CN116121168A - 一种外泌体的制备方法及其细胞培养箱 - Google Patents

一种外泌体的制备方法及其细胞培养箱 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种外泌体的制备方法，属于外泌体生产领域，该外泌体的制备方法具体步骤为样品取样、细胞培养、分离预处理、超高速分离、外泌体原料处理、原料检测、外泌体提纯和外泌体分装。本发明提供合理的制备工艺，通过对细胞培养后的观察，保证制备样品的质量，配合原料检测步骤可以对外泌体原料进行检测，保证外泌体制取后的质量，再经过多次的提纯、分离和收集后，可以进一步提高外泌体的制取质量，将检测后记录的数据进行上传，配合计算机的追溯系统，便于查询每一批外泌体的制备过程。

Description

一种外泌体的制备方法及其细胞培养箱
技术领域
本发明外泌体生产技术领域，尤其涉及一种外泌体的制备方法。
背景技术
外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡，主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，现有专利申请号为CN202110841864.6的一种用于皮肤修复的细胞外泌体的制备方法，包括以下步骤：S1.制备间充质干细胞外泌体；S2.将十肽-12转导入间充质干细胞外泌体中，得到可修复皮肤的初品干细胞外泌体；S3.制备人脂肪干细胞来源外泌体；S4.制备宫内膜干细胞外泌体；S5.制备用于皮肤修复的成品细胞外泌体；S6.杀菌处理后保存，外泌体制备过程比较繁琐复杂，导致生产后的多外泌体质量参差不齐，并且无法追溯。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种外泌体的制备方法，通过多次对样品进行检测记录，你并且将样品数据录入追溯系统中，提高外泌体的生产质量。
一种可以检测不同地质的矿用锚杆使用方法具体包括以下步骤：
步骤一：样品取样：先对取样工具进行消毒，再利用取样工具对需要培养的细胞样品进行取样，将取样后的细胞放入培养皿中；
步骤二：细胞培养，具体包括以下操作步骤：
第一步：细胞检测：将每一个培养皿分别放置到显微镜下管观察，确认细胞的鲜活状态；
第二步：放入培养箱：将挑选好的细胞样品统一归类放置之后送入细胞培养箱中；
第三步：参数设定：将细胞培养箱的温度参数以及湿度参数按照标准设定好，并且设定和记录好培养时间；
步骤三：分离预处理，具体包括以下操作步骤：
第一步：取出培养皿：工作人员先对全身进行消毒，再将培养好的细胞样品从细胞培养箱中取出，放置到显微镜旁的实验台上；
第二步：样品观察：先将显微镜调节到四十倍放大，管擦混细胞生长情况，再将显微镜调到二百倍放大，再观察细胞状态；
第三步：数值记录：利用计算机对细胞的各项数值进行激励，并且利用照相工具对细胞的放大图片进行拍照记录；
步骤四：超高速分离：等细胞诱导到百分之八十以后将其收集起来放入细心管中，对离心管的开口处进行密封，再将吸力管放入超高速离心机中进行细心分离；
步骤五：外泌体原料处理：将分离出来的外泌体原料收集起来，然后将剩余的杂质送入专门的处理室进行处理；
步骤六：原料检测，具体包括以下操作步骤：
第一步：原料取样：利用消毒后端取样工具对每个培养皿中的外泌体原料进行一一取样，将原料样品放入观察皿中，并且做好标记；
第二步：质量检测：将取样的原料样品送入检测室，工作人员对外泌体原料进行活性因子、因子浓度、外泌体粒径大小、携带蛋白数等项目的检测；
第三步：数据对照：将检测后的外泌体原料做多个对照组，保持数据的可靠性；
步骤七：外泌体提纯：利用专用的提纯设备对外泌体初级原料进行提纯、分离和收集，反复提纯三次至五次；
步骤八：外泌体分装：将合格的外泌体通过注射剂，分别装入专用存储瓶中，并且在晴子外侧粘贴名称标签。
优选地，在步骤三，所述的第三步参数记录中，细胞放大图片需要上传到计算机，与各项数值一同录入到追溯系统中。
优选地，在步骤七，所述的外泌体提纯中，提纯、分离和收集步骤重复次数为四次。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：由于本发明的一种外泌体的制备方法广泛应用于外泌体生产领域。本发明提供合理的制备工艺，通过对细胞培养后的观察，保证制备样品的质量，配合原料检测步骤可以对外泌体原料进行检测，保证外泌体制取后的质量，再经过多次的提纯、分离和收集后，可以进一步提高外泌体的制取质量，将检测后记录的数据进行上传，配合计算机的追溯系统，便于查询每一批外泌体的制备过程。
本发明提供一种外泌体的细胞培养箱，其密封盖上部安装有密封的通道，取样管可以从内侧穿过，保证密封的同时便于随时取样。
其技术方案是这样的：一种外泌体的细胞培养箱，包括培养保温箱1，培养保温箱1的内侧下部镶嵌有电加热管2，其特征在于，所述的培养保温箱1的内侧安装有支撑隔板3，支撑隔板3的内侧插接有培养皿4，支撑隔板3的内侧开设有通气口5，支撑隔板3的上部合页连接有透明密封盖6，透明密封盖6的上部安装有取样密封器组件7。
优选的，所述的取样密封器组件7包括连通管道71，所述的连通管道71的内侧上部胶接有尼龙密封垫72，连通管道71的内侧四角位置分别放置有橡胶转动片73，橡胶转动片73的下部胶接有金属弹片74。
优选的，所述的支撑隔板3位于电加热管2的上部，并且支撑隔板3的内侧盛放有加热水源。
附图说明
图1是外泌体的制备方法流程图。
图2是细胞培养流程图。
图3是分离预处理流程图。
图4是原料检测流程图。
图5是本发明的结构示意图。
图6是本发明的取样密封器组件的结构示意图。
图中：
1、培养保温箱；2、电加热管；3、支撑隔板；4、培养皿；5、通气口；6、透明密封盖；7、取样密封器组件；71、连通管道；72、尼龙密封垫；73、橡胶转动片；74、金属弹片。
具体实施方式
以下结合附图对本发明做进一步描述：
图中：
如附图1至图4所示
一种可以检测不同地质的矿用锚杆使用方法具体包括以下步骤：
S101：样品取样：先对取样工具进行消毒，再利用取样工具对需要培养的细胞样品进行取样，将取样后的细胞放入培养皿中；
S102：细胞培养，具体包括以下操作步骤：
S201：细胞检测：将每一个培养皿分别放置到显微镜下管观察，确认细胞的鲜活状态；
S202：放入培养箱：将挑选好的细胞样品统一归类放置之后送入细胞培养箱中；
S203：参数设定：将细胞培养箱的温度参数以及湿度参数按照标准设定好，并且设定和记录好培养时间；
S103：分离预处理，具体包括以下操作步骤：
S301：取出培养皿：工作人员先对全身进行消毒，再将培养好的细胞样品从细胞培养箱中取出，放置到显微镜旁的实验台上；
S302：样品观察：先将显微镜调节到四十倍放大，管擦混细胞生长情况，再将显微镜调到二百倍放大，再观察细胞状态；
S303：数值记录：利用计算机对细胞的各项数值进行激励，并且利用照相工具对细胞的放大图片进行拍照记录；
S104：超高速分离：等细胞诱导到百分之八十以后将其收集起来放入细心管中，对离心管的开口处进行密封，再将吸力管放入超高速离心机中进行细心分离；
S105：外泌体原料处理：将分离出来的外泌体原料收集起来，然后将剩余的杂质送入专门的处理室进行处理；
S106：原料检测，具体包括以下操作步骤：
S601：原料取样：利用消毒后端取样工具对每个培养皿中的外泌体原料进行一一取样，将原料样品放入观察皿中，并且做好标记；
S602：质量检测：将取样的原料样品送入检测室，工作人员对外泌体原料进行活性因子、因子浓度、外泌体粒径大小、携带蛋白数等项目的检测；
S603：数据对照：将检测后的外泌体原料做多个对照组，保持数据的可靠性；
S107：外泌体提纯：利用专用的提纯设备对外泌体初级原料进行提纯、分离和收集，反复提纯三次至五次；
S108：外泌体分装：将合格的外泌体通过注射剂，分别装入专用存储瓶中，并且在晴子外侧粘贴名称标签。
如附图5和附图6所示，一种外泌体的细胞培养箱，包括培养保温箱1，培养保温箱1的内侧下部镶嵌有电加热管2，其特征在于，所述的培养保温箱1的内侧安装有支撑隔板3，支撑隔板3的内侧插接有培养皿4，支撑隔板3的内侧开设有通气口5，支撑隔板3的上部合页连接有透明密封盖6，透明密封盖6的上部安装有取样密封器组件7；所述的取样密封器组件7包括连通管道71，所述的连通管道71的内侧上部胶接有尼龙密封垫72，连通管道71的内侧四角位置分别放置有橡胶转动片73，橡胶转动片73的下部胶接有金属弹片74。
上述实施例中，具体的，所述的支撑隔板3位于电加热管2的上部，并且支撑隔板3的内侧盛放有加热水源。
上述实施例中，具体的，所述的培养皿4和通气口5相互间隔设置，所述的透明密封盖6前端和培养保温箱1的前端安装有卡扣。
上述实施例中，具体的，所述的橡胶转动片73设置有四个，并且橡胶转动片73的端部与连通管道71的内侧轴接。
上述实施例中，具体的，所述的设置有四个的橡胶转动片73相互靠拢后呈圆形分布，所述的连通管道71的下部镶嵌在透明密封盖6的内侧。
工作原理
本发明的工作原理：将透明密封盖打开后，把需要培养的细胞放置到培养皿4的内侧，然后将培养皿4插入支撑隔板3的内侧，通过透明密封盖6对培养保温箱1进行密封，电加热管2对培养保温箱1内侧底部的水源进行加热，通过外部温控器使其保持在一个温度，在培养过程中，将取样管从尼龙密封垫72的内侧插入，尼龙密封垫72的内侧与取样管外侧紧密贴合，然后取样管继续向下移动，将橡胶转动片73推开，对培养皿4内侧的细胞进行取样，然后取样管拔出后金属弹片74推动橡胶转动片73复位，对连通管道71的内侧进行密封。
具体实施实例
实施例1：
1、样品取样：先对取样工具进行消毒，再利用取样工具对需要培养的细胞样品进行取样，将取样后的细胞放入培养皿中；
2、细胞培养，具体包括以下操作步骤：
第一步：细胞检测：将每一个培养皿分别放置到显微镜下管观察，确认细胞的鲜活状态；
第二步：放入培养箱：将挑选好的细胞样品统一归类放置之后送入细胞培养箱中；
第三步：参数设定：将细胞培养箱的温度参数以及湿度参数按照标准设定好，并且设定和记录好培养时间；
3、分离预处理，具体包括以下操作步骤：
第一步：取出培养皿：工作人员先对全身进行消毒，再将培养好的细胞样品从细胞培养箱中取出，放置到显微镜旁的实验台上；
第二步：样品观察：先将显微镜调节到四十倍放大，管擦混细胞生长情况，再将显微镜调到二百倍放大，再观察细胞状态；
第三步：数值记录：利用计算机对细胞的各项数值进行激励，并且利用照相工具对细胞的放大图片进行拍照记录；
4、超高速分离：等细胞诱导到百分之八十以后将其收集起来放入细心管中，对离心管的开口处进行密封，再将吸力管放入超高速离心机中进行细心分离；
5、外泌体原料处理：将分离出来的外泌体原料收集起来，然后将剩余的杂质送入专门的处理室进行处理；
6、原料检测，具体包括以下操作步骤：
第一步：原料取样：利用消毒后端取样工具对每个培养皿中的外泌体原料进行一一取样，将原料样品放入观察皿中，并且做好标记；
第二步：质量检测：将取样的原料样品送入检测室，工作人员对外泌体原料进行活性因子、因子浓度、外泌体粒径大小、携带蛋白数等项目的检测；
第三步：数据对照：将检测后的外泌体原料做多个对照组，保持数据的可靠性；
7、外泌体提纯：利用专用的提纯设备对外泌体初级原料进行提纯、分离和收集，反复提纯三次至五次；
8、外泌体分装：将合格的外泌体通过注射剂，分别装入专用存储瓶中，并且在晴子外侧粘贴名称标签。
利用本发明所述的技术方案，或本领域的技术人员在本发明技术方案的启发下，设计出类似的技术方案，而达到上述技术效果的，均是落入本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种外泌体的制备方法，其特征在于，该种外泌体的制备方法具体包括以下步骤：
步骤一：样品取样：先对取样工具进行消毒，再利用取样工具对需要培养的细胞样品进行取样，将取样后的细胞放入培养皿中；
步骤二：细胞培养；
步骤三：分离预处理；
步骤四：超高速分离：等细胞诱导到百分之八十以后将其收集起来放入细心管中，对离心管的开口处进行密封，再将吸力管放入超高速离心机中进行细心分离；
步骤五：外泌体原料处理：将分离出来的外泌体原料收集起来，然后将剩余的杂质送入专门的处理室进行处理；
步骤六：原料检测；
步骤七：外泌体提纯：利用专用的提纯设备对外泌体初级原料进行提纯、分离和收集，反复提纯三次至五次；
步骤八：外泌体分装：将合格的外泌体通过注射剂，分别装入专用存储瓶中，并且在晴子外侧粘贴名称标签。
2.如权利要求1所述的一种外泌体的制备方法，其特征在于，在步骤二中，所述的细胞培养，具体包括以下操作步骤：
第一步：细胞检测：将每一个培养皿分别放置到显微镜下管观察，确认细胞的鲜活状态；
第二步：放入培养箱：将挑选好的细胞样品统一归类放置之后送入细胞培养箱中；
第三步：参数设定：将细胞培养箱的温度参数以及湿度参数按照标准设定好，并且设定和记录好培养时间。
3.如权利要求1所述的一种外泌体的制备方法，其特征在于，在步骤三中，所述的分离预处理，具体包括以下操作步骤：
第一步：取出培养皿：工作人员先对全身进行消毒，再将培养好的细胞样品从细胞培养箱中取出，放置到显微镜旁的实验台上；
第二步：样品观察：先将显微镜调节到四十倍放大，管擦混细胞生长情况，再将显微镜调到二百倍放大，再观察细胞状态；
第三步：数值记录：利用计算机对细胞的各项数值进行激励，并且利用照相工具对细胞的放大图片进行拍照记录。
4.如权利要求1所述的一种外泌体的制备方法，其特征在于，在步骤六中，所述的原料检测，具体包括以下操作步骤：
第一步：原料取样：利用消毒后端取样工具对每个培养皿中的外泌体原料进行一一取样，将原料样品放入观察皿中，并且做好标记；
第二步：质量检测：将取样的原料样品送入检测室，工作人员对外泌体原料进行活性因子、因子浓度、外泌体粒径大小、携带蛋白数等项目的检测；
第三步：数据对照：将检测后的外泌体原料做多个对照组，保持数据的可靠性。
5.如权利要求3所述的外泌体的制备方法，其特征在于，在步骤三，所述的第三步参数记录中，细胞放大图片需要上传到计算机，与各项数值一同录入到追溯系统中。
6.如权利要求1所述的外泌体的制备方法，其特征在于，在步骤七，所述的外泌体提纯中，提纯、分离和收集步骤重复次数为四次。
7.一种外泌体的细胞培养箱，该外泌体的细胞培养箱，包括培养保温箱(1)，培养保温箱(1)的内侧下部镶嵌有电加热管(2)，其特征在于，所述的培养保温箱(1)的内侧安装有支撑隔板(3)，支撑隔板(3)的内侧插接有培养皿(4)，支撑隔板(3)的内侧开设有通气口(5)，支撑隔板(3)的上部合页连接有透明密封盖(6)，透明密封盖(6)的上部安装有取样密封器组件(7)。
8.如权利要求7所述的外泌体的细胞培养箱，其特征在于，所述的取样密封器组件(7)包括连通管道(71)，所述的连通管道(71)的内侧上部胶接有尼龙密封垫(72)，连通管道(71)的内侧四角位置分别放置有橡胶转动片(73)，橡胶转动片(73)的下部胶接有金属弹片(74)。
9.如权利要求7所述的外泌体的细胞培养箱，其特征在于，所述的支撑隔板(3)位于电加热管(2)的上部，并且支撑隔板(3)的内侧盛放有加热水源。
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