CN115975020A - 靶向sars-cov-2s蛋白的抗原结合蛋白及其应用 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及一种分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链可变区VH中的至少一个CDR。本申请涉及包含所述分离的抗原结合蛋白的多肽，免疫缀合物和药物组合物，还涉及编码所述分离的抗原结合蛋白的核酸、包含所述分离的抗原结合蛋白的载体、包含所述核酸或所述载体的细胞、制备所述分离的抗原结合蛋白的方法以及所述分离的抗原结合蛋白的应用。本申请还涉及一种用于检测或测定SARS‑CoV‑2的方法，一种用于检测或测定SARS‑CoV‑2的试剂盒。
Description
技术领域
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种靶向SARS-COV-2S蛋白的抗原结合蛋白及其应用。
背景技术
SARS-COV-2是一种β型冠状病毒，属于包膜病毒。对于所有被包膜的病毒来说，膜融合是进入宿主细胞和建立感染的关键早期步骤。SARS-COV-2的融合蛋白是Spike(S)蛋白。S蛋白是一种高度糖基化的Ⅰ型跨膜蛋白，固定在病毒膜上，将病毒粒子表面“装饰成一个皇冠”。SARS-CoV-2通过S蛋白三聚体识别受体ACE2来感染细胞。在这个过程中，S蛋白会被宿主的蛋白酶(如TMPRSS2)切割为S1和S2两部分，分别介导受体结合和膜融合过程。SARS-CoV-2利用糖基化刺突(S)蛋白与人体细胞膜上的ACE2受体结合，进而引导病毒外膜与细胞膜发生融合。S1由N-terminal domain(NTD)和receptor binding domain(RBD)组成(RBD负责与ACE2结合)。
在人体免疫系统和药物的双重压力下，SARS-COV-2S蛋白尤其是其RBD区域会不断的突变以逃逸宿主免疫系统、降低靶向药物(如中和抗体)的药效。由于S蛋白RBD区域氨基酸不同位点的突变造成其结构变化也不同，因此获得针对多种变异病毒的中和性抗体难度较大。靶向S蛋白尤其是其RBD区域开发广谱抗SARS-COV-2中和抗体对有效防控SARS-COV-2及其突变体传播具有重要意义。
发明内容
本申请提供了一种分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链可变区VH中的至少一个CDR。本申请涉及包含所述抗原结合蛋白的多肽，免疫缀合物和药物组合物，还涉及编码所述抗原结合蛋白的核酸、包含所述抗原结合蛋白的载体、包含所述核酸或所述载体的细胞、制备所述抗原结合蛋白的方法以及所述抗原结合蛋白的应用。本申请还涉及一种用于检测或测定SARS-CoV-2的方法，一种用于检测或测定SARS-CoV-2的试剂盒。本申请所述的分离的抗原结合蛋白能够针对不同的变异毒株，具有广谱抗SARS-COV-2作用。本申请所述的分离的抗原结合蛋白能够有效中和SARS-CoV-2S蛋白及其突变体，阻断S1-RBD及其常见突变体蛋白与人ACE2蛋白的结合。
一方面，本申请提供了一种分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链可变区VH中的至少一个CDR，所述VH包含SEQ ID No:98-103中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含HCDR3，所述HCDR3包含SEQ IDNo:33，50和92-93中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述HCDR3包含SEQ ID No:3，24，33，50，59和76中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQID No:94-96中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述HCDR2包含SEQ ID No:2，23，32，49，58和75中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID No:97中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQID No:1，22，31，48和57中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中任一项所示的氨基酸序列，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID No:97所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID No:94-96中任一项所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID No:33，50和92-93中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所示的氨基酸序列，其中所述HCDR1，HCDR2和HCDR3包含选自下述任意一组的氨基酸序列：
1)所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；
2)所述HCDR1包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列；
3)所述HCDR1包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列；
4)所述HCDR1包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列；
5)所述HCDR1包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列；以及
6)所述HCDR1包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR1，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连，且所述H-FR1包含SEQ ID No:91所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合的蛋白中所述H-FR1包含SEQ ID No:4，8，13，34，36，51，60，77和79中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR2，所述H-FR2位于所述HCDR1和所述HCDR2之间，且所述H-FR2包含SEQ ID No:90所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR2包含SEQ ID No:5，9，12，14，25，37，63，64，66，78和80中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR3，所述H-FR3位于所述HCDR2和所述HCDR3之间，且所述H-FR3包含SEQ ID No:89所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR3包含SEQ ID No:6，10，15，35，38，39，40，61，65和67中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR4，所述H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接相连，且所述H-FR4包含SEQ ID No:88所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR4包含SEQ ID No:7，11，16和62中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1包含SEQ ID No:91所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID No:90所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID No:89所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ IDNo:88所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1包含SEQ ID No:4，8，13，34，36，51，60，77和79中任一项所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID No:5，9，12，14，25，37，63，64，66，78和80中任一项所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID No:6，10，15，35，38，39，40，61，65和67中任一项所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID No:7，11，16和62中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4包含选自下述任意一组的氨基酸序列：
1)所述H-FR1包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ IDNo.7所示的氨基酸序列；
2)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；
3)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；
4)所述H-FR1包含SEQ ID No.13所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:16所示的氨基酸序列；
5)所述H-FR1包含SEQ ID No.13所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID No.12所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID No.15所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID No.16所示的氨基酸序列；
6)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:7所示的氨基酸序列；
7)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；
8)所述H-FR1包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:7所示的氨基酸序列；
9)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；
10)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
11)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
12)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
13)所述H-FR1包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
14)所述H-FR1包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列；
15)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；
16)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
17)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
18)所述H-FR1包含SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
19)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；以及
20)所述H-FR1包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其包含重链可变区VH，所述VH包含SEQ ID No:17～21，26～30，41～47，52～56，68～74和81～86中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其包含重链恒定区，且所述重链恒定区包含Fc片段。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述Fc片段包含SEQ IDNo:87所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体或其抗原结合片段。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv，VHH和/或dAb。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体选自下组：单克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其为单域抗体。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：
1)能够中和SARS-CoV-2S蛋白及其突变体；
2)在ELISA实验中，以小于或等于0.013μg/ml的EC50值与SARS-CoV-2S蛋白结合；以及
3)能够阻断S1-RBD及其常见突变体蛋白与人ACE2蛋白的结合。
另一方面，本申请提供了一种多肽，其包含所述的分离的抗原结合蛋白。
另一方面，本申请提供了一种免疫缀合物，其包含所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽。
另一方面，本申请提供了一种分离的核酸分子，其编码所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽。
另一方面，本申请提供了一种载体，其包含所述的分离的核酸分子。
另一方面，本申请提供了一种细胞，其包含所述的分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述的分离的核酸分子和/或所述的载体。
另一方面，本申请提供了一种制备所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽的方法，所述方法包括在使得所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽表达的条件下，培养所述的细胞。
另一方面，本申请提供了一种药物组合物，其包含所述的分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述的分离的核酸分子，所述的载体，所述的细胞，和/或药学上可接受的佐剂和/或赋形剂。
另一方面，本申请提供了一种用于检测或测定SARS-CoV-2的方法，所述方法包括使用所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽。
另一方面，本申请提供了一种用于检测或测定SARS-CoV-2的试剂盒，所述试剂盒包括所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽。
另一方面，本申请提供了一种所述的分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述的分离的核酸分子，所述的载体，所述的细胞和/或所述的药物组合物在制备预防和/或治疗疾病和/或病症的药物中的用途。
在某些实施方式中，所述的用途，其中所述疾病和/或病症由SARS-CoV-2或其突变体引起或介导。
本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。
附图说明
本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明如下：
图1显示的是本申请所述单域抗体与S1-RBD蛋白ELISA检测亲和力结果。
图2显示的是本申请所述单域抗体与S1-RBD蛋白ELISA检测竞争结合人ACE2蛋白结果。
图3显示的是本申请所述单域抗体与Delta突变体(B.1.167.2)S1-RBD蛋白ELISA检测竞争结合人ACE2蛋白结果。
图4显示的是本申请所述单域抗体阻断SARS-COV-2假病毒中和实验结果。
图5显示的是本申请所述单域抗体阻断Delta突变体(B.1.167.2)SARS-COV-2假病毒中和实验结果。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。
术语定义
在本申请中，术语“单域抗体”通常是指包含了抗体中单个可变域的片段，可以选择性地和特定抗原结合，单域抗体的质量大约为12～15kDa。本申请所述单域抗体可以包括一个重链可变域，本申请所述的单域抗体可以包括抗原结合片段，所述抗原结合片段可以包括Fab、Fab’、F(ab)2、Fv片段、F(ab’)2、scFv、di-scFv、VHH和/或dAb。
在本申请中，术语“多肽”通常是指氨基酸残基的聚合物。该术语也适用于其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然存在的氨基酸的类似物或模拟物的氨基酸聚合物、以及天然存在的氨基酸聚合物。该术语也可包括例如通过添加糖残基以形成糖蛋白或被磷酸化而被修饰的氨基酸聚合物。多肽可由天然存在的和非重组的细胞或由遗传工程改造的或重组的细胞产生，并且可包含具有天然蛋白质的氨基酸序列的分子、或具有天然序列的一个或多个氨基酸的缺失、添加和/或取代的分子。术语“多肽”可以包括抗原结合片段、抗体或具有抗原结合片段的一个或多个氨基酸的缺失、添加和/或取代的序列。术语“多肽”可以指与全长蛋白质相比具有氨基末端缺失、羧基末端缺失和/或内部缺失的多肽。与全长蛋白质相比，这类片段也可含有经修饰的氨基酸。
在本申请中，术语“核酸”通常指核苷酸(例如核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸)的聚合物，并且可包括天然存在的(腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶和胸腺嘧啶)、非天然存在的和经修饰的核酸。术语“核酸”可包括基因，cDNA或mRNA。例如，核酸分子可以是合成的(例如化学合成的)或重组的。核酸可以包括含有天然核苷酸的类似物或衍生物的核酸，其具有与参考核酸相似的结合特性并且以类似于天然存在的核苷酸的方式进行代谢。核酸序列还可以包括其保守修饰的变体(例如简并密码子取代)，等位基因，直向同源物，SNP和互补序列以及明确指出的序列。该术语不受聚合物的长度限制。核酸可以是单链或双链的，并且一般含有5’-3’磷酸二酯键，核苷酸类似物可以具有其他连接。
在本申请中，术语“恒定区”通常是指除了可变区之外的抗体的结构域的总合。恒定区不直接涉及抗原的结合，但是显示不同的效应子功能。取决于它们重链的恒定区的氨基酸序列，抗体被分为下述类别：IgA，IgD，IgE，IgG和IgM，并且这些中的一些可以被进一步分为类别如IgG1，IgG2，IgG3，和IgG4，IgA1和IgA2。对应于不同种类的抗体的重链恒定区分别被称为α、δ、ε、γ和μ。可以在所有5种抗体种类中发现的轻链恒定区被称为κ(kappa)和λ(lambda)。
在本申请中，术语“抗原结合蛋白”通常指包含结合抗原部分的蛋白质，以及任选地允许结合抗原的部分采用促进抗原结合蛋白与抗原结合的构象的支架或骨架部分。抗原结合蛋白的可包括但不限于抗体、抗原结合片段(Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv和/或dAb)、免疫缀合物、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、抗体片段、抗体衍生物、抗体类似物或融合蛋白等，只要它们显示出所需的抗原结合活性即可。本申请的“分离的抗原结合蛋白”可以包含结合抗原的部分和任选地，允许抗原结合部分采用促进所述抗原结合部分结合抗原的构象的支架或构架部分。
在本申请中，术语“抗原结合片段”通常是指一个与抗原结合或与抗原结合(即特异性结合)的完整抗体(即与它们所衍生的完整抗体)竞争的免疫球蛋白或抗体的多肽片段。所述抗原结合片段可以包括但不限于：Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段，线性抗体，单链抗体，双体抗体，以及由抗体片段形成的多特异性抗体。
在本申请中，术语“可变区”或“可变结构域”通常是指抗体轻链和/或重链的一部分，一般包括重链中的大约氨基末端的120-130个氨基酸和轻链中的大约100-110个氨基末端氨基酸。可变区一般在氨基酸序列中，甚至在相同物种的抗体中广泛不同。抗体的可变区可以决定其特定抗原的每种特定抗体的结合和特异性。序列的可变性集中在那些称作互补决定区(CDRs)的区域中，而可变区中保守性更高的区域称作构架区(FR)。轻链和重链的CDRs在其中可含有很大程度负责抗体与抗原的直接相互作用的氨基酸，而FRs中的氨基酸可以显著影响抗原结合/识别。
在本申请中，术语“免疫缀合物”通常指融合多肽分子，其可以包含一个效应器模块、至少一个抗原结合模块和Fc域，只要存在不超过一个效应器模块。在某些实施方式中，所述免疫缀合物可以包含一个效应器模块、两个抗原结合模块和Fc域。所述免疫缀合物可以由通过一种或多种接头序列连接的一个效应器模块、两个抗原结合模块和Fc域组成。在本申请中，所述免疫缀合物可以是融合蛋白，即免疫缀合物的组分可以通过肽键直接地或经由接头肽彼此连接。
在本申请中，术语“细胞”通常是指可以或已经含有包括本申请所述的核酸分子的质粒或载体，或者能够表达本申请所述的融合蛋白或其抗原结合片段的个体细胞，细胞系或细胞培养物。所述细胞可以包括单个细胞的子代。由于天然的，意外的或故意的突变，子代细胞与原始亲本细胞在形态上或在基因组上可能不一定完全相同，但能够表达本申请所述的融合蛋白或其抗原结合片段即可。所述细胞可以通过使用本申请所述的载体体外转染细胞而得到。所述细胞可以是原核细胞(例如大肠杆菌)，也可以是真核细胞(例如酵母细胞，例如COS细胞，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，HeLa细胞，HEK293细胞，COS-1细胞，NS0细胞或骨髓瘤细胞)。
在本申请中，术语“载体”通常是指能够在合适的宿主中自我复制的核酸分子，其将插入的核酸分子转移到细胞(例如，宿主细胞)中和/或细胞之间。所述载体可包括主要用于将DNA或RNA插入细胞中的载体、主要用于复制DNA或RNA的载体，以及主要用于DNA或RNA的转录和/或翻译的表达的载体。所述载体还包括具有多种上述功能的载体。所述载体可以是当引入合适的细胞时能够转录并翻译成多肽的多核苷酸。通常，通过培养包含所述载体的合适的细胞，所述载体可以产生期望的表达产物。在本申请中，所述载体可以为质粒。
在本申请中，术语“佐剂”通常是指和抗原联合使用时能增强对抗原的免疫反应的化合物，但当其单独使用时不会产生对抗原的免疫反应。佐剂可以通过数种机制增强免疫反应，包括募集淋巴细胞、刺激B细胞和/或T细胞、刺激巨噬细胞。
在本申请中，术语“互补决定区”或术语“CDR”通常是指在抗体可变序列内的互补性决定区。在重链和轻链的每个可变区中存在3个CDRs，所述CDRs对于每个可变区命名为CDR1、CDR2和CDR3。如本文使用的，CDR组合可指在能够结合抗原的单个可变区中出现的3个CDRs的组。这些CDRs的确切边界已根据不同系统不同地限定。由Kabat(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest National Institutes ofHealth，Bethesda，Md.(1987)和(1991))描述的系统，不仅提供了可应用于抗体的任何可变区的明确残基编号系统，还提供了限定3个CDRs的精确残基边界。这些CDRs可以被称为Kabat CDRs。Chothia和同事(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987)以及Chothia等人，Nature 342：877-883(1989))发现Kabat CDRs内的某些亚部分采取几乎相同的肽主链构象，尽管在氨基酸序列水平上具有大的多样性。这些亚部分命名为L1、L2和L3或H1、H2和H3，其中“L”和“H”分别指轻链和重链区域。这些区域可以被称为Chothia CDRs，所述Chothia CDRs具有与Kabat CDRs重叠的边界。与Kabat CDRs重叠的限定CDRs的其他边界已由Padlan(FASEB J.9：133-139(1995))和MacCallum(J Mol Biol 262(5)：732-45(1996))描述。在其他的CDR边界定义可能不严格地遵循上述系统之一，但仍将与KabatCDRs重叠，尽管按照特定残基或残基组或甚至整个CDRs并不显著影响抗原结合的预测或实验发现，它们可以缩短或加长。本文所述CDRs，可使用KABAT和IMGT的组合进行定义，具体组合的方式如下所述：按照KABAT和IMGT编号方案分别定义CDR区的氨基酸序列，将两种方案得到的CDR序列进行组合叠加，得到覆盖使用两种方案定义的CDR序列做为本申请定义的CDR序列。
在本申请中，术语“药物组合物”通常是指涉及适合施用于患者、可以是人患者的组合物。例如，本申请所述的药物组合物，其可以包含本申请所述的抗原结合蛋白、本申请所述的免疫缀合物、本申请所述的核酸分子、本申请所述的载体和/或本申请所述的细胞，以及任选地药学上可接受的载剂。此外，所述药物组合物还可以包含一种或多种(药学上有效的)载剂、稳定剂、赋形剂、稀释剂、增溶剂、表面活性剂、乳化剂和/或防腐剂的合适的制剂。组合物的可接受成分在所用剂量和浓度下对接受者无毒。本发明的药物组合物可以包括但不限于液体、冷冻和冻干组合物。
发明详述
分离的抗原结合蛋白
一方面，本申请提供了一种分离的抗原结合蛋白，其可以包含抗体重链可变区VH中的至少一个CDR，所述CDR可以是HCDR3，HCDR2和/或HCDR1。所述重链可变区VH可以包含SEQ ID No:98-103中任一项所示的氨基酸序列。在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白的HCDR序列可以包含使用任何方式划分得到的HCDR序列，只要VH序列与SEQ ID No:98-103中任一项所示的氨基酸序列相同，使用任何方式划分得到的HCDR序列都在本申请的保护范围中。
在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR3，所述HCDR3可以包含SEQID No:33，50和92-93中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述HCDR3可以包含SEQ ID No:3，24，33，50，59和76中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR2，所述HCDR2可以包含SEQID No:94-96中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述HCDR2可以包含SEQ ID No:2，23，32，49，58和75中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ IDNo:97中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR1，所述HCDR1可以包含SEQID No:1，22，31，48和57中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白中任一项所示的氨基酸序列，其可以包含HCDR1和HCDR3，所述HCDR1可以包含SEQ ID No:97所示的氨基酸序列，且所述HCDR3可以包含SEQ ID No:33，50和92-93中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白中任一项所示的氨基酸序列，其可以包含HCDR2和HCDR3，所述HCDR2可以包含SEQ ID No:94-96中任一项所示的氨基酸序列，且所述HCDR3可以包含SEQ ID No:33，50和92-93中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白中任一项所示的氨基酸序列，其可以包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述HCDR1可以包含SEQ ID No:97所示的氨基酸序列，所述HCDR2可以包含SEQ ID No:94-96中任一项所示的氨基酸序列，且所述HCDR3可以包含SEQ ID No:33，50和92-93中任一项所示的氨基酸序列。
例如，所述的分离的抗原结合蛋白中所示的氨基酸序列，其中所述HCDR1，HCDR2和HCDR3可以包含选自下述任意一组的氨基酸序列：
1)所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；
2)所述HCDR1包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列；
3)所述HCDR1包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列；
4)所述HCDR1包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列；
5)所述HCDR1包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列；以及
6)所述HCDR1包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的VH可以包含框架区H-FR1，H-FR2，H-FR3和/或H-FR4。
在本申请中，任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其可以包含H-FR1，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端可以直接或间接相连，且所述H-FR1可以包含SEQ ID No:91所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合的蛋白中所述H-FR1可以包含SEQ ID No:4，8，13，34，36，51，60，77和79中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白，其可以包含H-FR2，所述H-FR2可以位于所述HCDR1和所述HCDR2之间，且所述H-FR2可以包含SEQ ID No:90所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR2可以包含SEQ ID No:5，9，12，14，25，37，63，64，66，78和80中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白，其可以包含H-FR3，所述H-FR3可以位于所述HCDR2和所述HCDR3之间，且所述H-FR3可以包含SEQ ID No:89所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR3可以包含SEQ ID No:6，10，15，35，38，39，40，61，65和67中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白，其可以包含H-FR4，所述H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端可以直接或间接相连，且所述H-FR4可以包含SEQ ID No:88所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR4可以包含SEQ ID No:7，11，16和62中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白，其可以包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1可以包含SEQ ID No:91所示的氨基酸序列，所述H-FR2可以包含SEQ ID No:90所示的氨基酸序列，所述H-FR3可以包含SEQ ID No:89所示的氨基酸序列，且所述H-FR4可以包含SEQ ID No:88所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白，其可以包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1可以包含SEQ ID No:4，8，13，34，36，51，60，77和79中任一项所示的氨基酸序列，所述H-FR2可以包含SEQ ID No:5，9，12，14，25，37，63，64，66，78和80中任一项所示的氨基酸序列，所述H-FR3可以包含SEQ ID No:6，10，15，35，38，39，40，61，65和67中任一项所示的氨基酸序列，且所述H-FR4可以包含SEQ ID No:7，11，16和62中任一项所示的氨基酸序列。
例如，所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4可以包含选自下述任意一组的氨基酸序列：
1)所述H-FR1包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ IDNo.7所示的氨基酸序列；
2)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；
3)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；
4)所述H-FR1包含SEQ ID No.13所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:16所示的氨基酸序列；
5)所述H-FR1包含SEQ ID No.13所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID No.12所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID No.15所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID No.16所示的氨基酸序列；
6)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:7所示的氨基酸序列；
7)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；
8)所述H-FR1包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:7所示的氨基酸序列；
9)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；
10)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
11)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
12)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
13)所述H-FR1包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
14)所述H-FR1包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列；
15)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；
16)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
17)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
18)所述H-FR1包含SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
19)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；以及
20)所述H-FR1包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR1，HCDR2，HCDR3，H-FR1，H-FR2，H-FR3和/或H-FR4，且所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连，所述H-FR2位于所述HCDR1和所述HCDR2之间，所述H-FR3位于所述HCDR2和所述HCDR3之间，所述H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接相连。在本申请中，直接或间接相连可以通过分子间作用力连接，或者可以通过连接子连接。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白，其可以包含重链可变区VH，所述VH可以包含SEQ ID No:17～21，26～30，41～47，52～56，68～74和81～86中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白，其可以包含重链恒定区，且所述重链恒定区可以包含Fc片段。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述Fc片段可以包含SEQ ID No:87所示的氨基酸序列。例如，所述Fc片段可以包括其变体，所述变体可以包括所述Fc片段的氨基酸序列经过取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸。例如1-30个、1-20个或1-10个，又例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或9个氨基酸取代、缺失和/或插入；或者可以涵盖其同源物，所述同源物可以为与所述Fc片段的氨基酸序列具有至少约85％(例如，具有至少约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高的)序列同源性的氨基酸序列。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白，其可以包括抗体或其抗原结合片段。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合片段可以选自下组：Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv，VHH和/或dAb。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体可以选自下组：单克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白，其可以具有下述性质中的一种或多种：
1)能够中和SARS-CoV-2S蛋白及其突变体；
2)在ELISA实验中，以小于或等于0.013μg/ml的EC50值与SARS-CoV-2S蛋白结合；以及
3)能够阻断S1-RBD及其常见突变体蛋白与人ACE2蛋白的结合。
在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白在ELISA检测中，可以以约0.013μg/ml或以下的EC50值(例如，所述EC50值为不高于约0.013μg/ml、不高于约0.012μg/ml、不高于约0.011μg/ml、不高于约0.010μg/ml、不高于约0.009μg/ml、不高于约0.008μg/ml、不高于约0.007μg/ml、不高于约0.006μg/ml、不高于约0.005μg/ml、不高于约0.004μg/ml、不高于约0.003μg/ml、不高于约0.002μg/ml、不高于约0.001μg/ml或不高于0.001μg/ml或以下)与SARS-CoV-2S蛋白特异性结合。
单域抗体
在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白，其可以为单域抗体。
在本申请中，所述单域抗体可以包含抗体重链可变区VHH中的至少一个CDR，所述CDR可以是CDR3，CDR2和/或CDR1。所述重链可变区VHH可以包含SEQ ID No:98-103所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述单域抗体可以包含CDR3，所述CDR3可以包含SEQ ID No:33，50和92-93中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述单域抗体中所述CDR3可以包含SEQ ID No:3，24，33，50，59和76中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述单域抗体可以包含CDR2，所述CDR2可以包含SEQ ID No:94-96中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述单域抗体中所述CDR2可以包含SEQ ID No:2，23，32，49，58和75中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述单域抗体可以包含CDR1，所述CDR1可以包含SEQ ID No:97所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述单域抗体可以包含CDR1，所述CDR1可以包含SEQ ID No:1，22，31，48和57中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述单域抗体中任一项所示的氨基酸序列，其可以包含CDR1和CDR3，所述CDR1可以包含SEQ ID No:97所示的氨基酸序列，且所述CDR3可以包含SEQ ID No:33，50和92-93中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述单域抗体中任一项所示的氨基酸序列，其可以包含CDR2和CDR3，所述CDR2可以包含SEQ ID No:94-96中任一项所示的氨基酸序列，且所述CDR3可以包含SEQID No:33，50和92-93中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述单域抗体中任一项所示的氨基酸序列，其可以包含CDR1，CDR2和CDR3，所述CDR1可以包含SEQ ID No:97所示的氨基酸序列，所述CDR2可以包含SEQ ID No:94-96中任一项所示的氨基酸序列，且所述CDR3可以包含SEQ ID No:33，50和92-93中任一项所示的氨基酸序列。
例如，所述单域抗体中所示的氨基酸序列，其中所述CDR1，CDR2和CDR3可以包含选自下述任意一组的氨基酸序列：
1)所述CDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述CDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，且所述CDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；
2)所述CDR1包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列，所述CDR2包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列，且所述CDR3包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列；
3)所述CDR1包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述CDR2包含SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列，且所述CDR3包含SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列；
4)所述CDR1包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列，所述CDR2包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列，且所述CDR3包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列；
5)所述CDR1包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列，所述CDR2包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列，且所述CDR3包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列；以及
6)所述CDR1包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述CDR2包含SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，且所述CDR3包含SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列。
在本申请中，任一项所述的单域抗体，其可以包含FR1，所述FR1的C末端与所述CDR1的N末端可以直接或间接相连，且所述FR1可以包含SEQ ID No:91所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的单域抗体中所述FR1可以包含SEQ ID No:4，8，13，34，36，51，60，77和79中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的单域抗体，其可以包含FR2，所述FR2可以位于所述CDR1和所述CDR2之间，且所述FR2可以包含SEQ ID No:90所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的单域抗体，其中所述FR2可以包含SEQ ID No:5，9，12，14，25，37，63，64，66，78和80中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的单域抗体，其可以包含FR3，所述FR3可以位于所述CDR2和所述CDR3之间，且所述FR3可以包含SEQ ID No:89所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的单域抗体，其中所述FR3可以包含SEQ ID No:6，10，15，35，38，39，40，61，65和67中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的单域抗体，其可以包含FR4，所述FR4的N末端与所述CDR3的C末端可以直接或间接相连，且所述FR4可以包含SEQ ID No:88所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的单域抗体，其中所述FR4可以包含SEQ ID No:7，11，16和62中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的单域抗体，其可以包含FR1，FR2，FR3和FR4，所述FR1可以包含SEQ ID No:91所示的氨基酸序列，所述FR2可以包含SEQ ID No:90所示的氨基酸序列，所述FR3可以包含SEQ ID No:89所示的氨基酸序列，且所述FR4可以包含SEQ ID No:88所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的单域抗体，其可以包含FR1，FR2，FR3和FR4，所述FR1可以包含SEQ ID No:4，8，13，34，36，51，60，77和79中任一项所示的氨基酸序列，所述FR2可以包含SEQ ID No:5，9，12，14，25，37，63，64，66，78和80中任一项所示的氨基酸序列，所述FR3可以包含SEQ ID No:6，10，15，35，38，39，40，61，65和67中任一项所示的氨基酸序列，且所述FR4可以包含SEQ ID No:7，11，16和62中任一项所示的氨基酸序列。
例如，所述的单域抗体，其中所述FR1，FR2，FR3和FR4可以包含选自下述任意一组的氨基酸序列：
1)所述FR1包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ ID No.7所示的氨基酸序列；
2)所述FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
3)所述FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
4)所述FR1包含SEQ ID No.13所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；
5)所述FR1包含SEQ ID No.13所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID No.12所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID No.15所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ IDNo.16所示的氨基酸序列；
6)所述FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
7)所述FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
8)所述FR1包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
9)所述FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
10)所述FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列；
11)所述FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ IDNO:7所示的氨基酸序列；
12)所述FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ IDNO:7所示的氨基酸序列；
13)所述FR1包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
14)所述FR1包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ IDNO:62所示的氨基酸序列；
15)所述FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
16)所述FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列；
17)所述FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列；
18)所述FR1包含SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
19)所述FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；以及
20)所述FR1包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，所述FR2包含SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列，所述FR3包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，且所述FR4包含SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述单域抗体可以包含CDR1，CDR2，CDR3，FR1，FR2，FR3和/或FR4，且所述FR1的C末端与所述CDR1的N末端直接或间接相连，所述FR2位于所述CDR1和所述CDR2之间，所述FR3位于所述CDR2和所述CDR3之间，所述FR4的N末端与所述CDR3的C末端直接或间接相连。在本申请中，直接或间接相连可以通过分子间作用力连接，或者可以通过连接子连接。
在本申请中，所述的单域抗体，其可以包含重链可变区VHH，所述VHH可以包含SEQID No:17～21，26～30，41～47，52～56，68～74和81～86中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的单域抗体，其可以包含重链恒定区，且所述重链恒定区可以包含Fc片段。
在本申请中，所述的单域抗体，其中所述Fc片段可以包含SEQ ID No:87所示的氨基酸序列。例如，所述Fc片段可以包括其变体，所述变体可以包括所述Fc片段的氨基酸序列经过取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸。例如1-30个、1-20个或1-10个，又例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或9个氨基酸取代、缺失和/或插入；或者可以涵盖其同源物，所述同源物可以为与所述Fc片段的氨基酸序列具有至少约85％(例如，具有至少约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高的)序列同源性的氨基酸序列。
在本申请中，所述的单域抗体，其可以包括抗体或其抗原结合片段。
在本申请中，所述的单域抗体中所述抗原结合片段可以选自下组：Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv，VHH和/或dAb。
在本申请中，所述的单域抗体，其中所述抗体可以选自下组：单克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。
在本申请中，所述的单域抗体，其可以具有下述性质中的一种或多种：
1)能够中和SARS-CoV-2S蛋白及其突变体；
2)在ELISA实验中，以小于或等于0.013μg/ml的EC50值与SARS-CoV-2S蛋白结合；以及
3)能够阻断S1-RBD及其常见突变体蛋白与人ACE2蛋白的结合。
在本申请中，所述单域抗体在ELISA检测中，可以以约0.013μg/ml或以下的EC50值(例如，所述EC50值为不高于约0.013μg/ml、不高于约0.012μg/ml、不高于约0.011μg/ml、不高于约0.010μg/ml、不高于约0.009μg/ml、不高于约0.008μg/ml、不高于约0.007μg/ml、不高于约0.006μg/ml、不高于约0.005μg/ml、不高于约0.004μg/ml、不高于约0.003μg/ml、不高于约0.002μg/ml、不高于约0.001μg/ml或不高于0.001μg/ml或以下)与SARS-CoV-2S蛋白特异性结合。
多肽和免疫缀合物
另一方面，本申请提供了一种多肽，其可以包含所述的分离的抗原结合蛋白。
另一方面，本申请提供了一种免疫缀合物，其可以包含所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽。例如，所述免疫缀合物可以包括与抗原结合蛋白融合或偶联的其他的多肽、治疗剂、探针和/或其他抗体。在某些实施方式中，所述免疫缀合物可以包括药学上可接受的标记物、检测剂和/或治疗物。
核酸、载体、宿主细胞和制备方法
另一方面，本申请提供了分离的一种或多种核酸分子，所述一种或多种核酸分子可编码本申请所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽。例如，所述一种或多种核酸分子中的每一个核酸分子可以编码完整的所述分离的抗原结合蛋白或所述的多肽，也可以编码其中的一部分。本申请所述的核酸分子可以为分离的。在本申请中，可以通过本领域已知的多种方法来制备编码所述分离的抗原结合蛋白或所述的多肽的核酸。
另一方面，本申请提供了一种或多种载体，其包含本申请所述的一种或多种核酸分子。每种载体中可包含一种或多种所述核酸分子。此外，所述载体中还可包含其他基因，例如允许在适当的宿主细胞中和在适当的条件下选择该载体的标记基因。此外，所述载体可以含有多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，所述载体还可以含有复制起始位点。此外，所述载体可以包括，例如质粒、粘粒、病毒、噬菌体或者在例如遗传工程中通常使用的其他载体。
另一方面，本申请提供了一种细胞，所述细胞可包含本申请所述的一种或多种核酸分子和/或本申请所述的一种或多种载体。在某些实施方式中，每种或每个细胞可包含一个或一种本申请所述的核酸分子或载体。在某些实施方式中，每种或每个细胞可包含多个(例如，2个或以上)或多种(例如，2种或以上)本申请所述的核酸分子或载体。例如，可将本申请所述的载体引入所述细胞中，例如原核细胞(例如，细菌细胞)、CHO细胞、NS/0细胞、HEK293细胞，或者其他真核细胞，如来自植物的细胞、真菌或酵母细胞等。可通过本领域已知的方法将本申请所述的载体引入所述细胞中，例如电穿孔、lipofectine转染、lipofectamin转染等。
另一方面，本申请提供了制备本申请所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽的方法。所述方法可包括，在使得所述分离的抗原结合蛋白或所述的多肽表达的条件下，培养本申请所述的细胞。例如，可通过使用适当的培养基、适当的温度和培养时间等，这些方法是本领域普通技术人员所了解的。
药物组合物，应用
另一方面，本申请提供了一种药物组合物，其包含所述的分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述的分离的核酸分子，所述的载体，所述的细胞，和/或药学上可接受的佐剂和/或赋形剂。
所述药学上可接受的佐剂和/或赋形剂可以包括缓冲剂、抗氧化剂、防腐剂、低分子量多肽、蛋白质、亲水聚合物、氨基酸、糖、螯合剂、反离子、金属复合物和/或非离子表面活性剂等。
在本申请中，所述药物组合物可被配制用于口服给药，静脉内给药，肌肉内给药，在肿瘤部位的原位给药，吸入，直肠给药，阴道给药，经皮给药或通过皮下储存库给药。所述药物组合物可以用于抑制肿瘤生长。例如，本申请的药物组合物可以抑制或延缓疾病的发展或进展，和/或可以减轻和/或稳定疾病状态。
本申请所述的药物组合物可以包含预防和/或治疗有效量的所述分离的抗原结合蛋白。所述预防和/或治疗有效量是能够预防和/或治疗(至少部分治疗)患有或具有发展风险的受试者中的疾病或病症和/或其任何并发症而所需的剂量。
另一方面，本申请提供了一种可以用于检测或测定SARS-CoV-2的方法，所述方法可以包括使用所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽。例如，所述方法可以为体外方法。例如，所述方法可以为非诊断和治疗为目的的方法。
另一方面，本申请提供了一种可以用于检测或测定SARS-CoV-2的试剂盒，所述试剂盒可以包括所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽。
另一方面，本申请提供了一种所述的分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述的分离的核酸分子，所述的载体，所述的细胞和/或所述的药物组合物在制备预防和/或治疗疾病和/或病症的药物中的用途。
另一方面，本申请提供了所述分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述的分离的核酸分子，所述的载体，所述的细胞和/或所述的药物组合物，其制备预防或治疗疾病或病症。
另一方面，本申请提供了预防或治疗疾病的方法，其包括向有需要的受试者施用本申请所述的分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述的分离的核酸分子，所述的载体，所述的细胞和/或所述的药物组合物。
在本申请中，所述的用途中所述疾病和/或病症可以由SARS-CoV-2或其突变体引起或介导。
本申请还提供了以下实施方案：
1.分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链可变区VH中的至少一个CDR，所述VH包含SEQ ID No:98-103中任一项所示的氨基酸序列。
2.根据实施方案1所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR3，所述HCDR3包含SEQID No:33，50和92-93中任一项所示的氨基酸序列。
3.根据实施方案2所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR3包含SEQ ID No:3，24，33，50，59和76中任一项所示的氨基酸序列。
4.根据实施方案1-3中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID No:94-96中任一项所示的氨基酸序列。
5.根据实施方案4所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR2包含SEQ ID No:2，23，32，49，58和75中任一项所示的氨基酸序列。
6.根据实施方案1-5中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID No:97中任一项所示的氨基酸序列。
7.根据实施方案6中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID No:1，22，31，48和57中任一项所示的氨基酸序列。
8.根据实施方案1-7中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID No:97所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQID No:94-96中任一项所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID No:33，50和92-93中任一项所示的氨基酸序列。
9.根据实施方案1-8中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR1，HCDR2和HCDR3包含选自下述任意一组的氨基酸序列：
1)所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；
2)所述HCDR1包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列；
3)所述HCDR1包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列；
4)所述HCDR1包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列；
5)所述HCDR1包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列；以及
6)所述HCDR1包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列。
10.根据实施方案6-9中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR1，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连，且所述H-FR1包含SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列。
11.根据实施方案10所述的分离的抗原结合的蛋白，其中所述H-FR1包含SEQ IDNo:4，8，13，34，36，51，60，77和79中任一项所示的氨基酸序列。
12.根据实施方案6-11中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR2，所述H-FR2位于所述HCDR1和所述HCDR2之间，且所述H-FR2包含SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列。
13.根据实施方案12所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR2包含SEQ ID No:5，9，12，14，25，37，63，64，66，78和80中任一项所示的氨基酸序列。
14.根据实施方案4-13中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR3，所述H-FR3位于所述HCDR2和所述HCDR3之间，且所述H-FR3包含SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列。
15.根据实施方案14所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR3包含SEQ ID No:6，10，15，35，38，39，40，61，65和67中任一项所示的氨基酸序列。
16.根据实施方案2-15中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR4，所述H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接相连，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列。
17.根据实施方案16所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR4包含SEQ ID No:7，11，16和62中任一项所示的氨基酸序列。
18.根据实施方案1-17中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1包含SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQID NO:90所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列。
19.根据实施方案1-18中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1包含SEQ ID No:4，8，13，34，36，51，60，77和79中任一项所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID No:5，9，12，14，25，37，63，64，66，78和80中任一项所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID No:6，10，15，35，38，39，40，61，65和67中任一项所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID No:7，11，16和62中任一项所示的氨基酸序列。
20.根据实施方案1-19中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4包含选自下述任意一组的氨基酸序列：
1)所述H-FR1包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ IDNo.7所示的氨基酸序列；
2)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；
3)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；
4)所述H-FR1包含SEQ ID No.13所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:16所示的氨基酸序列；
5)所述H-FR1包含SEQ ID No.13所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID No.12所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID No.15所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID No.16所示的氨基酸序列；
6)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:7所示的氨基酸序列；
7)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；
8)所述H-FR1包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:7所示的氨基酸序列；
9)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；
10)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
11)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
12)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
13)所述H-FR1包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
14)所述H-FR1包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列；
15)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；
16)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
17)所述H-FR1包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
18)所述H-FR1包含SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
19)所述H-FR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQID NO:11所示的氨基酸序列；以及
20)所述H-FR1包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，所述H-FR2包含SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列，所述H-FR3包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。
21.根据实施方案1-20中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含重链可变区VH，所述VH包含SEQ ID No:17～21，26～30，41～47，52～56，68～74和81～86中任一项所示的氨基酸序列。
22.根据实施方案1-21中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含重链恒定区，且所述重链恒定区包含Fc片段。
23.根据实施方案22所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述Fc片段包含SEQ IDNO:87所示的氨基酸序列。
24.根据实施方案1-23中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体或其抗原结合片段。
25.根据实施方案24所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv，VHH和/或dAb。
26.根据实施方案24-25中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体选自下组：单克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。
27.根据实施方案1-26中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其为单域抗体。
28.根据实施方案1-27中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：
1)能够中和SARS-CoV-2S蛋白及其突变体；
2)在ELISA实验中，以小于或等于0.013μg/ml的EC50值与SARS-CoV-2S蛋白结合；以及
3)能够阻断S1-RBD及其常见突变体蛋白与人ACE2蛋白的结合。
29.多肽，其包含实施方案1-28中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。
30.免疫缀合物，其包含实施方案1-28中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或实施方案29所述的多肽。
31.分离的一种或多种核酸分子，其编码实施方案1-28中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或实施方案29所述的多肽。
32.载体，其包含实施方案31所述的分离的核酸分子。
33.细胞，其包含实施方案1-28中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，实施方案29所述的多肽，实施方案30所述的免疫缀合物，实施方案31所述的分离的核酸分子和/或实施方案32所述的载体。
34.制备实施方案1-28中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或实施方案29所述的多肽的方法，所述方法包括在使得实施方案1-28中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或实施方案29所述的多肽表达的条件下，培养实施方案33所述的细胞。
35.药物组合物，其包含实施方案1-28中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，实施方案29所述的多肽，实施方案30所述的免疫缀合物，实施方案31所述的分离的核酸分子，实施方案32所述的载体，和/或实施方案33所述的细胞，以及任选地药学上可接受的佐剂和/或赋形剂。
36.一种用于检测或测定SARS-CoV-2的方法，所述方法包括使用实施方案1-28中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或实施方案29所述的多肽。
37.一种用于检测或测定SARS-CoV-2的试剂盒，所述试剂盒包括实施方案1-28中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或实施方案29所述的多肽。
38.实施方案1-28中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，实施方案29所述的多肽，实施方案30所述的免疫缀合物，实施方案31所述的分离的核酸分子，实施方案32所述的载体，实施方案33所述的细胞和/或实施方案35所述的药物组合物在制备预防和/或治疗疾病和/或病症的药物中的用途。
39.根据实施方案38所述的用途，其中所述疾病和/或病症由SARS-CoV-2或其突变体引起或介导。
不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的抗原结合蛋白、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。
实施例
实施例1：靶向SARS-CoV-2S1-RBD的单域抗体的制备
1-1重组表达SARS-CoV-2的S1-RBD蛋白并用于免疫羊驼
重组表达SARS-CoV-2的S1-RBD蛋白并用纯化的S1-RBD蛋白免疫1只Alpaca羊驼，皮下多点免疫4次免疫流程如下表1所示。冲击免疫3天后采集50mL外周血，用于单个B细胞抗体序列克隆。
表1皮下多点免疫流程表
1-2单域抗体文库的构建及筛选
提取免疫羊驼100ml外周血淋巴细胞，使用Qigen公司试剂盒提取细胞总RNA。利用反转录试剂盒(Qigen)将RNA反转录成cDNA。利用PCR扩增编码抗体的可变区核酸片段。并使用限制性内切酶SfilI(Takara)酶切PCR产物及克隆载体pComb3Xss，利用T4连接酶将克隆载体连接至噬菌体载体pComb3Xss，连接产物随后通过电转化至大肠杆菌电转感受态细胞Top10中，并于LB液体培养基中振荡培养，加入辅助噬菌体超感染扩增噬菌体，构建单域抗体噬菌体文库。
1-3针对S1-RBD的单域抗体的淘选
利用S1-RBD蛋白包被96孔板，4℃放置过夜。第二天以5％的BSA进行封闭，随后加入100μl单域抗体噬菌体文库。室温作用1h，用PBST淘洗去除非特异性结合的噬菌体。最后用三乙氨基解离与S1-RBD特异性结合的噬菌体，并感染处于对数期生长的大肠杆菌TG1，并扩增噬菌体用于下一轮的筛选。相同筛选过程重复3-4轮。经过该过程，与S1-RBD蛋白特异性结合的噬菌体逐渐被富集。
1-4酶联免疫方法(ELISA)筛选特异性噬菌体抗体克隆
将经过淘选富集的特异性结合S1-RBD的噬菌体感染大肠杆菌，并进一步涂布于LB平板。随机挑选单个单菌落进行培养，扩增噬菌体。用S1-RBD蛋白包被96孔板，该板随后用5％BSA封闭，充分洗涤后，分别加入上述扩增后的噬菌体，室温反应2小时；洗涤之后加入HRP标记抗噬菌体抗体，室温反应l小时；洗涤之后加入TMB显色液，450nm波长读取吸收值(A450)。当样品孔A450值大于对照孔3倍以上时，判为阳性克隆。将阳性克隆孔对应的菌转移至含有100μl毫升氨苄青霉素的LB液体中培养以便提取质粒并进行测序，获得了6株特异性结合S1-RBD蛋白的单域抗体克隆的可变区(V)序列，这六株单域抗体分别命名为A04、B07、A09、B05、B08和C08。
1-5单域抗体-Fc融合白在Expi293细胞中进行表达、纯化
将测序分析所获得的单域抗体克隆A04、B07、A09、B05、C08和B08的可变区(V区)编码DNA序列融合人免疫球蛋白γ1(IgG1)的Fc片段并亚克隆至表达载体PCDNA3.4。Fc的氨基酸序列如SEQ ID NO:87所示。利用PEI转染Expi293细胞进行重组表达，7天后，收集细胞上清液，并利用Protein A磁珠进行纯化。最后获得单域抗体-Fc融合蛋白(S1-RBD抗原结合蛋白)，分别为A04-Fc、B07-Fc、A09-Fc、B05-Fc、C08-Fc和B08-Fc。A04-Fc的氨基酸序列为SEQID NO:104；B07-Fc的氨基酸序列为SEQ ID NO:109；A09-Fc的氨基酸序列为SEQ ID NO:114；B05-Fc的氨基酸序列为SEQ ID NO:121；C08-Fc的氨基酸序列为SEQ ID NO:126；B08-Fc的氨基酸序列为SEQ ID NO:133。
1-6单域抗体的人源化
通过NCBI数据库比对(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)，选取与驼源抗体最接近的人germline序列为模板，对单域抗体A04、B07、A09、B05、C08和B08的V区(可变区)进行人源化，并对它们的翻译后修饰位点进行优化。分别设计获得：A04的人源化单域抗体A04VH0、A04VH1、A04VH00和A04VH11；B07的人源化单域抗体B07VH0、B07VH1、B07VH00和B07VH11；A09的人源化单域抗体A09VH0、A09VH1、A09VH00、A09VH11、A09VH000和A09VH111；B05的人源化单域抗体B05VH0、B05VH1、B05VH00和B05VH11；C08的人源化单域抗体C08VH0、C08VH1、C08VH00、C08VH11、C08VH000和C08VH111；B08的人源化单域抗体B08VH0、B08VH1、B08VH00、B08VH11和B08VH000。将以上各人源化单域抗体的可变区(V区)编码DNA序列分别与人免疫球蛋白γ1(IgG1)的Fc片段融合并亚克隆至表达载体PCDNA3.4。Fc的氨基酸序列如SEQ ID NO:87所示。利用PEI转染Expi293细胞进行重组表达，7天后，收集细胞上清液，并利用ProteinA磁珠进行纯化，最后获得到单域抗体-Fc融合蛋白，分别为A04VH0-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:105)，A04VH1-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:106)，A04VH00-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:107)，A04VH11-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:108)；B07VH0-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:110)，B07VH1-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:111)，B07VH00-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:112)，B07VH11-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:113)；A09VH0-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:115)，A09VH1-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:116)，A09VH00-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:117)，A09VH11-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:118)，A09VH000-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:119)，A09VH111-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:120)；B05VH0-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:122)，B05VH1-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:123)，B05VH00-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:124)，B05VH11-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:125)；C08VH0-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:127)，C08VH1-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:128)，C08VH00-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:129)，C08VH11-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:130)，C08VH000-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:131)，C08VH111-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:132)；B08VH0-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:134)，B08VH1-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:135)，B08VH00-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:136)，B08VH11-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:137)，B08VH000-Fc(氨基酸序列为SEQ ID NO:138)。
实施例2：ELISA方法检测单域抗体-Fc融合蛋白与S1-RBD蛋白结合
将S1-RBD蛋白用PBS缓冲液稀释至1μg/ml，每孔100μl包被于96孔板(Thermo)4℃孵育过夜；次日取出96孔板，用PBST(含0.5％吐温20的PBS缓冲液)洗板，每次浸润1min后彻底甩干残余水分。样品孔中分别加入200μl的含5％ BSA PBST，置于37℃封闭1h；然后用PBST洗板，并甩干孔中水分。分别向96孔板中加入各单域抗体-Fc融合蛋白或对照抗体Etesevimab样品100μl 4℃孵育过夜。取出96孔板后用PBST洗板后每孔加入二抗100μl HRP抗体，并置于37℃孵育1h。再用PBST洗5次，每孔加入100μl Substrate Solution(Invitrogen)，于37℃孵育10min；每孔加入2mol盐酸50μl终止反应后于酶标仪(Multiskcin FC，Thermo)450nm波长处检测吸光度。
结果如图1所示，位于图片顶部的线为各单域抗体-Fc融合蛋白结合情况，其下部第一条为对照抗体Etesevimab结合情况。可以看出，各单域抗体-Fc融合蛋白对S1-RBD蛋白都有较强的结合活性，并且B07-Fc(EC50＝0.005μg/ml)、A04-Fc(EC50＝0.007μg/ml)、B05-Fc(EC50＝0.003μg/ml)、A09-Fc(EC50＝0.006μg/ml)、B08-Fc(EC50＝0.002μg/ml)、C08-Fc(EC50＝0.007μg/ml)结合活性都强于对照抗体Etesevimab(EC50＝0.014μg/ml)。此外，A04-Fc的人源化单域抗体-Fc融合蛋白A04VH0-Fc、A04VH1-Fc、A04VH00-Fc和A04VH11-Fc显示出与A04-Fc相似的与S1-RBD蛋白的结合活性；B07-Fc的人源化单域抗体-Fc融合蛋白B07VH0-Fc、B07VH1-Fc、B07VH00-Fc、B07VH11-Fc显示出与B07-Fc相似的与S1-RBD蛋白的结合活性；A09-Fc的人源化单域抗体-Fc融合蛋白A09VH0-Fc、A09VH1-Fc、A09VH00-Fc、A09VH11-Fc、A09VH000-Fc、A09VH111-Fc显示出与A09-Fc相似的与S1-RBD蛋白的结合活性；B05-Fc的人源化单域抗体-Fc融合蛋白B05VH0-Fc、B05VH1-Fc、B05VH00-Fc、B05VH11-Fc显示出与B05-Fc相似的与S1-RBD蛋白的结合活性；C08-Fc的人源化单域抗体-Fc融合蛋白C08VH0-Fc、C08VH1-Fc、C08VH00-Fc、C08VH11-Fc、C08VH000-Fc、C08VH111-Fc显示出与C08-Fc相似的与S1-RBD蛋白的结合活性。
实施例3：单域抗体-Fc融合蛋白阻断S1-RBD及其常见突变体蛋白与人ACE2蛋白的结合
用S1-RBD蛋白及其常见突变体蛋白包被96孔板。PBST(含0.5％吐温20的PBS缓冲液)洗涤之后，加入生物素标记ACE-2、单域抗体-Fc融合蛋白或对照抗体Etesevimab，室温孵育1h，再用PBST洗5次，每孔加入HRP标记的链霉亲和素(生工，D111054-001)，室温孵育1h。再用PBST洗5次，每孔加入100μl Substrate Solution(Invitrogen)，于37℃孵育10min；每孔加入2mol盐酸50μl终止反应后于酶标仪(Multiskcin FC，Thermo)450nm波长处检测吸光度(A450)。
结果如图2和图3所示，图2为B07-Fc、A04-Fc、B05-Fc、A09-Fc、B08-Fc、C08-Fc抗体竞争S1-RBD结合人ACE2蛋白结果，其中有六个柱形图，分别代表六种单域抗体-Fc融合蛋白，每个柱形图中有六条图柱，其中1，3，5条表示单域抗体-Fc融合蛋白结果，2，4，6条表示对比抗体结果。图3为B07-Fc、A04-Fc、B05-Fc、A09-Fc、B08-Fc、C08-Fc竞争Delta突变体(B.1.167.2)S1-RBD人ACE2蛋白结果，其中有六个柱形图，分别代表六种单域抗体-Fc融合蛋白，每个柱形图中有六条图柱，其中1，3，5条表示单域抗体-Fc融合蛋白结果，2，4，6条表示对照抗体结果。可以看出B07-Fc、A04-Fc、B05-Fc、A09-Fc、B08-Fc、C08-Fc能够竞争野生S-RBD蛋白及其Delta突变体(B.1.167.2)S-RBD与人ACE2结合，并且竞争活性均显著优于对照抗体Etesevimab(P<0.05)。A04-Fc的人源化单域抗体-Fc融合蛋白A04VH0-Fc、A04VH1-Fc、A04VH00-Fc和A04VH11-Fc显示出与A04-Fc相似的竞争野生S-RBD蛋白及其Delta突变体(B.1.167.2)S-RBD与人ACE2结合的活性；B07-Fc的人源化单域抗体-Fc融合蛋白B07VH0-Fc、B07VH1-Fc、B07VH00-Fc、B07VH11-Fc显示出与B07-Fc相似的竞争野生S-RBD蛋白及其Delta突变体(B.1.167.2)S-RBD与人ACE2结合的活性；A09-Fc的人源化单域抗体-Fc融合蛋白A09VH0-Fc、A09VH1-Fc、A09VH00-Fc、A09VH11-Fc、A09VH000-Fc、A09VH111-Fc显示出与A09-Fc相似的竞争野生S-RBD蛋白及其Delta突变体(B.1.167.2)S-RBD与人ACE2结合的活性；B05-Fc的人源化单域抗体-Fc融合蛋白B05VH0-Fc、B05VH1-Fc、B05VH00-Fc、B05VH11-Fc显示出与B05-Fc相似的竞争野生S-RBD蛋白及其Delta突变体(B.1.167.2)S-RBD与人ACE2结合的活性；C08-Fc的人源化单域抗体-Fc融合蛋白C08VH0-Fc、C08VH1-Fc、C08VH00-Fc、C08VH11-Fc、C08VH000-Fc、C08VH111-Fc显示出与C08-Fc相似的竞争野生S-RBD蛋白及其Delta突变体(B.1.167.2)S-RBD与人ACE2结合的活性。
实施例4：单域抗体-Fc融合蛋白中和SARS-COV-2假病毒实验
将单域抗体-Fc融合蛋白或对照抗体Etesevimab稀释至10μg/ml，进行3倍梯度稀释，稀释8个点，实验体系为：样本-假病毒混合液50μl/孔，37℃中和1h后，加入HEK293-ACE2细胞2×104cells/孔(50μl)，37℃培养48h后用Bio-LiteTM Luciferase Assay System进行检测。
结果如图4所示，单域抗体-Fc融合蛋白B07-Fc、A04-Fc、B05-Fc、A09-Fc能够阻断SARS-COV-2假病毒感染HEK293-ACE2细胞，具有明显的病毒中和活性；并且B07-Fc(IC50＝0.033μg/ml)、A04-Fc(IC50＝0.065μg/ml)、B05-Fc(IC50＝0.012μg/ml)、A09-Fc(IC50＝0.001μg/ml)对SARS-COV-2假病毒的中和作用优于对照抗体Etesevimab(IC50＝0.14μg/ml)。
结果如图5所示，单域抗体B07-Fc、A04-Fc、B05-Fc、A09-Fc、B08-Fc、C08-Fc能够阻断Delta突变体(B.1.167.2)SARS-COV-2假病毒感染HEK293-ACE2细胞，具有明显的中和作用。并且B07-Fc(IC50＝0.12μg/ml)、A04-Fc(IC50＝0.22μg/ml)、B05-Fc(IC50＝0.016μg/ml)、A09-Fc(IC50＝0.015μg/ml)、B08-Fc(IC50＝0.28μg/ml)、C08-Fc(IC50＝0.27μg/ml)的中和作用优于对照抗体Etesevimab(IC50＝0.34μg/ml)。
前述详细说明是以解释和举例的方式提供的，并非要限制所附权利要求的范围。目前本申请所列举的实施方式的多种变化对本领域普通技术人员来说是显而易见的，且保留在所附的权利要求和其等同方式的范围内。
Claims (10)
1.分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链可变区VH中的至少一个CDR，所述VH包含SEQID No:98-103中任一项所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述HCDR1，HCDR2和HCDR3包含选自下述任意一组的氨基酸序列：
1)所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；
2)所述HCDR1包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列；
3)所述HCDR1包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列；
4)所述HCDR1包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列；
5)所述HCDR1包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列；以及
6)所述HCDR1包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含重链可变区VH，所述VH包含SEQ ID No:17～21，26～30，41～47，52～56，68～74和81～86中任一项所示的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其为单域抗体。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：
1)能够中和SARS-CoV-2S蛋白及其突变体；
2)在ELISA实验中，以小于或等于0.013μg/ml的EC50值与SARS-CoV-2S蛋白结合；以及
3)能够阻断S1-RBD及其常见突变体蛋白与人ACE2蛋白的结合。
6.多肽，其包含权利要求1-5中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。
7.免疫缀合物，其包含权利要求1-5中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或权利要求6所述的多肽。
8.分离的核酸分子，其编码权利要求1-5中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或权利要求6所述的多肽。
9.药物组合物，其包含权利要求1-5中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，权利要求6所述的多肽，权利要求7所述的免疫缀合物，和/或权利要求8所述的分离的核酸分子，以及任选地药学上可接受的佐剂和/或赋形剂。
10.权利要求1-5中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，权利要求6所述的多肽，权利要求7所述的免疫缀合物，和/或权利要求8所述的分离的核酸分子，和/或权利要求9所述的药物组合物在制备预防和/或治疗疾病和/或病症的药物中的用途。
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