CN115997722A - Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法 - Google Patents
Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115997722A CN115997722A CN202211678847.6A CN202211678847A CN115997722A CN 115997722 A CN115997722 A CN 115997722A CN 202211678847 A CN202211678847 A CN 202211678847A CN 115997722 A CN115997722 A CN 115997722A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hiapp
- oligomer
- abeta
- human primate
- induced
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 238000011809 primate model Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims abstract description 37
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims abstract description 28
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 101001081479 Homo sapiens Islet amyloid polypeptide Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 14
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 12
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108010064539 amyloid beta-protein (1-42) Proteins 0.000 claims description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 5
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 claims description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims description 3
- 210000004227 basal ganglia Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 3
- 230000002739 subcortical effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000003478 temporal lobe Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 claims description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 abstract description 8
- 238000010171 animal model Methods 0.000 abstract description 6
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 abstract description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 210000002220 organoid Anatomy 0.000 description 9
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 6
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 4
- 230000007792 alzheimer disease pathology Effects 0.000 description 3
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 3
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 3
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 230000006386 memory function Effects 0.000 description 2
- 210000002682 neurofibrillary tangle Anatomy 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012549 training Methods 0.000 description 2
- 238000010173 Alzheimer-disease mouse model Methods 0.000 description 1
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000002528 anti-freeze Effects 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000012335 pathological evaluation Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 230000003936 working memory Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及非人灵长类实验动物AD疾病造模技术领域，具体公开了Aβ42‑hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法，使用Aβ42‑hIAPP共寡聚化物注射到非人灵长类动物的双侧脑实质内诱导阿尔茨海默病模型。所述Aβ42‑hIAPP共寡聚化物由可溶性β‑淀粉样蛋白42寡聚体与人胰岛淀粉样蛋白多肽合成。通过采用本方法，相比现有方法能够诱导出更接近于阿尔茨海默病的非人灵长类动物病理表征。
Description
技术领域
本发明涉及非人灵长类实验动物AD疾病造模技术领域，具体涉及Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法。
背景技术
阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)，是一种渐进性发展、与衰老相关的神经退行性疾病。由于年龄、遗传和代谢等各种生物变化及环境的影响，人类极易罹患AD，且很难在其他物种中复制。由于目前AD病因不明且发病机制复杂，导致缺乏早期诊断方法和有效治疗手段，并且长期照顾AD患者需消耗大量人力、财力和专业设施，也给患者、家庭和社会带来了极大的精神和经济负担。自2003年以来，除2021年6月FDA加速审批了一个颇具争议又缺乏有效性证据的单抗药物Aducanumab外，基本没有用于治疗AD的新药获批，亦没有缓解AD疾病疗法的获批。这主要是因为AD发病机制、新药研发和早期诊断等研究均需要建立在“拟临床”动物模型上，但到目前为止，在动物整体水平内仍缺乏可以真实模拟AD病程发展、临床表征和病理特征的动物模型。因此，动物模型研究的滞后是AD机制研究及其新药研发转化效率低下的瓶颈。虽然此前以啮齿类动物(小鼠和大鼠)为模型对AD相关研究做出了一些贡献，但最终将其研究成果应用于临床转化试验时几乎均以失败告终。因此，目前得出的结论是：以家族性AD小鼠模型作为临床前药物转化和评价的研究结果无法直接应用于人类临床试验。由此可见，更高进化程度的大脑对于表现出AD的全谱特征是至关重要的。
目前的研究表明，非人灵长类(Nonhuman Primate,NHP)是构建AD模型最理想的动物来源。虽然当前对非人灵长类的AD模型也有一些研究，比如目前公开有单独使用Aβ寡聚物(AβOligomers,AβO)诱导AD模型的方法，但采用上述方法目前为止尚未在非人灵长类中发现较为完整的AD临床病理。
发明内容
本发明针对上述技术问题提供一种能够获得更接近阿尔茨海默病病理表征的Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法，使用Aβ42-hIAPP共寡聚化物注射到非人灵长类动物的双侧脑实质内诱导阿尔茨海默病模型。
优选的，所述Aβ42-hIAPP共寡聚化物由可溶性β-淀粉样蛋白42寡聚体与人胰岛淀粉样蛋白多肽合成。
优选的，所述双侧脑实质为所述双侧脑实质的白质区域。
优选的，所述双侧脑实质的白质区域包括基底节、海马、颞叶之间的双侧海马上方的皮层下脑实质内。
优选的，包括注射方法，所述注射方法是先对非人灵长类动物进行头MRI定位相扫描，之后确定注射位点后，用立体定向手术方法进行脑内注射Aβ42-hIAPP共寡聚化物。
优选的，所述Aβ42-hIAPP共寡聚化物的合成方法如下：
(1)Aβ42以及hIAPP冻干肽分别溶于100％1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇中，浓度1mM，室温孵育1h后，将含hIAPP肽溶液于温和的氮气流下蒸发1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇得到干燥hIAPP肽膜；
(2)Aβ42与hIAPP肽膜分别在二甲亚砜中重悬，然后在浓度10mM HEPES缓冲液中进一步稀释，最终浓度为皆为110μM；
(3)快速取两体系1：1混匀，4℃共同孵育24h即得Aβ42-hIAPP共寡聚化物。
本发明与现有技术相比的有益效果：
通过采用本方法，相比现有方法能够诱导出更接近于阿尔茨海默病的非人灵长类动物病理表征。
附图说明
图1是非人灵长类实验动物进行DMTS的测试图；
图2是透射电镜观察下AβO的形态图；
图3是透射电镜观察下hIAPP的形态图；
图4是透射电镜观察下Aβ42-hIAPP共寡聚化物的形态图；
图5是Westernblot验证AβO、hIAPP、Aβ42-hIAPP共寡物和Aβ42-hIAPP共寡物光交联后的产物；
图6是在SH-SY5Y细胞中与不同浓度的AβO、hIAPP和Aβ42-hIAPP共寡聚物孵育下细胞形态图；
图7是通过MTT试剂盒对不同浓度的AβO、hIAPP、Aβ42-hIAPP进行细胞活性测定图；
图8是通过免疫荧光染色方法对分别注射AβO，Aβ42-hIAPP共寡聚物的脑类器官切片进行AD病理评估图。
具体实施方式
Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法，使用Aβ42-hIAPP共寡聚化物注射到非人灵长类动物(本实施例优选老年食蟹猴)的双侧脑实质内(本实施例的具体位置为基底节、海马、颞叶之间的双侧海马上方的皮层下脑实质内)诱导阿尔茨海默病模型。所述Aβ42-hIAPP共寡聚化物由可溶性β-淀粉样蛋白42寡聚体(Solubleβ-amyloid 1-42Oligomer,AβO)与人胰岛淀粉样蛋白多肽(Human islet amyloid polypeptide，hIAPP)合成(本实施例在合成Aβ42-hIAPP共寡聚化物后还进行鉴定)。
优选的，包括注射方法，所述注射方法是先对非人灵长类动物进行头MRI定位相扫描，之后确定注射位点后，用立体定向手术方法进行脑内注射Aβ42-hIAPP共寡聚化物。比如本步骤可优选通过MRI导引的对流增强给药(Convection Enhanced Delivery,CED)技术立体定向注射到老年食蟹猴所述双侧脑实质内，并进行至少6个月以上的观察(作为实验组)并与现有技术中AβO诱导方法(作为对照组)的结果进行对比。
对比实验具体操作如下：
(一)AβO、IAPP原纤维和Aβ42-hIAPP共寡聚体合成
按照现有方法制备AβO、IAPP原纤维；按照如下方法合成Aβ42-hIAPP共寡聚体：
(1)Aβ42以及hIAPP冻干肽分别溶于100％1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇中，浓度1mM，室温孵育1h后，将含hIAPP肽溶液于温和的氮气流下蒸发1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇得到干燥hIAPP肽膜；
(2)Aβ42与hIAPP肽膜分别在二甲亚砜中重悬，然后在浓度10mM HEPES缓冲液中进一步稀释，最终浓度为皆为110μM；
(3)快速取两体系1：1混匀，4℃共同孵育24h即得Aβ42-hIAPP共寡聚化物。
(二)立体定向食蟹猴双侧脑实质注射
采用核磁共振扫描，并在核磁共振图像上标记需要注射的靶部位(海马上方外侧)。动物麻醉后，使用对流增强给药技术分别向脑内立体定向注射AβO和Aβ42-hIAPP共寡聚物。
(三)认知行为学测试及评价
通过延迟匹配样本比对任务(Delayed Matching-to-Sample,DMTS)测试非人灵长类动物空间和物体工作记忆。
DMTS测试：通过造模前进行的训练，使动物掌握规则，正式测试时，将食饵放在动物可以看到但却拿不到的位置，并在其注视下用目标测试杯将食饵盖住，给动物短暂时间(1-3s)观察目标测试杯(图1-①)；上升黑色挡板，引入与目标测试杯形状和颜色均不同的干扰杯，根据随机表设定的位置进行摆放，且同一位置出现食物的次数不超过3次，维持特定的延迟时间，计时(图1-②)；延迟时间过后，将黑色挡板下降，并将目标测试杯与干扰杯同时推至动物可以操作的距离，让动物选择，选择目标测试杯将会得到食物奖励，反之，则不会得到食物奖励(图1-③)。
通过比较实验组(6只食蟹猴)与对照组(6只食蟹猴)在随机延迟时间(0s、30s、60s、90s、120s)下对物体识别的记忆能力，以此判断动物的认知记忆功能是否减退及记忆功能减退的程度。每只猴子每天测试30次，周期为5天，共测试150次，记录动物在延迟时间随机的情况下，30次测试的正确率。
(四)组织病理相关分析
当动态检测到体液生物标记物和/或测评其认知行为学结果发生显著变化时，对动物安乐死并进行尸体解剖，收集脑组织，一部分经固定、沉糖后，使用平推切片机将脑组织切成40μm的脑片，置于防冻液中，标记后，保存至-20℃冰箱，用于组织病理学检测。一部分直接速冻在-80℃冰箱，用于Western免疫印迹验证。
(五)对比实验结果
1、体外合成的AβO、hIAPP和Aβ42-hIAPP共寡物结果比对
通过透射电镜观察体外合成的AβO、hIAPP和Aβ42-hIAPP共寡物形态。其中如图2所示，AβO呈典型的斑点状；如图3所示hIAPP呈纤维状；而如图4所示，Aβ42-hIAPP共寡物则缠结在一起，并采用PICUP方法分析形成Aβ42-hIAPP共寡聚物的亚稳态或中间形态的聚合物，使用SDS-PAGE和Western免疫印迹分析，以鉴定所合成寡聚物的质量状况，结果如图5所示。通过硫磺素T实验测定两种蛋白在不同时间和不同浓度条件下共同孵育的动力学特征。
2、DMTS测试结果比对：
造模前测试是指：造模前需要对筛选出的食蟹猴先进行长期的常规训练直至测试的正确率达到要求的分值后才能用于行为学试验；
表1
通过开展DMTS的记忆能力行为学试验对比，由上可知：与单独应用可溶性β-淀粉样蛋白42寡聚体(AβO)相比，采用Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的实验组造模后其记忆力明显衰退，表明采用Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD动物模型相比传统造模具有显著的进步。
3、病理表征结果如下表：
表2
由上可知：与单独应用可溶性β-淀粉样蛋白42寡聚体(AβO)相比，Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的食蟹猴AD模型会出现显著的老年斑和β淀粉样蛋白阳性神经元，同时发现更多的磷酸化tau和神经纤维缠结，突触密度显著降低，胶质细胞激活并产生炎症小体，最为重要的是发现神经元发生变性和死亡，更接近AD脑病理表征。
(六)为了提供Aβ42-hIAPP共寡聚物更直观的效果证明1、对Aβ42-hIAPP共寡聚物在细胞中的毒性进行测定
为了评估AβO、hIAPP和Aβ42-hIAPP共寡聚物的神经毒性，在SH-SY5Y细胞中与不同浓度的AβO、hIAPP和Aβ42-hIAPP共寡聚物孵育，观察了不同培养时间和不同浓度下细胞形态变化，在明场下观察，随着IAPP-Aβ(IAPP-Aβ)浓度增高及对细胞作用时间增加，细胞损伤越严重，与对照组相比细胞完整性受到破坏，细胞轮廓不清晰，以至最后成为细胞碎片(如图6)。还通过MTT试剂盒对其进行细胞活性测定，随着AβO(Aβ)、hIAPP(IAPP)、Aβ42-hIAPP(Aβ-IAPP)的浓度升高，细胞活力越低，并且加Aβ42-hIAPP的组与加单独的AβO、hIAPP的组相比细胞活力显著下降，进一步验证了Aβ42-hIAPP对细胞的损伤(如图7)。
2、使用Aβ42-hIAPP共寡聚物在人源全脑类器官中诱导出AD病理
通过免疫荧光染色方法对注射Aβ42-hIAPP共寡聚物的脑类器官切片进行AD病理评估，如图8所示，注射Aβ42-hIAPP共寡聚物组的脑类器官相较于注射AβO组，产生的Aβ病理更密集，并且有大面积Aβ斑块产生；而对于p-Tau病理，Aβ42-hIAPP共寡聚物组的脑类器官产生了与AD病人类似的神经纤维缠结，而这在注射AβO组的脑类器官中暂时还未发现。表明通过合成的Aβ42-hIAPP共寡聚物注射到人源脑类器官实质中的方法，成功构建AD脑类器官病理模型，并且通过注射Aβ42-hIAPP共寡聚物诱导脑类器官产生的AD病理比注射AβO的脑类器官产生的病理更严重。因此，通过对构建的实质注射Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导AD脑类器官病理模型的方法，可以有效获得一种相比传统方法更好的AD病理模型。
以上内容是结合具体实施方式对本专利所作的详细说明，不能认定本专利的具体实施方式只局限于上述说明。对于本专利所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利构思的前提下，对上述已描述的实施方式做出的若干替代或变型，都应视为属于本专利的保护范围。在本说明书的描述中，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。在不相互矛盾的情况下，本领域技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。尽管已经详细描述了本发明的实施例及其优点，但应当理解，在不脱离专利申请的保护范围的情况下，可以在本文中进行各种改变、替换和变更。
Claims (6)
1.Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法，其特征在于：使用Aβ42-hIAPP共寡聚化物注射到非人灵长类动物的双侧脑实质内诱导阿尔茨海默病模型。
2.根据权利要求1所述的Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法，其特征在于：所述Aβ42-hIAPP共寡聚化物由可溶性β-淀粉样蛋白42寡聚体与人胰岛淀粉样蛋白多肽合成。
3.根据权利要求1所述的Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法，其特征在于：所述双侧脑实质为所述双侧脑实质的白质区域。
4.根据权利要求3所述的Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法，其特征在于：所述双侧脑实质的白质区域包括基底节、海马、颞叶之间的双侧海马上方的皮层下脑实质内。
5.根据权利要求1所述的Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法，其特征在于，包括注射方法，所述注射方法是先对非人灵长类动物进行头MRI定位相扫描，之后确定注射位点后，用立体定向手术方法进行脑内注射Aβ42-hIAPP共寡聚化物。
6.根据权利要求2所述的Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法，其特征在于：所述Aβ42-hIAPP共寡聚化物的合成方法如下：
(1)Aβ42以及hIAPP冻干肽分别溶于100％1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇中，浓度1mM，室温孵育1h后，将含hIAPP肽溶液于温和的氮气流下蒸发1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇得到干燥hIAPP肽膜；
(2)Aβ42与hIAPP肽膜分别在二甲亚砜中重悬，然后在浓度10mM HEPES缓冲液中进一步稀释，最终浓度皆为110μM；
(3)快速取两体系1：1混匀，4℃共同孵育24h，即得Aβ42-hIAPP共寡聚化物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211678847.6A CN115997722A (zh) | 2022-12-26 | 2022-12-26 | Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211678847.6A CN115997722A (zh) | 2022-12-26 | 2022-12-26 | Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115997722A true CN115997722A (zh) | 2023-04-25 |
Family
ID=86027727
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211678847.6A Pending CN115997722A (zh) | 2022-12-26 | 2022-12-26 | Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115997722A (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040197831A1 (en) * | 2001-03-16 | 2004-10-07 | Cornell Research Foundation, Inc. | Anti-amyloid peptide antibody based diagnosis and treatment of a neurological disease or disorder |
| US20130289140A1 (en) * | 2012-04-30 | 2013-10-31 | Centre National De La Recherche Scientifique | Biological complex specific for alzheimer's disease detection in vitro and use thereof |
| CN104010641A (zh) * | 2011-10-27 | 2014-08-27 | 普罗蒂奥科技有限公司 | 用于治疗淀粉样蛋白病和共核蛋白病的含咖啡因的化合物和组合物 |
| US20190330271A1 (en) * | 2015-11-25 | 2019-10-31 | Hangzhou Wisdom Panacea Biologics Co., Ltd. | Polypeptide binding to a plurality of amyloid monomers and aggregates, and use thereof |
| CN115354048A (zh) * | 2022-06-08 | 2022-11-18 | 暨南大学 | 阿尔茨海默病动物模型的构建方法、用途和Aβ42重组表达载体 |
-
2022
- 2022-12-26 CN CN202211678847.6A patent/CN115997722A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040197831A1 (en) * | 2001-03-16 | 2004-10-07 | Cornell Research Foundation, Inc. | Anti-amyloid peptide antibody based diagnosis and treatment of a neurological disease or disorder |
| CN104010641A (zh) * | 2011-10-27 | 2014-08-27 | 普罗蒂奥科技有限公司 | 用于治疗淀粉样蛋白病和共核蛋白病的含咖啡因的化合物和组合物 |
| US20130289140A1 (en) * | 2012-04-30 | 2013-10-31 | Centre National De La Recherche Scientifique | Biological complex specific for alzheimer's disease detection in vitro and use thereof |
| US20190330271A1 (en) * | 2015-11-25 | 2019-10-31 | Hangzhou Wisdom Panacea Biologics Co., Ltd. | Polypeptide binding to a plurality of amyloid monomers and aggregates, and use thereof |
| CN115354048A (zh) * | 2022-06-08 | 2022-11-18 | 暨南大学 | 阿尔茨海默病动物模型的构建方法、用途和Aβ42重组表达载体 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 卢静: "《实验动物专业技术人员等级培训教材 中级》", vol. 1, 31 March 2017, 中国协和医科大学出版社, pages: 151 - 152 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ellegood et al. | Neuroanatomical analysis of the BTBR mouse model of autism using magnetic resonance imaging and diffusion tensor imaging | |
| Gary et al. | Encephalopathy induced by Alzheimer brain inoculation in a non-human primate | |
| Hainsworth et al. | Translational models for vascular cognitive impairment: a review including larger species | |
| White et al. | Sarm1 deletion suppresses TDP-43-linked motor neuron degeneration and cortical spine loss | |
| Nairismägi et al. | Progression of brain damage after status epilepticus and its association with epileptogenesis: a quantitative MRI study in a rat model of temporal lobe epilepsy | |
| Sigurdsson et al. | Bilateral injections of amyloid-β 25-35 into the amygdala of young Fischer rats: behavioral, neurochemical, and time dependent histopathological effects | |
| Badea et al. | The fornix provides multiple biomarkers to characterize circuit disruption in a mouse model of Alzheimer's disease | |
| Bearer et al. | Alterations of functional circuitry in aging brain and the impact of mutated APP expression | |
| Blezer et al. | Quantitative MRI‐pathology correlations of brain white matter lesions developing in a non‐human primate model of multiple sclerosis | |
| Bagdatlioglu et al. | Cognitive impairment appears progressive in the mdx mouse | |
| Allemang-Grand et al. | Altered brain development in an early-onset murine model of Alzheimer's disease | |
| CN115997722A (zh) | Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法 | |
| Stabler et al. | In vivo noninvasive monitoring of a tissue engineered construct using 1H NMR spectroscopy | |
| Blaikie et al. | Experimental modelling of Alzheimer's disease for therapeutic screening | |
| KR101081358B1 (ko) | 자기공명분광법을 이용한 뇌 대사물질의 양적 측정에 의한 파킨슨 질환의 진단방법 | |
| Vorisek et al. | Brain diffusivity and structural changes in the R6/2 mouse model of Huntington disease | |
| Smith et al. | Investigation of feline brain anatomy for the detection of cortical spreading depression with magnetic resonance imaging | |
| CN115786260B (zh) | Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD脑类器官病理模型方法 | |
| Jupp et al. | MRI compatible electrodes for the induction of amygdala kindling in rats | |
| Almeida et al. | Impact of the sound of magnetic resonance imaging pulse sequences in awake mice | |
| Rattray et al. | Novel Cage Stress Alters Remote Contextual Fear Extinction and Regional T 2 Magnetic Resonance Relaxation Times in TASTPM Mice Overexpressing Amyloid | |
| Blackshear et al. | A novel operant testing regimen for multi-construct cognitive characterization of a murine model of Alzheimer’s amyloid-related behavioral impairment | |
| CN108186674A (zh) | 一种动物老年痴呆模型的建立方法及应用 | |
| Tenhunen et al. | Monitoring the CNS pathology in aspartylglucosaminuria mice | |
| 윤은정 et al. | Effects of AF64A induction on the cholinergic and amyloidogenic pathways in human neural stem cells and rat brain for Alzheimer’s disease models |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |