CN115996715A - 病毒性结膜炎的治疗 - Google Patents

Abstract

本文提供了用于治疗、减少、预防、抑制、减轻、改善或减缓眼部复制或感染，如病毒性结膜炎的组合物和方法。本公开内容的某些实施方案涉及产品组合，其包括一种或多种核糖核酸酶，如豹蛙酶，或它们的变体、衍生物、类似物、片段或药学上可接受的盐，以及一种或多种另外的治疗剂，如血管收缩剂、抗生素、免疫调节化合物或类固醇。

Description

病毒性结膜炎的治疗

领域

本公开内容涉及用于治疗、预防、抑制、减轻、改善或减缓病毒眼部复制或感染的产品组合及其使用方法。此类眼部感染包括但不限于来自病毒的腺病毒或疱疹病毒科的病毒感染。

背景

结膜炎，通常被称为粉红眼，是引起肿胀和刺激的眼部炎症。它影响结膜，结膜是覆盖眼球巩膜并排列于眼睑的内表面的透明薄膜。尽管过敏、化学刺激物和潜在疾病也可起作用，但结膜炎通常是由病毒或细菌感染引起的。结膜炎的症状包括但不限于巩膜和/或内眼睑发红、眼痒(眼部发痒)、异物感(眼沙砾或眼刺痒)、眼部灼热、视力模糊、对光的敏感度增加或畏光、内眼睑肿胀、泪液产量增多、水样溢液、可在睡眠时使睫毛结痂的黏脓性分泌物。病毒性和细菌性结膜炎都具有高度传染性。

虽然通常由发热细菌，如葡萄球菌或链球菌引起的细菌性结膜炎可以使用滴眼剂、药丸或软膏形式的抗生素治疗，但目前还没有治疗病毒性结膜炎的方法。病毒性结膜炎主要由腺病毒科中的病毒引起，每年占病毒性结膜炎病例的多达90％。尽管腺病毒性结膜炎通常是一种自限性疾病，但腺病毒性结膜炎患者的亚组通常会有严重的且威胁视力的长期后遗症，因为该疾病会导致角膜瘢痕形成。疱疹性病毒感染是第二种最常见的病毒性结膜炎形式，在性质上通常更严重，感染持续时间更长，并与感染的临床体征和症状相关。

因此，需要开发针对病毒性结膜炎的药物组合物和治疗方式。

概述

本文描述了用于治疗、预防、抑制、减轻、改善或减缓病毒眼部复制或感染的组合物(包括产品组合)，以及使用其用于治疗、预防、抑制、减轻、改善或减缓病毒眼部复制或感染的方法。这些组合致力于治疗多种感染，诸如例如细菌性和病毒性结膜炎，或提高病毒性结膜炎内的治疗价值，如解决传染和相关的临床体征和症状。

本文提供的一些实施方案涉及抑制或减缓眼部感染的产品组合。在一些实施方案中，产品组合包括治疗有效量的一种或多种核糖核酸酶(RNA酶)，和治疗有效量的一种或多种另外的治疗剂。在一些实施方案中，另外的治疗剂是血管收缩剂、抗生素、免疫调节化合物、类固醇或以上的组合。

在一些实施方案中，一种或多种RNA酶是豹蛙酶、其类似物、变体、衍生物或片段。在一些实施方案中，一种或多种豹蛙酶、其类似物、变体、衍生物或片段以约0.001％至约1％w/v的量存在。

在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂是萘甲唑林、四氢唑啉、苯肾上腺素、羟甲唑啉、溴莫尼定、阿可乐定、麻黄碱、阿奇霉素、红霉素、庆大霉素、新霉素、妥布霉素、贝西沙星、环丙沙星、加替沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、氧氟沙星、杆菌肽、氯霉素、短杆菌肽、纳他霉素、多粘菌素B、磺胺醋酰、四环素、甲氧苄啶、万古霉素、地塞米松、二氟泼尼酯、氟米龙、氯替泼诺、泼尼松龙、利美索龙、环孢霉素A、NLRP3抑制剂、双氯芬酸、酮咯酸、溴芬酸、奈帕芬胺、氟比洛芬、立他司特，或者以上的药学上可接受的盐、类似物或衍生物。在一些实施方案中，NLRP3抑制剂是Ac-YVAD-cmk、2-APB、阿格拉宾、BAPTA、BAY 11-7082、β-羟基丁酸酯(BHB)、C172、CY-09、氟芬那酸、格列本脲、INF39、异甘草素、MCC950、甲芬那酸、3,4-亚甲二氧基-β-硝基苯乙烯(MNS)、OLT1177、冬凌草甲素、小白菊内酯、白藜芦醇、萝卜硫素、曲尼司特、VX-765或Z-VAD-FMK。在一些实施方案中，另外的治疗剂以0.001％至5％w/v的浓度存在。

在一些实施方案中，一种或多种RNA酶包括约0.001％至约1％w/v的浓度的豹蛙酶，并且一种或多种另外的治疗剂包括0.001％至0.1％w/v的浓度的萘甲唑林、羟甲唑啉或溴莫尼定。

在一些实施方案中，产品组合包括以约0.03％w/v的量存在的豹蛙酶，和以约0.01％至约0.025％w/v的量存在的羟甲唑啉。在一些实施方案中，产品组合包括以约0.03％w/v的量存在的豹蛙酶和以约0.01％至约0.025％w/v的量存在的溴莫尼定。

在一些实施方案中，眼部感染是病毒性结膜炎。在一些实施方案中，病毒性结膜炎是流行性角结膜炎、咽结膜热、非特异性散发性滤泡性结膜炎或慢性乳头性结膜炎。在一些实施方案中，病毒性结膜炎由来自腺病毒科或疱疹病毒科的病毒感染引起，诸如例如人腺病毒B、人腺病毒D、人腺病毒E、单纯疱疹病毒(HSV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、Epstein-Barr病毒(EBV)、人巨细胞病毒(CMV)或带状疱疹病毒(HZV)。在一些实施方案中，人腺病毒B是人腺病毒B血清型3、人腺病毒B血清型7、人腺病毒B血清型11或以上的任意组合。在一些实施方案中，人腺病毒D是人腺病毒D血清型8、人腺病毒D血清型13、人腺病毒D血清型19、人腺病毒D血清型37或以上的任意组合。在一些实施方案中，人腺病毒E是人腺病毒E血清型4。

在一些实施方案中，产品组合还包括一种或多种药学上可接受的载体和任选地一种或多种药学上可接受的组分。

在一些实施方案中，一种或多种RNA酶和一种或多种另外的治疗剂配制成单一制剂或单一剂量。在一些实施方案中，一种或多种RNA酶在第一组合物中制备，并且一种或多种另外的治疗剂在第二组合物中制备。在一些实施方案中，第一组合物与第二组合物是分开的。在一些实施方案中，产品组合被配制为用于眼科给药途径的眼科制剂。在一些实施方案中，产品组合被配制为通过眼部滴注、眼部冲洗、眼内注射、角膜内注射、玻璃体内注射或结膜下注射给药。在一些实施方案中，产品组合是控释递送平台。在一些实施方案中，控释递送平台是延长释放制剂或持续释放制剂。在一些实施方案中，产品组合是眼部植入物、眼科植入物、泪点塞、眼内植入物、角膜内植入物或结膜下植入物。在一些实施方案中，产品组合每天给药两次。在一些实施方案中，产品组合每天给药4次。在一些实施方案中，产品组合每天给药8次。在一些实施方案中，产品组合包括约25mM的量的豹蛙酶和0.01％至0.025％w/的v量的羟甲唑啉。

本文提供的一些实施方案涉及减少或抑制对象中的眼部感染的方法。在一些实施方案中，方法包括选择需要减少或抑制眼部感染的产品组合的对象，以及向对象给药包括治疗有效量的一种或多种核糖核酸酶(RNA酶)和治疗有效量的一种或多种另外的治疗剂的产品组合。在一些实施方案中，产品组合是如本文所述的任何产品组合。在一些实施方案中，另外的治疗剂是血管收缩剂、抗生素、免疫调节化合物、类固醇或以上的组合。在一些实施方案中，一种或多种RNA酶是豹蛙酶、其类似物、变体、衍生物或片段。在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂是萘甲唑林、四氢唑啉、苯肾上腺素、羟甲唑啉、溴莫尼定、阿可乐定、麻黄碱、阿奇霉素、红霉素、庆大霉素、新霉素、妥布霉素、贝西沙星、环丙沙星、加替沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、氧氟沙星、杆菌肽、氯霉素、短杆菌肽、纳他霉素、多粘菌素B、磺胺醋酰、四环素、甲氧苄啶、万古霉素、地塞米松、二氟泼尼酯、氟米龙、氯替泼诺、泼尼松龙、利美索龙、环孢霉素A、NLRP3抑制剂、双氯芬酸、酮咯酸、溴芬酸、奈帕芬胺、氟比洛芬、立他司特，或者以上的药学上可接受的盐、类似物或衍生物。在一些实施方案中，NLRP3抑制剂是Ac-YVAD-cmk、2-APB、阿格拉宾、BAPTA、BAY 11-7082、β-羟基丁酸酯(BHB)、C172、CY-09、氟芬那酸、格列本脲、INF39、异甘草素、MCC950、甲芬那酸、3,4-亚甲二氧基-β-硝基苯乙烯(MNS)、OLT1177、冬凌草甲素、小白菊内酯、白藜芦醇、萝卜硫素、曲尼司特、VX-765或Z-VAD-FMK。

在一些实施方案中，方法包括给药产品组合，其包括以约0.03％w/v的量存在的豹蛙酶和以约0.01％至约0.025％w/v的量存在的羟甲唑啉。在一些实施方案中，方法包括给药产品组合，其包括以约0.03％w/v的量存在的豹蛙酶和以约0.01％至约0.025％w/v的量存在的溴莫尼定。

在一些实施方案中，方法抑制或延迟眼部感染，或者防止眼部感染扩散。在一些实施方案中，眼部感染是病毒性结膜炎。在一些实施方案中，病毒性结膜炎是流行性角结膜炎、咽结膜热、非特异性散发性滤泡性结膜炎、慢性乳头性结膜炎或疱疹性结膜炎。在一些实施方案中，向对象眼科给药产品组合。在一些实施方案中，一种或多种RNA酶在第一组合物中制备，并且一种或多种另外的治疗剂在第二组合物中制备。在一些实施方案中，第一组合物在第二组合物给药之前给药、伴随第二组合物给药或在第二组合物给药之后给药。在一些实施方案中，所述给药是每天两次。在一些实施方案中，所述给药是每天4次。在一些实施方案中，所述给药是每天8次。

本文提供的一些实施方案涉及产品组合在制备用于治疗眼部感染的药物中的用途。在一些实施方案中，产品组合包括治疗有效量的一种或多种核糖核酸酶(RNA酶)，和治疗有效量的一种或多种另外的治疗剂。在一些实施方案中，产品组合是本文所述的任何产品组合。在一些实施方案中，另外的治疗剂是血管收缩剂、抗生素、免疫调节化合物、类固醇或以上的组合。在一些实施方案中，一种或多种RNA酶是豹蛙酶、其类似物、变体、衍生物或片段。在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂是萘甲唑林、四氢唑啉、苯肾上腺素、羟甲唑啉、溴莫尼定、阿可乐定、麻黄碱、阿奇霉素、红霉素、庆大霉素、新霉素、妥布霉素、贝西沙星、环丙沙星、加替沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、氧氟沙星、杆菌肽、氯霉素、短杆菌肽、纳他霉素、多粘菌素B、磺胺醋酰、四环素、甲氧苄啶、万古霉素、地塞米松、二氟泼尼酯、氟米龙、氯替泼诺、泼尼松龙、利美索龙、环孢霉素A、NLRP3抑制剂、双氯芬酸、酮咯酸、溴芬酸、奈帕芬胺、氟比洛芬、立他司特，或者以上的药学上可接受的盐、类似物或衍生物。在一些实施方案中，NLRP3抑制剂是Ac-YVAD-cmk、2-APB、阿格拉宾、BAPTA、BAY 11-7082、β-羟基丁酸酯(BHB)、C172、CY-09、氟芬那酸、格列本脲、INF39、异甘草素、MCC950、甲芬那酸、3,4-亚甲二氧基-β-硝基苯乙烯(MNS)、OLT1177、冬凌草甲素、小白菊内酯、白藜芦醇、萝卜硫素、曲尼司特、VX-765或Z-VAD-FMK。在一些实施方案中，药物抑制或延迟眼部感染。在一些实施方案中，眼部感染是病毒性结膜炎。在一些实施方案中，病毒性结膜炎是流行性角结膜炎、咽结膜热、非特异性散发性滤泡性结膜炎或慢性乳头性结膜炎。在一些实施方案中，配制药物用于眼科给药。在一些实施方案中，产品组合包括以约0.03％w/v的量存在的豹蛙酶和以约0.01％至约0.025％w/v的量存在的羟甲唑啉。在一些实施方案中，产品组合包括以约0.03％w/v的量存在的豹蛙酶和以约0.01％至约0.025％w/v的量存在的溴莫尼定。

详述

本文提供的实施方案涉及用于治疗、预防、抑制、减轻、改善或减缓病毒眼部复制或感染的产品组合。在一些实施方案中，产品组合包括一种或多种核糖核酸酶与一种或多种血管收缩剂、抗生素、免疫调节化合物的组合，包括类固醇或非类固醇抗炎药(NSAID)，或以上的任意组合。本文提供的一些实施方案涉及使用产品组合来治疗、预防、抑制、减轻、改善或减缓病毒眼部复制或感染的方法。

将容易理解的是，如本文一般描述的，本公开内容的方面可以以各种不同的配置来布置、替换、组合、分离和设计，所有这些都在本文中明确预期。

除非另有定义，否则本文使用的技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。除非另有说明，否则本文引用的所有专利、申请、已公开的申请和其他出版物均通过引用整体明确地并入本文中。为了本公开内容的目的，以下术语如下定义。

“约”意指与参考数量、水平、值、数字、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度相差多达30％、25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的数量、水平、值、数字、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度。当一个值前面加上术语约时，组分不旨在严格限制于该值，而是旨在包括与该值不同的量。

在整个本说明书中，除非上下文另有要求，否则词语“包含(comprise)”、“包含(comprises)”和“包含(comprising)”可以理解为暗示包括所述步骤或元素或者步骤或元素的组，但不排除任何其他步骤或元素或者步骤或元素的组。

I.眼部感染

本文提供的实施方案涉及用于治疗、预防、抑制、减少、减轻、改善或减缓病毒眼部复制或感染的组合物和方法。特别地，组合物和方法涉及治疗、预防、抑制、减少、减轻、改善或减缓病毒眼部复制或感染。在一些实施方案中，眼部感染是由腺病毒科病毒引起的病毒感染，包括例如但不限于腺病毒类型3、4、7、8、19、29、37或54。在一些实施方案中，眼部感染是由疱疹病毒科病毒引起的病毒感染，包括例如单纯疱疹病毒1或2(HSV-1或HSV-2)、Epstein-Barr病毒(EBV)、人巨细胞病毒(CMV)、带状疱疹病毒(HZV)或水痘带状疱疹病毒(VZV)。

腺病毒(腺病毒科的成员)是中等大小(90-100nm)的无包膜病毒，其二十面体核衣壳含有双链DNA基因组。腺病毒有广泛的脊椎动物宿主。已发现约60种不同的腺病毒血清型在人类中导致多种疾病，从幼儿的轻度呼吸道感染(称为普通感冒)到免疫系统较弱的人的危及生命的多器官疾病。

眼睛的病毒感染会产生严重后果。关于病毒性结膜炎，腺病毒血清型3、4、7、8、11、13、19、37和54似乎是主要致病因子，尽管其他腺病毒血清也可能导致病毒性结膜炎。腺病毒血清型3、7和11被分类为人腺病毒B；血清型8、13、19和37被分类为人腺病毒D；并且血清型4被分类为人腺病毒E。由于普通人群对腺病毒的天然免疫力较低，因此每个人都被认为容易感染。另外，结膜病毒感染会引发强烈的先天性和适应性免疫应答。调节这种免疫应答的能力可有助于减少与病毒性结膜炎相关的许多临床体征和症状。

临床上，这些腺病毒可引起多种不同的综合征，最常见的是流行性角结膜炎(EKC—主要血清型8、19、37)和咽结膜热(PCF—主要血清型3、4、7)。EKC是急性结膜炎最常见的综合征之一，具有特征性的临床特征，如突然发作的急性滤泡性结膜炎，伴有水性排出物、充血(发红)、结膜水肿和同侧耳前淋巴结病。角膜受累可以以弥漫性、精细性和/或浅表性角膜炎、上皮缺损，以及甚至上皮下浸润和混浊的形式发生。在20％-50％的病例中，角膜混浊可持续数月。这些后遗症会显著降低视敏度并引起眩光症状。治疗主要旨在通过使用冷敷和人工泪液来控制症状。抗病毒药物(如西多福韦)和环孢霉素滴眼剂进行了临床测试，但没有观察到确切的益处。在严重膜性受累的非常特殊的情况下，可以使用温和的局部皮质类固醇来控制炎症。

疱疹病毒科的不同病毒可以感染眼睛的各种组织。1型和2型单纯疱疹病毒(HSV-1和HSV-2)感染眼睛前部，并引起结膜炎和角膜炎。已知CMV会感染眼睛后部，导致视网膜炎。当影响三叉神经区域时，HZV可导致慢性、严重的眼部疾病。眼带状疱疹是一种严重的急性带状疱疹形式，由三叉神经(第五颅神经)中VZV的再激活引起。

本文提供的产品组合两栖酶可用于治疗如本文所述的病毒眼部复制或感染，如病毒性结膜炎，所述产品组合包括一种或多种RNA酶，如一种或多种豹蛙酶、两栖酶、以上的变体、类似物、衍生物或片段，以及一种或多种另外的治疗剂，如一种或多种血管收缩剂、一种或多种抗生素、一种或多种免疫调节化合物或一种或多种类固醇或以上的组合。本文公开的病毒性结膜炎包括流行性角结膜炎、咽结膜热、非特异性散发性滤泡性结膜炎或慢性乳头性结膜炎。本文公开的病毒性结膜炎可由本文公开的或本领域技术人员已知的任何病毒复制或病毒感染引起，包括例如来自腺病毒科或疱疹病毒科的病毒感染，诸如例如人腺病毒B、人腺病毒D、人腺病毒E、HSV、VZV、EBV、HZV或CMV。

II.组合物

本文提供的一些实施方案涉及用于治疗、预防、抑制、减少、减轻、改善或减缓眼部复制或感染的产品组合。在一些实施方案中，眼部感染是病毒感染，包括例如来自腺病毒科或疱疹病毒科病毒的病毒感染。在一些实施方案中，产品组合包括一种或多种核糖核酸酶和一种或多种血管收缩剂、抗生素、免疫调节化合物或类固醇或者以上的组合。

如本文所用，术语“治疗(treating)”、“治疗(treatment)”、“治疗性的(therapeutic)”或“疗法(therapy)”具有根据说明书理解的一般含义，且不一定意味着完全治愈或消除疾病或病况。

如本文所用，术语“抑制”具有根据本说明书理解的一般含义，并且是指延迟或预防病毒眼部复制或感染，如由腺病毒科或疱疹病毒科病毒引起的病毒感染。如本文所使用的，术语“延迟”具有根据本说明书理解的一般含义，并且是指事件减缓、延迟或推迟至比在其他情况下预期的时间晚的时间，如眼部复制或感染的延迟，如由腺病毒科或疱疹病毒科病毒引起的病毒感染。延迟可以是10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量的延迟。术语“抑制”和“延迟”不应被解释为必须指示100％抑制或延迟。可以实现部分抑制或延迟。

术语“治疗有效量”具有根据本说明书理解的一般含义，且用于表示引发所示生物或药物反应的活性化合物或药剂的量。例如，化合物的治疗有效量可以是预防、减轻、缓解或改善病毒眼部复制或感染所需的量。这种反应可发生在组织、系统、动物或人中，并且包括缓解正在治疗的疾病的体征或症状。鉴于本文提供的公开内容，治疗有效量的测定在本领域技术人员的能力范围内。作为剂量需要的本文所公开的化合物的治疗有效量可取决于给药途径、被治疗的动物类型，包括人，以及所考虑的特定动物的身体特征。可以调整剂量以实现期望的效果，但可取决于诸如体重、饮食、同时用药等因素以及医学领域技术人员将认识到的其他因素。

如本文所用，术语“衍生物”具有根据本说明书理解的其一般含义，并且是指化学修饰的化合物，其中该修饰被普通技术化学家认为是常规的，如酸的酯或酰胺或保护基，如醇或硫醇的苄基，或胺的叔丁氧基羰基。

如本文所用，术语“类似物”具有根据本说明书理解的一般含义，并且是指以下化合物，其包括特定化合物或其类别的化学修饰形式，并保持所述化合物或类别的药物和/或药理活性特征。

如本文所用，“核糖核酸酶(ribonuclease enzyme)”、“核糖核酸酶(ribonuclease)”或“RNA酶”具有根据本说明书理解的其一般含义，且用于描述催化RNA降解为更小组分的核酸酶。在一些实施方案中，RNA酶是豹蛙酶或两栖酶、它们的变体形式、它们的重组形式或它们的部分。

豹蛙酶是一种两栖类核糖核酸酶，最初从豹蛙(Rana pipiens)(北美豹蛙)的卵母细胞和/或早期胚胎中分离出来。豹蛙酶最初被称为P-30蛋白或P-30，是胰腺核糖核酸酶(RNA酶A)蛋白超家族的成员。豹蛙酶最初被表达为前体多肽，被加工以去除前体肽部分和起始蛋氨酸，以产生分子量约为12kD的富含赖氨酸的碱性酶。N端焦谷氨酰残基是豹蛙酶活性位点的组成部分，且显著有助于豹蛙酶的催化和生物活性以及其异常高的构象稳定性。豹蛙酶的另一结构特征是稳定蛋白质紧密结构的C端二硫键(87-104)。这反过来又使豹蛙酶对内源性蛋白酶具有高度抗性。豹蛙酶的另一使其对内源性蛋白酶具有抗性的特征是对于特定RNA酶抑制剂观察到的低细胞内结合亲和力，这允许豹蛙酶在细胞内保持活性，而大多数哺乳动物RNA酶受到抑制。

豹蛙酶主要通过与细胞表面受体结合并经由AP-2/网格蛋白介导的内吞作用内化到细胞质中来靶向快速复制和/或生长的细胞。然后，这种酶穿梭到内质网，在那里它降解RNA底物，其序列偏好于尿嘧啶和鸟嘌呤核苷酸。例如，体外使用天然转移RNA(tRNA)底物的切割位点图谱揭示了UG和GG残基的主要切割位点以及CG位点处的切割。转移RNA似乎优先被豹蛙酶靶向为底物，这使信使RNA(mRNA)和核糖体RNA(rRNA)不受损害。豹蛙酶对tRNA的降解导致蛋白质合成的抑制。

然而，豹蛙酶的生物学效应不能仅通过蛋白质合成的下降来解释，这表明豹蛙酶可能会靶向另外的或替代的RNA分子。一种替代机制被归因于RNA干扰途径和miRNA、siRNA或其前体的降解。类似于tRNA，这些小RNA不受蛋白质保护，且也可能被豹蛙酶降解。豹蛙酶也可能降解小RNA的前体，从而产生siRNA并影响基因表达。最近的发现揭示了一类新的调控RNA(30-40nt)，其可能来源于小的非编码RNA，特别是tRNA，这表明豹蛙酶可以直接从其胞内tRNA底物产生siRNA。

豹蛙酶也已显示通过干扰核因子活化B细胞κ轻链增强子(nuclear factorkappa-light-chain-enhancer of activated B cells，NFκB)途径而具有免疫调节作用机制。体外研究表明，豹蛙酶抑制NFκB向细胞核的易位。NFκB是一种控制DNA转录的蛋白质复合物，是炎症对促炎刺激反应的关键主调节物。NFκB存在于几乎所有动物细胞中，并调节细胞对刺激，如应激、自由基、细菌和/或病毒抗原的反应。此外，NFκB在调节对感染的免疫应答中起着关键作用(κ轻链是免疫球蛋白的重要组成部分)。通过抑制NFκB向细胞核的易位，可抑制炎症过程，在细胞核处需要NFκB来增强炎症。另外，肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素1-b(IL-1b)在正反馈回路中被NFκB激活，其中受NFκB调节的基因也引起NFκB的激活。促炎细胞因子(包括TNFα和IL-1b)将炎症细胞吸引到炎症部位、产生炎症介质的酶、免疫受体和在中性粒细胞和巨噬细胞向炎症部位的初始募集中发挥重要作用的粘附分子。因此，NFκB的激活和易位因而导致许多基因表达的协同增加，这些基因的产物介导炎症和免疫应答。这种类型的正调节回路可放大并维持局部炎症反应。因此，豹蛙酶阻断由NFκB活性介导的促炎作用的发现表明，这种酶可以有效地抑制炎症反应。有趣的是注意到，在患有急性创伤(小鼠)或流行性角结膜炎(被诊断为腺病毒感染的患者)的小鼠和人类中，NFκB从结膜上皮细胞的细胞质易位到细胞核中。这是一个关键的观察结果，因为具有阻断这种易位能力的诸如豹蛙酶的药物具有敲低对这种触发的炎症反应的能力。

在一些实施方案中，本文公开的豹蛙酶是野生型豹蛙酶、重组豹蛙酶、豹蛙酶变体、豹蛙酶部分或以上的类似物。在一些实施方案中，豹蛙酶包括以下中的任一个所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26，或者豹蛙酶与以下中的任一个具有至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的氨基酸同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26。

在一些实施方案中，豹蛙酶与以下中的任一个具有约75％至约100％、约80％至约100％、约85％至约100％、约90％至约100％、约95％至约100％、约75％至约99％、约80％至约99％、约85％至约99％、约90％至约99％、约95％至约99％、约75％至约97％、约80％至约97％、约85％至约97％、约90％至约97％或约95％至约97％范围内的氨基酸同一性：SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:25或SEQ ID NO:26。

在一些实施方案中，豹蛙酶相对于以下中的任一个具有至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个连续的氨基酸缺失、添加和/或取代：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26；或相对于以下中的任一个具有最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个连续的氨基酸缺失、添加和/或取代：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ IDNO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26。

在一些实施方案中，豹蛙酶相对于以下中的任一个具有至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个非连续的氨基酸缺失、添加和/或取代：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26；或相对于以下中的任一个具有最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个非连续的氨基酸缺失、添加和/或取代：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ IDNO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26。

在一些实施方案中，本文公开的豹蛙酶可以具有用焦谷氨酸(PCA)封闭的N端。在一些实施方案中，焦谷氨酸N端嵌段通过谷氨酰胺(Gln)的自环化产生。在一些实施方案中，本文公开的豹蛙酶也可以具有用吡咯烷酮羧酸封闭的N端。在一些实施方案中，包括以下中的任一个的氨基酸序列的豹蛙酶具有用焦谷氨酸或吡咯烷酮羧酸封闭的N端：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26。

两栖酶是胰腺RNA酶A蛋白超家族的成员。两栖酶也是从两栖动物中分离出来的，并且是豹蛙酶的一种更基本的变体。对最初表达为前体多肽的两栖酶进行处理以去除前体肽部分和起始蛋氨酸，以产生分子量约为13kD的活性酶。与豹蛙酶类似，两栖酶主要通过降解RNA和最少程度地抑制蛋白质合成来靶向快速复制和/或生长的细胞。

在一些实施方案中，本文公开的两栖酶是野生型两栖酶、重组两栖酶、两栖酶变体、两栖酶部分或以上的类似物。在一些实施方案中，两栖酶包括以下中的任一个所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQID NO:38或SEQ ID NO:39。在一些实施方案中，两栖酶与以下中的任一个具有至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的氨基酸同一性：SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQID NO:38或SEQ ID NO:39。在一些实施方案中，两栖酶与以下中的任一个具有约75％至约100％、约80％至约100％、约85％至约100％、约90％至约100％、约95％至约100％、约75％至约99％、约80％至约99％、约85％至约99％、约90％至约99％、约95％至约99％、约75％至约97％、约80％至约97％、约85％至约97％、约90％至约97％或约95％至约97％范围内的氨基酸同一性：SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:39。

在一些实施方案中，两栖酶相对于以下中的任一个具有至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个连续的氨基酸缺失、添加和/或取代：SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:39；或相对于以下中的任一个具有最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个连续的氨基酸缺失、添加和/或取代：SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ IDNO:37、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:39。在一些实施方案中，两栖酶相对于以下中的任一个具有至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个非连续的氨基酸缺失、添加和/或取代：SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ IDNO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ IDNO:38或SEQ ID NO:39；或相对于以下中的任一个具有最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个非连续的氨基酸缺失、添加和/或取代：SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ IDNO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ IDNO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:39。

可用于本文所述组合物和方法的其他RNA酶化合物包括例如第5,559,212号、第5,728,805号、第6,239,257号、第6,175,003号、第6,423,515号、第7,229,824号、第7,442,535号、第7,442,536号、第7,473,542号、第7,556,953号、第7,585,655号、第7,763,449号、第7,556,951号、第7,556,952号、第7,585,654号、第8,518,399号、第8,663,964号、第8,808,690号和第9,682,130号美国专利中公开的化合物，所述美国专利中的每一个均通过引用整体并入本文中，并用于本文参考的特定公开内容。

在一些实施方案中，本文所公开的RNA酶，如豹蛙酶或两栖酶是重组改造的。在一些实施方案中，重组RNA酶添加功能结构域而不抑制RNA酶的内源性活性。例如，嗜酸性阳离子蛋白片段可以添加到RNA酶上，以提供或显著改善杀菌性能。这样的构建体描述于Torrent等人,“Bactericidal Activity Engineered on Human PancreaticRibonuclease and Onconase”,Mol.Pharm.6(2):531-542(2009)中，其通过引用整体并入本文中。如果单一治疗方法能治疗细菌结膜炎和病毒性结膜炎，同时还能解决对这种应激的共同潜在免疫应答，则这可能具有重要价值。

在一些实施方案中，RNA酶多肽包括其中一个氨基酸被添加、缺失或被另一氨基酸取代的变体多肽。可以通过多种因素来评估取代，诸如例如，被取代的氨基酸的物理性质或原始氨基酸如何耐受取代。本领域普通技术人员已知选择哪种氨基酸可以取代多肽中的另一种氨基酸。

在一些实施方案中，本文提供的产品组合还包括一种或多种另外的治疗剂，如一种或多种血管收缩剂、抗生素、免疫调节化合物或类固醇，或以上的衍生物、类似物或药学上可接受的盐。

如本文所用，“血管收缩剂”具有根据本说明书理解的一般含义，并且是指当向对象给药时引起血管收缩或血管(包括毛细血管)变窄的化合物。血管收缩剂可包括例如肾上腺素能受体激动剂，如：

萘甲唑林(包括其药学上可接受的盐。萘甲唑林包括盐酸萘甲唑啉(Naphcon)或2-(萘-1-基甲基)-4,5-二氢-1H-咪唑)；

四氢唑啉(包括其药学上可接受的盐。四氢唑啉(Tetrahydrozoline)包括四氢唑啉(tetryzoline)或(RS)-2-(1,2,3,4-四氢萘-1-基)-4,5-二氢-1H-咪唑)；

苯肾上腺素(包括其药学上可接受的盐。苯肾上腺素包括Mydfrin、Altafrin、AK-dilate、Neofrin、(R)-3-[-1-羟基-2-(甲基氨基)乙基]酚)；

羟甲唑啉(包括其药学上可接受的盐。羟甲唑啉包括Afrin、Ocuclear、Drixine、3-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基甲基)-2,4-二甲基-6-叔丁基-酚)；

溴莫尼定(包括其药学上可接受的盐。溴莫尼定包括Alphagan、Mirvaso、Lumify、5-溴-N-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)喹喔啉-6-胺)；

阿可乐定(包括其药学上可接受的盐。阿可乐定包括Iopidine、2,6-二氯-N-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)苯-1,4-二胺)；或

麻黄碱(包括其药学上可接受的盐。麻黄碱包括Bronkaid、Primatene、rel-(R,S)-2-(甲基氨基)-1-苯基丙-1-醇)

或以上的衍生物、盐或类似物，或以上的组合。

如本文所用，“抗生素”具有根据本说明书理解的一般含义，并且是指用于通过杀死细菌、抑制细菌生长或降低细菌活力来治疗和/或预防细菌感染的化合物。抗生素可包括例如大环内酯、氨基糖苷、氟喹诺酮或其他抗生素，如：

阿奇霉素(包括其药学上可接受的盐。阿奇霉素包括希舒美、Azithrocin、2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-15-氧代-11-{[3,4,6-三脱氧-3-(二甲基氨基)-β-D-木-六吡喃糖基(hexopyranosyl)]氧基}-1-氧杂-6-氮杂环十五-13-基2,6-二脱氧-3C-甲基-3-O-甲基-α-L-核糖-己吡喃糖苷(hexopyranoside)、9-脱氧-9α-氮杂-9α-甲基-9α-高红霉素A)；

红霉素(包括其药学上可接受的盐。红霉素(Erythromycin)包括Eryc、红霉素(Erythrocin)、3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12R,13S,14R)-6-{[(2S,3R,4S,6R)-4-(二甲基氨基)-3-羟基-6-甲基噁烷-2-基]氧基}-14-乙基-7,12,13-三羟基-4-{[(2R,4R,5S,6S)-5-羟基-4-甲氧基-4,6-二甲基噁烷-2-基]氧基}-3,5,7,9,11,13-六甲基-1-氧杂环十四烷-2,10-二酮)；

庆大霉素(包括其药学上可接受的盐。庆大霉素(Gentamicin)包括Cidomycin、Septopal、Genticyn、庆大霉素(Garamycin)、3R,4R,5R)-2-{[(1S,2S,3R,4S,6R)-4,6-二氨基-3-{[(2R,3R,6S)-3-氨基-6-[(1R)-1-(甲基氨基)乙基]噁烷-2-基]氧基}-2-羟基环己基]氧基}-5-甲基-4-(甲基氨基)噁烷-3,5-二醇)；

新霉素(包括其药学上可接受的盐。新霉素包括Neo-rx、2RS,3S,4S,5R)-5-氨基-2-(氨基甲基)-6-((2R,3S,4R,5S)-5-((1R,2R,5R,6R)-3,5-二氨基-2-((2R,3S,4R,5S)-3-氨基-6-(氨基甲基)-4,5-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-6-羟基环己基氧基)-4-羟基-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基氧基)四氢-2H-吡喃-3,4-二醇)；

妥布霉素(包括其药学上可接受的盐。妥布霉素包括托百士(Tobrex)、Tobi、2S,3R,4S,5S,6R)-4-氨基-2-{[(1S,2S,3R,4S,6R)-4,6-二氨基-3-{[(2R,3R,5S,6R)-3-氨基-6-(氨基甲基)-5-羟基噁烷-2-基]氧基}-2-羟基环己基]氧基}-6-(羟基甲基)噁烷-3,5-二醇)；

贝西沙星(包括其药学上可接受的盐。贝西沙星(Besifloxacin)包括贝西沙星(Besivance)、7-[(3R)-3-氨基西泮-1-基]-8-氯-1-环丙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-羧酸)；

环丙沙星(包括其药学上可接受的盐。环丙沙星包括Ciloxan、Cipro、Neofloxin、1-环丙基-6-氟-4-氧代-7-(哌嗪-1-基)-喹啉-3-羧酸)；

加替沙星(包括其药学上可接受的盐。加替沙星包括Gatiflo、Tequin、Zymar、1-环丙基-6-氟-8-甲氧基-7-(3-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代-喹啉-3-羧酸)；

左氧氟沙星(包括其药学上可接受的盐。左氧氟沙星包括Levaquin、Tavanic、Iquix、(S)-9-氟-2,3-二氢-3-甲基-10-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-氧代-7H-吡啶并[1,2,3-de]-1,4-苯并噁嗪-6-羧酸)；

莫西沙星(包括其药学上可接受的盐。莫西沙星包括Avelox、Vigamox、Moxeza、1-环丙基-7-[(1S,6S)-2,8-二氮杂双环[4.3.0]壬-8-基]-6-氟-8-甲氧基-4-氧代喹啉-3-羧酸)；

氧氟沙星(包括其药学上可接受的盐。氧氟沙星包括Floxin、Ocuflox、(±)-9-氟-2,3-二氢-3-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-7-氧代-7H-吡啶并[1,2,3-de][1,4]苯并噁嗪-6-羧酸、(RS)-7-氟-2-甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)-10-氧代-4-氧杂-1-氮杂三环[7.3.1.0^5,13]十三-5(13),6,8,11-四烯-11-羧酸)；

杆菌肽(包括其药学上可接受的盐。杆菌肽包括Baciim、(4R)-4-[(2S)-2-({2-[(1S)-1-氨基-2-甲基丁基]-4,5-二氢-1,3-噻唑-5-基}甲酰胺)-4-甲基戊酰胺]-4-{[(1S)-1-{[(3S,6R,9S,12R,15S,18R,21S)-18-(3-氨基丙基)-12-苄基-15-(丁-2-基)-3-(氨基甲酰基甲基)-6-(羧基甲基)-9-(1H-咪唑-5-基甲基)-2,5,8,11,14,17,20-七氧代-1,4,7,10,13,16,19-七氮杂环二十五-21-基]氨基甲酰基}-2-甲基丁基]氨基甲酰基}丁酸)；

氯霉素(包括其药学上可接受的盐。氯霉素(Chloramphenicol)包括Pentamycetin、氯霉素(Chloromycetin)、2,2-二氯-N-[(1R,2R)-1,3-二羟基-1-(4-硝基苯基)丙-2-基]乙酰胺)；

短杆菌肽(包括其药学上可接受的盐。短杆菌肽包括短芽孢杆菌(Bacillusbrevis)短杆菌肽D，具有甲酰基-L-X-Gly-L-Ala-D-Leu-L-Ala-D-Val-L-Val-D-Val-L-Trp-D-Leu-L-Y-D-Leu-L-Trp＝D-Lei-L-Trp-乙醇胺的线性十五肽链)；

纳他霉素(包括其药学上可接受的盐。纳他霉素包括Natacyn、1R,3S,5R,7R,8E,12R,14E,16E,18E,20E,22R,24S,25R,26S)-22-[(3-氨基-3,6-二脱氧-D-吡喃甘露糖)氧基]-1,3,26-三羟基-12-甲基-10-氧代-6,11,28-三氧杂三环[22.3.1.0^5,7]二十八-8,14,16,18,20-五烯-25-羧酸)；

多粘菌素B(包括其药学上可接受的盐。多粘菌素B包括N-[4-氨基-1-[[1-[[4-氨基-1-氧代-1-[[6,9,18-三(2-氨基乙基)-15-苄基-3-(1-羟基乙基)-12-(2-甲基丙基)-2,5,8,11,14,17,20-七氧代-1,4,7,10,13,16,19-七氮杂环二十三-21-基]氨基]丁-2-基]氨基]-3-羟基-1-氧代丁-2-基]氨基]-1-氧代丁-2-基]-6-甲基辛酰胺)；

磺胺醋酰(包括其药学上可接受的盐。磺胺醋酰包括Bleph-10、N-[(4-氨基苯基)磺酰基]乙酰胺)；

四环素(包括其药学上可接受的盐。四环素包括Sumycin、(4S,6S,12aS)-4-(二甲基氨基)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-八氢-3,6,10,12,12a-五羟基-6-甲基-1,11-二氧代萘并萘-2-甲酰胺)；

甲氧苄啶(包括其药学上可接受的盐。甲氧苄啶包括Proloprim、Monotrim、Triprim、5-(3,4,5-三甲氧基苄基)嘧啶-2,4-二胺)；

万古霉素(包括其药学上可接受的盐。万古霉素包括Vancocin、(1S,2R,18R,19R,22S,25R,28R,40S)-48-{[(2S,3R,4S,5S,6R)-3-

{[(2S,4S,5S,6S)-4-氨基-5-羟基-4,6-二甲基噁烷-2-基]氧基}-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基}-22-(氨基甲酰基甲基)-5,15-二氯-2,18,32,35,37-五羟基-19-[(2R)-4-甲基-2-(甲基氨基)戊酰胺基]-20,23,26,42,44-五氧代-7,13-二氧杂-21,24,27,41,43-五氮杂八环[26.14.2.2^3,6.2^14,17.1^8,12.1^29,33.0^10,25.0^34,39]五十-3,5,8(48),9,11,14,16,29(45),30,32,34,36,38,46,49-十五烯-40-羧酸)；

或以上的衍生物、盐或类似物，或以上的组合。

如本文所用，“免疫调节化合物”具有根据说明书理解的一般含义，并且是指调节对象免疫应答的化合物。免疫调节化合物可包括例如：

环孢素A(包括其药学上可接受的盐。环孢素A(Cyclosporin A)包括CsA、环孢素A(ciclosporin A)、环孢霉素A(cyclosporine A)、Neoral、Sandimmune、(3S,6S,9S,12R,15S,18S,21S,24S,30S,33S)-30-乙基-33-[(1R,2R,4E)-1-羟基-2-甲基-4-己烯-1-基]-6,9,18,24-四异丁基-3,21-二异丙基-1,4,7,10,12,15,19,25,28-九甲基-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十三烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮)；

NLRP3炎症小体的抑制剂。NLRP3炎症小体的抑制剂在本文中也称为NLRP3拮抗剂或NLRP3抑制剂。NLRP3或含核苷酸结合寡聚结构域(NOD)样受体(NLR)pyrin结构域的蛋白3炎症小体是一种天然免疫传感器，其组装后激活半胱天冬酶-1并介导IL-1β的加工和释放。示例性的NLRP3抑制剂包括例如Ac-YVAD-cmk、2-APB、阿格拉宾、BAPTA、BAY 11-7082、β-羟基丁酸酯(BHB)、C172、CY-09、氟芬那酸、格列本脲、INF39、异甘草素、MCC950、甲芬那酸、3,4-亚甲二氧基-β-硝基苯乙烯(MNS)、OLT1177、冬凌草甲素、小白菊内酯、白藜芦醇、萝卜硫素、曲尼司特、VX-765和Z-VAD-FMK；

Ac-YVAD-cmk(包括其药学上可接受的盐。Ac-YVAD-cmk包括基于proIL-1βYVHD、N-乙酰基-酪氨酰-缬氨酰-丙氨酰-天门冬氨酰氯甲基酮中的靶序列的氯甲基酮四肽)

2-APB(包括其药学上可接受的盐。2-APB包括2-氨基乙氧基二苯基硼酸盐、2-二苯基硼烷基氧基乙酰胺)；

阿格拉宾(包括其药学上可接受的盐。阿格拉宾包括(3aR,4aS,6aS,9aS,9bR)-1,4a-二甲基-7-亚甲基-5,6,6a,7,9a,9b-六氢-3H-环氧乙烯并(oxireno)[8,8a]azuleno[4,5-b]呋喃-8(4aH)-酮)；

BAPTA(包括其药学上可接受的盐。BAPTA包括1,2-双(o-氨基苯氧基)乙烷-N,N,N′,N′-四乙酸)；

BAY 11-7082(包括其药学上可接受的盐。BAY 11-7082包括(E)-3-甲苯磺酰基丙烯腈)；

BHB(包括其药学上可接受的盐。BHB包括β-羟基丁酸盐、3-羟基丁酸盐)；

C172(包括其药学上可接受的盐。C172包括CFTR(inh)-172、(Z)-4-((4-氧代-2-硫代-3-(5-(三氟甲基)苯基)噻唑烷-5-基亚基)甲基)苯甲酸)；

CY-09(包括其药学上可接受的盐。CY-09包括(Z)-4-((4-氧代-2-硫代-3-(3-(三氟甲基)苯基)噻唑烷-5-基亚基)甲基)苯甲酸)

氟芬那酸(包括其药学上可接受的盐。氟芬那酸包括嘧虫胺、氟虫脲、氟苯柳、2-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)苯甲酸)；

格列本脲(包括其药学上可接受的盐。格列本脲(Glybenclamide)包括格列本脲(glibenclamide)、格列本脲(glyburide)、Micronase、Maninil、5-氯-N-[2-[4-(环己基氨基甲酰基氨磺酰基)苯基]乙基]-2-甲氧基苯甲酰胺)；

INF39(包括其药学上可接受的盐。INF39包括乙基2-(2-氯苄基)丙烯酸盐)；

异甘草素(包括其药学上可接受的盐。异甘草素包括(E)-1-(2,4-二羟基苯基)-3-(4-羟基苯基)丙-2-烯-1-酮)；

MCC950(包括其药学上可接受的盐。MCC950包括N-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)氨基甲酰基)-4-(2-羟基丙-2-基)呋喃-2-磺酰胺)；

甲芬那酸(包括其药学上可接受的盐。甲芬那酸包括甲芬那酸(Ponstel)、甲灭酸(Ponstan)、2-(2,3-二甲基苯基)氨基苯甲酸)；

3,4-亚甲二氧基-β-硝基苯乙烯(MNS)(包括其药学上可接受的盐)；

OLT1177(包括其药学上可接受的盐。OLT1177包括3-(甲基磺酰基)-丙腈)；

冬凌草甲素(包括其药学上可接受的盐。冬凌草甲素包括Isodonol、7a,20-环氧基-1a,6b,7,14-四羟基-贝壳杉-16-烯-15-酮)；

小白菊内酯(包括其药学上可接受的盐。小白菊内酯包括(3aS,9aR,10aS,10bS,E)-6,9a-二甲基-3-亚甲基-3a,4,5,8,9,9a,10a,10b-八氢环氧乙烯并[2',3':9,10]环十[1,2-b]呋喃-2(3H)-酮)；

白藜芦醇(包括其药学上可接受的盐。白藜芦醇包括反式3,5,4′-三羟基二苯乙烯、3,4′,5-二苯乙烯三醇(Stilbenetriol)、反式白藜芦醇、(E)-5-(对羟基苯乙烯基)间苯二酚、(E)-5-(4-羟基苯乙烯基)苯-1,3-二醇)；

萝卜硫素(包括其药学上可接受的盐。萝卜硫素包括1-异硫氰基-4-甲基亚硫酰基丁烷)；

曲尼司特(包括其药学上可接受的盐。曲尼司特包括利喘平(Rizaben)、2-{[(2E)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙-2-烯酰基]氨基}苯甲酸)；

VX-765(包括其药学上可接受的盐。VX-765包括(S)-1-((S)-2-{[1-(4-氨基-3-氯-苯基)-甲酰氧基]-氨基}-3,3-二甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-羧酸((2R,3S)-2-乙氧基-5-氧代-四氢-呋喃-3-基)-酰胺)；

Z-VAD-FMK(包括其药学上可接受的盐。Z-VAD-FMK包括苄氧羰基-缬氨酰-丙氨酰-天门冬氨酰-[O-甲基]-氟甲基酮)。

另外的免疫调节化合物可以包括例如：

双氯芬酸(包括其药学上可接受的盐。双氯芬酸包括克它服宁(Cataflam)、扶他林(Voltaren)、[2-(2,6-二氯苯氨基)苯基]乙酸)；

酮咯酸(包括其药学上可接受的盐。酮咯酸包括Toradol、安贺拉(Acular)、Spric、酮咯酸氨丁三醇、(±)-5-苯甲酰基-2,3-二氢-1H-吡咯里嗪-1-羧酸)；

溴芬酸(包括其药学上可接受的盐。溴芬酸包括Bromday、Prolensa、Yellox、2-[2-氨基-3-(4-溴苯甲酰基)苯基]乙酸)；

奈帕芬胺(包括其药学上可接受的盐。奈帕芬胺包括Amnac、Ilevro、2-氨基-3-苯甲酰基苯乙酰胺)；

氟比洛芬(包括其药学上可接受的盐。氟比洛芬包括Ansaid、欧可芬(Ocufen)、Strepfen、(±)-2-氟-α-甲基-(1,1'-二苯基)-4-乙酸、(RS)-2-(2-氟二苯基-4-基)丙酸)；

立他司特(包括其药学上可接受的盐。立他司特包括Xiidra、N-{[2-(1-苯并呋喃-6-基羰基)-5,7-二氯-1,2,3,4-四氢-6-异喹啉基]羰基}-3-(甲基磺酰基)-L-苯基丙氨酸)；

或以上的衍生物、盐或类似物，或以上的组合。

如本文所用，“类固醇”具有根据说明书理解的一般含义，并且是指天然存在的类固醇及其衍生物，以及具有类固醇样活性的合成或半合成类固醇类似物。类固醇可以是糖皮质激素或皮质类固醇。类固醇可包括，例如：

地塞米松(包括其药学上可接受的盐。地塞米松包括(8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-氟-11,17-二羟基-17-(2-羟基乙酰基)-10,13,16-三甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氢-3H-环戊并[a]菲-3-酮)；

二氟泼尼酯(包括其药学上可接受的盐。二氟泼尼酯包括[(6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,17R)-17-(2-乙酰基氧基乙酰基)-6,9-二氟-11-羟基-10,13-二甲基-3-氧代-6,7,8,11,12,14,15,16-八氢环戊并[a]菲-17-基]丁酸酯)；

氟米龙(包括其药学上可接受的盐。氟米龙包括Efflumidex、Flucon、FML Forte、FML、(6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,17R)-17-乙酰基-9-氟-11,17-二羟基-6,10,13-三甲基-6,7,8,11,12,14,15,16-八氢环戊并[a]菲-3-酮、(1R,2S,8S,10S,11S,14R,15S,17S)-14-乙酰基-1-氟-14,17-二羟基-2,8,15-三甲基四环[8.7.0.0^2,7.0^11,15]十七-3,6-二烯-5-酮)；

氯替泼诺(包括其药学上可接受的盐。氯替泼诺包括露达舒(Lotemax)、11β,17α,二羟基-21-氧杂-21-氯甲基孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮17α-乙基碳酸盐、氯甲基17-乙氧基羰基氧基-11-羟基-10,13-二甲基-3-氧代-7,8,9,11,12,14,15,16-八氢-6H-环戊并[a]菲-17-羧酸盐)；

泼尼松龙(包括其药学上可接受的盐。泼尼松龙包括11,17-二羟基-17-(2-羟基乙酰基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氢环戊并[a]菲-3-酮、(11β)-11,17,21-三羟基孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮)；

利美索龙(包括其药学上可接受的盐。利美索龙包括Vexol、Trimexolone、Org6216、11β-羟基-16α,17α,21-三甲基孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮、(8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11-羟基-10,13,16,17-四甲基-17-丙酰基-7,8,9,11,12,14,15,16-八氢-6H-环戊并[a]菲-3-酮)；

或以上的衍生物、盐或类似物，或以上的组合。

在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂是羟甲唑啉。在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂是溴莫尼定。

在一些实施方案中，一种或多种RNA酶包括单一RNA酶，并且一种或多种另外的治疗剂包括单一的另外治疗剂。在这样的实施方案中，本文公开的任何单一的RNA酶可以在产品组合中与本文公开的任何单一的另外治疗剂组合。

在一些实施方案中，一种或多种RNA酶包括多种RNA酶，并且一种或多种另外的治疗剂包括单一的另外治疗剂。在这样的实施方案中，本文公开的任何多种RNA酶可以在产品组合中与本文公开的任何单一的另外治疗剂组合。

在一些实施方案中，一种或多种RNA酶包括单一RNA酶，并且一种或多种另外的治疗剂包括多种另外的治疗剂。在这样的实施方案中，本文公开的任何单一的RNA酶可以在产品组合中与本文公开的任何多种另外的治疗剂组合。

在一些实施方案中，一种或多种RNA酶包括多种RNA酶，并且一种或多种另外的治疗剂包括多种另外的治疗剂。在这样的实施方案中，本文公开的任何多种RNA酶可以在产品组合中与本文公开的任何多种另外的治疗剂组合。

在一些实施方案中，一种或多种RNA酶包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15种或更多种如本文公开的RNA酶。在一些实施方案中，一种或多种RNA酶包括至少1种、至少2种、至少3种、至少4种、至少5种、至少6种、至少7种、至少8种、至少9种、至少10种、至少11种、至少12种、至少13种、至少14种或至少15种如本文公开的RNA酶。在一些实施方案中，一种或多种RNA酶包括最多1种、最多2种、最多3种、最多4种、最多5种、最多6种、最多7种、最多8种、最多9种、最多10种、最多11种、最多12种、最多13种、最多14种或最多15种如本文公开的RNA酶。在一些实施方案中，一种或多种RNA酶包括1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9、1至10、1至11、1至12、1至13、1至14、1至15、2至3、2至4、2至5、2至6、2至7、2至8、2至9、2至10、2至11、2至12、2至13、2至14、2至15、3至4、3至5、3至6、3至7、3至8、3至9、3至10、3至11、3至12、3至13、3至14、3至15、4至5、4至6、4至7、4至8、4至9、4至10、4至11、4至12、4至13、4至14、4至15、5至6、5至7、5至8、5至9、5至10、5至11、5至12、5至13、5至14、5至15、6至7、6至8、6至9、6至10、6至11、6至12、6至13、6至14、6至15、7至8、7至9、7至10、7至11、7至12、7至13、7至14、7至15、8至9、8至10、8至11、8至12、8至13、8至14、8至15、9至10、9至11、9至12、9至13、9至14、9至15、10至11、10至12、10至13、10至14、10至15、11至12、11至13、11至14、11至15、12至13、12至14、12至15、13至14、13至15或14至15种如本文公开的RNA酶。

在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15种或更多种如本文公开的另外的治疗剂。在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂包括至少1种、至少2种、至少3种、至少4种、至少5种、至少6种、至少7种、至少8种、至少9种、至少10种、至少11种、至少12种、至少13种、至少14种或至少15种如本文公开的另外的治疗剂。在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂包括最多1种、最多2种、最多3种、最多4种、最多5种、最多6种、最多7种、最多8种、最多9种、最多10种、最多11种、最多12种、最多13种、最多14种或最多15种如本文公开的另外的治疗剂。在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂包括1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9、1至10、1至11、1至12、1至13、1至14、1至15、2至3、2至4、2至5、2至6、2至7、2至8、2至9、2至10、2至11、2至12、2至13、2至14、2至15、3至4、3至5、3至6、3至7、3至8、3至9、3至10、3至11、3至12、3至13、3至14、3至15、4至5、4至6、4至7、4至8、4至9、4至10、4至11、4至12、4至13、4至14、4至15、5至6、5至7、5至8、5至9、5至10、5至11、5至12、5至13、5至14、5至15、6至7、6至8、6至9、6至10、6至11、6至12、6至13、6至14、6至15、7至8、7至9、7至10、7至11、7至12、7至13、7至14、7至15、8至9、8至10、8至11、8至12、8至13、8至14、8至15、9至10、9至11、9至12、9至13、9至14、9至15、10至11、10至12、10至13、10至14、10至15、11至12、11至13、11至14、11至15、12至13、12至14、12至15、13至14、13至15或14至15种如本文公开的另外的治疗剂。

在本文所述的任何实施方案中，RNA酶的任何组合可与用于配制产品组合的另外的治疗剂的任何组合组合。

本文提供的一些实施方案涉及产品组合，其包括一种或多种如本文公开的RNA酶与一种或多种另外的治疗剂，如一种或多种血管收缩剂、抗生素、免疫调节化合物或类固醇的组合，如本文所述的。在一个实施方案中，产品组合包括包含豹蛙酶或其变体、类似物或一部分的组合物，以及包含一种或多种另外的治疗剂，如一种或多种血管收缩剂、抗生素、免疫调节化合物或类固醇的组合物，如本文所述的。在一个实施方案中，产品组合包括包含两栖酶或其变体、类似物或一部分的组合物，以及包含一种或多种另外的治疗剂，如一种或多种血管收缩剂、抗生素、免疫调节化合物或类固醇的组合物，如本文所述的。

在一些实施方案中，产品组合包括本文所述的任何豹蛙酶，包括其任何变体、类似物、衍生物或一部分，以及以下中的一种或多种：萘甲唑林、四氢唑啉、苯肾上腺素、羟甲唑啉、溴莫尼定、阿可乐定、麻黄碱、阿奇霉素、红霉素、庆大霉素、新霉素、妥布霉素、贝西沙星、环丙沙星、加替沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、氧氟沙星、杆菌肽、氯霉素、短杆菌肽、纳他霉素、多粘菌素B、磺胺醋酰、四环素、甲氧苄啶、万古霉素、地塞米松、二氟泼尼酯、氟米龙、氯替泼诺、泼尼松龙、利美索龙、环孢霉素A、NLRP3抑制剂、双氯芬酸、酮咯酸、溴芬酸、奈帕芬胺、氟比洛芬、立他司特或者以上的药学上可接受的盐、类似物或衍生物。NLRP3的抑制剂包括例如Ac-YVAD-cmk、2-APB、阿格拉宾、BAPTA、BAY 11-7082、β-羟基丁酸酯(BHB)、C172、CY-09、氟芬那酸、格列本脲、INF39、异甘草素、MCC950、甲芬那酸、3,4-亚甲二氧基-β-硝基苯乙烯(MNS)、OLT1177、冬凌草甲素、小白菊内酯、白藜芦醇、萝卜硫素、曲尼司特、VX-765或Z-VAD-FMK。

在一些实施方案中，产品组合包括本文所述的任何两栖酶，包括其任何变体、类似物、衍生物或一部分，以及以下中的一种或多种：萘甲唑林、四氢唑啉、苯肾上腺素、羟甲唑啉、溴莫尼定、阿可乐定、麻黄碱、阿奇霉素、红霉素、庆大霉素、新霉素、妥布霉素、贝西沙星、环丙沙星、加替沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、氧氟沙星、杆菌肽、氯霉素、短杆菌肽、纳他霉素、多粘菌素B、磺胺醋酰、四环素、甲氧苄啶、万古霉素、地塞米松、二氟泼尼酯、氟米龙、氯替泼诺、泼尼松龙、利美索龙、环孢霉素A、NLRP3抑制剂、双氯芬酸、酮咯酸、溴芬酸、奈帕芬胺、氟比洛芬、立他司特，或者以上的药学上可接受的盐、类似物或衍生物。NLRP3的抑制剂包括例如Ac-YVAD-cmk、2-APB、阿格拉宾、BAPTA、BAY 11-7082、β-羟基丁酸酯(BHB)、C172、CY-09、氟芬那酸、格列本脲、INF39、异甘草素、MCC950、甲芬那酸、3,4-亚甲二氧基-β-硝基苯乙烯(MNS)、OLT1177、冬凌草甲素、小白菊内酯、白藜芦醇、萝卜硫素、曲尼司特、VX-765或Z-VAD-FMK。

在一些实施方案中，产品组合包括豹蛙酶与羟甲唑啉的组合。在一些实施方案中，产品组合包括豹蛙酶与溴莫尼定的组合。

在一些实施方案中，一种或多种RNA酶或其药学上可接受的盐在组合物中制备，并且一种或多种另外的治疗剂在组合物中制备，并且每种组合物彼此分开。在一些实施方案中，分开的组合物制备为用于组合给药。包含RNA酶或其药学上可接受的盐的组合物与包含一种或多种另外的治疗剂的组合物的给药顺序可以不同。在一些实施方案中，包含RNA酶或其药学上可接受的盐的组合物可以在所有另外的治疗剂之前给药。在其他实施方案中，包含RNA酶或其药学上可接受的盐的组合物可以在至少一种另外的治疗剂之前给药。在其他实施方案中，包含RNA酶或其药学上可接受的盐的组合物可以伴随一种或多种另外的治疗剂给药。在其他实施方案中，包含RNA酶或其药学上可接受的盐的组合物可以在至少一种另外的治疗剂给药之后给药。在一些实施方案中，包含RNA酶或其药学上可接受的盐的组合物可以在所有另外的治疗剂给药之后给药。

本文提供的一些实施方案包括试剂盒，其包含一种或多种RNA酶或其药学上可接受的盐，以及一种或多种另外的治疗剂。在一些实施方案中，试剂盒还包含用于给药组合物的说明书，包括在组合物单独制备时是顺序或平行给药组合物的说明书，以及在产品组合制备为单一剂量制剂时用于给药单一制剂的说明书。在一些实施方案中，一种或多种RNA酶或其药学上可接受的盐提供于第一容器中，并且一种或多种另外的治疗剂提供于第二容器中。

在一些实施方案中，一种或多种RNA酶或其药学上可接受的盐，以及一种或多种另外的治疗剂配制成单一制剂或单一剂量。

III.剂量制剂

将包含一种或多种RNA酶、其变体、衍生物、类似物或药学上可接受的盐、一种或多种另外的治疗剂或其衍生物、类似物或盐的产品组合的实施方案配制为用于使用细胞摄取方法给药至对象的产品组合。在一些实施方案中，一种或多种RNA酶制备为第一药物组合物，并且一种或多种另外的治疗剂制备为第二药物组合物。在一些实施方案中，第一和第二药物组合物作为产品组合组合使用。

在一些实施方案中，产品组合是包括一种或多种RNA酶、其变体、衍生物、类似物或药学上可接受的盐，以及一种或多种另外的治疗剂或其衍生物、类似物或盐的单一制剂。

本文公开的药物组合物可任选地包括促进将活性成分加工成药学上可接受的组合物的药学上可接受的载体。如本文所用，术语“药理学上可接受的载体”与“药理学载体”同义，并且意指在给药时基本上没有长期或永久有害影响的任何载体，并且涵盖术语如“药理学上可接受的媒介物、稳定剂、稀释剂、添加剂、助剂或赋形剂”。这种载体通常与活性化合物混合或允许稀释或包封活性化合物，并且可以是固体、半固体或液体试剂。应当理解，活性成分可以是可溶的或者可以作为在所需载体或稀释剂中的悬浮液递送。可以使用多种药学上可接受的载体中的任何一种，包括但不限于水性介质，诸如例如水、盐水、甘氨酸、透明质酸等；固体载体，诸如例如甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等；溶剂；分散介质；包衣；抗细菌剂和抗真菌剂；等渗剂和吸收延迟剂；或任何其他非活性成分。药理学上可接受的载体的选择可取决于给药方式。除非任何药理学上可接受的载体与活性成分不相容，否则其用于药学上可接受的组合物是可预期的。这种药物载体的特定用途的非限制性实例可在Pharmaceutical Dosage Forms and DrugDelivery Systems(Howard C.Ansel等人,编辑,Lippincott Williams&WilkinsPublishers,第7版,1999)；REMINGTON:THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY(AlfonsoR.Gennaro编辑,Lippincott,Williams&Wilkins,第20版,2000)；Goodman&Gilman's ThePharmacological Basis of Therapeutics(Joel G.Hardman等人,编辑,McGraw-HillProfessional,第10版,2001)；和Handbook of Pharmaceutical Excipients(RaymondC.Rowe等人,APhA Publications,第4版,2003)中找到。这些方案是常规程序，并且任何修改都完全在本领域技术人员的范围内，并且来自本文的教导。

本文公开的药物组合物可任选地包括但不限于其他药学上可接受的组分(或药物组分)，包括但不限于缓冲剂、防腐剂、张力调节剂、盐、抗氧化剂、渗透压调节剂、生理物质、药理物质、填充剂、乳化剂、润湿剂、甜味剂或调味剂等。可以使用用于调节pH的各种缓冲剂和手段来制备本文公开的药物组合物，前提是所得到的制剂是药学上可接受的。此类缓冲剂包括但不限于乙酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水和硼酸盐缓冲剂。应当理解，可以根据需要使用酸或碱来调节组合物的pH。药学上可接受的抗氧化剂包括但不限于焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、乙酰半胱氨酸、丁基羟基茴香醚和丁基羟基甲苯。有用的防腐剂包括但不限于苯扎氯铵(BAK)、氯丁醇、硫柳汞、乙酸苯汞、硝酸苯汞、稳定的氧氯组合物，诸如例如

和螯合剂，诸如例如DTPA或DTPA-双酰胺、DTPA钙和CaNaDTPA-双酰胺。这些防腐剂中的许多具有杀菌性能。可用于药物组合物中的张力调节剂包括但不限于盐，诸如例如氯化钠、氯化钾、甘露醇或甘油和其他药学上可接受的张力调节剂。药物组合物可作为盐提供，并可与许多酸形成，包括但不限于盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。盐倾向于比相应的游离碱形式更易溶于水性或其他质子溶剂中。应当理解，这些和药理学领域中已知的其他物质可以包括在药物组合物中。

本文公开的药物组合物可使用局部、眼科、肠内或肠胃外给药途径配制用于局部或全身递送。另外，本文公开的药物组合物可作为液体制剂、半固体制剂或固体制剂生产。本文公开的制剂可以以形成一种相的方式生产，诸如例如油或固体。可选地，本文公开的制剂可以以形成两种相的方式生产，诸如例如胶体制剂。本文公开的旨在用于这种给药的药物组合物可以根据本领域已知的用于制造药物组合物的任何方法制备。适用于局部和眼科给药的液体制剂包括但不限于溶液和乳剂。适用于局部和眼科给药的半固体制剂包括但不限于软膏、乳膏、药膏、泡沫和凝胶。适用于局部和眼科给药的固体制剂包括但不限于凝胶植入物、固体溶胶植入物和固体植入物。

产品组合中的一种或多种RNA酶和产品组合中的一种或多种另外的治疗剂的量是治疗有效量，例如，足以减少、预防、抑制、治疗、减轻、改善或减缓病毒复制或感染，包括病毒感染症状的量。治疗有效量是不会引起显著不良副作用的量。除了产品组合中相容量的特定RNA酶和特定另外的治疗剂的量之外，该量可根据给药的特定RN酶和给药的特定另外的治疗剂而变化。特定产品组合的最佳量可通过标准研究确定，所述标准研究包括观察促炎细胞因子滴度、抗炎细胞因子滴度、前列腺素滴度、减少一种或多种与病毒性结膜炎相关的症状以及个体的其他反应。主要的药物组合物过程可包括1、2、3或4剂量的药物组合物，其以最佳间隔给予以提供抗炎反应。

通常，产品组合中RNA酶或另外的治疗剂的有效和安全量范围为约1fg至约3,000mg。在一些实施方案中，包括在产品组合中的本文公开的RNA酶或另外的治疗剂的量可分别为约1fg、约2fg、约3fg、约4fg、约5fg、约6fg、约7fg、约8fg、约9fg、约10fg、约15fg、约20fg、约25fg、约30fg、约35fg、约40fg、约45fg、约50fg、约55fg、约60fg、约65fg、约70fg、约75fg、约80fg、约85fg、约90fg、约95fg、约100fg、约110fg、约120fg、约130fg、约140fg、约150fg、约160fg、约170fg、约180fg、约190fg、约200fg、约210fg、约220fg、约230fg、约240fg、约250fg、260fg、约270fg、约280fg、约290fg、约300fg、约310fg、约320fg、约330fg、约340fg、约350fg、360fg、约370fg、约380fg、约390fg、约400fg、约410fg、约420fg、约430fg、约440fg、约450fg、460fg、约470fg、约480fg、约490fg、约500fg、约510fg、约520fg、约530fg、约540fg、约550fg、560fg、约570fg、约580fg、约590fg、约600fg、约610fg、约620fg、约630fg、约640fg、约650fg、660fg、约670fg、约680fg、约690fg、约700fg、约710fg、约720fg、约730fg、约740fg、约750fg、760fg、约770fg、约780fg、约790fg、约800fg、约810fg、约820fg、约830fg、约840fg、约850fg、860fg、约870fg、约880fg、约890fg、约900fg、约910fg、约920fg、约930fg、约940fg、约950fg、960fg、约970fg、约980fg、约990fg或约1,000fg，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量。

在一些实施方案中，包括在产品组合中的本文公开的RNA酶或另外的治疗剂的量可分别为约1ng、约2ng、约3ng、约4ng、约5ng、约6ng、约7ng、约8ng、约9ng、约10ng、约15ng、约20ng、约25ng、约30ng、约35ng、约40ng、约45ng、约50ng、约55ng、约60ng、约65ng、约70ng、约75ng、约80ng、约85ng、约90ng、约95ng、约100ng、约110ng、约120ng、约130ng、约140ng、约150ng、约160ng、约170ng、约180ng、约190ng、约200ng、约210ng、约220ng、约230ng、约240ng、约250ng、260ng、约270ng、约280ng、约290ng、约300ng、约310ng、约320ng、约330ng、约340ng、约350ng、360ng、约370ng、约380ng、约390ng、约400ng、约410ng、约420ng、约430ng、约440ng、约450ng、460ng、约470ng、约480ng、约490ng、约500ng、约510ng、约520ng、约530ng、约540ng、约550ng、560ng、约570ng、约580ng、约590ng、约600ng、约610ng、约620ng、约630ng、约640ng、约650ng、660ng、约670ng、约680ng、约690ng、约700ng、约710ng、约720ng、约730ng、约740ng、约750ng、760ng、约770ng、约780ng、约790ng、约800ng、约810ng、约820ng、约830ng、约840ng、约850ng、860ng、约870ng、约880ng、约890ng、约900ng、约910ng、约920ng、约930ng、约940ng、约950ng、960ng、约970ng、约980ng、约990ng或约1,000ng，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量。

在一些实施方案中，包括在产品组合中的本文公开的RNA酶或另外的治疗剂的量可分别为约1μg、约2μg、约3μg、约4μg、约5μg、约6μg、约7μg、约8μg、约9μg、约10μg、约15μg、约20μg、约25μg、约30μg、约35μg、约40μg、约45μg、约50μg、约55μg、约60μg、约65μg、约70μg、约75μg、约80μg、约85μg、约90μg、约95μg、约100μg、约110μg、约120μg、约130μg、约140μg、约150μg、约160μg、约170μg、约180μg、约190μg、约200μg、约210μg、约220μg、约230μg、约240μg、约250μg、260μg、约270μg、约280μg、约290μg、约300μg、约310μg、约320μg、约330μg、约340μg、约350μg、360μg、约370μg、约380μg、约390μg、约400μg、约410μg、约420μg、约430μg、约440μg、约450μg、460μg、约470μg、约480μg、约490μg、约500μg、约510μg、约520μg、约530μg、约540μg、约550μg、560μg、约570μg、约580μg、约590μg、约600μg、约610μg、约620μg、约630μg、约640μg、约650μg、660μg、约670μg、约680μg、约690μg、约700μg、约710μg、约720μg、约730μg、约740μg、约750μg、760μg、约770μg、约780μg、约790μg、约800μg、约810μg、约820μg、约830μg、约840μg、约850μg、860μg、约870μg、约880μg、约890μg、约900μg、约910μg、约920μg、约930μg、约940μg、约950μg、960μg、约970μg、约980μg、约990μg或约1,000μg，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量。

在一些实施方案中，包括在产品组合中的本文公开的RNA酶或另外的治疗剂的量可分别为约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg、260mg、约270mg、约280mg、约290mg、约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、360mg、约370mg、约380mg、约390mg、约400mg、约410mg、约420mg、约430mg、约440mg、约450mg、460mg、约470mg、约480mg、约490mg、约500mg、约510mg、约520mg、约530mg、约540mg、约550mg、560mg、约570mg、约580mg、约590mg、约600mg、约610mg、约620mg、约630mg、约640mg、约650mg、660mg、约670mg、约680mg、约690mg、约700mg、约710mg、约720mg、约730mg、约740mg、约750mg、760mg、约770mg、约780mg、约790mg、约800mg、约810mg、约820mg、约830mg、约840mg、约850mg、860mg、约870mg、约880mg、约890mg、约900mg、约910mg、约920mg、约930mg、约940mg、约950mg、960mg、约970mg、约980mg、约990mg、约1,000mg、约1,250mg、约1,500mg、约1,750mg、约2,000mg、约2,250mg、约2,500mg、约2,750mg或约3,000mg，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量。

在一些实施方案中，本文所述的产品组合中存在的豹蛙酶的量根据重量体积百分比(％w/v)或根据摩尔浓度(M)表示。在一些实施方案中，豹蛙酶以范围为约0.001％至约5％w/v的量，如0.001％、0.002％、0.003％、0.004％、0.005％、0.006％、0.007％、0.008％、0.009％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％或5％w/v，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量存在。在一些实施方案中，豹蛙酶的存在范围为约0.001％至约1％w/v、0.01％至约1％w/v、0.001％至约0.1％w/v、约0.01％至约0.1％w/v、约0.005％至约5％w/v、0.05％至约1％w/v、0.005％至约0.5％w/v、约0.05％至约0.05％w/v、约0.02％至约0.05％w/v或约0.02％至约0.04％w/v，或者由上述值中的任意两个定义的任何范围。在一些实施方案中，豹蛙酶存在量的范围为约1μM至约4M，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000μM，或者1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500或4000mM，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量。在一些实施方案中，豹蛙酶存在的范围为约1μM至约30μM、10μM至约30μM、1mM至约30mM或20mM至约30mM。

在一些实施方案中，本文所述的产品组合中一种或多种另外的治疗剂的量根据％w/v或根据M表示。在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂以0.001％、0.002％、0.003％、0.004％、0.005％、0.006％、0.007％、0.008％、0.009％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％或5％w/v的量，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量存在。在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂的存在范围为约0.001％至约1％w/v、0.01％至约1％w/v、0.001％至约0.1％w/v、约0.01％至约0.1％w/v、约0.005％至约5％w/v、0.05％至约1％w/v、0.005％至约0.5％w/v、约0.05％至约0.05％w/v、约0.02％至约0.05％w/v或约0.02％至约0.04％w/v，或者由上述值中的任意两个定义的任何范围。在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂以范围为约1μM至约4M，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000μM，或者1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500或4000mM的量，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量存在。在一些实施方案中，豹蛙酶以约1μM至约30μM、10μM至约30μM、1mM至约30mM或20mM至约30mM的范围存在。

在一些实施方案中，产品组合包括以本文所述的任何量存在的豹蛙酶，并且以本文关于一种或多种另外的治疗剂描述的任何量存在的羟甲唑啉。在一些实施方案中，产品组合包括以约0.001％至约5％w/v的量存在的豹蛙酶，以及以约0.001％至约5％w/v的量存在的羟甲唑啉。在一些实施方案中，产品组合包括以约0.01％至约0.05％w/v的量存在的豹蛙酶，以及以约0.01％至约0.05％w/v的量存在的羟甲唑啉。在一些实施方案中，产品组合包括以约0.02％至约0.04％w/v的量存在的豹蛙酶，以及以约0.02％至约0.03％w/v的量存在的羟甲唑啉。在一些实施方案中，产品组合包括以约0.03％w/v的量存在的豹蛙酶，以及以约0.01％至约0.025％w/v的量存在的羟甲唑啉。

在一些实施方案中，产品组合包括以本文所述的任何量存在的豹蛙酶，以及以本文关于一种或多种另外的治疗剂描述的任何量存在的溴莫尼定。在一些实施方案中，产品组合包括以约0.001％至约5％w/v的量存在的豹蛙酶，以及以约0.001％至约5％w/v的量存在的溴莫尼定。在一些实施方案中，产品组合包括以约0.01％至约0.05％w/v的量存在的豹蛙酶，以及以约0.01％至约0.05％w/v的量存在的溴莫尼定。在一些实施方案中，产品组合包括以约0.02％至约0.04％w/v的量存在的豹蛙酶，以及以约0.02％至约0.03％w/v的量存在的溴莫尼定。在一些实施方案中，产品组合包括以约0.03％w/v的量存在的豹蛙酶，以及以约0.01％至约0.025％w/v的量存在的溴莫尼定。

如本文公开的包含一种或多种RNA酶和一种或多种另外的治疗剂的产品组合可在包括持续释放制剂和延长释放制剂的控释递送平台中配制。眼表面是给药的具有挑战性的靶组织，因为给药后泪液的产生会立即稀释活性成分。此外，眨眼会稀释并去除给药的活性成分。使用控释递送平台粘附于眼表面，以确保本文公开的一种或多种RNA酶和一种或多种另外的治疗剂保留足够的时间，以递送治疗效果必要的所需剂量。这种控释递送平台可以通过以时间控制的方式释放来改善本文公开的一种或多种RNA酶和一种或多种另外的治疗剂的递送动力学，从而潜在地使治疗过程中所需的滴注次数最小化。

延长释放制剂是指本文公开的一种或多种RNA酶和/或本文公开的一种或多种另外的治疗剂在少于约7天的一段时间内的释放。持续释放制剂是指本文公开的一种或多种RNA酶和/或本文公开的一种或多种另外的治疗剂在约7天或更长时间的一段时间内的释放。

在一些实施方案中，持续释放制剂在给药后例如约7天、约15天、给药后约30天、约45天、约60天、约75天或约90天的一段时间内，以基本上零级释放动力学释放本文公开的一种或多种RNA酶和/或一种或多种另外的治疗剂。在一些实施方案中，持续释放制剂在例如给药后约7天、约15天、给药后约30天、约45天、约60天、约75天或约90天的一段时间内，以基本上一级释放动力学释放本文公开的一种或多种RNA酶和/或一种或多种另外的治疗剂。

在一些实施方案中，延长释放制剂在例如给药后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天的一段时间内，以基本上零级释放动力学释放本文公开的一种或多种RNA酶和/或一种或多种另外的治疗剂。在一些实施方案中，延长释放制剂在例如给药后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天的时间段内，以基本上一级释放动力学释放本文公开的一种或多种RNA酶和/或一种或多种另外的治疗剂。

剂量可以是单一剂量或累积(连续剂量)，并且可以由本领域技术人员容易地确定。例如，治疗、抑制、减少、预防、减轻、改善或减缓病毒眼部复制或感染，如病毒性结膜炎、流行性角结膜炎和/或咽结膜热，减少或抑制炎症诱导分子和/或炎症诱导前列腺素的水平、刺激或增强过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)通路信号、促进M1到M2的解析(resolving)表型改变、调节Th1和Th2细胞因子，和/或减少或抑制NFκB通路信号可包括一次性给药有效量的本文公开的产品组合。作为非限制性实例，本文公开的有效量的产品组合或本文公开的药物组合物可一次性给药个体，例如作为单一应用。可选地，治疗、抑制、减少、预防、减轻、改善或减缓病毒眼部复制或感染，如病毒性结膜炎、流行性角结膜炎和/或咽结膜热，降低或抑制炎症诱导分子和/或炎症诱导前列腺素的水平、刺激或增强过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)通路信号、促进M1到M2的解析表型改变、调节Th1和Th2细胞因子，和/或减少或抑制NFκB通路信号可以包括，在一系列时间段内执行多次给药有效量的本文公开的产品组合，诸如例如每天一次或多次、每几天一次、每周一次、每月一次或每年一次。作为非限制性实例，本文公开的产品组合可以每天向个体给药一次、两次、三次、四次、五次或六次。给药时间因对象而异，取决于诸如对象症状的严重程度等因素。例如，本文公开的有效量的产品组合可在不确定的时间段内每天向对象给药三至六次，或直到对象不再需要治疗。本领域普通技术人员将认识到，可以在整个治疗过程中监测对象的状况，并且可以相应地调整给药的有效量的本文公开的产品组合。

IV.治疗方法

本文提供的一些实施方案涉及使用本文所述的包括一种或多种RNA酶和一种或多种另外的治疗剂的产品组合用于治疗、预防、抑制、减少、减轻、改善或减缓眼部复制或感染，如眼睛的病毒性感染的方法。

在一些实施方案中，方法包括向有需要的对象给药产品组合，其包括治疗有效量的一种或多种RNA酶，如豹蛙酶、两栖酶，或它们的变体、衍生物、类似物或片段，以及治疗有效量的一种或多种另外的治疗剂，如一种或多种血管收缩剂、一种或多种抗生素、一种或多种免疫调节化合物或一种或多种类固醇，或以上的组合。

本文提供的一些实施方案涉及减少或抑制对象中的病毒水平、病毒滴度、病毒复制、蛋白质合成和/或tRNA的方法。在一些实施方案中，方法包括向有需要的对象给药如本文所述的产品组合，其包括包含治疗有效量的一种或多种RNA酶的第一药物组合物，以及包含治疗有效量的一种或多种另外的治疗剂的第二药物组合物。这种给药减少或抑制病毒水平、病毒滴度、病毒复制、蛋白质合成和/或tRNA。还公开了本文所述的产品组合用于减少或抑制对象中的病毒水平、病毒滴度、病毒复制、蛋白质合成和/或tRNA的用途。

在一些实施方案中，提供了通过向对象给药如本文公开的产品组合，来治疗、抑制、预防、延缓、减轻、改善或减缓有需要的对象中的由来自腺病毒科或疱疹病毒科的病毒感染，诸如例如人腺病毒B、人腺病毒D、人腺病毒E、HSV、VZV、EBV、HZV或CMV引起的病毒性结膜炎、流行性角结膜炎或咽结膜热的方法或用途，其中给药减少与病毒性结膜炎相关的症状。在一些实施方案中，本文公开的方法治疗由人腺病毒B血清型3、人腺病毒B血清型7、人腺病毒B血清型11、人腺病毒D血清型8、人腺病毒D血清型13、人腺病毒D血清型19、人腺病毒D血清型37、人腺病毒E血清型4，或以上的任意组合引起的病毒性结膜炎、流行性角结膜炎或咽结膜热。

本文提供的一些实施方案涉及减少或抑制对象中的炎症诱导分子水平的方法。在一些实施方案中，方法包括向有需要的对象给药如本文所述的产品组合，其包括包含治疗有效量的一种或多种RNA酶的第一药物组合物和包含治疗有效量的一种或多种另外的治疗剂的第二药物组合物。此类给药减少或抑制炎症诱导分子的水平。还公开了产品组合用于减少或抑制炎症诱导分子水平的用途。本文公开的炎症诱导分子包括物质P、降钙素基因相关肽、谷氨酸或以上的组合。

本文提供的一些实施方案涉及减少或抑制对象中的炎症诱导前列腺素的水平的方法。在一些实施方案中，方法包括向有需要的对象给药如本文所述的产品组合，其包括包含治疗有效量的一种或多种RNA酶的第一药物组合物和包含治疗有效量的一种或多种另外的治疗剂的第二药物组合物。此类给药减少或抑制炎症诱导前列腺素的水平。还公开了产品组合用于减少或抑制炎症诱导前列腺素的水平的用途。炎症诱导前列腺素包括15dPGJ2。

本文提供的一些实施方案涉及刺激或增强对象中的过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号传导通路活性的方法。在一些实施方案中，方法包括向有需要的对象给药如本文所述的产品组合，其包括包含治疗有效量的一种或多种RNA酶的第一药物组合物和包含治疗有效量的一种或者多种另外的治疗剂的第二药物组合物。这种给药刺激或增强PPAR信号传导通路活性。还公开了产品组合用于刺激或增强PPAR信号传导通路活性的用途。PPAR信号传导通路活性包括PPAR-α信号传导通路活性、PPAR-γ信号传导通路活性和PPAR-δ(也称为PPAR-β)信号传导通路活性。

本文提供的一些实施方案涉及促进对象中M1到M2的解析表型改变的方法。在一些实施方案中，方法包括向有需要的对象给药如本文所述的产品组合，其包括包含治疗有效量的一种或多种RNA酶的第一药物组合物和包含治疗有效量的一种或者多种另外的治疗剂的第二药物组合物。这种给药诱导巨噬细胞M1细胞的凋亡，促进巨噬细胞M2细胞的分化或两者，从而促进M1到M2的解析表型改变。还公开了产品组合用于促进M1到M2的解析表型改变的用途。

本文提供的一些实施方案涉及调节对象中的Th1细胞因子水平和/或Th2细胞因子水平的方法。在一些实施方案中，方法包括向有需要的对象给药如本文所述的产品组合，其包括包含治疗有效量的一种或多种RNA酶的第一药物组合物和包含治疗有效量的一种或多种另外的治疗剂的第二药物组合物。这种给药降低了从Th1细胞释放的干扰素-γ(IFNγ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1b(IL-1b)、白细胞介素-12(IL-12)或以上的组合的水平，增加了从Th2细胞释放的IL-10的水平，或两者，从而调节Th1细胞因子和/或Th2细胞因子的水平。还公开了产品组合用于调节Th1细胞因子水平和/或Th2细胞因子水平的用途。

本文提供的一些实施方案涉及减少或抑制对象中的NFκB信号传导通路活性的方法。在一些实施方案中，方法包括向有需要的对象给药如本文所述的产品组合，其包括包含治疗有效量的一种或多种RNA酶的第一药物组合物和包含治疗有效量的一种或多种另外的治疗剂的第二药物组合物。此类给药减少或抑制NFκB信号传导通路活性。还公开了产品组合用于减少或抑制NFκB信号传导通路活性的用途。

在一些实施方案中，如本文所述的一种或多种RNA酶和一种或多种另外的治疗剂在产品组合中组合，如本文公开的。在一些实施方案中，包括一种或多种RNA酶和一种或多种另外的治疗剂的组合的产品组合一起协同地降低、预防、抑制、减轻、改善或治疗眼部复制或感染，如由腺病毒科或疱疹病毒科病毒引起的眼睛的病毒感染。在一些实施方案中，产品组合减少、阻止或抑制病毒水平、病毒滴度、病毒复制或病毒功能，如蛋白质或RNA合成。在一些实施方案中，产品组合将病毒水平、病毒滴度或病毒复制或病毒功能(如蛋白质或RNA合成)降低、阻止或抑制例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量。在一些实施方案中，产品组合降低、阻止或抑制病毒水平、病毒滴度或病毒复制，或病毒功能，如蛋白质或RNA合成的范围为例如约10％至约100％、约20％至约100％、约30％至约100％、约40％至约100％、约50％至约100％、约60％至约100％、约70％至约100％、约80％至约100％、约10％至约90％、约20％至约90％、约30％至约90％、约40％至约90％、约50％至约90％、约60％至约90％、约70％至约90％、约10％至约80％、约20％至约80％、约30％至约80％、约40％至约80％、约50％至约80％或约60％至约80％、约10％至约70％、约20％至约70％、约30％至约70％、约40％至约70％或约50％至约70％，或者由上述值中的任意两个定义的范围。

在一些实施方案中，本文提供的产品组合具有能够降低炎症诱导分子水平的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够降低物质P(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)、谷氨酸或以上的组合的水平的抗炎活性。在本实施方案的其他方面，本文公开的产品组合具有能够将从感觉神经元释放的SP、CGRP、谷氨酸或以上的组合的水平降低例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量的抗炎活性。在本实施方案的其他方面，本文公开的产品组合具有能够将从感觉神经元释放的SP、CGRP、谷氨酸或以上的组合的水平降低例如约10％至约100％、约20％至约100％、约30％至约100％、约40％至约100％、约50％至约100％、约60％至约100％、约70％至约100％、约80％至约100％、约10％至约90％、约20％至约90％、约30％至约90％、约40％至约90％、约50％至约90％、约60％至约90％、约70％至约90％、约10％至约80％、约20％至约80％、约30％至约80％、约40％至约80％、约50％至约80％或约60％至约80％、约10％至约70％、约20％至约70％、约30％至约70％、约40％至约70％或约50％至约70％的范围，或者由上述值中的任意两个定义的范围的抗炎活性。

在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够降低炎症诱导前列腺素的水平的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够将从感觉神经元释放的炎症诱导前列腺素的水平降低例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够将从感觉神经元释放的炎症诱导前列腺素的水平降低例如约10％至约100％、约20％至约100％、约30％至约100％、约40％至约100％、约50％至约100％、约60％至约100％、约70％至约100％、约80％至约100％、约10％至约90％、约20％至约90％、约30％至约90％、约40％至约90％、约50％至约90％、约60％至约90％、约70％至约90％、约10％至约80％、约20％至约80％、约30％至约80％、约40％至约80％、约50％至约80％或约60％至约80％、约10％至约70％、约20％至约70％、约30％至约70％、约40％至约70％或约50％至约70％的范围，或者由上述值中的任意两个定义的范围的抗炎活性。

在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有基本上类似于15dPGJ2的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合的抗炎活性为例如对于15dPGJ2观察到的活性的至少5％、至少15％、至少25％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量。在一些实施方案中，本文公开的产品组合的抗炎活性为例如对于15dPGJ2观察到的活性的约5％至约100％、约50％至约100％、约60％至约100％、约70％至约100％、约80％至约100％、约25％至约90％、约50％至约90％、约60％至约90％、约70％至约90％、约80％至约90％、约25％至约80％、约50％至约80％、约60％至约80％、约70％至约80％、约25％至约70％、约50％至约70％、约25％至约60％、约50％至约60％或约25％至约50％的范围，或者由上述值中的任意两个定义的范围。

在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够刺激或增强来自所有PPAR信号传导通路的活性的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够刺激或增强一种或两种PPAR信号传导通路的活性的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够刺激或增强PPAR-α信号传导通路活性的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合将PPAR-α信号传导通路活性刺激或增强例如至少5％、至少15％、至少25％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量。在一些实施方案中，本文公开的产品组合在例如约5％至约100％、约50％至约100％、约60％至约100％、约70％至约100％、约80％至约100％、约25％至约90％、约50％至约90％、约60％至约90％、约70％至约90％、约80％至约90％、约25％至约80％、约50％至约80％、约60％至约80％、约70％至约80％、约25％至约70％、约50％至约70％、约25％至约60％、约50％至约60％或约25％至约50％的范围或者由上述值中的任意两个定义的范围内刺激或增强PPAR-α信号传导通路活性。

在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够刺激或增强PPAR-δ信号传导通路活性的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合将PPAR-δ信号传导通路活性刺激或增强例如至少5％、至少15％、至少25％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量。在一些实施方案中，本文公开的产品组合在例如约5％至约100％、约50％至约100％、约60％至约100％、约70％至约100％、约80％至约100％、约25％至约90％、约50％至约90％、约60％至约90％、约70％至约90％、约80％至约90％、约25％至约80％、约50％至约80％、约60％至约80％、约70％至约80％、约25％至约70％、约50％至约70％、约25％至约60％、约50％至约60％或约25％至约50％的范围或者由上述值中的任意两个定义的范围内刺激或增强PPAR-δ信号传导通路活性。

在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够刺激或增强PPARγ信号传导通路活性的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合将PPARγ信号传导通路活性刺激或增强例如至少5％、至少15％、至少25％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量。在一些实施方案中，本文公开的产品组合在例如约5％至约100％、约50％至约100％、约60％至约100％、约70％至约100％、约80％至约100％、约25％至约90％、约50％至约90％、约60％至约90％、约70％至约90％、约80％至约90％、约25％至约80％、约50％至约80％、约60％至约80％、约70％至约80％、约25％至约70％、约50％至约70％、约25％至约60％、约50％至约60％或约25％至约50％的范围或者由上述值中的任意两个定义的范围内刺激或增强PPARγ信号传导通路活性。

在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够促进M1到M2的解析表型改变的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够诱导巨噬细胞M1细胞凋亡的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够促进巨噬细胞M2细胞分化的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够诱导巨噬细胞M1细胞凋亡和促进巨噬细胞M2细胞分化的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够调节Th1细胞因子和/或Th2细胞因子水平的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够降低从Th1细胞释放的干扰素-γ(IFNγ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1b(IL-1b)、白细胞介素-12(IL-12)或以上的组合的水平的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够将从Th1细胞释放的IFNγ、TNF-α、IL-1b、IL-12或以上的组合的水平降低例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够在例如约5％至约100％、约10％至约100％、约20％至约100％、约30％至约100％、约40％至约100％、约50％至约100％、约60％至约100％、约70％至约100％、约80％至约100％、约10％至约90％、约20％至约90％、约30％至约90％、约40％至约90％、约50％至约90％、约60％至约90％、约70％至约90％、约10％至约80％、约20％至约80％、约30％至约80％、约40％至约80％、约50％至约80％或约60％至约80％、约10％至约70％、约20％至约70％、约30％至约70％、约40％至约70％或约50％至约70％的范围，或者由上述值中的任意两个定义的范围内降低从Th1细胞释放的IFNγ、TNF-α、IL-1b、IL-12或以上的组合的水平的抗炎活性。

在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够增加从Th2细胞释放的IL-10水平的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够将从Th2细胞释放的IL-10水平增加例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够在例如约5％至约100％、约10％至约100％、约20％至约100％、约30％至约100％、约40％至约100％、约50％至约100％、约60％至约100％、约70％至约100％、约80％至约100％、约10％至约90％、约20％至约90％、约30％至约90％、约40％至约90％、约50％至约90％、约60％至约90％、约70％至约90％、约10％至约80％、约20％至约80％、约30％至约80％、约40％至约80％、约50％至约80％、或约60％至约80％、约10％至约70％、约20％至约70％、约30％至约70％、约40％至约70％或约50％至约70％的范围，或者由上述值中的任意两个定义的范围内增加从Th2细胞释放的IL-10水平的抗炎活性。

在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够降低从Th1细胞释放的IFNγ、TNF-α、IL-1b、IL-12或以上的组合的水平，并增加从Th2细胞释放的IL-10水平的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够将从Th1细胞释放的IFNγ、TNF-α、IL-1b、IL-12或以上的组合的水平降低例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量，并且能够将从Th2细胞释放的IL-10水平增加例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够在例如约5％至约100％、约10％至约100％、约20％至约100％、约30％至约100％、约40％至约100％、约50％至约100％、约60％至约100％、约70％至约100％、约80％至约100％、约10％至约90％、约20％至约90％、约30％至约90％、约40％至约90％、约50％至约90％、约60％至约90％、约70％至约90％、约10％至约80％、约20％至约80％、约30％至约80％、约40％至约80％、约50％至约80％或约60％至约80％、约10％至约70％、约20％至约70％、约30％至约70％、约40％至约70％或约50％至约70％的范围，或者由上述值中的任意两个定义的范围内降低从Th1细胞释放的IFNγ、TNF-α、IL-1b、IL-12或以上的组合的水平，并且能够在例如约10％至约100％、约20％至约100％、约30％至约100％、约40％至约100％、约50％至约100％、约60％至约100％、约70％至约100％、约80％至约100％、约10％至约90％、约20％至约90％、约30％至约90％、约40％至约90％、约50％至约90％、约60％至约90％、约70％至约90％、约10％至约80％、约20％至约80％、约30％至约80％、约40％至约80％、约50％至约80％或约60％至约80％、约10％至约70％、约20％至约70％、约30％至约70％、约40％至约70％或约50％至约70％的范围，或者由上述值中的任意两个定义的范围内增加从Th2细胞释放的IL-10的水平的抗炎活性。

在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够减少或抑制NFκB信号传导通路活性的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够将NFκB信号传导通路活性减少或抑制例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量的抗炎活性。在一些实施方案中，本文公开的产品组合具有能够在例如约5％至约100％、约10％至约100％、约20％至约100％、约30％至约100％、约40％至约100％、约50％至约100％、约60％至约100％、约70％至约100％、约80％至约100％、约10％至约90％、约20％至约90％、约30％至约90％、约40％至约90％、约50％至约90％、约60％至约90％、约70％至约90％、约10％至约80％、约20％至约80％、约30％至约80％、约40％至约80％、约50％至约80％、或约60％至约80％、约10％至约70％、约20％至约70％、约30％至约70％、约40％至约70％或约50％至约70％的范围，或者由上述值中的任意两个定义的范围内减少或抑制NFκB信号传导通路活性的抗炎活性。

在一些实施方案中，本文公开的产品组合使用眼科制剂和眼科递送途径给药。例如，产品组合可以配制为局部制剂，诸如例如滴眼剂、泪点塞、药膏、软膏、洗剂，配制为肠内制剂，诸如例如片剂、胶囊、糖浆，或者配制为肠胃外制剂，诸如例如注射剂或眼内塞。此类制剂可以例如经由眼部滴注、眼部冲洗或局部植入物(泪点塞)进行眼部给药，或者经由眼内注射或植入物、玻璃体内注射、角膜内注射或植入物或结膜下注射或植入物进行肠道外给药。在一些实施方案中，一种或多种RNA酶配制为与一种或多种另外的治疗剂分开的制剂。在这样的实施方案中，分开的制剂可以组合给药。在一些实施方案中，一种或多种RNA酶与一种或多种另外的治疗剂配制在产品组合中作为同一制剂。

在一些实施方案中，提供了治疗、减少、抑制、预防、减轻、改善或减缓病毒复制或感染，包括病毒感染症状的方法，如本文所述的。在一些实施方案中，方法包括给药包括如本文所述的一种或多种RNA酶和如本文所述的一种或多种另外的治疗剂的产品组合。如本文所使用的，术语“给药”是指向对象提供本文所公开的包含一种或多种RNA酶和一种或多种另外的治疗剂的产品组合的任何递送机制，其导致临床上、治疗上或实验上有益的结果。用于向对象给药本文公开的组合物的实际递送机制可由本领域普通技术人员通过考虑以下因素来确定，包括但不限于：眼部感染如病毒性结膜炎的类型、眼部感染如病毒结膜炎的位置、眼部感染如病毒性结膜炎的原因、眼部感染如病毒性结膜炎的严重程度、眼部感染如病毒性结膜炎所需的缓解程度、眼部感染如病毒性结膜炎所需的缓解持续时间、治疗、抑制、减轻、改善、预防、减少或抑制所需的病毒水平、病毒滴度、病毒复制、蛋白质合成或tRNA、被调节的特定信号通路、炎症分子、前列腺素和/或细胞因子、特定的病毒病原体、所用的特定RNA酶和另外的治疗剂、所用的特定RNA酶和另外的治疗剂的排泄率、所用的特定RNA酶和另外的治疗剂的药代动力学、将包括在药物组合物中的任何另外的化合物的性质、对象的特定给药途径、特定特征、历史和风险因素，诸如例如年龄、体重、一般健康等，或以上的任意组合。

在一些实施方案中，给药本文公开的产品组合包括给药至对象的结膜表面、给药至对象的眼睛表面或给药至对象的结膜表面和/或眼睛表面。

在一些实施方案中，给药本文公开的产品组合包括向对象的结膜给药植入物、向对象的眼睛给药植入物或向对象的结膜和/或眼睛给药植入物。

在一些实施方案中，给药本文公开的产品组合包括眼部滴注、眼部冲洗、眼内注射、角膜内注射、玻璃体内注射或结膜下注射。

在一些实施方案中，本文公开的产品组合以足以治疗眼部复制或感染，如病毒性结膜炎、流行性角结膜炎和/或咽结膜热，降低炎症诱导分子和/或炎症诱导前列腺素的水平，刺激或增强过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)通路信号，促进M1到M2的解析表型改变，调节Th1和Th2细胞因子，和/或减少或抑制NFκB通路信号的量给药。在一些实施方案中，产品组合中一种或多种RNA酶和一种或多种另外的治疗剂的量以足以减少与眼部感染，如病毒性结膜炎、流行性角结膜炎和/或咽结膜热相关的一种或多种生理状况或症状，降低炎症诱导分子和/或炎症诱导前列腺素的水平，刺激或增强过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)通路信号，促进M1到M2的解析表型改变，调节Th1和Th2细胞因子，和/或减少或抑制NFκB通路信号的量给药。如本文所用，术语“足以……的量”包括“有效量”、“有效剂量”、“治疗有效量”或“治疗有效剂量”，并且是指达到所需治疗效果的本文公开的RNA酶和/或另外的治疗剂的量，并且包括足以减少与眼部感染，如病毒性结膜炎、流行性角结膜炎和/或咽结膜热相关的一种或多种生理状况或症状的量，足以降低炎症诱导分子和/或炎症诱导前列腺素的水平的量，足以刺激或增强过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)通路信号的量，足以促进M1到M2的解析表型改变的量，足以调节Th1和Th2细胞因子的量，和/或足以减少或抑制NFκB通路信号的量。

本领域普通技术人员可以通过考虑以下因素来确定向对象给药的RNA酶和/或另外的治疗剂的实际有效量，包括但不限于：眼部感染如病毒性结膜炎的类型、眼部感染如病毒性结膜炎的位置、眼部感染如病毒性结膜炎的原因、眼部感染如病毒性结膜炎的严重程度、眼部感染如病毒性结膜炎所需的缓解程度、眼部感染如病毒性结膜炎所需的缓解持续时间、减少或抑制所需的病毒水平、病毒滴度、病毒复制、蛋白质合成或tRNA、被调节的特定信号通路、炎症分子、前列腺素和/或细胞因子、特定病毒病原体、所用的特定RNA酶和另外的治疗剂、所用的特定RNA酶和另外的治疗剂的排泄率、所用的特定RNA酶和另外的治疗剂的药代动力学、药物组合物中包括的任何另外的化合物的性质、对象的特定给药途径、特定特征、历史和风险因素，诸如例如年龄、体重、一般健康等，或以上的任意组合。另外，在使用产品组合的重复给药的情况下，实际治疗有效量可进一步取决于以下因素，包括但不限于给药频率、所使用的RNA酶和另外的治疗剂的半衰期，或以上的任意组合。本领域普通技术人员已知，本文公开的RNA酶和另外的治疗剂或本文公开的药物组合物的有效量可以在给药至人之前使用动物模型从体外测定和体内给药研究中推断出来。鉴于各种给药途径的效率不同，预计必要的有效量会有很大差异。例如，眼科给药通常预计需要比经口给药更高的剂量水平，并且经口给药通常预期需要比通过静脉注射或玻璃体内注射给药更高的剂量水平。这些剂量水平的变化可以使用本领域普通技术人员熟知的标准经验优化程序进行调整。精确的治疗有效剂量水平和模式优选由主治医师考虑上述因素来确定。

在一些实施方案中，本文公开的一种或多种RNA酶或本文公开的一种或多种另外的治疗剂的有效量范围通常分别为约0.001mg/kg/天至约100mg/kg/天。在一些实施方案中，本文公开的一种或多种RNA酶或一种或多种另外的治疗剂的有效量可以分别为至少0.001mg/kg/天、至少0.01mg/kg/天、至少0.1mg/kg/天、至少1.0mg/kg/天、至少5.0mg/kg/天、至少10mg/kg/天、至少15mg/kg/天、至少20mg/kg/天、至少25mg/kg/天、至少30mg/kg/天、至少35mg/kg/天、至少40mg/kg/天、至少45mg/kg/天、至少50mg/kg/天、至少60mg/kg/天、至少70mg/kg/天、至少80mg/kg/天、至少90mg/kg/天或至少100mg/kg/天，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的量。

在一些实施方案中，产品组合以给药量提供。在一些实施方案中，在眼科组合物中配制给药量。在一些实施方案中，眼科组合物包含豹蛙酶和一种或多种另外的治疗剂，如羟甲唑啉和/或溴莫尼定。在一些实施方案中，在两种单独的组合物中提供眼科组合物，其中一种包括豹蛙酶，并且其中一种包括一种或多种另外的治疗剂，如羟甲唑啉和/或溴莫尼定。在一些实施方案中，每天一次或多次，如每天1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次向对象给药眼科组合物。在一些实施方案中，通过在每次剂量时在一只眼睛或两只眼睛中滴注一滴或多滴来给药。在一些实施方案中，在一天或多天，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60或更多天的过程中，或在由上述值中的任意两个定义的范围内的时间长度内，每天以给定频率(如每天一次或多次)给药眼科组合物，每只眼睛给药多滴(如每只眼睛一滴或多滴)。

在一些实施方案中，用于给药的每滴包括范围为约5μL至约50μL，如5、10、15、20、25、30、35、40、45或50μL的体积，或者由上述值中的任意两个定义的范围内的体积。

在一些实施方案中，单位剂量包括每只眼睛给药一滴，其中每滴包括以约0.03％w/v量的存在的豹蛙酶和以约0.01％至约0.025％w/v的量的羟甲唑啉。在一些实施方案中，每日剂量包括每天4次在每只眼睛中给药一滴，其中每滴包括以约0.03％w/v的量存在的豹蛙酶和约0.01％至约0.025％w/v的量的羟甲唑啉。

在一些实施方案中，单位剂量包括每只眼睛给药一滴，其中每滴包括以约0.03％w/v的量存在的豹蛙酶和以约0.01％至约0.025％w/v的量的溴莫尼定。在一些实施方案中，每日剂量包括每天4次在每只眼睛中给药一滴，其中每滴包括以约0.03％w/v的量存在的豹蛙酶和以约0.01％至约0.025％w/v的量的溴莫尼定。

在一些实施方案中，给药量包括约0.03％w/v的剂量给药的豹蛙酶和以约0.01％至0.025％w/v的剂量给药的羟甲唑啉，在一滴或多滴中给药，每天一次或多次。在一些实施方案中，每天4次在对象的每只眼睛中给药眼科组合物，并且所述眼科组合物包含约0.03％w/v的量的豹蛙酶和以约0.01％至约0.025％w/v的量的羟甲唑啉。

在一些实施方案中，给药量包括以约0.03％w/v的剂量给药的豹蛙酶和以约0.01％至0.025％w/v的剂量给药的溴莫尼定，在一滴或多滴中给药，每天一次或多次。在一些实施方案中，每天4次在对象的每只眼睛中给药眼科组合物，并且所述眼科组合物包含约0.03％w/v的量的豹蛙酶和约0.01％至约0.025％w/v的量的溴莫尼定。

实施例

在以下实施例中进一步限定了本发明的实施方案。应当理解，这些实施例仅通过示例的方式给出。从以上讨论和这些实施例中，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征，并且在不脱离其精神和范围的情况下，可以对本发明的实施方案进行各种改变和修改，以使其适应各种用途和条件。因此，除了本文所示和描述的那些之外，从上述描述中，本发明的实施方案的各种修改对于本领域技术人员来说将是显而易见的。这种修改也旨在落入所附权利要求的范围内。本文所示的每篇参考文献的公开内容通过引用整体并入本文中，并用于本文所引用的公开内容。

实施例1

豹蛙酶和治疗药剂的制剂

以下实施例提供了配制用于眼科给药的产品组合中的核糖核酸酶与治疗药剂的制剂。

制备了豹蛙酶和羟甲唑啉的眼科制剂。制剂包括于pH为7.4的PBS中的0.03％w/v(25mM)的豹蛙酶、范围为0.01％-0.025％w/v的量的羟甲唑啉，以及苯扎氯铵(BAK)。

实施例2

豹蛙酶和治疗药剂的相容性

以下实施例证明了配制用于眼科给药的产品组合中核糖核酸酶与治疗剂的相容性。

制备了具有0.03％w/v的豹蛙酶以及羟甲唑啉或溴莫尼定的制剂。通过色谱法分析制剂，以验证治疗药剂是否干扰豹蛙酶。采用了几种色谱方法，包括阳离子交换和尺寸排阻色谱，以及苯扎氯铵(BAK)分析。

对于阳离子交换色谱，利用以下溶液进行分析：稀释剂(PBS pH 7.4)、盐酸羟甲唑啉(0.5mg/mL)、安慰剂和豹蛙酶。在稀释剂中制备盐酸羟甲唑啉(0.5mg/mL)溶液。将豹蛙酶及其安慰剂从冰箱中取出，升温至室温，并装入HPLC小瓶中。

豹蛙酶在RT＝20.8min处表现出峰值，在RT＝17.7min处出现肩峰。对于羟甲唑啉色谱图，除了1.4min处稀释剂峰后的小峰外，没有观察到羟甲唑啉峰。因此，羟甲唑啉在阳离子交换方法中似乎不存在任何干扰。

对于尺寸排阻色谱，对以下溶液进行分析：稀释剂(PBS pH7.4)、盐酸羟甲唑啉(0.5mg/mL)、安慰剂和豹蛙酶。在稀释剂中制备盐酸羟甲唑啉(0.5mg/mL)溶液。将豹蛙酶及其安慰剂从冰箱中取出，升温至室温，并装入HPLC小瓶中。

豹蛙酶在RT＝17.4min处出现峰值。对于羟甲唑啉色谱图，未观察到羟甲唑啉峰。因此，羟甲唑啉在尺寸排阻方法中似乎不存在任何干扰。

对以下溶液进行苯扎氯铵(BAK)分析：稀释剂(PBS pH 7.4)、盐酸羟甲唑啉(0.05mg/mL)、安慰剂和豹蛙酶。将盐酸羟甲唑啉(0.5mg/mL)溶液(10x)在稀释剂中稀释至0.05mg/mL。将豹蛙酶及其安慰剂从冰箱中取出，升温至室温，并装入HPLC小瓶中。

方法中的稀释剂为50:50的水：甲醇，但在PBS溶液中制备羟甲唑啉溶液，以确定羟甲唑啉是否干扰BAK峰。

BAK峰的典型RT为C12＝6.3min，C14＝8.0min，C16＝9.4min。在RT 6.8min、8.5min和9.9min处，豹蛙酶色谱图显示出峰值。羟甲唑啉在RT 2.36min处显示出峰值，但不干扰BAK峰。羟甲唑啉在BAK方法中不存在任何干扰。

这些分析证明了在眼科制剂中配制豹蛙酶与羟甲唑啉的相容性。

实施例3

产品组合的功效和安全性

本实施例证明了在用于治疗患有急性腺病毒性结膜炎的患者的眼科制剂中配制的豹蛙酶和羟甲唑啉的产品组合的功效和安全性。

在媒介物中制备具有约0.03％w/v的量的豹蛙酶和约0.025％w/v的量的羟甲唑啉的眼科制剂。制备了具有于媒介物中的约0.03％w/v的量的豹蛙酶或仅媒介物的对照制剂。

将制剂以每天四次(QID)滴注在每只眼睛中，持续五天。患者按2:1:1的比例随机接受一剂组合制剂、于媒介物中的豹蛙酶或仅媒介物。在双掩蔽盲研究中进行本研究。登记包括总共352名患者，其中176名患者接受组合制剂，88名患者接受于媒介物中的豹蛙酶，且88名仅接受媒介物。

用于研究的纳入标准包括以下内容。每位患者必须：

1.无论性别或任何种族，在第1次访视(第1天，基线)时年龄≥18岁。

2.愿意并能够提供书面知情同意书，或者如果患者无法阅读，则按照当地法律和人类研究伦理委员会(HREC)指南的规定提供同意书。

3.愿意并能够遵守所有指示并参加所有研究访视。

4.至少有一只眼睛有疑似急性腺病毒性结膜炎的临床诊断，并且同一只眼睛存在以下两种最小临床体征：

·球结膜发红：基于0-3级的最低等级“1”

·水样眼部分泌物：基于0-3级的最低等级“1”

5.在第1次访视之前，患者报告在同一只眼睛中存在与腺病毒性结膜炎≤72小时一致的体征和症状(注意，如果一只眼睛具有>72小时的体征/症状，则如果另一只眼睛具有≤72小时的体征/症状并且满足所有其他的纳入/排除标准，其另一只眼睛可能仍然合格)。

6.在第1次访视时，在符合球结膜发红和水样眼部分泌物最低1+等级的同一只眼睛中，

检测呈阳性。

7.在研究持续时间内，愿意避免不允许的药物和治疗(参见排除标准12、14和19)。

8.愿意在研究持续时间内停止佩戴隐性镜片。

9.同意在登记前的第1次访视时和第4次访视时接受妊娠测试，或不具备生育潜力。

10.同意在研究持续时间内使用可接受的避孕方法，或不具有生育潜力。可接受的节育方法包括：口服、经皮、注射或可植入避孕、宫内节育器、禁欲和伴侣手术绝育。如果女性患者进行过子宫切除术、双侧卵巢切除术、双侧输卵管结扎术或绝经后至少12个月，则她们不具有生育潜力。

11.如使用糖尿病视网膜病变早期治疗研究(ETDRS)图表或文盲患者的ETDRS等效图表测量的，每只眼睛的最佳眼镜矫正视力(BSCVA)为最小分辨角(logMAR)的0.60对数或更好。

用于研究的排除标准包括以下内容。每位患者不得：

1.对研究药物或诊断的任何成分具有已知的敏感性或耐受不良。

2.第1次访视前12周内具有眼部手术干预或创伤的历史或者在研究期间计划进行眼部手术干预或创伤。

3.除急性腺病毒性结膜炎外，存在任何活动性眼部炎症(如葡萄膜炎、过敏性结膜炎、眼红斑痤疮或虹膜炎)。

4.除急性腺病毒性结膜炎外具有眼部感染的临床体征或存在眼部感染(例如，细菌、真菌或其他眼部病毒感染，如疱疹)。

5.在基线处，在研究眼中存在角膜上皮下浸润。

6.在基线处，在研究眼中存在假膜，其需要进行干预，该干预不被包括为研究方案程序的一部分。

7.有复发性角膜糜烂综合征、溃疡性角膜炎或干眼病史，包括睑板腺功能障碍和其他眼表疾病。

8.存在严重的眼睑炎、眼睑异常、眼睑边缘严重炎症或上睑下垂。

9.任一眼中有泪管阻塞。

10.在裂隙灯检查过程中，存在可能干扰研究参数或以其他方式混淆研究者确定的数据的任何其他具有临床意义的发现。

11.在任何一只眼睛中，有任何具有临床意义的视网膜或视神经发现(如在非扩张眼底检查中观察到的)或先前诊断，其可能干扰研究参数或以其他方式混淆研究者确定的数据)。

12.在登记的7天内使用过任何局部眼部或全身抗病毒或者局部眼部或全身皮质类固醇，且在研究持续时间内不计划开始任何局部眼部或全身抗病毒。研究期间允许吸入、鼻内和局部皮肤科类固醇(面部除外)。

13.在试验持续时间内开始或继续使用热敷或冷敷。

14.在第1次访视的2小时内使用过任何局部眼科溶液，包括泪液替代品和诊断剂，并且在研究持续时间内无法停止所有局部眼科溶液(包括诊断剂，本方案和抗生素要求的除外)。另外，如果患者在过去72小时内使用了于水凝胶中配制的人工泪液或其他局部眼用制剂。

15.目前正在怀孕、哺乳或计划怀孕；或者是怀孕测试呈阳性的女性。

16.患有任何不受控制的(过去30天没有稳定的方案)全身性疾病或衰弱性疾病(例如心血管疾病、高血压、糖尿病或囊性纤维化)或服用已知会影响眼表和/或泪膜的药物。

17.在研究期间计划住院过夜。

18.患有任何不受控制的(过去30天没有稳定的方案)自身免疫性疾病或服用已知会影响眼表和/或泪膜的药物。

19.之前(在开始研究治疗的30天内)或预期同时使用研究药物或装置。

20.具有这样的状况或情形，即在研究者看来，可能会使患者处于增加的风险、混淆研究数据或严重干扰患者的研究参与。

21.不太可能遵循研究指示或完成所有要求的研究访视，或具有这样的状况或情形，即在研究者看来，可能使患者面临重大风险、可能混淆研究结果或可能严重干扰患者参与研究。

功效终点包括以下内容。主要功效终点包括：在第2次访视时研究的眼中急性腺病毒性结膜炎相比基线的临床改善，如通过球结膜发红的严重程度(使用经验证的基于图片的参考量表以0-3的级别进行等级划分)和水样结膜分泌物之和测量的。

关键的次要功效终点包括：1.通过细胞培养免疫荧光测定(CC-IFA)评估的在第2次访视时的腺病毒根除；2.第2次访视时研究眼中急性腺病毒性结膜炎的整体临床治愈，如通过每次访视时使用水样结膜分泌物和球结膜发红的参考量表的评分总和的缺失(评分＝0)测量的；以及3.第5次访视时存在/缺失上皮下浸润。

次要功效终点包括：1.通过细胞培养免疫荧光测定(CC-IFA)评估的每次随访(除了第2次访视外)时的腺病毒根除；2.通过定量聚合酶链式反应(qPCR)评估的每次随访时研究眼中病毒滴度水平相对于基线的平均变化；3.通过qPCR评估的病毒滴度低于检测下限(LLOD)的患者的百分比；4.通过qPCR评估的病毒滴度低于100拷贝/mL的患者的百分比；5.如通过球结膜发红的严重程度(使用经验证的基于图片的参考量表以0-3的级别进行等级划分)测量的在每次访视(独立地第2次访视、第3次访视、第4次访视或第5次访视)时，研究眼中急性腺病毒性结膜炎的临床改善；6.在每次访视(独立地第2次访视、第3次访视、第4次访视或第5次访视)时，研究眼中急性腺病毒性结膜炎的临床改善，如通过水样结膜分泌物的严重程度(使用经验证的参考量表以0-3的级别进行等级划分)测量的；7.在每次访视(独立地第2次访视、第3次访视、第4次访视或第5次访视)时，研究眼中急性腺病毒性结膜炎的临床治愈，如通过球结膜发红(使用经验证的基于图片的参考量表以0-3的级别进行等级划分)的缺失(评分＝0)测量的；8.在每次访视(独立地第2次访视、第3次访视、第4次访视或第5次访视)时，研究眼中急性腺病毒性结膜炎的临床治愈，如通过水样结膜分泌物(使用经验证的参考量表以0-3的级别进行等级划分)的缺失(评分＝0)测量的；9.在每次访视(独立地第3次访视、第4次访视或第5次访视)时，研究眼中急性腺病毒性结膜炎的整体临床治愈，如通过使用水样结膜分泌物和球结膜发红的参考量表的评分总和的缺失(评分＝0)测量的；10.在每次访视(独立地第2次访视、第3次访视、第4次访视或第5次访视)时，研究眼中腺病毒性结膜炎的扩大的临床治愈。扩大的临床治愈定义为以下2种临床体征的评分为0或1：水样结膜分泌物和球结膜发红；11.在每次访视时，研究眼中球结膜发红评分相对于基线的平均变化；12.在每次访视时，研究眼中水样结膜分泌物评分相对于基线的平均变化；13.在每次访视时，球结膜发红和水样结膜分泌物评分总和相对于基线的平均变化；14.除第5次访视外，每次访视时存在/缺失上皮下浸润；15.每次访视时上皮下浸润的严重程度；以及16.每次访视时以下的其他临床体征和症状的严重程度：流泪、灼热、视力模糊、畏光、异物感、瘙痒、眼睑水肿或眼睑红斑。

安全性测量通过以下方式进行评估：1.裂隙灯生物显微镜(非扩张性眼底检查)；2.BSCVA；3.尿妊娠试验；4.不良事件(AE)；5.通过使用研究参考手册中定义的视觉模拟量表，评估滴注(自我给药)后第1次访视时、滴注后5分钟患者另一只眼睛中滴注舒适度的耐受性。

连续变量的概括包括样本量、平均值、标准差、中值、最小值和最大值。离散变量的概括包括频率和百分比。通常，数据按治疗组汇总。治疗组之间的差异计算为测试–媒介物，并且相对于基线的变化(CFB)计算为随访–基线。基线访视被定义为开始研究治疗之前的最后一次非缺失措施。除非另有说明，否则所有功效分析均为双侧α＝0.05检验。

研究人群包括以下人群。意向治疗(ITT)人群由所有随机患者组成；ITT中的对象根据他们随机分组的治疗进行分析。

改良意向治疗(mITT)人群由ITT患者的子集组成，他们接受了至少一(1)剂研究产品，且在第1次访视时在符合临床症状要求(球结膜发红和水样眼部分泌物为1+级)的眼睛中在第1次访视时CCIFA呈阳性。mITT人群用于功效分析，并根据他们随机分组的治疗分析患者。

遵循方案(PP)人群是mITT人群的一个子集，并且包括没有可能严重影响研究的主要结果的严重违反方案的患者。PP人群用于功效的敏感性分析、分析实际接受治疗的患者。重要的方案偏差与研究纳入或排除标准、试验实施、患者管理或掩蔽治疗(unmaskingtreatment)之前鉴定的患者评估相关。

安全性人群包括接受至少一剂研究药物的所有随机患者。安全性人群按治疗情况进行分析，并用于安全性分析。无任何原因排除数据。

分析单位为研究眼的所有功效和眼部安全性汇总。如果对象的双眼在第1次访视时均符合临床症状要求(球结膜发红和水样眼部分泌物1+级)，且在第1次访视时CC-IFA呈阳性，则研究眼为第1次访视时总临床症状评分(球结膜发红+水样眼部分泌物)最高的眼睛。如果两只眼睛具有相同的第1次访视总临床症状评分，则研究眼为右眼(OD)；另一只眼睛被认为是合格的另一只眼睛。如果对象的仅一只眼睛在第1次访视时符合临床症状要求(球结膜发红和水样眼部分泌物为1+级)，并且在第1次访视时CC-IFA呈阳性，则该眼睛为研究眼。另一只眼睛被认为是不合格的另一只眼睛。

对于mITT人群中的那些对象，ITT和安全人群的研究眼被定义为mITT人群的研究眼。对于不在mITT人群中的那些对象，研究眼被定义为第1次访视时总临床症状评分(球结膜发红+水样眼部分泌物)最高的眼。如果两只眼的第1次访视总临床症状评分相同，则研究眼为右眼(OD)。如果另一只眼睛在第1次访视时符合临床症状评分要求(球结膜发红和水样眼部分泌物为1+级)，则另一只眼睛被视为合格的另一只眼睛。否则，另一只眼睛被视为不合格的另一只眼睛。对象水平测量以对象水平呈现。

用制剂治疗的对象表现出眼部感染的改善。在第2次访视时，利用组合制剂(豹蛙酶和羟甲唑啉)治疗的研究眼与利用单独的媒介物治疗的研究眼之间的以平均相对于基线的变化(CFB)总临床体征评分(球结膜发红+水样眼部分泌物)计的差异≠0，使得在第2次访视时，组合制剂在平均CFB总临床体征评分方面优于单独的媒介物，并且以下关键次要终点按照以下分层顺序在双侧α＝0.05下进行检验：

在第2次访视时，用组合制剂治疗的研究眼与用媒介物治疗的研究眼之间的以腺病毒根除(通过CC-IFA评估)的研究眼的百分比计的差异＝0。

在第2次访视时，用组合制剂治疗的研究眼与用媒介物治疗的研究眼之间的以腺病毒根除(通过CC-IFA评估)的研究眼的百分比计的差异≠0。

在第2次访视时，用组合制剂治疗的研究眼与用于媒介物中的豹蛙酶治疗的研究眼之间的以平均相对于基线变化(CFB)的总临床体征评分(球结膜发红+水样眼部分泌物)计的差异＝0。

在第2次访视时，用组合制剂治疗的研究眼与用于媒介物中的豹蛙酶治疗的研究眼之间的以平均CFB总临床体征评分(球结膜发红+水性眼部分泌物)计的差异≠0。

在第2次访视时，用于媒介物中的豹蛙酶治疗的研究眼与用媒介物治疗的研究眼之间的以腺病毒根除(通过CC-IFA评估)的研究眼的百分比计的差异＝0。

在第2次访视时，用于媒介物中的豹蛙酶治疗的研究眼与用媒介物治疗的研究眼之间的以腺病毒根除(通过CC-IFA评估)的研究眼的百分比计的差异≠0。

在第2次访视时，用组合制剂治疗的研究眼与用媒介物治疗的研究眼之间的以整体临床治愈的研究眼的百分比计的差异＝0。

在第2次访视时，用组合制剂治疗的研究眼与用媒介物治疗的研究眼之间的以整体临床治愈的研究眼的百分比计的差异≠0。

在第5次访视时，用组合制剂治疗的研究眼与用媒介物治疗的研究眼之间的以上皮下浸润缺失的研究眼的百分比计的差异＝0。

在第5次访视时，用组合制剂治疗的研究眼与用媒介物治疗的研究眼之间的以上皮下浸润缺失的研究眼的百分比计的差异≠0。

采用分级固定序列检验来保持I类错误率。

在约50％的患者被随机化并完成通过第2次访视或停止研究后，进行中期分析(interim analysis)。基于主要终点，即第2次访视时平均CFB总临床症状评分，将在中期分析中决定是否因无效而停止试验。组别顺序方法与针对优先性的O’Brien-Flemingα消耗函数(中期优先性的Zstatistic＝2.96259，对应于单侧α＝0.00153；注意，这是中期分析的I类错误惩罚，无意为更优的功效而在中期停止研究)和针对无效(中期无效的Zstatistic＝0.02379，对应于单侧α＝0.49055)的非约束Power Familyα消耗函数(

参数＝3)一起使用。在这种设计中，最终分析剩余的单侧α为0.02450(对应于双侧α＝0.049和Zstatistic＝1.96860)。

在来自阳性

测试的80％培养确认率下，在本研究中将约352名患者随机化。治疗组中98个mITT对象(研究眼)和媒介物治疗组中49个mITT对象(研究眼)的样本量产生90％的能力，以检测第2次访视时研究眼平均CFB总临床症状评分的差异，假定第2次访视时研究眼平均CFB总临床症状评分的真实差异为-1.0，常见标准偏差为1.75，以及指定的组别顺序中期分析策略。假定治疗组中的140个mITT对象(研究眼)和媒介物治疗组中的70个mITT对象(研究眼)的样本量是开发组合制剂的安全概况，该研究对主要终点具有>97％的能力。

另外，治疗组中的140个mITT对象(研究眼)和媒介物治疗组中的70个mITT对象(研究眼)产生>97％的能力，以在第2次访视时通过CC-IFA测定检测腺病毒根除的研究眼比例的差异，假定通过CC-IFA测定腺病毒根除的研究眼的真实比例对于组合制剂为0.65，且对于媒介物为0.35，并且双侧α＝0.049。

豹蛙酶媒介物治疗组中的七十(70)个mITT对象(研究眼)和媒介物治疗组中的70个mITT对象(研究眼)产生95％的能力，以在第2次访视时通过CC-IFA测定检测腺病毒根除的研究眼比例的差异，假定通过CC-IFA测定腺病毒根除的研究眼的真实比例对于组合制剂为0.65，且对于媒介物为0.35，并且双侧α＝0.049。

计划的样本量产生>95％的能力，以证明在第2次访视时的研究眼平均CFB总临床症状评分和第2次访视时通过CC-IFA测定腺病毒根除的研究眼比例方面，组合制剂均优于媒介物。

主要和关键次要功效终点的主要分析是在mITT人群中进行的，并且仅利用观察到的数据，除非缺失>5％的主要功效测量，在这种情况下，并发事件以以下方式处理：

1)研究药物的停用和非最佳依从性被忽略[治疗政策策略]。

2)由于缺乏功效或不良事件而退出，缺失数据为：a.使用针对非单调缺失的基于媒介物的马尔可夫链蒙特卡罗(MCMC)方法和针对单调缺失的回归方法对研究眼CFB总临床症状评分进行多重插补(Multiply imputed)[假设策略]；b.单一插补为研究眼腺病毒根除失败；c.单一插补为研究眼中急性腺病毒性结膜炎的整体临床治愈失败[假设策略]；d.对使用针对非单调缺失的基于媒介物的马尔可夫链蒙特卡罗(MCMC)方法和针对单调缺失的逻辑回归方法的研究眼上皮下浸润进行多重插补[假设策略]。

3)由于缺乏疗效或不良事件以外的原因而未退出或退出的缺失数据，缺失数据为：a.使用针对非单调缺失的基于治疗的马尔可夫链蒙特卡罗(MCMC)方法和针对单调缺失的回归方法对研究眼CFB总临床症状评分进行多重插补[假设策略]；b.使用针对非单调缺失的基于治疗的马尔可夫链蒙特卡罗(MCMC)方法和针对单调缺失的回归方法对研究眼腺病毒水平(与从中确定的腺病毒根除)进行多重插补(假设策略)；c.使用针对非单调缺失的基于治疗的马尔可夫链蒙特卡罗(MCMC)方法和针对单调缺失的回归方法对研究眼CFB总临床症状评分(与从中确定的急性腺病毒性结膜炎的整体临床治愈)进行多重插补(假设策略)；d.使用针对非单调缺失的基于治疗的马尔可夫链蒙特卡罗(MCMC)方法和针对单调缺失的逻辑回归方法对研究眼上皮下浸润进行多重插补[假设策略]。对于连续测量(分别通过CC-IFA和CFB总临床症状评分评估腺病毒水平)，完成了腺病毒根除(通过CC-IFA评估)的二分关键次要终点和急性腺病毒性结膜炎的整体临床治愈的缺失值的多重插补，然后从中确定反应变量。

使用mITT对主要和关键次要功效变量进行敏感性分析，其中所有缺失数据均插补为失败(腺病毒根除、整体临床治愈和上皮下浸润)，并使用基于媒介物的方法(CFB总临床症状评分)进行多重插补；具有所有缺失数据的mITT被插补为成功(腺病毒根除、整体临床治愈和上皮下浸润)，并使用基于治疗的方法(CFB总临床症状评分)进行多重插补；具有观察数据的mITT和PP设置为观察数据。可进行另外的敏感性分析，如临界点，并在统计分析计划(SAP)中指定。

第2次访视时CFB总临床症状评分的主要功效终点使用治疗组的连续汇总统计进行汇总。CFB总临床症状评分的主要功效终点的初步分析是使用线性模型完成的，该模型包括基线总临床症状评分的固定效应作为协变量和处理。给出了最小二乘均值(LSM)CFB总临床症状评分和LSM CFB总临床症状评分的差异以及相应的双侧95％置信区间(CI)和p值。使用双样本t检验进行治疗比较，作为对上述初步模型的敏感性分析。

第2次访视时腺病毒根除(通过CC-IFA评估)、第2次访视时CFB总临床症状评分、第2次访视时腺病毒根除(通过CC-IFA评估)、总临床治愈、第5次访视时上皮下浸润缺失的关键次要功效终点使用治疗组的离散或连续(仅CFB总临床症状评分)汇总统计进行汇总。使用logistic回归模型完成对腺病毒根除和总临床治愈的每个关键次要功效终点的初步分析，该模型包括相应基线评分的固定效应作为协变量和处理。给出了腺病毒根除(和临床治愈)的调整优势比和边际比例和腺病毒根除(和临床治愈)的边际比例的差异，以及相应的双侧95％置信区间(CI)和p值。

使用皮尔森卡方检验(Pearson’s chi-squared test)或费希尔精确检验(Fisher’s exact test)(如果任何预期细胞计数小于5)作为对上述初步模型的敏感性分析和上皮下浸润的初步分析进行治疗比较。使用与主要功效终点的初步分析相同的分析策略，完成了组合制剂与于媒介物中的豹蛙酶之间的CFB总临床症状评分在第2次访视时的关键次要功效终点的初步分析。

使用ITT人群的连续汇总统计对相对于基线变化的总临床症状评分进行汇总，并使用与mITT人群相同的策略，使用主要插补策略以及仅使用观察数据在治疗组之间进行检验。

安全性分析使用患者和事件水平的离散总结汇总了所有治疗患者的研究眼和另一只眼中的治疗紧急AE(TEAE)，包括眼部和全身TEAE。所有TEAE(定义为在第一次治疗时或之后发生或恶化的AE)均使用监管活动医学词典(Medical Dictionary for RegulatoryActivities)进行编码，以鉴定系统器官类别和首选术语。

裂隙灯生物显微镜测量在每次访视时使用离散总结统计进行汇总。每次访视时，使用离散总结来汇总BSCVA数据，包括相对于基线变化的行数和与先前访视相比变化≥3行的患者比例(>0.3LogMAR)。

人口统计学特征(即年龄、性别、种族、族群和虹膜颜色)、医疗史和眼病史数据按治疗组进行汇总和呈现，并根据情况使用离散或连续汇总统计作为所有患者的总体汇总。

实施例4

产品组合的体内抗病毒作用

使用兔眼复制模型在体内评价产品组合的抗病毒活性。为了进行该测定，将25只新西兰白(NZW)兔使用全身麻醉氯胺酮和甲苯噻嗪以及局部麻醉丙美卡因进行麻醉。每只兔子在角膜上皮划痕(25根无菌针的12次交叉划线)后，在两只眼睛中局部接种50μL腺病毒血清型Ad5(3×10⁷pfu/mL)。闭上眼睛，并轻轻揉搓5秒钟，以确保所有眼表面接触病毒。两只眼睛的接种允许减少所需的动物数量，而不会危及统计的有效性。24小时后，将兔子随机分配到以下5个局部处理组之一：(1A)仅25μM豹蛙酶(n＝5)；(1B)25μM豹蛙酶+一种或多种另外的治疗剂(n＝5)；(1C)10μM豹蛙酶+一种或多种另外的治疗剂(n＝5)；(1D)0.9％盐水，作为阴性对照(n＝5)；和(CC)0.5％西多福韦，作为阳性对照(n＝5)。治疗兔(1A、1B、1C和1D)的双眼每日处理8次，持续9天。对照组(CC)的双眼每日处理两次，持续7天。所有局部溶液(37μL滴剂)都用电子移液管(EDP；Rainin,Oakland,Calif.)滴注，该移液管设置为多分配模式。在接种后第0天、第1天、第3天、第4天、第5天、第7天、第9天、第11天和第14天的最终剂量后至少1小时，用丙美卡因局部麻醉之后，进行眼拭子以从泪膜和角膜和结膜表面回收腺病毒。将来自每只眼睛的眼部样品分别放入含有1mL培养基的管中，并在-70℃下冷冻，待病毒噬斑测定。

通过进行噬斑减少测定来测定眼部样品的Ad5滴度。将样品稀释1:10，并将这些稀释液接种到含有A549单层的24孔多板的重复孔上。将病毒在37℃下于5％CO₂水蒸气气氛中吸附3小时。吸附后，向每个孔中加入1mL培养基加0.5％甲基纤维素，并将板在37℃下于5％CO₂水蒸气气氛中孵育。7天后，将细胞用0.5％龙胆紫染色，并使用解剖显微镜(25×)计数噬斑数。然后计算病毒滴度，并将其表示为每毫升噬斑形成单位(PFU/mL)。使用方差分析(ANOVA)和Fisher配对比较分析来自研究的数据，并使用True Epistat和/或Minitab统计软件进行X2分析。在P≦0.05置信水平建立显著性。

与仅接受豹蛙酶(1A)、仅接受盐水(1D)或仅接受西多福韦(CC)的动物相比，接受产品组合的动物表现出眼睛的病毒复制或感染的减少。

实施例5

产品组合的体内抗疱疹作用

使用用于评价病毒复制以及临床体征和症状的疱疹兔模型在体内评价产品组合的抗病毒效应。为了进行该测定，使用全身麻醉氯胺酮(40mg/kg)和甲苯噻嗪(4mg/kg)以及局部麻醉丙美卡因麻醉20只体重为1.5-2.0kg的雌性兔子。

在第1天，在角膜上皮划痕(7.5mm环钻的3个联锁圆)后，在每只兔子的两只眼睛中局部接种50μL HSV-1(3.2×10⁵pfu/眼)。闭上眼睛，并轻轻揉搓5秒钟，以确保所有眼表面上接触病毒。

将兔子随机分配至以下4个局部处理组之一：(1)仅包括药物载体的阴性对照；(2)10μM豹蛙酶+一种或多种另外的治疗剂的测试组合物；(3)25μM豹蛙酶+一种或多种另外的治疗剂的测试组合物；和(4)0.15％更昔洛韦眼凝胶的阳性对照。每组包括5只兔子。对于第1组、第2组和第3组中的每只兔子，每日处理双眼4次，持续10天，并且对于第4组，每日处理5次，持续10天。处理在第2天开始。

在第2天、第3天、第5天、第7天、第9天、第11天和第14天中的每一天，使用裂隙灯检查来检查每只兔子的双眼，以基于0-4的级别对HSV-1树枝状角膜炎进行分级。利用0.1％荧光素钠和钴蓝滤器进行裂隙灯检查，以可视化由眼部HSV-1感染产生的局部角膜上皮角膜炎，并在每次检查时评价和分级HSV-1树枝状角膜炎。树枝状角膜炎分级量表如下：

0＝无树突

0.5＝1-5个树突

1.0＝6-10个树突

1.5＝11-15个树突

2.0＝16-20个树突或地图状角膜溃疡(Geographic Ulcer)<1/4的角膜表面

2.5＝>20个树突或地图状角膜溃疡>1/4但<1/3的角膜表面

3.0＝地图状角膜溃疡或多个树突>1/3但<1/2的角膜表面以及基质受累

3.5＝地图状角膜溃疡或多个树突>1/2但<2/3的膜表面以及基质受累

4.0＝地图状角膜溃疡或多个树突>2/3的角膜表面以及基质受累

每次裂隙灯检查后，也可通过在用0.5％丙美卡因局部麻醉后，用棉头涂抹器擦拭每只眼睛的上下穹窿，获得眼部病毒培养物。在测试药物最终剂量后至少1小时获得眼部病毒培养物。不培养角膜以避免损伤扩大。将来自每只眼睛的拭子分别放入含有1ml生长培养基的管中，并在-80℃下冷冻，待病毒斑测定。

将每个待滴定的冷冻HSV-1眼部样品解冻并连续稀释(1:10)三次稀释。然后将每份稀释液(每孔0.1ml)接种到24孔板的重复孔中的Vero或A549细胞上。将病毒在37℃，5％CO₂水蒸气气氛中吸附1小时。吸附后，向每个孔中加入1ml生长培养基加0.5％甲基纤维素，并将板在37℃下于5％CO₂水蒸气气氛中孵育。5天后用0.5％龙胆紫对板进行染色，并在解剖显微镜(25X)下计数每个孔的噬斑数。计算眼部HSV-1滴度，并表示为每毫升噬斑形成单位(PFU/ml)。使用True Epistat和/或Minitab统计软件对数据进行统计分析。结果测量包括每日HSV-1阳性培养物/总培养物、每日病毒滴度、脱落持续时间、每日角膜炎评分、患有角膜炎的眼数和角膜炎消退时间。在p≤0.05置信水平建立显著性。

与仅接受载体(1)或仅接受更昔洛韦(4)的动物相比，接受产品组合的动物表现出眼睛的病毒复制或感染的减少，以及基于树枝状角膜炎分级量表的临床体征/症状的改善。

实施例6

产品组合的体内抗充血作用

使用兔充血模型在体内评价产品组合的抗充血活性。为了进行该测定，将25只新西兰白兔(NZW)使用全身麻醉氯胺酮和甲苯噻嗪以及局部麻醉丙美卡因进行麻醉。通过局部给予0.01％组胺或0.3％花生四烯酸，在每只兔子的两只眼睛中诱导充血。评估每只兔子的充血程度或严重程度。

24小时后，将兔子随机分配至以下5个局部处理组之一：(1A)仅25μM豹蛙酶(n＝5)；(1B)25μM豹蛙酶+一种或多种另外的治疗剂，如血管收缩剂(n＝5)；(1C)10μM豹蛙酶+一种或多种另外的治疗剂，如血管收缩剂(n＝5)；(1D)0.9％盐水，作为阴性对照(n＝5)；和(CN)0.1％萘甲唑林，作为阳性对照(n＝5)。所有兔子组(1A、1B、1C、1D和CN)均在两只眼睛中每日处理8次，持续9天。所有局部溶液(37μL滴剂)都用电子移液管(EDP；Rainin,Oakland,Calif.)滴注，该移液管设置为多分配模式。在治疗过程中每天监测充血程度。

与仅接受豹蛙酶(1A)、仅接受盐水(1D)或仅接受萘甲唑啉(CDV)的动物相比，接受产品组合的动物表现出眼睛充血的减少。

实施例7

血管收缩的动脉外植体培养模型

在培养物中提供动脉的外植体培养物作为血管收缩的模型。通过获得动脉来制备外植体培养物。将动脉段转移到含有培养基的带腔盖玻片上。用实施例6中所述的处理组处理外植体培养物，即：(1A)仅25μM豹蛙酶；(1B)25μM豹蛙酶+一种或多种另外的治疗剂，如血管收缩剂；(1C)10μM豹蛙酶+一种或多种另外的治疗剂，如血管收缩剂；和(CN)0.1％萘甲唑林，作为阳性对照。使用仅培养基的阴性对照。每天更换培养基和处理剂。

监测每组动脉外植体培养物的血管收缩效果。与仅接受豹蛙酶、仅接受萘甲唑林或仅接受培养基的培养物相比，接受产品组合的培养物表现出改善的血管收缩效果。

实施例8

产品组合的眼部耐受性和毒性

评估了产品组合的耐受性和毒性。

为了评估产品组合的耐受性，使用眼部损伤的Draize量表对实施例4和5中处理的NZW兔进行眼部刺激性测定。在第3天和第9天，使用最大平均总评分(MMTS)评价每只兔子的双眼的眼部刺激的分类。MMTS评分如下：0.0-0.5，无刺激性(N)；0.6-2.5，几乎无刺激性(PN)；2.6-15.0，最小刺激(M1)；15.1-25.0，轻度刺激(M2)；25.1-50.0，中度刺激(M3)；50.1-80.0，严重刺激(S)；80.1-100.0，极度刺激(E)；和100.1-110.0，最大刺激(Mx)。该产品组合耐受性好，刺激性低。

为了评估体外细胞毒性，将96孔板接种1×10⁵个细胞/mL的A549细胞，并在37℃和5％CO₂下孵育过夜。连续稀释产品组合以包含1.0μM、10μM和50μM浓度的豹蛙酶。去除组织培养基后，将100μL的每种稀释液添加到96孔板的3个孔中，其中包含80％-100％的汇合细胞。作为对照，将100μL含有0.25％TRITON X-100的裂解缓冲液添加到6个孔中(阳性细胞毒性对照)，并将100μL不含豹蛙酶或仅含豹蛙酶的组织培养基添加到6个孔中(阴性细胞毒性对照)。在37℃和5％CO₂下，将每个测试和对照处理在A549单层上孵育2天。向每个孔中加入100μL荧光染色等分试样，并将细胞在37℃和5％CO₂下孵育1小时。荧光染色(

Invitrogen,Carlsbad,Calif.)作为氧化还原指示剂，其通过代谢活性活细胞还原为荧光形式。用平板读数仪(Biotek Synergy 2；Biotek)读取荧光，该读数仪具有500/27-nm激发滤光器和620/40-nm发射滤光器，灵敏度为35。细胞毒性由暴露于豹蛙酶后剩余活细胞的百分比确定(细胞毒性百分比＝100-[(中值荧光药物/中值荧光无药物)×100]，其中“药物”是产品组合中三种浓度的豹蛙酶之一或裂解缓冲液，并且“无药物”或“仅豹蛙酶”是阴性对照。使用非参数Kruskal-Wallis ANOVA和Duncan多重比较对观察到的差异进行统计评估，并在P≦0.05置信水平建立显著性。

实验表明，包含豹蛙酶的产品组合在暴露2天后对A549细胞产生显著的细胞毒性。

应理解，虽然本说明书的各个方面通过参考具体实施方案而强调，但本领域技术人员容易理解，这些公开的实施方案仅是本文公开的主题的原理的说明。因此，应理解，除非明确说明，所公开的主题决不限于本文所述的具体化合物、组合物、制品、装置、方法、方案和/或试剂等。此外，本领域普通技术人员将认识到，在不脱离本说明书的精神的情况下，根据本文的教导可以做出某些改变、修改、置换、变更、增加、减少和亚组合。因此，旨在所附权利要求和此后引入的权利要求被解释为包括在其真实精神和范围内的所有这些改变、修改、置换、变更、增加、减少和亚组合。

本文描述了本发明的某些实施方案，包括发明人已知的用于实施本发明的最佳模式。当然，本领域普通技术人员在阅读前述的描述时，，这些所描述的实施方案的变化将变得显而易见。发明人期望本领域技术人员视情况应用此类改变，并且发明人意图以与本文具体所述的不同的方式实践本发明。因此，如适用的法律所允许的，本发明包括在此所附的权利要求中所述的主题的所有修饰和等同物。此外，本发明涵盖以上所述实施方案的所有可能的改变的任何组合，除非本文另外指明或者在其它方面与上下文明显矛盾。

本发明的替代实施方案、要素或步骤的分组不应被解释为限制。每个组成员可以单独提及和要求保护或者与本文公开的其它组成员组合提及和要求保护。为方便性和/或专利性原因，组的一个或多个成员可预期包括于组中或从组中删除。当发生任何这种包括或删除时，说明书被视为包含改变的组，因而符合所附权利要求中使用的马什库组的书面描述。

除非另外说明，本说明书和权利要求书中使用的表达特性、项、量、参数、性质、术语等的所有数字应理解为在所有情况下均由术语“约”来修饰。如本文所用，术语“约”意指这样的特性、项、量、参数、性质或术语，其限定为涵盖在所述特性、物品、量、参数、性质或术语的数值以上或以下加或减百分之十的范围。因此，除非有相反指示，说明书和所附权利要求书中阐明的数值参数是可以变化的近似值。例如，由于质谱分析仪器在确定给定分析物的质量时，可能略有变化，因此在离子质量或离子的质量/电荷比的情况下，术语“约”是指+/-0.50原子质量单位。每个数值指示应至少根据报道的有效数字的数值以及通过应用常规舍入技术来理解，至少并不试图将等同原则的应用限制于权利要求书的范围。

提及实施方案或实施方案的方面的术语“可能”或“可以”的使用也带有“可能不”或“不可以”的替代含义。因此，如果本说明书公开了实施方案或实施方案的方面可能或可以被包括作为本发明主题的一部分，则也明确地示出否定性限制或排除性附带条件，这意味着实施方案或实施方案的方面可能不或不可以被包括作为本发明主题的一部分。以类似的方式，提及实施方案或实施方案的方面的术语“可选地”的使用意指此类实施方案或实施方案的方面可以被包括作为本发明主题的一部分，或者可以不被包括作为本发明主题的一部分。此类否定性限制或排除性附带条件是否适用是基于在所要求保护的主题内是否列举了否定性限制或排除性附带条件。

尽管阐明本发明广泛范围的数字范围和数值是近似值，但具体实例中阐述的数字范围和数值应尽可能予以精确报道。然而，任何数字范围或数值固有地包含由发现于它们各自的测试测量中的标准偏差必然导致的某些误差。本文数值的数字范围的列举仅旨在用作分别提及属于范围内的每个单独数值的速记方法。除非本文另外指出，将数字范围的每个单独数值并入说明书如同其在本文单独列举。

在描述本发明的上下文中(尤其是在所附权利要求的上下文中)使用的术语“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”、“所述(the)”以及类似的指代物应被解释为既涵盖单数又涵盖复数，除非本文另外指明或者上下文明显矛盾。此外，使用用于鉴定要素的序数指示物(例如“第一”、“第二”、“第三”等)以区分这些要素，并且不表示或暗示这些要素必需的或限定的数量，并且不表示这些要素的特定位置或顺序，除非另外具体说明。可以以任何合适的顺序实施本文所述的所有方法，除非本文另外指明或者在其它方面与上下文明显矛盾。本文提供的任何和所有实例或者示例性语言(例如“如”)的使用仅旨在更好地阐明本发明，并且不对本发明的范围构成限制，除非另外声明。不应将本说明书中的语言解释为表明对于实施本发明必要的任何未要求保护的要素。

可以在权利要求中使用语言“由......组成”或“基本上由......组成”进一步限制本文公开的特定实施方案。当在权利要求中使用时，无论是在提交时还是通过修正加入，过渡术语“由……组成”不包括未在权利要求中指定的任何要素、步骤或成分。过渡术语“基本上由...组成”将权利要求的范围限制为指定的材料或步骤以及不会实质上影响基本特征和新颖性特征的那些材料或步骤。所要求保护的本发明的实施方案在本文中固有地或明确地进行描述和能够实现的。

出于描述和公开的目的，将在本说明书中引用和确认的所有专利、专利出版物和其它出版物单独且明确地通过引用整体并入本文，例如，可以将此类出版物中描述的组合物和方法与本发明结合使用。提供这些出版物仅是因其在本申请的提交日之前公开。这方面的任何内容均不应被解释为承认发明人无权凭借先前发明或出于任何其它原因而早于此类公开。所有关于日期的陈述或关于这些文件内容的陈述都是基于申请人可获得的信息，并不构成对这些文件的日期或内容的正确性的任何承认。

本文使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，而不意图限制仅由权利要求限定的本发明的范围。因此，本发明不限于本文精确显示和描述的。

序列表

<110> 奥可金公司 (Okogen, LLC)

布莱恩·施特雷姆(Strem, Brian M.)

<120> 用于病毒性结膜炎的豹蛙酶

<130> OKGEN.006WO

<150> US 63/014,380

<151> 2020-04-23

<160> 39

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 127

<212> PRT

<213> 北美豹蛙 (Rana pipiens)

<400> 1

Met Phe Pro Lys Phe Ser Phe Leu Leu Ile Phe Ala Val Val Leu Ser

1               5                   10                  15

Leu Thr His Lys Ser Leu Cys Gln Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys

            20                  25                  30

His Ile Thr Asn Thr Arg Asp Val Asp Cys Asp Asn Ile Met Ser Thr

        35                  40                  45

Asn Leu Phe His Cys Lys Asp Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro

    50                  55                  60

Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val

65                  70                  75                  80

Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg

                85                  90                  95

Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys Lys Ser Thr Asn Lys Phe Cys Val Thr

            100                 105                 110

Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val His Phe Val Gly Val Gly Ser Cys

        115                 120                 125

<210> 2

<211> 104

<212> PRT

<213> 北美豹蛙 (Rana pipiens)

<400> 2

Gln Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Ile Thr Asn Thr Arg Asp

1               5                   10                  15

Val Asp Cys Asp Asn Ile Met Ser Thr Asn Leu Phe His Cys Lys Asp

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Ser Thr Asn Lys Phe Cys Val Thr Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Gly Val Gly Ser Cys

            100

<210> 3

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的豹蛙酶变体

<400> 3

Glu Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Ile Thr Asn Thr Arg Asp

1               5                   10                  15

Val Asp Cys Asp Asn Ile Leu Ser Thr Asn Leu Phe His Cys Lys Asp

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Ser Thr Asn Lys Phe Cys Val Thr Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Gly Val Gly Ser Cys

            100

<210> 4

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 豹蛙酶变体

<400> 4

Glu Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Val Thr Asn Thr Arg Asp

1               5                   10                  15

Val Asp Cys Asn Asn Ile Leu Ser Thr Asn Leu Phe His Cys Lys Asp

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Ser Thr Asn Lys Phe Cys Val Thr Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Gly Val Gly Arg Cys

            100

<210> 5

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的豹蛙酶变体

<400> 5

Gln Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Ile Thr Asn Thr Arg Asp

1               5                   10                  15

Val Asp Cys Asp Asn Ile Leu Ser Thr Asn Leu Phe His Cys Lys Asp

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Cys Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Ser Thr Asn Lys Phe Cys Val Thr Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Gly Val Gly Ser Cys

            100

<210> 6

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的豹蛙酶变体

<400> 6

Gln Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Ile Thr Asn Thr Arg Asp

1               5                   10                  15

Val Asp Cys Asp Asn Ile Met Ser Thr Asn Leu Phe His Cys Lys Asp

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Cys Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Ser Thr Asn Lys Phe Cys Val Thr Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Gly Val Gly Ser Cys

            100

<210> 7

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的豹蛙酶变体

<400> 7

Gln Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Ile Thr Asn Thr Arg Asp

1               5                   10                  15

Val Asp Cys Asp Asn Ile Leu Ser Thr Asn Leu Phe His Cys Lys Asp

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Ser Thr Asn Lys Phe Ala Val Thr Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Gly Val Gly Ser Ala

            100

<210> 8

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的豹蛙酶变体

<400> 8

Gln Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Ile Thr Asn Thr Arg Asp

1               5                   10                  15

Val Asp Cys Asp Asn Ile Met Ser Thr Asn Leu Phe His Cys Lys Asp

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Ser Thr Asn Lys Phe Ala Val Thr Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Gly Val Gly Ser Ala

            100

<210> 9

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的豹蛙酶变体

<400> 9

Gln Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Ile Thr Asn Thr Arg Asp

1               5                   10                  15

Val Asp Cys Asp Asn Ile Leu Ser Thr Asn Leu Phe His Cys Lys Asp

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Ser Thr Asn Lys Phe Cys Val Asn Cys Ala Asn Gln Ala Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Gly Val Gly Ser Cys

            100

<210> 10

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的豹蛙酶变体

<400> 10

Gln Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Ile Thr Asn Thr Arg Asp

1               5                   10                  15

Val Asp Cys Asp Asn Ile Met Ser Thr Asn Leu Phe His Cys Lys Asp

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Ser Thr Asn Lys Phe Cys Val Asn Cys Ala Asn Gln Ala Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Gly Val Gly Ser Cys

            100

<210> 11

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的豹蛙酶变体

<400> 11

Gln Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Ile Thr Asn Thr Arg Asp

1               5                   10                  15

Val Asp Cys Asp Asn Ile Leu Ser Thr Asn Leu Phe His Ala Lys Asp

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg Pro Ala Lys Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Ser Thr Asn Lys Phe Cys Val Thr Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Gly Val Gly Ser Cys

            100

<210> 12

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的豹蛙酶变体

<400> 12

Gln Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Ile Thr Asn Thr Arg Asp

1               5                   10                  15

Val Asp Cys Asp Asn Ile Met Ser Thr Asn Leu Phe His Ala Lys Asp

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg Pro Ala Lys Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Ser Thr Asn Lys Phe Cys Val Thr Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Gly Val Gly Ser Cys

            100

<210> 13

<211> 102

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的豹蛙酶变体

<400> 13

Gln Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Ile Thr Asn Thr Arg Asp

1               5                   10                  15

Val Asp Cys Asp Asn Ile Leu Ser Thr Asn Leu Phe His Cys Lys Asp

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Ser Thr Asn Lys Phe Ser Val Thr Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Gly Val Gly

            100

<210> 14

<211> 102

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的豹蛙酶变体

<400> 14

Gln Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Ile Thr Asn Thr Arg Asp

1               5                   10                  15

Val Asp Cys Asp Asn Ile Met Ser Thr Asn Leu Phe His Cys Lys Asp

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Ser Thr Asn Lys Phe Ser Val Thr Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Gly Val Gly

            100

<210> 15

<211> 117

<212> PRT

<213> 东北林蛙(Rana dybowskii)

<400> 15

Leu Phe Ala Val Val Leu Ser Leu Thr His Lys Phe Leu Cys Gln Asp

1               5                   10                  15

Trp Lys Thr Phe Gln Asp Lys His Leu Thr Lys Thr Arg Asp Val Asp

            20                  25                  30

Cys Asp Asn Val Leu Ser Lys Pro Leu Phe Asn Cys Lys Asp Arg Asn

        35                  40                  45

Thr Phe Ile Phe Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Leu Cys Lys Gly

    50                  55                  60

Val Lys Asp Lys Asn Val Leu Ser Arg Ser Glu Phe Tyr Leu Ser Asp

65                  70                  75                  80

Cys Asn Val Thr Thr Arg His Cys Lys Tyr Lys Leu Lys Lys Lys Ile

                85                  90                  95

Asn Thr Ile Cys Ile Thr Cys Arg Gly Glu Ala Pro Val His Phe Val

            100                 105                 110

Gly Val Gly Ser Cys

        115

<210> 16

<211> 104

<212> PRT

<213> 东北林蛙(Rana dybowskii)

<400> 16

Gln Asp Trp Lys Thr Phe Gln Lys Lys His Leu Thr Lys Ala Arg Asp

1               5                   10                  15

Ile Lys Cys Asp Asn Ile Met Ser Lys Thr Leu Phe Asn Cys Lys Asp

            20                  25                  30

Thr Asn Thr Phe Ile Phe Ser Leu Pro Gly Pro Val Lys Ala Leu Cys

        35                  40                  45

Arg Gly Ile Lys Val Ser Lys Asn Val Leu Ser Arg Ser Glu Phe Asp

    50                  55                  60

Leu Ser Glu Cys Asn Val Lys Ser Lys Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Lys Ser Asp Gly Ile Cys Ile Thr Cys Arg Asp Glu Ala Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Gly Val Gly Ser Cys

            100

<210> 17

<211> 104

<212> PRT

<213> 东北林蛙(Rana dybowskii)

<400> 17

Gln Asp Trp Lys Thr Phe Gln Lys Lys His Leu Thr Asn Thr Arg Asn

1               5                   10                  15

Ile Lys Cys Asp Lys Ile Met Pro Ile Asn Leu Phe His Cys Lys Tyr

            20                  25                  30

Arg Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Arg Gly Val Glu Asn Leu Cys

        35                  40                  45

Arg Gly Lys Ile Asn Ala Thr Asn Val Ser Ser Ser Ser Lys Phe Ala

    50                  55                  60

Leu Phe Glu Cys Ile Glu Lys Ser Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Gln Thr Asn Val Ile Cys Ile Thr Cys Glu His Lys Val Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Gly Val Gly Ser Cys

            100

<210> 18

<211> 129

<212> PRT

<213> 牛蛙(Rana catesbeiana)

<400> 18

Met Phe Pro Lys Phe Ser Phe Leu Leu Ile Phe Ala Ile Val Leu Ser

1               5                   10                  15

Leu Thr His Lys Ser Leu Cys Gln Asp Trp Ala Thr Phe Lys Lys Lys

            20                  25                  30

His Leu Thr Asp Thr Trp Asp Val Asp Cys Asp Asn Leu Met Pro Thr

        35                  40                  45

Ser Leu Phe Asp Cys Lys Asp Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Leu Pro

    50                  55                  60

Gly Pro Val Lys Ala Leu Cys Arg Gly Val Ile Phe Ser Ala Asp Val

65                  70                  75                  80

Leu Ser Asn Ser Glu Phe Tyr Leu Ala Glu Cys Asn Val Lys Pro Arg

                85                  90                  95

Lys Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys Lys Ser Ser Asn Arg Ile Cys Ile

            100                 105                 110

Arg Cys Glu His Glu Leu Pro Val His Phe Ala Gly Val Gly Ile Cys

        115                 120                 125

Pro

<210> 19

<211> 106

<212> PRT

<213> 牛蛙(Rana catesbeiana)

<400> 19

Gln Asp Trp Ala Thr Phe Lys Lys Lys His Leu Thr Asp Thr Trp Asp

1               5                   10                  15

Val Asp Cys Asp Asn Leu Met Pro Thr Ser Leu Phe Asp Cys Lys Asp

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Leu Pro Gly Pro Val Lys Ala Leu Cys

        35                  40                  45

Arg Gly Val Ile Phe Ser Ala Asp Val Leu Ser Asn Ser Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Ala Glu Cys Asn Val Lys Pro Arg Lys Pro Cys Lys Tyr Lys Leu

65                  70                  75                  80

Lys Lys Ser Ser Asn Arg Ile Cys Ile Arg Cys Glu His Glu Leu Pro

                85                  90                  95

Val His Phe Ala Gly Val Gly Ile Cys Pro

            100                 105

<210> 20

<211> 128

<212> PRT

<213> 牛蛙(Rana catesbeiana)

<400> 20

Met Phe Pro Lys Phe Ser Phe Leu Leu Ile Phe Ala Val Val Leu Ser

1               5                   10                  15

Leu Thr His Lys Ser Leu Cys Gln Asn Trp Glu Thr Phe Gln Lys Lys

            20                  25                  30

His Leu Thr Asn Ile Leu Asp Ile Asn Cys Asp Val Glu Met Ala Lys

        35                  40                  45

Ala Leu Phe Asn Cys Lys Glu Met Asn Thr Phe Ile Tyr Ala Leu Pro

    50                  55                  60

Gly Arg Val Gln Ala Leu Cys Lys Asn Ile Lys Asp Asn Thr Glu Val

65                  70                  75                  80

Leu Ser Thr Asp Thr Phe Tyr Leu Pro Glu Cys Asn Arg Ile Lys Leu

                85                  90                  95

Pro Cys His Tyr Lys Leu Lys Lys Pro Leu Glu Lys Ile Cys Ile Thr

            100                 105                 110

Cys Val Asn Glu Leu Pro Ile His Phe Ala Gly Val Gly Ser Cys Pro

        115                 120                 125

<210> 21

<211> 105

<212> PRT

<213> 牛蛙(Rana catesbeiana)

<400> 21

Gln Asn Trp Glu Thr Phe Gln Lys Lys His Leu Thr Asn Ile Leu Asp

1               5                   10                  15

Ile Asn Cys Asp Val Glu Met Ala Lys Ala Leu Phe Asn Cys Lys Glu

            20                  25                  30

Met Asn Thr Phe Ile Tyr Ala Leu Pro Gly Arg Val Gln Ala Leu Cys

        35                  40                  45

Lys Asn Ile Lys Asp Asn Thr Glu Val Leu Ser Thr Asp Thr Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Pro Glu Cys Asn Arg Ile Lys Leu Pro Cys His Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Pro Leu Glu Lys Ile Cys Ile Thr Cys Val Asn Glu Leu Pro Ile

                85                  90                  95

His Phe Ala Gly Val Gly Ser Cys Pro

            100                 105

<210> 22

<211> 128

<212> PRT

<213> 牛蛙(Rana catesbeiana)

<400> 22

Met Phe Pro Lys Phe Ser Phe Leu Leu Ile Phe Ala Val Val Leu Ser

1               5                   10                  15

Leu Thr His Lys Ser Leu Cys Gln Asn Trp Glu Thr Phe Gln Lys Lys

            20                  25                  30

His Leu Thr Asn Ile Leu Asp Ile Asn Cys Asp Val Glu Met Ala Lys

        35                  40                  45

Ala Leu Phe Asn Cys Lys Glu Met Asn Thr Phe Ile Tyr Ala Leu Pro

    50                  55                  60

Gly Arg Val Gln Ala Leu Cys Lys Asn Ile Arg Asp Asn Thr Asp Val

65                  70                  75                  80

Leu Ser Arg Asp Ala Phe Leu Leu Pro Gln Cys Asp Arg Ile Lys Leu

                85                  90                  95

Pro Cys His Tyr Lys Leu Ser Ser Ser Thr Asn Thr Ile Cys Ile Thr

            100                 105                 110

Cys Val Asn Gln Leu Pro Ile His Phe Ala Gly Val Gly Ser Cys Pro

        115                 120                 125

<210> 23

<211> 105

<212> PRT

<213> 牛蛙(Rana catesbeiana)

<400> 23

Gln Asn Trp Glu Thr Phe Gln Lys Lys His Leu Thr Asn Ile Leu Asp

1               5                   10                  15

Ile Asn Cys Asp Val Glu Met Ala Lys Ala Leu Phe Asn Cys Lys Glu

            20                  25                  30

Met Asn Thr Phe Ile Tyr Ala Leu Pro Gly Arg Val Gln Ala Leu Cys

        35                  40                  45

Lys Asn Ile Arg Asp Asn Thr Asp Val Leu Ser Arg Asp Ala Phe Leu

    50                  55                  60

Leu Pro Gln Cys Asp Arg Ile Lys Leu Pro Cys His Tyr Lys Leu Ser

65                  70                  75                  80

Ser Ser Thr Asn Thr Ile Cys Ile Thr Cys Val Asn Gln Leu Pro Ile

                85                  90                  95

His Phe Ala Gly Val Gly Ser Cys Pro

            100                 105

<210> 24

<211> 131

<212> PRT

<213> 牛蛙(Rana catesbeiana)

<400> 24

Met Phe Pro Lys Phe Ser Phe Leu Leu Ile Phe Ala Val Val Leu Ser

1               5                   10                  15

Leu Thr His Lys Ser Leu Cys Gln Asp Trp Glu Thr Phe Gln Lys Lys

            20                  25                  30

His Leu Thr Asp Thr Val Asp Val Asn Cys Asp Val Glu Met Gln Lys

        35                  40                  45

Ala Leu Phe Asn Cys Lys Gln Thr Asn Thr Phe Ile Phe Ala Arg Pro

    50                  55                  60

Pro Arg Val Gln Ala Leu Cys Lys Asn Ile Lys Asp Asn Thr Asp Val

65                  70                  75                  80

Leu Ser Arg Asp Glu Phe Tyr Leu Pro Glu Cys Asn Arg Thr Lys Leu

                85                  90                  95

Pro Cys His Tyr Lys Leu Lys Lys Pro Leu Asn Thr Ile Cys Leu Thr

            100                 105                 110

Cys Arg Lys Glu Leu Pro Val His Phe Ala Gly Val Gly Lys Cys Pro

        115                 120                 125

Glu Lys Val

    130

<210> 25

<211> 108

<212> PRT

<213> 牛蛙(Rana catesbeiana)

<400> 25

Gln Asp Trp Glu Thr Phe Gln Lys Lys His Leu Thr Asp Thr Val Asp

1               5                   10                  15

Val Asn Cys Asp Val Glu Met Gln Lys Ala Leu Phe Asn Cys Lys Gln

            20                  25                  30

Thr Asn Thr Phe Ile Phe Ala Arg Pro Pro Arg Val Gln Ala Leu Cys

        35                  40                  45

Lys Asn Ile Lys Asp Asn Thr Asp Val Leu Ser Arg Asp Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Pro Glu Cys Asn Arg Thr Lys Leu Pro Cys His Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Pro Leu Asn Thr Ile Cys Leu Thr Cys Arg Lys Glu Leu Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Ala Gly Val Gly Lys Cys Pro Glu Lys Val

            100                 105

<210> 26

<211> 105

<212> PRT

<213> 牛蛙(Rana catesbeiana)

<400> 26

Gln Asn Trp Glu Thr Phe Gln Lys Lys His Leu Thr Asp Thr Arg Asp

1               5                   10                  15

Val Lys Cys Asp Ala Glu Met Lys Lys Ala Leu Phe Asp Cys Lys Gln

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ala Arg Pro Gly Arg Val Gln Ala Leu Cys

        35                  40                  45

Lys Asn Ile Ile Val Ser Lys Asn Val Leu Ser Thr Asp Glu Phe Tyr

    50                  55                  60

Leu Ser Asp Cys Asn Arg Ile Lys Leu Pro Cys His Tyr Lys Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Ser Ser Asn Thr Ile Cys Ile Thr Cys Glu Asn Lys Leu Pro Val

                85                  90                  95

His Phe Val Ala Val Glu Glu Cys Pro

            100                 105

<210> 27

<211> 114

<212> PRT

<213> 北美豹蛙(Rana pipens)

<400> 27

Lys Pro Lys Glu Asp Arg Glu Trp Glu Lys Phe Lys Thr Lys His Ile

1               5                   10                  15

Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys Asn Arg Thr Met Asn Asp

            20                  25                  30

Pro Ala Tyr Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys Pro Ile Asn Thr Phe Ile

        35                  40                  45

His Ser Thr Thr Gly Pro Val Lys Glu Ile Cys Arg Arg Ala Thr Gly

    50                  55                  60

Arg Val Asn Lys Ser Ser Thr Gln Gln Phe Thr Leu Thr Thr Cys Lys

65                  70                  75                  80

Asn Pro Ile Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Thr Thr Asn Phe Ile

                85                  90                  95

Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val His Phe Val Lys Thr Gly

            100                 105                 110

Lys Cys

<210> 28

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的两栖酶-2变体

<400> 28

Met Lys Pro Lys Glu Asp Arg Glu Trp Glu Lys Phe Lys Thr Lys His

1               5                   10                  15

Ile Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys Asn Arg Thr Met Asn

            20                  25                  30

Asp Pro Ala Tyr Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys Pro Ile Asn Thr Phe

        35                  40                  45

Ile His Ser Thr Thr Gly Pro Val Lys Glu Ile Cys Arg Arg Ala Thr

    50                  55                  60

Gly Arg Val Asn Lys Ser Ser Thr Gln Gln Phe Thr Leu Thr Thr Cys

65                  70                  75                  80

Lys Asn Pro Ile Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Thr Thr Asn Phe

                85                  90                  95

Ile Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val His Phe Val Lys Thr

            100                 105                 110

Gly Lys Cys

        115

<210> 29

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的两栖酶-2变体

<400> 29

Met Ala Lys Pro Lys Glu Asp Arg Glu Trp Glu Lys Phe Lys Thr Lys

1               5                   10                  15

His Ile Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys Asn Arg Thr Met

            20                  25                  30

Asn Asp Pro Ala Tyr Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys Pro Ile Asn Thr

        35                  40                  45

Phe Ile His Ser Thr Thr Gly Pro Val Lys Glu Ile Cys Arg Arg Ala

    50                  55                  60

Thr Gly Arg Val Asn Lys Ser Ser Thr Gln Gln Phe Thr Leu Thr Thr

65                  70                  75                  80

Cys Lys Asn Pro Ile Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Thr Thr Asn

                85                  90                  95

Phe Ile Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val His Phe Val Lys

            100                 105                 110

Thr Gly Lys Cys

        115

<210> 30

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的两栖酶-2变体

<400> 30

Ala Ala Gln Pro Ala Met Ala Lys Pro Lys Glu Asp Arg Glu Trp Glu

1               5                   10                  15

Lys Phe Lys Thr Lys His Ile Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn

            20                  25                  30

Cys Asn Arg Thr Met Asn Asp Pro Ala Tyr Thr Pro Asp Gly Gln Cys

        35                  40                  45

Lys Pro Ile Asn Thr Phe Ile His Ser Thr Thr Gly Pro Val Lys Glu

    50                  55                  60

Ile Cys Arg Arg Ala Thr Gly Arg Val Asn Lys Ser Ser Thr Gln Gln

65                  70                  75                  80

Phe Thr Leu Thr Thr Cys Lys Asn Pro Ile Arg Cys Lys Tyr Ser Gln

                85                  90                  95

Ser Asn Thr Thr Asn Phe Ile Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro

            100                 105                 110

Val His Phe Val Lys Thr Gly Lys Cys

        115                 120

<210> 31

<211> 136

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的两栖酶-2变体

<400> 31

Met Lys Tyr Leu Leu Pro Thr Ala Ala Ala Gly Leu Leu Leu Leu Ala

1               5                   10                  15

Ala Gln Pro Ala Met Ala Lys Pro Lys Glu Asp Arg Glu Trp Glu Lys

            20                  25                  30

Phe Lys Thr Lys His Ile Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys

        35                  40                  45

Asn Arg Thr Met Asn Asp Pro Ala Tyr Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys

    50                  55                  60

Pro Ile Asn Thr Phe Ile His Ser Thr Thr Gly Pro Val Lys Glu Ile

65                  70                  75                  80

Cys Arg Arg Ala Thr Gly Arg Val Asn Lys Ser Ser Thr Gln Gln Phe

                85                  90                  95

Thr Leu Thr Thr Cys Lys Asn Pro Ile Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser

            100                 105                 110

Asn Thr Thr Asn Phe Ile Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val

        115                 120                 125

His Phe Val Lys Thr Gly Lys Cys

    130                 135

<210> 32

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的两栖酶-2变体

<400> 32

Lys Pro Lys Glu Asp Arg Glu Trp Glu Lys Phe Lys Thr Lys His Ile

1               5                   10                  15

Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys Asn Arg Thr Met Asn Asp

            20                  25                  30

Pro Ala Tyr Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys Pro Ile Asn Thr Phe Ile

        35                  40                  45

His Ser Thr Thr Gly Pro Val Lys Glu Ile Cys Arg Arg Ala Thr Gly

    50                  55                  60

Arg Val Asn Lys Ser Ser Cys Gln Gln Phe Thr Leu Thr Thr Cys Lys

65                  70                  75                  80

Asn Pro Ile Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Thr Thr Asn Phe Ile

                85                  90                  95

Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val His Phe Val Lys Thr Gly

            100                 105                 110

Lys Cys

<210> 33

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的两栖酶-2变体

<400> 33

Met Lys Pro Lys Glu Asp Arg Glu Trp Glu Lys Phe Lys Thr Lys His

1               5                   10                  15

Ile Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys Asn Arg Thr Met Asn

            20                  25                  30

Asp Pro Ala Tyr Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys Pro Ile Asn Thr Phe

        35                  40                  45

Ile His Ser Thr Thr Gly Pro Val Lys Glu Ile Cys Arg Arg Ala Thr

    50                  55                  60

Gly Arg Val Asn Lys Ser Ser Cys Gln Gln Phe Thr Leu Thr Thr Cys

65                  70                  75                  80

Lys Asn Pro Ile Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Thr Thr Asn Phe

                85                  90                  95

Ile Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val His Phe Val Lys Thr

            100                 105                 110

Gly Lys Cys

        115

<210> 34

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的两栖酶-2变体

<400> 34

Lys Pro Lys Glu Asp Arg Glu Trp Glu Lys Phe Lys Thr Lys His Ile

1               5                   10                  15

Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys Asn Arg Thr Met Asn Asp

            20                  25                  30

Pro Ala Tyr Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys Pro Val Asn Thr Phe Ile

        35                  40                  45

His Ser Thr Thr Gly Pro Val Lys Glu Ile Cys Arg Arg Ala Thr Gly

    50                  55                  60

Arg Val Asn Lys Ser Ser Thr Gln Gln Phe Thr Leu Thr Thr Cys Lys

65                  70                  75                  80

Asn Pro Ile Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Thr Thr Asn Phe Ile

                85                  90                  95

Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val His Phe Val Lys Thr Gly

            100                 105                 110

Lys Cys

<210> 35

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的两栖酶-2变体

<400> 35

Met Lys Pro Lys Glu Asp Arg Glu Trp Glu Lys Phe Lys Thr Lys His

1               5                   10                  15

Ile Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys Asn Arg Thr Met Asn

            20                  25                  30

Asp Pro Ala Tyr Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys Pro Val Asn Thr Phe

        35                  40                  45

Ile His Ser Thr Thr Gly Pro Val Lys Glu Ile Cys Arg Arg Ala Thr

    50                  55                  60

Gly Arg Val Asn Lys Ser Ser Thr Gln Gln Phe Thr Leu Thr Thr Cys

65                  70                  75                  80

Lys Asn Pro Ile Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Thr Thr Asn Phe

                85                  90                  95

Ile Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val His Phe Val Lys Thr

            100                 105                 110

Gly Lys Cys

        115

<210> 36

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的两栖酶-2变体

<400> 36

Lys Pro Lys Glu Asp Lys Glu Trp Glu Lys Phe Lys Val Lys His Ile

1               5                   10                  15

Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys Thr Ser Thr Met Asn Asn

            20                  25                  30

Pro Asp Phe Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys Pro Ile Asn Thr Phe Ile

        35                  40                  45

His Ser Asn Thr Gly Pro Val Lys Glu Ile Cys Arg Arg Ala Ser Gly

    50                  55                  60

Arg Val Asn Lys Ser Ser Thr Gln Gln Phe Pro Leu Thr Thr Cys Lys

65                  70                  75                  80

Asn Pro Lys Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Glu Thr Asn Tyr Ile

                85                  90                  95

Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val His Phe Val Lys Ile Gly

            100                 105                 110

Lys Cys

<210> 37

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的两栖酶-2变体

<400> 37

Met Lys Pro Lys Glu Asp Lys Glu Trp Glu Lys Phe Lys Val Lys His

1               5                   10                  15

Ile Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys Thr Ser Thr Met Asn

            20                  25                  30

Asn Pro Asp Phe Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys Pro Ile Asn Thr Phe

        35                  40                  45

Ile His Ser Asn Thr Gly Pro Val Lys Glu Ile Cys Arg Arg Ala Ser

    50                  55                  60

Gly Arg Val Asn Lys Ser Ser Thr Gln Gln Phe Pro Leu Thr Thr Cys

65                  70                  75                  80

Lys Asn Pro Lys Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Glu Thr Asn Tyr

                85                  90                  95

Ile Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val His Phe Val Lys Ile

            100                 105                 110

Gly Lys Cys

        115

<210> 38

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的两栖酶-2变体

<400> 38

Lys Pro Lys Glu Asp Lys Glu Trp Val Lys Phe Lys Ala Lys His Ile

1               5                   10                  15

Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys Asn Lys Thr Met Asn Asp

            20                  25                  30

Pro Asp Phe Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys Pro Val Asn Thr Phe Ile

        35                  40                  45

His Ser Asn Thr Gly Pro Val Lys Asp Ile Cys Arg Arg Ala Ser Gly

    50                  55                  60

Arg Val Asn Lys Ser Ser Thr Gln Gln Phe Pro Leu Thr Thr Cys Asn

65                  70                  75                  80

Lys Pro Ile Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Thr Thr Asn Phe Ile

                85                  90                  95

Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val His Phe Val Lys Ile Gly

            100                 105                 110

Lys Cys

<210> 39

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 重组的两栖酶-2变体

<400> 39

Met Lys Pro Lys Glu Asp Lys Glu Trp Val Lys Phe Lys Ala Lys His

1               5                   10                  15

Ile Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys Asn Lys Thr Met Asn

            20                  25                  30

Asp Pro Asp Phe Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys Pro Val Asn Thr Phe

        35                  40                  45

Ile His Ser Asn Thr Gly Pro Val Lys Asp Ile Cys Arg Arg Ala Ser

    50                  55                  60

Gly Arg Val Asn Lys Ser Ser Thr Gln Gln Phe Pro Leu Thr Thr Cys

65                  70                  75                  80

Asn Lys Pro Ile Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Thr Thr Asn Phe

                85                  90                  95

Ile Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val His Phe Val Lys Ile

            100                 105                 110

Gly Lys Cys

        115

Claims (49)

1.抑制或减缓眼部感染的产品组合，其中所述产品组合包括：

治疗有效量的一种或多种核糖核酸酶(RNA酶)；和

治疗有效量的一种或多种另外的治疗剂，其中所述另外的治疗剂是血管收缩剂、抗生素、免疫调节化合物、类固醇或以上的组合。

2.如权利要求1所述的产品组合，其中所述一种或多种RNA酶是豹蛙酶、其类似物、变体、衍生物或片段。

3.如权利要求2所述的产品组合，其中所述一种或多种豹蛙酶、其类似物、变体、衍生物或片段以约0.001％至约1％w/v的量存在。

4.如权利要求1-3中任一项所述的产品组合，其中所述一种或多种另外的治疗剂是萘甲唑林、四氢唑啉、苯肾上腺素、羟甲唑啉、溴莫尼定、阿可乐定、麻黄碱、阿奇霉素、红霉素、庆大霉素、新霉素、妥布霉素、贝西沙星、环丙沙星、加替沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、氧氟沙星、杆菌肽、氯霉素、短杆菌肽、纳他霉素、多粘菌素B、磺胺醋酰、四环素、甲氧苄啶、万古霉素、地塞米松、二氟泼尼酯、氟米龙、氯替泼诺、泼尼松龙、利美索龙、环孢霉素A、NLRP3抑制剂、双氯芬酸、酮咯酸、溴芬酸、奈帕芬胺、氟比洛芬、立他司特，或者以上的药学上可接受的盐、类似物或衍生物。

5.如权利要求4所述的产品组合，其中所述NLRP3抑制剂是Ac-YVAD-cmk、2-APB、阿格拉宾、BAPTA、BAY 11-7082、β-羟基丁酸酯(BHB)、C172、CY-09、氟芬那酸、格列本脲、INF39、异甘草素、MCC950、甲芬那酸、3,4-亚甲二氧基-β-硝基苯乙烯(MNS)、OLT1177、冬凌草甲素、小白菊内酯、白藜芦醇、萝卜硫素、曲尼司特、VX-765或Z-VAD-FMK。

6.如权利要求1-5中任一项所述的产品组合，其中所述另外的治疗剂以0.001％至5％w/v的浓度存在。

7.如权利要求1-6中任一项所述的产品组合，其中所述一种或多种RNA酶包括约0.001％至约1％w/v的浓度的豹蛙酶，并且一种或多种另外的治疗剂包括0.001％至0.1％w/v的浓度的萘甲唑林、羟甲唑啉或溴莫尼定。

8.如权利要求1-7中任一项所述的产品组合，其包括以约0.03％w/v的量存在的豹蛙酶，以及以约0.01％至约0.025％w/v的量存在的羟甲唑啉。

9.如权利要求1-7中任一项所述的产品组合，其包括以约0.03％w/v的量存在的豹蛙酶，以及以约0.01％至约0.025％w/v的量存在的溴莫尼定。

10.如权利要求1-9中任一项所述的产品组合，其中所述眼部感染是病毒性结膜炎。

11.如权利要求10所述的产品组合，其中所述病毒性结膜炎是流行性角结膜炎、咽结膜热、非特异性散发性滤泡性结膜炎或慢性乳头性结膜炎。

12.如权利要求10-11中任一项所述的产品组合，其中所述病毒性结膜炎由来自腺病毒科或疱疹病毒科的病毒感染引起。

13.如权利要求12所述的产品组合，其中所述病毒感染由人腺病毒B、人腺病毒D、人腺病毒E、单纯疱疹病毒(HSV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、Epstein-Barr病毒(EBV)、人巨细胞病毒(CMV)或带状疱疹病毒(HZV)引起。

14.如权利要求13所述的产品组合，其中所述人腺病毒B是人腺病毒B血清型3、人腺病毒B血清型7、人腺病毒B血清型11或以上的任意组合。

15.如权利要求13所述的产品组合，其中所述人腺病毒D是人腺病毒D血清型8、人腺病毒D血清型13、人腺病毒D血清型19、人腺病毒D血清型37或以上的任意组合。

16.如权利要求13所述的产品组合，其中所述人腺病毒E是人腺病毒E血清型4。

17.如权利要求1-16中任一项所述的产品组合，其中所述产品组合还包括一种或多种药学上可接受的载体和任选地一种或多种药学上可接受的组分。

18.如权利要求1-17中任一项所述的产品组合，其中所述一种或多种RNA酶和所述一种或多种另外的治疗剂被配制成单一制剂。

19.如权利要求1-17中任一项所述的产品组合，其中所述一种或多种RNA酶在第一组合物中，并且所述一种或多种另外的治疗剂在第二组合物中，并且其中所述第一组合物与所述第二组合物是分开的。

20.如权利要求1-19中任一项所述的产品组合，其中所述产品组合被配制成用于眼科给药途径中的眼科制剂。

21.如权利要求1-20中任一项所述的产品组合，其中所述产品组合被配制为通过眼部滴注、眼部冲洗、眼内注射、角膜内注射、玻璃体内注射或结膜下注射给药。

22.如权利要求1-21中任一项所述的产品组合，其中所述产品组合是控释递送平台。

23.如权利要求22所述的产品组合，其中所述控释递送平台是延长释放制剂或持续释放制剂。

24.如权利要求1-23中任一项所述的产品组合，其中所述产品组合是眼部植入物、眼科植入物、泪点塞、眼内植入物、角膜内植入物或结膜下植入物。

25.如权利要求1-24中任一项所述的产品组合，其中所述产品组合包括约25μM的量的豹蛙酶和0.01％至0.025％w/v的量的羟甲唑啉。

26.减少或抑制对象中的眼部感染的方法，所述方法包括：

选择需要减少或抑制眼部感染的对象；以及

向所述对象给药：

治疗有效量的一种或多种核糖核酸酶(RNA酶)；和

治疗有效量的一种或多种另外的治疗剂，其中所述另外的治疗剂是血管收缩剂、抗生素、免疫调节化合物、类固醇或以上的组合。

27.如权利要求26所述的方法，其中所述一种或多种RNA酶是豹蛙酶、其类似物、变体、衍生物或片段。

28.如权利要求26-27中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂是萘甲唑林、四氢唑啉、苯肾上腺素、羟甲唑啉、溴莫尼定、阿可乐定、麻黄碱、阿奇霉素、红霉素、庆大霉素、新霉素、妥布霉素、贝西沙星、环丙沙星、加替沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、氧氟沙星、杆菌肽、氯霉素、短杆菌肽、纳他霉素、多粘菌素B、磺胺醋酰、四环素、甲氧苄啶、万古霉素、地塞米松、二氟泼尼酯、氟米龙、氯替泼诺、泼尼松龙、利美索龙、环孢霉素A、NLRP3抑制剂、双氯芬酸、酮咯酸、溴芬酸、奈帕芬胺、氟比洛芬、立他司特，或者以上的药学上可接受的盐、类似物或衍生物。

29.如权利要求28所述的方法，其中所述NLRP3抑制剂是Ac-YVAD-cmk、2-APB、阿格拉宾、BAPTA、BAY 11-7082、β-羟基丁酸酯(BHB)、C172、CY-09、氟芬那酸、格列本脲、INF39、异甘草素、MCC950、甲芬那酸、3,4-亚甲二氧基-β-硝基苯乙烯(MNS)、OLT1177、冬凌草甲素、小白菊内酯、白藜芦醇、萝卜硫素、曲尼司特、VX-765或Z-VAD-FMK。

30.如权利要求26-29中任一项所述的方法，其中所述给药包括每天4次在所述对象的每只眼睛中滴注眼科组合物，其中所述眼科组合物包含约0.03％w/v的量的豹蛙酶和约0.01％至约0.025％w/v的量的羟甲唑啉。

31.如权利要求26-29中任一项所述的方法，其中所述给药包括每天4次在所述对象的每只眼睛中滴注眼科组合物，其中所述眼科组合物包含约0.03％w/v的量的豹蛙酶和约0.01％至约0.025％w/v的量的溴莫尼定。

32.如权利要求26-31中任一项所述的方法，其中所述方法抑制或延迟所述眼部感染，或者防止所述眼部感染扩散。

33.如权利要求26-32中任一项所述的方法，其中所述眼部感染是病毒性结膜炎。

34.如权利要求33所述的方法，其中所述病毒性结膜炎是流行性角结膜炎、咽结膜热、非特异性散发性滤泡性结膜炎、慢性乳头性结膜炎或疱疹性结膜炎。

35.如权利要求26-34中任一项所述的方法，其中所述给药是眼科给药。

36.如权利要求26-35中任一项所述的方法，其中所述一种或多种RNA酶在第一组合物中制备，并且所述一种或多种另外的治疗剂在第二组合物中制备，并且其中所述第一组合物在所述第二组合物给药之前给药、伴随所述第二组合物给药，或在所述第二组合物给药之后给药。

37.如权利要求26-36中任一项所述的方法，其中所述给药是每天两次。

38.如权利要求26-36中任一项所述的方法，其中所述给药是每天4次。

39.如权利要求26-36中任一项所述的方法，其中所述给药是每天8次。

40.产品组合在制备用于治疗眼部感染的药物中的用途，所述产品组合包括：

治疗有效量的一种或多种核糖核酸酶(RNA酶)；和

治疗有效量的一种或多种另外的治疗剂，其中所述另外的治疗剂是血管收缩剂、抗生素、免疫调节化合物、类固醇或以上的组合。

41.如权利要求40所述的用途，其中所述一种或多种RNA酶是豹蛙酶、其类似物、变体、衍生物或片段。

42.如权利要求40-41中任一项所述的用途，其中所述一种或多种另外的治疗剂是萘甲唑林、四氢唑啉、苯肾上腺素、羟甲唑啉、溴莫尼定、阿可乐定、麻黄碱、阿奇霉素、红霉素、庆大霉素、新霉素、妥布霉素、贝西沙星、环丙沙星、加替沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、氧氟沙星、杆菌肽、氯霉素、短杆菌肽、纳他霉素、多粘菌素B、磺胺醋酰、四环素、甲氧苄啶、万古霉素、地塞米松、二氟泼尼酯、氟米龙、氯替泼诺、泼尼松龙、利美索龙、环孢霉素A、NLRP3抑制剂、双氯芬酸、酮咯酸、溴芬酸、奈帕芬胺、氟比洛芬、立他司特，或者以上的药学上可接受的盐、类似物或衍生物。

43.如权利要求42所述的用途，其中所述NLRP3抑制剂是Ac-YVAD-cmk、2-APB、阿格拉宾、BAPTA、BAY 11-7082、β-羟基丁酸酯(BHB)、C172、CY-09、氟芬那酸、格列本脲、INF39、异甘草素、MCC950、甲芬那酸、3,4-亚甲二氧基-β-硝基苯乙烯(MNS)、OLT1177、冬凌草甲素、小白菊内酯、白藜芦醇、萝卜硫素、曲尼司特、VX-765或Z-VAD-FMK。

44.如权利要求40-43中任一项所述的用途，其中所述产品组合包括以约0.03％w/v的量存在的豹蛙酶和以约0.01％至约0.025％w/v的量存在的羟甲唑啉。

45.如权利要求40-43中任一项所述的用途，其中所述产品组合包括以约0.03％w/v的量存在的豹蛙酶和以约0.01％至约0.025％w/v的量存在的溴莫尼定。

46.如权利要求40-45中任一项所述的用途，其中所述药物抑制或延迟所述眼部感染。

47.如权利要求40-46中任一项所述的用途，其中所述眼部感染是病毒性结膜炎。

48.如权利要求47所述的用途，其中所述病毒性结膜炎是流行性角结膜炎、咽结膜热、非特异性散发性滤泡性结膜炎或慢性乳头性结膜炎。

49.如权利要求40-48中任一项所述的用途，其中配制所述药物用于眼科给药。