CN115974715A - 牡丹籽油神经酰胺及其合成方法与用途 - Google Patents
牡丹籽油神经酰胺及其合成方法与用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115974715A CN115974715A CN202310051559.6A CN202310051559A CN115974715A CN 115974715 A CN115974715 A CN 115974715A CN 202310051559 A CN202310051559 A CN 202310051559A CN 115974715 A CN115974715 A CN 115974715A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ceramide
- seed oil
- peony seed
- acid
- fatty acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 title claims abstract description 157
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 title claims abstract description 146
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 title claims abstract description 146
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 146
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 146
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 title claims abstract description 108
- 235000006484 Paeonia officinalis Nutrition 0.000 title claims abstract description 107
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 title description 3
- 244000170916 Paeonia officinalis Species 0.000 title 1
- 241000736199 Paeonia Species 0.000 claims abstract description 106
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims abstract description 49
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims abstract description 48
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims abstract description 48
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims abstract description 48
- WWUZIQQURGPMPG-KRWOKUGFSA-N sphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C\[C@@H](O)[C@@H](N)CO WWUZIQQURGPMPG-KRWOKUGFSA-N 0.000 claims abstract description 12
- AERBNCYCJBRYDG-UHFFFAOYSA-N D-ribo-phytosphingosine Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(N)CO AERBNCYCJBRYDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- OTKJDMGTUTTYMP-UHFFFAOYSA-N dihydrosphingosine Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(N)CO OTKJDMGTUTTYMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 230000035876 healing Effects 0.000 claims abstract description 11
- 229940033329 phytosphingosine Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 150000003410 sphingosines Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N (-)-D-erythro-Sphingosine Natural products CCCCCCCCCCCCCC=CC(O)C(N)CO WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- AERBNCYCJBRYDG-KSZLIROESA-N phytosphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](N)CO AERBNCYCJBRYDG-KSZLIROESA-N 0.000 claims abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims abstract description 5
- OTKJDMGTUTTYMP-ROUUACIJSA-N Safingol ( L-threo-sphinganine) Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@H](O)[C@@H](N)CO OTKJDMGTUTTYMP-ROUUACIJSA-N 0.000 claims abstract 2
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 claims description 34
- -1 sphingoid compound Chemical class 0.000 claims description 34
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 24
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 claims description 18
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 claims description 17
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 claims description 17
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 claims description 17
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 claims description 13
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 claims description 13
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 claims description 11
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 claims description 11
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 11
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 claims description 10
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 9
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 9
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 9
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical group Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims description 8
- 230000008591 skin barrier function Effects 0.000 claims description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 8
- 206010051246 Photodermatosis Diseases 0.000 claims description 7
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 7
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 claims description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 claims description 6
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 claims description 6
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 claims description 6
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 claims description 6
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 claims description 5
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 claims description 4
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 claims description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 6
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 abstract description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 abstract description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 20
- 239000000047 product Substances 0.000 description 18
- VKOBVWXKNCXXDE-UHFFFAOYSA-N icosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O VKOBVWXKNCXXDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 14
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 14
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 13
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 150000001783 ceramides Chemical class 0.000 description 11
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 11
- 101001013150 Homo sapiens Interstitial collagenase Proteins 0.000 description 10
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 10
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 8
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 8
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 7
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- OTKJDMGTUTTYMP-ZWKOTPCHSA-N sphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@@H](N)CO OTKJDMGTUTTYMP-ZWKOTPCHSA-N 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UILPJVPSNHJFIK-UHFFFAOYSA-N Paeonol Chemical compound COC1=CC=C(C(C)=O)C(O)=C1 UILPJVPSNHJFIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 6
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 5
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 5
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- ATGQXSBKTQANOH-UWVGARPKSA-N N-oleoylphytosphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)NC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC ATGQXSBKTQANOH-UWVGARPKSA-N 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 3
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 3
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 3
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 3
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- YLTGFGDODHXMFB-UHFFFAOYSA-N isoacetovanillon Natural products COC1=CC=C(C(C)=O)C=C1O YLTGFGDODHXMFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- MLIBGOFSXXWRIY-UHFFFAOYSA-N paeonol Natural products COC1=CC=C(O)C(C(C)=O)=C1 MLIBGOFSXXWRIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 3
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 3
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 3
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 3
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 3
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 3
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 3
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- FIXXCHAZHOXPQG-ZNWYJMOFSA-N (E,2S,3R)-2-aminooctadec-4-ene-1,3-diol octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCCCCCCC\C=C\[C@@H](O)[C@@H](N)CO FIXXCHAZHOXPQG-ZNWYJMOFSA-N 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 108010016113 Matrix Metalloproteinase 1 Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N Thiazole Chemical compound C1=CSC=N1 FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 2
- 229940099417 ceramide 2 Drugs 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N diphenyl-(2,4,6-trinitrophenyl)iminoazanium Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1N=[N+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000036564 melanin content Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 230000008845 photoaging Effects 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- 102000010909 Monoamine Oxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010062431 Monoamine oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000002849 elastaseinhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000686 essence Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000003961 penetration enhancing agent Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
本发明属于生物医药技术领域，公开了牡丹籽油神经酰胺，其由牡丹籽油脂肪酸与鞘氨醇类化合物反应得到，所述鞘氨醇类化合物选自鞘氨醇、植物鞘氨醇、二氢鞘氨醇，本方案还公开了牡丹籽油神经酰胺的合成方法与用途。牡丹籽油神经酰胺在皮肤天然屏障的修复、抗炎、组织愈合、抗衰老等方面表现出优异性能，在化妆品、保健品、生物医药等领域有着广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及牡丹籽油神经酰胺及其合成方法与用途。
背景技术
神经酰胺(Ceramide，又称分子钉)天然存在于皮肤中，是皮肤屏障(角质层)非常重要的组成部分，含量高达40～50wt％，神经酰胺是一类由鞘氨醇类长链碱基与脂肪酸组成的神经鞘氨脂质，其中的鞘氨醇部分、脂肪酸部分的碳链长度、不饱和度和羟基数目都是可以变化的，神经酰胺代表了一类化合物。神经酰胺在调控皮肤屏障功能，恢复皮肤水分以及增强皮肤角质细胞之间的粘着力等方面表现出优异的性能。
由于神经酰胺的重要性，许多化妆品和制药公司正在研究、开发相应的产品。天然植物来源的神经酰胺因其更加可持续和更加环保的原料来源，以及与皮肤神经酰胺成分相近的特性，能形成有效的皮肤屏障防止水分流失，并对抗外部损坏，将可能成为下一代环境友好、安全可靠的神经酰胺产品。
牡丹籽油是从牡丹籽中提取的一种新型木本坚果植物油，牡丹籽油含有丰富的α-亚麻酸、油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸，含量是其他常用植物油的几十倍；除此之外，牡丹籽油中还含有植物甾醇、维生素E、丹皮酚、皂苷、多糖、黄酮等100多种具有生理活性的营养物质。牡丹籽油含油量多，营养价值高，具有抗炎、抗过敏、抗氧化、促进皮肤新陈代谢的功效；研究表明，它可以降低单胺氧化酶活性，促进抗氧化酶表达，促进表皮细胞再生，起到延缓皮肤衰老的作用。在传统医学中，牡丹籽油已被用于降血脂、降血压、降胆固醇，预防心血管疾病。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用植物来源的牡丹籽油脂肪酸合成得到的神经酰胺。
本发明的另一目的是提供牡丹籽油神经酰胺的合成方法，其利用天然植物来源且易得的牡丹籽油油脂或者牡丹籽油脂肪酸作为原料。
本发明的另一目的是提供牡丹籽油神经酰胺的用途。
为达到上述目的之一，本发明采用以下技术方案：
本发明的第一方面，牡丹籽油神经酰胺，其由牡丹籽油脂肪酸与鞘氨醇类化合物反应得到，所述鞘氨醇类化合物选自鞘氨醇、植物鞘氨醇、二氢鞘氨醇。
反应即可以是化学合成反应(如下文详述)，也可采用微生物发酵法，即应用雪氏毕赤酵母或酿酒酵母，在一定环境下发酵得到鞘氨醇类化合物，然后加入脂肪酸，最终得到神经酰胺；或者以牡丹籽油为原料，选用合适的菌株，进行发酵得到牡丹籽油神经酰胺。
鞘氨醇指2-氨基-4-十八烯-1,3-二醇，植物鞘氨醇指2-氨基-十八烷-1，3，4-三醇，二氢鞘氨醇指2-氨基-十八烷-1，3-二醇。
进一步地，所述牡丹籽油脂肪酸由牡丹籽油油脂水解得到。
进一步地，所述牡丹籽油脂肪酸含有35～70wt％α-亚麻酸。
进一步地，所述牡丹籽油脂肪酸含有15～40wt％亚油酸。
进一步地，所述牡丹籽油脂肪酸含有10～30wt％油酸。
进一步地，所述牡丹籽油脂肪酸含有0.1～5wt％棕榈酸。
进一步地，所述牡丹籽油脂肪酸含有0.1～5wt％硬脂酸。
此外，牡丹籽油脂肪酸还含有0～1wt％花生酸。
牡丹籽油脂肪酸的组成为：35～70wt％α-亚麻酸、15～40wt％亚油酸、10～30wt％油酸、0.1～5wt％棕榈酸、0.1～5wt％硬脂酸、0～1wt％花生酸。
牡丹籽油脂肪酸的主要成分为α-亚麻酸，其他的脂肪酸包括亚油酸、油酸、棕榈酸、硬脂酸，这些是必要组分，受植物品种、土壤、气候、产地、采摘季节、提取过程的影响，各组分的含量会有所不同，而花生酸不一定含有，是可选组分或者非必要组分。
牡丹籽油神经酰胺，其组成包括：α-亚麻酸神经酰胺，亚油酸神经酰胺，油酸神经酰胺，棕榈酸神经酰胺，硬脂酸神经酰胺；因为脂肪酸都会参与相同的反应，反应后神经酰胺的质量占比变化不大，所以与牡丹籽油脂肪酸的组成类似，牡丹籽油神经酰胺的组成为：35～70wt％α-亚麻酸神经酰胺，15～40wt％亚油酸神经酰胺，10～30wt％油酸神经酰胺，0.1～5wt％棕榈酸神经酰胺，0.1～5wt％硬脂酸神经酰胺。各组分的含量因牡丹籽油脂肪酸或油脂中各脂肪酸的含量不同而存在差异。此外，牡丹籽油神经酰胺还包括花生酸与鞘氨醇类化合物反应得到的神经酰胺，即还包括0～1wt％花生酸神经酰胺。牡丹籽油神经酰胺还包括植物甾醇、维生素E、丹皮酚、皂苷、多糖、黄酮等存在于牡丹籽油脂肪酸中但是不与鞘氨醇类化合物反应的化合物。
牡丹籽油神经酰胺，其组成包括：α-亚麻酸神经酰胺，亚油酸神经酰胺，油酸神经酰胺；α-亚麻酸神经酰胺占比35～70wt％，亚油酸神经酰胺占比15～40wt％，油酸神经酰胺占比10～30wt％。
进一步地，牡丹籽油神经酰胺包括棕榈酸神经酰胺，棕榈酸神经酰胺占比0.1～5wt％。
进一步地，牡丹籽油神经酰胺包括硬脂酸神经酰胺，硬脂酸神经酰胺占比0.1～5wt％。
进一步地，牡丹籽油神经酰胺包括不超过1wt％的花生酸神经酰胺，尤其是0.1～1wt％花生酸神经酰胺。
α-亚麻酸神经酰胺是α-亚麻酸与鞘氨醇类化合物缩合反应得到，包括α-亚麻酸植物鞘氨醇神经酰胺、α-亚麻酸鞘氨醇神经酰胺、α-亚麻酸二氢鞘氨醇神经酰胺；亚油酸神经酰胺是亚油酸与鞘氨醇类化合物缩合反应得到，包括亚油酸植物鞘氨醇神经酰胺、亚油酸鞘氨醇神经酰胺、亚油酸二氢鞘氨醇神经酰胺；油酸神经酰胺是油酸与鞘氨醇类化合物缩合反应得到，包括油酸植物鞘氨醇神经酰胺、油酸鞘氨醇神经酰胺、油酸二氢鞘氨醇神经酰胺；棕榈酸神经酰胺、硬脂酸神经酰胺、花生酸神经酰胺等以此类推。
本发明的第二方面，牡丹籽油神经酰胺的合成方法，包括以下步骤：
在缩合剂、有机碱条件下，牡丹籽油脂肪酸与鞘氨醇类化合物反应，所述缩合剂为EDCI，所述有机碱为Et3N。
进一步地，所述牡丹籽油脂肪酸、鞘氨醇类化合物、EDCI、Et3N的摩尔比为1：(1～1.5)：(1～2)：(1～2)，所述反应的溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙腈中的至少一种。
在市场上购买的牡丹籽油一般是油脂形态，需要水解成牡丹籽油脂肪酸，因此还包括以下步骤：
牡丹籽油油脂通过皂化反应水解得到牡丹籽油脂肪酸。
进一步地，所述皂化反应是牡丹籽油油脂在氢氧化钾溶液中水解。
进一步地，所述牡丹籽油油脂与氢氧化钾的质量比为1：(1～2)。
本发明的第三方面，牡丹籽油神经酰胺在化妆品、药品、膳食品或保健品中的用途。
进一步地，所述牡丹籽油神经酰胺具有皮肤屏障修复、组织愈合、抗衰老、抗炎、抗光老化、抗氧化、促进胶原合成、维持弹性蛋白活力、美白功效中的至少一种。
一种组合物，包括牡丹籽油神经酰胺，所述组合物具有皮肤屏障修复、组织愈合、抗衰老、抗炎、抗光老化、抗氧化、促进胶原合成、维持弹性蛋白活力、美白功效中的至少一种。
该组合物含有可接受的辅料，包括增溶剂、防腐剂、抗氧剂、pH调节剂、促渗剂、脂质体、保湿剂、增稠剂、螯合剂、肤感调节剂、表面活性剂、乳化剂、香精及色素中的一种或多种；该组合物为霜剂、乳剂、溶液剂、膜剂、气雾或喷雾形式。
本发明具有以下有益效果：
牡丹籽油脂肪酸属于天然形成的脂肪酸，最主要的成分是饱和脂肪酸——α-亚麻酸，此外还含有亚油酸、油酸等，其与天然存在于皮肤中的鞘氨醇类化合物，经温和反应制备得到牡丹籽油神经酰胺，在皮肤天然屏障的修复、抗氧化、抗衰老等方面表现出优异性能，在化妆品、保健品、生物医药等领域有着广泛的应用前景。
1、与单一的神经酰胺相比效果更好。不同的神经酰胺，因其结构的差异，功效也会存在差异，单一结构的神经酰胺一般难以具备全面的效果。本方案基于仿生的思路，利用天然来源的牡丹籽油油脂或脂肪酸作为原料，合成复合的神经酰胺，以弥补不同神经酰胺功效的差异，牡丹籽油中的微量脂肪酸可以形成微量神经酰胺，起到功效补充的作用。
2、与复配的神经酰胺相比效果更好。除了脂肪酸(或油脂)，牡丹籽油还含有植物甾醇、维生素E、丹皮酚、皂苷、多糖、黄酮等100多种具有生理活性的营养物质，这些物质营养价值高，具备抗炎、抗过敏、抗氧化、促进皮肤新陈代谢的功效，用牡丹籽油合成的神经酰胺，与牡丹籽油中含有的其它活性成分具有协同增效的作用，相比按照类似比例复配的神经酰胺，具有更好的效果。
3、成本更低。本发明的方法快速得到多种神经酰胺复配的组合物，植物源的牡丹籽油油脂或其脂肪酸来源广泛、易于商业化获取、成本较低，更加环保经济，有别于将不同的单一神经酰胺混合复配的思路，单一成分的脂肪酸不仅原料价格高(尤其是α-亚麻酸的价格特别昂贵)，而且需要分别生产不同的神经酰胺，然后再进行复配，增加了制备成本。
4、合成方法简单。本发明的方法可以采用化学合成，实现一步制备多种神经酰胺，也可以使用微生物发酵法。
附图说明
图1、2为实施例4细胞增殖活力测试结果柱形图；
图3为实施例5细胞迁移能力测试结果；
图4、5为实施例6弹性蛋白酶抑制率柱形图；
图6为实施例7抗炎修复功效检测IL-6因子表达量柱形图；
图7、8为实施例8抗光老化测试MMP1表达量柱形图；
图9为实施例9抗氧化性测试DPPH自由基清除率柱形图；
图10为实施例10美白活性测试黑色素含量柱形图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。
EDCI指1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺，Et3N指三乙胺。硅胶柱层析使用青岛海洋硅胶(粒径0.040-0.063mm)。薄层色谱分析(TLC)使用60F254硅胶板，TLC显色采用UV光(254nm)或碘。
实施例1
牡丹籽油脂肪酸和植物鞘氨醇合成神经酰胺
第一步：将40g牡丹籽油油脂溶于50mL四氢呋喃，冰浴下冷却，滴加100mL氢氧化钾(25wt％)溶液，滴加完毕后升至室温反应，至TLC检测反应完毕。
后处理：加入稀盐酸(3N)调节反应体系的pH值到3，加入150mL乙酸乙酯萃取水相，加入100mL饱和食盐水洗一次，有机相加入无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到31.2g牡丹籽油脂肪酸。
第二步：将牡丹籽油脂肪酸(50mmol，以主成分脂肪酸计)、EDCI(60mmol)、Et3N(60mmol)加入250mL圆底烧瓶中，再加入100mL二氯甲烷，随后在室温条件下搅拌1小时，随后将植物鞘氨醇(60mmol)加入到反应体系中，在室温条件下搅拌，至TLC检测反应完毕。
后处理：加入水淬灭反应，分离有机层，干燥，过滤并真空浓缩后经溶剂洗涤得到牡丹籽油神经酰胺，产物经HPLC分析，HPLC色谱条件：使用岛津高效液相色谱仪(LC-2030C3D Plus)，用Innoval ODS-2 4.6*250mm，5μm色谱柱，柱温：30℃，进样体积：10μL，流速：1.0mL/min，蒸发温度：40℃，载气流速：2.5L/min，流动相：100％甲醇。
各成分HPLC的保留时间为：α-亚麻酸-植物鞘氨醇神经酰胺8.3min，亚油酸-植物鞘氨醇神经酰胺9.5min，棕榈酸-植物鞘氨醇神经酰胺10.7min，油酸-植物鞘氨醇神经酰胺11.3min，硬脂酸-植物鞘氨醇神经酰胺13.9min。
所得产物经高效液相色谱分析，α-亚麻酸-植物鞘氨醇神经酰胺、亚油酸-植物鞘氨醇神经酰胺、油酸-植物鞘氨醇神经酰胺、棕榈酸-植物鞘氨醇神经酰胺、硬脂酸-植物鞘氨醇神经酰胺的含量依次为66％、15％、11％、2％、2％，其余为其他成分，含量较少。
实施例2
牡丹籽油脂肪酸和鞘氨醇合成神经酰胺
第一步：将40g牡丹籽油油脂溶于50mL四氢呋喃，冰浴下冷却，滴加100mL氢氧化钾(25wt％)溶液，滴加完毕后升至室温反应，至TLC检测反应完毕。
后处理：加入稀盐酸(3N)调节反应体系的pH值到3，加入150mL乙酸乙酯萃取水相，加入100mL饱和食盐水洗一次，有机相加入无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到31.7g牡丹籽油脂肪酸。
第二步：将牡丹籽油脂肪酸(50mmol，以主成分脂肪酸计)、EDCI(70mmol)、Et3N(70mmol)加入250mL圆底烧瓶中，再加入100mL二氯甲烷，随后在室温条件下搅拌1小时，随后将鞘氨醇(65mmol)加入到反应体系中，在室温条件下搅拌，至TLC检测反应完毕。
后处理：加入水淬灭反应，分离有机层，干燥，过滤并真空浓缩后经溶剂洗涤得到牡丹籽油神经酰胺，产物经HPLC分析，HPLC色谱条件：使用岛津高效液相色谱仪(LC-2030C3D Plus)，用Innoval ODS-2 4.6*250mm，5μm色谱柱，柱温：30℃，进样体积：10μL，流速：1.0mL/min，蒸发温度：40℃，载气流速：2.5L/min，流动相：100％甲醇。
各成分HPLC的保留时间为：α-亚麻酸-鞘氨醇神经酰胺7.8min，亚油酸-鞘氨醇神经酰胺8.7min，油酸-鞘氨醇神经酰胺10.1min，棕榈酸-鞘氨醇神经酰胺10.4min，硬脂酸-鞘氨醇神经酰胺13.5min，花生酸-鞘氨醇神经酰胺17.8min。
所得产物经高效液相色谱分析，α-亚麻酸-鞘氨醇神经酰胺、亚油酸-鞘氨醇神经酰胺、油酸-鞘氨醇神经酰胺、棕榈酸-鞘氨醇神经酰胺、硬脂酸-鞘氨醇神经酰胺、花生酸-鞘氨醇神经酰胺的含量依次为38％、21％、27％、5％、4％、1％，其余为其他成分，含量较少。
实施例3
牡丹籽油脂肪酸和二氢鞘氨醇合成神经酰胺
第一步：将40g牡丹籽油油脂溶于50mL四氢呋喃，冰浴下冷却，滴加100mL氢氧化钾(25wt％)溶液，滴加完毕后升至室温反应，至TLC检测反应完毕。
后处理：加入稀盐酸(3N)调节反应体系的pH值到3，加入150mL乙酸乙酯萃取水相，加入100mL饱和食盐水洗一次，有机相加入无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到31.4g牡丹籽油脂肪酸。
第二步：将牡丹籽油脂肪酸(50mmol，以主成分脂肪酸计)、EDCI(90mmol)、Et3N(90mmol)加入250mL圆底烧瓶中，再加入100mL二氯甲烷，随后在室温条件下搅拌1小时，随后将二氢鞘氨醇(75mmol)加入到反应体系中，在室温条件下搅拌，至TLC检测反应完毕。
后处理：加入水淬灭反应，分离有机层，干燥，过滤并真空浓缩后经溶剂洗涤得到牡丹籽油神经酰胺，产物经HPLC分析，HPLC色谱条件：使用岛津高效液相色谱仪(LC-2030C3D Plus)，用Innoval ODS-2 4.6*250mm，5μm色谱柱，柱温：30℃，进样体积：10μL，流速：1.0mL/min，蒸发温度：40℃，载气流速：2.5L/min，流动相：100％甲醇。
各成分HPLC的保留时间为：α-亚麻酸-二氢鞘氨醇神经酰胺8.3min，亚油酸-二氢鞘氨醇神经酰胺9.5min，棕榈酸-二氢鞘氨醇神经酰胺10.6min，油酸-二氢鞘氨醇神经酰胺11.2min，硬脂酸-二氢鞘氨醇神经酰胺13.5min。
所得产物经高效液相色谱分析，α-亚麻酸-二氢鞘氨醇神经酰胺、亚油酸-二氢鞘氨醇神经酰胺、油酸-二氢鞘氨醇神经酰胺、棕榈酸-二氢鞘氨醇神经酰胺、硬脂酸-二氢鞘氨醇神经酰胺的含量依次为43％、34％、16％、1％、3％，其余为其他成分，含量较少。
实施例4
MTT法检测化合物对细胞的增殖活力
将HaCaT细胞以1×104个/孔的密度种于96孔板，培养箱内过夜。24h后弃去上清液，加入含不同浓度的样品(实施例1产物)的培养基100μL，继续孵育24h后除去培养基，每孔中加入100μL噻唑蓝(MTT)，测定450nm处吸光度，计算细胞存活率＝A给药孔/A空白孔×100％。
结果如图1所示，牡丹籽油神经酰胺对细胞活力有促进作用，在浓度为3.90625、7.8125、15.625、31.25、62.5、125、250、500、1000mg/L时的细胞存活率分别为109.76％、106.50％、107.43％、105.11％、105.34％、107.55％、116.61％、124.04％、125.96％。起效浓度低至4mg/L，安全浓度高至1000mg/L，浓度梯度稳定，表现出明显的促进细胞增殖效果，具有良好的组织修复能力。
按照相同的方法测试神经酰胺2对细胞的增殖活力，结果如图2所示，在浓度为3.90625、7.8125、15.625、31.25、62.5、125、250、500、1000mg/L时的细胞存活率分别为61.49％，60.03％，55.41％，54.64％，53.37％，46.95％，44.05％，40.35％，39.42％，其对细胞增殖有抑制作用，促进细胞增殖效果和组织修复潜力不如牡丹籽油神经酰胺。
实施例5
细胞迁移评估皮肤屏障修复作用
原理：当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上划痕工具制造一个空白区域，空白区域的细胞被机械力去除掉了，通过一段时间的培养，观察细胞向无细胞区域迁移的情况，通过测量细胞的迁移距离反映细胞的迁移能力。
操作步骤：
1、培养板划线。首先使用Marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5～1cm一道，横穿过孔，每孔至少穿过5条线，划线时注意线不要太粗。
2、铺细胞。在孔中加入约5×105个细胞(不同的细胞数量有所不同，根据细胞的生长快慢调整)，接种原则为过夜后融合率达到100％。
3、细胞划线。第二天用枪头，垂直于细胞平面，沿着第一天划在平板背面的线在细胞层上进行划痕(不同孔之间最好使用同一只枪头)。
4、洗细胞。划痕完成后，使用无菌PBS洗细胞3次，洗去不贴壁的细胞，即划线时划线的细胞，划线后留下的间隙清晰可见，然后更换新鲜无血清培养基。
5、细胞培养、观察。样品(实施例1产物、神经酰胺3B)用培养基稀释后(实施例1产物浓度为5mg/L，神经酰胺3B浓度为100mg/L)加入细胞培养皿，将细胞放入37℃、5wt％CO2培养箱培养，在24h后取出细胞，显微镜观察并测量划痕的宽度，并拍照，用Image J软件计算愈合率。
结果如图3所示，相比溶剂对照组，实验组的划痕宽度更窄，说明牡丹籽油神经酰胺具有更好的组织愈合能力。溶剂对照组在24h后的愈合率为32.58％，牡丹籽油神经酰胺在24h后的愈合率为93.21％，神经酰胺3B在24h后的愈合率为59.32％。本发明的化合物明显提升了细胞愈合速率，具备良好的皮肤组织修复活性，而且效果比神经酰胺3B更好。
实施例6
弹性蛋白酶抑制实验测试抗衰老作用
弹性蛋白酶抑制方法：取2mg/mL弹性蛋白酶溶液2mL，加入不同浓度样品(实施例1产物)，充分涡旋混匀，在37℃、400r/min摇床振荡20min，立即加入pH6.0的0.5mol/L磷酸盐缓冲液5mL，涡旋混匀，取适量混匀液至2mL离心管内，在9 391×g下离心10min，精密吸取上清液200μL至96孔板内，在波长495nm处酶标仪测定吸光度，同时进行400～800nm光谱扫描。
以底物加酶溶液为空白对照组，底物加酶和样品溶液为酶抑制组，底物加样品不加酶溶液作扣背景用。每组均设3复孔。抑制率(％)＝[1–(An–An′)/(A0–A0′)]×100％，式中，A0为加酶不加样品的吸光度，A0′为仅加底物不加样品和酶的吸光度，An为仅加样品溶液的吸光度，An′为加样品不加酶的吸光度。若An′>An，则表现为促进作用，促进率(％)＝[1–(An′–An)/(A0–A0′)]×100％。
结果如图4所示，牡丹籽油神经酰胺在不同浓度下对弹性蛋白酶均具有较好的抑制效果，具体而言，在0.25g/L的浓度时对弹性蛋白酶的抑制率为11.47％，在0.5g/L的浓度时对弹性蛋白酶的抑制率为23.60％，在1.0g/L的浓度时对弹性蛋白酶的抑制率为18.33％，在2.0g/L的浓度时对弹性蛋白酶的抑制率为30.00％。
按照相同的方法测试神经酰胺2对弹性蛋白酶的抑制活性，结果如图5所示，在浓度为0.25、0.5、1.0、2.0g/L时的弹性蛋白酶抑制率分别为10.12％、18.06％、28.84％和19.78％，其抑制效果不如相同浓度的牡丹籽油神经酰胺。
实施例7
LPS诱导细胞法检测抗炎修复功效
将B16小鼠黑色素瘤细胞以密度1×104个/孔种于96孔板，置于培养箱内贴壁过夜，24h后弃去上清液，加入100μL经DMEM培养基稀释的不同浓度的样品(实施例1产物)，阴性对照组为不含样品的DMEM培养基，每组3个复孔，在5wt％CO2、37℃环境中孵育。给药2h后脂多糖模型组与实验组加入10μg/mL LPS并共同孵育至24h。反应结束后取细胞上清液50μL，使用IL-6ELISA试剂盒检测细胞内IL-6基因表达。
结果如图6所示，在工作浓度为10μg/mL的LPS刺激下，IL-6水平为基础水平的10.16倍。在浓度分别为50mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L的牡丹籽油神经酰胺的作用下，IL-6因子水平显著降低，分别为LPS模型组的0.99、0.74、0.48、0.22倍，呈剂量依赖性，这证明牡丹籽油神经酰胺具有良好的抗炎效果，可以促进炎症受损皮肤的修复。
实施例8
MMP1又称间质性胶原酶、基质金属蛋白酶，属基质金属蛋白酶家族，其主要作用底物为纤维性胶原，可降解细胞外基质中的胶原纤维和明胶及改变细胞的微环境。MMP1在弹性蛋白中起着重要作用，抑制MMP1可提高成纤维细胞胶原蛋白和弹性蛋白合成，MMP活性降低可增加胶原合成速度。
将HaCaT细胞以1×105个/孔的密度种于96孔板，培养箱内过夜。24h后弃去上清液，加入含不同浓度的样品(实施例1产物)的培养基100μL，模型组不加入样品，阴性对照组为不含样品的DMEM培养基，每组3个复孔，在质量分数5％CO2、37℃环境中孵育2h后，辐射UVA或UVB紫外线。紫外线辐射光源与细胞之间的距离为15cm，UVA强度为200mJ/cm2，辐射时间为2h，UVB强度为50mJ/cm2，辐射时间为1h。结束辐射后，在培养箱内继续孵育12h。使用MMP-1ELISA试剂盒检测细胞内MMP-1基因表达。抑制率＝1-(实验组MMP1表达量/模型组MMP1表达量)×100％。
结果如图7、8所示，对于UVA，阴性对照组的MMP1表达量设为1，模型组的表达量为1.90，牡丹籽油神经酰胺在125、250、400mg/L的浓度时，相对模型组MMP1表达的抑制率为35％、49％、67％；对于UVB，阴性对照组的MMP1表达量设为1，模型组的表达量为2.33，牡丹籽油神经酰胺在125、250、400mg/L的浓度时，相对模型组MMP1表达的抑制率为40％、51％、63％。
UVA紫外线辐射后，角质形成细胞促进成纤维细胞MMP1表达升高，从而引起皮肤细胞外基质和皮肤胶原降解，导致皮肤光老化。上述结果表明，牡丹籽油神经酰胺可以抑制紫外线辐射导致的成纤维细胞产生MMP1，对防止皮肤光老化有一定作用。
实施例9
DPPH自由基清除检测抗氧化性能
DPPH是1,1-二苯-2-三硝苯肼，可以用于抗氧化实验。
将对应浓度(50、100、200、400、800mg/L)样品(实施例1产物)分别与0.1mol/LDPPH、无水乙醇溶液按1：1的体积比例混合均匀，DPPH与无水乙醇1：1等体积混合，室温避光反应30min，于517nm处测吸光值。样品与DPPH反应液的吸光度记作A1，样品与无水乙醇反应液的吸光度记作A2，DPPH与无水乙醇反应液的吸光度记作A3，样品的DPPH清除率＝[1-(A1-A2)/A3]×100％。
结果如图9所示，在浓度为50、100、200、400、800mg/L时的DPPH自由基清除率分别为2.43％、6.24％、12.00％、16.00％、21.77％，表现出优异的抗氧化效果。
实施例10
美白活性测试
取指数生长期B16细胞，用质量分数0.25％胰蛋白酶-EDTA消化并吹打均匀，将细胞按3×105个/孔的密度接种于12孔板。于37℃、质量分数5％CO2环境中培养过夜。弃去上清液，加入含不同质量浓度样品(实施例1产物)的培养液，以不加样品的RPMI-1640培养基孵育为空白组，加DMEM培养基孵育为造模组，每组3个复孔，在质量分数5％CO2、37℃环境中孵育24h。将孔板中培养基弃去，用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗一到两次后，加入1mL含质量分数10％DMSO的NaOH溶液(1mol/L)裂解细胞，置于80℃或100℃下恒温2h至细胞完全溶解。置于酶标仪中，于405nm下测吸光值。计算出黑色素抑制率＝1-(各孔OD值/模型组OD值)×100％。
结果如图10所示，空白对照组的黑色素含量设为1，造模组的黑色素表达为1.51，在浓度为10、20、40、80、100mg/L时，牡丹籽油神经酰胺的黑色素抑制率分别为9.91％、16.94％、22.21％、27.79％、40.54％，表现出很好的美白效果。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求的保护范围为准。
Claims (10)
1.牡丹籽油神经酰胺，其由牡丹籽油脂肪酸与鞘氨醇类化合物反应得到，所述鞘氨醇类化合物选自鞘氨醇、植物鞘氨醇、二氢鞘氨醇。
2.根据权利要求1所述的牡丹籽油神经酰胺，其特征在于，所述牡丹籽油脂肪酸由牡丹籽油水解得到。
3.根据权利要求1或2所述的牡丹籽油神经酰胺，其特征在于，所述牡丹籽油脂肪酸含有35～70wt％α-亚麻酸、15～40wt％亚油酸、10～30wt％油酸、0.1～5wt％棕榈酸、0.1～5wt％硬脂酸。
4.牡丹籽油神经酰胺，其组成包括：α-亚麻酸神经酰胺，亚油酸神经酰胺，油酸神经酰胺，棕榈酸神经酰胺，硬脂酸神经酰胺。
5.根据权利要求4所述的牡丹籽油神经酰胺，其组成包括：35～70wt％α-亚麻酸神经酰胺，15～40wt％亚油酸神经酰胺，10～30wt％油酸神经酰胺，0.1～5wt％棕榈酸神经酰胺，0.1～5wt％硬脂酸神经酰胺。
6.根据权利要求4或5所述的牡丹籽油神经酰胺，其组成还包括：0～1wt％花生酸神经酰胺。
7.权利要求1～6任意一项所述的牡丹籽油神经酰胺的合成方法，包括以下步骤：
在缩合剂、有机碱条件下，牡丹籽油脂肪酸与鞘氨醇类化合物反应，所述缩合剂为EDCI，所述有机碱为Et3N；
所述牡丹籽油脂肪酸、鞘氨醇类化合物、EDCI、Et3N的摩尔比为1：(1～1.5)：(1～2)：(1～2)，所述反应的溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙腈中的至少一种。
8.权利要求1～6任意一项所述的牡丹籽油神经酰胺在化妆品、药品、膳食品或保健品中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述牡丹籽油神经酰胺具有皮肤屏障修复、组织愈合、抗衰老、抗炎、抗光老化、抗氧化、促进胶原合成、维持弹性蛋白活力、美白功效中的至少一种。
10.一种组合物，包括权利要求1～6任意一项所述的牡丹籽油神经酰胺，所述组合物具有皮肤屏障修复、组织愈合、抗衰老、抗炎、抗光老化、抗氧化、促进胶原合成、维持弹性蛋白活力、美白功效中的至少一种。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310051559.6A CN115974715A (zh) | 2023-02-02 | 2023-02-02 | 牡丹籽油神经酰胺及其合成方法与用途 |
| PCT/CN2023/133524 WO2024109867A1 (zh) | 2022-11-25 | 2023-11-23 | 植物油神经酰胺及其合成方法与用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310051559.6A CN115974715A (zh) | 2023-02-02 | 2023-02-02 | 牡丹籽油神经酰胺及其合成方法与用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115974715A true CN115974715A (zh) | 2023-04-18 |
Family
ID=85960990
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310051559.6A Pending CN115974715A (zh) | 2022-11-25 | 2023-02-02 | 牡丹籽油神经酰胺及其合成方法与用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115974715A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024109867A1 (zh) * | 2022-11-25 | 2024-05-30 | 深圳市迪克曼生物科技有限公司 | 植物油神经酰胺及其合成方法与用途 |
-
2023
- 2023-02-02 CN CN202310051559.6A patent/CN115974715A/zh active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024109867A1 (zh) * | 2022-11-25 | 2024-05-30 | 深圳市迪克曼生物科技有限公司 | 植物油神经酰胺及其合成方法与用途 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN115974714A (zh) | 乳木果油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN115947666A (zh) | 米糠油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN1905886B (zh) | 含有人参皂甙f1或化合物k的皮肤外用组合物 | |
| CN115894279A (zh) | 橄榄油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| JP4939766B2 (ja) | 基底膜安定化剤 | |
| CN115304509A (zh) | 含链状羧酸的神经酰胺类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN115974715A (zh) | 牡丹籽油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN115974716A (zh) | 棉籽油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN116041206A (zh) | 红花籽油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN116003289A (zh) | 西瓜籽油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN116023288A (zh) | 葡萄籽油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN116023289A (zh) | 鳄梨油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN116003287A (zh) | 葵花籽油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN115947667A (zh) | 椰子油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN116041205A (zh) | 琉璃苣油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN116003288A (zh) | 南美油藤油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN116003286A (zh) | 青刺果油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN110559248A (zh) | 一种护肤基质及其制备方法和应用 | |
| CN115894278A (zh) | 亚麻酸衍生的神经酰胺及其制备方法和应用 | |
| CN117304059A (zh) | 番茄籽油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN117304055A (zh) | 紫苏籽油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| EP2440551B1 (fr) | Mono esters et bis esters d'acide gras insature sur l'acide ascorbique et leurs utilisations cosmetiques | |
| CN117304061A (zh) | 元宝枫籽油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN117326965A (zh) | 月见草油神经酰胺及其合成方法与用途 | |
| CN117304058A (zh) | 核桃油神经酰胺及其合成方法与用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |