛋白水平增加或铁储备减少，则本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白的剂量可在量或频率方面降低，以降低本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白对一种或多种血液学参数的影响。如果本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白的施用导致一种或多种血液学参数的对患者不利的变化，则本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白的给药可以暂时终止，直到一种或多种血液学参数回到可接受的水平，或永久地终止。类似地，如果在减少本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白的施用剂量或频率后，一种或多种血液学参数未在可接受的范围内，则可以终止给药。作为减少或终止本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白的给药的替代方案或除其之外，患者可以服用解决一种或多种血液学参数的不希望的水平的额外治疗剂，例如像降血压剂或铁补充剂。例如，如果用本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白治疗的患者具有升高的血压，则用本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白给药可以继续在相同水平并且将降血压剂添加至治疗方案，可以减少(例如，在量和/或频率上)用本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白给药并且将降血压剂添加至治疗方案，或者可以终止用本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白给药并且可以用降血压剂治疗患者。
在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗肺高血压(例如，肺动脉高压)、肾相关疾病(例如，奥尔波特综合征或局灶节段性肾小球硬化(FSGS))和/或间质性肺疾病(ILD)(例如，特发性肺纤维化)的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)中的任一种或任何组合。在一些实施方案中，向所述患者施用任何本文公开的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB多肽和/或其片段。在一些实施方案中，本公开文本考虑治疗肺高血压的一种或多种并发症(例如，肺动脉中的平滑肌和/或内皮细胞增殖、肺动脉中的血管发生、喘病、胸痛、肺血管重塑、右心室肥大和肺纤维化)的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。在一些实施方案中，本公开文本考虑预防肺高血压的一种或多种并发症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低肺高血压的进展速率的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低肺高血压的一种或多种并发症的进展速率的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低肺高血压的严重性的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低肺高血压的一种或多种并发症的严重性的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。任选地，本文公开的用于治疗、预防肺高血压或降低所述肺高血压的进展速率和/或严重性，特别是治疗、预防肺高血压的一种或多种并发症或降低肺高血压的所述一种或多种并发症的进展速率和/或严重性的方法还可以包括向患者施用用于治疗肺高血压的一种或多种支持疗法或另外的活性剂。例如，还可以向所述患者施用选自以下的一种或多种支持疗法或活性剂：前列环素及其衍生物(例如，依前列醇、曲前列环素和伊洛前列素)；前列环素受体激动剂(例如，舍来昔帕)；内皮素受体拮抗剂(例如，西他生坦、安立生坦、马西替坦和波生坦)；钙通道阻滞药(例如，氨氯地平、地尔硫卓和硝苯地平)；抗凝血剂(例如，华法林)；利尿剂；氧疗法；房间隔造口术；肺动脉血栓内膜剥脱术；5型磷酸二酯酶抑制剂(例如，西地那非和他达拉非)；可溶性鸟苷酸环化酶激活物(例如，辛那西呱(cinaciguat)和利奥西呱)；ASK-1抑制剂(例如，CIIA；SCH79797；GS-4997；MSC2032964A；3H-萘并[1,2,3-de]喹啉-2,7-二酮、NQDI-1；2-硫代-噻唑烷、5-溴-3-(4-氧代-2-硫代-噻唑烷-5-亚基)-1,3-二氢-吲哚-2-酮)；NF-κB拮抗剂(例如，dh404、CDDO-环氧化物；2.2-二氟丙酰胺；C28咪唑(CDDO-Im)；2-氰基-3,12-二氧代齐墩果-1,9-二烯-28-酸(CDDO)；3-乙酰齐墩果酸；3-三氟乙酰基齐墩果酸；28-甲基-3-乙酰基齐墩果烷；28-甲基-3-三氟乙酰基齐墩果烷；28-甲氧基齐墩果酸；SZC014；SCZ015；SZC017；齐墩果酸的PEG化衍生物；3-O-(β-D-吡喃葡糖基)齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡糖基-(1-->3)-β-D-吡喃葡糖基]齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡糖基-(1-->2)-β-D-吡喃葡糖基]齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡糖基-(1-->3)-β-D-吡喃葡糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡糖酯；3-O-[β-D-吡喃葡糖基-(1-->2)-β-D-吡喃葡糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡糖酯；3-O-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1-->3)-β-D-吡喃葡糖醛酸基]齐墩果酸；3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1-->3)-β-D-吡喃葡糖醛酸基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡糖酯；28-O-β-D-吡喃葡糖基-齐墩果酸；3-O-β-D-吡喃葡糖基(1→3)-β-D-吡喃葡糖醛酸(CS1)；齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡糖基(1→3)-β-D-吡喃葡糖醛酸(CS2)；甲基3,11-二氧代齐墩果-12-烯-28-醇化物(DIOXOL)；ZCVI4-2；3-去羟基-1,2,5-噁二唑并[3',4':2,3]齐墩果酸苄基酯)；肺和/或心脏移植。
在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗间质性肺疾病(例如，特发性肺纤维化)的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的任何本文公开的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。在一些实施方案中，向所述患者施用任何本文公开的呈同聚或异聚形式的ActRIIB多肽或其变体和/或片段。在一些实施方案中，所述间质性肺疾病是肺纤维化。在一些实施方案中，间质性肺病由以下中的任一种引起：硅肺、石棉沉滞症、铍中毒、过敏性肺炎、药物使用(例如，抗生素、化学治疗药物、抗心律失常剂、他汀类)、系统性硬化、多肌炎、皮肌炎、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、感染(例如，非典型肺炎、肺孢子虫性肺炎、肺结核、沙眼衣原体和/或呼吸道合胞病毒)、淋巴管性癌病、吸烟或发育障碍。在一些实施方案中，间质性肺病是特发性的(例如，结节病、特发性肺纤维化、阿曼-里什综合征(Hamman-Rich syndrome)和/或抗合成酶综合征)。在特定实施方案中，所述间质性肺疾病是特发性肺纤维化(IPF)。在一些实施方案中，针对特发性肺纤维化的治疗是与另外的治疗剂组合施用。在一些实施方案中，所述另外的治疗剂选自：吡非尼酮(pirfenidone)、N-乙酰半胱氨酸、泼尼松、硫唑嘌呤、尼达尼布(nintedanib)、其衍生物以及其组合。
肺高血压(PH)先前被分类为原发性(特发性)或继发性。最近，世界卫生组织(WHO)将肺高血压分为五组：第1组：肺动脉高压(PAH)；第2组：伴有左心病的肺动脉高压；第3组：伴有肺病和/或低氧血症的肺高血压；第4组：慢性血栓性和/或栓塞性疾病引起的肺高血压；和第5组：其他病症(例如，结节病、组织细胞增生症X、淋巴管瘤病和肺血管压迫)。参见例如，Rubin(2004)Chest 126:7-10。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肺高血压或降低所述肺高血压的进展速率和/或严重性(例如，治疗、预防肺高血压的一种或多种并发症或降低所述并发症的进展速率和/或严重性)的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。在一些实施方案中，向所述患者施用任何本文公开的呈同聚或异聚形式的ActRIIB多肽或其变体和/或片段。在一些实施方案中，所述方法涉及患有肺动脉高压的肺高血压患者。在一些实施方案中，所述方法涉及患有伴有左心病的肺高血压的肺高血压患者。在一些实施方案中，所述方法涉及患有肺病和/或低氧血症的肺高血压患者。在一些实施方案中，所述方法涉及患有慢性血栓性和/或栓塞性疾病的肺高血压患者。在一些实施方案中，所述方法涉及患有结节病、组织细胞增生症X或淋巴管瘤病和肺血管压迫的肺高血压患者。
肺动脉高压是肺脉管系统的一种严重、进行性且危及生命的疾病，其特征在于深度血管收缩和肺动脉壁中平滑肌细胞的异常增殖。肺中血管的严重收缩导致非常高的肺动脉压。这些高压使得心脏难以将血液泵送通过肺进行充氧。PAH患者遭受极度的呼吸短促，因为心脏难以泵送血液对抗这些高压。PAH患者通常会出现肺血管阻力(PVR)的显著增加和肺动脉压(PAP)的持续升高，这最终导致右心室衰竭和死亡。被诊断患有PAH的患者具有差的预后并且同样累及的生活质量，如果不治疗，则从诊断时起平均预期寿命为2至5年。
多种因素促成肺高血压的发病机理，包括可促成血管重构(即，增生)的肺细胞的增殖。例如，肺血管重构主要因患有肺高血压的患者的动脉内皮细胞和平滑肌细胞的增殖而发生。多种细胞因子的过表达被认为促进肺高血压。此外，已经发现肺动脉高压可能起因于肺动脉平滑细胞和肺内皮细胞的过度增殖。更进一步地，晚期PAH的特征可在于远端肺小动脉的肌化、同心内膜增厚和增殖内皮细胞阻塞血管腔。Pietra等人,J.Am.Coll.Cardiol.,43:255-325(2004)。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肺高血压或降低所述肺高血压的进展速率和/或严重性(例如，治疗、预防肺高血压的一种或多种并发症或降低所述并发症的进展速率和/或严重性)的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白，其中所述患者具有至少25mm Hg(例如，25、30、35、40、45或50mm Hg)的静息肺动脉压(PAP)。在一些实施方案中，向所述患者施用任何本文公开的呈同聚或异聚形式的ActRIIB多肽或其变体和/或片段。在一些实施方案中，所述方法涉及具有至少25mm Hg的静息PAP的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及具有至少30mm Hg的静息PAP的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及具有至少35mm Hg的静息PAP的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及具有至少40mm Hg的静息PAP的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及具有至少45mm Hg的静息PAP的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及具有至少50mm Hg的静息PAP的患者。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PH患者的一个或多个血液动力学参数朝向更正常的水平(例如，如与相似年龄和性别的健康人相比是正常的)调整的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。在一些实施方案中，向所述患者施用任何本文公开的呈同聚或异聚形式的ActRIIB多肽或其变体和/或片段。在一些实施方案中，所述方法涉及降低PAP。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PAP降低至少3mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PAP降低至少5mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PAP降低至少7mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PAP降低至少10mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PAP降低至少12mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PAP降低至少15mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PAP降低至少20mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PAP降低至少25mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及降低肺血管阻力(PVR)。在一些实施方案中，所述方法涉及升高肺毛细血管楔压(PCWP)。在一些实施方案中，所述方法涉及升高左心室舒张末压(LVEDP)。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肺高血压的一种或多种并发症或降低所述并发症的进展速率和/或严重性的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防肺高血压患者的肺动脉中的细胞增殖或降低肺高血压患者的肺动脉中的细胞增殖的进展速率和/或严重性。在一些实施方案中，向所述患者施用任何本文公开的呈同聚或异聚形式的ActRIIB多肽或其变体和/或片段。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防肺高血压患者的肺动脉中的平滑肌和/或内皮细胞增殖或降低肺高血压患者的肺动脉中的平滑肌和/或内皮细胞增殖的进展速率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防肺高血压患者的肺动脉中的血管生成或降低肺高血压患者的肺动脉中的血管生成的进展速率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及增加患有肺高血压的患者的身体活动。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防肺高血压患者的呼吸困难或降低肺高血压患者的呼吸困难的进展速率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防肺高血压患者的胸痛或降低肺高血压患者的胸痛的进展速率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防肺高血压患者的疲劳或降低肺高血压患者的疲劳的进展速率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防肺高血压患者的肺纤维化或降低肺高血压患者的肺纤维化的进展速率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防肺高血压患者的纤维化或降低肺高血压患者的纤维化的进展速率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防肺高血压患者的肺血管重构或降低肺高血压患者的肺血管重构的进展速率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防肺高血压患者的右心室肥大或降低肺高血压患者的右心室肥大的进展速率和/或严重性。
在某些方面，本公开文本涉及增加患有肺高血压的患者的运动能力的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。在一些实施方案中，向所述患者施用任何本文公开的呈同聚或异聚形式的ActRIIB多肽或其变体和/或片段。可以使用运动能力的任何合适的量度。例如，6分钟步行测试(6MWT)(其测量受试者在6分钟内可以行走多远，即6分钟步行距离(6MWD))中的运动能力经常用于评估肺高血压严重性和疾病进展。博格呼吸困难指数(BDI)是用于评估感观呼吸困难(呼吸不适)的数值标度。它测量呼吸急促的程度，例如在完成6MWT后，其中BDI为0表示无呼吸急促，且10表示最大呼吸急促。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的6MWD增加至少10米。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的6MWD增加至少20米。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的6MWD增加至少30米。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的6MWD增加至少40米。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的6MWD增加至少50米。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的6MWD增加至少60米。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的6MWD增加至少70米。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的6MWD增加至少80米。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的6MWD增加至少90米。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的6MWD增加至少100米。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少0.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少1个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少1.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少2个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少2.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少3个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少3.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少4个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少4.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少5.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少6个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少6.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少7个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少7.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少8个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少8.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少9个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少9.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低至少3个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将患有肺高血压的患者的BDI降低10个指数点。
基线处的肺高血压可以是轻度、中度或重度的，如例如由世界卫生组织(WHO)功能类别所测量的，其是患有肺动脉高压的患者的疾病的严重性的量度。WHO功能分类是纽约心脏协会(New York Heart Association，NYHA)系统的改编，并且常用于定性地评估活动耐受性，例如用于监测疾病进展和对治疗的反应(Rubin(2004)Chest 126:7-10)。在WHO系统中公认四种功能类别：I类：不会导致身体活动受限的肺高血压；普通的身体活动不会引起过度的呼吸困难或疲劳、胸痛或近昏厥；II类：导致身体活动轻微受限的肺高血压；患者在休息时舒服；普通的身体活动导致过度的呼吸困难或疲劳、胸痛或近昏厥；III类：导致体力活动明显受限的肺高血压；患者在休息时舒服；低于普通活动导致过度的呼吸困难或疲劳、胸痛或近昏厥；IV类：导致无法进行任何无症状下的身体活动的肺高血压；患者表现出右心室衰竭的体征；即使在休息时也可能出现呼吸困难和/或疲劳；任何身体活动都会增加不适。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肺高血压或降低所述肺高血压的进展速率和/或严重性(例如，治疗、预防肺高血压的一种或多种并发症或降低所述并发症的进展速率和/或严重性)的方法，其包括向有需要的患者施用呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白，其中所述患者患有如WHO所公认的I类、II类、III类或IV类肺高血压。在一些实施方案中，向所述患者施用任何本文公开的呈同聚或异聚形式的ActRIIB多肽或其变体和/或片段。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如WHO所公认的I类肺高血压的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如WHO所公认的II类肺高血压的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及预防或延迟患者从如WHO所公认的I类肺高血压进展至II类肺高血压。在一些实施方案中，所述方法涉及促进或增加患者从如WHO所公认的II类肺高血压消退至I类肺高血压。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如WHO所公认的III类肺高血压的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及预防或延迟患者从如WHO所公认的II类肺高血压进展至III类肺高血压。在一些实施方案中，所述方法涉及促进或增加患者从如WHO所公认的III类肺高血压消退至II类肺高血压。在一些实施方案中，所述方法涉及促进或增加患者从如WHO所公认的III类肺高血压消退至I类肺高血压。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如WHO所公认的IV类肺高血压的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及预防或延迟患者从如WHO所公认的III类肺高血压进展至IV类肺高血压。在一些实施方案中，所述方法涉及促进或增加患者从如WHO所公认的IV类肺高血压消退至III类肺高血压。在一些实施方案中，所述方法涉及促进或增加患者从如WHO所公认的IV类肺高血压消退至II类肺高血压。在一些实施方案中，所述方法涉及促进或增加患者从如WHO所公认的IV类肺高血压消退至I类肺高血压。
没有已知的治愈肺高血压的方法；目前的治疗方法集中于延长患者寿命和提高患者的生活质量。目前肺高血压的治疗方法包括施用：血管扩张药，如前列环素、依前列醇和西地那非；内皮素受体拮抗剂，如波生坦；钙通道阻滞药，如氨氯地平、地尔硫卓和硝苯地平；抗凝血剂，如华法林；以及利尿剂。还使用氧疗法、房间隔造口术、肺动脉血栓内膜剥脱术以及肺和/或心脏移植来进行肺高血压的治疗。然而，这些方法中的每一种都存在一个或多个缺点，其可能包括缺乏有效性、严重的副作用、患者依从性低和成本高。在某些方面，所述方法涉及治疗、预防肺高血压或降低所述肺高血压的进展速率和/或严重性(例如，治疗、预防肺高血压的一种或多种并发症或降低所述并发症的进展速率和/或严重性)，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的与以下组合(例如，在相同时间或不同时间施用，但通常以实现重叠的药理/生理作用的方式来进行)的本文公开的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白：用于治疗肺高血压的一种或多种另外的活性剂和/或支持疗法(例如，血管扩张药，如前列环素、依前列醇和西地那非；内皮素受体拮抗剂，如波生坦；钙通道阻滞药，如氨氯地平、地尔硫卓和硝苯地平；抗凝血剂，如华法林；利尿剂；氧疗法；房间隔造口术；肺动脉血栓内膜剥脱术：以及肺和/或心脏移植)；甲基巴多索隆或其衍生物；齐墩果酸或其衍生物。
部分地，本公开文本涉及治疗肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本公开文本的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)，所述变体ActRIIB多肽可以用于治疗或预防与ActRIIA或ActRIIB多肽和/或ActRIIA或ActRIIB配体(例如，激活素A、激活素B、GDF11、GDF8、GDF3、BMP5、BMP6和BMP10)的异常活性相关的疾病或病症。
术语“肾(renal)”和“肾(kidney)”在本文中可互换使用。
在一些实施方案中，任何本文公开的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB多肽可以单独使用或与一种或多种支持疗法或活性剂组合使用，用于治疗、预防肾相关疾病或病症或降低所述肾相关疾病或病症的进展速率和/或严重性。如本文所用，“肾相关疾病或病症”可以是指影响肾或肾系统的任何疾病、障碍或病症。肾相关疾病或病症的例子包括但不限于慢性肾脏病(或衰竭)、急性肾脏病(或衰竭)、原发性肾脏疾病、非糖尿病性肾脏疾病、肾小球肾炎、间质性肾炎、糖尿病性肾脏疾病、糖尿病性肾病、肾小球硬化、快速进行性肾小球肾炎、肾纤维化、阿尔波特综合征、IDDM肾炎、肾小球膜增生性肾小球肾炎、膜增生性肾小球肾炎、新月形肾小球肾炎、肾间质性纤维化、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、膜性肾病、微小病变型肾病、微量免疫型快速进行性肾小球肾炎、IgA肾病、多囊肾脏疾病(PKD)、邓特氏病、肾胱氨酸病、海曼肾炎、常染色体显性(成人)多囊肾脏疾病(ADPKD)、常染色体隐性(儿童)多囊肾脏疾病(ARPKD)、获得性囊性肾病(ACKD)、多囊性肾综合征(PKS)、急性肾脏损伤、肾病综合征、肾缺血、足细胞疾病或障碍、蛋白尿、肾小球疾病、膜性肾小球肾炎、局灶节段性肾小球肾炎、先兆子痫、子痫、肾脏病变、胶原蛋白血管疾病、良性体位性(姿势性)蛋白尿、IgM肾病、膜性肾病、结节病、糖尿病、药物引起的肾脏损伤、法布里氏病、氨基酸尿、范可尼综合征、高血压性肾硬化、间质性肾炎、镰状细胞病、血红蛋白尿、肌红蛋白尿、韦格纳氏肉芽肿、糖原贮积病1型、慢性肾脏病、慢性肾衰竭、肾小球滤过率低(GFR)、肾血管硬化、狼疮性肾炎、ANCA阳性的微量免疫型新月形肾小球肾炎、慢性同种异体肾病、肾中毒、肾毒性、肾脏坏死、肾脏损伤、肾小球和肾小管损伤、肾脏功能不全、肾病综合征、急性肾衰竭、慢性肾衰竭、近端肾小管功能不全、急性肾移植排斥、慢性肾移植排斥、非IgA系膜增生性肾小球肾炎、感染后肾小球肾炎、任何种类的肾受损血管炎、任何遗传性肾病、任何间质性肾炎、肾移植失败、肾癌、与其他病症(例如，高血压、糖尿病和自身免疫性疾病)相关的肾病、邓特氏病、肾胱氨酸病、海曼肾炎、原发性肾脏疾病、塌陷性肾小球病、致密物沉积病、与冷球蛋白血症相关的肾小球肾炎、亨诺-许兰病、感染后肾小球肾炎、细菌性心内膜炎、微观多发性血管炎、查格-施特劳斯综合征、抗GBM抗体介导的肾小球肾炎、淀粉样变性、单克隆免疫球蛋白沉积病、纤维样肾小球肾炎、免疫触须样肾小球病、缺血性肾小管损伤、药物诱发性肾小管间质性肾炎、中毒性肾小管间质性肾炎、感染性肾小管间质性肾炎、细菌性肾盂肾炎、由多瘤病毒感染或HIV感染引起的病毒感染性肾小管间质性肾炎、代谢诱发性肾小管间质性疾病、混合性结缔组织病、管型肾病、可能由尿酸盐或草酸盐或药物诱发性晶体沉积引起的晶体型肾病、急性细胞肾小管间质性同种异体移植排斥、由淋巴瘤或移植后淋巴增生性疾病引起的肿瘤渗透性疾病、肾脏阻塞性疾病、血管病、血栓性微血管病、肾血管硬化、粥样梗塞性疾病、混合性结缔组织病、结节性多动脉炎、钙调神经磷酸酶抑制剂诱发性血管疾病、急性细胞血管性同种异体移植排斥、急性体液性同种异体移植排斥、早期肾功能下降(ERFD)、终末期肾病(ESRD)、肾静脉血栓形成、急性肾小管坏死、急性间质性肾炎、已建立的慢性肾脏病、肾动脉狭窄、缺血性肾病、尿毒症、药物和毒素诱发性慢性肾小管间质性肾炎、反流性肾病、肾结石、古德帕斯彻氏综合征、正常红细胞正常色素性贫血、肾贫血、糖尿病性慢性肾脏病、IgG4相关疾病、冯希伯-林岛氏综合征、结节性硬化、肾单位肾痨、髓质囊性肾脏疾病、肾细胞癌、腺癌、肾母细胞瘤、淋巴瘤、白血病、低唾液酸化障碍、慢性环孢菌素肾病、肾再灌注损伤、肾发育不良、氮质血症、双侧动脉闭塞、急性尿酸肾病、血容量不足、急性双侧阻塞性尿病、高钙性肾病、溶血性尿毒症综合征、急性尿滞留、恶性肾硬化、产后肾小球硬化、硬皮病、非古德帕斯彻氏抗GBM病、微小结节性多动脉炎、过敏性肉芽肿、急性辐射肾炎、链球菌感染后肾小球肾炎、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、镇痛性肾病、动静脉瘘、动静脉移植物、透析、异位肾、髓质海绵状肾、肾性骨营养不良、孤立肾、肾盂积水、微量白蛋白尿、尿毒症、血尿、高脂血症、低白蛋白血症、脂质尿、酸中毒、高钾血症和水肿。
在一些实施方案中，本公开文本考虑治疗肾脏疾病或病症的一种或多种并发症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)。在一些实施方案中，本公开文本考虑预防肾脏疾病或病症的一种或多种并发症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低肾脏疾病或病症的进展速率的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低肾脏疾病或病症的一种或多种并发症的进展速率的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低肾脏疾病或病症的严重性的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低肾脏疾病或病症的一种或多种并发症的严重性的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)。在一些实施方案中，肾脏疾病或病症选自奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病和慢性肾脏病。在一些实施方案中，肾脏疾病或病症是奥尔波特综合征。在一些实施方案中，肾脏疾病或病症是局灶节段性肾小球硬化(FSGS)。在一些实施方案中，肾脏疾病或病症是多囊肾病。在一些实施方案中，肾脏疾病或病症是慢性肾脏病。在一些实施方案中，受试者患有肾功能下降。在一些实施方案中，本公开文本的方法减缓肾功能下降。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肾脏疾病或病症或降低所述疾病或病症的进展速率和/或严重性的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)。在一些实施方案中，所述方法涉及患有奥尔波特综合征的受试者的肾脏疾病或病症。
奥尔波特综合征，也称为遗传性肾炎，是一种遗传异质性疾病，其源自编码IV型胶原蛋白的α-3、α-4和α-5链的基因中的突变。IV型胶原蛋白α链通常位于全身(包括肾)的各种基膜中。这些链中的异常可以导致在这些部位的缺陷性基膜，其继而导致奥尔波特综合征的临床特征(例如，进行性肾小球疾病)。
奥尔波特综合征的传播可以是X连锁的、常染色体隐性的或常染色体显性的。在一些实施方案中，受试者患有X连锁奥尔波特综合征。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有X连锁奥尔波特综合征的受试者的方法。X连锁传播占受影响患者的大多数，并且源自X染色体上COL4A5基因中的突变。在一些实施方案中，受试者具有COL4A5基因中的遗传缺陷。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗具有COL4A5基因中的一个或多个遗传缺陷的受试者的方法。常染色体隐性变体占患有奥尔波特综合征的患者的大约15％，并且源自COL4A3或COL4A4基因中的遗传缺陷。在一些实施方案中，受试者患有常染色体隐性奥尔波特综合征。常染色体显性疾病似乎占患有奥尔波特综合征的患者的约20％至约30％之间，并且源自COL4A3或COL4A4基因中的杂合突变。在一些实施方案中，受试者患有常染色体显性奥尔波特综合征。在一些实施方案中，受试者具有COL4A3基因中的杂合突变。在一些实施方案中，受试者具有COL4A4基因中的杂合突变。在一些实施方案中，受试者具有COL4A3基因中的遗传缺陷。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗具有COL4A3基因中的一个或多个遗传缺陷的受试者的方法。在一些实施方案中，受试者具有COL4A4基因中的遗传缺陷。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗具有COL4A4基因中的一个或多个遗传缺陷的受试者的方法。在一些实施方案中，受试者具有COL4A3和COLA4A基因中的遗传缺陷。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗具有COL4A3和COL4A4基因中的一个或多个遗传缺陷的受试者的方法。一些家族由于三个基因(COL4A3、COL4A4、COL4A5)中的两个中的突变的传播而展现二基因遗传性。在一些实施方案中，受试者具有三个基因(COL4A3、COL4A4、COL4A5)中的两个中的突变。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗具有COL4A3、COL4A4和/或COL4A5基因中的一个或多个遗传缺陷的受试者的方法。
奥尔波特综合征的经典表现是基于患有X连锁疾病的受影响男性的临床表现。在一些实施方案中，患有X连锁疾病的受试者患有进展至终末期肾脏疾病(ESRD)的一种或多种肾小球疾病。患有常染色体隐性疾病的患者的临床表现和病程与患有X连锁疾病的那些患者类似。患有常染色体显性疾病的患者通常展现更渐进性的肾功能损失。
最初，奥尔波特综合征的肾脏表现通常是无症状持续性镜下血尿(例如，尿中血的存在)，其通常存在于受影响患者的童年早期。由于在常规儿童基层医疗保健中很少进行筛选尿液分析，可能不检测镜下血尿，除非患者因为受影响的家族成员而被筛选或者被发现为另一问题的偶发性发现。肉眼血尿可能是最初表现的发现并且通常在上呼吸道感染后发生。然而，肉眼血尿的复发性发作不常见，尤其在童年期间。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗具有无症状持续性镜下血尿的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗具有肉眼血尿的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗具有肉眼血尿的复发性发作的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者(例如，患有奥尔波特综合征的受试者)的无症状持续性镜下血尿、肉眼血尿或持续性镜下血尿的严重性、发生率和/或持续时间的方法。
患有奥尔波特综合征的患者通常具有正常的C3水平，C3是在身体的免疫防御中起整体作用的补体通路的组分。降低的C3可能尤其与以下病症相关：急性肾小球肾炎、膜增生性肾小球肾炎、免疫复合物病、活动期系统性红斑狼疮，脓毒症休克和终末期肝病。在童年早期，血清肌酐和血压测量通常也在正常水平。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗具有正常C3水平的患有奥尔波特综合征的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗具有与基线测量相比降低的C3水平的患有奥尔波特综合征的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及增加有需要的受试者(例如，患有奥尔波特综合征的受试者)的C3水平的方法。
在患有奥尔波特综合征的受试者中可能发展蛋白尿、高血压和进行性肾功能不全。蛋白尿包括尿中过量蛋白质的存在。白蛋白是肝产生的蛋白质，其构成血液中蛋白质的大约50％-60％。因此，与常规蛋白尿检查相比，尿中白蛋白的浓度是任何肾脏疾病的最灵敏指标之一，特别对于患有糖尿病或高血压的受试者。此测量通常称为白蛋白尿。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有蛋白尿的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有高血压的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有进行性肾功能不全的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者(例如，患有奥尔波特综合征的受试者)的蛋白尿、高血压和进行性肾功能不全中的一种或多种的严重性、发生率和/或持续时间的方法。
患有奥尔波特综合征的受试者可能患上终末期肾脏疾病(ESRD)。在许多其他肾脏疾病和病症中，ESRD通常在患有X连锁或常染色体隐性奥尔波特综合征的患者中在16岁与35岁之间的年龄发生。在一些家族中，病程是更无痛的，肾衰竭延迟至45岁至60岁年龄，尤其在患有常染色体显性奥尔波特综合征的那些患者中。患有X连锁奥尔波特综合征的女性可能在更早的年龄具有肉眼血尿、蛋白尿和弥漫性肾小球基膜(GBM)增厚的复发性发作，其与更严重的肾功能障碍和ESRD相关。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗具有ESRD的患有奥尔波特综合征的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有X连锁奥尔波特综合征的女性的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者(例如，患有奥尔波特综合征的受试者)的肉眼血尿、蛋白尿和弥漫性肾小球基膜(GBM)增厚中的一种或多种的严重性、发生率和/或持续时间的方法，所述病症与更严重的肾功能障碍和ESRD相关。
奥尔波特综合征的诊断可以通过分子遗传学测试或通过皮肤或肾活检来作出。分子遗传学下一代分析是一种对具有持续性血尿和/或终末期肾脏疾病(ESRD)的阳性家族史的患者以及对患有慢性肾脏病(CKD)的患者(不管家族史如何)作出诊断的优选方法。奥尔波特综合征与其他肾小球疾病的区别之处可能在于，来自肾活检的样品中肾小球基膜(GBM)分层的特征性发现的存在，或者通过免疫染色发现的IV型胶原蛋白的异常，或者在于COL4A3、COL4A4或COL4A5中的一个或多个突变的鉴定。具有或不具有FSGS表现的具有COL4A3、COL4A4或COL4A5突变的受试者的薄肾小球基膜被适当地诊断为奥尔波特综合征。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗具有持续性血尿和/或终末期肾脏疾病(ESRD)的阳性家族史的患有奥尔波特综合征的受试者和/或患有慢性肾脏病(CKD)的患者的方法。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肾脏疾病或病症或降低所述疾病或病症的进展速率和/或严重性的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)至患有局灶节段性肾小球硬化(FSGS)的受试者。
FSGS是一种肾小球瘢痕疾病，其特征为肾活检上足细胞足的消失。在分析来自患有FSGS的受试者的尿样时，通常观察到大量尿蛋白损失，其可能进展至肾衰竭。FSGS是一种在美国患有特发性肾病综合征的成人中常见的组织病理学病变，占所有病例的约35％。FSGS也是在美国患有终末期肾脏疾病(ESRD)的患者中鉴定的最常见的原发性肾小球疾病。FSGS作为与ESRD相关的病变的患病率已经有所上升。FSGS的特征为，在通过光学显微镜术(LM)、免疫荧光(IF)或电子显微镜术(EM)检查时，在肾活检样本的至少一个肾小球(局灶性)的部分(节段性)中硬化的存在。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者(例如，患有FSGS的受试者)的尿蛋白损失的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者(例如，患有FSGS的受试者)的肾衰竭的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者(例如，患有FSGS的受试者)的终末期肾脏疾病(ESRD)的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者(例如，患有FSGS的受试者)的肾的肾小球中硬化的严重性、发生率和/或持续时间的方法。
FSGS因多个通路单独地或共同地导致足细胞损伤而引起，所述足细胞是肾中环绕肾小球毛细血管的鲍曼囊中的细胞。存在与FSGS相关的五种已知病因以及提出的第六种病因。FSGS的病因包括原发性的(例如，特发性的)、继发性的(例如，适应性的)、遗传的、病毒相关的、用药相关的和APOL1风险等位基因相关的。原发性的或特发性的FSGS与对免疫抑制疗法具有反应性的血浆因子和在肾移植后复发的风险相关。在原发性FSGS中，对足细胞有毒的假定循环因子引起广泛性足细胞功能障碍。原发性FSGS最常与肾病系统一起存在。继发性(例如，适应性)FSGS与过多的肾单位工作负荷相关，这是由于与某些疾病相关的身体大小增加、肾单位容量降低或单一肾小球超滤所致。继发性FSGS通常作为源自肾单位质量减小的适应性现象而发生，或者可以被视为被来自药物(例如，海洛因、干扰素和氨羟二磷酸二钠)的直接毒性药物诱导的或者被病毒感染(例如，HIV)病毒诱导的。继发性FSGS通常与非肾病蛋白尿和/或与一定程度的肾功能不全一起存在。继发性FSGS最常是指作为对肾小球肥大或超滤的适应性反应发展的FSGS。另外的病因被公认为FSGS的驱动物，包括由于近40个基因之一中的突变所致的高外显率遗传性FSGS(遗传性FSGS)、病毒相关的FSGS和用药相关的FSGS。新出现的数据支持对第六种病因的鉴定：具有撒哈拉以南的祖先的个体的APOL1风险等位基因相关的FSGS。有时，继发性FSGS涵盖病毒相关的FSGS和/或用药相关的FSGS。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有原发性的或特发性的FSGS的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有继发性或适应性FSGS的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有遗传性FSGS的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有病毒相关的FSGS的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有用药相关的FSGS的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有APOL1风险等位基因相关的FSGS的受试者的方法。
原发性FSGS包括几个原型特征。原发性FSGS是青少年和年轻成人最常见的FSGS形式，并且一般与肾病范围蛋白尿(有时大量蛋白尿，例如，尿中>10g蛋白质/天)、降低的血浆白蛋白水平和/或高脂血症相关。在一些实施方案中，肾病范围蛋白尿包括>3.5g蛋白质/天的蛋白尿，和/或<3.5g白蛋白/dL尿(<35g/L)的低白蛋白血症，和/或肾病综合征的其他表现(例如，水肿、高脂血症)。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者(例如，患有原发性FSGS的受试者)的肾病范围蛋白尿、降低的血浆白蛋白水平或高脂血症中的一种或多种的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者(例如，患有原发性FSGS的受试者)的蛋白尿的严重性、发生率和/或持续时间的方法。
患有继发性或适应性FSGS的受试者通常与随时间缓慢增加的蛋白尿和肾功能不全一起存在。患有继发性FSGS的受试者的蛋白尿通常以非肾病范围存在(例如，肾病范围通常是每天尿中损失3克或更多蛋白质，和/或尿中存在2克蛋白质/克肌酐)。有时，患有继发性FSGS的受试者的蛋白尿包括正常的血清白蛋白水平。患有继发性FSGS的受试者可能具有升高的肾小球滤过率(GFR)，其为经肾过滤的流体的流速的测量。在一些实施方案中，具有继发性FSGS和GFR增加的受试者可能具有选自以下的一种或多种另外的和/或相关的病症：先天性紫绀型心脏病、镰状细胞贫血、肥胖症、雄激素滥用、睡眠呼吸暂停和高蛋白饮食。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗具有正常GFR的患有继发性FSGS的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗具有降低的GFR的患有继发性FSGS的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者(例如，患有原发性FSGS的受试者)的蛋白尿和/或肾功能不全的严重性、发生率和/或持续时间的方法。
病毒牵涉在引起FSGS中。HIV-1可能与FSGS、特别是塌陷性肾小球病变体相关。牵涉在引起FSGS中的其他病毒包括但不限于巨细胞病毒、细小病毒B19和EB病毒。寄生虫也与FSGS相关，其包括但不限于疟原虫属(Plasmodium)(疟疾)、曼氏血吸虫(Schistosomamansoni)和丝虫病。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与HIV-1相关的FSGS的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与HIV-1、巨细胞病毒、细小病毒B19和EB病毒中的一种或多种相关的FSGS的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与寄生虫(包括但不限于疟原虫属(疟疾)、曼氏血吸虫和丝虫病)相关的FSGS的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与感染(包括但不限于HIV、巨细胞病毒、细小病毒B19、EB病毒、肺结核、利什曼病和疟疾)相关的FSGS的受试者的方法。
在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与牵涉在引起FSGS中的自身免疫性障碍(包括但不限于成人斯蒂尔病、系统性红斑狼疮和混合性结缔组织障碍)相关的FSGS的受试者的方法。
在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与牵涉在引起FSGS中的恶性肿瘤(包括但不限于噬血细胞性淋巴组织细胞增生症、多发性骨髓瘤和急性原始单核细胞白血病)相关的FSGS的受试者的方法。
在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与牵涉在引起FSGS中的急性肾小球缺血(包括但不限于血栓性微血管病、肾梗死、动脉栓塞和亲水聚合物栓塞)相关的FSGS的受试者的方法。
在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与牵涉在引起FSGS中的遗传障碍(包括但不限于APOL1高风险等位基因、镰状细胞病、线粒体病(辅酶Q缺乏)、急性肌阵挛-肾衰竭综合征和加洛韦-莫厄特综合征)相关的FSGS的受试者的方法。
在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与牵涉在引起FSGS中的移植后事件(包括但不限于动脉病/血栓性微血管病、急性排斥反应和病毒感染(巨细胞病毒、EB病毒、BK多瘤病毒))相关的FSGS的受试者的方法。
在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与某些用药相关的FSGS的受试者的方法。在一些实施方案中，IFN-α、IFN-β或IFN-γ疗法与塌陷性肾小球病的发展相关。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与足细胞损伤(包括MCD)、FSGS和特别是塌陷性FSGS(塌陷性肾小球病)中的一种或多种相关的FSGS的受试者的方法，所述受试者已经服用和/或仍在服用二膦酸盐。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有FSGS的受试者的方法，所述受试者已经进行和/或当前正在进行锂疗法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有FSGS的受试者的方法，所述受试者已经服用和/或仍在服用西罗莫司。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有FSGS的受试者的方法，所述受试者已经服用和/或仍在服用蒽环素药物，所述蒽环素药物包括多柔比星(阿霉素)和柔红霉素。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有FSGS的受试者的方法，所述受试者已经服用和/或仍在服用牵涉在引起FSGS中的药物，所述药物包括但不限于二膦酸盐、干扰素(α、β或γ)、同化类固醇、钙调磷酸酶抑制剂以及雷帕霉素(mTOR)抑制剂的哺乳动物(机械的)靶标。
遗传性FSGS采用两种形式。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与易患基因中的一种或多种变体相关的遗传性FSGS的受试者(即，具有特定变体的一些个体会患上FSGS，并且其他个体不会患上FSGS)的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与一种或多种易患基因(包括但不限于APOL1和PDSS1)相关的FSGS的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与一种或多种高外显率突变相关的遗传性FSGS的受试者的方法，所述高外显率突变表现孟德尔遗传(对于核基因)或母体遗传(对于由线粒体DNA编码的基因)。与FSGS相关的基因数量每年增加，很大程度上是由于全外显子组测序的普及所致。已经鉴定出至少38个基因与遗传性FSGS相关。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与遗传性FSGS中涉及的一个或多个基因(包括COL4A3、COL4A4、COL4A5、ITGB4、LAMB2、NPHS、NPHS2、CD2AP、PTPRO、MYO1E、ACTN4、INF2、AHRGP24、AHRGDIA、MYH9、INF1、MT-TL1、MT-TL2、MT-TY、COQ2、COQ6、PDSS2、ADCK、WT1、NUP95、NUP203、XP05、NXF5、PAX2、LMX1B、SMARCAL1、NXF5、EYA1、WDR73、LMNA、PLCE1、TRPC6、KANK4、SCARB2和TTC21B)相关的FSGS的受试者的方法。
在一些实施方案中，对怀疑患有FSGS的受试者施用肾活检。可以通过光学显微镜术分析肾活检样品以确定肾小球大小、FSGS的组织学变体、微囊性小管变化以及小管肥大中的一种或多种。此外，可以通过免疫荧光分析肾活检以排除其他原发性肾小球病，和/或通过电子显微镜术来分析以确定足细胞足过程消失的程度、足细胞微绒毛转化和管网状包涵中的一种或多种。肾组织学的完整评估对于建立节段性肾小球硬化的实质环境，区分与许多其他肾小球疾病之一相关的FSGS与FSGS的临床-病理性综合征是重要的。在一些实施方案中，使用遗传测试进一步分析受试者的遗传性FSGS病因。
传统上，基于哥伦比亚分类对FSGS进行分类，哥伦比亚分类基于LM检查定义了FSGS病变的五种形态变体。这种分类系统设计为仅依赖于病理学标准，并且没有将这些发现与临床和/或遗传信息整合。通常，在肾活检中见到的形态特征无法区分FSGS的遗传形式与非遗传形式。例外包括与NPHS1和辅肌动蛋白α4基因突变相关的区别性特征以及法布里病、奥尔波特综合征和卵磷脂-胆固醇酰基转移酶缺乏的疾病特有的病变。FSGS的组织学变体包括FSGS非特指型(NOS)(以前称为经典FSGS，其为最常见的形式)；塌陷性变体、顶端变体；门周变体；以及细胞变体。尽管在LM中肾小球的外观依据定义在这些形式之间不同，但它们都共有足细胞改变的超微结构发现。顶端病变影响肾小球丛与小管极点并列的部分，并且顶端病变异常包括在顶端黏附至鲍曼囊、细胞过多、泡沫细胞的存在和/或硬化中的一种或多种。塌陷性变体显示节段性整体性系膜合并以及与毛细管外上皮肥大和/或增殖相关的毛细管内开放性丧失。门周变体和NOS变体分别通过伴有基质增加(伴有或没有透明变性)的毛细血管袢的节段性硬化/节段性闭塞是否涉及门附近的节段或者是否无法确定具体节段来确定。细胞病变是最难可重现地鉴定的病变。细胞病变显示节段性毛细血管内细胞过多而阻塞管腔，且伴有或没有泡沫细胞和核碎裂。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肾脏疾病或病症或降低所述疾病或病症的进展速率和/或严重性的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)，其中所述肾脏疾病或病症是多囊肾病(PKD)。
多囊肾病以两种形式发生：常染色体隐性(ARPKD)和常染色体显性(ADPKD)。所述疾病的这两种形式具有不同的遗传基础，并且已经鉴定出ADPKD中涉及的两个基因，已经鉴定出ARPKD中涉及的一个基因。两种不同类型的疾病的表现非常相似，并且二者都源自小管上皮细胞的过度增殖，其最终导致小管结构的破坏和囊肿形成，从而引起慢性肾衰竭。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有常染色体隐性遗传多囊肾病(ARPKD)的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有常染色体显性遗传多囊肾病(ADPKD)的受试者的方法。
常染色体显性多囊肾病(ADPKD)是一种遗传性肾脏障碍，特征为肾脏显著肿大和到处广泛的囊肿形成。这些囊肿随着年龄进行性地增大，同时肾功能逐渐下降。ADPKD的诊断是基于家族史和超声检查评价。在多至25％的患有ADPKD的患者中，未鉴定出家族史，这可能与亚临床疾病或约5％此类病例中的新基因突变有关。ADPKD的定义性特征是显著的双侧肾肿大。患有ADPKD的患者通常截至生命的第五个或第六个十年进展至终末期肾脏疾病(ESRD)。ADPKD的进展速率与肾体积直接相关，并且治疗旨在减缓肾体积的下降以延迟进展。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的肾上的囊肿的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的肾肿大的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的肾体积(例如，总肾体积)增加的严重性、发生率和/或持续时间的方法。
可以将ADPKD归因于染色体16(PKD1基因座)或染色体4(PKD2基因座)上的异常。PKD1突变占ADPKD病例的约78％，而PKD2突变占病例的约14％。PKD1患者往往在比PKD2患者更早的年龄进展至ESRD。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有具有PKD1基因座中的突变的ADPKD的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有具有PKD2基因座中的突变的ADPKD的受试者的方法。
PKD1和PKD2基因分别编码蛋白质多囊蛋白-1和多囊蛋白-2。这些多囊蛋白是整合膜蛋白并且发现于肾小管上皮中。假定多囊蛋白-1肿大异常损害肾小管上皮中的细胞-细胞相互作用和细胞-基质相互作用，而多囊蛋白-2肿大异常损害细胞中的钙信号传导。
作为结果的由于PKD所致的肾脏病理生理学的变化包括但不限于血尿(通常为肉眼血尿)、浓缩缺陷(导致多尿和口渴加重)、轻度蛋白尿、肾结石(在约25％的ADPKD患者中)、胁腹痛和腹痛。此外，囊肿破裂、出血和感染是常见的并发症。进行性肾功能下降通常导致终末期肾脏疾病。高血压是最普遍的初始临床表现，在约50％至约70％的病例中发生，并且是与下降至ESRD和心血管并发症的速率直接相关的最常见特征。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的血尿、浓缩缺陷、蛋白尿、肾结石、胁腹痛和腹痛中的一种或多种的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的囊肿破裂、出血和感染中的一种或多种的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的终末期肾脏疾病(ESRD)的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的高血压的严重性、发生率和/或持续时间的方法。
多种肾外表现通常存在于患有多囊肾病的受试者中。脑动脉瘤发生在约5％的年轻成人中，并且多达20％的患者年龄超过60岁。脑动脉瘤或蛛网膜下出血的风险在具有所述疾病家族史的受试者中最高。肾外囊肿在ADPKD中是常见的。在这些患者中通常注意到肝脏囊肿，并且患病率岁年龄而增加。已经报道多达94％的年龄超过35岁的患者患有肝脏囊肿。相比于男性，总囊肿患病率和体积在女性中更高。ADPKD患者中的肝脏囊肿很少引起肝功能障碍。罕见地，患者因急性囊肿感染或出血而出现疼痛。另外，约7％与约36％之间的ADPKD患者患上胰腺囊肿，且具有PKD2突变的ADPKD患者的患病率更高。已经在25％至30％的ADPKD患者中注意到心血管疾病。心血管并发症，特别是心脏肥大和冠状动脉疾病，是患有ADPKD的患者死亡的首要原因。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的脑动脉瘤的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的肾外囊肿的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的肝脏囊肿的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的胰腺囊肿的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的心血管并发症(例如，心脏肥大,冠状动脉疾病)的严重性、发生率和/或持续时间的方法。
常染色体隐性多囊肾病(ARPKD)是儿童的显著肾脏和肝脏相关的发病率和死亡率的一个原因。大多数患有ARPKD的受试者在新生儿期呈现，伴随增大的回声肾。肾脏疾病的特征为肾肥大、高血压和不同程度的肾功能障碍。超过50％的患有ARPKD的受影响个体在生命的第一个十年内进展至终末期肾脏疾病(ESRD)，并且进展至ESRD的患有ARPKD的受试者可能需要肾移植。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的肾肥大、高血压和肾功能障碍中的一种或多种的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的终末期肾脏疾病的严重性、发生率和/或持续时间，从而预防对肾移植的需要的方法。
可以将ARPKD归因于位于染色体6p21上的PKHD1基因中的突变，所述基因含有至少66个外显子并且编码纤维囊蛋白(fibrocystin)(也称为多导管蛋白(polyductin)，一种整合膜蛋白)。尽管纤维囊蛋白的功能当前未知，但其发现于肾脏的皮质和髓质集合管以及升支粗段中，以及肝内胆管的上皮细胞中。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有与PKHD1中的一个或多个突变相关的ARPKD的受试者的方法。
由于PKHD1突变的多样性，在ARPKD的病例中将基因型与表型相关联可能具有挑战性。具有两个截短突变的受试者可能具有更严重的肾受累并且可能具有早期新生儿死亡的风险。作为错义突变的纯合子或者具有与截短突变配对的错义突变的受试者也可能具有严重表型。作为具有两个错义突变的杂合子的受试者通常患有较轻度的疾病。从新生儿期存活的受试者最常具有至少一个错义突变。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有包含两个截短突变的ARPKD的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有包含一个或多个错义突变的ARPKD的受试者的方法。
在ARPKD中受影响的两个主要器官系统是肾和肝胆道。肾的大小可能增加和/或具有微囊肿(通常大小小于2mm)，所述微囊肿从髓质辐射至皮质，并且在肾囊表面上作为极小点是可见的。肾脏疾病的严重性与受囊肿影响的肾单位的百分比成比例。较大的肾囊肿(大到1cm)和间质纤维化发展，其促进在存活超出新生儿期的受试者中见到的肾功能的进行性衰退。ARPKD与胆道发育不全相关，所述胆道发育不全由于包括不同程度的肝内胆管扩张和肝脏纤维化的发育缺陷所致。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低肾大小增加和/或囊肿的存在的严重性、发生率和/或持续时间的方法。
ARPKD的临床表现基于症状发作年龄和肝或肾受累的主导性而变化。ARPKD通常通过受孕24周后胎儿的常规产前超声检查来检测。假定的诊断是基于显著肿大的回声肾和较差皮质髓质分界的特征性发现的存在。可以检测到大小范围为直径5至7mm的离散囊肿；然而，更大的囊肿是少见的，尤其是直径>10mm的那些。通常监测患有ARPKD的受试者的血压变化、肾功能、血清电解质浓度、水合状态、营养状态和生长。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有ARPKD的受试者的方法，其还包括监测血压、肾功能、血清电解质浓度、水合状态、营养状态和生长中的一个或多个。
在新生儿期期间，婴儿可以呈现出肾脏表现，其可能伴随或可能不伴随呼吸窘迫。患有ARPKD的婴儿可能呈现出双侧显著肿大的肾，其可能影响肺功能或由于胃受肾压迫而导致进食困难。患有ARPKD的婴儿可能呈现出肾功能受损，反映为增加的肌酐和血尿素氮(BUN)的血清/血浆浓度。患有终末期肾脏疾病(ESRD)的新生儿可能需要肾替代疗法(RRT)才能存活。患有ARPKD的婴儿可能呈现出高血压和低钠血症(由于不能最大程度的稀释尿液所致)中的一种或多种。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的肾功能受损的严重性、发生率和/或持续时间的方法，所述肾功能受损反映为增加的肌酐和血尿素氮(BUN)的血清/血浆浓度。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的高血压和/或低钠血症的严重性、发生率和/或持续时间的方法。
对于存活超出新生儿期的患者，可能由于持续的肾成熟而存在肾功能改进。然而，随着时间推移，肾功能的进行性衰退可能发展，其可能是快速的或缓慢的并且可能导致ESRD。患有ARPKD的青少年受试者可能具有以下中的一种或多种：肾功能的进行性衰退(通常始于小管功能障碍或损伤的体征)、由于浓缩能力降低所致的多尿和/或烦渴、最大尿渗透压低于500mosmol/kg、由于尿酸化能力下降所致的代谢性酸中毒、高血压、尿道感染的复发性发作、排尿异常(包括的必要性轻度蛋白尿、糖尿、高磷酸盐尿和/或镁的尿排泄量增加)、进行性肾损伤以及肾生长率和/或肾大小降低。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的肾功能的进行性衰退、进行性肾损伤和肾生长率和/或肾大小降低中的一种或多种的严重性、发生率和/或持续时间的方法。
ARPKD的超声发现的特征为双侧大回声肾和较差皮质髓质分界。在仅具有髓质受累的患者中，标准分辨率超声检查可以是正常的；然而，高分辨率超声检查能够检测限于髓质的导管膨胀。通常在患有常染色体显性疾病的受试者中见到的大囊肿在患有ARPKD的患者中在婴儿期间通常不存在，但是在年龄更大的儿童中可能出现。因此，在年龄更大的受试者中，通过超声区分ARPKD与常染色体显性遗传多囊肾病(ADPKD)可能更有挑战性。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有ARPKD或ADPKD的受试者的方法，其还包括通过超声区分疾病。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肾脏疾病或病症或降低所述疾病或病症的进展速率和/或严重性的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)至患有慢性肾脏病(CKD)的受试者。
慢性肾脏病(CKD)是一种肾脏受损并且无法像健康的肾那样好地过滤血液的病症。患有CKD的受试者通常有过多来自血液的流体和废物留在体内。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗患有CKD的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有CKD的受试者，其中所述受试者还患有选自以下的一种或多种其他健康病症：贫血或红细胞数量低、感染的发生率增加、血液中的低钙水平、高钾水平和高磷水平、食欲丧失或吃得少、抑郁或生活质量降低。
CKD具有不同水平的严重程度并且通常随时间推移而恶化，但已显示治疗可减缓进展。如果不进行治疗，CKD可能进展至肾衰竭、终末期肾脏疾病(ESRD)和/或早期心血管疾病，潜在地导致透析或肾移植才能存活。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的肾衰竭、终末期肾脏疾病(ESRD)和/或早期心血管疾病的严重性、发生率和/或持续时间的方法。
CKD的诊断通常通过测量估算肾小球滤过率(eGFR)的血液测试和/或测量尿中的白蛋白和/或总蛋白的尿测试来完成。典型地，尿中蛋白质的增加指示CKD。可以进行超声或肾活检以确定潜在的病因。
在一些实施方案中，CKD最初的表现没有症状，并且通常在常规血液筛选工作中通过血清肌酐和/或尿中蛋白质的增加而被检测出来。随着患有CKD的受试者的肾功能下降，血压由于体液超量和肾脏经由肾素-血管紧张素系统产生的血管活性激素的产生而升高，从而增加患上高血压和心力衰竭的风险。随着尿素在患有CKD的受试者体内积累，可能发生氮质血症和最终的尿毒症(症状范围为嗜睡至心包炎和脑病)。由于尿素的高系统浓度，尿素在外分泌腺汗液中以高浓度排泄，并且在汗液蒸发时在皮肤上结晶(例如，“尿毒症霜”)。在患有CKD的受试者中，钾可能在血液中积累(例如，高钾血症，其具有一系列症状，包括乏力和可能致命的心律失常)。高钾血症通常不在患有CKD的受试者中发展，直至肾小球滤过率(GFR)下降至小于约20至约25ml/min/1.73m2，此时肾脏排泄钾的能力下降。CKD中的高钾血症可能因酸血症(其导致钾的细胞外转移)和缺乏胰岛素而加重。患有CKD的受试者可能患有高磷血症，其可能源自肾脏中的较差磷酸盐消除。高磷血症通过引起血管钙化而促使心血管风险增加。患有CKD的受试者可能患有低钙血症。患有CKD的受试者可能具有矿物和骨代谢的一种或多种变化，其可能引起钙、磷(磷酸盐)、甲状旁腺激素或维生素D代谢的异常；骨转换、矿化、体积、线性生长或强度的异常(肾性骨营养不良)；和/或血管或其他软组织钙化。患有CKD的受试者可能患有代谢性酸中毒，其可能源自从近端小管的细胞生成足够氨的能力下降。患有CKD的受试者可能患有贫血。在CKD的较后期，受试者可能患上恶病质，从而导致无意的体重减轻、肌肉消耗、乏力和厌食症。患有CKD的受试者比一般群体更有可能患上动脉粥样硬化和由此引起的心血管疾病。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低选自以下的CKD的一种或多种病症或并发症的严重性、发生率和/或持续时间的方法：血压升高、高血压和/或心力衰竭、氮质血症、尿毒症、“尿毒症霜”、高钾血症、肾脏排泄钾的能力下降、酸血症、高磷血症、血管钙化、低钙血症、矿物和骨代谢的变化(特别是可能引起钙、磷(磷酸盐)、甲状旁腺激素或维生素D代谢的异常的变化)、骨转换、矿化、体积、线性生长或强度的异常(肾性骨营养不良)、血管或其他软组织钙化、代谢性酸中毒、贫血、恶病质(特别是可能导致无意的体重减轻、肌肉消耗、乏力和厌食症的恶病质)以及动脉粥样硬化(其可能导致心血管疾病)。
CKD的常见病因是糖尿病、高血压和肾小球肾炎。五个患有高血压的成人中约一个和三个患有糖尿病的成人中的一个患有CKD。CKD也可能由以下中的一种或多种引起：血管疾病(包括但不限于大血管疾病如双侧肾动脉狭窄和小血管疾病如缺血性肾病、溶血性尿毒综合征、血管炎)、原发性肾小球疾病(局灶节段性肾小球硬化(FSGS)和/或IgA肾病(或肾炎))、继发性肾小球疾病(如糖尿病肾病和狼疮肾炎)、肾小管间质性疾病(其包括药物和毒素诱导的慢性小管间质性肾炎和反流性肾病)、梗阻性肾病(如例示为双侧肾结石和前列腺的良性前列腺增生)以及先天性疾病(如多囊肾病)。罕见地，感染肾脏的蛲虫可能引起梗阻性肾病。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有由以下中的一种或多种引起的CKD的受试者的方法：糖尿病、高血压和肾小球肾炎、血管疾病(包括但不限于大血管疾病如双侧肾动脉狭窄和小血管疾病如缺血性肾病、溶血性尿毒综合征、血管炎)、原发性肾小球疾病(局灶节段性肾小球硬化(FSGS)和/或IgA肾病(或肾炎))、继发性肾小球疾病(如糖尿病肾病和狼疮肾炎)、肾小管间质性疾病(其包括药物和毒素诱导的慢性小管间质性肾炎以及反流性肾病)、梗阻性肾病(如例示为双侧肾结石和前列腺的良性前列腺增生)以及先天性疾病(如多囊肾病)。罕见地，感染肾脏的蛲虫可能引起梗阻性肾病。
在一些实施方案中，任何本文公开的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白可以单独使用或与一种或多种支持疗法或活性剂组合使用，用于治疗、预防慢性肾脏病(例如，组织损伤、炎症和/或纤维化)或降低所述慢性肾脏病的进展速率和/或严重性。慢性肾脏病(CKD)，也称为慢性肾病，是一种在数月或数年的时间段中肾功能的进行性丧失。肾脏功能恶化的症状可能包括总体感觉不适和经历食欲下降。通常，慢性肾脏病是作为筛查已知具有肾脏问题风险的人，如患有高血压或糖尿病的那些人和具有患有CKD的血亲的那些人的结果而被诊断出。在该疾病导致其公认的并发症(如心血管疾病、贫血或心包炎)之一时，也可以鉴定该疾病。最近的专业指南将CKD的严重性分为五个阶段，其中第1阶段最轻且通常引起很少症状，并且第5阶段是严重疾病，如果不治疗则预期寿命短。第5阶段CKD通常被称为终末期肾脏疾病、终末期肾病或终末期肾脏衰竭，并且在很大程度上与现在已过时的术语慢性肾衰竭或慢性肾脏衰竭同义；并且通常意指该患者需要肾替代疗法，其可能涉及一种形式的透析，但理想地是进行肾脏移植。CKD最初没有特定症状，并且通常仅被检测为尿液中血清肌酸酐或蛋白质增加。随着肾脏功能的下降，可能会出现以下各种症状。由于体液超量和肾脏经由肾素-血管紧张素系统产生的血管活性激素的产生，血压可能增加，从而增加了欢声高血压和/或患上充血性心力衰竭的风险。尿素可能积累，导致氮质血症和最终的尿毒症(症状范围为嗜睡至心包炎和脑病)。由于尿素的高系统性循环，尿素在外分泌腺汗液中以高浓度排泄，并且在汗液蒸发时在皮肤上结晶(“尿毒症霜”)。钾可能在血液中积累(高钾血症，其具有一系列症状，包括乏力和可能致命的心律失常)。高钾血症通常不发展，直至肾小球滤过率下降至小于20-25ml/min/1.73m2，此时肾脏排泄钾的能力下降。CKD中的高钾血症可能因酸血症(其导致钾的细胞外转移)和缺乏胰岛素而加重。促红细胞生成素合成可能减少，从而引起贫血。体液体积超量症状可能发生，范围为轻度水肿至危及生命的肺水肿。由于磷酸盐排出减少所致的高磷酸盐血症可能通常在肾小球滤过减少后产生。高磷酸盐血症与心血管风险增加有关，是血管钙化的直接刺激因素。低钙血症可能会出现，其通常通过刺激纤维母细胞生长因子-23引起。骨细胞负责增加FGF23的产生，FGF23是酶1-α-羟化酶(其负责将25-羟基胆钙化醇转化为1,25二羟基维生素D3)的有效抑制剂。随后，其进展为继发性甲状旁腺功能亢进、肾性骨营养不良和进一步损害心脏功能的血管钙化。可能发生代谢性酸中毒(由于硫酸盐、磷酸盐、尿酸等的积累)，并且由于过量的酸作用于酶而引起酶活性改变；并且还通过因过量酸(酸血症)促进高钾血症来增加心脏和神经元膜的兴奋性。酸中毒也是由于从近端肾小管的细胞产生足够的氨的能力降低引起的。随着肾功能降低而患病率增加的缺铁性贫血在需要血液透析的人中尤为普遍。缺铁性贫血的原因是多因素的，但包括炎症增加、红细胞生成素减少和导致骨髓抑制的高尿酸血症。患有CKD的人患有加速的动脉粥样硬化并且比一般人群更有可能患心血管疾病。患有CKD和心血管疾病的患者往往比仅患有后者的患者具有明显更差的预后。在一些实施方案中，慢性肾脏病是慢性肾脏病矿物骨障碍，所述障碍是由肾脏疾病引起的相互关联的骨骼、心血管和矿物代谢障碍的广泛综合征。CKD-MBD涵盖了通常称为肾性骨营养不良(ROD)的各种骨骼病变，其为用任何本文公开的多肽或与一种或多种支持疗法或活性剂的组合治疗的优选实施方案。根据不同病理性因子的相对贡献，ROD表现为骨重建的不同病理性模式(Hruska等人,2008,Chronic kidney disease mineral bone disorder(CKD-MBD)；Rosen等人(编辑)Primeron the Metabolic Bone Diseases and Disorders of Mineral Metabolism,第7版American Society for Bone and Mineral Research,华盛顿,第343-349页)。在所述疾病谱的一端是伴有尿毒症性骨营养不良和低骨转换的ROD，其特征为少量的活性重建部位、深度抑制的骨形成和低的骨再吸收。另一端是伴有甲状旁腺功能亢进症、高骨转换和纤维性骨炎的ROD。
在一些实施方案中，本公开文本考虑治疗肾相关疾病(例如，奥尔波特综合征或局灶节段性肾小球硬化)的一种或多种并发症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。在一些实施方案中，本公开文本考虑预防肾相关疾病(例如，奥尔波特综合征或局灶节段性肾小球硬化)的一种或多种并发症的方法，其包括向有需要的患者施用呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低肾相关疾病(例如，奥尔波特综合征或局灶节段性肾小球硬化)的进展速率的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低肾相关疾病(例如，奥尔波特综合征或局灶节段性肾小球硬化)的一种或多种并发症的进展速率的方法，其包括向有需要的患者施用呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低肾相关疾病(例如，奥尔波特综合征或局灶节段性肾小球硬化)的严重性的方法，其包括向有需要的患者施用呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低肾相关疾病(例如，奥尔波特综合征或局灶节段性肾小球硬化)的一种或多种并发症的严重性的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白。任选地，本文公开的用于治疗、预防肾相关疾病(例如，奥尔波特综合征或局灶节段性肾小球硬化)或降低所述疾病的进展速率和/或严重性，特别是治疗、预防肾相关疾病的一种或多种并发症或降低所述并发症的进展速率和/或严重性的方法还可以包括向患者施用用于治疗所述肾相关疾病的一种或多种支持疗法或另外的活性剂。
在一些实施方案中，本公开文本涉及监测患有肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的受试者的白蛋白尿和/或蛋白尿的方法。尿中的蛋白质水平升高是许多肾脏疾病或病症的标志。对于有风险的儿童，对白蛋白尿和蛋白尿的每年监测是在一岁年龄时开始启动。蛋白尿包括尿中异常量的蛋白质的存在。蛋白尿的最灵敏的标记是升高的尿白蛋白(例如，白蛋白尿)。白蛋白通常在血液中循环，并且在未患肾脏疾病或病症的受试者的尿中仅发现痕量的白蛋白。中度白蛋白尿通常被称为微量白蛋白尿，而重度白蛋白尿通常被称为大量白蛋白尿。高于上限值的白蛋白水平被称为重度白蛋白尿或大量白蛋白尿。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗患有白蛋白尿、蛋白尿、微量白蛋白尿和大量白蛋白尿中的一种或多种的受试者的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低有需要的受试者的白蛋白尿、蛋白尿、微量白蛋白尿和大量白蛋白尿中的一种或多种的严重性、发生率和/或持续时间的方法。
根据如何进行这样的测量，白蛋白的测量可以具有不同单位。在一些实施方案中，尿中的白蛋白是作为白蛋白质量/尿收集时间段(例如，mg/24h)来测量。在一些实施方案中，尿中的白蛋白是作为白蛋白质量/体积收集的尿(例如，mg/L)来测量。在一些实施方案中，尿中的白蛋白是作为白蛋白质量/尿中肌酐质量(例如，μg/mg肌酐，称为白蛋白-肌酸比率，或ACR)。
在一些实施方案中，向受试者施用尿测试，以确定肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的存在。在一些实施方案中，尿测试包括在特定时间段(例如，24小时)中收集尿液。中度白蛋白尿或微量白蛋白尿包括在约30与约300mg白蛋白/24小时之间的在来自24小时尿收集的尿中检测的白蛋白水平，和/或在约20与约200μg白蛋白/1分钟之间的在来自一分钟尿收集的尿中检测的白蛋白水平。重度白蛋白尿或大量白蛋白尿包括高于约300mg白蛋白/24小时的在来自24小时尿收集的尿中检测的白蛋白水平，和/或高于约200μg白蛋白/1分钟的在来自1分钟尿收集的尿中检测的白蛋白水平。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有中度白蛋白尿或微量白蛋白尿的受试者的方法，所述中度白蛋白尿或微量白蛋白尿包括在约30与约300mg白蛋白/24小时之间的在来自24小时尿收集的尿中检测的白蛋白水平。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有中度白蛋白尿或微量白蛋白尿的受试者的方法，所述中度白蛋白尿或微量白蛋白尿包括在约20与约200μg白蛋白/1分钟之间的在来自一分钟尿收集的尿中检测的白蛋白水平。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有重度白蛋白尿或大量白蛋白尿的受试者的方法，所述重度白蛋白尿或大量白蛋白尿包括高于约300mg白蛋白/24小时的在来自24小时尿收集的尿中检测的白蛋白水平。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有重度白蛋白尿或大量白蛋白尿的受试者的方法，所述重度白蛋白尿或大量白蛋白尿包括高于约200μg白蛋白/1分钟的在来自1分钟尿收集的尿中检测的白蛋白水平。
在一些实施方案中，尿测试包括使用单一尿样的斑点测试。在一些实施方案中，尿测试包括浸染棒测试。在一些实施方案中，尿浸染棒测试可以提供对白蛋白尿的水平的估计。在一些实施方案中，中度白蛋白尿或微量白蛋白尿包括在约20与约200mg白蛋白/L尿之间的在来自斑点样品的尿中检测的白蛋白水平。在一些实施方案中，重度白蛋白尿或大量白蛋白尿包括高于约200mg白蛋白/L尿的在来自斑点样品的尿中检测的白蛋白水平。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有中度白蛋白尿或微量白蛋白尿的受试者的方法，所述中度白蛋白尿或微量白蛋白尿包括在约20与约200mg白蛋白/L尿之间的在来自斑点样品的尿中检测的白蛋白水平。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有重度白蛋白尿或大量白蛋白尿的受试者的方法，所述重度白蛋白尿或大量白蛋白尿包括高于约200mg白蛋白/L尿的在来自斑点样品的尿中检测的白蛋白水平。
为了补偿斑点检查样品中尿浓度的变化(相比于更大的样品收集和/或随时间进行的样品收集)，比较所述样品中白蛋白的量与肌酐的尿浓度是有用的。这被称为白蛋白/肌酐比率(ACR)。在一些实施方案中，白蛋白尿的存在和/或严重性是通过尿中白蛋白与肌酐的比率(例如，白蛋白-肌酐比率，ACR)来确定。ACR下限和上限可以在男性与女性之间变化。ACR是作为尿中的白蛋白质量单位/肌酐质量单位来测量的。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗患有中度白蛋白尿或微量白蛋白尿的受试者的方法，所述中度白蛋白尿或微量白蛋白尿包括在约30与约300mg白蛋白/g肌酐之间的ACR。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗患有重度白蛋白尿或大量白蛋白尿的受试者的方法，所述重度白蛋白尿或大量白蛋白尿包括高于约300mg白蛋白/g肌酐的ACR。在一些实施方案中，正常ACR通常低于30mg白蛋白/g肌酐。重要的是注意到，任何白蛋白尿测量的量度单位可以不同。例如，ACR可以作为μg白蛋白/mg肌酐来测量。mg白蛋白/g肌酐的单位与μg白蛋白/mg肌酐的单位是可互换的。如果白蛋白和肌酐二者都是作为质量的测量来提供，有时在没有单位的情况下提供ACR。
ACR可以作为尿中的白蛋白质量/肌酐浓度来测量。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗有需要的受试者的中度白蛋白尿或微量白蛋白尿的方法，所述中度白蛋白尿或微量白蛋白尿包括在约2.5与约35mg白蛋白/mmol肌酐之间的ACR。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗有需要的受试者的重度白蛋白尿或大量白蛋白尿的方法，所述重度白蛋白尿或大量白蛋白尿包括高于约35mg白蛋白/mmol肌酐的ACR。
通常将描述受试者的肾损伤和功能丧失的程度的疾病阶段分配给患有肾脏疾病或病症的受试者。白蛋白尿阶段通常是按照ACR来测量。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有A1期白蛋白尿的受试者的方法。A1期白蛋白尿包括正常至中等增加的尿中的白蛋白水平，和小于30mg白蛋白/g肌酐(或小于3mg白蛋白/mmol肌酐)的ACR。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有A2期白蛋白尿的受试者的方法。A2期包括中度白蛋白尿或微量白蛋白尿，其具有在约30与约300mg白蛋白/g肌酐之间(或在约3与约30mg白蛋白/mmol肌酐之间)的ACR。在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗患有A3期白蛋白尿的受试者的方法。A3期包括重度白蛋白尿或大量白蛋白尿，其具有大于300mg白蛋白/g肌酐(或大于30mg白蛋白/mmol肌酐)的ACR。在一些实施方案中，将疗法施用至患有肾脏疾病或病症的受试者将延迟或预防终末期肾脏疾病的发展。在一些实施方案中，将疗法施用至患有肾脏疾病或病症的受试者将降低所述受试者的白蛋白尿阶段。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低A1期白蛋白尿的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低A2期白蛋白尿的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低A3期白蛋白尿的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗患有A1期白蛋白尿的受试者的方法，所述方法延迟或预防进展至A2期白蛋白尿。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗患有A2期白蛋白尿的受试者的方法，所述方法延迟或预防进展至A3期白蛋白尿。在一些实施方案中，本公开文本提供延迟和/或预防有需要的受试者的白蛋白尿阶段进展的恶化的方法。在一些实施方案中，本公开文本提供有需要的受试者的肾损伤的改进和/或白蛋白尿阶段分类的降级。在一些实施方案中，本公开文本提供将受试者的白蛋白尿分类改进一个或多个阶段的方法。
在一些实施方案中，受试者患有肾病范围内的蛋白尿。在一些实施方案中，肾病范围内的蛋白尿包括在约3与约3.5g尿中的蛋白质/24小时/1.73m2体表面积之间。在一些实施方案中，患有肾病综合征的受试者患有大于3.5g/24h/1.73m2的蛋白尿。
在一些实施方案中，本公开文本涉及降低患有肾脏疾病或病症的受试者的ACR的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约0.1与约2.5mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约2.5与约3.5mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约3.5与约5.0mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约5.0与约7.5mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约7.5与约10.0mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约10.0与约15.0mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约15.0与约20.0mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约20.0与约25.0mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约30.0与约35.0mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约40.0与约45.0mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约45.0与约50.0mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约50.0与约60.0mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约60.0与约70.0mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约70.0与约80.0mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约80.0与约90.0mg白蛋白/g肌酐之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低约90.0与约100.0mg白蛋白/g肌酐之间。
在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低至少2.5％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低至少5％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低至少10％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低至少15％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低至少20％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低至少25％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低至少30％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低至少40％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低至少50％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低至少60％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低至少70％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低至少80％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低至少90％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低至少95％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的ACR降低至少99％。
在一些实施方案中，可以测量总尿蛋白并且与尿中的肌酐存在(例如，UPCR)相比较。在一些实施方案中，UPCR是对蛋白尿的测量。在一些实施方案中，蛋白尿包括大于0.2mg/mg的尿蛋白-肌酐比率(UPCR)。在一些实施方案中，蛋白尿包括大于4mg/m2/小时的尿蛋白排泄。在一些实施方案中，将肾脏疾病或病症的完全消退(CR)定义为小于0.2g蛋白质/g肌酐的一致UPCR测量。在一些实施方案中，将肾脏疾病或病症的部分消退(PR)定义为具有相对于基线蛋白尿的约50％降低以及小于约2g蛋白质/g肌酐的一致UPCR。
在一些实施方案中，本公开文本涉及降低患有肾脏疾病或病症的受试者的UPCR的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约0.2与约1mg/mg之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低小于0.5mg/mg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约0.1与约100.0mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约0.1与约2.5mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约2.5与约3.5mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约3.5与约5.0mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约5.0与约7.5mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约7.5与约10.0mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约10.0与约15.0mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约15.0与约20.0mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约20.0与约25.0mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约30.0与约35.0mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约40.0与约45.0mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约45.0与约50.0mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约50.0与约60.0mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约60.0与约70.0mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约70.0与约80.0mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约80.0与约90.0mg尿蛋白/mg肌酐之间。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低约90.0与约100.0mg尿蛋白/mg肌酐之间。
在一些实施方案中，疗法的施用降低尿蛋白排泄。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低至少2.5％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低至少5％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低至少10％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低至少15％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低至少20％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低至少25％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低至少30％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低至少40％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低至少50％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低至少60％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低至少70％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低至少80％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低至少90％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低至少95％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的UPCR降低至少99％。
可以向受试者施用血液测试，以通过确定肾过滤血液的程度来确定肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的存在。典型地，确定肾小球滤过率(GFR)，其测量经由肾过滤至鲍曼囊中的流体(例如，血液)的流速。GFR等于当任何溶质被肾自由过滤并且既不被肾再吸收也不被肾分泌时的清除速率。因此，GFR是对来源于可计算体积的血液的尿中的物质的量的测量，并且通常以体积/时间(例如，毫升/分钟(mL/min))的单位来记录。针对体表面积调整的GFR的正常范围在男性中为约100与约130mL/min/1.73m2之间，且男性中的平均GFR为125mL/min/1.73m2。针对体表面积调整的GFR的正常范围在年龄小于40岁的女性中为约90与约120mL/min/1.73m2之间。在小于2岁龄的儿童中通过菊糖清除率测量的GFR为约110mL/min/1.73m2，其进行性地降低。在40岁后，GFR随着年龄进行性地降低，每年降低约0.4与约1.2mL/min之间。GFR还可以通过血液与尿中的物质的比较性测量来计算，使用血液测试结果(例如，eGFR)来估计。在一些实施方案中，eGFR是使用血清肌酐、年龄、民族性和性别变量来测量的。在一些实施方案中，eGFR是使用以下中的一种或多种来测量的：Cockcroft-Gault公式、肾病饮食调整(MDRD)公式、CKD-EPI公式、Mayo二次公式以及Schwartz公式。
在未患慢性肾脏病的受试者中，如果不存在肾损伤，则≥60ml/min/1.73m2的肾小球滤过率(GFR)被认为是正常的，所述肾损伤包括在血液、尿或成像研究中见到的损伤体征，其包括≥30的实验室白蛋白/肌酐比率(ACR)。GFR<60ml/min/1.73m2持续至少3个月的受试者被诊断为患有慢性肾脏病。
通常，尿中的蛋白质被视为肾功能下降和心血管疾病的独立标记，并且慢性肾脏病的阶段(通常一般用于肾脏疾病和/或病症)是通过测量受试者的GFR来确定的。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗1期CKD的方法。1期CKD包括正常肾功能、具有正常或相对高GFR(例如，≥90ml/min/1.73m2)的肾损伤以及较低的肌酐水平。可以将肾损伤定义为病理性异常或损伤标记，包括血液或尿测试或成像研究中的异常。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗2期CKD的方法。2期CKD包括肾功能轻度降低和GFR(例如，在约60与约89ml/min/1.73m2之间)和肾损伤。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗3期CKD的方法。3期CKD包括肾功能轻度至中度降低和GFR(例如，在约30与约59ml/min/1.73m2之间)。可以将3期CKD分为3a期(例如，肾功能轻度至中度降低和在约45与约59ml/min/1.73m2之间的GFR)和3b其(例如，肾功能中度至重度降低和在约30与约44ml/min/1.73m2之间的GFR)。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗3a期CKD的方法。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗3b期CKD的方法。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗4期CKD的方法。4期CKD包括肾功能重度降低和GFR(例如，在约15与约29ml/min/1.73m2之间)。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗5期CKD的方法。5期CKD包括已确立的肾衰竭(例如，约<15ml/min/1.73m2的GFR)、永久性肾替代疗法、终末期肾脏疾病(ESRD)和高肌酐水平。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低1期CKD的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低2期CKD的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低3期CKD的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低3a期CKD的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低3b期CKD的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低4期CKD的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本涉及降低5期CKD的严重性、发生率和/或持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗患有1期CKD的受试者的方法，所述方法延迟或预防进展至2期CKD。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗患有2期CKD的受试者的方法，所述方法延迟或预防进展至3期CKD。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗患有2期CKD的受试者的方法，所述方法延迟或预防进展至3a期CKD。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗患有2期CKD的受试者的方法，所述方法延迟或预防进展至3b期CKD。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗患有3a期CKD的受试者的方法，所述方法延迟或预防进展至3b期CKD。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗患有3期CKD的受试者的方法，所述方法延迟或预防进展至4期CKD。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗患有3a期CKD的受试者的方法，所述方法延迟或预防进展至4期CKD。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗患有3b期CKD的受试者的方法，所述方法延迟或预防进展至4期CKD。在一些实施方案中，本公开文本提供治疗患有4期CKD的受试者的方法，所述方法延迟或预防进展至5期CKD。在一些实施方案中，本公开文本提供延迟和/或预防有需要的受试者的CKD阶段进展的恶化的方法。在一些实施方案中，本公开文本提供有需要的受试者的肾损伤的改进和/或CKD阶段分类的降级。在一些实施方案中，本公开文本提供将受试者的CKD分类改进一个或多个阶段的方法。
在一些实施方案中，本公开文本涉及增加患有肾脏疾病或病症的受试者的GFR和/或eGFR的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR和/或eGFR增加至少2.5％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR和/或eGFR增加至少5％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR和/或eGFR增加至少10％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR和/或eGFR增加至少15％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR和/或eGFR增加至少20％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR和/或eGFR增加至少25％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR和/或eGFR增加至少30％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR和/或eGFR增加至少40％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR和/或eGFR增加至少50％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR和/或eGFR增加至少60％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR和/或eGFR增加至少70％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR和/或eGFR增加至少80％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR和/或eGFR增加至少90％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR和/或eGFR增加至少95％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR和/或eGFR增加至少99％。
在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约1mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约3mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约5mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约7mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约9mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约10mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约15mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约20mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约25mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约30mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约35mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约40mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约45mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约50mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约55mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约60mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约65mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约70mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约75mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约80mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约85mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约90mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约95mL/min/1.73m2。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的GFR增加约100mL/min/1.73m2。
在一些实施方案中，GFR和/或eGFR可以通过将菊糖或菊糖类似物海葱糖(sinistrin)注射至血浆中来确定。因为菊糖和海葱糖二者在肾小球过滤后都既不会被肾再吸收也不会被肾分泌，它们的排泄速率与水和溶质经肾小球过滤器过滤的速率成正比。在一些实施方案中，GFR和/或eGFR是使用放射性物质来测量的。在一些实施方案中，GFR和/或eGFR是使用铬-51来测量的。在一些实施方案中，GFR和/或eGFR是使用51Cr-EDTA的肾或血浆清除率来测量的。在一些实施方案中，GFR和/或eGFR是使用锝-99m来测量的。在一些实施方案中，GFR和/或eGFR是使用99mTc-DTPA来测量的。使用放射性物质的益处是它们接近菊糖的理想特性(仅经历肾小球过滤)，但是可以更实用地仅用少量尿样或血液样品来测量。已经显示51Cr-EDTA的肾和血浆清除率与菊糖相比是精确的。在一些实施方案中，菊糖清除率略微过高估计肾小球功能。在早期肾脏疾病中，菊糖清除率由于在剩余肾单位中的超滤而可以保持正常。不完整的尿收集是菊糖清除率测量中的误差的重要来源。
肌酐清除速率(CCr或CrCl)是每单位时间清除了肌酐的血浆的体积，并且是近似计算GFR的有用量度。肌酐清除率由于肌酐分泌而超过GFR，肌酐分泌可以被西咪替丁阻断。GFR和CCr二者都可以通过血液与尿中的物质的比较性测量精确计算，或者通过仅使用血液测试结果(eGFR和eCCr)的公式来估计。
在一些实施方案中，本公开文本涉及降低患有肾脏疾病或病症的受试者的总肾体积的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)。在一些实施方案中，总肾体积是通过超声测量的。在一些实施方案中，总肾体积是通过磁共振成像(MRI)测量的。在一些实施方案中，总肾体积反映肾脏疾病或障碍(例如，ADPKD)中肾和囊肿的体积之和。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的总肾体积降低至少2.5％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的总肾体积降低至少5％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的总肾体积降低至少10％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的总肾体积降低至少15％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的总肾体积降低至少20％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的总肾体积降低至少25％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的总肾体积降低至少30％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的总肾体积降低至少40％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的总肾体积降低至少50％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的总肾体积降低至少60％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的总肾体积降低至少70％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的总肾体积降低至少80％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的总肾体积降低至少90％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的总肾体积降低至少95％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的总肾体积降低至少99％。
在一些实施方案中，测量血尿素氮(BUN)。在一些实施方案中，BUN测试测量血液中尿素氮的量。在一些实施方案中，如果肾受损，尿素氮的量可能更高。在一些实施方案中，本公开文本涉及减少患有肾脏疾病或病症的受试者的BUN的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的变体ActRIIB多肽(例如，变体ActRIIB同多聚体蛋白或变体ActRIIB异多聚体蛋白)。在一些实施方案中，人的正常BUN水平在约7mg/dL与约20mg/dL之间。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的BUN减少至少2.5％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的BUN减少至少5％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的BUN减少至少10％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的BUN减少至少15％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的BUN减少至少20％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的BUN减少至少25％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的BUN减少至少30％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的BUN减少至少40％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的BUN减少至少50％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的BUN减少至少60％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的BUN减少至少70％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的BUN减少至少80％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的BUN减少至少90％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的BUN减少至少95％。在一些实施方案中，与基线测量相比，所述方法涉及将所述受试者的BUN减少至少99％。
任选地，本文公开的用于治疗、预防肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)或降低所述疾病或病症的进展速率和/或严重性，特别是治疗、预防肾脏疾病或病症的一种或多种并发症或降低所述并发症的进展速率和/或严重性的方法还可以包括向受试者施用用于治疗肾脏疾病或病症的一种或多种另外的活性剂和/或支持疗法。在一些实施方案中，向受试者施用用于治疗肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的另外的活性剂和/或支持疗法。在一些实施方案中，ARB和ACE抑制剂是肾脏疾病和病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的主要疗法，其中β阻断和钙通道阻滞药作为二线疗法。在一些实施方案中，作为三线疗法，噻嗪类在具有正常肾功能的受试者中是优选的，而髓袢利尿剂在肾功能受损的受试者中是优选的。
在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的受试者施用肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的拮抗剂。在一些实施方案中，RAAS抑制剂包括但不限于血管紧张素拮抗剂(例如，血管紧张素阻断疗法、血管紧张素系统抑制剂、肾素-血管紧张素系统抑制剂、血管紧张素II阻断、血管紧张素II 1型受体阻滞药、ARB、血管紧张素II受体拮抗剂、AT1受体拮抗剂或沙坦(sartan))和血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂。在一些实施方案中，RAAS拮抗作用以及特别地ACE抑制剂与ARB的组合将通过降低传出小动脉血管紧张且因此降低肾小球内毛细血管血压(肾小球过滤的驱动力)来降低GFR。因此，GFR的适度降低可以被耐受，从而提供已经实现RAAS拮抗作用的证据。
在一些实施方案中，在受试者显示蛋白尿的体征时，向受试者施用血管紧张素拮抗剂(例如，血管紧张素受体阻滞药，ARB)。在一些实施方案中，ARB减少患有肾脏疾病或病症的受试者的蛋白尿。在一些实施方案中，血管紧张素拮抗剂减小患有肾脏疾病或病症的受试者的肾小球硬化率。在一些实施方案中，ARB的施用降低肾脏疾病进展。在一些实施方案中，向受试者施用选自以下的一种或多种ARB：氯沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、坎地沙坦、缬沙坦、非马沙坦、阿齐沙坦、沙普沙坦和替米沙坦。在一些实施方案中，向受试者施用氯沙坦。在一些实施方案中，向受试者施用厄贝沙坦。在一些实施方案中，向受试者施用奥美沙坦。在一些实施方案中，向受试者施用坎地沙坦。在一些实施方案中，向受试者施用缬沙坦。在一些实施方案中，向受试者施用非马沙坦。在一些实施方案中，向受试者施用阿齐沙坦。在一些实施方案中，向受试者施用沙普沙坦。在一些实施方案中，向受试者施用替米沙坦。
在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用ACE抑制剂。在一些实施方案中，ACE抑制剂选自贝那普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、培哚普利、雷米普利(例如，雷米平)、群多普利和佐芬普利。在一些实施方案中，向受试者施用贝那普利。在一些实施方案中，向受试者施用卡托普利。在一些实施方案中，向受试者施用依那普利。在一些实施方案中，向受试者施用赖诺普利。在一些实施方案中，向受试者施用培哚普利。在一些实施方案中，向受试者施用雷米普利。在一些实施方案中，向受试者施用群多普利。在一些实施方案中，向受试者施用佐芬普利。在一些实施方案中，ACE抑制剂的施用延迟具有蛋白尿和正常肾功能的受试者的透析。在一些实施方案中，ACE抑制剂的施用减缓受试者的肾功能的下降。在一些实施方案中，ACE抑制剂的施用减少受试者的蛋白尿。在一些实施方案中，ACE抑制剂的施用减少受试者的肾损伤。
在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用ARB和ACE抑制剂。在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症(包括蛋白尿和/或微量白蛋白尿)的受试者施用ARB和ACE抑制剂。
在一些实施方案中，血管紧张素拮抗作用的替代性方法是将ACE抑制剂和/或ARB与醛固酮拮抗剂组合。
在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症(例如，原发性FSGS)的受试者施用免疫抑制治疗。在一些实施方案中，用免疫抑制药物治疗患有肾脏疾病或病症的受试者。在一些实施方案中，不向患有继发性FSGS的受试者施用免疫抑制。在一些实施方案中，不向未患原发性FSGS的受试者施用免疫抑制药。在一些实施方案中，免疫抑制药选自皮质类固醇、钙调磷酸酶抑制剂、JAK激酶抑制剂、雷帕霉素(mTOR)抑制剂的哺乳动物靶标、IMDH抑制剂和生物制品(包括但不限于单克隆抗体)。
在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用皮质类固醇。在一些实施方案中，糖皮质激素是皮质类固醇。在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用一种或多种糖皮质激素。在一些实施方案中，糖皮质激素的施用是初始疗法。在一些实施方案中，糖皮质激素选自倍氯米松、倍他米松、布地奈德、可的松、地塞米松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、甲基强的松、泼尼松和曲安西龙。在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用泼尼松。在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用泼尼松龙。
在一些实施方案中，钙调磷酸酶抑制剂选自环孢菌素(例如，环孢素(cyclosporin)、环孢灵、环孢素(ciclosporine)、Neoral、Sandimmune、SangCya)和他罗利姆(例如，Astagraf XL、Envarsus XR、Prograf)。在一些实施方案中，将钙调磷酸酶抑制剂施用至无法耐受连续类固醇疗法的对类固醇敏感的受试者，和/或施用至患有类固醇抗性肾脏疾病(例如类固醇抗性FSGS)的受试者。在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用环孢菌素。在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用他罗利姆。
在一些实施方案中，可以向患有肾脏疾病或病症的受试者施用一种或多种皮质类固醇和/或钙调磷酸酶抑制剂的组合。在一些实施方案中，可以向患有肾脏疾病或病症的受试者施用环孢菌素和泼尼松。在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用他罗利姆和泼尼松。在一些实施方案中，施用环孢菌素和泼尼松以保留评估为肌酐清除的肾功能。
在一些实施方案中，用与糖皮质激素组合的麦考酚酸吗乙酯(MMF)治疗在无法服用钙调磷酸酶抑制剂的受试者中可能是有益的。在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用与一种或多种糖皮质激素组合的麦考酚酸吗乙酯(MMF)。在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用MMF和泼尼松。在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用泼尼松龙和MMF。
在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用环磷酰胺和/或泼尼松。在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用泼尼松龙和/或苯丁酸氮芥。在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用环磷酰胺。在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症的受试者施用苯丁酸氮芥。
在一些实施方案中，JAK激酶抑制剂是托法替尼(例如，Xeljanz)。
在一些实施方案中，mTOR抑制剂选自西罗莫司(例如，雷帕鸣)和依维莫司(例如，Afinitor、Zortress)。
在一些实施方案中，IMDH抑制剂选自硫唑嘌呤(例如，Azasan、Imuran)、来氟米特(例如，Arava)和麦考酚酯(例如，CellCept、Myfortic)。
在一些实施方案中，生物制品选自阿巴西普(例如，Orencia)、阿达木单抗(例如，Humira)、阿那白滞素(例如，Kineret)、巴利昔单抗(例如，Simulect)、赛妥珠单抗(例如，Cimzia)、达克珠单抗(例如，Zinbryta)、依那西普(例如，Enbrel)、非苏木单抗、戈利木单抗(例如，Simponi)、英利昔单抗(例如，Remicade)、依奇珠单抗(例如，Taltz)、那他珠单抗(例如，Tysabri)、利妥昔单抗(例如，Rituxan)、苏金单抗(例如，Cosentyx)、托珠单抗(例如，Actemra)、优特克单抗(例如，Stelara)和维多珠单抗(例如，Entyvio)。
在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的受试者施用他汀(例如，贝那普利、缬沙坦、氟伐他汀、普伐他汀)。
在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的受试者施用甲基巴多索隆。甲基巴多索隆是一种KEAP1-Nrf2通路的激活物，并且甲基巴多索隆还抑制促炎转录因子NF-κB。
在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的受试者施用Achtar凝胶。Achtar凝胶在20世纪50年代依据不如现在的要求严格的标准被美国食品药品监督管理局批准用于肾病综合征。在一些实施方案中，一些病例研究提出Acthar在一些患有FSGS的受试者中的有限功效。在一些实施方案中，向患有FSGS的受试者施用Achtar凝胶。
在一些实施方案中，向患有ADPKD的受试者施用托伐普坦(例如，OPC-41061)。在一些实施方案中，托伐普坦已经在患有晚期慢性肾脏病的患者中在一年时间段中显示比安慰剂更慢的eGFR下降，但是与胆红素和丙氨酸氨基转移酶水平的升高相关。
在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的受试者施用以下中的一种或多种：阿巴西普联合斯派森坦、阿利吉仑、别嘌呤醇、ANG-3070、阿托伐他汀、布来鲁单抗、博舒替尼、CCX140-B、CXA-10、D6-25-羟维生素D3、达格列净、地塞米松联合MMF、大黄素、FG-3019、FK506、FK-506和MMF、FT-011、半乳糖、GC1008、GFB-887、异维甲酸、拉德梅森、兰瑞肽、左旋咪唑、利希普坦、洛批莫德、二甲双胍、咪唑立宾、N-乙酰甘露糖胺、奥曲肽、帕立骨化醇、PF-06730512、吡格列酮、丙帕锗、丙帕锗和厄贝沙坦、雷帕鸣、雷帕霉素、RE-021(例如，斯派森坦)、RG012、罗格列酮(例如，Avandia)、沙奎那韦、SAR339375、促生长素抑制素、螺内酯、特泊替尼(KD019)、替可克肽、雷公藤(TW)、丙戊酸、VAR-200、文格司他(GZ402671)、维立诺雷、伏环孢素或VX-147。
在一些实施方案中，患有肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的受试者经历肾透析。在一些实施方案中，患有肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的受试者经历肾移植。在一些实施方案中，患有ESRD的受试者经历肾移植。在一些实施方案中，进行肾移植的受试者未经历复发性肾脏疾病。在一些实施方案中，进行肾移植的受试者患上抗肾小球基膜抗体病。在一些实施方案中，抗肾小球基膜抗体病在肾移植后一年内发生。在一些实施方案中，向患有抗肾小球基膜抗体病的受试者施用甲基强的松和/或环磷酰胺。在一些实施方案中，患有抗肾小球基膜抗体病的受试者经历血浆去除术。
在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的受试者施用间充质干细胞疗法。在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的受试者施用骨髓干细胞。在一些实施方案中，患有肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的受试者经历脂蛋白清除。在一些实施方案中，向患有肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的受试者施用Liposorber LA-15装置。在一些实施方案中，患有肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的受试者经历血浆去除术。在一些实施方案中，患有肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的受试者经历血浆置换。在一些实施方案中，患有肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的受试者经历饮食改变(例如，膳食钠摄入量)。
在一些实施方案中，本公开文本的方法延迟受试者的肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)的临床恶化。在一些实施方案中，本公开文本的方法降低与肾脏疾病或病症(例如，奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、多囊肾病、慢性肾脏病)相关的一种或多种并发症的住院风险。
7.药物组合物
在某些实施方案中，将本公开文本的化合物(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)用药学上可接受的载体来配制。例如，变体ActRIIB蛋白可以单独施用或作为药物制剂(治疗性组合物)的组分施用。本发明化合物可以被配制用于以在人或兽医药物中任何方便的方式施用。
在某些实施方案中，本公开文本涉及药物制剂，其包含ActRIIB多肽(包括变体ActRIIB多肽以及包含所述变体ActRIIB多肽的同多聚体和异多聚体)和药学上可接受的载体。在一些实施方案中，包含一种或多种变体ActRIIB异多聚体的药物制剂包含小于约10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或小于约1％同多聚体。
在某些实施方案中，本文所述的治疗方法包括将组合物作为植入物或装置外用地、全身地或局部地施用。当然，在施用时，用于本公开文本中的治疗组合物呈无热原的生理上可接受的形式。此外，可以将组合物合意地以黏性形式包封或注射用于递送至靶组织部位(例如，肾、肺、心脏、骨、软骨、肌肉、脂肪或神经元)，例如，具有组织损伤的部位。外用施用可以适合于伤口愈合和组织修复。还可以任选地包括于如上所述的组合物中的除了变体ActRIIB蛋白以外的治疗上有用的药剂可以在本文所述的方法中可替代地或另外地与主题化合物(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)同时或依序施用。
在某些实施方案中，本公开文本的组合物可以包括能够将一种或多种治疗化合物(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)递送至靶组织部位的基质，从而为发育中的组织提供结构并且最佳地能够被再吸收至体内。例如，所述基质可以提供变体ActRIIB蛋白的缓慢释放。此类基质可以由目前用于其他植入医疗应用的材料形成。
基质材料的选择是基于生物相容性、生物可降解性、机械特性、装饰性外观和界面特性。主题组合物的特定应用将限定适当的制剂。组合物的潜在基质可以是生物可降解的和化学成分确定的硫酸钙、磷酸三钙、羟基磷灰石、聚乳酸和聚酸酐。其他潜在的材料是生物可降解的和生物学上明确限定的，如骨或真皮胶原。其他基质由纯蛋白质或细胞外基质组分组成。其他潜在基质是不可生物降解的和化学成分确定的，如烧结的羟基磷灰石、生物玻璃、铝酸盐或其他陶瓷。基质可以由任何上述类型的材料的组合组成，如聚乳酸和羟基磷灰石或胶原和磷酸三钙。生物陶瓷的组成可以改变，如铝酸钙-磷酸盐中，并且加工以改变孔径、粒度、颗粒形状和生物降解性。
在某些实施方案中，本文所述的变体ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以口服施用，例如，呈胶囊剂、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用调味的基质，通常为蔗糖和阿拉伯糖或黄芪胶)、散剂、颗粒剂的形式，或者作为水性或非水性液体中的溶液或悬浮液，或者作为水包油或油包水液体乳液，或者作为酏剂或糖浆剂，或作为软锭剂(使用惰性基质，如明胶和甘油，或者蔗糖和阿拉伯胶)和/或作为口洗剂等，其各自含有预定量的药剂作为活性成分。药剂还可以作为推助剂、舐剂或糊剂来施用。
在用于口服施用的固体剂型(胶囊剂、片剂、丸剂、糖锭剂、散剂、颗粒剂等)中，可以将本公开文本的一种或多种变体ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)与一种或多种药学上可接受的载体混合，所述载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下中的任一种：(1)填充剂或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)湿润剂，如甘油；(4)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，如石蜡；(6)吸收促进剂，如季铵化合物；(7)润湿剂，如像鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；(8)吸收剂，如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物；以及(10)着色剂。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，药物组合物还可以包含缓冲剂。类似类型的固体组合物也可作为填充剂用于使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中。
用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆剂和酏剂。除活性成分之外，液体剂型可以含有在本领域中常用的惰性稀释剂，如水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(具体地，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨聚糖的脂肪酸酯及其混合物。除了惰性稀释剂，口服组合物还可以包括佐剂，如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。
除活性化合物以外，悬浮液还可以含有助悬剂，如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄芪胶以及其混合物。
本文公开的某些组合物可以外用施用至皮肤或粘膜。外用制剂还可以包含已知可作为皮肤或角质层渗透促进剂有效的多种药剂中的一种或多种。这些药剂的例子是2-吡咯烷酮、N-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇、甲基或异丙基醇、二甲基亚砜和氮酮。还可以包含另外的试剂以使配制品在化妆品上可接受。这些试剂的例子是脂肪、蜡、油类、染料、芳香剂、防腐剂、稳定剂和表面活性剂。还可以包含角质层分离剂，如本领域中已知的那些。例子是水杨酸和硫。
用于外用或透皮施用的剂型包括散剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液和贴剂。活性化合物可以在无菌条件下与药学上可接受的载体以及可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。除了本文所述的主题化合物(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)外，软膏剂、糊剂、乳膏剂和凝胶剂可以含有赋形剂，如动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄芪胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌或其混合物。
除主题化合物之外，散剂和喷雾剂还可以含有赋形剂，如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙以及聚酰胺粉末，或这些物质的混合物。喷雾剂可以另外含有常规推进剂，如氯氟烃和挥发性未取代的烃(如丁烷或丙烷)。
在某些实施方案中，适合于肠胃外施用的药物组合物可以包含一种或多种变体ActRIIB蛋白与一种或多种药学上可接受的无菌等渗水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳液，或可以在临使用前重构成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末的组合，所述组合可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使配制品与预期接受者的血液等渗的溶质，或者助悬剂或增稠剂。可用于本文所述的药物组合物中的合适的水性和非水性载体的例子包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物，植物油(如橄榄油)和可注射的有机酯(如油酸乙酯)。可以例如通过使用包衣材料(如卵磷脂)、在分散液的情况下通过维持所需粒度、以及通过使用表面活性剂来维持适当流动性。在一些实施方案中，肠胃外施用途径选自肌内、腹膜内、真皮内、玻璃体内、硬膜外、大脑内、动脉内、关节内、海绵窦内、病灶内、骨内、眼内、鞘内、静脉内、透皮、经黏膜、羊膜外施用，皮下及其组合。在一些实施方案中，肠胃外施用途径是皮下。在一些实施方案中，肠胃外施用途径是皮下注射。在一些实施方案中，本公开文本的组合物通过皮下注射来施用。
本文所述的组合物还可以含有佐剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可以通过包含各种抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等，来确保防止微生物的作用。还可能合意的是将等渗剂(如糖、氯化钠等)包含至组合物中。此外，可以通过包含延迟吸收的试剂(如单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射药物形式的延长吸收。
应理解，剂量方案将由主治医师在考虑修改本文所述的主题化合物(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)的作用的各种因素后来确定。所述各种因素将取决于要治疗的疾病。在肌肉障碍的情况下，因素可以包括但不限于期望形成的肌肉的量、受疾病影响最大的肌肉、肌肉恶化的状况、患者的年龄、性别和饮食、给药时间和其他临床因素。向最终组合物中添加其他已知的生长因子也可能影响剂量。可以通过定期评估肌肉生长和/或修复(例如，通过强度测试、肌肉尺寸的MRI评估和肌肉活组织检查的分析)来监测进展。
在某些实施方案中，一种或多种变体ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)可以组合(同一配制品或在单独配制品中)、并行、依序或按不同时间表施用。另外，变体ActRIIB蛋白可以与另一类型的治疗剂一起施用，所述治疗剂例如软骨诱导剂、骨诱导剂、肌肉诱导剂、减脂剂、神经元诱导剂、用于肺病的药剂(例如，西地那非)、用于肾脏疾病的药剂或用于心脏病的药剂。两种类型的化合物可以同时或在不同时间施用。预期本文所述的变体ActRIIB蛋白可以与另一种治疗剂配合作用或可能协同作用。
在一个具体例子中，已经描述了多种成骨因子、软骨诱导因子和骨诱导因子，特别是二膦酸盐。参见例如，欧洲专利申请号148,155和169,016。例如，可以与主题变体ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)组合的其他因子包括各种生长因子，如表皮生长因子(EGF)、血小板源性生长因子(PDGF)、转化生长因子(TGF-α和TGF-β)以及胰岛素样生长因子(IGF)。
在某些实施方案中，本公开文本还提供用于变体ActRIIB蛋白(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)的体内产生的基因疗法。这样的疗法将通过将变体ActRIIB多核苷酸序列引入患有如上文列出的障碍的细胞或组织中来实现其治疗作用。使用重组表达载体如嵌合病毒或胶体分散系统，可以实现变体ActRIIB多核苷酸序列的递送。对于变体ActRIIB多核苷酸序列的治疗性递送优选的是靶向脂质体的使用。
如本文所传授的可以用于基因疗法的各种病毒载体包括腺病毒、疱疹病毒、牛痘或优选RNA病毒如逆转录病毒。优选地，逆转录病毒载体是鼠或禽逆转录病毒的衍生物。可以插入单一外源基因的逆转录病毒载体的例子包括但不限于：莫洛尼鼠白血病病毒(MoMuLV)、哈维鼠肉瘤病毒(HaMuSV)、鼠乳腺瘤病毒(MuMTV)和劳斯肉瘤病毒(RSV)。多种另外的逆转录病毒载体可以掺入多个基因。所有这些载体都可以转移或掺入可选择标记的基因，使得可以鉴别并生成转导的细胞。可以通过附接例如糖、糖脂或蛋白质而使逆转录病毒载体成为靶标特异性的。优选的靶向通过使用抗体来实现。本领域技术人员将认识到，可以将特定多核苷酸序列插入逆转录病毒基因组中或附接至病毒包膜，以允许靶特异性递送含有变体ActRIIB多核苷酸的逆转录病毒载体。在一个优选实施方案中，将载体靶向至肾、肺、心脏、骨、软骨、肌肉或神经元细胞/组织。
可替代地，可以通过常规的磷酸钙转染，用编码逆转录病毒结构基因gag、pol和env的质粒直接转染组织培养细胞。然后用含有目的基因的载体质粒转染这些细胞。所得细胞将逆转录病毒载体释放到培养基中。
用于变体ActRIIB多核苷酸(例如，呈同聚或异聚形式的变体ActRIIB蛋白)的另一靶向递送系统是胶体分散系统。胶体分散系统包括大分子复合物、纳米胶囊、微球、珠和基于脂质的系统，所述系统包括水包油乳液、胶束、混合胶束和脂质体。本公开文本的优选胶体系统是脂质体。脂质体是人工膜囊泡，其在体外和体内可用作递送运载体。RNA、DNA和完整病毒粒子可以包封在水性内部并且以生物活性形式递送至细胞(参见例如，Fraley等人,Trends Biochem.Sci.,6:77,1981)。使用脂质体媒介物进行有效基因转移的方法是本领域中已知的，参见例如，Mannino等人,Biotechniques,6:682,1988。脂质体的组成通常是磷脂的组合，通常与类固醇、尤其是胆固醇的组合。也可以使用其他磷脂或其他脂质。脂质体的物理特性取决于pH、离子强度和二价阳离子的存在。
可用于脂质体产生的脂质的例子包括磷脂酰基化合物，如磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、鞘脂、脑苷脂和神经节苷脂。说明性磷脂包括卵磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰胆碱。基于例如器官特异性、细胞特异性和细胞器特异性，脂质体的靶向也是可能的，并且是本领域中已知的。
实施例
现在大体上描述本发明，通过参考以下实施例将更容易地理解本发明，所述实施例仅出于说明本发明的某些实施方案和实施方案的目的而被包括在内，并非意图限制本发明。
实施例1.ActRIIB-Fc融合蛋白的生成
申请人构建了可溶性ActRIIB融合蛋白,其具有用其间的接头(三个甘氨酸氨基酸)与人G1Fc结构域融合的人ActRIIB的细胞外结构域。所述构建体被称为ActRIIB-G1Fc。
ActRIIB-G1Fc在下文SEQ ID NO:5中示出(其中接头加下划线)，如从CHO细胞系所纯化：
GRGEAETRECIYYNANWELERTNQSGLERCEGEQDKRLHCYASWRNSSGTIELVKKGCWLDDFNCYDRQECVATEENPQVYFCCCEGNFCNERFTHLPEAGGPEVTYEPPPTAPTGGGTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:5)
ActRIIB-G1Fc蛋白在CHO细胞系中表达。考虑了三种不同的前导序列：
(i)蜜蜂蜂毒素(HBML)：MKFLVNVALVFMVVYISYIYA(SEQ ID NO:7)
(ii)组织纤溶酶原激活物(TPA)：MDAMKRGLCCVLLLCGAVFVSP(SEQ ID NO:8)
(iii)天然的：MTAPWVALALLWGSLCAG(SEQ ID NO:9)。
所选形式采用TPA前导序列并且具有以下未加工的氨基酸序列：
MDAMKRGLCCVLLLCGAVFVSPGASGRGEAETRECIYYNANWELERTNQSGLERCEGEQDKRLHCYASWRNSSGTIELVKKGCWLDDFNCYDRQECVATEENPQVYFCCCEGNFCNERFTHLPEAGGPEVTYEPPPTAPTGGGTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQID NO:6)
该多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:10)编码：
Figure GDA0004158550890001881
CHO细胞产生的物质的N末端测序揭示了-GRGEAE的主要序列(SEQ ID NO:11)。值得注意的是，文献中报告的其他构建体以-SGR…序列开始。
ActRIIB-G1Fc还可以如下文SEQ ID NO:519中所示来呈现(其中接头加下划线)，如从CHO细胞系所纯化：
GRGEAETRECIYYNANWELERTNQSGLERCEGEQDKRLHCYASWRNSSGTIELVKKGCWLDDFNCYDRQECVATEENPQVYFCCCEGNFCNERFTHLPEAGGPEVTYEPPPTAPTGGGTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPVPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:519)
所选形式采用TPA前导序列并且具有以下未加工的氨基酸序列(SEQ ID NO:520)：
Figure GDA0004158550890001882
Figure GDA0004158550890001891
该多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:521)编码：
Figure GDA0004158550890001892
CHO细胞产生的物质的N末端测序揭示了-GRGEAE的主要序列(SEQ ID NO:11)。值得注意的是，文献中报告的其他构建体以-SGR…序列开始。
可以通过一系列柱色谱步骤实现纯化，包括例如以任何顺序的以下步骤中的三步或更多步：蛋白A色谱、Q琼脂糖色谱、苯基琼脂糖色谱、尺寸排阻色谱和阳离子交换色谱。所述纯化可以通过病毒过滤和缓冲液交换来完成。
ActRIIB-Fc融合蛋白也在HEK293细胞和COS细胞中表达。尽管来自所有细胞系和合理培养条件的材料在体内提供具有肌肉构建活性的蛋白质，但观察到效力的可变性，这可能与细胞系选择和/或培养条件有关。
实施例2：计算方法
激活素IIB受体(ActRIIB)结合刺激Smad2/3激活的多种TGFβ超家族配体(包括激活素A、激活素B、GDF8和GDF11)，以及刺激Smad1/5/8激活的骨形态发生蛋白(BMP)(如BMP9和BMP10)。ActRIIB-Fc融合蛋白可以用作与可溶配体结合并通过防止配体与细胞表面受体结合来阻断Smad激活的配体阱。已知ActRIIB-Fc对BMP9介导的Smad1/5/8激活的拮抗作用会导致不期望的副作用，包括鼻出血和毛细管扩张(Campbell,C.等人Muscle Nerve 55:458-464,2017)。为了设计ActRIIB中减少BMP9结合同时保留与刺激Smad2/3激活的配体的结合的突变，比较了三种ActRIIB配体复合物的晶体结构：(1)BMP9:ActRIIB:Alk1，PDB ID＝4fao，(2) ActRIIB:激活素A，PDB ID:1s4y， 以及 (3)GDF11:ActRIIB:Alk5，PDB ID:6mac(可从蛋白质数据库(PDB)https://www.rcsb.org/获得)。基于晶体结构对ActRIIB与三种配体之间的接触的比较基于由相同的相应ActRIIB残基接触的配体残基的电荷、极性和疏水性差异揭示了突变灶的残基。在鉴定出要靶向以供突变的残基后，使用
Figure GDA0004158550890001893
Bioluminate生物制品建模软件平台(2017-4版：Bioluminate，
Figure GDA0004158550890001894
LLC，纽约，纽约州)以计算方式预测ActRIIB中会减少与BMP9的结合同时维持其他配体结合活性的突变。
考虑从晶体结构的比较中鉴定的所有残基用于突变。进行残基扫描计算，其考虑结构复合物中的分子的稳定性和亲和力二者，产生每种分子(配体和受体)和复合物结构的潜在突变和能量，以及野生型和突变体形式二者的能量差异的指定列表。在分析亲和力/稳定性/主要能量等参数后，鉴定前5％-10％的单一突变。在此分析后进行这些突变的潜在组合。在结构上分析所选单一突变和突变组合以理解结构差异和形成的/损失的接触。最终，对于每种复合物(ActRIIB:配体)筛选出817个单一突变，并且基于Δ亲和力以及选择性地考虑到Δ稳定性(溶剂化)和Δ主要能量来选择最优命中(top hit)。在关注离群值的剔除(striking)时，还考虑其他特性。
实施例3：变体ActRIIB-Fc蛋白的生成
基于实施例1中所述的发现，申请人在ActRIIB的细胞外结构域中生成了一系列突变(序列变异)，并且将这些变体多肽产生为可溶性同二聚融合蛋白，其包含通过任选接头接合的变体ActRIIB细胞外结构域和Fc结构域。用于变体ActRIIB-Fc蛋白的生成的背景ActRIIB-Fc融合物是ActRIIB-G1Fc，并且在上文实施例1中显示为SEQ ID NO:5。
将各种取代突变引入背景ActRIIB-G1Fc蛋白中。基于实施例1中呈现的数据，预期这些构建体如果与TPA前导序列一起表达，则将缺乏N末端丝氨酸。因此，大多数成熟序列可能始于甘氨酸(缺乏N末端丝氨酸)，但是一些种类可能呈现有N末端丝氨酸。通过PCR诱变在ActRIIB细胞外结构域中生成突变。在PCR后，将片段通过Qiagen柱纯化，用SfoI和AgeI消化并进行凝胶纯化。将这些片段连接至表达载体pAID4中(参见WO2006/012627)，使得在连接后其产生与人IgG1的融合嵌合体。在转化至大肠杆菌DH5α中之后，挑取菌落并分离DNA。对于鼠构建体(mFc)，用鼠IgG2a取代人IgG1。对所有突变体都进行序列验证。
未加工的ActRIIB(F82I-N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:276)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82I和N83R取代由
Figure GDA0004158550890001903
指示。SEQID NO:276的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001901
该ActRIIB(F82I-N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:277)编码：
Figure GDA0004158550890001902
Figure GDA0004158550890001911
成熟ActRIIB(F82I-N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:278)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001912
未加工的ActRIIB(F82K-N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:279)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82K和N83R取代由
Figure GDA0004158550890001913
指示。SEQID NO:279的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001914
该ActRIIB(F82K-N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:331)编码：
Figure GDA0004158550890001915
成熟ActRIIB(F82K-N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:332)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001916
未加工的ActRIIB(F82T-N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:333)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82T和N83R取代由
Figure GDA0004158550890001921
指示。SEQID NO:333的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001922
该ActRIIB(F82T-N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:334)编码：
Figure GDA0004158550890001923
成熟ActRIIB(F82T-N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:335)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001924
未加工的ActRIIB(F82T)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:336)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82T取代由
Figure GDA0004158550890001925
指示。SEQ ID NO:336的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001926
该ActRIIB(F82T)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:337)编码：
Figure GDA0004158550890001931
成熟ActRIIB(F82T)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:338)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001932
未加工的ActRIIB(L79H-F82I)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:339)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L79H和F82I取代由
Figure GDA0004158550890001933
指示。SEQID NO:339的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001934
该ActRIIB(L79H-F82I)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:340)编码：
 
Figure GDA0004158550890001935
Figure GDA0004158550890001941
成熟ActRIIB(L79H-F82I)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:341)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001942
未加工的ActRIIB(L79H)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:342)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L79H取代由
Figure GDA0004158550890001943
指示。SEQ ID NO:342的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001944
该ActRIIB(L79H)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:343)编码：
Figure GDA0004158550890001945
成熟ActRIIB(L79H)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:344)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
  
Figure GDA0004158550890001946
Figure GDA0004158550890001951
未加工的ActRIIB(L79H-F82K)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:345)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L79H和F82K取代由
Figure GDA0004158550890001952
指示。SEQID NO:345的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001953
该ActRIIB(L79H-F82K)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:346)编码：
Figure GDA0004158550890001954
成熟ActRIIB(L79H-F82K)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:347)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001955
未加工的ActRIIB(E50L)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:348)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且E50L取代由
Figure GDA0004158550890001956
指示。SEQ ID NO:348的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
 
Figure GDA0004158550890001957
Figure GDA0004158550890001961
该ActRIIB(E50L)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(密码子优化的)(SEQ ID NO:349)编码：
Figure GDA0004158550890001962
成熟ActRIIB(E50L)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:350)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001963
未加工的ActRIIB(L38N-L79R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:351)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L38N和L79R取代由
Figure GDA0004158550890001966
指示。SEQID NO:351的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001964
该ActRIIB(L38N-L79R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:352)编码：
 
Figure GDA0004158550890001965
Figure GDA0004158550890001971
成熟ActRIIB(L38N-L79R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:353)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001972
未加工的ActRIIB(V99G)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:354)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且V99G取代由
Figure GDA0004158550890001975
指示。SEQ ID NO:354的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001973
该ActRIIB(V99G)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(密码子优化的)(SEQ ID NO:355)编码：
 
Figure GDA0004158550890001974
Figure GDA0004158550890001981
成熟ActRIIB(V99G)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:356)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890001982
构建体通过瞬时感染在COS或CHO细胞中表达，并且通过过滤和蛋白A色谱进行纯化。在一些情况下，用条件培养基而不是纯化的蛋白质进行测定。通过SDS-PAGE和分析型尺寸排阻色谱评价用于报告基因测定的样品的纯度。
在下文描述的结合测定和/或生物测定中测试突变体。
可替代地，可以将类似突变引入ActRIIB细胞外结构域中，所述ActRIIB细胞外结构域具有五个氨基酸的N末端截短和三个氨基酸的C末端截短，如下文所示(SEQ ID NO:357)。
此截短的ActRIIB细胞外结构域基于SEQ ID NO:2中的编号表示为ActRIIB(25-131)。
Figure GDA0004158550890001983
相应的背景融合多肽ActRIIB(25-131)-G1Fc显示于下文中(SEQ ID NO:12)。
Figure GDA0004158550890001984
实施例4.变体ActRIIB-Fc蛋白的活性和配体结合谱
为了确定变体ActRIIB-Fc同二聚体的配体结合谱，使用基于BiacoreTM的结合测定来比较某些变体ActRIIB-Fc蛋白的配体结合动力学。使用抗Fc抗体将待测试的ActRIIB-Fc蛋白独立地捕获到系统上。然后注射配体并使其流过捕获的受体蛋白。在37℃下分析的变体ActRIIB-Fc蛋白的结果显示于图8A和图8B中。使用ActRIIB-G1Fc作为对照蛋白。
为了确定变体ActRIIB-Fc蛋白的活性，使用基于A204细胞的测定来比较与ActRIIB-G1Fc相比，变体ActRIIB-Fc蛋白对通过激活素A、激活素B、GDF8、GDF11、BMP9和BMP10的信号传导的作用。简言之，该测定使用源自肌肉的人A204横纹肌肉瘤细胞系(
Figure GDA0004158550890001985
HTB-82TM)和报告载体pGL3(CAGA)12(Dennler等人,1998,EMBO 17:3091-3100)以及海肾报告质粒(pRLCMV)来控制转染效率。CAGA12基序存在于TGF-β反应性基因(例如，PAI-1基因)中，因此该载体通常用于可以通过Smad2/3发信号的配体，所述配体包括激活素A、GDF11和BMP9。
在第1天，将A204细胞转移到一个或多个48孔板中。在第2天，用10μg pGL3(CAGA)12或pGL3(CAGA)12(10μg)+pRLCMV(1μg)和Fugene转染这些细胞。在第3天，将含有0.1％BSA的培养基中稀释的配体与ActRIIB-Fc蛋白一起预孵育1h，然后将其添加至细胞。大约六小时后，将细胞用PBS冲洗并裂解。在荧光素酶测定中分析细胞裂解产物以确定Smad激活的程度。
使用该测定针对对通过激活素A、激活素B、GDF8、GDF11、BMP9和BMP10的细胞信号传导的抑制作用来筛选变体ActRIIB-Fc蛋白。将在人ActRIIB细胞外结构域中掺入氨基酸取代的同二聚Fc融合蛋白的效力与包含未修饰的人ActRIIB细胞外结构域的Fc融合蛋白ActRIIB-G1Fc的效力相比较。对于所测试的一些变体，不可能计算精确的IC50，但是曲线斜率中抑制的迹象是可检测的。对于这些变体，包括相对IC50的数量级的估计值，即>10nM或>100nM，而不是明确的数字。这样的数据点由下表1中的(*)指示。对于所测试的一些变体，在所测试的浓度范围内在曲线的斜率中无可检测的抑制，其在表1中由“ND”指示。
表1.同二聚ActRIIB-Fc构建体的抑制性效力。
Figure GDA0004158550890001991
如上文表1中以及图8A和图8B中所示，ActRIIB细胞外结构域中的氨基酸取代可以在各种体外测定中改变ActRIIB:配体结合与下游信号传导活性之间的平衡。通常，申请人实现生成ActRIIB细胞外结构域中的变体的目标，所述变体展现与含有未修饰的ActRIIB细胞外结构域的融合蛋白(ActRIIB-G1Fc)相比降低的或无法检测的与BMP9的结合，同时保留其他配体结合特性。
另外地，如与ActRIIB-G1Fc相比，变体ActRIIB(L79H-F82I)、ActRIIB(L79H)和ActRIIB(L79H-F82K)在显示与BMP9的结合的降低时，还展现激活素A结合的显著降低，同时保留相对高的对激活素B的亲和力。表1中显示抑制性效力的IC50值与此配体结合趋势一致。类似地，变体ActRIIB(F82K-N83R)、ActRIIB(F82I-N83R)和ActRIIB(F82T-N83R)显示类似的趋势。
此外，如与ActRIIB-G1Fc相比，变体ActRIIB(F82K-N83R)、ActRIIB(F82I-N83R)、ActRIIB(F82T-N83R)和ActRIIB(L79H-F82K)在显示与BMP9的结合的降低和保留相对高的对激活素B的亲和力时，还展现GDF8和GDF11结合的显著降低。表1中显示抑制性效力的IC50值与此配体结合趋势一致。
另外应注意，如与ActRIIB-G1Fc相比，变体ActRIIB(L79H-F82I)、ActRIIB(L79H)和ActRIIB(L79H-F82K)在显示与BMP9的结合的降低和保留相对高的对激活素B的亲和力时，还展现BMP10结合的降低。表1中显示抑制性效力的IC50值与此配体结合趋势一致。
因此，除了实现产生展现降低的至无法检测的与BMP9的结合的ActRIIB变体的目标外，申请人还已经生成多种多样的新型变体多肽，其中许多的特征部分在于独特的配体结合/抑制谱。因此，在这样的选择性拮抗作用有利的某些应用中，这些变体可能比ActRIIB-G1Fc更有用。例子包括治疗性应用，其中期望保留激活素B的拮抗作用，同时降低BMP9以及任选地激活素A、GDF8、GDF11和BMP10中的一种或多种的拮抗作用。实施例5：变体ActRIIB-Fc蛋白的生成
申请人在ActRIIB的细胞外结构域中生成了一系列突变(序列变异)，并且将这些变体多肽产生为可溶性同二聚融合蛋白，其包含通过任选接头接合的变体ActRIIB细胞外结构域和Fc结构域。背景ActRIIB-Fc融合物是ActRIIB-G1Fc，如SEQ ID NO:5中所示。
将各种取代突变引入背景ActRIIB-Fc蛋白中。基于实施例1中呈现的数据，预期这些构建体如果与TPA前导序列一起表达，则将缺乏N末端丝氨酸。通过PCR诱变在ActRIIB细胞外结构域中生成突变。在PCR后，将片段通过Qiagen柱纯化，用SfoI和AgeI消化并进行凝胶纯化。将这些片段连接至表达载体pAID4中(参见WO2006/012627)，使得在连接后其产生与人IgG1的融合嵌合体。在转化至大肠杆菌DH5α中之后，挑取菌落并分离DNA。对于鼠构建体(mFc)，用鼠IgG2a取代人IgG1。鼠构建体具有与相应的人构建体类似的生物学特征。对所有突变体都进行序列验证。
未加工的ActRIIB(K55A)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:31)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且K55A取代由
Figure GDA0004158550890002001
指示。SEQ ID NO:31的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002002
该ActRIIB(K55A)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:32)编码：
Figure GDA0004158550890002003
成熟ActRIIB(K55A)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:33)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
 
Figure GDA0004158550890002004
Figure GDA0004158550890002011
未加工的ActRIIB(K55E)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:34)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且K55E取代由
Figure GDA0004158550890002012
指示。SEQ ID NO:34的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002013
该ActRIIB(K55E)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:35)编码：
Figure GDA0004158550890002014
成熟ActRIIB(K55E)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:36)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002015
未加工的ActRIIB(F82I)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:37)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82I取代由
Figure GDA0004158550890002016
指示。SEQ ID NO:37的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002021
该ActRIIB(F82I)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:38)编码：
Figure GDA0004158550890002022
成熟ActRIIB(F82I)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:39)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002023
未加工的ActRIIB(F82K)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:40)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82K取代由
Figure GDA0004158550890002024
指示。SEQ ID NO:40的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002025
该ActRIIB(F82K)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:41)编码：
Figure GDA0004158550890002031
成熟ActRIIB(F82K)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:42)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸，并且G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002032
未加工的ActRIIB(F82K)-G1Fc(LALA)的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:522)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82K取代由
Figure GDA0004158550890002033
指示。SEQ ID NO:522的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890002034
该ActRIIB(F82K)-G1Fc(LALA)融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:523)编码：
 
Figure GDA0004158550890002035
Figure GDA0004158550890002041
成熟ActRIIB(F82K)-G1Fc(LALA)融合多肽(SEQ ID NO:524)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸：
Figure GDA0004158550890002042
(SEQ ID NO:524)构建体在COS或CHO细胞中表达，并且通过过滤和蛋白A色谱进行纯化。在一些情况下，用条件培养基而不是纯化的蛋白质进行测定。通过SDS-PAGE和蛋白质印迹分析来评价用于报告基因测定的样品的纯度。
在下文描述的结合测定和/或生物测定中测试突变体。
可替代地，可以将类似突变引入ActRIIB细胞外结构域中，所述ActRIIB细胞外结构域具有五个氨基酸的N末端截短和三个氨基酸的C末端截短，如下文所示(SEQ ID NO:53)。
此截短的ActRIIB细胞外结构域基于SEQ ID NO:2中的编号表示为ActRIIB(25-131)。
Figure GDA0004158550890002043
相应的背景融合多肽ActRIIB(25-131)-G1Fc显示于下文中(SEQ ID NO:12)。
Figure GDA0004158550890002044
实施例6.变体ActRIIB-Fc同二聚体的配体结合谱和变体ActRIIB-Fc蛋白在基于细胞的测定中的活性
为了确定变体ActRIIB-Fc同二聚体的配体结合谱，使用基于BiacoreTM的结合测定来比较某些变体ActRIIB-Fc蛋白的配体结合动力学。使用抗Fc抗体将待测试的ActRIIB-Fc蛋白独立地捕获到系统上。然后注射配体并使其流过捕获的受体蛋白。在37℃下分析的变体ActRIIB-Fc蛋白的结果显示于图9中。与包含未修饰的ActRIIB细胞外结构域的Fc-融合蛋白相比，变体蛋白ActRIIB(K55A)-Fc、ActRIIB(K55E)-Fc、ActRIIB(F82I)-Fc和ActRIIB(F82K)-Fc展现出它们对BMP9比对GDF11更大的亲和力降低。在25℃下分析的另外的变体ActRIIB-Fc蛋白的结果显示于图10中。
这些结果证实K55A、K55E、F82I和F82K是降低对BMP9的ActRIIB结合亲和力超过它们降低对激活素A或GDF11的ActRIIB亲和力的取代。因此，在这样的选择性拮抗作用有利的某些应用中，这些变体ActRIIB-Fc蛋白可能比未修饰的ActRIIB-Fc蛋白更有用。例子包括治疗性应用，其中期望保留激活素A、激活素B、GDF8和GDF11中的一种或多种的拮抗作用，同时降低BMP9的拮抗作用。
为了确定变体ActRIIB-Fc蛋白的活性，使用基于A204细胞的测定来比较变体ActRIIB-Fc蛋白对通过激活素A、GDF11和BMP9的信号传导的作用。简言之，该测定使用源自肌肉的人A204横纹肌肉瘤细胞系(
Figure GDA0004158550890002051
HTB-82TM)和报告载体pGL3(CAGA)12(Dennler等人,1998,EMBO 17:3091-3100)以及海肾报告质粒(pRLCMV)来控制转染效率。CAGA12基序存在于TGF-β反应性基因(例如，PAI-1基因)中，因此该载体通常用于可以通过Smad2/3发信号的配体，所述配体包括激活素A、GDF11和BMP9。
在第1天，将A-204细胞转移到一个或多个48孔板中。在第2天，用10μg pGL3(CAGA)12或pGL3(CAGA)12(10μg)+pRLCMV(1μg)和Fugene转染这些细胞。在第3天，将含有0.1％BSA的培养基中稀释的配体与ActRIIB-Fc蛋白一起预孵育1h，然后将其添加至细胞。大约六小时后，将细胞用PBS冲洗并裂解。在荧光素酶测定中分析细胞裂解产物以确定Smad激活的程度。
该测定用于筛选变体ActRIIB-Fc蛋白对通过激活素A、GDF11和BMP9的细胞信号传导的抑制作用。将在人ActRIIB细胞外结构域中掺入氨基酸取代的同二聚Fc融合蛋白的效力与包含未修饰的人ActRIIB细胞外结构域的Fc融合蛋白的效力进行比较。
Figure GDA0004158550890002052
Figure GDA0004158550890002061
如上表所示，ActRIIB细胞外结构域中的单一氨基酸取代可以在基于细胞的报告基因测定中改变激活素A或GDF11抑制与BMP9抑制之间的平衡。与含有未修饰的ActRIIB细胞外结构域的融合蛋白相比，变体ActRIIB(K55A)-Fc、ActRIIB(K55E)-Fc、ActRIIB(F82I)-Fc和ActRIIB(F82K)-Fc显示较低效的对BMP9的抑制(增加的IC50值)，同时维持基本上未减小的对激活素A和GDF11的抑制。
这些结果表明，与包含未修饰的ActRIIB细胞外结构域的Fc融合蛋白相比，变体ActRIIB-Fc蛋白如ActRIIB(K55A)-Fc、ActRIIB(K55E)-Fc、ActRIIB(F82I)-Fc和ActRIIB(F82K)-Fc是激活素A和GDF11的更具选择性的拮抗剂。因此，在这样的选择性拮抗作用有利的某些应用中，这些变体可能比ActRIIB-Fc更有用。例子包括治疗性应用，其中期望保留激活素A、GDF8和GDF11中的一种或多种的拮抗作用，同时降低BMP9和可能的BMP10的拮抗作用。
实施例7.ActRIIB-Fc:ActRIIB(L79E)-Fc异二聚体的生成
申请人设想可溶性ActRIIB-Fc:ActRIIB(L79E)-Fc异聚复合物的生成，其包含未修饰的人ActRIIB和在位置79具有亮氨酸至谷氨酸取代的人ActRIIB的细胞外结构域，所述细胞外结构域各自分别用位于细胞外结构域与G1Fc结构域之间的接头与G1Fc结构域融合。单独构建体分别称为ActRIIB-Fc融合多肽和ActRIIB(L79E)-Fc融合多肽，并且其各自的序列提供于下文中。
如与ActRIIB-Fc或ActRIIB(L79E)-Fc同二聚复合物相反，用于促进ActRIIB-Fc:ActRIIB(L79E)-Fc异聚复合物的形成的方法是在Fc结构域的氨基酸序列中引入改变以指导不对称异聚复合物的形成。使用Fc结构域制备不对称相互作用对的许多不同方法描述于本公开文本中。
在一种方法中，分别在SEQ ID NO:43-45和46-48的ActRIIB(L79E)-Fc和ActRIIB-Fc多肽序列中说明，可以改变一个Fc结构域以在相互作用面处引入阳离子氨基酸，同时可以改变另一个Fc结构域以在相互作用面处引入阴离子氨基酸。ActRIIB(L79E)-Fc融合多肽和ActRIIB-Fc融合多肽可以各自采用TPA前导序列(SEQ ID NO:8)。
ActRIIB(L79E)-Fc多肽序列(SEQ ID NO:43)显示于下文中：
Figure GDA0004158550890002062
前导(信号)序列和接头加下划线，并且L79E取代由
Figure GDA0004158550890002063
指示。为了促进ActRIIB-Fc:ActRIIB(L79E)-Fc异二聚体而不是可能的同二聚复合物中任一种的形成，可以将两个氨基酸取代(用酸性氨基酸替代赖氨酸)引入ActRIIB融合蛋白的Fc结构域中，如上文由
Figure GDA0004158550890002064
所指示。SEQ ID NO:43的氨基酸序列可以任选地提供有添加至C末端的赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
该ActRIIB(L79E)-Fc融合蛋白可以由以下核酸序列(SEQ ID NO:44)编码：
Figure GDA0004158550890002071
成熟ActRIIB(L79E)-Fc融合多肽(SEQ ID NO:45)如下，并且可以任选地提供有添加至C末端的赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002072
ActRIIB-Fc融合多肽的互补形式(SEQ ID NO:46)如下：
Figure GDA0004158550890002073
前导序列和接头序列加下划线。为了用上文SEQ ID NO:43和45的ActRIIB(L79E)-Fc融合多肽指导异二聚体形成，可以将两个氨基酸取代(用赖氨酸替代谷氨酸和天冬氨酸)引入ActRIIB-Fc融合多肽的Fc结构域中，如上文由
Figure GDA0004158550890002074
所指示。SEQ ID NO:46的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
该ActRIIB-Fc融合蛋白可以由以下核酸(SEQ ID NO:47)编码：
 
Figure GDA0004158550890002075
Figure GDA0004158550890002081
成熟ActRIIB-Fc融合蛋白序列(SEQ ID NO:48)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002082
SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:48的ActRIIB(L79E)-Fc和ActRIIB-Fc多肽分别可以从CHO细胞系共表达和纯化，以产生包含ActRIIB-Fc:ActRIIB(L79E)-Fc的异聚蛋白复合物。
在使用不对称的Fc融合蛋白促进异多聚体复合物的形成的另一种方法中，可以改变Fc结构域以引入互补的疏水相互作用和另外的分子间二硫键，如分别在SEQ ID NO:49-50和51-52的ActRIIB(L79E)-Fc和ActRIIB-Fc多肽序列中所说明。ActRIIB(L79E)-Fc融合多肽和ActRIIB-Fc融合多肽可以各自采用TPA前导序列(SEQ ID NO:8)。ActRIIB(L79E)-Fc多肽序列(SEQ ID NO:49)显示于下文中：
Figure GDA0004158550890002083
信号序列和接头序列加下划线，并且L79E取代由
Figure GDA0004158550890002084
指示。为了促进ActRIIB-Fc:ActRIIB(L79E)-Fc异二聚体而不是可能的同二聚复合物中任一种的形成，可以将两个氨基酸取代(用半胱氨酸替代丝氨酸和用色氨酸替代苏氨酸)引入融合蛋白的Fc结构域中，如上文由
Figure GDA0004158550890002086
所指示。SEQ ID NO:49的氨基酸序列可以任选地提供有添加至C末端的赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。成熟ActRIIB(L79E)-Fc融合多肽(SEQ ID NO:50)如下：
Figure GDA0004158550890002085
ActRIIB-Fc融合多肽的互补形式(SEQ ID NO:51)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002091
前导序列和接头加下划线。为了用上文SEQ ID NO:49-50的ActRIIB(L79E)-Fc融合多肽指导异二聚体形成，可以将四个氨基酸取代(用半胱氨酸替代酪氨酸、用丝氨酸替代苏氨酸、用丙氨酸替代亮氨酸和用缬氨酸替代酪氨酸)引入ActRIIB-Fc融合多肽的Fc结构域中，如上文由
Figure GDA0004158550890002092
所指示。SEQ ID NO:51的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
成熟ActRIIB-Fc融合蛋白序列如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。
Figure GDA0004158550890002093
SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:52的ActRIIB(L79E)-Fc和ActRIIB-Fc多肽分别可以从CHO细胞系共表达和纯化，以产生包含ActRIIB-Fc:ActRIIB(L79E)-Fc的异聚蛋白复合物。
各种ActRIIB-Fc:ActRIIB(L79E)-Fc复合物的纯化可以通过一系列柱色谱步骤实现，包括例如以下中按任何顺序的三种或更多种：蛋白A色谱、Q琼脂糖色谱、苯基琼脂糖色谱、尺寸排阻色谱、阳离子交换色谱、多元色谱(例如，用含有静电和疏水性配体的树脂)和基于表位的亲和色谱(例如，用针对ActRIIB的表位的抗体或功能等效配体)。可以通过病毒过滤和缓冲液交换完成纯化。
实施例8.ActRIIB-Fc:ActRIIB(L79E)-Fc异聚体的配体结合谱
使用基于BiacoreTM的结合测定来比较ActRIIB-Fc:ActRIIB(L79E)-Fc异二聚体与未修饰的ActRIIB-Fc同二聚体的配体结合动力学。使用抗Fc抗体将融合蛋白捕获到系统上。然后注射配体并使其在37℃下流过捕获的受体蛋白。结果总结于下表中，其中最能表明有效配体阱的配体解离速率(kd)以粗体表示。
Figure GDA0004158550890002094
Figure GDA0004158550890002101
在此实施例中，两条ActRIIB多肽链之一中的单一氨基酸取代相对于未修饰的ActRIIB-Fc同二聚体改变Fc-融合蛋白的配体结合选择性。与ActRIIB-Fc同二聚体相比，ActRIIB(L79E)-Fc异二聚体在很大程度上保留了与激活素B、GDF8、GDF11和BMP6的高亲和力结合，但展现大约快十倍的针对激活素A和BMP10的解离速率，以及与BMP9的结合强度的甚至更大降低。因此，在这样的选择性拮抗作用有利的某些应用中，变体ActRIIB-Fc异聚体可能比未修饰的ActRIIB-Fc同二聚体更有用。例子包括治疗性应用，其中期望保留激活素B、GDF8、GDF11和BMP6中的一种或多种的拮抗作用，同时降低激活素A、BMP9或BMP10.9的拮抗作用。ActRIIB突变体的生成：
生成ActRIIB的细胞外结构域中的一系列突变，并且将这些突变体蛋白产生为细胞外ActRIIB与Fc结构域之间的可溶性融合蛋白。激活素和细胞外ActRIIB的共晶结构没有显示细胞外结构域的最终(C末端)15个氨基酸(本文中称为“尾”)在配体结合中的任何作用。在晶体结构上未能分辨出这个序列，表明这些残基存在于晶体中未均一包装的柔性环中。ThompsonEMBO J.2003Apr 1；22(7):1555-66。这个序列在ActRIIB与ActRIIA之间的保守性也较低。因此，在基础或背景ActRIIB-Fc融合物构建体中省略这些残基。另外地，在此实施例中，背景形式中的位置64由丙氨酸占据。因此，此实施例中的背景ActRIIB-Fc融合物具有以下序列(Fc部分加下划线)(SEQ ID NO:54)：
SGRGEAETRECIYYNANWELERTNQSGLERCEGEQDKRLHCYASWANSSGTIELVKKGCWLDDFNCYDRQECVATEENPQVYFCCCEGNFCNERFTHLPEAGGGTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPVPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
令人惊讶地，如下文所讨论，发现C末端尾增强激活素和GDF-11结合，因此ActRIIB-Fc的优选形式具有以下序列(Fc部分加下划线)(SEQ ID NO:55)：
SGRGEAETRECIYYNANWELERTNQSGLERCEGEQDKRLHCYASWANSSGTIELVKKGCWLDDFNCYDRQECVATEENPQVYFCCCEGNFCNERFTHLPEAGGPEVTYEPPPTAPTGGGTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPVPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
将多种突变引入背景ActRIIB-Fc蛋白中。通过PCR诱变在ActRIIB细胞外结构域中生成突变。在PCR后，经由Qiagen柱纯化片段，用SfoI和AgeI消化并进行凝胶纯化。将这些片段连接至表达载体pAID4中，使得在连接后其产生与人IgG1的融合嵌合体。分离DNA。所有突变体都是在HEK293T细胞中通过瞬时转染产生的。总而言之，在500ml旋转器中，将HEK293T细胞以6x105个细胞/ml设置于250ml体积的Freestyle(Invitrogen)培养基中并生长过夜。第二天，用DNA:PEI(1:1)复合物以0.5ug/ml最终DNA浓度处理这些细胞。在4h后，添加250ml培养基并使细胞生长7天。通过旋转沉降细胞来收获条件培养基并浓缩。
在蛋白A柱上纯化所有突变体并用低pH(3.0)甘氨酸缓冲液洗脱。在中和后，将这些突变体针对PBS透析。
也在CHO细胞中通过类似方法产生突变体。
在下文所述的结合测定和生物测定中测试突变体。在CHO细胞和HEK293细胞中表达的蛋白质在所述结合测定和生物测定中是无法区分的。
实施例9.ActRIIB(F82K)-mFc治疗抑制肾纤维化和炎症并减少肾损伤。
在小鼠单侧输尿管梗阻模型中评估实施例5中描述的变体ActRIIB F82K mFc融合物(ActRIIB(F82K)-mFc)对肾脏疾病的作用。参见例如，Klahr和Morrissey(2002)AmJPhysiol Renal Physiol 283:F861-F875。
十六只12周龄的C57BL/6雄性小鼠在肾下极的水平面上经历两次左侧单侧输尿管结扎。在3天后，将小鼠随机化为两组：i)在手术后第3天、第7天、第10天和第14天向八只小鼠皮下注射媒介物对照，即磷酸盐缓冲盐水(PBS)(“UUO/PBS”)，以及ii)在手术后第3天、第7天、第10天和第14天以10mg/kg的剂量向八只小鼠皮下注射ActRIIB(F82K)-mFc(“UUO/F82K”)。根据相关的动物护理指南，在第17天处死两组小鼠。从UUO肾和对侧肾收集来自各个动物的半个肾用于组织学分析(H&E和马松三色(Masson's Trichrome)染色)，并且使用1/4个肾进行RNA提取(RNeasy Midi Kit，Qiagen，伊利诺伊州)。
对UUO肾样品进行基因表达分析以评估各个基因的水平。在CFX ConnectTM实时PCR检测系统(Bio-Rad，加利福尼亚州)上进行QRT-PCR以评价各个纤维化基因(Col1a1、Col3a1、纤维粘连蛋白、PAI-1和a-SMA)、炎症基因(Tnfa和MCP1)、细胞因子(TGFβ1和激活素A)和肾损伤基因(NGAL)的表达。参见图11A-图11J。用ActRIIB(F82K)-mFc对小鼠的治疗显著抑制纤维化和炎症基因的表达，抑制TGFβ1和激活素A的上调，并且减少肾损伤。
总之，这些数据表明，ActRIIB(F82K)-mFc治疗抑制肾纤维化和炎症并减少肾损伤。此外，这些数据表明，其他ActRIIB-Fc变体可能在肾脏疾病的治疗或预防中是有用的，包括例如维持与激活素A、GDF11和BMP10的强结合，但减少与BMP9的结合的ActRIIB变体。
实施例10.在Alport小鼠模型中ActRIIB(F82K)-mFc治疗减少白蛋白尿并改进肾功能。
在小鼠Alport模型(Col4a3-/-)中评估实施例5中的变体ActRIIB F82K mFc融合物(“ActRIIB(F82K)-mFc”)对肾脏疾病的作用。参见例如，Cosgrove D等人(1996)GenesDev 10(23):2981-92。
将十四只4周龄的Col4a3-/-小鼠随机化为两组：i)向八只小鼠皮下注射媒介物对照，即磷酸盐缓冲盐水(PBS)，一周两次(“Col4a3-Veh”)，以及ii)以10mg/kg的剂量向六只小鼠皮下注射ActRIIB(F82K)-mFc，一周两次(“Col4a3-F82K”)。在治疗开始前一天(4周)、第49天(7周)和第63天(9周)，从正常小鼠(WT)、Col4a3-/-小鼠和用ActRIIB(F82K)-mFc治疗的Col4a3-/-小鼠收集尿样以测量白蛋白(小鼠白蛋白ELISA试剂盒，MolecularInnovations，密歇根州)和肌酐(肌酐测定试剂盒，BioAssay Systems，加利福尼亚州)。根据相关的动物护理指南，在第63天(9周)处死两组小鼠。从单独动物收集一个肾用于组织学分析(H&E和马松三色染色)，并且将其他肾在-80℃下急冻。
计算尿白蛋白与肌酐的比率(ACR)以测量白蛋白尿。参见图12A。在Col4a3-/-小鼠中，白蛋白尿从4周至9周显著增加。在Col4a3-/-小鼠中，用ActRIIB(F82K)-mFc治疗小鼠显著减少白蛋白尿，在7周减少38.9％(p<0.05)并且在9周减少45.1％(p<0.001)。
为了评价ActRIIB(F82K)-mFc在血管紧张素转换酶抑制剂(ACEi)存在下在Alport模型中的治疗益处，在用雷米普利治疗的Col4a3-/-小鼠中进一步评估ActRIIB(F82K)-mFc。参见例如，Gross O等人(2003)Kidney Int.63(2):438-46。
在整个研究期间向三十一只4周龄的Col4a3-/-小鼠饲喂饮用水中的雷米普利(10mg/kg/天)，并将其随机化为两组：i)向十六只小鼠皮下注射媒介物对照，即磷酸盐缓冲盐水(PBS)，一周两次(“Col4a3-ACEi/Veh”)，以及ii)以10mg/kg的剂量向十五只小鼠皮下注射ActRIIB(F82K)-mFc，一周两次(“Col4a3-ACEi/F82K”)。在治疗开始前一天(4周)、第49天(7周)、第63天(9周)、第84天(12周)、第105天(15周)和第119天(17周)，从正常小鼠(WT)、Col4a3-/-小鼠和用ActRIIB(F82K)-mFc治疗的Col4a3-/-小鼠收集尿样以测量白蛋白(小鼠白蛋白ELISA试剂盒，Molecular Innovations，密歇根州)和肌酐(肌酐测定试剂盒，BioAssay Systems，加利福尼亚州)。在第49天(7周)、第63天(9周)、第84天(12周)、第105天(15周)和第119天(17周)，从正常小鼠(WT)、Col4a3-/-小鼠和用ActRIIB(F82K)-mFc治疗的Col4a3-/-小鼠收集血液样品用于血尿素氮(BUN)测量(DRI-CHEM 7000化学分析仪，HESKA，科罗拉多州)。根据相关的动物护理指南，在体重减轻超过25％时，将两组中的小鼠安乐死以计算存活时间。
计算尿白蛋白与肌酐的比率(ACR)以测量白蛋白尿。参见图12B。在用雷米普利治疗的Col4a3-/-小鼠中，白蛋白尿从4周至17周显著增加。在Col4a3-/-小鼠中用ActRIIB(F82K)-mFc治疗这些小鼠显著减少白蛋白尿，分别在12周减少76.7％(p<0.05)，在15周减少59％(p<0.05)，并且在17周减少86％(p<0.001)，其与Col4a3-/-小鼠中降低的BUN相关(图12C)。
此外，在用雷米普利治疗的Col4a3-/-小鼠中，ActRIIB(F82K)-mFc显著延长寿命(p<0.05)，中值存活时间在用ActRIIB(F82K)-mFc治疗的小鼠中为141天，并且在用PBS治疗的群组中为119天(图12D)。
总之，这些数据表明，在Alport小鼠模型中作为单一疗法或与雷米普利治疗一起，ActRIIB(F82K)-mFc治疗减少白蛋白尿，改进肾功能，并且延长寿命。此外，这些数据表明，ActRIIB(F82K)-mFc和其他ActRIIB-mFc变体在肾脏疾病的治疗或预防中可能是有用的，包括例如维持与激活素A、GDF11和BMP10的强结合，但减少与BMP9的结合的ActRIIB变体。
实施例11.ActRIIB(K55A)-mFc、ActRIIB(K55E)-mFc和ActRIIB(F82I)-mFc治疗抑制肾纤维化和炎症并减少肾损伤。
在小鼠单侧输尿管梗阻模型中评估实施例5中描述的ActRIIB(K55A)-mFc、ActRIIB(K55E)-mFc和ActRIIB(F82I)-mFc对肾脏疾病的作用。参见例如，Klahr和Morrissey(2002)Am J Physiol Renal Physiol 283:F861-F875。
三十二只12周龄的C57BL/6雄性小鼠在肾下极的水平面上经历两次左侧单侧输尿管结扎。在3天后，将小鼠随机化为四组：i)在手术后第3天、第7天、第10天和第14天，向八只小鼠皮下注射媒介物对照，即磷酸盐缓冲盐水(PBS)(“UUO/PBS”)，ii)在手术后第3天、第7天、第10天和第14天以10mg/kg的剂量向八只小鼠皮下注射ActRIIB(K55A)-mFc，iii)在手术后第3天、第7天、第10天和第14天，以10mg/kg的剂量向八只小鼠皮下注射ActRIIB(K55E)-mFc，以及iv)在手术后第3天、第7天、第10天和第14天，以10mg/kg的剂量向八只小鼠皮下注射ActRIIB(F82I)-mFc。根据相关的动物护理指南，在第17天处死所有组的小鼠。从UUO肾和对侧肾收集来自各个动物的半个肾用于组织学分析(H&E和马松三色染色)，并且使用1/4个肾进行RNA提取(RNeasy Midi Kit，Qiagen，伊利诺伊州)。
对UUO肾样品进行基因表达分析以评估各个基因的水平。在CFX ConnectTM实时PCR检测系统(Bio-Rad，加利福尼亚州)上进行QRT-PCR以评价各个纤维化基因(Col1a1、Col3a1、纤维粘连蛋白、PAI-1和a-SMA)、炎症基因(Tnfa和MCP1)、细胞因子(TGFβ1和激活素A)和肾损伤基因(NGAL)的表达。参见图13A-图13J。
用ActRIIB(K55A)-mFc对小鼠的治疗显著抑制纤维化和炎症基因的表达，抑制TGFβ1和激活素A的上调，并且减少肾损伤。用ActRIIB(K55E)-mFc治疗小鼠显著抑制PAI-1和a-SMA，而非Col1a1、Col3a1和纤维粘连蛋白的表达。另外，用ActRIIB(K55E)-mFc治疗小鼠没有显著抑制炎症基因表达，也没有减少肾损伤。用ActRIIB(F82I)-mFc治疗小鼠显著抑制PAI-1和a-SMA，而非Col1a1、Col3a1和纤维粘连蛋白的表达。另外，用ActRIIB(F82I)-mFc治疗小鼠显著抑制TGFβ1和激活素A的上调，并且减少肾损伤。然而，ActRIIB(F82I)-mFc没有显著抑制炎症基因表达。
总之，这些数据表明，在UUO模型中，ActRIIB(K55A)-mFc比ActRIIB(K55E)-mFc和ActRIIB(F82I)-mFc更有效地抑制肾纤维化和炎症并减少肾损伤。
实施例12：变体ActRIIB-Fc蛋白的生成
申请人在ActRIIB的细胞外结构域中生成了一系列突变(序列变异)，并且将这些变体多肽产生为可溶性同二聚融合蛋白，其包含通过任选接头接合的变体ActRIIB细胞外结构域和Fc结构域。背景ActRIIB-Fc融合物是ActRIIB-G1Fc，如SEQ ID NO:5中所示。
将各种取代突变引入背景ActRIIB-Fc蛋白中。基于实施例1中呈现的数据，预期这些构建体如果与TPA前导序列一起表达，可能缺少N末端丝氨酸。在Twist Bioscience或Genscript通过基因合成在ActRIIB细胞外结构域中生成突变。将片段连接至表达载体pAID4的NheI和AgeI位点中(参见WO2006/012627)，使得在连接后其与人IgG1 Fc结构域产生融合嵌合体。在转化至大肠杆菌DH5α中之后，挑取菌落并分离DNA。对所有突变体都进行序列验证。
未加工的ActRIIB(N35E)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:366)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且N35E取代由
Figure GDA0004158550890002131
指示。SEQ ID NO:366的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002132
该ActRIIB(N35E)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:367)编码：
 
Figure GDA0004158550890002133
Figure GDA0004158550890002141
成熟ActRIIB(N35E)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:368)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002142
未加工的ActRIIB(E52N)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:369)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且E52N取代由
Figure GDA0004158550890002143
指示。SEQ ID NO:369的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002144
该ActRIIB(E52N)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:370)编码：
Figure GDA0004158550890002145
成熟ActRIIB(E52N)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:371)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002146
Figure GDA0004158550890002151
未加工的ActRIIB(Y60D)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:372)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且Y60D取代由
Figure GDA0004158550890002156
指示。SEQ ID NO:372的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002152
该ActRIIB(Y60D)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:373)编码：
Figure GDA0004158550890002153
成熟ActRIIB(Y60D)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:374)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002154
未加工的ActRIIB(G68R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:375)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且G68R取代由
Figure GDA0004158550890002157
指示。SEQ ID NO:375的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
  
Figure GDA0004158550890002155
Figure GDA0004158550890002161
该ActRIIB(G68R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:376)编码：
Figure GDA0004158550890002162
成熟ActRIIB(G68R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:377)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002163
未加工的ActRIIB(K74E)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:378)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且K74E取代由
Figure GDA0004158550890002164
指示。SEQ ID NO:378的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002165
该ActRIIB(K74E)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:379)编码：
Figure GDA0004158550890002166
Figure GDA0004158550890002171
成熟ActRIIB(K74E)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:380)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002172
未加工的ActRIIB(W78Y)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:381)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且W78Y取代由
Figure GDA0004158550890002173
指示。SEQ ID NO:381的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002174
该ActRIIB(W78Y)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:382)编码：
 
Figure GDA0004158550890002175
Figure GDA0004158550890002181
成熟ActRIIB(W78Y)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:383)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002182
未加工的ActRIIB(L79A)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:384)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L79A取代由
Figure GDA0004158550890002183
指示。SEQ ID NO:384的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002184
该ActRIIB(L79A)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:385)编码：
Figure GDA0004158550890002185
成熟ActRIIB(L79A)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:386)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002191
未加工的ActRIIB(L79K)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:387)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L79K取代由
Figure GDA0004158550890002192
指示。SEQ ID NO:387的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002193
该ActRIIB(L79K)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:388)编码：
Figure GDA0004158550890002194
成熟ActRIIB(L79K)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:389)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002195
Figure GDA0004158550890002201
未加工的ActRIIB(L79S)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:390)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L79S取代由
Figure GDA0004158550890002202
指示。SEQ ID NO:390的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002203
该ActRIIB(L79S)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:391)编码：
Figure GDA0004158550890002204
成熟ActRIIB(L79S)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:392)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002205
未加工的ActRIIB(L79W)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:393)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L79W取代由
Figure GDA0004158550890002206
指示。SEQ ID NO:393的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002207
Figure GDA0004158550890002211
该ActRIIB(L79W)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:394)编码：
Figure GDA0004158550890002212
成熟ActRIIB(L79W)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:395)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002213
未加工的ActRIIB(F82D)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:396)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82D取代由
Figure GDA0004158550890002214
指示。SEQ ID NO:396的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002215
该ActRIIB(F82D)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:397)编码：
 
Figure GDA0004158550890002216
Figure GDA0004158550890002221
成熟ActRIIB(F82D)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:398)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002222
未加工的ActRIIB(F82E)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:399)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82E取代由
Figure GDA0004158550890002223
指示。SEQ ID NO:399的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002224
该ActRIIB(F82E)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:400)编码：
 
Figure GDA0004158550890002225
Figure GDA0004158550890002231
成熟ActRIIB(F82E)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:401)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002232
未加工的ActRIIB(F82L)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:402)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82L取代由
Figure GDA0004158550890002233
指示。SEQ ID NO:402的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002234
该ActRIIB(F82L)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:403)编码：
Figure GDA0004158550890002235
成熟ActRIIB(F82L)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:404)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002241
未加工的ActRIIB(F82S)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:405)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82S取代由
Figure GDA0004158550890002242
指示。SEQ ID NO:405的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002243
该ActRIIB(F82S)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:406)编码：
Figure GDA0004158550890002244
成熟ActRIIB(F82S)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:407)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002245
未加工的ActRIIB(F82Y)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:408)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82Y取代由
Figure GDA0004158550890002246
指示。SEQ ID NO:408的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002251
该ActRIIB(F82Y)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:409)编码：
Figure GDA0004158550890002252
成熟ActRIIB(F82Y)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:410)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002253
未加工的ActRIIB(E94K)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:411)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且E94K取代由
Figure GDA0004158550890002254
指示。SEQ ID NO:411的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002255
该ActRIIB(E94K)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:412)编码：
Figure GDA0004158550890002261
成熟ActRIIB(E94K)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:413)如下并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002262
未加工的ActRIIB(E52D、F82D)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:414)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且E52D、F82D取代由
Figure GDA0004158550890002263
指示。SEQID NO:414的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002264
该ActRIIB(E52D、F82D)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:415)编码：
 
Figure GDA0004158550890002265
Figure GDA0004158550890002271
成熟ActRIIB(E52D、F82D)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:416)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002272
未加工的ActRIIB(E52D、F82T)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:417)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且E52D、F82T取代由
Figure GDA0004158550890002273
指示。SEQID NO:417的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002274
该ActRIIB(E52D、F82T)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:418)编码：
Figure GDA0004158550890002275
Figure GDA0004158550890002281
成熟ActRIIB(E52D、F82T)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:419)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002282
未加工的ActRIIB(L57R、F82D)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:420)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L57R、F82D取代由
Figure GDA0004158550890002283
指示。SEQID NO:420的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002284
该ActRIIB(L57R、F82D)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:421)编码：
Figure GDA0004158550890002285
成熟ActRIIB(L57R、F82D)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:422)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002286
Figure GDA0004158550890002291
未加工的ActRIIB(L57R、F82S)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:423)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L57R、F82S取代由
Figure GDA0004158550890002292
指示。SEQID NO:423的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002293
该ActRIIB(L57R、F82S)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:424)编码：
Figure GDA0004158550890002294
成熟ActRIIB(L57R、F82S)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:425)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002295
未加工的ActRIIB(L57R、F82T)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:426)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L57R、F82T取代由
Figure GDA0004158550890002296
指示。SEQID NO:426的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
  
Figure GDA0004158550890002297
Figure GDA0004158550890002301
该ActRIIB(L57R、F82T)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:427)编码：
Figure GDA0004158550890002302
成熟ActRIIB(L57R、F82T)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:428)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002303
未加工的ActRIIB(L79F、F82D)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:429)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L79F、F82D取代由
Figure GDA0004158550890002304
指示。SEQID NO:429的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002305
该ActRIIB(L79F、F82D)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:430)编码：
  
Figure GDA0004158550890002306
Figure GDA0004158550890002311
成熟ActRIIB(L79F、F82D)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:431)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002312
未加工的ActRIIB(L79F、F82T)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:432)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L79F、F82T取代由
Figure GDA0004158550890002313
指示。SEQID NO:432的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002314
该ActRIIB(L79F、F82T)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:433)编码：
Figure GDA0004158550890002315
Figure GDA0004158550890002321
成熟ActRIIB(L79F、F82T)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:434)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002322
未加工的ActRIIB(F82D、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:435)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82D、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002323
指示。SEQID NO:435的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002324
该ActRIIB(F82D、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:436)编码：
Figure GDA0004158550890002325
成熟ActRIIB(F82D、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:437)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002331
未加工的ActRIIB(F82E、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:438)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82E、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002332
指示。SEQID NO:438的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002333
该ActRIIB(F82E、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:439)编码：
Figure GDA0004158550890002334
成熟ActRIIB(F82E、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:440)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002335
Figure GDA0004158550890002341
未加工的ActRIIB(F82S、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:441)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82S、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002342
指示。SEQID NO:441的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002343
该ActRIIB(F82S、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:442)编码：
Figure GDA0004158550890002344
成熟ActRIIB(F82S、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:443)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002345
未加工的ActRIIB(F82W、N83A)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:444)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82W N83A取代由
Figure GDA0004158550890002346
指示。SEQID NO:444的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002347
Figure GDA0004158550890002351
该ActRIIB(F82W、N83A)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:445)编码：
Figure GDA0004158550890002352
成熟ActRIIB(F82W、N83A)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:446)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002353
未加工的ActRIIB(F82I、E94K)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:447)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且F82I、E94K取代由
Figure GDA0004158550890002354
指示。SEQID NO:447的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002355
该ActRIIB(F82I、E94K)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:448)编码：
 
Figure GDA0004158550890002356
Figure GDA0004158550890002361
成熟ActRIIB(F82I、E94K)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:449)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002362
未加工的ActRIIB(E50L、F82D、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:450)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且E50L、F82D、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002363
Figure GDA0004158550890002364
指示。SEQ ID NO:450的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002365
该ActRIIB(E50L、F82D、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:451)编码：
 
Figure GDA0004158550890002366
Figure GDA0004158550890002371
成熟ActRIIB(E50L、F82D、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:452)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002372
未加工的ActRIIB(E52D、F82D、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:453)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且E52D、F82D、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002373
Figure GDA0004158550890002374
指示。SEQ ID NO:453的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002375
该ActRIIB(E52D、F82D、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:454)编码：
Figure GDA0004158550890002376
成熟ActRIIB(E52D、F82D、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:455)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002381
未加工的ActRIIB(E52D、F82E、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:456)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且E52D、F82E、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002382
Figure GDA0004158550890002383
指示。SEQ ID NO:456的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002384
该ActRIIB(E52D、F82E、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:457)编码：
Figure GDA0004158550890002385
成熟ActRIIB(E52D、F82E、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:458)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002386
Figure GDA0004158550890002391
未加工的ActRIIB(E52D、F82T、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:459)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且E52D、F82T、N83R取代由双下划线指示。SEQ ID NO:459的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002392
该ActRIIB(E52D、F82T、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:460)编码：
Figure GDA0004158550890002393
成熟ActRIIB(E52D、F82T、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:461)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002394
未加工的ActRIIB(E52N、F82I、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:462)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且E52N、F82I、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002395
Figure GDA0004158550890002396
指示。SEQ ID NO:462的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
  
Figure GDA0004158550890002397
Figure GDA0004158550890002401
该ActRIIB(E52N、F82I、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:463)编码：
Figure GDA0004158550890002402
成熟ActRIIB(E52N、F82I、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:464)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002403
未加工的ActRIIB(E52N、F82Y、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:465)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且E52N、F82Y、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002404
Figure GDA0004158550890002405
指示。SEQ ID NO:465的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002406
该ActRIIB(E52N、F82Y、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:466)编码：
Figure GDA0004158550890002411
成熟ActRIIB(E52N、F82Y、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:467)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002412
未加工的ActRIIB(E52Y、F82D、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:468)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且E52Y、F82D、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002413
Figure GDA0004158550890002414
指示。SEQ ID NO:468的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002415
该ActRIIB(E52Y、F82D、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:469)编码：
Figure GDA0004158550890002416
Figure GDA0004158550890002421
成熟ActRIIB(E52Y、F82D、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:470)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002422
未加工的ActRIIB(L57E、F82E、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:471)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L57E、F82E、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002423
Figure GDA0004158550890002424
指示。SEQ ID NO:471的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002425
该ActRIIB(L57E、F82E、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:472)编码：
 
Figure GDA0004158550890002426
Figure GDA0004158550890002431
成熟ActRIIB(L57E、F82E、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:473)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002432
未加工的ActRIIB(L57I、F82D、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:474)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L57I、F82D、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002433
Figure GDA0004158550890002434
指示。SEQ ID NO:474的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002435
该ActRIIB(L57I、F82D、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:475)编码：
Figure GDA0004158550890002436
成熟ActRIIB(L57I、F82D、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:476)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002441
未加工的ActRIIB(L57I、F82E、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:477)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L57I、F82E、N83R取代由双下划线指示。SEQ ID NO:477的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002442
该ActRIIB(L57I、F82E、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:478)编码：
Figure GDA0004158550890002443
成熟ActRIIB(L57I、F82E、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:479)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002444
未加工的ActRIIB(L57R、F82D、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:480)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L57R、F82D、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002451
Figure GDA0004158550890002452
指示。SEQ ID NO:480的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002453
该ActRIIB(L57R、F82D、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:481)编码：
Figure GDA0004158550890002454
成熟ActRIIB(L57R、F82D、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:482)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002455
未加工的ActRIIB(L57R、F82E、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:483)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L57R、F82E、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002456
Figure GDA0004158550890002457
指示。SEQ ID NO:483的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002458
Figure GDA0004158550890002461
该ActRIIB(L57R、F82E、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:484)编码：
Figure GDA0004158550890002462
成熟ActRIIB(L57R、F82E、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:485)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002463
未加工的ActRIIB(L57R、F82L、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:486)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L57R、F82L、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002464
Figure GDA0004158550890002465
指示。SEQ ID NO:486的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002466
该ActRIIB(L57R、F82L、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:487)编码：
Figure GDA0004158550890002467
Figure GDA0004158550890002471
成熟ActRIIB(L57R、F82L、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:488)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002472
未加工的ActRIIB(L57T、F82Y、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:489)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L57T、F82Y、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002473
Figure GDA0004158550890002474
指示。SEQ ID NO:489的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002475
该ActRIIB(L57T、F82Y、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:490)编码：
 
Figure GDA0004158550890002476
Figure GDA0004158550890002481
成熟ActRIIB(L57T、F82Y、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:491)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002482
未加工的ActRIIB(L57V、F82D、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:492)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L57V、F82D、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002483
Figure GDA0004158550890002484
指示。SEQ ID NO:492的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002485
该ActRIIB(L57V、F82D、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:493)编码：
Figure GDA0004158550890002486
Figure GDA0004158550890002491
成熟ActRIIB(L57V、F82D、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:494)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002492
未加工的ActRIIB(L57V、F82Y、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:495)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且L57V、F82Y、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002493
Figure GDA0004158550890002494
指示。SEQ ID NO:495的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002495
该ActRIIB(L57V、F82Y、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:496)编码：
Figure GDA0004158550890002496
成熟ActRIIB(L57V、F82Y、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:497)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002497
Figure GDA0004158550890002501
未加工的ActRIIB(G68R、W78Y、F82Y)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:498)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且G68R、W78Y、F82Y取代由
Figure GDA0004158550890002502
Figure GDA0004158550890002503
指示。SEQ ID NO:498的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002504
该ActRIIB(G68R、W78Y、F82Y)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:499)编码：
Figure GDA0004158550890002505
成熟ActRIIB(G68R、W78Y、F82Y)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:500)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002506
未加工的ActRIIB(G68R、F82S、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQ IDNO:501)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且G68R、F82S、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002507
Figure GDA0004158550890002508
指示。SEQ ID NO:501的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002511
该ActRIIB(G68R、F82S、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:502)编码：
Figure GDA0004158550890002512
成熟ActRIIB(G68R、F82S、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:503)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002513
未加工的ActRIIB(E52N、G68R、F82Y、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQID NO:504)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且E52N、G68R、F82Y、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002514
指示。SEQ ID NO:504的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002515
该ActRIIB(E52N、G68R、F82Y、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:505)编码：
Figure GDA0004158550890002521
成熟ActRIIB(E52N、G68R、F82Y、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:506)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002522
未加工的ActRIIB(G68R、L79E、F82T、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQID NO:507)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且G68R、L79E、F82T、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002523
指示。SEQ ID NO:507的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002524
该ActRIIB(G68R、L79E、F82T、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:508)编码：
 
Figure GDA0004158550890002525
Figure GDA0004158550890002531
成熟ActRIIB(G68R、L79E、F82T、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:509)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002532
未加工的ActRIIB(G68R、L79E、F82Y、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQID NO:510)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且G68R、L79E、F82Y、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002533
指示。SEQ ID NO:510的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002534
该ActRIIB(G68R、L79E、F82Y、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:511)编码：
 
Figure GDA0004158550890002535
Figure GDA0004158550890002541
成熟ActRIIB(G68R、L79E、F82Y、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:512)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002542
未加工的ActRIIB(G68R、L79T、F82T、N83R)-G1Fc的氨基酸序列显示于下文中(SEQID NO:513)。信号序列和接头序列由实线下划线指示，并且G68R、L79T、F82T、N83R取代由
Figure GDA0004158550890002543
指示。SEQ ID NO:513的氨基酸序列可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002544
该ActRIIB(G68R、L79T、F82T、N83R)-G1Fc融合多肽由以下核酸序列(SEQ ID NO:514)编码：
Figure GDA0004158550890002545
Figure GDA0004158550890002551
成熟ActRIIB(G68R、L79T、F82T、N83R)-G1Fc融合多肽(SEQ ID NO:515)如下，并且可以任选地提供为从C末端去除赖氨酸。G1Fc区还可以包含位置234处的至丙氨酸的突变或位置235处的至丙氨酸的突变，或其组合。
Figure GDA0004158550890002552
实施例13.变体ActRIIB-Fc同二聚体的配体结合谱和变体ActRIIB-Fc蛋白在基于细胞的测定中的活性
为了确定变体ActRIIB-Fc同二聚体的配体结合谱，使用基于BiacoreTM的结合测定来比较某些变体ActRIIB-Fc蛋白的配体结合动力学。使用抗Fc抗体将待测试的ActRIIB-Fc蛋白独立地捕获到系统上。然后注射配体并使其流过捕获的受体蛋白。在37℃下分析的变体ActRIIB-Fc蛋白的结果显示于图15A、图15B、图16A和图16B中。
为了确定变体ActRIIB-Fc蛋白的活性，使用基于A204细胞的测定比较变体ActRIIB-Fc蛋白对通过激活素A、激活素B、GDF8和GDF11的信号传导的作用，而基于HepG2细胞的测定用于BMP6且基于T98G细胞的测定用于BMP10和BMP9。简单来说，A204测定使用源自肌肉的人A204横纹肌肉瘤细胞系(
Figure GDA0004158550890002553
HTB-82TM)和报告载体pGL3(CAGA)12(Dennler等人,1998,EMBO 17:3091-3100)以及海肾报告质粒(pRLCMV)来控制转染效率。CAGA12基序存在于TGF-β反应性基因(例如，PAI-1基因)中，因此该载体通常用于可以经由Smad2/3发信号的配体，所述配体包括激活素A、激活素B、GDF8和GDF11。HepG2测定使用人肝细胞癌细胞系(
Figure GDA0004158550890002554
HB-8065TM)，并且T98G测定使用人T98G胶质母细胞瘤细胞系(
Figure GDA0004158550890002555
CRL-1690TM)。两种细胞系与报告载体pGL3BRE萤光素酶以及海肾报告载体(pRLCMV)一起用于控制转染效率。在Id1基因中鉴定出BMP反应元件(BRE)(Korchynskyi,O.和ten Dijke,P.,Journal ofBiological Chemistry,2002,277:4883-4891)，因此该载体通常用于可以经由Smad1/5/8发信号的配体，所述配体包括BMP6、BMP10和BMP9。
在第1天，将A-204细胞转移到一个或多个48孔板中。在第2天，用pGL3(CAGA)12(10μg)+pRLCMV(100ng)和X-tremeGENE 9(含有0.1％ BSA的培养基)转染每个48孔板。在第3天，将稀释于含有0.1％ BSA的培养基中的配体与ActRIIB-Fc蛋白一起预孵育30min，然后将其添加至细胞。大约六小时后，将细胞用PBS冲洗并裂解。在荧光素酶测定中分析细胞裂解产物以确定Smad激活的程度。以类似的方式进行HepG2和T98G测定，仅用pGL3-BRE取代报告质粒并用X-tremeGENE HP取代转染试剂，并且在与配体/测试样品一起过夜孵育后测定细胞。
使用该测定针对对通过激活素A、激活素B、GDF8、GDF11、BMP6、BMP10和BMP9的细胞信号传导的抑制作用来筛选变体ActRIIB-Fc蛋白(图14)。将在人ActRIIB细胞外结构域中掺入氨基酸取代的同二聚Fc融合蛋白的效力与包含未修饰的人ActRIIB细胞外结构域的Fc融合蛋白的效力进行比较。
如图14-图16B中所示，ActRIIB细胞外结构域中的取代可以改变基于BiacoreTM的结合测定与基于细胞的测定中的激活素A、激活素B、GDF8、GDF11、BMP6、BMP9和BMP10抑制之间的平衡。结合谱在变体集合之间显著不同。
与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白(例如，“WT”)相比，变体ActRIIB(F82D、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:437)和ActRIIB(E50L、F82D、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:452)展示激活素A结合的显著降低、GDF11结合的显著降低、无检测到的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。此外，与WT相比，ActRIIB(F82D、N83R)-G1Fc(例如，SEQ IDNO:437)和ActRIIB(E50L、F82D、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:452)展示接近WT水平的激活素B结合。
与WT相比，变体ActRIIB(L79F、F82T)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:434)展示激活素A结合的显著降低、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的略微增加以及BMP9结合的适度降低。此外，与WT相比，ActRIIB(L79F、F82T)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:434)展示接近WT水平的激活素B结合。
与WT相比，变体ActRIIB(L79S)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:392)展示激活素A结合的显著降低、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的轻微降低、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的轻微降低。此外，与WT相比，ActRIIB(L79S)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:392)展示接近WT水平的激活素B结合。
与WT相比，变体ActRIIB(L57R、F82L、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:488)展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。此外，与WT相比，ActRIIB(L57R、F82L、N83R)-G1Fc(例如，SEQ IDNO:488)展示接近WT水平的激活素B结合。
与WT相比，变体ActRIIB(L57V、F82D、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:494)展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。此外，ActRIIB(L57V、F82D、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:494)与WT相比，展示适度降低的激活素B结合。
与WT相比，变体ActRIIB(L57R、F82D、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:482)和ActRIIB(L57R、F82E、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:485)展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的显著降低以及BMP9结合的显著降低。此外，与WT相比，ActRIIB(L57R、F82D、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:482)和ActRIIB(L57R、F82E、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:485)展示适度降低的激活素B结合。
与WT相比，变体ActRIIB(F82S、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:443)和ActRIIB(E52N、F82Y、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:467)展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。此外，与WT相比，ActRIIB(F82S、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:443)和ActRIIB(E52N、F82Y、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:467)展示接近WT水平的激活素B结合。，与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白相比
与WT相比，变体ActRIIB(L57T、F82Y、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:491)展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、最小BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。此外，与WT相比，ActRIIB(L57T、F82Y、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:491)展示接近WT水平的激活素B结合。
与WT相比，变体ActRIIB(E52D、F82D、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:455)展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、最小BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。此外，与WT相比，ActRIIB(E52D、F82D、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:455)展示激活素B结合的适度降低。
与WT相比，变体ActRIIB(L57I、F82D、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:476)展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、最小BMP10结合、BMP6结合的适度降低以及BMP9结合的显著降低。此外，与WT相比，ActRIIB(L57I、F82D、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:476)展示激活素B结合的适度降低。
与WT相比，变体ActRIIB(E52D、F82T、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:461)展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、BMP10结合的适度降低、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。此外，与WT相比，ActRIIB(E52D、F82T、N83R)-G1Fc(例如，SEQ IDNO:461)展示接近WT水平的激活素B结合。
与WT相比，变体ActRIIB(E52N、F82I、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:464)展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、BMP10结合的适度降低、最小BMP6结合以及BMP9结合的显著降低。此外，与WT相比，ActRIIB(E52N、F82I、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:464)展示接近WT水平的激活素B结合。
与WT相比，变体ActRIIB(E52Y、F82D、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:470)展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、BMP10结合的适度降低、最小BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。此外，与WT相比，ActRIIB(E52Y、F82D、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:470)展示激活素B结合的适度降低。
与WT相比，变体ActRIIB(F82E、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:440)、ActRIIB(E52D、F82E、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:458)、ActRIIB(L57I、F82E、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:479)和ActRIIB(L57E、F82E、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:473)展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的适度降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。此外，与WT相比，ActRIIB(F82E、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:440)、ActRIIB(E52D、F82E、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:458)、ActRIIB(L57I、F82E、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:479)和ActRIIB(L57E、F82E、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:473)展示激活素B结合的轻微降低。
与WT相比，变体ActRIIB(L79W)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:395)展示激活素A结合的适度降低、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的略微增加以及接近WT水平的BMP9结合。此外，与WT相比，ActRIIB(L79W)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:395)展示接近WT水平的激活素B结合。
与WT相比，变体ActRIIB(L79F、F82D)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:431)展示激活素A结合的适度降低、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的略微增加以及接近WT水平的BMP9结合。此外，与WT相比，ActRIIB(L79F、F82D)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:431)展示激活素B结合的适度降低。
与WT相比，变体ActRIIB(L57V、F82Y、N83R)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:497)展示激活素A结合的轻微降低、GDF11结合的适度降低、BMP10结合的适度降低、BMP6结合的显著降低以及BMP9结合的显著降低。此外，与WT相比，ActRIIB(L57V、F82Y、N83R)-G1Fc(例如，SEQ IDNO:497)展示接近WT水平的激活素B结合。
与WT相比，变体ActRIIB(L57R、F82D)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:422)展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的适度降低、BMP6结合的适度降低以及BMP9结合的适度降低。此外，与WT相比，ActRIIB(L57R、F82D)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:422)展示激活素B结合的轻微降低。
与WT相比，变体ActRIIB(E94K)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:413)展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、与BMP6的最小结合以及BMP9结合的轻微降低。此外，与WT相比，ActRIIB(E94K)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:413)展示接近WT水平的激活素B结合。
与WT相比，变体ActRIIB(F82D)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:398)、ActRIIB(F82E)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:401)、ActRIIB(F82S)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:407)、ActRIIB(F82L)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:404)和ActRIIB(E52D、F82T)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:419)展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、接近ActRIIB水平的BMP6结合以及BMP9结合的轻微降低。此外，与WT相比，ActRIIB(F82D)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:398)、ActRIIB(F82E)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:401)、ActRIIB(F82S)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:407)、ActRIIB(F82L)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:404)和ActRIIB(E52D、F82T)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:419)展示接近WT水平的激活素B结合。
与WT相比，变体ActRIIB(E52N)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:371)和ActRIIB(F82Y)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:410)展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、接近ActRIIB水平的BMP6结合以及接近WT水平的BMP9结合。此外，与WT相比，ActRIIB(E52N)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:371)、ActRIIB(F82Y)-G1Fc(例如，SEQ IDNO:410)展示接近WT水平的激活素B结合。
与WT相比，变体ActRIIB(E52D、F82D)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:416)展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、接近ActRIIB水平的BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。此外，与WT相比，ActRIIB(E52D、F82D)-G1Fc(例如，SEQID NO:416)展示激活素B结合的轻微降低。
与WT相比，变体ActRIIB(L57R、F82T)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:428)展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的轻微降低、接近ActRIIB水平的BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。此外，与WT相比，ActRIIB(L57R、F82T)-G1Fc(例如，SEQID NO:428)展示激活素B结合的轻微降低。
与WT相比，变体ActRIIB(L57R、F82S)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:425)展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的轻微降低、接近ActRIIB水平的BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。此外，与WT相比，ActRIIB(L57R、F82S)-G1Fc(例如，SEQID NO:425)展示接近WT水平的激活素B结合。
与WT相比，变体ActRIIB(F82I、E94K)-G1Fc(例如，SEQ ID NO:449)展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的适度降低。此外，与WT相比，ActRIIB(F82I、E94K)-G1Fc(例如，SEQ IDNO:449)展示激活素B结合的轻微降低。
这些结果表明，与包含未修饰的ActRIIB细胞外结构域的Fc融合蛋白相比，变体ActRIIB-Fc蛋白可以展示变化的配体结合谱。因此，在这样的选择性拮抗作用谱有利的某些应用中，这些变体可能比ActRIIB-Fc更有用。例子包括治疗性应用其中期望保留激活素A、激活素B、GDF8、GDF11、BMP6和/或BMP10中的一种或多种的拮抗作用，同时降低BMP9的拮抗作用。
通过引用并入
本文提及的所有出版物和专利都是通过引用以其整体特此并入，如同将每个单独的出版物或专利明确地且单独地指示为通过引用并入一般。
虽然已经讨论了主题的特定实施方案，但是上述说明书是说明性的而不是限制性的。在回顾本说明书和以下权利要求书后，许多变化对于本领域技术人员将变得显而易见。本发明的全部范围应通过参考权利要求书和其等效物的全部范围以及说明书和此类变化来确定。
Figure GDA0004158550890002591
TCCGGGCCCCGGGGGGTCCAGGCTCTGCTGTGTGCGTGCACCAGCTGCCTCCAGGCCAACTACACGTGTGAGACAGATGGGGCCTGCATGGTTTCCATTTTCAATCTGGATGGGATGGAGCACCATGTGCGCACCTGCATCCCCAAAGTGGAGCTGGTCCCTGCCGGGAAGCCCTTCTACTGCCTGAGCTCGGAGGACCTGCGCAACACCCACTGCTGCTACACTGACTACTGCAACAGGATCGACTTGAGGGTGCCCAGTGGTCACCTCAAGGAGCCTGAGCACCCGTCCATGTGGGGCCCGGTGGAG(SEQ ID NO:222)
Figure GDA0004158550890002611
TCCGGGCCCCGGGGGGTCCAGGCTCTGCTGTGTGCGTGCACCAGCTGCCTCCAGGCCAACTACACGTGTGAGACAGATGGGGCCTGCATGGTTTCCATTTTCAATCTGGATGGGATGGAGCACCATGTGCGCACCTGCATCCCCAAAGTGGAGCTGGTCCCTGCCGGGAAGCCCTTCTACTGCCTGAGCTCGGAGGACCTGCGCAACACCCACTGCTGCTACACTGACTACTGCAACAGGATCGACTTGAGGGTGCCCAGTGGTCACCTCAAGGAGCCTGAGCACCCGTCCATGTGGGGCCCGGTGGAG(SEQ ID NO:224)
Figure GDA0004158550890002631
GAGCTCTCGCCAGGACTGAAGTGTGTATGTCTTTTGTGTGATTCTTCAAACTTTACCTGCCAAACAGAAGGAGCATGTTGGGCATCAGTCATGCTAACCAATGGAAAAGAGCAGGTGATCAAATCCTGTGTCTCCCTTCCAGAACTGAATGCTCAAGTCTTCTGTCATAGTTCCAACAATGTTACCAAAACCGAATGCTGCTTCACAGATTTTTGCAACAACATAACACTGCACCTTCCAACAGCATCACCAAATGCCCCAAAACTTGGACCCATGGAG(SEQ ID NO:234)
Figure GDA0004158550890002651
ATGCTAACCAATGGAAAAGAGCAGGTGATCAAATCCTGTGTCTCCCTTCCAGAACTGAATGCTCAAGTCTTCTGTCATAGTTCCAACAATGTTACCAAAACCGAATGCTGCTTCACAGATTTTTGCAACAACATAACACTGCACCTTCCAACAGCATCACCAAATGCCCCAAAACTTGGACCCATGGAG(SEQ ID NO:236)
ATGACCCGGGCGCTCTGCTCAGCGCTCCGCCAGGCTCTCCTGCTGCTCGCAGCGGCCGCCGAGCTCTCGCCAGGACTGAAGTGTGTATGTCTTTTGTGTGATTCTTCAAACTTTACCTGCCAAACAGAAGGAGCATGTTGGGCATCAGTCATGCTAACCAATGGAAAAGAGCAGGTGATCAAATCCTGTGTCTCCCTTCCAGAACTGAATGCTCAAGTCTTCTGTCATAGTTCCAACAATGTTACCAAAACCGAATGCTGCTTCACAGATTTTTGCAACAACATAACACTGCACCTTCCAACAGGTCTACCTCTGTTGGTTCAAAGGACAATTGCAAGGACGATTGTGCTTCAGGAAATAGTAGGAAAAGGTAGATTTGGTGAGGTGTGGCATGGAAGATGGTGTGGGGAAGATGTGGCTGTGAAAATATTCTCCTCCAGAGATGAAAGATCTTGGTTTCGTGAGGCAGAAATTTACCAGACGGTCATGCTGCGACATGAAAACATCCTTGGTTTCATTGCTGCTGACAACAAAGATAATGGAACTTGGACTCAACTTTGGCTGGTATCTGAATATCATGAACAGGGCTCCTTATATGACTATTTGAATAGAAATATAGTGACCGTGGCTGGAATGATCAAGCTGGCGCTCTCAATTGCTAGTGGTCTGGCACACCTTCATATGGAGATTGTTGGTACACAAGGTAAACCTGCTATTGCTCATCGAGACATAAAATCAAAGAATATCTTAGTGAAAAAGTGTGAAACTTGTGCCATAGCGGACTTAGGGTTGGCTGTGAAGCATGATTCAATACTGAACACTATCGACATACCTCAGAATCCTAAAGTGGGAACCAAGAGGTATATGGCTCCTGAAATGCTTGATGATACAATGAATGTGAATATCTTTGAGTCCTTCAAACGAGCTGACATCTATTCTGTTGGTCTGGTTTACTGGGAAATAGCCCGGAGGTGTTCAGTCGGAGGAATTGTTGAGGAGTACCAATTGCCTTATTATGACATGGTGCCTTCAGATCCCTCGATAGAGGAAATGAGAAAGGTTGTTTGTGACCAGAAGTTTCGACCAAGTATCCCAAACCAGTGGCAAAGTTGTGAAGCACTCCGAGTCATGGGGAGAATAATGCGTGAGTGTTGGTATGCCAACGGAGCGGCCCGCCTAACTGCTCTTCGTATTAAGAAGACTATATCTCAACTTTGTGTCAAAGAAGACTGCAAAGCC(SEQ ID NO:237)
GAGCTCTCGCCAGGACTGAAGTGTGTATGTCTTTTGTGTGATTCTTCAAACTTTACCTGCCAAACAGAAGGAGCATGTTGGGCATCAGTCATGCTAACCAATGGAAAAGAGCAGGTGATCAAATCCTGTGTCTCCCTTCCAGAACTGAATGCTCAAGTCTTCTGTCATAGTTCCAACAATGTTACCAAAACCGAATGCTGCTTCACAGATTTTTGCAACAACATAACACTGCACCTTCCAACAGGTCTACCTCTGTTGGTTCAAAGGACAATTGCAAGGACGATTGTGCTTCAGGAAATAGTAGGAAAAGGTAGATTTGGTGAGGTGTGGCATGGAAGATGGTGTGGGGAAGATGTGGCTGTGAAAATATTCTCCTCCAGAGATGAAAGATCTTGGTTTCGTGAGGCAGAAATTTACCAGACGGTCATGCTGCGACATGAAAACATCCTTGGTTTCATTGCTGCTGACAACAAAGATAATGGAACTTGGACTCAACTTTGGCTGGTATCTGAATATCATGAACAGGGCTCCTTATATGACTATTTGAATAGAAATATAGTGACCGTGGCTGGAATGATCAAGCTGGCGCTCTCAATTGCTAGTGGTCTGGCACACCTTCATATGGAGATTGTTGGTACACAAGGTAAACCTGCTATTGCTCATCGAGACATAAAATCAAAGAATATCTTAGTGAAAAAGTGTGAAACTTGTGCCATAGCGGACTTAGGGTTGGCTGTGAAGCATGATTCAATACTGAACACTATCGACATACCTCAGAATCCTAAAGTGGGAACCAAGAGGTATATGGCTCCTGAAATGCTTGATGATACAATGAATGTGAATATCTTTGAGTCCTTCAAACGAGCTGACATCTATTCTGTTGGTCTGGTTTACTGGGAAATAGCCCGGAGGTGTTCAGTCGGAGGAATTGTTGAGGAGTACCAATTGCCTTATTATGACATGGTGCCTTCAGATCCCTCGATAGAGGAAATGAGAAAGGTTGTTTGTGACCAGAAGTTTCGACCAAGTATCCCAAACCAGTGGCAAAGTTGTGAAGCACTCCGAGTCATGGGGAGAATAATGCGTGAGTGTTGGTATGCCAACGGAGCGGCCCGCCTAACTGCTCTTCGTATTAAGAAGACTATATCTCAACTTTGTGTCAAAGAAGACTGCAAAGCC(SEQ ID NO:238)
ATGACCCGGGCGCTCTGCTCAGCGCTCCGCCAGGCTCTCCTGCTGCTCGCAGCGGCCGCCGAGCTCTCGCCAGGACTGAAGTGTGTATGTCTTTTGTGTGATTCTTCAAACTTTACCTGCCAAACAGAAGGAGCATGTTGGGCATCAGTCATGCTAACCAATGGAAAAGAGCAGGTGATCAAATCCTGTGTCTCCCTTCCAGAACTGAATGCTCAAGTCTTCTGTCATAGTTCCAACAATGTTACCAAAACCGAATGCTGCTTCACAGATTTTTGCAACAACATAACACTGCACCTTCCAACAGATAATGGAACTTGGACTCAACTTTGGCTGGTATCTGAATATCATGAACAGGGCTCCTTATATGACTATTTGAATAGAAATATAGTGACCGTGGCTGGAATGATCAAGCTGGCGCTCTCAATTGCTAGTGGTCTGGCACACCTTCATATGGAGATTGTTGGTACACAAGGTAAACCTGCTATTGCTCATCGAGACATAAAATCAAAGAATATCTTAGTGAAAAAGTGTGAAACTTGTGCCATAGCGGACTTAGGGTTGGCTGTGAAGCATGATTCAATACTGAACACTATCGACATACCTCAGAATCCTAAAGTGGGAACCAAGAGGTATATGGCTCCTGAAATGCTTGATGATACAATGAATGTGAATATCTTTGAGTCCTTCAAACGAGCTGACATCTATTCTGTTGGTCTGGTTTACTGGGAAATAGCCCGGAGGTGTTCAGTCGGAGGAATTGTTGAGGAGTACCAATTGCCTTATTATGACATGGTGCCTTCAGATCCCTCGATAGAGGAAATGAGAAAGGTTGTTTGTGACCAGAAGTTTCGACCAAGTATCCCAAACCAGTGGCAAAGTTGTGAAGCACTCCGAGTCATGGGGAGAATAATGCGTGAGTGTTGGTATGCCAACGGAGCGGCCCGCCTAACTGCTCTTCGTATTAAGAAGACTATATCTCAACTTTGTGTCAAAGAAGACTGCAAAGCCTAA(SEQ ID NO:239)
GAGCTCTCGCCAGGACTGAAGTGTGTATGTCTTTTGTGTGATTCTTCAAACTTTACCTGCCAAACAGAAGGAGCATGTTGGGCATCAGTCATGCTAACCAATGGAAAAGAGCAGGTGATCAAATCCTGTGTCTCCCTTCCAGAACTGAATGCTCAAGTCTTCTGTCATAGTTCCAACAATGTTACCAAAACCGAATGCTGCTTCACAGATTTTTGCAACAACATAACACTGCACCTTCCAACAGATAATGGAACTTGGACTCAACTTTGGCTGGTATCTGAATATCATGAACAGGGCTCCTTATATGACTATTTGAATAGAAATATAGTGACCGTGGCTGGAATGATCAAGCTGGCGCTCTCAATTGCTAGTGGTCTGGCACACCTTCATATGGAGATTGTTGGTACACAAGGTAAACCTGCTATTGCTCATCGAGACATAAAATCAAAGAATATCTTAGTGAAAAAGTGTGAAACTTGTGCCATAGCGGACTTAGGGTTGGCTGTGAAGCATGATTCAATACTGAACACTATCGACATACCTCAGAATCCTAAAGTGGGAACCAAGAGGTATATGGCTCCTGAAATGCTTGATGATACAATGAATGTGAATATCTTTGAGTCCTTCAAACGAGCTGACATCTATTCTGTTGGTCTGGTTTACTGGGAAATAGCCCGGAGGTGTTCAGTCGGAGGAATTGTTGAGGAGTACCAATTGCCTTATTATGACATGGTGCCTTCAGATCCCTCGATAGAGGAAATGAGAAAGGTTGTTTGTGACCAGAAGTTTCGACCAAGTATCCCAAACCAGTGGCAAAGTTGTGAAGCACTCCGAGTCATGGGGAGAATAATGCGTGAGTGTTGGTATGCCAACGGAGCGGCCCGCCTAACTGCTCTTCGTATTAAGAAGACTATATCTCAACTTTGTGTCAAAGAAGACTGCAAAGCCTAA(SEQ ID NO:240)

Claims (488)

1.一种多肽，其包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，并且其中所述多肽包含在SEQ ID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：N35、E50、E52、K55、L57、Y60、G68、K74、W78、L79、F82、N83和E94。
2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸29-109至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸25-131至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸20-134至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的多肽，其中所述多肽是融合蛋白，所述融合蛋白还包含第一多肽结构域和一个或多个异源多肽结构域。
7.根据权利要求6所述的多肽，其中所述多肽是ActRIIB-Fc融合蛋白。
8.根据权利要求6或7所述的多肽，其中所述融合蛋白还包含定位于所述第一多肽结构域与所述一个或多个异源结构域或Fc结构域之间的接头结构域。
9.根据权利要求8所述的多肽，其中所述接头结构域选自：TGGG、TGGGG、SGGGG、GGGGS、GGG、GGGG、SGGG和GGGGS。
10.根据权利要求8所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
11.根据权利要求8所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
12.根据权利要求8所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:519的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含关于SEQ ID NO:2的氨基酸序列的选自以下的一个或多个氨基酸取代：L38N、E50L、E52N、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79F、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。
14.根据权利要求1-12中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含关于SEQ ID NO:2的氨基酸序列的选自以下的一个或多个氨基酸取代：L38N、E50L、E52D、E52N、E52Y、K55A、K55E、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79E、L79F、L79H、L79R、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。
15.根据权利要求1-12中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含关于SEQ ID NO:2的氨基酸序列的选自以下的一个或多个氨基酸取代：A24、S26、N35、E37、L38、R40、S44、L46、E50、E52、Q53、D54、K55、R56、L57、Y60、R64、N65、S67、G68、K74、W78、L79、D80、F82、N83、T93、E94、Q98、V99、E105、E106、F108、E111、R112、A119、G120、E123、P129、P130和A132。
16.根据权利要求1515所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的E50的位置处的L取代。
17.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L38的位置处的N取代。
18.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的V99的位置处的G取代。
19.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
20.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的T取代。
21.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的H取代。
22.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:522的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
23.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:524的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
24.根据权利要求22或权利要求23所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的K取代。
25.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:276的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
26.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:278的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
27.根据权利要求25或权利要求26所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的I取代和在对应于N83的位置处的R取代。
28.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:279的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
29.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:332的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
30.根据权利要求28或权利要求29所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的K取代和在对应于N83的位置处的R取代。
31.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:333的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
32.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:335的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
33.根据权利要求31或权利要求32所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的T取代和在对应于N83的位置处的R取代。
34.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:336的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
35.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:338的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
36.根据权利要求34或权利要求35所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的T取代。
37.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:339的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
38.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:341的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
39.根据权利要求37或权利要求38所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L79的位置处的H取代和在对应于F82的位置处的I取代。
40.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:342的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
41.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:344的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
42.根据权利要求40或权利要求41所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L79的位置处的H取代。
43.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:345的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
44.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:347的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
45.根据权利要求43或权利要求44所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L79的位置处的H取代和在对应于F82位置处的K取代。
46.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:348的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
47.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:350的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
48.根据权利要求46或权利要求47所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的E50的位置处的L取代。
49.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:351的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
50.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:353的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
51.根据权利要求49或权利要求50所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L38的位置处的N取代和在对应于L79的位置处的R取代。
52.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:354的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
53.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:356的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
54.根据权利要求52或权利要求53所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的V99的位置处的G取代。
55.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:366的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
56.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:368的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
57.根据权利要求55或权利要求56所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的N35的位置处的E取代。
58.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:369的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
59.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:371的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
60.根据权利要求58或权利要求59所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的E52的位置处的N取代。
61.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:372的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
62.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:374的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
63.根据权利要求61或权利要求62所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的Y60的位置处的D取代。
64.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:375的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
65.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:377的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
66.根据权利要求64或权利要求65所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的G68的位置处的R取代。
67.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:378的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
68.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:380的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
69.根据权利要求67或权利要求68所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的K74的位置处的E取代。
70.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:381的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
71.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:383的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
72.根据权利要求70或权利要求71所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的W78的位置处的Y取代。
73.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:384的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
74.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:386的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
75.根据权利要求73或权利要求74所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L79的位置处的A取代。
76.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:387的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
77.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:389的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
78.根据权利要求76或权利要求77所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L79的位置处的K取代。
79.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:390的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
80.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:392的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
81.根据权利要求79或权利要求80所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L79的位置处的S取代。
82.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:393的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
83.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:395的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
84.根据权利要求82或权利要求83所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L79的位置处的W取代。
85.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:396的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
86.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:398的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
87.根据权利要求85或权利要求86所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的D取代。
88.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:399的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
89.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:401的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
90.根据权利要求88或权利要求89所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的E取代。
91.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:402的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
92.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:404的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
93.根据权利要求91或权利要求92所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的L取代。
94.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:405的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
95.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:407的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
96.根据权利要求94或权利要求95所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的S取代。
97.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:408的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
98.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:410的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
99.根据权利要求97或权利要求98所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的Y取代。
100.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:411的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
101.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:413的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
102.根据权利要求100或权利要求101所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的E94的位置处的K取代。
103.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:414的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
104.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:416的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
105.根据权利要求103或权利要求104所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的E52的位置处的D取代和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代。
106.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:417的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
107.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:419的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
108.根据权利要求106或权利要求107所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的E52的位置处的D取代和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的T取代。
109.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:420的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
110.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:422的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
111.根据权利要求109或权利要求110所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L57的位置处的R取代和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代。
112.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:423的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
113.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:425的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
114.根据权利要求112或权利要求113所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L57的位置处的R取代和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的S取代。
115.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:426的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
116.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:428的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
117.根据权利要求115或权利要求116所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L57的位置处的R取代和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的T取代。
118.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:429的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
119.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:431的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
120.根据权利要求118或权利要求119所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L79的位置处的F取代和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代。
121.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:432的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
122.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:434的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
123.根据权利要求121或权利要求122所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L79的位置处的F取代和在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的T取代。
124.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:435的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
125.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:437的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
126.根据权利要求124或权利要求125所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的D取代和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
127.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:438的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
128.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:440的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
129.根据权利要求127或权利要求128所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的E取代和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
130.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:441的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
131.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:443的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
132.根据权利要求130或权利要求131所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的S取代和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
133.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:444的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
134.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:446的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
135.根据权利要求133或权利要求134所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的W取代和在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的A取代。
136.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:447的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
137.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:449的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
138.根据权利要求136或权利要求137所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的I取代和在对应于SEQ ID NO:2的E94的位置处的K取代。
139.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:450的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
140.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:452的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
141.根据权利要求139或权利要求140所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的E50的位置处的L取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
142.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:453的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
143.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:455的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
144.根据权利要求142或权利要求143所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的E52的位置处的D取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
145.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:456的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
146.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:458的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
147.根据权利要求145或权利要求146所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的E52的位置处的D取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的E取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
148.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:459的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
149.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:461的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
150.根据权利要求148或权利要求149所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的E52的位置处的D取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的T取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
151.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:462的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
152.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:464的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
153.根据权利要求151或权利要求152所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的E52的位置处的N取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的I取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
154.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:465的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
155.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:467的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
156.根据权利要求154或权利要求155所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的E52的位置处的N取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的Y取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
157.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:468的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
158.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:470的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
159.根据权利要求157或权利要求158所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的E52的位置处的Y取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
160.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:471的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
161.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:473的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
162.根据权利要求160或权利要求161所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L57的位置处的E取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的E取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
163.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:474的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
164.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:476的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
165.根据权利要求163或权利要求164所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L57的位置处的I取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
166.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:477的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
167.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:479的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
168.根据权利要求166或权利要求167所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L57的位置处的I取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的E取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
169.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:480的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
170.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:482的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
171.根据权利要求169或权利要求170所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L57的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
172.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:483的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
173.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:485的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
174.根据权利要求172或权利要求173所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L57的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的E取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
175.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:486的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
176.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:488的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
177.根据权利要求175或权利要求176所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L57的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的L取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
178.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:489的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
179.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:491的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
180.根据权利要求178或权利要求179所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L57的位置处的T取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的Y取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
181.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:492的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
182.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:494的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
183.根据权利要求181或权利要求182所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L57的位置处的V取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的D取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
184.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:495的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
185.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:497的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
186.根据权利要求184或权利要求185所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L57的位置处的V取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的Y取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
187.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:498的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
188.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:500的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
189.根据权利要求187或权利要求188所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的G68的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的W78的位置处的Y取代以及在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的Y取代。
190.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:501的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
191.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:503的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
192.根据权利要求190或权利要求191所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的G68的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的S取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
193.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:504的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
194.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:506的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
195.根据权利要求193或权利要求194所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的E52的位置处的N取代、在对应于SEQ ID NO:2的G68的位置处的R取代、在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的Y取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
196.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:507的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
197.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:509的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
198.根据权利要求196或权利要求197所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的G68的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的E取代、在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的T取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
199.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:510的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
200.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:512的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
201.根据权利要求199或权利要求200所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的G68的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的E取代、在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的Y取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
202.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:513的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
203.根据权利要求15所述的多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:515的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
204.根据权利要求202或权利要求203所述的多肽，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的G68的位置处的R取代、在对应于SEQ ID NO:2的L79的位置处的T取代、在对应于SEQID NO:2的F82的位置处的T取代以及在对应于SEQ ID NO:2的N83的位置处的R取代。
205.根据权利要求124-126或权利要求139-141中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的显著降低、GDF11结合的显著降低、无检测到的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。
206.根据权利要求124-126或权利要求139-141中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
207.根据权利要求121-123中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的显著降低、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、和BMP6结合的略微增加以及BMP9结合的适度降低。
208.根据权利要求121-123中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
209.根据权利要求79-81中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的显著降低、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的轻微降低、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的轻微降低。
210.根据权利要求79-81中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
211.根据权利要求175-177中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。
212.根据权利要求175-177中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
213.根据权利要求181-183中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。
214.根据权利要求181-183中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的适度降低。
215.根据权利要求169-171或权利要求172-174中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的显著降低以及BMP9结合的显著降低。
216.根据权利要求169-171或权利要求172-174中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的适度降低。
217.根据权利要求130-132或权利要求154-156中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。
218.根据权利要求130-132或权利要求154-156中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
219.根据权利要求178-180中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、最小BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。
220.根据权利要求178-180中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
221.根据权利要求142-144中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、最小BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。
222.根据权利要求142-144中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的适度降低。
223.根据权利要求163-165中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、最小BMP10结合、BMP6结合的适度降低以及BMP9结合的显著降低。
224.根据权利要求163-165中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低。
225.根据权利要求148-150中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、BMP10结合的适度降低、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。
226.根据权利要求148-150中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
227.根据权利要求151-153中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、BMP10结合的适度降低、最小BMP6结合以及BMP9结合的显著降低。
228.根据权利要求151-153中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
229.根据权利要求157-159中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的显著降低、BMP10结合的适度降低、最小BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。
230.根据权利要求157-159中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的适度降低。
231.根据权利要求127-129、权利要求145-147、权利要求166-168或权利要求160-162中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、GDF11结合的适度降低、无可检测的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的显著降低。
232.根据权利要求127-129、权利要求145-147、权利要求166-168或权利要求160-162中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的轻微降低。
233.根据权利要求82-84中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的略微增加以及接近WT水平的BMP9结合。
234.根据权利要求82-84中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
235.根据权利要求118-120中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的适度降低、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的略微增加以及接近WT水平的BMP9结合。
236.根据权利要求118-120中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的适度降低。
237.根据权利要求184-186中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素A结合的轻微降低、GDF11结合的适度降低、BMP10结合的适度降低、BMP6结合的显著降低以及BMP9结合的显著降低。
238.根据权利要求184-186中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
239.根据权利要求109-111中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的适度降低、BMP6结合的适度降低以及BMP9结合的适度降低。
240.根据权利要求109-111中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的轻微降低。
241.根据权利要求100-102中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、与BMP6的最小结合以及BMP9结合的轻微降低。
242.根据权利要求100-102中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
243.根据权利要求85-87、权利要求88-90、权利要求94-96、权利要求91-93或权利要求106-108中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的轻微降低。
244.根据权利要求88-90、权利要求94-96、权利要求91-93或权利要求106-108中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
245.根据权利要求58-60或权利要求97-99中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、接近WT水平的BMP6结合以及接近WT水平的BMP9结合。
246.根据权利要求58-60或权利要求97-99中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
247.根据权利要求103-105中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。
248.根据权利要求103-105中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的轻微降低。
249.根据权利要求115-117中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的轻微降低、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。
250.根据权利要求115-117中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的轻微降低。
251.根据权利要求112-114中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、BMP10结合的轻微降低、接近WT水平的BMP6结合以及BMP9结合的适度降低。
252.根据权利要求112-114中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素B结合。
253.根据权利要求136-138中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示接近WT水平的激活素A结合、接近WT水平的GDF11结合、接近WT水平的BMP10结合、BMP6结合的轻微降低以及BMP9结合的适度降低。
254.根据权利要求136-138中任一项所述的多肽，其中与未修饰的ActRIIB-Fc蛋白的结合谱相比，所述多肽展示激活素B结合的轻微降低。
255.根据权利要求1-254中任一项所述的多肽，其中所述多肽是同二聚体蛋白。
256.一种包含变体ActRIIB多肽和ALK4多肽的异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB多肽包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，以及在SEQID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：L38N、E50L、E52N、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79F、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。
257.一种包含变体ActRIIB多肽和ALK7多肽的异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB多肽包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，以及在SEQID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：L38N、E50L、E52N、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79F、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。
258.一种包含变体ActRIIB多肽和ALK4多肽的异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB多肽包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，以及在SEQID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：L38N、E50L、E52D、E52N、E52Y、K55A、K55E、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79E、L79F、L79H、L79R、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。
259.一种包含变体ActRIIB多肽和ALK7多肽的异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB多肽包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，以及在SEQID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：L38N、E50L、E52D、E52N、E52Y、K55A、K55E、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79E、L79F、L79H、L79R、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。
260.一种包含变体ActRIIB多肽和ALK4多肽的异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB多肽包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，以及在SEQID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。
261.一种包含变体ActRIIB多肽和ALK7多肽的异多聚体蛋白，其中所述变体ActRIIB多肽包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，以及在SEQID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。56.
根据权利要求52-55中任一项所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB多肽包含与SEQID NO:2的氨基酸29-109至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
262.根据权利要求256-261中任一项所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸25-131至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
263.根据权利要求256-261中任一项所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸20-134至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
264.根据权利要求256-261中任一项所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB多肽包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
265.根据权利要求256-264中任一项所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB多肽包含关于SEQ ID NO:2的氨基酸序列的选自以下的一个或多个氨基酸取代：L38N、E50L、E52D、E52N、E52Y、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、G68R、K74E、W78Y、L79E、L79F、L79H、L79R、L79S、L79T、L79W、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82Y、N83R、E94K和V99G。
266.根据权利要求256-264中任一项所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB多肽包含关于SEQ ID NO:2的氨基酸序列的选自以下的一个或多个氨基酸取代：A24N、S26T、N35E、E37A、E37D、L38N、R40A、R40K、S44T、L46V、L46I、L46F、L46A、E50K、E50P、E50L、E52A、E52D、E52G、E52H、E52K、E52N、E52P、E52R、E52S、E52T、E52Y、Q53R、Q53K、Q53N、Q53H、D54A、K55A、K55D、K55E、K55R、R56A、L57E、L57I、L57R、L57T、L57V、Y60D、Y60F、Y60K、Y60P、R64A、R64H、R64K、R64N、N65A、S67N、S67T、G68R、K74A、K74E、K74F、K74I、K74R、K74Y、W78A、W78Y、L79A、L79D、L79E、L79F、L79H、L79K、L79P、L79R、L79S、L79T、L79W、D80A、D80F、D80G、D80I、D80K、D80M、D80N、D80R、F82A、F82D、F82E、F82I、F82K、F82L、F82S、F82T、F82W、F82Y、N83A、N83R、T93D、T93E、T93G、T93H、T93K、T93P、T93R、T93S、T93Y、E94K、Q98D、Q98E、Q98K、Q98R、V99E、V99G、V99K、E105N、F108I、F108L、F108V、F108Y、E111D、E111H、E111K、111N、E111Q、E111R、R112H、R112K、R112N、R112S、R112T、A119P、A119V、G120N、E123N、P129N、P129S、P130A、P130R和A132N。
267.根据权利要求256、权利要求258或权利要求260所述的异多聚体，其中所述ALK4多肽包含与选自SEQ ID NO:84、85、86、87、88、89、92、93、247和249的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
268.根据权利要求257、权利要求259或权利要求261所述的异多聚体，其中所述ALK7多肽包含与选自SEQ ID NO:120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、133和134的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
269.根据权利要求256-268中任一项所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB多肽是包含ActRIIB多肽结构域和一个或多个异源结构域的融合蛋白。
270.根据权利要求256-268中任一项所述的异多聚体，其中所述ALK4多肽是包含ALK4多肽结构域和一个或多个异源结构域的融合蛋白。
271.根据权利要求256-268中任一项所述的异多聚体，其中所述ALK7多肽是包含ALK7多肽结构域和一个或多个异源结构域的融合蛋白。
272.根据权利要求269所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB多肽是ActRIIB-Fc融合蛋白。
273.根据权利要求270所述的异多聚体，其中所述ALK4多肽是ALK4-Fc融合蛋白。
274.根据权利要求271所述的异多聚体，其中所述ALK7多肽是ALK7-Fc融合蛋白。
275.根据权利要求269或权利要求272所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白还包含定位于所述ActRIIB多肽结构域与所述一个或多个异源结构域或Fc结构域之间的接头结构域。
276.根据权利要求270或权利要求273所述的异多聚体，其中所述ALK4-Fc融合蛋白还包含定位于所述ALK4多肽结构域与所述一个或多个异源结构域或Fc结构域之间的接头结构域。
277.根据权利要求271或权利要求274所述的异多聚体，其中所述ALK7-Fc融合蛋白还包含定位于所述ALK7多肽结构域与所述一个或多个异源结构域或Fc结构域之间的接头结构域。
278.根据权利要求275-277中任一项所述的异多聚体，其中所述接头结构域选自：TGGG、TGGGG、SGGGG、GGGGS、GGG、GGGG、SGGG和GGGGS。
279.根据权利要求272、273、275或276中任一项所述的异多聚体，其中所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：
a.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；
b.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；
c.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；
d.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及
e.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
280.根据权利要求272、274、275或277中任一项所述的异多聚体，其中所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：
a.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；
b.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；
c.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；
d.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及
e.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
281.根据权利要求272、273、275或276中任一项所述的异多聚体，其中所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：
a.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及
b.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
282.根据权利要求272、274、275或277中任一项所述的异多聚体，其中所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：
a.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及
b.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
283.根据权利要求272、273、275或276中任一项所述的异多聚体，其中所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：
a.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及
b.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
284.根据权利要求272、274、275或277中任一项所述的异多聚体，其中所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：
a.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及
b.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
285.根据权利要求272、273、275或276中任一项所述的异多聚体，其中所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：
a.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及
b.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
286.根据权利要求272、274、275或277中任一项所述的异多聚体，其中所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：
a.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及
b.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
287.根据权利要求272、273、275或276中任一项所述的异多聚体，其中所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：
a.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及
b.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
288.根据权利要求272、274、275或277中任一项所述的异多聚体，其中所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：
a.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及
b.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
289.根据权利要求272、273、275或276中任一项所述的异多聚体，其中所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：
a.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及
b.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
290.根据权利要求272、274、275或277中任一项所述的异多聚体，其中所述异多聚体包含选自以下的Fc结构域：
a.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域；以及
b.所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
291.根据权利要求272、273、275或276中任一项所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
292.根据权利要求272、274、275或277中任一项所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
293.根据权利要求291所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置138处的谷氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置217处的天冬氨酸，并且其中所述ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、位置146处的丙氨酸、氨基酸位置162处的精氨酸、氨基酸位置179处的精氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。
294.根据权利要求292所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置138处的谷氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置217处的天冬氨酸，并且其中所述ALK7-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、位置146处的丙氨酸、氨基酸位置162处的精氨酸、氨基酸位置179处的精氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。
295.根据权利要求272、273、275或276中任一项所述的异多聚体，其中所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
296.根据权利要求272、274、275或277中任一项所述的异多聚体，其中所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
297.根据权利要求295所述的异多聚体，其中所述ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置138处的谷氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置217处的天冬氨酸，并且其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、位置146处的丙氨酸、氨基酸位置162处的精氨酸、氨基酸位置179处的精氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。
298.根据权利要求296所述的异多聚体，其中所述ALK7-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置138处的谷氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置217处的天冬氨酸，并且其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、位置146处的丙氨酸、氨基酸位置162处的精氨酸、氨基酸位置179处的精氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。
299.根据权利要求272、273、275或276中任一项所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
300.根据权利要求272、274、275或277中任一项所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
301.根据权利要求299所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置435处的精氨酸，并且其中所述ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、氨基酸位置146处的丙氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。
302.根据权利要求300所述的异多聚体，其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置435处的精氨酸，并且其中所述ALK7-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、氨基酸位置146处的丙氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。
303.根据权利要求272、273、275或276中任一项所述的异多聚体，其中所述ALK4-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
304.根据权利要求272、274、275或277中任一项所述的异多聚体，其中所述ALK7-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域，并且所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的Fc结构域。
305.根据权利要求303所述的异多聚体，其中所述ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置435处的精氨酸，并且其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、氨基酸位置146处的丙氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。
306.根据权利要求304所述的异多聚体，其中所述ALK7-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置132处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的色氨酸以及氨基酸位置435处的精氨酸，并且其中所述变体ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域包含氨基酸位置127处的半胱氨酸、氨基酸位置144处的丝氨酸、氨基酸位置146处的丙氨酸以及氨基酸位置185处的缬氨酸。
307.根据权利要求256-304中任一项所述的异多聚体，其中所述异多聚体是异二聚体。
308.一种分离的和/或重组的核酸，其包含根据权利要求256-307中任一项所述的ALK4多肽的编码序列。
309.根据权利要求308所述的分离的和/或重组的核酸，其中所述核酸与对应于SEQ IDNo:221、222、223和224中的任一个的核酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。
310.一种分离的和/或重组的核酸，其包含根据权利要求256-307中任一项所述的ALK7多肽的编码序列。
311.根据权利要求306所述的分离的和/或重组的核酸，其中所述核酸与对应于SEQ IDNO:233、234、235、236、237、238、239、240和255中的任一个的核酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。
312.一种分离的和/或重组的核酸，其包含根据权利要求1-255中任一项所述的多肽的编码序列。
313.根据权利要求312所述的分离的和/或重组的核酸，其中所述核酸与对应于SEQ IDNo:3、10、32、35、38、41、44、47、277、331、334、337、340、343、346、349、352、355、367、370、373、376、379、382、385、388、391、394、397、400、403、406、409、412、415、418、421、424、427、430、433、436、439、442、445、448、451、454、457、460、463、466、469、472、475、478、481、484、487、490、493、496、499、502、505、508、511、514、517、521和523中的任一个的核酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。
314.一种分离的和/或重组的核酸，其包含根据权利要求256-307中任一项所述的异多聚体的编码序列。
315.一种重组多核苷酸序列，其包含与根据权利要求308、310、312或314中任一项所述的编码序列可操作地连接的启动子序列。
316.一种载体，其包含根据权利要求308-314中任一项所述的分离的核酸或根据权利要求315所述的重组多核苷酸。
317.一种细胞，其包含根据权利要求315所述的重组多核苷酸序列或根据权利要求316所述的载体。
318.一种制备多肽的方法，所述方法包括在适合于多肽表达的条件下培养细胞，其中所述细胞包含含有根据权利要求1-255中任一项所述的多肽的编码序列的核酸。
319.一种制备包含变体ActRIIB多肽和ALK4多肽的异多聚体的方法，所述方法包括在适合于变体ActRIIB多肽和所述ALK4多肽的表达的条件下培养细胞，其中所述细胞包含含有根据权利要求1-51中任一项所述的变体ActRIIB多肽的编码序列的第一核酸以及含有根据权利要求256-307中任一项所述的ALK4多肽的编码序列的第二核酸。
320.一种制备包含变体ActRIIB多肽和ALK7多肽的异多聚体的方法，所述方法包括在适合于变体ActRIIB多肽和所述ALK7多肽的表达的条件下培养细胞，其中所述细胞包含含有根据权利要求1-51中任一项所述的变体ActRIIB多肽的编码序列的第一核酸以及含有根据权利要求256-307中任一项所述的ALK7多肽的编码序列的第二核酸。
321.根据权利要求319或权利要求320所述的方法，其中所述方法包括回收所述异多聚体的另一步骤。
322.一种制备包含变体ActRIIB多肽和ALK4多肽的异多聚体的方法，所述方法包括：
a)在适合于变体ActRIIB多肽的表达的条件下培养第一细胞，其中所述细胞包含含有变体ActRIIB多肽的编码序列的核酸；
b)回收所述变体ActRIIB多肽；
c)在适合于ALK4多肽的表达的条件下培养第二细胞，其中所述细胞包含含有ALK4多肽的编码序列的核酸；
d)回收所述ALK4多肽；
e)在适合于异多聚体形成的条件下组合所述回收的变体ActRIIB多肽与所述ALK4多肽。
323.一种制备包含变体ActRIIB多肽和ALK7多肽的异多聚体的方法，所述方法包括：
a)在适合于变体ActRIIB多肽的表达的条件下培养第一细胞，其中所述细胞包含含有变体ActRIIB多肽的编码序列的核酸；
b)回收所述变体ActRIIB多肽；
c)在适合于ALK7多肽的表达的条件下培养第二细胞，其中所述细胞包含含有ALK7多肽的编码序列的核酸；
d)回收所述ALK7多肽；
e)在适合于异多聚体形成的条件下组合所述回收的变体ActRIIB多肽与所述ALK7多肽。
324.根据权利要求322或权利要求323所述的方法，其中所述方法还包括回收表达的异多聚体多肽。
325.一种用于增加患者的红细胞水平或血红蛋白水平的方法，所述方法包括向有需要的患者施用根据前述权利要求中任一项所述的多肽或异多聚体。
326.一种用于治疗患者的贫血或与贫血相关的障碍的方法，所述方法包括向有需要的患者施用根据前述权利要求中任一项所述的多肽或异多聚体。
327.根据权利要求326所述的方法，其中所述贫血或与贫血相关的障碍选自MDS、地中海贫血症和骨髓纤维化。
328.一种用于增加患者的肌肉质量和/或肌肉强度的方法，所述方法包括向有需要的患者施用根据前述权利要求中任一项所述的多肽或异多聚体。
329.一种用于治疗患者的肌肉相关障碍的方法，所述方法包括向有需要的患者施用根据前述权利要求中任一项所述的多肽或异多聚体。
330.根据权利要求329所述的方法，其中所述肌肉相关障碍与不期望的低肌肉生长和/或肌无力相关。
331.根据权利要求330所述的方法，其中所述肌肉相关障碍选自：迪谢内肌营养不良(DMD)、贝克肌营养不良(BMD)、夏科-马里-图思病(CMT)、面肩胛肱型肌营养不良(FSH或FSHD)、肌萎缩侧索硬化(ALS)和脊髓性肌萎缩(SMA)。
332.一种用于治疗患者的肺动脉高压的方法，所述方法包括向有需要的患者施用根据前述权利要求中任一项所述的多肽或异多聚体。
333.一种用于治疗患者的肺高血压的方法，所述方法包括向有需要的患者施用根据前述权利要求中任一项所述的多肽或异多聚体。
334.一种用于治疗患者的间质性肺疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用根据前述权利要求中任一项所述的多肽或异多聚体。
335.一种用于治疗患者的肾相关疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用根据前述权利要求中任一项所述的多肽或异多聚体。
336.根据权利要求335所述的方法，其中所述肾相关疾病选自奥尔波特综合征、局灶节段性肾小球硬化、多囊肾病或慢性肾脏病。
337.一种用于治疗患者的骨相关障碍的方法，所述方法包括向有需要的患者施用根据前述权利要求中任一项所述的多肽或异多聚体。
338.根据权利要求337所述的方法，其中所述骨相关障碍选自骨质疏松症、甲状旁腺功能亢进症、库欣病、甲状腺毒症、慢性腹泻状态或吸收不良、肾小管性酸中毒、神经性厌食或进行性骨化性纤维结构不良(FOP)。
339.根据权利要求1-255中任一项所述的多肽，其中所述多肽与选自激活素A、激活素B、GDF11、GDF8、GDF3、BMP5、BMP6和BMP10的一种或多种配体结合。
340.根据权利要求1-255中任一项所述的多肽，其中所述多肽与激活素A、GDF8、GDF11和BMP10结合。
341.根据权利要求1-255中任一项所述的多肽，其中所述多肽在基于细胞的测定中抑制一种或多种配体的活性。
342.根据权利要求256-307中任一项所述的异多聚体蛋白，其中所述异多聚体蛋白与选自激活素A、激活素B、GDF11、GDF8、GDF3、BMP5、BMP6和BMP10的一种或多种配体结合。
343.根据权利要求256-307中任一项所述的异多聚体蛋白，其中所述异多聚体蛋白与激活素A、GDF8、GDF11和BMP10结合。
344.根据权利要求256-307中任一项所述的异多聚体蛋白，其中所述异多聚体蛋白在基于细胞的测定中抑制一种或多种配体的活性。
345.一种治疗肾脏疾病或病症的方法，所述方法包括将多肽施用至有需要的受试者，其中所述多肽包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，并且其中所述多肽包含在SEQ ID NO:2中选自以下的位置处的一个或多个氨基酸取代：N35、E50、E52、K55、L57、Y60、G68、K74、W78、L79、F82、N83、E94。
346.根据权利要求345所述的方法，其中所述多肽选自权利要求1-51中的任一项。
347.根据权利要求345所述的方法，其中所述多肽选自权利要求51-101中的任一项。
348.根据权利要求345所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:31的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
349.根据权利要求345所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:33的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
350.根据权利要求348或权利要求349所述的方法，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的K55的位置处的A取代。
351.根据权利要求345所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:34的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
352.根据权利要求345所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
353.根据权利要求351或权利要求352所述的方法，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的K55的位置处的E取代。
354.根据权利要求345所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:40的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
355.根据权利要求345所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:42的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
356.根据权利要求354或权利要求355所述的方法，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的K取代。
357.根据权利要求345所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:37的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
358.根据权利要求345所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:39的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
359.根据权利要求357或权利要求358所述的方法，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的F82的位置处的I取代。
360.根据权利要求345所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:43的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
361.根据权利要求345所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:45的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
362.根据权利要求360或权利要求361所述的方法，其中所述多肽包含在对应于SEQ IDNO:2的L79的位置处的E取代。
363.根据权利要求345所述的方法，其中所述多肽包含根据权利要求22-204中任一项所述的多肽。
364.根据权利要求345-363中任一项所述的方法，其中所述肾脏疾病或病症是奥尔波特综合征。
365.根据权利要求345-363中任一项所述的方法，其中所述肾脏疾病或病症是局灶节段性肾小球硬化(FSGS)。
366.根据权利要求345-363中任一项所述的方法，其中所述肾脏疾病或病症是多囊肾病。
367.根据权利要求345-363中任一项所述的方法，其中所述肾脏疾病或病症是常染色体显性遗传多囊肾病(ADPKD)。
368.根据权利要求345-363中任一项所述的方法，其中所述肾脏疾病或病症是常染色体隐性遗传多囊肾病(ARPKD)。
369.根据权利要求345-363中任一项所述的方法，其中所述肾脏疾病或病症是慢性肾脏病(CKD)。
370.根据权利要求345-369中任一项所述的方法，其中所述受试者患有肾功能下降。
371.根据权利要求345-369中任一项所述的方法，其中所述方法减缓肾功能下降。
372.根据权利要求345-369中任一项所述的方法，所述方法还包括向所述受试者施用用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法。
373.根据权利要求372所述的方法，其中所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法选自：血管紧张素受体阻滞药(ARB)(例如，氯沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、坎地沙坦、缬沙坦、非马沙坦、阿齐沙坦、沙普沙坦和替米沙坦)、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂(例如，贝那普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、培哚普利、雷米普利、群多普利和佐芬普利)、糖皮质激素(例如，倍氯米松、倍他米松、布地奈德、可的松、地塞米松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、甲基强的松、泼尼松和曲安西龙)、钙调磷酸酶抑制剂(例如，环孢菌素、他罗利姆)、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、JAK激酶抑制剂(例如，托法替尼)、mTOR抑制剂(例如，西罗莫司、依维莫司)、IMDH抑制剂(例如，硫唑嘌呤、来氟米特、麦考酚酯)、生物制品(例如，阿巴西普、阿达木单抗、阿那白滞素、巴利昔单抗、赛妥珠单抗、达克珠单抗、依那西普、非苏木单抗、戈利木单抗、英利昔单抗、依奇珠单抗、那他珠单抗、利妥昔单抗、苏金单抗、托珠单抗、优特克单抗、维多珠单抗)、他汀(例如，贝那普利、缬沙坦、氟伐他汀、普伐他汀)、甲基巴多索隆、Achtar凝胶、托伐普坦、阿巴西普联合斯派森坦、阿利吉仑、别嘌呤醇、ANG-3070、阿托伐他汀、布来鲁单抗、博舒替尼、CCX140-B、CXA-10、D6-25-羟维生素D3、达格列净、地塞米松联合MMF、大黄素、FG-3019、FK506、FK-506和MMF、FT-011、半乳糖、GC1008、GFB-887、异维甲酸、拉德梅森、兰瑞肽、左旋咪唑、利希普坦、洛批莫德、二甲双胍、咪唑立宾、N-乙酰甘露糖胺、奥曲肽、帕立骨化醇、PF-06730512、吡格列酮、丙帕锗、丙帕锗和厄贝沙坦、雷帕鸣、雷帕霉素、RE-021(例如，斯派森坦)、RG012、罗格列酮(例如，Avandia)、沙奎那韦、SAR339375、促生长素抑制素、螺内酯、特泊替尼(KD019)、替可克肽、雷公藤(TW)、丙戊酸、VAR-200、文格司他(GZ402671)、维立诺雷、伏环孢素、VX-147、肾透析、肾移植、间充质干细胞疗法、骨髓干细胞、脂蛋白清除、Liposorber LA-15装置、血浆去除术、血浆置换以及饮食改变(例如，膳食钠摄入量)。
374.根据权利要求372所述的方法，其中所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法是选自以下的血管紧张素受体阻滞药(ARB)：氯沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、坎地沙坦、缬沙坦、非马沙坦、阿齐沙坦、沙普沙坦和替米沙坦。
375.根据权利要求372所述的方法，其中所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法是选自以下的血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂：贝那普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、培哚普利、雷米普利、群多普利和佐芬普利。
376.根据权利要求372所述的方法，其中所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法是ARB与ACE抑制剂的组合。
377.根据权利要求345-376中任一项所述的方法，其中所述受试者患有蛋白尿。
378.根据权利要求345-376中任一项所述的方法，其中所述受试者患有白蛋白尿。
379.根据权利要求345-376中任一项所述的方法，其中所述受试者患有中度白蛋白尿。
380.根据权利要求345-376中任一项所述的方法，其中所述受试者患有重度白蛋白尿。
381.根据权利要求345-380中任一项所述的方法，其中所述方法降低有需要的受试者的白蛋白尿、蛋白尿、微量白蛋白尿和大量白蛋白尿中的一种或多种的严重性、发生率和/或持续时间。
382.根据权利要求379所述的方法，其中所述受试者的白蛋白-肌酐比率(ACR)在约30与约300mg白蛋白/24小时尿收集之间。
383.根据权利要求379所述的方法，其中所述受试者的ACR在约30与约300mg白蛋白/g肌酐之间。
384.根据权利要求380所述的方法，其中所述受试者的白蛋白-肌酐比率(ACR)高于约300mg白蛋白/24小时。
385.根据权利要求380所述的方法，其中所述受试者的ACR高于约300mg白蛋白/g肌酐。
386.根据权利要求345-378中任一项所述的方法，其中所述受试者患有A1期白蛋白尿、A2期白蛋白尿或A3期白蛋白尿。
387.根据权利要求345-378中任一项所述的方法，其中所述方法降低A1期白蛋白尿的严重性、发生率和/或持续时间。
388.根据权利要求345-378中任一项所述的方法，其中所述方法降低A2期白蛋白尿的严重性、发生率和/或持续时间。
389.根据权利要求345-378中任一项所述的方法，其中所述方法降低A3期白蛋白尿的严重性、发生率和/或持续时间。
390.根据权利要求345-378中任一项所述的方法，其中所述方法延迟或预防患有A1期白蛋白尿的受试者进展至A2期白蛋白尿，或者患有A2期的受试者进展至A3期白蛋白尿。
391.根据权利要求345-378中任一项所述的方法，其中所述方法延迟和/或预防有需要的受试者的白蛋白尿阶段进展的恶化。
392.根据权利要求345-378中任一项所述的方法，其中所述方法将受试者的白蛋白尿分类改进一个或多个阶段。
393.根据权利要求345-392中任一项所述的方法，其中所述方法减小所述受试者的ACR。
394.根据权利要求393所述的方法，其中所述方法将所述受试者的ACR减小约0.1与约100.0mg白蛋白/g肌酐之间(例如，约0.1与约2.5mg白蛋白/g之间、约2.5与约3.5mg白蛋白/g肌酐之间、约3.5与约5.0mg白蛋白/g肌酐之间、约5.0与约7.5mg白蛋白/g肌酐之间、约7.5与约10.0mg白蛋白/g肌酐之间、约10.0与约15.0mg白蛋白/g肌酐之间、约15.0与约20.0mg白蛋白/g肌酐之间、约20.0与约25.0mg白蛋白/g肌酐之间、约30.0与约35.0mg白蛋白/g肌酐之间、约40.0与约45.0mg白蛋白/g肌酐之间、约45.0与约50.0mg白蛋白/g肌酐之间、约50.0与约60.0mg白蛋白/g肌酐之间、约60.0与约70.0mg白蛋白/g肌酐之间、约70.0与约80.0mg白蛋白/g肌酐之间、约80.0与约90.0mg白蛋白/g肌酐之间、约90.0与约100.0mg白蛋白/g肌酐之间)。
395.根据权利要求380所述的方法，其中与基线测量相比，所述方法将所述受试者的ACR减小至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。
396.根据权利要求345-395中任一项所述的方法，其中所述方法减小所述受试者的尿蛋白-肌酐比率(UPCR)。
397.根据权利要求396所述的方法，其中所述方法将所述受试者的UPCR减小约0.1与约100.0mg尿蛋白/mg肌酐之间(例如，约0.1与约2.5mg尿蛋白/mg肌酐之间、约2.5与约3.5mg尿蛋白/mg肌酐之间、约3.5与约5.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约5.0与约7.5mg尿蛋白/mg肌酐之间、约7.5与约10.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约10.0与约15.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约15.0与约20.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约20.0与约25.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约30.0与约35.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约40.0与约45.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约45.0与约50.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约50.0与约60.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约60.0与约70.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约70.0与约80.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约80.0与约90.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约90.0与约100.0mg尿蛋白/mg肌酐之间)。
398.根据权利要求396所述的方法，其中与基线测量相比，所述方法将所述受试者的UPCR减小至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。
399.根据权利要求345-398中任一项所述的方法，其中所述方法增加所述受试者的估算肾小球滤过率(eGFR)和/或肾小球滤过率(GFR)。
400.根据权利要求399所述的方法，其中所述eGFR是使用血清肌酐、年龄、民族性和性别变量来测量的。
401.根据权利要求399所述的方法，其中所述eGFR是使用以下中的一种或多种来测量的：Cockcroft-Gault公式、肾病饮食调整(MDRD)公式、CKD-EPI公式、Mayo二次公式以及Schwartz公式。
402.根据权利要求399所述的方法，其中与基线测量相比，使所述eGFR和/或GFR增加至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。
403.根据权利要求399所述的方法，其中与基线测量相比，使所述GFR增加约1mL/min/1.73m2(例如，3、5、7、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100mL/min/1.73m2)。
404.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述肾脏疾病或病症按慢性肾脏病(CKD)的阶段来评价。
405.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述受试者患有一期慢性肾脏病(CKD)。
406.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述受试者患有二期慢性肾脏病(CKD)。
407.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述受试者患有三期慢性肾脏病(CKD)。
408.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述受试者患有四期慢性肾脏病(CKD)。
409.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述受试者患有五期慢性肾脏病(CKD)。
410.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述方法降低1期CKD的严重性、发生率和/或持续时间。
411.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述方法降低2期CKD的严重性、发生率和/或持续时间。
412.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述方法降低3期CKD的严重性、发生率和/或持续时间。
413.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述方法降低3a期CKD的严重性、发生率和/或持续时间。
414.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述方法降低3b期CKD的严重性、发生率和/或持续时间。
415.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述方法降低4期CKD的严重性、发生率和/或持续时间。
416.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述方法降低5期CKD的严重性、发生率和/或持续时间。
417.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟患有1期CKD的受试者进展至2期CKD。
418.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟患有2期CKD的受试者进展至3期CKD。
419.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟患有2期CKD的受试者进展至3a期CKD。
420.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟患有3a期CKD的受试者进展至3b期CKD。
421.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟患有3期CKD的受试者进展至4期CKD。
422.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟患有3b期CKD的受试者进展至4期CKD。
423.根据权利要求345-403中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟患有4期CKD的受试者进展至5期CKD。
424.根据权利要求345-423中任一项所述的方法，其中所述方法延迟和/或预防有需要的受试者的CKD阶段进展的恶化。
425.根据权利要求345-424中任一项所述的方法，其中所述方法使受试者的肾损伤CKD分类改进一个或多个阶段。
426.根据权利要求345-425中任一项所述的方法，其中所述方法减小受试者的总肾体积。
427.根据权利要求426所述的方法，其中与基线测量相比，使所述总肾体积减小至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。
428.根据权利要求345-427中任一项所述的方法，其中所述方法减少所述受试者的血尿素氮(BUN)。
429.根据权利要求428所述的方法，其中与基线测量相比，使所述BUN减少至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。
430.根据权利要求345-429中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟肾脏疾病或病症的临床恶化。
431.根据权利要求345-430中任一项所述的方法，其中所述方法降低与肾脏疾病或病症相关的一种或多种并发症的住院风险。
432.根据权利要求345-346或权利要求348-431中任一项所述的方法，其中所述多肽通过皮下注射来施用。
433.根据权利要求345或347-431中任一项所述的方法，其中所述异多聚体蛋白通过皮下注射来施用。
434.一种治疗肾脏疾病或病症的方法，所述方法包括将多肽施用至有需要的受试者，其中所述多肽包含与在SEQ ID NO:2的氨基酸20-29中的任一个(例如，氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)处开始并且在SEQ ID NO:2的氨基酸109-134中的任一个(例如，氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，并且其中所述多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的F82的位置处的K取代。
435.根据权利要求434所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸29-109至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
436.根据权利要求434所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸25-131至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
437.根据权利要求434所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸20-134至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
438.根据权利要求434所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
439.根据权利要求434-438中任一项所述的方法，其中所述多肽是包含第一多肽结构域和一个或多个异源多肽结构域的融合蛋白。
440.根据权利要求439所述的方法，其中所述多肽是ActRIIB-Fc融合蛋白。
441.根据权利要求439或权利要求440所述的方法，其中所述融合蛋白还包含定位于所述第一多肽结构域与所述一个或多个异源结构域或Fc结构域之间的接头结构域。
442.根据权利要求441所述的方法，其中所述接头结构域选自：TGGG、TGGGG、SGGGG、GGGGS、GGG、GGGG、SGGG和GGGGS。
443.根据权利要求441所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
444.根据权利要求441所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
445.根据权利要求434-444中任一项所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:40的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
446.根据权利要求434-444中任一项所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:42的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
447.根据权利要求434-444中任一项所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:522的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
448.根据权利要求434-444中任一项所述的方法，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:524的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
449.根据权利要求434-448中任一项所述的方法，其中所述多肽与选自激活素A、激活素B、GDF11、GDF8、GDF3、BMP5、BMP6和BMP10的一种或多种配体结合。
450.根据权利要求434-448中任一项所述的方法，其中所述多肽与激活素A、GDF8、GDF11和BMP10结合。
451.根据权利要求434-448中任一项所述的方法，其中所述多肽在基于细胞的测定中抑制一种或多种配体的活性。
452.根据权利要求434-451中任一项所述的方法，其中所述肾脏疾病或病症是奥尔波特综合征。
453.根据权利要求434-451中任一项所述的方法，其中所述肾脏疾病或病症是局灶节段性肾小球硬化(FSGS)。
454.根据权利要求434-453中任一项所述的方法，其中所述受试者患有肾功能下降。
455.根据权利要求434-453中任一项所述的方法，其中所述方法减缓肾功能下降。
456.根据权利要求434-455中任一项所述的方法，所述方法还包括向所述受试者施用用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法。
457.根据权利要求456所述的方法，其中所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法选自：血管紧张素受体阻滞药(ARB)(例如，氯沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、坎地沙坦、缬沙坦、非马沙坦、阿齐沙坦、沙普沙坦和替米沙坦)、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂(例如，贝那普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、培哚普利、雷米普利、群多普利和佐芬普利)、糖皮质激素(例如，倍氯米松、倍他米松、布地奈德、可的松、地塞米松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、甲基强的松、泼尼松和曲安西龙)、钙调磷酸酶抑制剂(例如，环孢菌素、他罗利姆)、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、JAK激酶抑制剂(例如，托法替尼)、mTOR抑制剂(例如，西罗莫司、依维莫司)、IMDH抑制剂(例如，硫唑嘌呤、来氟米特、麦考酚酯)、生物制品(例如，阿巴西普、阿达木单抗、阿那白滞素、巴利昔单抗、赛妥珠单抗、达克珠单抗、依那西普、非苏木单抗、戈利木单抗、英利昔单抗、依奇珠单抗、那他珠单抗、利妥昔单抗、苏金单抗、托珠单抗、优特克单抗、维多珠单抗)、他汀(例如，贝那普利、缬沙坦、氟伐他汀、普伐他汀)、甲基巴多索隆、Achtar凝胶、托伐普坦、阿巴西普联合斯派森坦、阿利吉仑、别嘌呤醇、ANG-3070、阿托伐他汀、布来鲁单抗、博舒替尼、CCX140-B、CXA-10、D6-25-羟维生素D3、达格列净、地塞米松联合MMF、大黄素、FG-3019、FK506、FK-506和MMF、FT-011、半乳糖、GC1008、GFB-887、异维甲酸、拉德梅森、兰瑞肽、左旋咪唑、利希普坦、洛批莫德、二甲双胍、咪唑立宾、N-乙酰甘露糖胺、奥曲肽、帕立骨化醇、PF-06730512、吡格列酮、丙帕锗、丙帕锗和厄贝沙坦、雷帕鸣、雷帕霉素、RE-021(例如，斯派森坦)、RG012、罗格列酮(例如，Avandia)、沙奎那韦、SAR339375、促生长素抑制素、螺内酯、特泊替尼(KD019)、替可克肽、雷公藤(TW)、丙戊酸、VAR-200、文格司他(GZ402671)、维立诺雷、伏环孢素、VX-147、肾透析、肾移植、间充质干细胞疗法、骨髓干细胞、脂蛋白清除、Liposorber LA-15装置、血浆去除术、血浆置换以及饮食改变(例如，膳食钠摄入量)。
458.根据权利要求456所述的方法，其中所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法是选自以下的血管紧张素受体阻滞药(ARB)：氯沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、坎地沙坦、缬沙坦、非马沙坦、阿齐沙坦、沙普沙坦和替米沙坦。
459.根据权利要求456所述的方法，其中所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法是选自以下的血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂：贝那普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、培哚普利、雷米普利、群多普利和佐芬普利。
460.根据权利要求456所述的方法，其中所述用于治疗肾脏疾病或病症的另外的活性剂和/或支持疗法是ARB与ACE抑制剂的组合。
461.根据权利要求434-460中任一项所述的方法，其中所述受试者患有蛋白尿。
462.根据权利要求434-460中任一项所述的方法，其中所述受试者患有白蛋白尿。
463.根据权利要求434-462中任一项所述的方法，其中所述方法减小所述受试者的白蛋白-肌酐比率(ACR)。
464.根据权利要求463所述的方法，其中所述方法将所述受试者的ACR减小约0.1与约100.0mg白蛋白/g肌酐之间(例如，约0.1与约2.5mg白蛋白/g之间、约2.5与约3.5mg白蛋白/g肌酐之间、约3.5与约5.0mg白蛋白/g肌酐之间、约5.0与约7.5mg白蛋白/g肌酐之间、约7.5与约10.0mg白蛋白/g肌酐之间、约10.0与约15.0mg白蛋白/g肌酐之间、约15.0与约20.0mg白蛋白/g肌酐之间、约20.0与约25.0mg白蛋白/g肌酐之间、约30.0与约35.0mg白蛋白/g肌酐之间、约40.0与约45.0mg白蛋白/g肌酐之间、约45.0与约50.0mg白蛋白/g肌酐之间、约50.0与约60.0mg白蛋白/g肌酐之间、约60.0与约70.0mg白蛋白/g肌酐之间、约70.0与约80.0mg白蛋白/g肌酐之间、约80.0与约90.0mg白蛋白/g肌酐之间、约90.0与约100.0mg白蛋白/g肌酐之间)。
465.根据权利要求463所述的方法，其中与基线测量相比，所述方法将所述受试者的ACR减小至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。
466.根据权利要求434-465中任一项所述的方法，其中所述方法减小所述受试者的尿蛋白-肌酐比率(UPCR)。
467.根据权利要求466所述的方法，其中所述方法将所述受试者的UPCR减小约0.1与约100.0mg尿蛋白/mg肌酐之间(例如，约0.1与约2.5mg尿蛋白/mg肌酐之间、约2.5与约3.5mg尿蛋白/mg肌酐之间、约3.5与约5.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约5.0与约7.5mg尿蛋白/mg肌酐之间、约7.5与约10.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约10.0与约15.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约15.0与约20.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约20.0与约25.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约30.0与约35.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约40.0与约45.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约45.0与约50.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约50.0与约60.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约60.0与约70.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约70.0与约80.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约80.0与约90.0mg尿蛋白/mg肌酐之间、约90.0与约100.0mg尿蛋白/mg肌酐之间)。
468.根据权利要求466所述的方法，其中与基线测量相比，所述方法将所述受试者的UPCR减小至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。
469.根据权利要求434-468中任一项所述的方法，其中所述方法增加所述受试者的估算肾小球滤过率(eGFR)和/或肾小球滤过率(GFR)。
470.根据权利要求469所述的方法，其中所述eGFR是使用血清肌酐、年龄、民族性和性别变量来测量的。
471.根据权利要求469所述的方法，其中所述eGFR是使用以下中的一种或多种来测量的：Cockcroft-Gault公式、肾病饮食调整(MDRD)公式、CKD-EPI公式、Mayo二次公式以及Schwartz公式。
472.根据权利要求469所述的方法，其中与基线测量相比，使所述eGFR和/或GFR增加至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。
473.根据权利要求469所述的方法，其中与基线测量相比，使所述GFR增加约1mL/min/1.73m2(例如，3、5、7、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100mL/min/1.73m2)。
474.根据权利要求434-473中任一项所述的方法，其中所述肾脏疾病或病症按慢性肾脏病(CKD)的阶段来评价。
475.根据权利要求434-474中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟患有1期CKD的受试者进展至2期CKD。
476.根据权利要求434-474中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟患有2期CKD的受试者进展至3期CKD。
477.根据权利要求434-474中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟患有2期CKD的受试者进展至3a期CKD。
478.根据权利要求434-474中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟患有3a期CKD的受试者进展至3b期CKD。
479.根据权利要求434-474中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟患有3期CKD的受试者进展至4期CKD。
480.根据权利要求434-474中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟患有3b期CKD的受试者进展至4期CKD。
481.根据权利要求434-474中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟患有4期CKD的受试者进展至5期CKD。
482.根据权利要求434-481中任一项所述的方法，其中所述方法减小受试者的总肾体积。
483.根据权利要求482所述的方法，其中与基线测量相比，使所述总肾体积减小至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。
484.根据权利要求434-483中任一项所述的方法，其中所述方法减少所述受试者的血尿素氮(BUN)。
485.根据权利要求484所述的方法，其中与基线测量相比，使所述BUN减少至少2.5％(例如，5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％)。
486.根据权利要求434-485中任一项所述的方法，其中所述方法预防或延迟肾脏疾病或病症的临床恶化。
487.根据权利要求434-486中任一项所述的方法，其中所述方法降低与肾脏疾病或病症相关的一种或多种并发症的住院风险。
488.根据权利要求434-487中任一项所述的方法，其中所述多肽通过皮下注射来施用。
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