CN116077527A - 一种针状铜-没食子酸纳米酶及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于抗肿瘤药物技术领域，具体公开了一种针状铜‑没食子酸纳米酶及其制备方法与应用，包括如下步骤：将聚乙烯吡咯烷酮和可溶性铜盐的混合溶液搅拌设定时间后，加入没食子酸溶液，并调节其pH值至12‑14，持续搅拌反应10‑14h，固液分离，即得铜‑没食子酸纳米粒子；二价铜离子与没食子酸的摩尔比为1.6‑1.8:1；所述聚乙烯吡咯烷酮的分子量为44000‑54000。该针状铜‑没食子酸纳米酶可作为纳米药物诱导细胞焦亡以治疗肿瘤。

Description

一种针状铜-没食子酸纳米酶及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于抗肿瘤药物技术领域，具体涉及一种针状铜-没食子酸纳米酶及其制备方法与应用，该针状铜-没食子酸纳米酶可作为纳米药物诱导细胞焦亡以治疗肿瘤。
背景技术
本部分的陈述仅仅是提供了与本发明相关的背景技术信息，不必然构成在先技术。
肿瘤微环境具有谷胱甘肽（GSH）浓度高、过氧化氢（H2O2）过量、偏酸性和乏氧等特点，这种环境不仅关系着肿瘤细胞的生长繁殖、扩散和侵袭等行为，而且会影响或限制化疗、放疗等传统治疗方式的治疗效果。纳米酶可以通过模拟过氧化物酶（POD）活性催化肿瘤细胞内高浓度的H2O2产生高毒性的羟基自由基（·OH）；模拟过氧化氢酶（CAT）活性催化H2O2产生氧气缓解肿瘤乏氧微环境；或是模拟谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性氧化GSH为谷胱甘肽二硫化物（GSSG），破坏肿瘤细胞的抗氧化防御系统，加速细胞氧化应激，进而诱导肿瘤细胞死亡。目前报道的纳米酶常以金属（金、铂、银、铈、铜、铁等）为催化反应活性位点，其共同缺点是在生物体内难以降解，导致它们很难通过代谢和排出体外，阻碍了纳米酶的进一步临床应用。因此，开发具有良好降解性和生物安全性的纳米酶至关重要。
细胞焦亡表现为细胞逐渐胀大和渗透裂解，导致细胞内容物的释放，从而激活免疫反应。与细胞凋亡不同，细胞焦亡能够释放炎症因子（包括白细胞介素-1β和白介素-18）和细胞内容物（如乳酸脱氢酶），更容易激活机体的免疫系统、引起强烈的免疫反应，所以诱导细胞焦亡是一种更具潜力的癌症治疗途径。然而，目前研究较为深入的细胞焦亡通常由某些小分子药物和化疗药物引起，易产生耐药性、治疗具有非特异性以及其他严重副作用，限制了其在癌症治疗中的应用。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种针状铜-没食子酸纳米酶及其制备方法与应用。
为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：
第一方面，本发明提供一种针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法，包括如下步骤：
将聚乙烯吡咯烷酮和可溶性铜盐的混合溶液搅拌设定时间后，加入没食子酸溶液，并调节其pH值至12-14，持续搅拌反应10-14 h，固液分离，即得铜-没食子酸纳米粒子；
二价铜离子与没食子酸的摩尔比为1.6-1.8:1；
所述聚乙烯吡咯烷酮的分子量为44000-54000。
将聚乙烯吡咯烷酮和可溶性铜盐的混合溶液搅拌一定时间，其目的是将二价铜离子包封在聚乙烯吡咯烷酮空腔内，原理是聚乙烯吡咯烷酮（K30）是长分子链聚合物，每个分子单元都具有极性基团-叔酰胺基，对二价铜离子表现出很强的亲和力。
加入没食子酸溶液后，并调节其pH值至12-14，调pH至碱性的目的是使没食子酸水解，产生去质子化的没食子酸，便于后续与二价铜离子络合。
聚乙烯吡咯烷酮作为反应的稳定剂和分散剂，具有调节纳米粒子形貌和尺寸的作用。可溶性铜盐和没食子酸之间发生络合反应，二价铜离子作为中心离子，没食子酸作为配体，在碱性环境下去质子化，易给出电子与金属离子形成稳定的配合物。
聚乙烯吡咯烷酮的分子量会影响铜-没食子酸纳米粒子的形貌和尺寸。分子量过大可能会导致团聚，过小会导致纳米粒子不成形，所以要求聚乙烯吡咯烷酮的分子量为44000-54000。
所述可溶性铜盐为氯化铜。
在一些实施例中，聚乙烯吡咯烷酮的粘度等级为K30。聚乙烯吡咯烷酮的平均分子量常以K值表示，不同K值代表相应的分子量范围。
在一些实施例中，聚乙烯吡咯烷酮和可溶性铜盐的混合溶液搅拌混合的时间为60-120min；
优选的，搅拌混合的时间为70-90min；更优选为70-80min。
在一些实施例中，加入没食子溶液后，采用氢氧化钠调节其pH值。此处只能采用氢氧化钠，如果采用其他碱，会引入其他金属离子或者铵根，会干扰铜离子与没食子酸的络合。
在一些实施例中，加入没食子酸后，调节溶液的pH值至13。当溶液的pH为碱性时，没食子酸发生去质子化而带负电，随着pH值增大使得没食子酸暴露出来的去质子化的酚羟基和羧基增多，更有利于铜离子与没食子酸配位，但pH过高会导致二价铜离子沉淀成氢氧化铜，故pH值选用13。
在一些实施例中，二价铜离子与没食子酸的摩尔比为1.7-1.8:1；二价铜离子与没食子酸的最佳摩尔比为1.7:1。
在一些实施例中，持续搅拌反应的时间为10-14h；进一步优选为12-13h。
优选的，持续搅拌的搅拌速率为500-1000rpm。
进一步优选的，搅拌速率为600-900 rpm；更优选为700-800 rpm。
在一些实施例中，固液分离时采用离心分离的方式进行分离，离心分离的转速为10000-15000 rpm，离心时间为10-30min。
优选的，离心分离的转速为12000-14000 rpm，离心时间为15-20 min。
在一些实施例中，将铜-没食子酸纳米酶离心分离后，还包括对其进行洗涤、干燥的步骤。洗涤次数为2-3次。
第二方面，本发明提供一种针状铜-没食子酸纳米酶，由所述制备方法制备而成。
铜-没食子酸纳米酶可模拟过氧化氢酶，过氧化物酶和谷胱甘肽过氧化物酶。这三种酶活性使得铜-没食子酸纳米酶能够有效的改善肿瘤微环境，具有极强的杀死肿瘤细胞的能力。且由于正常组织中仅存在低浓度的过氧化氢和谷胱甘肽，该纳米酶在正常组织中不会发生作用，所以具有高特异性和良好的生物相容性。
制备的铜-没食子酸纳米酶具有过氧化氢酶活性，即催化过氧化氢产生氧气；还具有的过氧化物酶活性，即催化过氧化氢产生羟基自由基（·OH）；还具有谷胱甘肽过氧化物酶活性，即将谷胱甘肽（GSH）氧化为GSSG，具体发生的反应如下：
。
制备的铜-没食子酸纳米酶可诱导肿瘤细胞发生焦亡，驱动细胞起泡、肿胀、细胞膜破裂、溶解和促炎细胞因子的释放，激活机体的免疫系统，引起强烈的免疫反应，使得机体不仅能够杀死原发性肿瘤，还能够清除远端继发性肿瘤。
铜-没食子酸纳米酶可响应肿瘤微环境中的高浓度谷胱甘肽、过氧化氢和微酸环境，发生自降解释放出铜离子和没食子酸，发挥作用后，可经生物降解后，由肾脏排出体外，具有良好的生物安全性。
第三方面，本发明提供所述针状铜-没食子酸纳米酶在制备肿瘤微环境改善剂或细胞焦亡诱导剂中的应用。
第四方面，本发明提供一种药物组合物，包括所述针状可降解的铜-没食子酸纳米酶，针状可降解的铜-没食子酸纳米酶表面结合聚合物，所述聚合物包括但不限于透明质酸、聚乙二醇、多糖或羟基乙酸中的一种或其组合。
药物组合物中，还包括其他活性成分，所述其他活性成分包括但不限于抗肿瘤小分子药物、天然酶、光敏剂等一种或多种的组合。
上述本发明的一种或多种实施例取得的有益效果如下：
与传统的纳米酶不同，本发明制备的铜-没食子酸纳米酶不仅可以响应肿瘤微环境中的微酸、过氧化氢和谷胱甘肽，执行过氧化物酶、过氧化氢酶以及谷胱甘肽过氧化物酶三种酶活性功能。
此外，铜-没食子酸可被谷胱甘肽、微酸、过氧化氢特异性降解，释放出铜离子和没食子酸，解决了现有纳米酶在体内长期滞留，无法代谢、快速排出体外的问题。更重要的是，铜-没食子酸纳米酶在短时间内降解大量释放出的铜离子将在肿瘤处大量积聚，导致肿瘤细胞内离子浓度失衡，进而诱导肿瘤细胞发生焦亡，驱动细胞起泡、肿胀、细胞膜破裂、溶解和促炎细胞因子的释放。
本发明制备的铜-没食子酸纳米酶尺寸分布较为均一，具有良好的分散性。作为一种抗肿瘤活性成分，该具有针状形貌的铜-没食子酸纳米粒子不但可以提高肿瘤细胞对其内化的效率和速率，还可在纳米酶表面修饰官能基团，连接小分子药物。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为实施例1中制备的针状铜-没食子酸的透射电镜（TEM）照片。
图2为对比例1中制备的铜-没食子酸的透射电镜（TEM）照片。
图3为对比例2中制备的铜-没食子酸的透射电镜（TEM）照片。
图4为对比例3中所述的铜-没食子酸的透射电镜（TEM）照片。
图5为实施例1中所述新型针状铜-没食子酸模拟过氧化氢酶活性的曲线图。
图6为用亚甲基蓝（MB）检测实施例1中所述新型针状铜-没食子酸模拟过氧化物酶活性的曲线图。
图7为实施例1中所述针状铜-没食子酸模拟谷胱甘肽过氧化物酶活性的曲线图。
图8为用RDPP探测实施例1中所述针状铜-没食子酸处理后细胞内O2变化的荧光显微镜图像，自左向右依次为处理0h、0.5h和1h的荧光显微镜图像，三个荧光显微镜图像的标尺相同。
图9为用DCFH-DA探测接受实施例1中所述针状铜-没食子酸处理的4T1细胞中ROS生成的荧光显微镜图像。
图10为实施例1中所述针状铜-没食子酸在4T1细胞消耗GSH实验图。
图11为实施例1中所述新型针状铜-没食子酸细胞毒性（MTT）实验图。
图12为实施例1中所述新型针状铜-没食子酸引发的焦亡细胞形态实验图。
图13为实施例1中所述新型针状铜-没食子酸在微酸、过氧化氢及谷胱甘肽中分别响应降解的TEM图。
图14为实施例中调节铜离子与没食子酸的摩尔比时，制备的纳米颗粒在550-800纳米波长范围内的吸收峰对比图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本发明使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法，包括如下步骤：1）称取250 mg PVP k30与5mL水混合，超声溶解；
2）称取85 mg CuCl2·2H2O与40 mL水混合，超声溶解；
3）在800 rpm搅拌下混合PVP k30水溶液和CuCl2·2H2O水溶液，搅拌75min后，得到前驱体溶液；
4）缓慢加入5 mL没食子酸水溶液(10 mg/mL)至前驱体溶液中；
5）然后用氢氧化钠（NaOH）溶液将溶液调节至pH值为13；
6）室温搅拌12h后，通过14000 rpm离心20min获得深绿色固体产物。该实施例中，二价铜离子与没食子酸的摩尔比为1.7:1。
将实施例1制备的铜-没食子酸纳米酶通过透射电镜进行表征，如图1所示，从图中可以看到制备的铜-没食子酸为明显的单分散的针状纳米颗粒。
将实施例1中得到的针状的铜-没食子酸纳米酶模拟过氧化氢酶、过氧化物酶及谷胱甘肽过氧化物酶活性：
1）模拟铜-没食子酸的过氧化氢酶活性试验：
铜-没食子酸的过氧化氢酶样活性测定是通过测量产生的氧浓度来检测的。将铜-没食子酸和不同浓度的H2O2添加到10mL PBS（pH 7.4）中，每1分钟记录溶解氧计上显示的氧浓度，并持续监测30分钟。
2）模拟铜-没食子酸的过氧化物酶活性试验：
使用TMB（4,4'-二氨基-3,3'，5,5'-四甲基联苯）作为底物，将铜-没食子酸分散在PBS（pH = 5.5）中，加入不同浓度的H2O2，反应30s后，使用紫外分光光度计快速检测662nm处的吸光度。
3）模拟谷胱甘肽过氧化物酶活性试验：
DTNB被用作检测铜-没食子酸的GPx活性的底物。将不同浓度的铜-没食子酸分散在2 mL PBS（pH 7.4）中，再分别加入等量的GSH，反应3分钟后加入DTNB。使用UV-vis分光光度计记录415nm处的吸收变化。
以上试验得到氧气、羟基自由基（·OH）的产生及谷胱甘肽（GSH）的消耗曲线，见图5、图6和图7。
图5中，H2O2作为铜-没食子酸产生O2的反应底物，其浓度高低严重影响着O2的生成速率和产率。H2O2浓度越高，铜-没食子酸产生氧气的速率越快，产量越多。
图6中，H2O2作为铜-没食子酸产生羟基自由基的反应底物，其浓度高低严重影响着羟基自由基的生成速率和产率。H2O2浓度越高，铜-没食子酸产生羟基自由基的速率越快，产量越多。
图7中，GSH和DTNB反应形成黄色TNB，在415nm处观察到清晰的吸收峰。DTNB被用作检测铜-没食子酸的GPx活性的底物。随着铜-没食子酸的浓度增大，消耗谷胱甘肽的能力越强，反应后谷胱甘肽剩余量越少，吸收峰越低。
并进行了细胞内相关试验，试验过程如下：
1）细胞内氧气含量检测：
将4T1细胞接种在6孔板中，以每孔2×105个细胞的密度孵育24小时，并用[Ru（dpp）3]2+Cl2（最终浓度为30μM）处理4小时。然后将含有材料的新鲜培养基加入培养皿中孵育一段时间，用荧光显微镜观察红色荧光图像。
2）细胞内ROS含量检测：
将4T1细胞接种在6孔板上并培养24小时，每孔细胞数达到1×105个。在与含有不同材料的培养基（a）Cu-GA、（b）Cu-GA+H2O2孵育不同时间（0小时、2小时、4小时）后，吸去含有材料的培养液，用PBS溶液洗涤三次。随后，将含有2′，7′-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）的新鲜培养基添加到每个孔中，并将混合物在37°C下孵育15分钟。最后，通过荧光显微镜观察绿色荧光图像。
3）细胞内GSH含量检测：
将4T1细胞以每皿5×106个细胞的密度接种到培养板中，并用（a）对照、（b）Cu-GA、处理12 h。根据制造商的说明，使用GSH检测试剂盒（北京索拉比科技有限公司，BC1175）检测GSH的量。
图8中红色荧光随时间逐渐减弱，说明氧气浓度逐渐增加；图9中绿色荧光随时间逐渐增强，说明产生ROS的量增多；加入过氧化氢后，绿色荧光也会增强，是因为芬顿反应产生ROS需要过氧化氢；图10中铜-没食子酸能够消耗细胞内的谷胱甘肽，与不加材料的对比，加入铜-没食子酸后细胞内的谷胱甘肽仅剩33.35%，细胞实验验证了铜-没食子酸可有效改善肿瘤微环境。
细胞毒性试验：
将4T1接种在96孔板中并孵育24小时。通过细胞计数器测量细胞数量，达到每孔8000个细胞。然后分别以不同浓度（0、1.7、3.5、7.5、15、31、62、125、250、500 μg mL-1）的铜-没食子酸孵育细胞。24小时后，加入MTT检测细胞毒性，用酶微板读取器测量490nm处的吸光度。
通过细胞毒性试验（图11）证明了，该纳米酶对4T1细胞具有毒性，能够显著杀死肿瘤细胞。
细胞形态学观察：
将4T1细胞接种到6孔板中，孵育24h，使细胞数量达到2×105，然后用含有不同浓度的铜-没食子酸的培养基孵育4小时。使用荧光显微镜进一步观察细胞的形态。
通过观察细胞形态证明了该纳米酶能够使4T1细胞肿胀破裂，发生细胞焦亡，如图12所示，随着材料浓度增大，细胞焦亡的现象越来越明显，主要表现为细胞肿胀，起泡，细胞膜破裂，这是因为铜-没食子酸可被谷胱甘肽、微酸、过氧化氢特异性降解，释放出铜离子和没食子酸，铜-没食子酸纳米酶在短时间内降解大量释放出的铜离子将在肿瘤处大量积聚，导致肿瘤细胞内离子浓度失衡，进而诱导肿瘤细胞发生焦亡，驱动细胞起泡、肿胀、细胞膜破裂、溶解和促炎细胞因子的释放。
铜-没食子酸生物可降解性实验：
通过模拟肿瘤微环境中谷胱甘肽和过氧化氢的浓度以及其酸性环境，来评估铜-没食子酸的生物可降解能力。如图13所示，分别在GSH (3 mM)、H2O2(100 μM)或酸性条件下，铜-没食子酸都能够随时间降解，配位结构被破坏，针状逐渐消失，释放出铜离子和没食子酸，而且酸性越强，降解速度越快。
实施例2
针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法，包括如下步骤：1）称取100 mg PVP k30与5mL水混合，超声溶解；
2）称取70mg CuCl2·2H2O与40 mL水混合，超声溶解；
3）在800 rpm搅拌下混合PVP k30水溶液和CuCl2·2H2O水溶液，搅拌75min后，得到前驱体溶液；
4）缓慢加入5 mL没食子酸水溶液(10 mg/mL)至前驱体溶液中；
5）然后用氢氧化钠（NaOH）溶液将溶液调节至pH值为10；
6）室温搅拌16h后，通过14000 rpm离心20min获得深绿色固体产物。
实施例3
针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法，包括如下步骤：1）称取50 mg PVP k30与5mL水混合，超声溶解；
2）称取90 mg CuCl2·2H2O与40 mL水混合，超声溶解；
3）在800 rpm搅拌下混合PVP k30水溶液和CuCl2·2H2O水溶液，搅拌100min后，得到前驱体溶液；
4）缓慢加入5 mL没食子酸水溶液(10 mg/mL)至前驱体溶液中；
5）然后用氢氧化钠（NaOH）溶液将溶液调节至pH值为14；
6）室温搅拌8h后，通过14000 rpm离心20min获得深绿色固体产物。
对比例1
针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法，包括如下步骤：1）称取250 mg PVP k30与5mL水混合，超声溶解；
2）称取50 mg CuCl2·2H2O与40 mL水混合，超声溶解；
3）在800 rpm搅拌下混合PVP k30水溶液和CuCl2·2H2O水溶液，搅拌75分钟后，得到前驱体溶液；
4）缓慢加入5 mL没食子酸水溶液(10 mg/mL)至前驱体溶液中；
5）然后用氢氧化钠（NaOH）溶液将溶液调节至pH值为13；
6）室温搅拌12小时后，通过14000 rpm离心20分钟获得深绿色固体产物。
将对比例1制备铜-没食子酸纳米酶通过透射电镜进行表征，从图中可以看到制备的纳米酶为不规则的纳米颗粒，如图2所示，该产品不符合要求。一方面该纳米颗粒不规则、且不均匀分散；二是与针状的纳米颗粒相比，相同质量该纳米颗粒中形成的有效络合成份（即铜粒子与没食子酸的配位）降低，反映在紫外吸收光谱中550-800 nm的峰降低。
原因：改变了二价铜离子与没食子酸的摩尔比至1:1，如图14所示。
对比例2
针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法，包括如下步骤：1）称取250 mg PVP k30与5mL水混合，超声溶解；
2）称取16 mg CuCl2·2H2O与40 mL水混合，超声溶解；
3）在800 rpm搅拌下混合PVP k30水溶液和CuCl2·2H2O水溶液，搅拌75分钟后，得到前驱体溶液；
4）缓慢加入5 mL没食子酸水溶液(10 mg/mL)至前驱体溶液中；
5）然后用氢氧化钠（NaOH）溶液将溶液调节至pH值为13；
6）室温搅拌12小时后，通过14000 rpm离心20min获得深绿色固体产物。
改变了二价铜离子与没食子酸的摩尔比至0.3:1，如图14所示，将对比例2中制备的的铜-没食子酸纳米酶通过透射电镜进行表征，从图3中可以看到制备的铜-没食子酸为长短不均匀的针状纳米颗粒。
对比例3
针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法，包括如下步骤：1）称取250 mg PVP k30与5mL水混合，超声溶解；
2）称取150 mg CuCl2·2H2O与40 mL水混合，超声溶解；
3）在800 rpm搅拌下混合PVP k30水溶液和CuCl2·2H2O水溶液，搅拌75分钟后，得到前驱体溶液；
4）缓慢加入5 mL没食子酸水溶液(10 mg/mL)至前驱体溶液中；
5）然后用氢氧化钠（NaOH）溶液将溶液调节至pH值为13；
6）室温搅拌12小时后，通过14000 rpm离心20分钟获得深绿色固体产物。
改变了二价铜离子与没食子酸的摩尔比至3:1，如图14所示，将对比例3中制备的铜-没食子酸纳米酶通过透射电镜进行表征，从图4中可以看到制备的铜-没食子酸为团聚且不均匀的纳米颗粒，该产品不符合要求。一方面太团聚会影响细胞内吞，导致细胞和活体实验效果不佳；另一方面不利于后续表面修饰和与其他药物结合。
原因是：改变了PVP、铜离子与没食子酸的投料比。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
将聚乙烯吡咯烷酮和可溶性铜盐的混合溶液搅拌设定时间后，加入没食子酸溶液，并调节其pH值至12-14，持续搅拌反应8-16h，固液分离，即得铜-没食子酸纳米粒子；
二价铜离子与没食子酸的摩尔比为1.6-1.8:1；
所述聚乙烯吡咯烷酮的分子量为44000-54000。
2.根据权利要求1所述的针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法，其特征在于：聚乙烯吡咯烷酮的粘度等级为K30。
3.根据权利要求1所述的针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法，其特征在于：所述可溶性铜盐为氯化铜。
4.根据权利要求1所述的针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法，其特征在于：聚乙烯吡咯烷酮和可溶性铜盐的混合溶液搅拌混合的时间为60-120min。
5.根据权利要求1所述的针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法，其特征在于：加入没食子溶液后，采用氢氧化钠调节其pH值。
6.根据权利要求1所述的针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法，其特征在于：采用氢氧化钠调节溶液的pH值至13。
7.根据权利要求1所述的针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法，其特征在于：二价铜离子与没食子酸的摩尔比为1.7-1.8:1。
8.根据权利要求1所述的针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法，其特征在于：持续搅拌反应的时间为10-14h；搅拌速率为500-1000rpm。
9.一种针状铜-没食子酸纳米酶，其特征在于：由权利要求1-8任一所述的针状铜-没食子酸纳米酶的制备方法制备而成。
10.权利要求9所述针状铜-没食子酸纳米酶在制备肿瘤微环境改善剂或细胞焦亡诱导剂中的应用。
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