CN116082513A

CN116082513A - 分离的抗原结合蛋白及其用途

Info

Publication number: CN116082513A
Application number: CN202111290274.5A
Authority: CN
Inventors: 孙乃超; 周若芸; 马海立; 刘运华; 杨红舟; 郭若闻; 高琪; 刘恒
Original assignee: Tianchen Biomedical Suzhou Co ltd
Current assignee: Tianchen Biomedical Suzhou Co ltd
Priority date: 2021-10-29
Filing date: 2021-11-02
Publication date: 2023-05-09

Abstract

本申请涉及一种抗原结合蛋白，其包含重链可变区的至少一个CDR，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；且其包含轻链可变区的至少一个CDR，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。

Description

分离的抗原结合蛋白及其用途

技术领域

本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种抗原结合蛋白及其用途。

背景技术

过敏(包括特应性)和其他过敏反应性疾病是对外来抗原不适当的或过度的免疫反应。不适当的免疫反应包括那些被误导的针对人体自身成分的免疫反应，导致自身免疫性疾病。过敏性疾病(也称作变应性疾病)是全球第六大慢性疾病，影响机体多种组织器官，一旦发作会引起各种不适症状，严重降低生活质量甚至危及生命。例如过敏性反应、过敏性鼻炎、哮喘、遗传性过敏皮炎、食物过敏和风疹，在许多国家中给占人口总数20％的人群带来痛苦，并且疾病流行的程度在逐渐增加(Wuthrich B.，Int.Arch.AllergyAppI.Tmmunol.,90,pp3_10,1989)。过敏性疾病大体上分为IgE-介导的(immunoglobulin-mediated)与IgE-非介导的(immunoglobulin-nonmediated)，由免疫球蛋白E(IgE)介导的超敏反应占多数。IgE的高亲和力受体(FcεRI)是介导变应性表现的关键。除了肥大细胞和嗜碱性粒细胞以外，FcεRI还见于许多其他细胞类型(包括嗜酸性粒细胞、血小板)和抗原呈递细胞(例如单核细胞和树突细胞)。由于IgE在介导大部分变应性反应中起重要作用，开发针对控制IgE水平的过敏性疾病的治疗策略是十分必要的。

发明内容

本申请提供了一种抗原结合蛋白，其具备以下的一种或多种优势：1)稳定性好，本申请的抗原结合蛋白成药性高，更有利于工业化生产；2)本申请的抗原结合蛋白对新生儿受体FcRn的亲和力增强，半衰期更长，可以达到延长给药周期的目的。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包含重链可变区的至少一个互补决定区(CDR)，所述重链可变区(VH)包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；且其包含轻链可变区(VL)的至少一个互补决定区(CDR)，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白具有下述性质中的一种或多种：

1)能够以约3pM或更小的KD值与IgE相结合；

2)能够抑制IgE与其受体FcεRIa和/或FcεRII的结合。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白与人IgE结合。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包含重链HCDR3和HCDR2，所述HCDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，且所述HCDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白还包含重链HCDR1，所述HCDR1包含SEQID NO:1所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3；其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包含重链框架区1(H-FR1)，所述H-FR1的C末端与本申请的HCDR1的N末端直接或间接相连，且本申请的H-FR1包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白还包含重链框架区2(H-FR2)，所述H-FR2位于本申请的HCDR1与本申请的HCDR2之间，且本申请的H-FR2包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白还包含重链框架区3(H-FR3)，所述H-FR3位于本申请的HCDR2与本申请的HCDR3之间，且本申请的H-FR3还包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包含重链框架区4(H-FR4)，所述H-FR4的N末端与本申请的HCDR3的C末端相连，且本申请的H-FR4包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包含重链可变区VH，所述VH包含SEQID NO:8所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包含轻链LCDR3，所述LCDR3包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白还包含轻链LCDR2，所述LCDR2包含SEQID NO:10所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白还包含轻链LCDR1，所述LCDR1包含SEQID NO:9所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包含轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3；其中所述LCDR1包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述LCDR3包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包含轻链框架区1(L-FR1)，所述L-FR1的C末端与本申请的LCDR1的N末端直接或间接相连，且本申请的L-FR1包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白还包含轻链框架区2(L-FR2)，所述L-FR2位于本申请的LCDR1与本申请的LCDR2之间，且本申请的L-FR2包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白还包含轻链框架区3(L-FR3)，所述L-FR3位于本申请的LCDR2与本申请的LCDR3之间，且本申请的L-FR3包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白还包含轻链框架区4(L-FR4)，所述L-FR4的N末端与本申请的LCDR3的C末端相连，且本申请的L-FR4包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包含轻链可变区VL，所述VL包含SEQID NO:16所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包含本申请的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列和所述LCDR3包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包含重链可变区VH和轻链可变区VL，所述VH包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，且所述VL包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包括抗体或其抗原结合片段。

在某些实施方式中，本申请抗原结合蛋白中的抗原结合片段包括Fab，Fab’，F(ab)2、Fv片段、F(ab’)2，scFv，di-scFv和/或dAb。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包括重链恒定区，且本申请的重链恒定区源自人IgG。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包括重链恒定区，且本申请的重链恒定区源自人IgG1。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包括重链恒定区，其中与SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列相比，所述重链恒定区包含下述氨基酸突变：M135Y、S137T和/或T139E。

在某些实施方式中，本申请的重链恒定区包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包含重链，且所述重链包含SEQ IDNO:20所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包括轻链恒定区，且所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包含轻链，且所述轻链包含SEQ IDNO:21所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请的抗原结合蛋白包含重链和轻链，其中所述重链包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列，且所述轻链包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。

另一方面，本申请还提供了多肽，其包含本申请的抗原结合蛋白。

另一方面，本申请还提供了免疫缀合物，其包含本申请的抗原结合蛋白。

另一方面，本申请还提供了分离的核酸分子，其编码本申请的抗原结合蛋白。

另一方面，本申请还提供了载体，其包含本申请的分离的核酸分子。

另一方面，本申请还提供了细胞，其包含和/或表达本申请的抗原结合蛋白、本申请的多肽、本申请的免疫缀合物、本申请的核酸分子或本申请的载体。

另一方面，本申请还提供了制备本申请的抗原结合蛋白的方法，本申请方法包括在使得本申请的抗原结合蛋白表达的条件下，培养本申请的细胞。

另一方面，本申请还提供了药物组合物，其包含本申请的抗原结合蛋白、本申请的多肽、本申请的免疫缀合物、本申请的核酸分子、本申请的载体、本申请的细胞和/或任选地药学上可接受的载剂。

另一方面，本申请还提供了本申请的抗原结合蛋白、本申请的多肽、本申请的免疫缀合物、本申请的核酸分子、本申请的载体、本申请的细胞和/或本申请的药物组合物在制备药物中的用途，本申请药物用于预防、缓解和/或治疗IgE相关的疾病或病症。

另一方面，本申请还提供了预防、缓解或治疗IgE相关的疾病或病症的方法，本申请方法包括向有需要的受试者施用本申请的抗原结合蛋白、本申请的多肽、本申请的免疫缀合物和/或本申请的药物组合物。

另一方面，本申请还提供了本申请的抗原结合蛋白、本申请的多肽、本申请的核酸分子、本申请的载体、本申请的细胞、本申请的免疫缀合物和/或本申请的药物组合物，其用于预防、缓解或治疗IgE相关的疾病或病症。

另一方面，本申请还提供了一种用于检测或测定IgE的方法，本申请方法包括使用本申请的抗原结合蛋白或本申请的多肽。

另一方面，本申请还提供了一种用于检测或测定IgE的试剂盒，本申请试剂盒包括本申请的抗原结合蛋白或本申请的多肽。

本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。

附图说明

本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明如下：

图1A-1B显示的是本申请的抗原结合蛋白与人IgE结合的亲和力。

图2A-2B显示的是本申请的抗原结合蛋白阻断IgE与其受体(FcεRIa和FcεRII)结合的阻断活性结果。

图3显示的是本申请的抗原结合蛋白阻断IgE介导的细胞激活的抑制活性检测结果。

图4A-4C显示的是本申请的抗原结合蛋白断不同过敏原IgE介导的细胞激活的抑制活性检测结果。

图5显示的是本申请的抗原结合蛋白在小鼠体内对游离人IgE的抑制能力。

图6显示的是本申请的抗原结合蛋白在小鼠速发过敏模型中缓解体温变化的结果。

图7显示的是本申请的抗原结合蛋白在食蟹猴IgE抑制模型中对游离IgE的抑制能力。

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。

术语定义

在本申请中，术语“抗原结合蛋白”通常指包含结合抗原部分的蛋白质，以及任选地允许结合抗原的部分采用促进抗原结合蛋白与抗原结合的构象的支架或骨架部分。抗原结合蛋白可包括但不限于抗体、抗原结合片段(Fab、Fab’、F(ab)2、Fv片段、F(ab’)2、scFv、di-scFv和/或dAb)、免疫缀合物、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、抗体片段、抗体衍生物、抗体类似物或融合蛋白等，只要它们显示出所需的抗原结合活性即可。本申请的“抗原结合蛋白”可以包含结合抗原的部分和任选地，允许抗原结合部分采用促进所述抗原结合部分结合抗原的构象的支架或构架部分。

在本申请中，术语“IgE”或“IgE免疫球蛋白”或“免疫球蛋白E”通常是指一类由浆细胞产生的抗体(或免疫球蛋白(Ig))。IgE的单体通常由两条重链(ε链)和两条轻链组成，其中ε链可包含4个Ig样恒定区(Cε1-Cε4)。在本申请中，“IgE”可以是完整的IgE或其片段，可以是IgE的功能性变体、同工型、物种同源物、衍生物、类似物，以及具有至少一个与IgE共同表位的类似物。在人类中，IgE属于基本上由公知免疫球蛋白epsilon基因编码的抗体类别的多肽。IgE可以包括膜锚定的(mIgE)，或非膜锚定的，也称为循环IgE。在本申请中，术语“IgE”可以来源于哺乳动物，IgE可以包括人IgE。在本申请中，所述人IgE在GenBank数据库中的序列号为Gene ID:3497。

在本申请中，术语“FcεRIα”通常是指是免疫球蛋白E(IgE)的Fc区的高亲和受体(FcεRI，也称作Fc epsilon RI，)的α链。FcεRI是能够结合IgE的ε重链的Fc区的四聚体受体复合物，其通常由一个α链(即FcεRIα)，一个β链(FcεRIβ)和两个γ链(FcεRIγ)组成。通常情况下，α链可以作为抗体(例如，IgE)的结合位点，γ链可以作为下游信号起始的位点，β链可以起到放大下游信号的作用。在本申请中，“FcεRIα”可以是完整的FcεRIα或其片段，可以是FcεRIα的功能性变体、同工型、物种同源物、衍生物、类似物，以及具有至少一个与FcεRIα共同表位的类似物。

在本申请中，术语“KD”，也称作“K_D”、“K_D”、“亲和常数”或“平衡解离常数”，通常是指在滴定测量中在平衡时、或者通过将解离速率常数(k_d)除以结合速率常数(k_a)所获得的值。通常，可使用结合速率常数(k_a)、解离速率常数(k_d)和平衡解离常数(K_D)表示结合蛋白(例如本申请所述的抗原结合蛋白)对抗原(例如人IgE)的结合亲和力。确定结合和解离速率常数的方法为本领域熟知。例如，可以通过Octet测定所述KD值，也可以使用其他实验途径和仪器例如BIAcore(生物分子相互作用分析)测定。另外，电化学发光分析-溶液平衡滴定法(MSD-SET)可以测定所述KD值。测量方法如Estep P.等人,MAbs,2013.5(2):p.270-8所述。在本申请中，可以采用KinExA方法和软件检测KD值，测量方法如Jonathan K.Fleming等人，Methods Mol Biol.2018；1697:1-8所述。

在本申请中，术语“互补决定区”或术语“CDR”通常是指在抗体可变序列内的互补性决定区。在重链和轻链的每个可变区中存在3个CDR，所述CDR对于每个可变区命名为CDR1、CDR2和CDR3。如本文使用的，CDR组合可指在能够结合抗原的单个可变区中出现的3个CDR的组。这些CDR的确切边界已根据不同系统不同地限定。由Kabat(Kabat等人，Sequencesof Proteins of Immunological Interest National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1987)和(1991))描述的系统，不仅提供了可应用于抗体的任何可变区的明确残基编号系统，还提供了限定3个CDR的精确残基边界。这些CDR可以被称为Kabat CDR。Chothia和同事(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987)以及Chothia等人，Nature 342：877-883(1989))发现Kabat CDR内的某些亚部分采取几乎相同的肽主链构象，尽管在氨基酸序列水平上具有大的多样性。这些亚部分命名为L1、L2和L3或H1、H2和H3，其中“L”和“H”分别指轻链和重链区域。这些区域可以被称为Chothia CDR，所述Chothia CDR具有与Kabat CDR重叠的边界。与Kabat CDR重叠的限定CDR的其他边界已由Padlan(FASEB J.9：133-139(1995))和MacCallum(J Mol Biol 262(5)：732-45(1996))描述。在其他的CDR边界定义可能不严格地遵循上述系统之一，但仍将与Kabat CDR重叠，尽管按照特定残基或残基组或甚至整个CDR并不显著影响抗原结合的预测或实验发现，它们可以缩短或加长。本文所述CDR，可使用KABAT进行定义，但不排除采用其他方法进行CDR区域的划分。

在本申请中，术语“抗体”通常指免疫球蛋白或其片段或其衍生物或其变体，涵盖包括抗原结合位点的任何多肽，无论其是在体外还是体内产生的。该术语包括但不限于多克隆的、单克隆的、单特异性的、多特异性的、非特异性的、人源化的、单链的、嵌合的、合成的、重组的、杂化的、突变的和移植的抗体。在本申请中，术语“抗体”也可以包括抗体片段，比如Fab、F(ab')2、Fv、scFv、Fd、dAb和保持抗原结合功能(例如，特异性结合人IgE)的其它抗体片段。本申请所述抗体可以包括来源于人、来源于鼠、来源于猴和/或来源于羊驼的抗体。在本申请中，所述抗体可以包括其功能性变体、同工型、物种同源物、衍生物或类似物。例如，本申请的中的变体可以包括与抗体具有至少80％、至少85％、至少至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％或至少99.9％同一性的氨基酸序列。

在本申请中，术语“抗原结合片段”通常是指与抗原结合(即特异性结合)的完整抗体(即与它们所衍生的完整抗体)竞争的免疫球蛋白或抗体的多肽片段。所述抗原结合片段可以包括但不限于：Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2和Fv片段，线性抗体，单链抗体，双体抗体，以及由抗体片段形成的多特异性抗体。

在本申请中，术语“可变区”或“可变结构域”通常是指抗体轻链和/或重链的一部分，其通常在不同的抗体中有较大差异，且可能影响抗体与特定抗原的结合特异性。可变区可以包含序列变化较大的区域称作互补决定区(CDR)，可变区也可以包含比较保守的区域通常称作框架区(FR)。

在本申请中，术语“直接或间接相连”通常是指相对的“直接相连”或“间接相连”。“直接相连”通常是指直接连接。例如，所述直接相连可以为相连的物质(例如氨基酸序列区段)之间没有间隔成分(例如氨基酸残基或其衍生物)而直接相连接的情况；例如氨基酸序列区段X与另一氨基酸序列区段Y通过氨基酸序列区段X的C端氨基酸与氨基酸序列区段Y的N端氨基酸形成的酰胺键直接连接。“间接相连”通常是指相连的物质(例如氨基酸序列区段)之间有间隔成分(例如氨基酸残基或其衍生物)而间接相连接的情况例如，在本申请所述的抗原结合蛋白中，所述L-FR1的C末端与所述LCDR1的N末端可以直接或间接相连。

在本申请中，术语“免疫缀合物”通常指与抗原结合蛋白或其片段相连接的其他组分。所述免疫缀合物可以包括与抗原结合蛋白融合或偶联的其他的多肽、治疗剂、探针和/或其他抗体。

在本申请中，术语“分离的核酸分子”通常是指任何长度的分离形式的核苷酸，脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或从其天然环境分离的或人工合成的类似物。

在本申请中，术语“细胞”通常是指可以或已经含有包括本申请所述的核酸分子的质粒或载体，或者能够表达本申请所述的抗原结合蛋白的个体细胞，细胞系或细胞培养物。所述细胞可以包括单个细胞的子代。由于天然的，意外的或故意的突变，子代细胞与原始亲本细胞在形态上或在基因组上可能不一定完全相同，但能够表达本申请所述的抗原结合蛋白即可。所述细胞可以通过使用本申请所述的载体体外转染细胞而得到。所述细胞可以是原核细胞(例如大肠杆菌)，也可以是真核细胞(例如酵母细胞，例如COS细胞，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，HeLa细胞，HEK293细胞，COS-1细胞，NS0细胞或骨髓瘤细胞)。

在本申请中，术语“药物组合物”通常是指涉及适合施用于患者、例如人患者的组合物。例如，本申请所述的药物组合物，其可以包含本申请所述的抗原结合蛋白、本申请所述的免疫缀合物、本申请所述的核酸分子、本申请所述的载体和/或本申请所述的细胞，以及任选地药学上可接受的载剂。此外，所述药物组合物还可以包含一种或多种(药学上有效的)载剂、稳定剂、赋形剂、稀释剂、增溶剂、表面活性剂、乳化剂和/或防腐剂的合适的制剂。组合物的可接受成分在所用剂量和浓度下对接受者无毒。本发明的药物组合物可以包括但不限于液体、冷冻和冻干组合物。

在本申请中，术语“载体”通常指将编码某蛋白的多聚核苷酸插入其中并使蛋白获得表达的一种核酸运载工具。载体可通过转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内表达得以表达。例如，载体可包括：质粒、噬菌粒、柯斯质粒、人工染色体如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。用作载体的动物病毒种类有逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。一种载体可能含有多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。载体还有可能包括有协助其进入细胞的成分，如病毒颗粒、脂质体或蛋白外壳，但不仅仅只有这些物质。

在本申请中，术语“药学上可接受的载剂”通常包括药剂学可接受的载体、赋形剂或稳定剂，它们在所采用的剂量和浓度对暴露于其的细胞或哺乳动物是无毒的。生理学可接受的载体可包括合适的物质。

发明详述

抗原结合蛋白

一方面，本申请提供了一种抗原结合蛋白，其可包含重链可变区的至少一个CDR，所述重链可变区可包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；且其可包含轻链可变区的至少一个CDR，所述轻链可变区可包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以包含重链可变区的一个CDR，所述重链可变区可以包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以包含重链可变区中的两个CDR，所述重链可变区可以包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以包含重链可变区中的三个CDR，所述重链可变区可以包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的重链可变区中的CDR可以称为HCDRn，n表示CDR的编号，通常可以为1，2或3。

例如，本申请的重链可变区中的CDR可以包括本申请所述的HCDR1、HCDR2和HCDR3。

例如，本申请的抗原结合蛋白可包含重链HCDR3，所述HCDR3可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或者其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可包含重链HCDR2，所述HCDR2可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或者其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可包含重链HCDR1，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或者其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可包含重链HCDR3和HCDR2，所述HCDR3可包含SEQ IDNO:3所示的氨基酸序列或者其变体，且所述HCDR2可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或者其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可包含重链HCDR2和HCDR1，所述HCDR2可包含SEQ IDNO:2所示的氨基酸序列或者其变体，且所述HCDR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或者其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3；其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或者其变体，所述HCDR2可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或者其变体，所述HCDR3可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或者其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以包含轻链可变区的一个CDR，所述轻链可变区可以包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以包含轻链可变区中的两个CDR，所述轻链可变区可以包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以包含轻链可变区中的三个CDR，所述轻链可变区可以包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的轻链可变区中的CDR可以称为LCDRn，n表示CDR的编号，通常可以为1，2或3等。

例如，本申请的轻链可变区中的CDR可以包括本申请所述的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

例如，本申请的抗原结合蛋白可包含轻链LCDR3，所述LCDR3可包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或者其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可包含轻链LCDR2，所述LCDR2可包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或者其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可包含轻链LCDR1，所述LCDR1可包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或者其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白包含轻链LCDR3和LCDR2，所述LCDR3可包含SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列或者其变体，且所述LCDR2可包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或者其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可包含轻链LCDR2和LCDR1，所述LCDR2可包含SEQ IDNO:10所示的氨基酸序列或者其变体，且所述LCDR1可包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或者其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可包含轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述LCDR1可包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或者其变体，所述LCDR2可包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或者其变体，所述LCDR3可包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或者其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以包含HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或者其变体，所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或者其变体，所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或者其变体，所述LCDR1可以包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或者其变体，所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或者其变体，和所述LCDR3可以包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列或者其变体。

框架区(FR)

例如，本申请的轻链可变区可以包括框架区L-FR1，L-FR2，L-FR3，和/或L-FR4。

例如，本申请的轻链可变区可以包括框架区L-FR1，L-FR2和L-FR3。

例如，本申请的轻链可变区可以包括框架区L-FR1，L-FR2和L-FR4。

例如，本申请的轻链可变区可以包括框架区L-FR2，L-FR3和L-FR4。

例如，本申请的轻链可变区可以包括框架区L-FR1，L-FR3和L-FR4。

例如，本申请的轻链可变区可以包括框架区L-FR1，L-FR2，L-FR3和L-FR4。

例如，本申请的L-FR1的C末端可以与本申请的LCDR1的N末端直接或间接相连，例如，本申请的L-FR1的C末端可以与本申请的LCDR1的N末端直接相连，例如，本申请的L-FR1的C末端可以与本申请的LCDR1的N末端间接相连，例如，本申请的间接相连可以包括本申请的L-FR1的C末端氨基酸残基与本申请的LCDR1的N末端氨基酸残基之间相隔1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。

例如，本申请的L-FR1可以包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的L-FR2可以位于本申请的LCDR1与本申请的LCDR2之间。

例如，本申请的L-FR2的N末端可以与本申请的LCDR1的C末端直接或间接相连，并且本申请的L-FR2的C末端可以与本申请的LCDR2的N末端直接或间接相连。

例如，间接相连可以包括相连的两个部分(例如，本申请的L-FR2与本申请的LCDR1，或者本申请的L-FR2与本申请的LCDR2)之间相隔1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。

例如，本申请的L-FR2可以包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的-FR3可以位于本申请的LCDR2与本申请的LCDR3之间。

例如，本申请的L-FR3的N末端可以与本申请的LCDR2的C末端直接或间接相连，并且本申请的L-FR3的C末端可以与本申请的LCDR3的N末端直接或间接相连。

例如，间接相连可以包括相连的两个部分(例如，本申请的L-FR3与本申请的LCDR2，或者本申请的L-FR3与本申请的LCDR3)之间相隔1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。

例如，本申请的L-FR3可以包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的L-FR4的N末端与本申请的LCDR3的C末端直接或间接相连。

例如，间接相连可以包括本申请的L-FR4的N末端氨基酸残基与本申请的LCDR3的C末端氨基酸残基之间相隔1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。

例如，本申请的L-FR4可以包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的重链可变区可以包括框架区H-FR1，H-FR2，H-FR3，和/或H-FR4。

例如，本申请的轻链可变区可以包括框架区H-FR1，H-FR2和H-FR3。

例如，本申请的轻链可变区可以包括框架区H-FR1，H-FR2和H-FR4。

例如，本申请的轻链可变区可以包括框架区H-FR2，H-FR3和H-FR4。

例如，本申请的轻链可变区可以包括框架区H-FR1，H-FR3和H-FR4。

例如，本申请的链可变区可以包括框架区H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4。

例如，本申请的H-FR1的C末端可以与本申请的HCDR1的N末端直接或间接相连。例如，本申请的H-FR1的C末端可以与本申请的HCDR1的N末端直接相连，例如，本申请的H-FR1的C末端可以与本申请的HCDR1的N末端间接相连，例如，本申请的间接相连可以包括本申请的H-FR1的C末端氨基酸残基与本申请的HCDR1的N末端氨基酸残基之间相隔1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。

例如，本申请的H-FR1可以包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的H-FR2可以位于本申请的HCDR1与本申请的HCDR2之间。

例如，本申请的H-FR2的N末端可以与本申请的HCDR1的C末端直接或间接相连，并且本申请的H-FR2的C末端可以与本申请的HCDR2的N末端直接或间接相连。

例如，本申请的间接相连可以包括相连的两个部分(例如，本申请的H-FR2与本申请的HCDR1，或者本申请的H-FR2与本申请的HCDR2)之间相隔1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。

例如，本申请的H-FR2可以包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的H-FR3可以位于本申请的HCDR2与本申请的HCDR3之间。

例如，本申请的H-FR3的N末端可以与本申请的HCDR2的C末端直接或间接相连，并且本申请的H-FR3的C末端可以与本申请的HCDR3的N末端直接或间接相连。

例如，间接相连可以包括相连的两个部分(例如，本申请的H-FR3与本申请的HCDR2，或者本申请的H-FR3与本申请的HCDR3)之间相隔1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。

例如，本申请的H-FR3可以包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的H-FR4的N末端可以与本申请的HCDR3的C末端直接或间接相连。

例如，本申请的H-FR4可以包含SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列或其变体。

例如，在提及具体的氨基酸序列时(例如特定的序列)，所指代的序列还可以涵盖其变体。例如，本申请的变体可以包含与SEQ ID NO:xx所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％或至少99.9％同一性的氨基酸序列。

可变区，恒定区，重链和轻链

在本申请中，本申请的抗原结合蛋白可包含重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)。例如，本申请的重链可变区可包含SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列或其变体。例如，本申请的轻链可变区可包含SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列或其变体。

例如，在提及具体的氨基酸序列时(例如特定的序列)，所指代的序列还可以涵盖其变体。例如，本申请的变体可以包含与含SEQ ID NO:8、16中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％或至少99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，本申请的重链可变区包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或其变体。例如，本申请的轻链可变区包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的重链可变区包含SEQ ID NO:23所示的核苷酸序列或其变体。例如，本申请的轻链可变区包含SEQ ID NO:25所示的核苷酸序列或其变体。

例如，在提及具体的氨基酸和/或核苷酸序列时(例如特定的序列)，所指代的序列还可以涵盖其变体。例如，本申请的变体可以包含与SEQ ID NO:8、16、23或25中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％或至少99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以包括抗体重链恒定区，且本申请的抗体重链恒定区可以源自人IgG重链恒定区。例如，本申请的抗原结合蛋白可以包括抗体重链恒定区，且本申请的抗体重链恒定区可以源自人IgG1重链恒定区。例如，本申请的抗体重链恒定区可以包含SEQ ID NO:17、18中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，在提及具体的氨基酸序列时(例如特定的序列)，所指代的序列还可以涵盖其变体。例如，本申请的变体可以包含与SEQ ID NO:17、18中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％或至少99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，本申请的重链恒定区变体可以包括在人IgG1重链恒定区(氨基酸序列如SEQID NO:17所示)基础上，包含下述氨基酸突变：M135Y、S137T和/或T139E(氨基酸序列编号以序列SEQ ID NO:17为基础)。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以包括抗体轻链恒定区，且本申请的抗体轻链恒定区可以包括人Igκ(Kappa)恒定区。例如，本申请的抗体轻链恒定区可以包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或其变体。

例如，在提及具体的氨基酸序列时(例如特定的序列)，所指代的序列还可以涵盖其变体。例如，本申请的变体可以包含与SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％或至少99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以包含抗体重链，且本申请的抗体重链可以包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以包含抗体重链，且本申请的抗体重链可以包含SEQ ID NO:24所示的核苷酸序列或其变体。

例如，在提及具体的氨基酸和/或核苷酸序列时(例如特定的序列)，所指代的序列还可以涵盖其变体。例如，本申请的变体可以包含与SEQ ID NO:20、24中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％或至少99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以包含抗体轻链，且本申请的抗体轻链可以包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列或其变体。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以包含抗体轻链，且本申请的抗体轻链可以包含SEQ ID NO:26所示的核苷酸序列或其变体。

例如，在提及具体的氨基酸和/或核苷酸序列时(例如特定的序列)，所指代的序列还可以涵盖其变体。例如，本申请的变体可以包含与SEQ ID NO:21、26中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％或至少99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以包含本申请的抗体重链和本申请的抗体轻链。

例如，本申请的抗体重链可包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列，抗体轻链可包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。本申请的重链可包含重链可变区和重链恒定区。本申请的重链可变区可包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。本申请的重链恒定区可包含如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列。本申请的重链可变区可包含重链互补决定区(HCDR)和重链框架区(H-FR)。本申请的重链互补决定区(HCDR)可包含HCDR1，HCDR2和HCDR3。本申请的HCDR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，本申请的HCDR2可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，本申请的HCDR3可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。本申请的重链框架区(H-FR)可包含H-FR1，H-FR2，H-FR3，H-FR4。本申请的H-FR1可包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，H-FR4可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。

例如，本申请的轻链可包含轻链可变区和轻链恒定区。本申请的轻链可变区可包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。本申请的轻链恒定区可包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。本申请的轻链可变区可包含轻链互补决定区(LCDR)和轻链框架区(L-FR)。本申请的轻链互补决定区(LCDR)可包含LCDR1，LCDR2和LCDR3。本申请的LCDR1可包含SEQ IDNO:9所示的氨基酸序列，本申请的LCDR2可包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，本申请的LCDR3可包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。本申请的轻链框架区(L-FR)可包含L-FR1，L-FR2，L-FR3，L-FR4。本申请的L-FR1可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列，L-FR4可包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以是本申请实施例中的人源化SE5ss抗体。

抗原结合蛋白的性质

本申请的抗原结合蛋白能够以约3pM或更小的KD值与IgE(例如人IgE)相结合。可以通过本领域常用的Octet方法、MSD-SET法和/或KinExA方法对所述结合进行测定。例如，所述KD值可以通过KinExA方法测定，测量方法如Jonathan K.Fleming等人，Methods MolBiol.2018；1697:1-8所述所述。

例如，通过KinExA法进行测定时，本申请的抗原结合蛋白结合所述IgE的KD值可以为例如，≤3.5×10^-12M、≤3.4×10^-12M、≤3.3×10^-12M、≤3.2×10^-12M、≤3.1×10^-12M、≤3×10^-12M、≤2.9×10^-12M、≤2.8×10^-12M、≤2.7×10^-12M、≤2.6×10^-12M、≤2.5×10^-12M、≤2.4×10^-12M、≤2.3×10^-12M、≤2.2×10^-12M、≤2.1×10^-12M、≤2.0×10^-12M、≤1.9×10^-12M、≤1.8×10^-12M、≤1.7×10^-12M、≤1.6×10^-12M、≤1.5×10^-12M、≤1.4×10^-12M、≤1.3×10^-12M、≤1.2×10^-12M、≤1.1×10^-12M。

本申请的抗原结合蛋白能够抑制IgE与其受体FcεRIa和/或FcεRII的结合。

例如，通过ELISA方法检测时，本申请的抗原结合蛋白抑制IgE与其受体FcεRIa的结合的IC50值可以为例如，≤35ng/mL、≤34ng/mL、≤33ng/mL、≤32.5ng/mL、≤32.5ng/mL、≤32.4ng/mL、≤32.3ng/mL、≤32.2ng/mL、≤32.1ng/mL、≤32.0ng/mL、≤31ng/mL、≤30ng/mL、≤29ng/mL、≤28ng/mL、≤27ng/mL、≤26ng/mL、≤25ng/mL、≤24ng/mL、≤23ng/mL、≤22ng/mL、≤21ng/mL、≤20ng/mL、≤19ng/mL、≤18ng/mL、≤17ng/mL、≤16ng/mL、≤15ng/mL、≤14ng/mL、≤13ng/mL、≤12ng/mL、≤11ng/mL或≤10ng/mL。

例如，通过ELISA方法检测时，本申请的抗原结合蛋白抑制IgE与其受体FcεRII的结合的IC50值可以为例如，≤4.0μg/mL、≤3.9μg/mL、≤3.8μg/mL、≤3.7μg/mL、≤3.6μg/mL、≤3.5μg/mL、≤3.4μg/mL、≤3.3μg/mL、≤3.2μg/mL、≤3.1μg/mL或≤3.0μg/mL。

例如，本申请的抗原结合蛋白可以包括抗体或其抗原结合片段。例如，本申请的抗体可以包括但不限于重组抗体、单克隆抗体、人抗体、鼠源抗体、人源化抗体、嵌合抗体、骆驼化单结构域抗体、双特异性抗体、单链抗体、双抗体、三抗体或四抗体。

例如，本申请的抗体可以为人源化抗体。例如，本申请的抗原结合蛋白可以为免疫特异性结合至相关抗原(例如人IgE抗原且包含基本上具有人类抗体的氨基酸序列的框架区(FR)及基本上具有非人类抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变异体、衍生物、类似物或片段)。此处的“基本上”在CDR的情况下可以是指CDR的氨基酸序列与非人类抗体CDR的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少98.5％或至少99％同一。本申请的人源化抗体基本上可以包含所有至少一个且通常两个可变域(Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv)，其中所有或基本上所有CDR区对应于非人类免疫球蛋白(即抗体)的CDR区且所有或基本上所有框架区为具有人类免疫球蛋白共有序列的框架区。例如，人源化抗体还可包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(例如，Fc)，通常为人类免疫球蛋白的恒定区。在一些实施例中，人源化抗体至少含有轻链或及重链的可变域。抗体还可包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3及CH4区。例如，人源化抗体可以仅含人源化轻链。例如，人源化抗体可以仅含人源化重链。例如，人源化抗体可以仅含轻链和/或人源化重链的人源化可变域。

例如，本申请的抗原结合片段可以包括Fab，Fab’，F(ab)2、Fv片段、F(ab’)2，scFv，di-scFv和/或dAb。

多肽和免疫缀合物

另一方面，本申请提供了一种多肽，其可以包含本申请的抗原结合蛋白。本申请的多肽还可以包括其他肽段或蛋白片段，例如，其还可以包含促进抗原结合蛋白与抗原结合的构象的其他架或骨架部分。在某些情况下，本申请的多肽还可以包含与其他抗原结合的部分，和/或具有其他功能的蛋白片段。例如，本申请的多肽可以是融合蛋白，多特异性抗体，和/或其他重组蛋白。

另一方面，本申请提供了一种免疫缀合物，其可以包含本申请的抗原结合蛋白或本申请的多肽。例如，本申请的免疫缀合物可以包括与所述抗原结合蛋白融合或偶联的其他的多肽、治疗剂(例如，细胞毒性分子)、探针和/或其他抗体。例如，本申请所述免疫缀合物可以包括药学上可接受的标记物、检测剂和/或治疗物。

核酸、载体、宿主细胞和制备方法

另一方面，本申请提供了分离的一种或多种核酸分子，所述一种或多种核酸分子可编码本申请的抗原结合蛋白或多肽。例如，所述一种或多种核酸分子中的每一个核酸分子可以编码完整的所述分离的抗原结合蛋白或所述的多肽，也可以编码其中的一部分。本申请所述的核酸分子可以为分离的。在本申请中，可以通过本领域已知的多种方法来制备编码所述的抗原结合蛋白或所述的多肽的核酸。

另一方面，本申请提供了一种或多种载体，其包含本申请所述的一种或多种核酸分子。每种载体中可包含一种或多种所述核酸分子。此外，所述载体中还可包含其他基因，例如允许在适当的宿主细胞中和在适当的条件下选择该载体的标记基因。此外，所述载体可以含有多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，所述载体还可以含有复制起始位点。此外，所述载体可以包括，例如质粒、粘粒、病毒、噬菌体或者在例如遗传工程中通常使用的其他载体。

另一方面，本申请提供了一种细胞，所述细胞可包含本申请所述的一种或多种核酸分子和/或本申请所述的一种或多种载体。例如，每种或每个细胞可包含一个或一种本申请所述的核酸分子或载体。例如，每种或每个细胞可包含多个(例如，2个或以上)或多种(例如，2种或以上)本申请所述的核酸分子或载体。例如，可将本申请所述的载体引入所述细胞中，例如原核细胞(例如，细菌细胞)、CHO细胞、NS/0细胞、HEK293细胞，或者其他真核细胞，如来自植物的细胞、真菌或酵母细胞等。可通过本领域已知的方法将本申请所述的载体引入所述细胞中，例如电穿孔、lipofectine转染、lipofectamin转染等。

例如，载体可以包括：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。用作载体的动物病毒种类有逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。又例如，所述载体可以含有多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，所述载体还可以含有复制起始位点。此外，所述载体还可以包括有协助其进入细胞的成分，如病毒颗粒、脂质体或蛋白外壳，但不仅仅只有这些物质。

例如，所述细胞可以包括原核细胞、酵母菌细胞或高等真核细胞。适用于此目的的原核生物包括格兰氏阴性菌和格兰氏阳性菌，例如，肠细菌，例如大肠杆菌、肠杆菌、欧文氏菌(Erwinia)、克雷臼氏杆菌(Klebsiella)、变形菌(Proteus)、沙门氏菌(Salmonella)、粘质沙雷氏菌(Serratia)、和志贺氏杆菌(Shigella),以及杆菌、假单胞菌和链霉菌。

例如，所述细胞可以包括哺乳动物宿主细胞系。例如，猴肾脏细胞，人类胚胎肾脏细胞系，幼小仓鼠肾脏细胞，中国仓鼠卵巢细胞小鼠塞尔托利(sertoli)细胞，人类子宫颈癌细胞(HELA)，犬肾脏细胞，人类肺细胞，人类肝脏细胞，小鼠乳腺癌细胞或NSO细胞。

例如，所述细胞还可以包括用本发明所述的载体在体外转染的细胞。例如，所述细胞可以是细菌细胞(例如，大肠杆菌)、酵母细胞或其它真核细胞，例如COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、CHO-K1细胞、LNCAP细胞、HeLa细胞、HEK293细胞、COS-1细胞、NS0细胞或骨髓瘤细胞。在某些实施方案中，所述细胞可以为哺乳动物细胞。例如，所述哺乳动物细胞可以为HEK293细胞。

药物组合物、应用

另一方面，本申请还提供了制备本申请的抗原结合蛋白的方法，所述方法可以包括在使得本申请所述的抗原结合蛋白表达的条件下，培养本申请所述的细胞。

另一方面，本申请还提供了本申请的抗原结合蛋白、本申请的核酸分子、本申请的载体、本申请的细胞和/或本申请的药物组合物在制备药物中的用途，本申请的药物用于预防、缓解和/或治疗IgE相关的疾病或病症。

另一方面，本申请还提供了预防、缓解或治疗IgE相关的疾病或病症的方法，本申请方法可以包括向有需要的受试者施用本申请的抗原结合蛋白、本申请的核酸分子、本申请的载体、本申请的细胞和/或本申请的药物组合物。

另一方面，本申请还提供了本申请的抗原结合蛋白、本申请的核酸分子、本申请的载体、本申请的细胞和/或本申请的药物组合物，其可以用于预防、缓解或治疗IgE相关的疾病或病症。

例如，IgE相关的疾病或病症可以包括Omalizumab(商品名Xolair)在世界范围(例如，美国、中国、欧洲等)内获得批准的可适用于治疗的疾病或病症。例如，所述疾病或病症可以包括过敏性疾病。

例如，所述受试者可以包括人类和非人类动物。例如，所述受试者可以包括但不限于猫、狗、马、猪、奶牛、羊、兔、小鼠、大鼠或猴。

另一方面，本申请还提供了药物组合物，其包含本申请的抗原结合蛋白、本申请的核酸分子、本申请的载体和/或本申请的细胞，以及任选地药学上可接受的载剂。

例如，药物组合物可以另外地含有适合治疗或预防IgE相关的疾病或病症的一种或多种其它治疗剂。

例如，所述药学上可接受的载剂增强或稳定组合物，或促进组合物的制备。例如，所述药学上可接受的载剂可以包括生理上相容的溶剂、分散介质、包衣材料、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。

例如，所述施用可以通过不同的方式进行，例如静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、局部或真皮内施用。

例如，本申请的药物组合物可以通过本领域已知的多种方法施用，取决于期望结果、施用途径和/或施用模式改变。例如，施用可以为静脉内、肌内、腹膜内或皮下、或邻近靶位点施用。例如，配制所述的药物组合物使得可将它们玻璃体内施用入眼。例如，取决于施用途径，可以将所述的抗原结合蛋白(例如，抗体、双特异性和多特异性分子)用材料包覆以保护化合物免于酸或其它天然条件的作用，所述作用可以使化合物失活。

例如，本申请的药物组合物可以为无菌的且为流体。例如，通过使用包衣材料(诸如卵磷脂)、或在分散液的情况下通过保持所要求的颗粒大小、以及通过使用表面活性剂可以保持适当的流动性。

例如，在组合物中包括等渗剂，例如，糖、多元醇，诸如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化钠。例如，可注射的所述药物组合物的长期吸收可以通过在所述药物组合物中包括延迟吸收的试剂(例如，单硬脂酸铝或明胶)来实现。

例如，本申请的抗原结合蛋白、本申请的核酸分子、本申请的载体和/或本申请的细胞与任选的药学可接受载体、赋形剂或稳定剂混合而制备以贮存。例如，本申请的药物组合物的形式可以为冻干制剂或水溶液。

例如，本申请的药学上可接受的载剂可以包括药学可接受载体、赋形剂或稳定剂。

例如，本申请的可接受的载体、赋形剂或稳定剂以采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，并且包括缓冲剂例如磷酸盐柠檬酸盐、乙酸盐和其他有机酸。

例如，包含本申请的抗原结合蛋白的药物组合物可以是水溶性形式。

例如，用于体内施用的药物组合物可以是无菌的。这可以通过无菌过滤膜过滤或其他方法而容易地实现。例如，以无菌水溶液形式施用包含本申请的抗原结合蛋白的药物组合物可以多种方式进行，包括但不限于口服、皮下、静脉内、鼻内、耳内、透皮、局部(例如，凝胶、油膏、洗剂、乳霜等)、腹膜内、肌肉内、肺内、胃肠外、直肠或眼内。在一些情况下，例如治疗伤口、炎症等，本申请的抗原结合蛋白可以作为溶液或喷雾剂直接应用。

例如，本申请的药物组合物可以根据本领域熟知且常规实践的方法制备。例如，本申请的药物组合物可以在GMP条件下制备。通常，在本申请的药物组合物中使用IgE结合蛋白的治疗有效剂量或有效剂量。例如，通过本领域技术人员已知的常规方法可将IgE结合蛋白配制成药学上可接受的剂量形式。调节剂量方案以提供最佳的期望响应(例如，治疗响应)。本申请的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可发生改变以便获得有效实现特定患者所期望的治疗响应、组合物和施用模式而对患者不具有毒性的活性成分的量。选择的剂量水平取决于多种药代动力学因素，例如，本申请使用的特定组合物或其酯、盐或酰胺的活性，施用途径，施用时间，正使用的特定化合物的排泄速率，治疗的持续时间，与使用的特定组合物组合使用的其它药物、化合物和/或物质，治疗的受试者的年龄、性别、体重、状态、一般健康和先前病史以及其它因素。

例如，皮下施用可以用于其中患者可以自己施用药物组合物的情况。许多蛋白治疗剂不足够有效以允许配制皮下施用最大可接受体积的治疗有效剂量。本申请公开的抗原结合蛋白可适用于皮下施用，例如，可以增加的效价、提高的血浆半衰期和提高的溶解度。

本领域已知，蛋白治疗剂可以通过IV输注或快速浓注来递送。本申请公开的抗原结合蛋白也可以使用此类方法递送。

另一方面本申请还提供了检测样品中IgE的方法，所述方法包括施用本申请中所述的抗原结合蛋白。

例如，将获取自受试者的样品接触本申请的抗原结合蛋白(例如，IgE结合蛋白)。例如，其中用可检测标记或报告分子标记IgE结合蛋白或将抗IgE结合蛋白用作捕获配体以选择性地从患者样品分离IgE。或者，未标记的抗IgE结合蛋白可以结合第二抗体用于检测应用中，所述第二抗体自身是具有可检测标记的。可检测标记或报告分子可以是放射性同位素，例如如³H、¹⁴C、³²P、³⁵S或¹²⁵I；还可以是荧光或化学发光部分，例如异硫氰酸荧光素、若丹明；或酶，例如碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶或荧光素酶；可以用于检测或测量样品中的IgE的特定示例性分析包括酶联免疫吸附分析(ELISA)、放射性免疫分析(RIA)和荧光激活的细胞分选(FACS)。

可以用于本申请的IgE检测中的样品可以包括获取自正常或病理状况下的受试者的任何组织或流体样品，其含有可检测含量的IgE蛋白或其片段。例如，可以将测量获自健康受试者(例如，未患IgE相关疾病的受试者)的特定样品的IgE蛋白的水平，以最初建立IgE的基线或标准水平。随后将这个IgE的基线水平相对于获取自疑似患有IgE相关疾病或病症或与该病症相关症状的个体的样品中测量的IgE水平进行比较。IgE结合蛋白可以不含另外的标记，也可以含有N-末端或C-末端标记。例如，所述标记是生物素。在结合分析中，标记(如果存在的话)的位置可以确定肽相对于其上结合肽的表面的方向。例如，如果表面包被了抗生物素蛋白，则含有N-末端生物素的肽将使得肽的C-末端部分远离表面。

本申请还包含以下的实施方式：

1.抗原结合蛋白，其包含重链可变区的至少一个CDR，所述重链可变区包含如SEQID NO:8所示的氨基酸序列；且其包含轻链可变区的至少一个CDR，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。

2.根据实施方式1所述的抗原结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：

1)能够以约3pM或更小的KD值与IgE相结合；

2)能够抑制IgE与其受体FcεRIa和/或FcεRII的结合。

3.根据实施方式2中所述的抗原结合蛋白，其中所述IgE为人IgE。

4.根据实施方式1-3中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含重链HCDR3和HCDR2，所述HCDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，且所述HCDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

5.根据实施方式1-4中任一项所述的抗原结合蛋白，其还包含重链HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

6.根据实施方式1-5中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3；其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

7.根据实施方式1-6中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含重链H-FR1，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连，且所述H-FR1包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

8.根据实施方式1-7中任一项所述的抗原结合蛋白，其还包含重链H-FR2，所述H-FR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述H-FR2包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。

9.根据实施方式1-8中任一项所述的抗原结合蛋白，其还包含重链H-FR3，所述H-FR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述H-FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。

10.根据实施方式1-9中任一项所述的抗原结合蛋白，其还包含重链H-FR4，所述H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端相连，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。

11.根据实施方式1-10中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含重链可变区VH，所述VH包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。

12.根据实施方式1-11中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含轻链LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。

13.根据实施方式1-12中任一项所述的抗原结合蛋白，其还包含轻链LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。

14.根据实施方式1-13中任一项所述的抗原结合蛋白，其还包含轻链LCDR1，所述LCDR1包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。

15.根据实施方式1-14中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3；其中所述LCDR1包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述LCDR3包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。

16.根据实施方式1-15中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含轻链L-FR1，所述L-FR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接或间接相连，且所述L-FR1包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。

17.根据实施方式1-16中任一项所述的抗原结合蛋白，其还包含轻链L-FR2，所述L-FR2位于所述LCDR1与所述LCDR2之间，且所述L-FR2包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。

18.根据实施方式1-17中任一项所述的抗原结合蛋白，其还包含轻链L-FR3，所述L-FR3位于所述LCDR2与所述LCDR3之间，且所述L-FR3包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。

19.根据实施方式1-18中任一项所述的抗原结合蛋白，其还包含轻链L-FR4，所述L-FR4的N末端与所述LCDR3的C末端相连，且所述L-FR4包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列。

20.根据实施方式1-19中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含轻链可变区VL，所述VL包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。

21.根据实施方式1-20中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列和所述LCDR3包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。

22.根据实施方式1-21中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含重链可变区VH和轻链可变区VL，所述VH包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，且所述VL包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。

23.根据实施方式1-22中任一项所述的抗原结合蛋白，其包括抗体或其抗原结合片段。

24.根据实施方式23所述的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合片段包括Fab，Fab’，F(ab)₂、Fv片段、F(ab’)₂，scFv，di-scFv和/或dAb。

25.根据实施方式1-24中任一项所述的抗原结合蛋白，其包括重链恒定区，且所述重链恒定区源自人IgG。

26.根据实施方式1-25中任一项所述的抗原结合蛋白，其包括重链恒定区，且所述重链恒定区源自人IgG1。

27.根据实施方式1-26中任一项所述的抗原结合蛋白，其包括重链恒定区，其中与SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列相比，所述重链恒定区包含下述氨基酸突变：M135Y、S137T和/或T139E。

28.根据实施方式1-27中任一项所述的抗原结合蛋白，其重链恒定区包含SEQ IDNO:18所示的氨基酸序列。

29.根据实施方式1-28中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含重链，且所述重链包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。

30.根据实施方式1-29中任一项所述的抗原结合蛋白，其包括轻链恒定区，且所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。

31.根据实施方式1-30中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含轻链，且所述轻链包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。

32.根据实施方式1-31中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含重链和轻链，其中所述重链包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列，且所述轻链包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。

33.多肽，其包含实施方式1-32中任一项所述的抗原结合蛋白。

34.免疫缀合物，其包含实施方式1-32中任一项所述的抗原结合蛋白。

35.分离的核酸分子，其编码根据实施方式1-32中任一项所述的抗原结合蛋白。

36.载体，其包含实施方式35所述的分离的核酸分子。

37.细胞，其包含和/或表达实施方式1-32中任一项所述的抗原结合蛋白、实施方式33所述的多肽、实施方式34所述的免疫缀合物、实施方式35所述的核酸分子或实施方式36所述的载体。

38.制备实施方式1-32中任一项所述的抗原结合蛋白的方法，所述方法包括在使得实施方式1-32中任一项所述的抗原结合蛋白表达的条件下，培养实施方式37所述的细胞。

39.药物组合物，其包含实施方式1-32中任一项所述抗原结合蛋白、实施方式33所述的多肽、实施方式34所述的免疫缀合物、实施方式35所述的核酸分子、实施方式36所述的载体、实施方式37所述的细胞和/或任选地药学上可接受的载剂。

40.实施方式1-32中任一项所述的抗原结合蛋白、实施方式33所述的多肽、实施方式34所述的免疫缀合物、实施方式35所述的核酸分子、实施方式36所述的载体、实施方式37所述的细胞和/或实施方式39所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防、缓解和/或治疗IgE相关的疾病或病症。

41.预防、缓解或治疗IgE相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用实施方式1-32中任一项所述的抗原结合蛋白、实施方式33所述的多肽、实施方式34所述的免疫缀合物和/或实施方式39所述的药物组合物。

42.实施方式1-32中任一项所述的抗原结合蛋白、实施方式33所述的多肽、实施方式34所述的核酸分子、实施方式36所述的载体、实施方式37所述的细胞、实施方式34所述的免疫缀合物和/或实施方式39所述的药物组合物，其用于预防、缓解或治疗IgE相关的疾病或病症。

43.一种用于检测或测定IgE的方法，所述方法包括使用实施方式1-32中任一项所述的抗原结合蛋白或实施方式33所述的多肽。

44.一种用于检测或测定IgE的试剂盒，所述试剂盒包括实施方式1-32中任一项所述的抗原结合蛋白或实施方式33所述的多肽。

不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的抗原结合蛋白、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。

实施例

实施例1本申请的抗原结合蛋白制备

(1)小鼠免疫

向四周龄的BALB/c小鼠皮下注射20μg重组表达的人IgE的Fc区域(CH2-4)蛋白(IgE-Fc，SEQ ID NO:22)(在弗氏完全佐剂中)。每三至四星期注射一次，一共注射五次。最后在腹膜内单次注射20μg重组人IgE-Fc蛋白。

(2)ELISA法测定小鼠血清与人IgE-Fc抗原的结合

以重组人IgE-Fc蛋白包被酶标板(Costar)，室温过夜。弃去包被溶液，用溶解在磷酸盐缓冲盐水(PBS)的2.5％的脱脂奶封闭各孔0.5小时，用含有0.05％吐温(Tween)-20的PBS洗孔。然后分别加入稀释血清和作为阴性对照的非相关抗体(Irrevalent mAb)，室温孵育1小时，用含有0.05％吐温(Tween)-20的PBS洗孔，然后每孔加入50μl的HRP标记的羊抗鼠IgG多克隆抗体(Jackson Laboratory)作为检测抗体。经血清测试后，鉴定出含有高水平抗重组人IgE-Fc蛋白抗体血清的小鼠。

(3)细胞融合、筛选和鼠源单克隆抗体制备

经血清测试鉴定出含有高水平抗人IgE-Fc抗体血清的小鼠后，取出该小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞株相融合。混合5×10⁸的Sp2/0细胞与5×10⁸的脾细胞在50％聚乙二醇(PEG，分子量为1450)和5％二甲基亚枫(DMSO)溶液中融合。用Iscove培养基(含有10％胎牛血清，100单位/mL青霉素，100μg/mL链霉素，10mM次黄嘌呤，0.4μM氨基蝶呤和1.6mM胸苷)来调整脾脏细胞数至7.5×10⁵/mL，以0.2ml加入96孔培养板的孔内。置于37℃，5％CO₂的培养箱内。10天后，取出各孔内的培养基测试其中鼠源抗体对人IgE-Fc的结合能力，以此筛选出与人IgE-Fc结合的阳性孔。再将上述含有能与人IgE-Fc结合抗体的孔内融合细胞进行亚克隆，同样以ELISA方法筛选得到表达高亲和力鼠单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

制备纯化的鼠单克隆抗体，以获得待测试的抗体样品。在补充10％FCS的RPMI1640培养基中培养产生特异性抗体的细胞克隆。当细胞密度达到大约5×10⁵个细胞/ml时，用无血清培养基替换该培养基。2至4天后，将培养过的培养基离心，以收集培养物上清液。使用蛋白G柱用于纯化抗体。用150mM的NaCl透析单克隆抗体洗脱液。通过0.2μm滤器将透析的溶液过滤除菌，以获得待测试的抗体样品。制备得到单克隆抗体SE5。

(4)本申请的抗原结合蛋白制备

对抗体可变区的序列分析发现，SE5重链CDR2区(如SEQ ID NO:2所示)的N53为潜在的N-糖基化位点，对人源化SE5进行了N53S/T57S突变改造，同时对SE5的Fc区域(SEQ IDNO:17)进行了M135Y、S137T和/或T139E(YTE)改造，以增强抗体分子在酸性条件下与新生儿受体FcRn的亲和力，从而延长抗体分子在体内的半衰期，达到延长给药周期的目的，改造后的人源化分子称为SE5ss。

实施例2本申请的抗原结合蛋白亲和力检测

使用KinExA检测人源化抗体和对照抗体(Omalizumab)与人IgE(来源于U266细胞(ATCC)，制备方法参见Mol Immunol.1986,23(2):159-67)的平衡亲和力。溶液平衡滴定(SET)在PBS+0.1％不含IgG的BSA缓冲液(PBSF)中进行，其中抗原人IgE-Biotin(生物素标记人IgE，制备方法参考Thermofisher EZ-LinkTMSulfo-NHS-LC-Biotinylation Kit使用说明)保持恒定在20pM-5nM，且与从2nM-1μM抗体两倍连续稀释液一起孵育。具体地，针对人源化抗体SE5ss测定时，抗原人IgE-Biotin保持恒定在20pM，人源化抗体SE5ss从2nM开始连续两倍稀释至30.52fM，将混合样品在室温下孵育30小时；针对对照抗体Omalizumab测定时，抗原人IgE-Biotin保持恒定在5nM，Omalizumab从1μM开始连续两倍稀释至15.26pM，将混合样品在室温下孵育20小时。将抗原人IgE-Biotin与抗体两倍连续稀释液孵育的样品在KinExA仪器(型号：4000)中流过用抗体包被的珠子，样品中未与抗体结合的游离抗原人IgE-Biotin就会与珠子上包被的抗体结合，继续将连有荧光的二抗AlexaFluor647Streptavidin流过珠子，仪器通过检测珠子上的荧光信号并通过KinExA软件拟合得到KD值。测量结果见图1A-B。实验结果表明，根据实施例1制备的人源化重组单克隆抗体SE5ss和Omalizumab与人IgE结合的平衡亲和力分别约为2.08pM和1.79nM，SE5ss亲和力远高于Omalizumab。

实施例3本申请的抗原结合蛋白阻断活性检测

(1)本申请的抗原结合蛋白阻断人源IgE与其受体FcεRIa结合的阻断活性

使用ELISA方法检测SE5ss单克隆抗体阻断人源IgE与其受体FcεRIa结合的阻断活性。具体方法为，将重组表达的人FcεRIa-Fc蛋白用PBS稀释到1μg/mL，100μL/孔包被酶标板(Corning，货号：42592)，4℃孵育过夜。第二天弃去包被液，使用含2.5％脱脂牛奶的PBS25℃封闭1小时，结束后用PBST(PBS+0.05％Tween 20)洗涤3次，之后加入预先混合1小时、含有100ng/mL的人源IgE和梯度稀释的待检抗体(SE5ss、Omalizumab和人源IgG)的预混液，25℃孵育1小时，待检抗体终浓度从10ug/mL起，3倍连续稀释10个点至0.17ng/mL，再加0ug/mL的点，结束后用PBST洗3次。使用1:5000稀释的山羊抗人IgE抗体(Invitrogen，货号：A18795)和1:2000稀释的HRP标记的兔抗山羊IgG抗体(生工，货号：D110117-0100)进行检测。测得OD₄₅₀值用四参数回归模型分析，计算抗体的IC₅₀。结果如图2A所示，根据实施例1制备的SE5ss和Omalizumab均能有效阻断人源IgE与FcεRIα受体的结合，IC₅₀分别是32.38ng/mL和1009ng/mL，SE5ss阻断人源IgE与FcεRIα受体结合的能力远远好于Omalizumab。

(2)本申请的抗原结合蛋白阻断人源IgE与其受体FcεRII(CD23)受体的阻断活性

使用与步骤(1)相似的ELISA方法，检测SE5ss阻断人源IgE与其受体FcεRⅡ(CD23)的阻断活性。具体方法为，将重组人FcεRⅡ(CD23，购于翊翘神州，货号：10261-H07H)蛋白用PBS稀释至1.5μg/mL，100μL/孔包被酶标板(Corning，货号：42592)。第二天弃去包被液，使用1％casein室温封闭2小时。将生物素标记的重组表达β乳球蛋白特异性人IgE(bIgEk，Structure 15,1413–1421,2007)和β-乳球蛋白(sigma，货号：L3908)等体积(摩尔比大约1：10)混匀(浓度均为60μg/mL)，37℃孵育1小时后和梯度浓度的抗体再混合，37℃孵育1小时，待测抗体(SE5ss、Omalizumab和人源IgG)终浓度从300ug/mL起，3倍连续稀释7个点到0.41μg/mL，再加0ug/mL的点，bIgEk-Biotin和β-乳球蛋白复合物的浓度恒定为30μg/mL，结束后用PBST洗3次。使用1:8000稀释的Streptavidin-HRP抗体(购自生工，货号：D110513-0100)进行检测。测得OD₄₅₀值用四参数回归模型分析，计算各抗体的IC₅₀。结果如图2B所示，实验结果表明根据实施例1制备的SE5ss和Omalizumab均能有效阻断人源IgE与FcεRⅡ(CD23)受体的结合，IC₅₀分别是3.756μg/mL和3.444μg/mL，二者阻断人源IgE与FcεRⅡ蛋白结合的能力与相近。

(3)本申请的抗原结合蛋白对人源IgE介导的RBL-2H3-FcεRIα-NFATLuc细胞报告基因激活的抑制活性检测

RBL-2H3-FcεRIα-NFATLuc细胞株构建：为检测IgE介导的细胞激活及本申请的抗原结合蛋白阻断IgE的细胞水平活性，在大鼠嗜碱性细胞RBL-2H3细胞系(中科院细胞库)基础上，构建了表达人FcεRIα受体和NFAT驱动的荧光素酶(Luciferase)报告基因细胞株，命名为：RBL-2H3-FcεRIα-NFATLuc。构建过程参见：Analytical and BioanalyticalChemistry volume 412,pages1901-1914(2020)；Allergy 2010；65:1266–1273；J ImmunolJuly 1,1996,157(1)221-230。

取对数生长期的RBL-2H3-FcεRIα-NFATLuc细胞铺于96孔平底板，每孔约5E4个细胞，50uL培养基。之后加入预先混合的人源IgE和梯度浓度的待检抗体(SE5ss、Omalizumab和人源IgG)的预混液，37℃、5％CO₂培养箱孵育20小时左右。人源IgE恒定终浓度为1000ng/mL，待检抗体终浓度从45ug/mL起，3倍连续稀释8个点到0.021ug/mL，再加0ug/mL的点。第二天板子用PBS清洗两遍，每孔加入含10μg/mL抗人IgE抗体的(购自Invitrogen，货号：A18795)完全培养基，放于培养箱孵育3小时左右。结束后每孔加入100μL One-Lite TM(诺唯赞)检测试剂，等待约5分钟后转移到96孔白板中，使用酶标仪发光检测模块进行检测，结果用四参数回归模型拟合抑制曲线，计算抗体的IC₅₀。结果如图3所示，结果说明SE5ss和Omalizumab均可抑制人源IgE介导的效应细胞报告基因激活，IC₅₀分别为0.2641μg/mL和0.6093μg/mL，SE5ss的抑制能力明显强于Omalizumab。

(4)本申请的抗原结合蛋白抑制不同过敏原过敏的人血清诱发的RBL-2H3-FcεRIα-NFATLuc细胞激活的活性检测

取对数生长期的RBL-2H3-FcεRIα-NFATLuc细胞铺于96孔平底板，每孔约5E4个细胞，50uL培养基。将梯度浓度的待测抗体(SE5ss、Omalizumab和人源IgG)和不同过敏源人血清依次加到细胞中，37℃、5％CO2培养箱孵育20小时左右。由于各血清中特异性过敏原的IgE含量不同，所以使用了不同浓度的血清及抗体。尘螨过敏人血清(PlasmaLab，货号：PL25740)使用浓度是1.5％，抗体终浓度从10000ng/mL起3倍连续稀释9个点至5ng/mL；虾过敏人血清(PlasmaLab，货号：PL24819)使用浓度是3％，Omalizumab和人源IgG终浓度从1200.00ng/mL起3倍稀释12个点到0.01ng/mL，SE5ss的浓度从133.33ng/mL起，3倍连续稀释11个点至0.002ng/mL；胡桃过敏人血清(PlasmaLab，货号：PL27530)使用浓度是1.5％，抗体终浓度从10000ng/mL起，3倍连续稀释9个点至1.5ng/mL，三组均加上0ug/mL的点作为对照。第二天板子用PBS清洗两遍，每孔加入100uL含10μg/mL对应过敏原(尘螨过敏原，购于Greerlabs，货号：XPB82D3A25；虾过敏原，购于沃卡威，货号：M110227；胡桃过敏原，购于沃卡威，货号：M110343)的完全培养基，放于培养箱孵育3小时左右。结束后每孔加入100μLOne-Lite^TM检测试剂，等待约5分钟后转移到96孔白板中，使用酶标仪发光检测模块进行检测，结果用四参数回归模型拟合抑制曲线，计算抗体的IC₅₀。实验结果表明，根据实施例1制备的SE5ss和Omalizumab都能抑制各过敏血清介导的RBL-2H3-FcεRIα-NFATLuc细胞报告激活，其中对尘螨过敏血清抑制的IC₅₀分别为19.38ng/mL和177.9ng/mL(图4A)；对虾过敏血清抑制的IC50分别为1.917ng/mL和229.8ng/mL(图4B)；对胡桃过敏血清抑制的IC50分别为51.57ng/mL和264.2ng/mL(图4C)，SE5ss的抑制能力均明显优于Omalizumab。

实施例4本申请的抗原结合蛋白在动物体内活性检测

(1)本申请的抗原结合蛋白在人源IgE重建小鼠模型中的药效学评估

建立人源IgE重建模型评估SE5ss对小鼠体内游离IgE的抑制作用。试验采用Balb/c小鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)，将44只小鼠根据性别和体重随机分为阴性对照组、溶媒对照组、SE5ss 0.5μg组、SE5ss 1μg组、SE5ss 2μg组和Omalizumab 2μg组，其中阴性对照组为4只小鼠，其余各组均为每组8只。每只小鼠静脉注射2μg人源IgE(来源于U266培养纯化，In house，批号5/20/29)，其中阴性对照组静脉注射同等体积的PBST(HyClone，批号C520004-0001)；2小时后静脉注射不同剂量的SE5ss和阳性药Omalizumab(Novartis，批号SPX27)。分别于给药前一天，给药前1小时，给药后1小时和给药后4小时对所有小鼠进行下颌静脉采血，使用MSD检测小鼠血清样本中游离IgE的含量，方法简述如下：MSD板包被FcεRIα-Fc(In house，批号：069-109-11)，加入待测样本，37度孵育1小时后PBST洗涤3次，加入生物素标记的鼠抗人IgE抗体(In house，Clone#AE10-10)，37度孵育1小时后PBST洗涤3次，采用MSD sulfo-tag labeled streptavidin进行检测(MSD，批号：R32AD-1)。试验采用SE5ss溶媒(In house，批号129-098-01)作为阴性对照。结果如图5所示，根据实施例1制备的不同浓度的SE5ss和Omalizumab均能明显的抑制小鼠体内游离IgE(P<0.05)，且抑制能力呈剂量依赖效应，0.5μg/只SE5ss对游离IgE的抑制能力大于2μg/只的Omalizumab(P<0.05)。

(2)本申请的抗原结合蛋白在外源重建速发型过敏反应模型中药效学评估

试验使用human-FcεRIA转基因小鼠(购自上海南方模式生物科技股份有限公司)建立外源重建速发型过敏反应小鼠模型，腹腔注射不同剂量的SE5ss，通过小鼠体内温度的变化，对SE5ss进行初步药效学评估。51只human-FcεRIA转基因小鼠根据性别及基线体温随机分为阴性对照组、溶媒对照组、SE5ss 5μg/只组、SE5ss 10μg/只组、SE5ss 20μg/只组和Omalizumab 20μg/只组，其中阴性对照组为6只，其余各组为9只小鼠。各组动物腹腔注射给予不同剂量的SE5ss和Omalizumab(Novartis，批号SPX27)。给药1小时后腹腔注射给予各组动物人源IgE 20μg/只，给药24小时后腹腔注射给予抗-人IgE(ε-特定链)山羊抗20μg/只(Sigma，批号I6284-1mg)，建立速发型过敏反应模型。分别于给抗人源IgE抗体前和后20分钟、40分钟、60分钟和90分钟对小鼠的体温进行测定。试验采用SE5ss溶媒作为阴性对照。结果如图6所示，给予抗人源IgE抗体后，溶媒对照组小鼠体温开始下降，在40分钟时达到体温最低点，后续缓慢回升。SE5ss各剂量组均能抑制小鼠体温下降，且呈剂量依赖效应。其中SE5ss 10μg/只与Omalizumab 20μg/只药理学效应相当，SE5ss 20μg/只组可以将小鼠体温维持在正常范围。

(3)本申请的抗原结合蛋白在食蟹猴IgE抑制模型中的药效学评估

在食蟹猴体内静脉注射不同剂量的SE5ss，对其抑制食蟹猴游离IgE的能力进行评价。将18只食蟹猴(中科院上海药物研究所)，根据性别和体重随机分为3组，3/性别/组，单次皮下注射分别给予1mg/kg、5mg/kg、25mg/kg SE5ss，并于给药前、给药后1小时、第14天、第28天、第42天和第56天的采集血清样本并测定游离IgE的含量。结果如图7所示，不同浓度的SE5ss均能明显抑制食蟹猴体内游离IgE，且抑制能力呈剂量依赖效应25mg/kg组在给药后1小时，游离IgE下降至给药前的2.4％，在第14和28天游离IgE均低于检测下限，在第42和56天回升至基线的19.1％和34.8％。

序列表

<110> 天辰生物医药（苏州）有限公司

<120> 分离的抗原结合蛋白及其用途

<130> 0125-PA-023

<160> 26

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链CDR1

<400> 1

Ser Asp Tyr Ala Trp Asn

1 5

<210> 2

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链CDR2

<400> 2

Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链CDR3

<400> 3

Gly Ser Ser Gln Arg Phe Phe Asp Tyr

1 5

<210> 4

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链FR1

<400> 4

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr

20 25 30

<210> 5

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链FR2

<400> 5

Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Leu Gly

1 5 10

<210> 6

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链FR3

<400> 6

Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys

1 5 10 15

Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Val Tyr

20 25 30

<210> 7

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链FR4

<400> 7

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 8

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链可变区

<400> 8

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Leu Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Val Tyr Gly Ser Ser Gln Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 9

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 轻链CDR1

<400> 9

Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Asp Val Ala

1 5 10

<210> 10

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 轻链CDR2

<400> 10

Ser Ala Ser Trp Arg Tyr Ala

1 5

<210> 11

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 轻链CDR3

<400> 11

Gln Gln His Tyr Asn Leu Phe Thr

1 5

<210> 12

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 轻链FR1

<400> 12

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys

20

<210> 13

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 轻链FR2

<400> 13

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 14

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 轻链FR3

<400> 14

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 15

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 轻链FR4

<400> 15

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 16

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 轻链可变区

<400> 16

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Trp Arg Tyr Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Asn Leu Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 17

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链恒定区氨基酸序列

<400> 17

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 18

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链恒定区

<400> 18

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Phe Gln Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Gln Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 19

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 轻链恒定区

<400> 19

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 20

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链

<400> 20

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Leu Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Val Tyr Gly Ser Ser Gln Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Gln Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg

245 250 255

Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Gln Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 21

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 轻链

<400> 21

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Trp Arg Tyr Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Asn Leu Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 22

<211> 325

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人IgE的Fc区域（CH2-4）氨基酸序列

<400> 22

Val Cys Ser Arg Asp Phe Thr Pro Pro Thr Val Lys Ile Leu Gln Ser

1 5 10 15

Ser Cys Asp Gly Gly Gly His Phe Pro Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys

20 25 30

Leu Val Ser Gly Tyr Thr Pro Gly Thr Ile Asn Ile Thr Trp Leu Glu

35 40 45

Asp Gly Gln Val Met Asp Val Asp Leu Ser Thr Ala Ser Thr Thr Gln

50 55 60

Glu Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gln Ser Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys

65 70 75 80

His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly

85 90 95

His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg

100 105 110

Gly Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile

115 120 125

Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Ala Pro Ser

130 135 140

Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val

145 150 155 160

Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys Gln Arg Asn Gly Thr Leu Thr

165 170 175

Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr Arg Asp Trp Ile Glu Gly Glu

180 185 190

Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met

195 200 205

Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Tyr

210 215 220

Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu

225 230 235 240

Ala Cys Leu Ile Gln Asn Phe Met Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp

245 250 255

Leu His Asn Glu Val Gln Leu Pro Asp Ala Arg His Ser Thr Thr Gln

260 265 270

Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser Gly Phe Phe Val Phe Ser Arg Leu Glu

275 280 285

Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala

290 295 300

Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser

305 310 315 320

Val Asn Pro Gly Lys

325

<210> 23

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链可变区核苷酸序列

<400> 23

caggtgcagc tgcaggagag cggaccagga ctggtgaagc caagccagac cctgtctctg 60

acctgtacag tgagcggcta ctctatcaca tccgactatg cctggaactg gatcagacag 120

ccacctggaa atggactgga gtggctgggc tacatctcct atagcggctc tacccgctac 180

aatccaagcc tgaagtctag gatcaccatc tcccgggata caagcaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctgt ccagcgtgac cgccgctgac acagccgtgt acttttgcgt gtatggctct 300

tcccagaggt tctttgatta ctggggccag ggcaccctgg tgacagtgag ctct 354

<210> 24

<211> 1344

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链核苷酸序列

<400> 24

caggtgcagc tgcaggagag cggaccagga ctggtgaagc caagccagac cctgtctctg 60

acctgtacag tgagcggcta ctctatcaca tccgactatg cctggaactg gatcagacag 120

ccacctggaa atggactgga gtggctgggc tacatctcct atagcggctc tacccgctac 180

aatccaagcc tgaagtctag gatcaccatc tcccgggata caagcaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctgt ccagcgtgac cgccgctgac acagccgtgt acttttgcgt gtatggctct 300

tcccagaggt tctttgatta ctggggccag ggcaccctgg tgacagtgag ctctgcctct 360

accaagggcc cctccgtgtt tcctctggct ccatccagca agtccaccag cggaggaaca 420

gccgctctgg gctgtctggt gaaggactat ttccctgagc cagtgaccgt gtcctggaac 480

agcggcgccc tgacctccgg agtgcataca tttcccgctg tgctgcagtc ttccggcctg 540

tacagcctga gctctgtggt gaccgtgcct tccagctctc tgggcaccca gacatatatc 600

tgcaacgtga atcacaagcc ctctaataca aaggtggaca agaaggtgga gcctaagtcc 660

tgtgataaga cccatacatg cccaccatgt ccagctcctg agttccaggg aggacctagc 720

gtgttcctgt ttcctccaaa gccaaaggac accctgtaca tcacaaggga gcctgaggtg 780

acctgcgtgg tggtggacgt gtctcacgag gatccagagg tgaagtttaa ctggtacgtg 840

gatggcgtgg aggtgcataa tgctaagacc aagcctagag aggagcagta caatagcacc 900

tatcgcgtgg tgtctgtgct gacagtgctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960

aagtgccagg tgagcaataa ggccctgcca gctcccatcg agaagaccat ctctaaggct 1020

aagggacagc caagggagcc tcaggtgtac acactgcccc cttcccggga cgagctgacc 1080

aagaaccagg tgagcctgac atgtctggtg aagggcttct atccaagcga tatcgctgtg 1140

gagtgggagt ctaatggcca gcccgagaac aattacaaga ccacaccacc cgtgctggac 1200

tctgatggct ccttctttct gtattctaag ctgaccgtgg ataagtcccg gtggcagcag 1260

ggcaacgtgt tttcttgttc cgtgatgcat gaggccctgc acaatcatta tacacagaag 1320

agcctgtctc tgtcccctgg caag 1344

<210> 25

<211> 318

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 轻链可变区核苷酸序列

<400> 25

gacatcgtga tgacccagtc tccagattcc ctggccgtgt ccctgggaga gagggctaca 60

atcaactgta aggccagcca ggacgtgtct atcgatgtgg cctggtacca gcagaagcct 120

ggccagcccc ctaagctgct gatctactcc gctagctgga gatatgccgg cgtgccagac 180

aggttctctg gctcccggag cggcaccgat tacaccctga caatctccag cctgcaggct 240

gaggacgtgg ccgtgtacta ttgccagcag cactataatc tgttcacctt tggcagcggc 300

acaaagctgg agatcaag 318

<210> 26

<211> 639

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 轻链核苷酸序列

<400> 26

gacatcgtga tgacccagtc tccagattcc ctggccgtgt ccctgggaga gagggctaca 60

atcaactgta aggccagcca ggacgtgtct atcgatgtgg cctggtacca gcagaagcct 120

ggccagcccc ctaagctgct gatctactcc gctagctgga gatatgccgg cgtgccagac 180

aggttctctg gctcccggag cggcaccgat tacaccctga caatctccag cctgcaggct 240

gaggacgtgg ccgtgtacta ttgccagcag cactataatc tgttcacctt tggcagcggc 300

acaaagctgg agatcaagag aaccgtggcc gctcccagcg tgttcatctt tccaccctct 360

gacgagcagc tgaagtccgg cacagccagc gtggtgtgcc tgctgaacaa tttctaccct 420

cgcgaggcta aggtgcagtg gaaggtggat aacgccctgc agagcggcaa ttctcaggag 480

tccgtgaccg agcaggacag caaggattct acatattccc tgtcttccac cctgacactg 540

tccaaggctg attacgagaa gcacaaggtg tatgcctgcg aggtgaccca tcagggcctg 600

agctctcccg tgacaaagag ctttaaccgc ggcgagtgt 639

Claims

1.抗原结合蛋白，其包含重链可变区的至少一个CDR，所述重链可变区包含如SEQ IDNO:8所示的氨基酸序列；且其包含轻链可变区的至少一个CDR，所述轻链可变区包含如SEQID NO:16所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的抗原结合蛋白，其包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3；其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3；其中所述LCDR1包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述LCDR3包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含重链可变区VH，所述VH包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，和/或包含轻链可变区VL，所述VL包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗原结合蛋白，其包括重链恒定区，其中与SEQ IDNO:17所示的氨基酸序列相比，所述重链恒定区包含下述氨基酸突变：M135Y、S137T和/或T139E。

6.根据权利要求5中任一项所述的抗原结合蛋白，其重链恒定区包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的抗原结合蛋白，其包含重链，所述重链包含SEQ IDNO:20所示的氨基酸序列，和/或包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。

8.分离的核酸分子，其编码权利要求1-7中任一项所述的抗原结合蛋白。

9.细胞，其包含和/或表达权利要求1-7中任一项所述的抗原结合蛋白、权利要求8所述的分离的核酸分子。

10.权利要求1-7中任一项所述的抗原结合蛋白、权利要求8所述的核酸分子在制备药物中的用途，所述药物用于预防、缓解和/或治疗IgE相关的疾病或病症。