CN115917007A - 核酸探针 - Google Patents
核酸探针 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115917007A CN115917007A CN202080099895.2A CN202080099895A CN115917007A CN 115917007 A CN115917007 A CN 115917007A CN 202080099895 A CN202080099895 A CN 202080099895A CN 115917007 A CN115917007 A CN 115917007A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- probe
- dna
- artificial sequence
- nucleic acid
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 title claims abstract description 120
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 title claims abstract description 120
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 439
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 192
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 192
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 192
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims abstract description 172
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 110
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 84
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 38
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 69
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 44
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 39
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 28
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 13
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 238000002509 fluorescent in situ hybridization Methods 0.000 abstract description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 609
- 101100005469 Mus musculus Ccdc177 gene Proteins 0.000 description 143
- 101150088952 IGF1 gene Proteins 0.000 description 60
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 60
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 53
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 41
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 35
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 31
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 30
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 30
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 28
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 28
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 21
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 18
- 101000972282 Homo sapiens Mucin-5AC Proteins 0.000 description 15
- 102100022496 Mucin-5AC Human genes 0.000 description 15
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 15
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 14
- 102100026561 Filamin-A Human genes 0.000 description 11
- 101000913549 Homo sapiens Filamin-A Proteins 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 10
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 9
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 9
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 9
- 238000003559 RNA-seq method Methods 0.000 description 8
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 8
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 8
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 8
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 7
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 6
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 5
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000005443 Circulating Neoplastic Cells Diseases 0.000 description 5
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 5
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 210000005153 frontal cortex Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- -1 cosmid Substances 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000116 DAPI staining Methods 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 3
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000002898 library design Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 3
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000224466 Giardia Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000043141 Nuclear RNA Human genes 0.000 description 2
- 108020003217 Nuclear RNA Proteins 0.000 description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- 101150052128 SLC12A7 gene Proteins 0.000 description 2
- 108091007415 Small Cajal body-specific RNA Proteins 0.000 description 2
- 102000039471 Small Nuclear RNA Human genes 0.000 description 2
- 108020003224 Small Nucleolar RNA Proteins 0.000 description 2
- 102000042773 Small Nucleolar RNA Human genes 0.000 description 2
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 2
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000224526 Trichomonas Species 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 210000002726 cyst fluid Anatomy 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 2
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 2
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- DRAVOWXCEBXPTN-UHFFFAOYSA-N isoguanine Chemical compound NC1=NC(=O)NC2=C1NC=N2 DRAVOWXCEBXPTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 2
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 2
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 2
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 2
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 2
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 2
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 2
- 108091029842 small nuclear ribonucleic acid Proteins 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UUTKICFRNVKFRG-WDSKDSINSA-N (4R)-3-[oxo-[(2S)-5-oxo-2-pyrrolidinyl]methyl]-4-thiazolidinecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CSCN1C(=O)[C@H]1NC(=O)CC1 UUTKICFRNVKFRG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 108020004463 18S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XQCZBXHVTFVIFE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-hydroxypyrimidine Chemical compound NC1=NC=CC(O)=N1 XQCZBXHVTFVIFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 101150083548 ABCC2 gene Proteins 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 241000224489 Amoeba Species 0.000 description 1
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 description 1
- 241000712891 Arenavirus Species 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- 102000003910 Cyclin D Human genes 0.000 description 1
- 108090000259 Cyclin D Proteins 0.000 description 1
- 102000003909 Cyclin E Human genes 0.000 description 1
- 108090000257 Cyclin E Proteins 0.000 description 1
- 102000015792 Cyclin-Dependent Kinase 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010024986 Cyclin-Dependent Kinase 2 Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 101100126626 Drosophila melanogaster Itpr gene Proteins 0.000 description 1
- 101100129310 Drosophila melanogaster mam gene Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 108050002772 E3 ubiquitin-protein ligase Mdm2 Proteins 0.000 description 1
- 102000012199 E3 ubiquitin-protein ligase Mdm2 Human genes 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150084967 EPCAM gene Proteins 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000224431 Entamoeba Species 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000756632 Homo sapiens Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000998011 Homo sapiens Keratin, type I cytoskeletal 19 Proteins 0.000 description 1
- 101001128138 Homo sapiens NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000981336 Homo sapiens Nibrin Proteins 0.000 description 1
- 101000611202 Homo sapiens Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase B Proteins 0.000 description 1
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150030450 IRS1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 102100033420 Keratin, type I cytoskeletal 19 Human genes 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100346932 Mus musculus Muc1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 101150054386 Myh11 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100024403 Nibrin Human genes 0.000 description 1
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007399 Nuclear hormone receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020005497 Nuclear hormone receptor Proteins 0.000 description 1
- 241000713112 Orthobunyavirus Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000014160 PTEN Phosphohydrolase Human genes 0.000 description 1
- 108010011536 PTEN Phosphohydrolase Proteins 0.000 description 1
- 238000010220 Pearson correlation analysis Methods 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102100040283 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase B Human genes 0.000 description 1
- 108010053210 Phycocyanin Proteins 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 description 1
- 108020004422 Riboswitch Proteins 0.000 description 1
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108091046869 Telomeric non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N Trolox Chemical compound O1C(C)(C(O)=O)CCC2=C1C(C)=C(C)C(O)=C2C GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223104 Trypanosoma Species 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 102100029469 WD repeat and HMG-box DNA-binding protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710097421 WD repeat and HMG-box DNA-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 238000001790 Welch's t-test Methods 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000005441 aurora Substances 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 238000011094 buffer selection Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 108091092328 cellular RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 125000001295 dansyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(N(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=C2C([H])=C([H])C([H])=C(C2=C1[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 241001492478 dsDNA viruses, no RNA stage Species 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000008995 epigenetic change Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003953 foreskin Anatomy 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000003869 genetically modified organism Nutrition 0.000 description 1
- 101150036072 glmE gene Proteins 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 238000007834 ligase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004880 lymph fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 108010026228 mRNA guanylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101150063457 mamB gene Proteins 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 238000007481 next generation sequencing Methods 0.000 description 1
- 102000037979 non-receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 108091008046 non-receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 108020004017 nuclear receptors Proteins 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- FZHAPNGMFPVSLP-UHFFFAOYSA-N silanamine Chemical compound [SiH3]N FZHAPNGMFPVSLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000003046 sporozoite Anatomy 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- 101150065190 term gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 108091006106 transcriptional activators Proteins 0.000 description 1
- 108091006107 transcriptional repressors Proteins 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6841—In situ hybridisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2525/00—Reactions involving modified oligonucleotides, nucleic acids, or nucleotides
- C12Q2525/10—Modifications characterised by
- C12Q2525/161—Modifications characterised by incorporating target specific and non-target specific sites
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2537/00—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature
- C12Q2537/10—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature the purpose or use of
- C12Q2537/125—Sandwich assay format
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2537/00—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature
- C12Q2537/10—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature the purpose or use of
- C12Q2537/143—Multiplexing, i.e. use of multiple primers or probes in a single reaction, usually for simultaneously analyse of multiple analysis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2563/00—Nucleic acid detection characterized by the use of physical, structural and functional properties
- C12Q2563/107—Nucleic acid detection characterized by the use of physical, structural and functional properties fluorescence
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及用于荧光原位杂交中检测多核苷酸分析物的一对非天然存在的核酸探针，其中所述探针包含第一核酸探针和第二核酸探针，该第一核酸探针包含与桥式探针的第一探针靶区域互补的第一探针结合臂和与多核苷酸分析物的第一分析物靶区域互补的第一多核苷酸分析物结合臂，该第二核酸探针包含与所述桥式探针的第二探针靶区域互补的第二探针结合臂。所述探针对与靶多核苷酸的结合允许与桥式探针的结合，以检测多核苷酸分析物。还提供了包含所述核酸探针对的探针系统和检测样品中多核苷酸分析物的方法。
Description
技术领域
本发明涉及荧光原位杂交(FISH)。具体而言，本发明涉及一对非天然存在的核酸探针，用于在荧光原位杂交中检测多核苷酸分析物。
背景技术
作为空间转录组学的一种具有吸引力的方法，多重荧光原位杂交(FISH)允许对转录组进行组合成像，并有望揭示天然组织中单细胞的状态-功能关系。使多重FISH更广泛地适用于所有组织类型的一个关键挑战是在复杂的组织环境中难以准确检测各个RNA分子，这些环境通常遭受低信号和组织依赖性背景的影响。为了解决这一局限性，人们一直致力于信号放大，以产生更亮的RNA斑点。然而，这类方法只能提高相对于组织自体荧光的信号。另外，由于所有探针都被等同扩增，因此这些扩增方法无助于区分真实的RNA斑点(真阳性)和非特异性结合的探针(假阳性)。
FISH探针的脱靶结合会产生背景荧光和乱真信号。由于使用高度多样化(通常由数千个序列组成)和浓缩的探针溶液，这些问题在多重FISH中变得更加严重。解决这些问题的一种办法是使用个性化组织清理方法来去除细胞蛋白质和脂质，从而减少非特异性探针结合。然而，清理并不会去除探针与细胞和组织内非靶RNA的非特异性结合。另外，组织清理造成了样品与样品之间技术性变化的另一种来源，并且它需要冗长的方案，可能需要针对每种组织类型进行定制。
相应地，通常希望克服或改善一个或多个上述难题。
发明内容
一方面，提供了一对用于检测多核苷酸分析物的非天然存在的核酸探针，包括：
i.第一核酸探针，其包含：
a)第一探针结合臂，其与桥式探针的第一探针靶区域互补；和
b)第一多核苷酸分析物结合臂，其与多核苷酸分析物的第一分析物靶区域互补，以及
ii.第二核酸探针，其包含：
a)第二探针结合臂，其与桥式探针的第二探针靶区域互补；其中第一探针靶区域位于桥式探针上第二探针靶区域的下游，和
b)第二多核苷酸分析物结合臂，其与多核苷酸分析物的第二分析物靶区域互补，其中第二分析物靶区域位于多核苷酸分析物上第一分析物靶区域的下游，
其中第一多核苷酸分析物结合臂与第一分析物靶区域的结合以及第二多核苷酸分析物结合臂与第二分析物靶区域的结合允许第一探针结合臂与第一探针靶区域的结合以及第二探针结合臂与第二探针靶区域的结合，从而检测所述多核苷酸分析物。
一方面，提供了一种如本文所定义的探针系统。
在一个实施方案中，提供了一种探针系统，包括：
i.第一核酸探针，其包含：
a)第一探针结合臂，其与桥式探针的第一探针靶区域互补，和
b)第一多核苷酸分析物结合臂，其与多核苷酸分析物的第一分析物靶区域互补；以及
ii.第二核酸探针，其包含：
a)第二探针结合臂，其与桥式探针的第二探针靶区域互补，其中第一探针靶区域位于桥式探针上第二探针靶区域的下游，和
b)第二多核苷酸分析物结合臂，其与多核苷酸分析物的第二分析物靶区域互补，其中第二分析物靶区域位于多核苷酸分析物上第一分析物靶区域的下游；
其中第一多核苷酸分析物结合臂与第一分析物靶区域的结合以及第二多核苷酸分析物结合臂与第二分析物靶区域的结合允许第一探针结合臂与第一探针靶区域的结合以及第二探针结合臂与第二探针靶区域的结合，从而检测所述多核苷酸分析物。
在一个实施方案中，第一和/或第二核酸探针中的探针结合臂包含用于结合独特的桥式探针的识别部分。识别部分可以允许一对(或多对)核酸探针由独特的桥式探针识别。多对核酸探针可以包含用于结合相同的独特桥式探针的相同识别部分，这可以允许每对核酸探针(或一组核酸探针对)在包含多种核酸探针对的文库中彼此区分。
一方面，提供了一种检测样品中的多核苷酸分析物的方法，该方法包括：
(a)使样品与如本文所定义的一对非天然存在的核酸探针或探针系统接触；和
(b)在多核苷酸分析物存在的情况下，基于与独特的桥式探针的杂交来检测所述多核苷酸分析物。
一方面，提供了用于检测样品中两种或更多种多核苷酸分析物的文库；该文库包含如本文所定义的两对或更多对非天然存在的核酸探针或者多种探针系统，
其中每对核酸探针对每种多核苷酸分析物而言都是特异性的；并且
其中将每对核酸探针配置为在所述多核苷酸分析物存在的情况下与独特的桥式探针杂交。
一方面，提供了一种检测样品中两种或更多种多核苷酸分析物的方法，该方法包括：
a)使样品与如本文所定义的文库接触，和
b)在所述多核苷酸分析物存在的情况下，基于与独特桥式探针的杂交来检测每种多核苷酸分析物。
该方法可以包括在步骤b)之前提供独特桥式探针，将该独特桥式探针配置为与特定的一对(或多对)核酸探针结合。可以同时、序贯或组合地提供多种独特桥式探针，以实现对多种多核苷酸分析物的检测。
一方面，提供了一种对样品中一种或多种多核苷酸分析物的表达进行检测或可视化的方法，该方法包括：
a)使样品与如本文所定义的文库接触，和
b)基于与独特桥式探针的杂交来对每种多核苷酸分析物进行检测或可视化。
一方面，提供了一种试剂盒，该试剂盒包含如本文所定义的一对非天然存在的核酸探针或如本文所定义的多种探针系统或文库。
在一个实施方案中，该试剂盒还包括一种或多种桥式探针。
附图说明
以下附图说明了某些实施方案。应该理解的是，以下描述仅出于描述特定实施方案的目的，而并非意在就该描述而言进行限制。
图1：桥式序列长度的优化。(a)设计分离式(split)探针以靶向A549细胞系中MUC5AC转录本的多态性重复区域(SEQ ID NO:591)。(b)非配对和(c)配对的分离式探针中分离桥式序列长度(x)为7-12个核苷酸(nt)的RNA FISH图像(橙色和浅蓝色序列)。较短的(7-9个核苷酸)桥式长度能够抑制非配对探针的结合。然而，使用过短的桥式长度(7+7个核苷酸)，即使在配对探针中也会导致结合不良。9+9个核苷酸似乎是最佳长度。
图2：分离式FISH工作流程的优化。通过限制性消化从探针上(a)去除扩增引物和(b)不去除扩增引物的分离式FISH图像。(c)与b相同，但对比度为10倍。(d)杂交1、5、10、30和60分钟后，分离式FISH的桥式探针(蓝色)相比常规读出探针(红色)的标准化RNA亮度。对于分离式FISH，需要附加一轮染料标记的读出探针杂交(10分钟)。
图3：分离式探针构建体的优化。(a-f)测试了六种不同的构建体-环形、十字形、双“C”形和双“Z”形、常规的和非配对的(SEQ ID NOs；344-353)。示出了靶向RNA(SEQ ID NO:591)和探针序列。(g-k)带有DAPI细胞核(蓝色)染色的所测试构建体的示例性RNA FISH图像。发现环形构建体(g)产生了最佳的RNA信号，其达到了与常规方案(k)相似的亮度。(l)相反，非配对探针未显示信号(阴性对照)。(m)每种探针构建体的单个RNA分子(n＝从5个FOV中随机选定的1,000个RNA)亮度的箱形图。中线为中位数；箱规格限为上四分位数和下四分位数；箱须为1.5倍的四分位范围。
图4：分离式探针构建体的双通道共定位对照。(a)针对MUC5AC转录本上非重复区域的75种独特探针(Cy3)与分离式探针构建体(Cy5)同时进行杂交，这些分离式探针构建体为环形、十字形、双“C”形、双“Z”形和常规的。(b-e)来自Cy3和Cy5通道的环形和双“Z”形构建体的样品RNA FISH图像，带有细胞核的DAPI染色(蓝色)。与“环形”相比，双“Z”形Cy5以4倍增强对比度显示。本实验重复了两次，结果相似。(f)每种探针构建体与Cy3斑点共定位的Cy5斑点分数(n＝10个FOV)的箱形图。中线为中位数；箱规格限为上四分位数和下四分位数；箱须为1.5倍的四分位范围。
图5：分离式探针消除了与已知脱靶相关的假阳性信号。(a)使用常规读出，在细胞核(蓝色)中也观察到了假阳性信号。(b)去除“扰乱(rogue)”探针(红色)消除了细胞核中的假阳性信号。(c)使用分离式读出，尽管存在“扰乱”序列，但在细胞核中未观察到假阳性信号。(d)读出探针无法与非配对的“扰乱”序列结合。
图6：哺乳动物细胞系和组织中基于分离式探针的多重FISH(分离式FISH)。(a)多重分离式FISH方案的示意图。编码探针首先进行杂交。在每一轮成像时，引入桥式探针并使其杂交，随后是染料标记的读出探针。成像后，将桥式探针和读出探针都洗掉，为下一轮做准备。(b)来自AML12细胞的分离式FISH的图8d中区域的解码转录本定位。示出了跨越所有轮次杂交的最大强度投影，将解码转录本位置叠加。每个点表示单个转录本。颜色代表不同的基因。比例尺的长度为10μm。每个基因的总计数与批量RNA测序FPKM值(对于AML12)的散点图，红色为对数皮尔逊相关性。对于两种方案共有的10种基因，分离式FISH和常规之间的每个细胞计数散点图。y＝x线以红色显示。(c)脑、肾脏、卵巢和肝组织中每个基因的总计数与批量RNA测序FPKM值的散点图。红色为对数皮尔逊相关性值。(d)小鼠脑和肝组织中常规多重FISH和分离式FISH之间每个细胞的“空白”计数比较。分别对8个和7个“空白”条形码进行了分离式FISH(317个基因)和常规(133个基因)方案的测试。中线为中位数；箱规格限为上四分位数和下四分位数；箱须为1.5倍的四分位范围；所有数据点显示为蓝色。
图7：优化的分离式FISH允许杂交和洗涤的重复循环。(a)在相同的A549细胞中对FLNA转录本交替进行杂交和洗涤，持续20个循环。(b)在20个杂交和洗涤循环中每个细胞(n＝38个细胞)检测到的斑点数量的箱形图。中线为中位数；箱规格限为上四分位数和下四分位数；箱须为1.5倍的四分位范围。(c)20次杂交中RNA亮度(n＝从4个FOV中随机选定的1,000个RNA)的箱形图。中线为中位数；箱规格限为上四分位数和下四分位数；箱须为1.5倍的四分位范围。
图8：多重FISH的常规和分离式探针方法的比较。(a)两种方法的示意图比较。细胞RNA为黑色，编码探针为红色，染料标记的读出探针为橙色。桥式探针(仅限分离式方案)为绿色，仅当两个匹配的编码探针在近距离内同步时才会结合。(b-e)使用常规(b和c)和分离式探针(d和e)方案，从AML12细胞和小鼠脑切片上获得的多重FISH单次成像轮的未处理图像。将b、c、d和e中的图像按比例调节到相同的摄像强度范围(30k，直方图上的橙色虚线框)。插图显示了整个视野，其中主图像显示了一个放大区域(红色框)。比例尺的长度为10μm。直方图示出了来自整个视野的原始像素强度的分布。将直方图的X轴按比例调节至最大摄像传感器输出65535。红线表示中位数。
图9：与真实的RNA信号相比，组织自体荧光可以忽略不计。(a)来自带有DAPI染色(蓝色)的分离式FISH的代表性图像。(b)洗涤后的图像，未显示可检测到的RNA斑点。(c)与b相同的图像，但对比度为10倍，以突出组织自体荧光和未洗涤的单个荧光染料分子。
图10：通过分离式FISH揭示的四种类型的未清理小鼠组织中不同的转录组定位模式。来自一轮成像的拼接图像上叠加的选定基因的解码转录本定位。比例尺的长度为100μm。(a)脑组织显示转录本在神经突(neuronal processes)(Map4)和含有细胞体的区域(例如Itpr1)中的差异化定位。(b)肾脏切片中5个基因(Ppl、Sptbn2、Irs1、Notch3和Osbpl8)的分带模式。(c)Plxnc1、Dsp和Slc12a7转录本在卵巢滤泡内的区室化定位，Myh11转录本在滤泡周围的定位以及Rnf213转录本在卵巢外表面附近的定位。(d)基因在肝脏切片门静脉周围的定位。
图11：常规多重FISH的总计数与批量RNA测序FPKM值之间的相关性。(a)AML-12、(b)肝脏、(c)脑。
图12：来自图1所示的AML-12数据集的5位的另外图像。在右下方的图像中，同一区域中检测到的基因用基因名称进行注释，每种基因用不同的颜色注释。(a)常规、(b)分离式FISH。
图13：来自图1所示的小鼠脑数据集的5位的另外图像。在右下方的图像中，同一区域中检测到的基因用基因名称进行注释，每种基因用不同的颜色注释。(a)常规、(b)分离式FISH。
图14：来自小鼠肝脏数据集的5位的另外图像。在右下方的图像中，同一区域中检测到的基因用基因名称进行注释，每种基因用不同的颜色注释。(a)常规、(b)分离式FISH。
发明详述
本说明书公开了一对用于检测多核苷酸分析物的非天然存在的核酸探针。
本文提供了用于检测多核苷酸分析物的一对非天然存在的核酸探针，包括：
i.第一核酸探针，其包含：
a)第一探针结合臂，其与桥式探针的第一探针靶区域互补；和
b)第一多核苷酸分析物结合臂，其与多核苷酸分析物的第一分析物靶区域互补，以及
ii.第二核酸探针，其包含：
a)第二探针结合臂，其与所述桥式探针的第二探针靶区域互补，其中第一探针靶区域位于桥式探针上第二探针靶区域的下游，和
b)第二多核苷酸分析物结合臂，其与所述多核苷酸分析物的第二分析物靶区域互补，其中第二分析物靶区域位于多核苷酸分析物上第一分析物靶区域的下游，
其中第一多核苷酸分析物结合臂与第一分析物靶区域的结合以及第二多核苷酸分析物结合臂与第二分析物靶区域的结合允许第一探针结合臂与第一探针靶区域的结合以及第二探针结合臂与第二探针靶区域的结合，从而检测多核苷酸分析物。
一方面，提供了一种探针系统，包括：
i.第一核酸探针，其包含：
a)第一探针结合臂，其与桥式探针的第一探针靶区域互补，和
b)第一多核苷酸分析物结合臂，其与多核苷酸分析物的第一分析物靶区域互补；以及
ii.第二核酸探针，其包含：
a)第二探针结合臂，其与所述桥式探针的第二探针靶区域互补，其中第一探针靶区域位于桥式探针上第二探针靶区域的下游，和
b)第二多核苷酸分析物结合臂，其与多核苷酸分析物的第二分析物靶区域互补，其中第二分析物靶区域位于多核苷酸分析物上第一分析物靶区域的下游；
其中第一多核苷酸分析物结合臂与第一分析物靶区域的结合以及第二多核苷酸分析物结合臂与第二分析物靶区域的结合允许第一探针结合臂与第一探针靶区域的结合以及第二探针结合臂与第二探针靶区域的结合，从而检测所述多核苷酸分析物。
不受理论束缚地，本发明人发现了一种在检测细胞或组织中的多核苷酸分析物时(例如使用荧光原位杂交)降低非特异性背景的方法。这可以通过使用一组分离式探针来实现，由此只有当两个独立的杂交事件共定位时才会产生荧光信号(称为分离式FISH)。在分离式FISH方案(图6a和8a)中，在一对邻近的编码探针之间共享一个桥式序列。可以将桥式探针设计为不能以足够的亲和力与任何单个编码探针杂交。只有当一对编码探针在多核苷酸分析物(例如靶RNA)上的邻近位置处杂交时，才会有足够的近距离内的互补碱基配对，以使桥式探针能够有效结合。然后，荧光标记的读出探针可以与桥式探针杂交，以生成在靶信号。通过在单分子水平上改进探针设计并设计定制的条形码化桥式序列，即使在未清理的组织中，分离式FISH也可用于精确的转录组谱分析。
探针系统还可以包括桥式探针。
用于检测多核苷酸分析物的该对非天然存在的核酸探针也可以称为一对非天然存在的核酸分离式探针。
该对非天然存在的核酸探针也可以称为“编码探针”。
该对核酸探针可以是一对单链核酸探针。
当第一和第二核酸探针与多核苷酸分析物杂交时，“桥式探针”可以与核酸探针杂交。因此，“桥式探针”可以检测第一和第二核酸探针与多核苷酸分析物的结合。
可以将每对核酸探针配置成与独特桥式探针杂交。在一个实施方案中，第一和/或第二核酸探针中的探针结合臂包含用于结合独特桥式探针的识别部分。识别部分可以允许一对(或多对)核酸探针被独特桥式探针识别。这可以允许每对核酸探针(或一组核酸探针对)在包含多种核酸探针对的文库中彼此区分。
本文还提供了一对非天然存在的核酸探针用于检测多核苷酸分析物的用途。本文还提供了一对当用于检测多核苷酸分析物时的非天然存在的核酸探针。
在一个实施方案中，第一和/或第二核酸探针中的探针结合臂由9或10个核苷酸组成。在一个实施方案中，第一和/或第二核酸探针中的探针结合臂由9个核苷酸组成。发现分离式桥的长度可能影响非特异性背景信号，并且约9个核苷酸的长度出乎意料地能够产生几乎无法检测到的非特异性背景信号水平。例如，第一核酸探针可以在3'末端处包含第一探针结合臂，该结合臂与桥式探针的第一探针靶区域互补并与其选择性杂交，其中该第一探针结合臂是ATTTAACCG(SEQ ID NO:592)(参见表9)。第二核酸探针可以在5'末端处包含第二探针结合臂，该结合臂与桥式探针的第二探针靶区域互补并与其选择性杂交，其中该第二探针结合臂是CCCATTACC(SEQ ID NO:593)。桥式探针可以具有一个序列，即GGTAATGGGCGGTTAAAT(SEQ ID NO:594)。桥式探针还可以包括一个或两个读出序列(例如，ATTGTAAAGCGTGAGAAA(SEQ ID NO:595))，其允许桥式探针被读出探针检测或识别。
在一个实施方案中，第一或第二核酸探针中的多核苷酸分析物结合臂由20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个核苷酸组成。在一个实施方案中，第一或第二核酸探针中的多核苷酸分析物结合臂由25个核苷酸组成。
在一个实施方案中，在探针结合臂和多核苷酸分析物结合臂之间置有一个接头。接头可以是约1至10个核苷酸的短接头。接头可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个核碱基的短接头。在一个实施方案中，接头是约1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3、1至2个核碱基。在一个实施方案中，接头是约1至5个核碱基。在一个实施方案中，接头是1、2、3、4或5个核碱基。在一个实施方案中，接头是2或3个核碱基。在一个示例中，接头是TAT(参见表8a中的配对(环形)分离式探针序列)。
术语“核酸”指的是单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物，除非另有限制，包括以类似于天然存在的核苷酸的方式与核酸杂交的天然核苷酸的已知类似物。
如本文所用的，术语“核酸”和等同术语诸如“多核苷酸”指的是任何长度的核苷酸的聚合形式，所述核苷酸例如核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或肽核酸(PNA)，其包括嘌呤和嘧啶碱基，或者其他天然的、化学或生物化学修饰的、非天然的或衍生的核苷酸碱基。核酸可以是双链或单链的。提及单链核酸包括提及正义链或反义链。多核苷酸的主链可以包含糖和磷酸基团，如通常可以见于RNA或DNA中的，或者可以包含经修饰或取代的糖或磷酸基团。多核苷酸可以包括修饰核苷酸，例如甲基化核苷酸和核苷酸类似物。核苷酸序列可能被非核苷酸组分间隔开。术语核苷、核苷酸、脱氧核苷和脱氧核苷酸通常包括核苷、核苷酸、脱氧核苷和脱氧核苷酸或它们类似物的互补物、片段和变体。
在一个实施方案中，第一分析物靶区域紧邻第二分析物靶区域。在另一实施方案中，第一分析物靶区域与第二分析物靶区域之间的间隔不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个核碱基。
在一个实施方案中，第一探针靶区域紧邻第二探针靶区域。在另一实施方案中，第一探针靶区域与第二探针靶区域之间的间隔不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个核碱基。
如本文所用的“寡核苷酸”是可用于杂交或扩增技术的单链分子。一般来说，寡核苷酸的长度可以是约15至约100的任意整数个核苷酸，但也可以是更大的长度。
术语“探针”指的是能够选择性结合明确指定的靶分子(例如核苷酸转录本)的任何分子。探针可以由本领域技术人员合成，或者来源自合适的生物制品。
本发明的核酸探针(或核酸分离式探针)可用于检测一种或多种已知含有或疑似含有一种或多种多核苷酸分析物的样品中是否存在该多核苷酸分析物。核酸探针也可用于对样品中多核苷酸分析物的量进行定量。核酸探针可用于检测样品中未扩增的多核苷酸靶标，例如RNA、mRNA、rRNA、质粒DNA、病毒DNA、细菌DNA和染色体DNA。此外，核酸探针可用于与通过众所周知的方法对多核苷酸靶标扩增结合使用，这些方法诸如PCR、连接酶链式反应、Q-B复制酶、链置换扩增(SDA)、滚环扩增(RCA)、基于核酸序列的扩增(NASBA)等。
在一个实施方案中，将桥式探针与标记物(如荧光标记物)偶联或缀合。这种桥式探针可以称为读出探针。
在一个实施方案中，通过与二级检测探针(或读出探针)杂交来检测桥式探针，该二级检测探针与标记物(如荧光标记物)缀合。桥式探针可以包含特定的(或独特的)标签或条形码序列，使其能够通过与二级检测探针(或读出探针)杂交而被识别。
荧光标记物的实例包括但不限于稀土螯合物(铕螯合物)、德克萨斯红、罗丹明、荧光素、丹磺酰、藻红蛋白、藻蓝蛋白、光谱橙、光谱绿和/或上述任意一种或多种的衍生物。测定中使用的多种探针可以用多于一种可区分的荧光或色素颜色进行标记。这些颜色差异提供了一种手段来识别例如特定探针的杂交位置。此外，在空间上未分开的探针可以通过由混合两种其他颜色(例如，浅红色+绿色＝黄色)、色素(例如，蓝色+黄色＝绿色)产生的不同色光或色素来识别，或者通过使用一次仅穿过一种颜色的滤光片组来识别。利用常规方法，可以用荧光团直接或间接标记探针。可以添加额外的探针和颜色来优化和扩展这一常规程序，以包括更多的遗传异常或作为内部对照。
在一个实施方案中，二级检测探针(或读出探针)与桥式探针的一个末端区域杂交。
在一个实施方案中，两种二级检测探针与桥式探针的两个末端区域杂交。
在一个实施方案中，一种或多种二级检测探针(或读出探针)与桥式探针的中心区域杂交。
在一个实施方案中，桥式探针具有与多核苷酸分析物相同的序列。
在一个实施方案中，读出探针具有与多核苷酸分析物相同的序列。
在一个实施方案中，提供了用于检测多核苷酸分析物的一对非天然存在的核酸探针，该对核酸探针包括两条反平行的核酸链，其中：
i.第一核酸链，包含：
a)位于3'末端的读出结合臂，其与读出探针的第一区域互补并选择性杂交；和
b)位于5'末端的多核苷酸分析物结合臂，其与多核苷酸分析物的第一区域互补并选择性杂交，以及
ii.第二核酸链，包含：
a)位于5'末端的读出结合臂，其与读出探针的第二区域互补并选择性杂交；和
b)位于3'末端的多核苷酸分析物结合臂，其与位于第一区域3'端的多核苷酸分析物的第二区域互补并选择性杂交；
其中第一和第二核酸链与多核苷酸分析物的杂交使得能够与读出探针杂交并检测该多核苷酸分析物。
术语“互补的”指的是核苷酸或核酸之间的碱基配对，例如双链DNA分子的两条链之间或者寡核苷酸引物和待测序或扩增的单链核酸上的引物结合位点之间的碱基配对。互补核苷酸通常是A和T(或A和U)，或者C和G。当一条链的核苷酸经过最佳对齐和比较并在具有适当核苷酸插入或缺失的情况下，与另一条链的至少约80％的核苷酸配对，通常与另一条链的至少约90％至95％，更优选约98％至100％的核苷酸配对时，就认为两条单链RNA或DNA分子是互补的。备选地，当RNA或DNA链在选择性杂交条件下与其互补链杂交时，就存在互补性。通常，当在至少14至25个核苷酸的一段上存在至少约65％的互补性，优选至少约75％，更优选至少约90％的互补性时，就会发生选择性杂交。
如本文所用的，术语“杂交(hybridization)”或“杂交(hybridizes)”指的是两条单链多核苷酸非共价结合以形成稳定的双链多核苷酸的过程。术语“杂交”也可以指三链杂交。由此产生的(通常情况下)双链多核苷酸是“杂合体”。形成稳定杂合体的多核苷酸群体的比例在本文中称为“杂交度”。
杂交条件通常将包括低于约1M的盐浓度，更通常情况下低于约500mM和低于约200mM。杂交温度可以低至5℃，但通常高于22℃，更典型地高于约30℃，优选超过约37℃。杂交通常在严格条件下进行，即探针将与其靶标杂交的条件。严格条件是序列依赖性的，并且在不同的情况下有所不同。对于特异性杂交，较长的片段可能需要更高的杂交温度。由于其他因素包括互补链的碱基组成和长度、有机溶剂的存在和碱基错配的程度可能也会影响杂交的严格性，因此参数的组合比任何一个单独参数的绝对量度都更重要。通常，将严格条件选定为在规定的离子强度和pH值下，比特定序列的热解链温度点(Tm)低约5℃。Tm是在平衡状态下50％的与靶序列互补的探针与靶序列杂交时的温度(在规定的离子强度、pH值和核酸组成下)。通常，严格条件包括在pH 7.0至8.3和至少25℃的温度下，盐浓度为至少0.01M至不超过1M的Na离子浓度(或其它盐类)。例如，5X SSPE(750mM NaCl,50mM磷酸钠,5mMEDTA,pH 7.4)和25-30℃的温度的条件适用于等位基因特异性探针杂交。
“标记物”指的是一种报告分子或酶，它们能够产生可测量信号并与多核苷酸共价或非共价连接。
就例如探针而言，术语“标记的”意在包括通过将可检测物质偶联(即实体连接)到探针上来直接标记探针，以及通过与另一种直接标记的试剂反应来间接标记探针。间接标记的示例包括使用荧光标记的二级探针(或读出探针)来检测桥式探针(在多核苷酸分析物存在的情况下与核酸对结合)。
术语“多核苷酸分析物”可以是可通过如本文所定义的一对核酸探针或探针系统进行检测或分析的任意多核苷酸。该分析物可以是天然存在的或合成的。多核苷酸分析物可以存在于使用本领域已知的任何方法获得的样品中。在某些情况下，可以在分析样品中的多核苷酸分析物之前，对样品进行处理。多核苷酸可以包括DNA、RNA、肽核酸以及它们的任何杂合体，其中多核苷酸包含脱氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸的任意组合。多核苷酸可以是单链或双链的，或者包含双链或单链序列两者的部分。多核苷酸可以包含核苷酸或碱基的任意组合，包括例如尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤、肌苷、黄嘌呤、次黄嘌呤、异胞嘧啶、异鸟嘌呤及其任何核苷酸衍生物。如本文所用的，术语“核苷酸”可以包括核苷酸和核苷，以及核苷和核苷酸类似物，和经修饰的核苷酸，包括合成的和天然存在的种类。多核苷酸可以是任何合适的多核苷酸，包括但不限于cDNA、线粒体DNA(mtDNA)、信使RNA(mRNA)、核糖体RNA(rRNA)、转运RNA(tRNA)、核RNA(nRNA)、小干扰RNA(siRNA)、小核RNA(snRNA)、小核仁RNA(snoRNA)、小Cajal体特异性RNA(scaRNA)、微小RNA(miRNA)、双链RNA(dsRNA)、核酶、核糖开关或病毒RNA。多核苷酸可以包含在任何合适的载体中，例如质粒、粘粒、片段、染色体或基因组。多核苷酸分析物可以是对细胞而言的内源性核酸。再举一个示例，多核苷酸分析物可以是通过用病原体感染细胞而导入或在细胞中表达的核酸，所述病原体为例如病毒或细菌基因组RNA或DNA、质粒、病毒或细菌mRNA等。
基因组DNA可以获自天然存在的或经遗传修饰的生物体，或者可以获自人工或合成创建的基因组。可以从任何来源并使用本领域已知的任何方法获得包含基因组DNA在内的多核苷酸分析物。例如，基因组DNA可以在扩增或不扩增的情况下分离。扩增可以包括PCR扩增、滚环扩增和其他扩增方法。基因组DNA也可以通过克隆或重组方法获得，例如那些涉及质粒和人工染色体的方法，或通过其他常规方法(参见Sambrook和Russell,MolecularCloning:A Laboratory Manual,已在上文引用)。可以使用本领域已知的其他方法分离多核苷酸分析物，例如在下列中公开的方法，即Genome Analysis:ALaboratory ManualSeries(第I-IV卷)或Molecular Cloning:A Laboratory Manual。如果分离的多核苷酸分析物是mRNA，则可以使用常规技术将其反转录成cDNA，如Sambrook和Russell,MolecularCloning:A Laboratory Manual中所述，已在上文引用。
术语“基因”广泛用于指与生物学功能相关的任何核酸。基因通常包括编码序列和/或表达此类编码序列所需的调节序列。术语基因可以适用于特定的基因组序列，以及由该基因组序列编码的cDNA或mRNA。基因还包括非表达的核酸区段，例如，形成其他蛋白质的识别序列的核酸区段。非表达的调节序列包括启动子和增强子，调节蛋白如转录因子与其结合，引起毗连或邻近序列的转录。
如本文所用的，术语“样品”包括从受试者中分离的组织、细胞、体液及其分离物等，以及存在于受试者内的组织、细胞和流体等(即，样品是体内的)。样品的示例包括：全血、血液(例如，血清和血浆)、淋巴液和囊液、痰、粪便、泪、粘液、毛发、皮肤、腹水、囊液、尿、乳头渗出物、乳头抽吸物、组织切片如活检和尸检样品、用于组织学目的的冷冻切片、存档样品、外植体和来源自患者组织的原代和/或转化细胞培养物等。
在与如本文所定义的一对核酸探针杂交之前，可对样品(例如组织或细胞样品)进行固定和透化，以将多核苷酸分析物保留在细胞中，并允许核酸探针、桥式探针等进入该样品。任选地，洗涤样品以去除未捕获到多核苷酸分析物之一的物质。在各种步骤中的任何一个步骤之后可以对样品进行洗涤，例如，在核酸探针与多核苷酸分析物杂交之后(以去除未结合的核酸探针)或者在与核酸探针和桥式探针杂交之后(然后去除未结合的核酸探针和桥式探针)。
如本文所用的术语“限制性酶”和“限制性内切核酸酶”意指一种内切核酸酶，其识别并切割特定的DNA序列(识别序列)。
一方面，提供了一种检测样品中多核苷酸分析物的方法，该方法包括：
(a)使样品与如本文所定义的一对非天然存在的核酸探针或探针系统接触；和
(b)在多核苷酸分析物存在的情况下，基于与桥式探针的杂交来检测该多核苷酸分析物。
在一个实施方案中，提供了一种测定样品中多核苷酸分析物水平的方法，该方法包括：
(a)使样品与如本文所定义的一对非天然存在的核酸探针或探针系统接触；和
(b)在多核苷酸分析物存在的情况下，基于与桥式探针的杂交来检测该多核苷酸分析物。
各个杂交步骤可以同时或序贯进行，基本上以任何方便的顺序进行。在一个实施方案中，同时对所有多核苷酸分析物完成与多对(或文库)核酸探针的杂交步骤。例如，可以将所有的核酸探针一次加入到样品中，并使其与其相应的靶标杂交，然后可以洗涤样品。相应的桥式探针可以与核酸探针杂交，并且可以在检测桥式探针之前再次洗涤样品。显然，在相应的一对或多对核酸探针与多核苷酸分析物杂交之前，优选地将双链多核苷酸分析物(一种或多种)变性，例如，通过加热变性。
该方法可以包括将桥式探针与结合于存在的多核苷酸分析物的非天然存在的核酸探针对杂交的步骤。可以去除或洗掉任何未结合的桥式探针。
可以将桥式探针与实现桥式探针检测的标记物(如荧光标记物)偶联或缀合，从而能够检测多核苷酸分析物。这种桥式探针还可以称为“读出探针”。
备选地，二级检测探针(即读出探针)可以与桥式探针杂交，并允许检测桥式探针(和多核苷酸分析物)。
桥式探针可以包含特定的标签或条形码序列(例如6核苷酸序列)。这可以使得桥式探针能够被二级检测探针(或读出探针)识别。
该方法可以允许基于检测到的信号来检测多核苷酸分析物的存在或水平。
该方法可以涉及检测一种或多种多核苷酸分析物。可以同时或序贯地检测多核苷酸分析物。
在序贯地检测多核苷酸分析物的情况下，这可能涉及每种多核苷酸分析物与特定核酸探针对的多轮杂交，以及随后用桥式探针和/或读出探针的检测。在检测每种多核苷酸分析物之间还可以存在洗涤或去除信号(例如，通过漂白)的步骤。
一方面，提供了用于检测样品中两种或更多种多核苷酸分析物的文库；该文库包含如本文所定义的两对或更多对非天然存在的核酸探针或者多种探针系统，其中每对核酸探针对每种多核苷酸分析物而言是特异性的；并且其中将每对核酸探针配置为在多核苷酸分析物存在的情况下与独特桥式探针杂交。
术语“独特桥式探针”可以指桥式探针识别特定核酸探针对的能力。文库中的每对核酸探针可在第一或第二核酸探针(或二者)的探针结合臂中包含“识别部分”(或条形码)，用于结合独特桥式探针。在一个实施方案中，识别部分由6个核苷酸(例如，actcta)组成。桥式探针可以具有识别该核酸探针对中识别部分的相应条形码序列。
多于一对的核酸探针(例如，一组核酸探针)可以包含相同的识别部分(或条形码)，从而允许它们结合一种独特桥式探针。核酸探针对的文库可以根据共有相同识别部分(或条形码)的核酸探针对进行分组。这可以允许基于添加识别共有相同识别部分的核酸探针对的相应独特桥式探针来组合检测多核苷酸分析物。
在某些实施方案中，可以使用识别部分(或条形码)的文库，例如，包含至少10个、至少102个、至少103个、至少104个、至少105个、至少106个、至少107个、至少108个等独特序列。独特序列可以全部单独确定(例如，随机地)，尽管在一些情况下，识别部分可以被定义为多个可变部分(或“位(bit)”)，例如按顺序。例如，识别部分可以包括至少2个、至少3个、至少5个、至少6个、至少7个、至少10个、至少15个、至少20个、至少25个、至少30个、至少40个或至少50个可变部分。每个可变部分可以包括至少2种、至少3种、至少4种、至少5种、至少7种、至少10种、至少15种、至少20种、至少25种、至少30种、至少40种、至少50种或更多种可能性。在一个实施方案中，识别部分由6个可变部分组成。
因此，例如，用22个可变区和每个可变区2种独特可能性定义的识别部分将定义具有222＝4,194,304个成员的识别部分文库。再举一个非限制性示例，可以用10个可变区和每个可变区7种独特可能性来定义识别部分，以定义具有710个成员的识别部分文库。应该理解的是，可变部分可以包括任何合适数量的核苷酸，并且识别部分内的不同可变部分可以独立地具有相同或不同数量的核苷酸。不同的可变区也可能具有相同或不同数量的独特可能性。例如，可以将可变部分定义为具有至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少7个、至少10个、至少15个、至少20个、至少25个、至少30个、至少40个、至少50个或更多个核苷酸的长度，和/或不超过50个、不超过40个、不超过30个、不超过25个、不超过20个、不超过15个、不超过10个、不超过7个、不超过5个、不超过4个、不超过3个或不超过2个核苷酸的最大长度。这些的组合也是可能的，例如，可变部分的长度可以是5至50nt，或15至25nt等。文库的一个非限制性示例用识别序列1-1、1-0、2-1、2-0等至22-1和22-0来说明，它们可以串联在一起(例如，识别序列1—识别序列2—识别序列3—...—识别序列22)以产生桥式序列(在这个非限制性示例中，每个序列位置1、2...22可以具有两种可能性之一，用-0和-1标识，例如，序列位置1可以是识别序列1-1或1-0，序列位置2可以是识别序列2-1或2-0，等等)。类似地，根据某些实施方案，在不存在此类序列的情况下也可以包括信息。例如，包括在存在一个序列(例如，序列1-0)的情况下的相同信息，也可以从不存在另一个序列(例如，序列1-1)的情况下来确定。每个识别序列位置可以被认为是一个“位”(例如，在本示例中为1或0)，但应该理解的是，每个“位”的可能性的数量不一定仅限于2，这与计算机不同。在其它实施方案中，可能有3种可能性(即“三位”)、4种可能性(即“四位”)、5种可能性等，而不是像在一些实施方案中那样只有2种可能性。
用于生成文库的方法可以包括(a)将条形码序列与多个寡核苷酸序列和多个码字(codeword)相关联，其中码字包含的位置数量少于靶标数量，和b)基于多个码字对核酸探针对进行分组，其中每种桥式探针对应于码字内独特位置的特定值。该方法可以包括将样品暴露于桥式探针之一；对样品进行成像；并且重复暴露和成像步骤一次或多次，然后用不同的桥式探针重复。这个过程可以重复进行，重复至少10、15、20、50、80、100、500次。
一方面，提供了一种检测样品中两种或更多种多核苷酸分析物的方法，该方法包括：
a)使样品与如本文所定义的文库或探针系统接触，和
b)在多核苷酸分析物存在的情况下，基于与独特桥式探针的杂交来检测每种多核苷酸分析物。
在一个实施方案中，提供了一种用于组合检测样品中两种或更多种多核苷酸分析物的方法，该方法包括：
a)使样品与如本文所定义的文库或探针系统接触，和
b)在两种或更多种多核苷酸分析物存在的情况下，基于与独特桥式探针的杂交来检测这两种或更多种多核苷酸分析物。
在一个实施方案中，提供了一种测定样品中两种或更多种多核苷酸分析物水平的方法，该方法包括：
a)使样品与如本文所定义的文库或探针系统接触，和
b)在多核苷酸分析物存在的情况下，基于与独特桥式探针的杂交来检测每种多核苷酸分析物。
在一个实施方案中，可以将两种或更多种核酸探针对配置成与相同的独特桥式探针结合，以允许组合检测两种或更多种多核苷酸分析物。
术语“检测”、“测定”、“测量”、“评估”、“评价”和“分析”在本文中可互换使用，指的是任何形式的测量，并包括确定某要素是否存在。这些术语包括定量和/或定性测定。评价可以是相对的，也可以是绝对的。如本文所定义的方法可以包括对样品中两种或更多种多核苷酸分析物的水平进行测量或可视化。
在一个实施方案中，该方法包括使样品与针对每种多核苷酸分析物的独特(或条形码化)桥式探针接触。
在一个实施方案中，基于与针对每种多核苷酸分析物的独特桥式探针的杂交，同时检测多种多核苷酸分析物。
在一个实施方案中，基于与针对每种多核苷酸分析物的独特桥式探针的多轮杂交，序贯地检测多种多核苷酸分析物。
在一个实施方案中，该方法包括通过与缀合至标记物的读出探针杂交来检测独特桥式探针。
在一个实施方案中，该方法包括使样品与针对每种多核苷酸分析物的独特读出探针接触。
该方法可以包括在每种多核苷酸分析物的检测之间，去除任何结合的或未结合的桥式探针和/或读出探针(例如通过洗涤)。
该方法可以包括在每种多核苷酸分析物的检测之间，去除来自任何结合的或未结合的读出探针的任何信号。这可以通过例如漂白或淬灭信号来完成。
一方面，提供了一种试剂盒，其包含一对如本文所定义的非天然存在的核酸探针或如本文所定义的文库。该试剂盒还可以包括用于检测与多核苷酸分析物结合的核酸探针的桥式探针。可以标记桥式探针，以实现对分析物的检测或测量。备选地，该试剂盒还可以包括与桥式探针结合的读出探针。该试剂盒任选地还包括用于检测样品中一种或多种多核苷酸分析物的说明书、一种或多种缓冲溶液(例如，稀释液、杂交缓冲液和/或洗涤缓冲液)、包含一种或多种多核苷酸分析物的参照细胞。
在一个实施方案中，提供了一种执行基于阵列的测定的方法。本文还提供了基于阵列的测定。术语“阵列”涵盖术语“微阵列”，并且指的是呈现为用于与核酸等结合的有序阵列。“阵列”包括带有核酸，特别是寡核苷酸或其合成模拟物等的空间可寻址区域的任何二维或基本上二维(以及三维)排列。
本文提供了一种进行多重荧光原位杂交(FISH)测定的方法。
本文提供了一种组合物，该组合物包含一对如本文所定义的非天然存在的核酸探针。
基本上，可以使用如本文所定义的核酸探针来检测和鉴定基于细胞核酸含量(一种或多种核酸的存在、不存在、表达水平或拷贝数)可以进行区分的任何类型的细胞，以检测多核苷酸分析物的合适选择。例如，细胞可以是循环肿瘤细胞、病毒感染细胞、母体血液中的胎儿细胞、生物样品(例如，血液或其它体液)中的细菌细胞或其他微生物、内皮细胞、前体内皮细胞或血液中的心肌细胞、干细胞或T细胞。如有必要，可以在实施该方法之前通过本领域已知的方法富集罕见细胞类型(例如，裂解红细胞、分离外周血单核细胞、通过磁性激活细胞分选术(MACS)进一步富集罕见靶细胞等)。这些方法任选地与其他技术相结合，例如核DNA的DAPI染色。显然，多种不同类型的核酸标志物任选地通过这些方法同时检测，并用于鉴定细胞。例如，可以基于细胞中一种核酸靶标的存在或相对表达水平以及细胞中另一种核酸靶标的不存在来鉴定细胞；例如，可以通过在肿瘤细胞中发现而在血细胞中没有发现(或发现处于不同水平)的一种或多种标志物的存在或水平来鉴定循环肿瘤细胞，并且可以通过存在于血细胞而非循环肿瘤细胞中的一种或多种标志物的不存在来确认其身份。该原理可以扩展到使用任何其他类型的标志物，例如单细胞中基于蛋白质的标志物。
本文提供了诊断疾病的方法。该疾病可能是癌症、或病毒或细菌感染或者由于存在缺陷基因而导致的遗传病症。该方法可以包括检测从受试者获得的样品中是否存在一种或多种多核苷酸分析物。本文还提供了在检测到疾病之后治疗疾病的方法。
“受试者”或“患者”意指期望治疗的任何单个主体，包括人、牛、马、猪、山羊、绵羊、狗、猫、豚鼠、兔、鸡、昆虫等。还拟将下列作为受试者，即包括参与临床研究试验但未显示出疾病的任何临床迹象的任何受试者，或参与流行病学研究的受试者，或用作对照的受试者。
可使用如本文所定义的核酸探针来检测一种或多种与癌症相关的多核苷酸分析物，例如编码过表达或突变的多肽生长因子(例如，sis)、过表达或突变的生长因子受体(例如，erb-B1)、过表达或突变的信号转导蛋白如G蛋白(例如，Ras)或非受体酪氨酸激酶(例如，abl)、或过表达或突变的调节蛋白(例如，myc、myb、jun、fos等)和/或类似物的多核苷酸分析物。一般来说，癌症通常与信号转导分子和相应的癌基因产物有关，例如编码Mos、Ras、Raf和Met的核酸；以及转录激活因子和抑制因子，例如p53、Tat、Fos、Myc、Jun、Myb、Rel和/或核受体。对于循环肿瘤细胞(CTC)的检测，已知多种合适的多核苷酸分析物。例如，用于CTC检测的多重标志物组可以包括一种或多种以下标志物：上皮细胞特异性(例如，CK19、Muc1、EpCAM)、作为阴性选择的血细胞特异性(例如，CD45)、肿瘤起源特异性(例如，用于前列腺癌的PSA、PSMA、HPN和用于乳腺癌的mam、mamB、her-2)、增殖潜力特异性(例如，Ki-67、CEA、CA15-3)、凋亡标志物(例如，BCL-2、BCL-XL)和用于转移、遗传和表观遗传变化的其他标志物。
类似地，可以通过如本文定义的核酸探针来检测来自致病性或感染性生物体的一种或多种多核苷酸分析物，例如，用于感染性真菌，如曲霉属(Aspergillus)或假丝酵母菌属(Candida)物种；细菌，尤其是大肠杆菌(E.coli)，它可作为致病细菌的模型(当然，其中某些菌株是致病性的)，以及医学上重要的细菌诸如葡萄球菌(Staphylococci)(如金黄色葡萄球菌(aureus))或链球菌(Streptococci)(如肺炎链球菌(pneumoniae))；原生动物诸如孢子虫类(sporozoa)(如疟原虫(Plasmodia))、根足虫类(rhizopods)(如阿米巴原虫(Entamoeba))和鞭毛虫类(锥虫属(Trypanosoma)、利什曼虫属(Leishmania)、毛滴虫属(Trichomonas)、贾第鞭毛虫属(Giardia)等)；病毒诸如(+)RNA病毒(示例包括痘病毒，如痘苗病毒；小RNA病毒，如脊髓灰质炎病毒；披盖病毒，如风疹病毒；黄病毒属，如HCV；和冠状病毒)、(-)RNA病毒(例如，杆状病毒(Rhabdovirus)，如VSV；副粘病毒，如RSV；正粘病毒，如流感病毒；布尼亚病毒；和沙粒病毒)、dsDNA病毒(例如，呼肠孤病毒)、RNA到DNA病毒，即逆转录病毒例如HIV和HTLV，以及某些DNA到RNA病毒，如乙型肝炎病毒。
可以使用如本文所述的核酸探针在染色体水平上检测基因扩增或缺失事件，例如可以检测改变的或异常的表达水平。一些多核苷酸分析物包括经受这种扩增或缺失影响的癌基因或肿瘤抑制基因。示例性核酸靶标包括整联蛋白(例如，缺失)、受体酪氨酸激酶(RTK；例如，扩增、点突变、易位或表达增加)、NF1(例如，缺失或点突变)、Akt(例如，扩增、点突变或表达增加)、PTEN(例如，缺失或点突变)、MDM2(例如，扩增)、SOX(例如，扩增)、RAR(例如，扩增)、CDK2(例如，扩增或表达增加)、细胞周期蛋白D(例如，扩增或易位)、细胞周期蛋白E(例如，扩增)、Aurora A(例如，扩增或表达增加)、P53(例如，缺失或点突变)、NBS1(例如，缺失或点突变)、Gli(例如，扩增或易位)、Myc(例如，扩增或点突变)、HPV-E7(例如，病毒感染)和HPV-E6(例如，病毒感染)。
如果将多核苷酸分析物用作参照，则合适的参照核酸已在本领域中类似地描述或可以测定。例如，本领域已知在各种肿瘤细胞中其拷贝数保持稳定的多种基因。其转录本可以在基因表达分析中作为参照的管家基因包括，例如18S rRNA、28S rRNA、GAPD、ACTB和PPIB。
本文提供了一种对样品中一种或多种多核苷酸分析物的表达进行检测或可视化的方法，该方法包括a)使样品与如本文所定义的文库接触，和b)在该一种或多种多核苷酸分析物存在的情况下，基于与独特桥式探针的杂交来对每种多核苷酸分析物的表达进行检测或可视化。
该方法可以包括检测样品中mRNA的存在或水平。
样品可以是细胞或组织样品。
在整个本说明书中，除非上下文另有要求，否则词语“包含”或变型诸如“包括”或“含有”，将被理解为意味着包含所述要素或整数或方法步骤或者要素或整数或方法步骤的组，但并不排除任何其他要素或整数或方法步骤或者要素或整数或方法步骤的组。
除非上下文中另有明确规定，如本说明书所用的，单数形式的“一个(a)”、“一种(an)”和“所述或该(the)”包括复数方面。因此，例如，提及“一种方法”包括单个方法，以及两个/种或更多个/种方法；提及“一种作用剂”包括单个作用剂，以及两个/种或更多个/种作用剂；提及“本公开”包括本公开所教导的单个和多个方面；诸如此类。术语“发明”涵盖了本文所教导和实现的方面。本发明的“形式”涵盖了本文所设想的任何变体和衍生物。
实施例
材料和方法
分离式FISH文库设计。使用先前公布的算法来鉴定靶向区域(25-nt序列对，在对之间具有2-nt的间隔)。首先，从GENCODE网站下载参照转录本序列(分别为人类v24和小鼠m4)。使用15-nt种子区计算特异性表，并使用0.2的特异性截留值。将四重重复序列('AAAA'、'TTTT'、'GGGG'和'CCCC')、KpnI限制性位点(‘GGTACC’(SEQ ID NO:1)和‘CCATGG’(SEQ ID NO:2))和EcoRI限制性位点('GAATTC'(SEQ ID NO:3)和'CTTAAG'(SEQ ID NO:4))从可能的靶区域排除。然后，右侧靶向区域对与右侧桥式序列(例如，‘CactctaCC TAT’(SEQID NO:5)，小写表示形成6-nt条形码的可变碱基，TAT是桥式序列和靶向区域之间的接头)连接。左侧靶向区域对与左侧桥式序列‘TAT ATTTAACCG’(SEQ ID NO:6)连接。最后，在探针每侧的两端引入KpnI和EcoRI限制性位点，以及正向和反向PCR引物。需要通过限制性消化去除PCR引物，以实现后续桥式序列的有效杂交。编码探针的列表可以见于表1。桥式序列的两侧是位于两端的读出序列。桥式序列的列表可以见于表3。所用的读出序列是‘/5Cy5/TTACTCACGCACCCATCA’(SEQ ID NO:7)和‘/5Alex750N/TTTCTCACGCTTTACAAT’(SEQ ID NO:8)。为了构建317个基因的组合文库，使用了“26选2”编码方案。325个可能的码字中有8个是空白，没有分配给任何基因(没有编码探针)，以作为估计假阳性背景水平的阴性对照。对于每个基因，将72对靶区域分成两个池。根据基因的“开”位，为每个池分配一个6-nt条形码。317个基因的文库的基因码本(codebook)分配可以见于表2。常规多重FISH探针和文库的设计如前所述。常规编码探针文库和读出序列分别可以见于表4和表5。常规码本可以见于表6。
探针扩增和制备。使用先前公布方案的略加修改版本来创建探针文库(TwistBioscience)。简言之，首先使用Phusion热启动Flex 2X主混物(NEB,货号:M0536L)通过限定循环PCR对寡聚体池进行扩增，退火温度为66℃，然后使用高产率体外转录试剂盒(NEB,货号:E2050S)进行过夜体外转录。在PCR期间，在反向引物上引入T7启动子序列。接下来，从RNA模板进行逆转录(ThermoFisher货号:EP0753)。然后使用碱性水解将RNA切割掉，留下ssDNA，随后通过旋转柱纯化(Zymo货号:C1016-50)对其进行纯化，并在无核酸酶水(Ambion,货号:AM9930)中洗脱。然后将与EcoRI和KpnI限制性位点互补的切除引物与ssDNA探针退火，再使用高保真酶(NEB货号:R3101M、R3142M)在37℃进行双重限制性消化16小时，以切割掉正向和反向引物。最后，使用旋转柱(Zymol,货号:C1016-50)或磁珠(BeckmanCoulter,货号:A63882)纯化ssDNA探针，并在无核酸酶水中洗脱。将探针干燥并储存在-20℃。用于PCR的引物是f‘AACGAACGGAGGGTCATTGG’(SEQ ID NO:9)和‘TAATACGACTCACTATAGGGAGGCTCTACTCGCATTAGGG’(SEQ ID NO:10)；用于限制性消化的引物是‘TACTCGCATTAGGGGAATTCNN’(SEQ ID NO:11)和‘NNGTACCCCAATGACCCTCCGT’(SEQ ID NO:12)。
细胞培养样品制备。将人包皮成纤维细胞(
CRL-2097TM)、人A549(
CCL-185TM)和AML12(
CRL-2254TM)细胞培养在补充有10％胎牛血清(Thermofisher,货号:26140079)的Dulbecco高葡萄糖改良Eagles培养基(HycloneTM货号:SH30022.01)中。将A549细胞培养在DMEM/F12 1:1中，补充有10％胎牛血清。在6孔板中，对于XLOC_010514和MUC5AC实验，细胞生长在22mm x 22mm的1号盖玻片(Marienfeld-Superior货号:0101050)上，或者对于FLNA实验，细胞生长在40mm直径的1号盖玻片(WarnerInstruments货号:64-1500)上。细胞生长至约80％汇合后，将细胞在溶于1xPBS的4％ V/V多聚甲醛(Electron Microscopy Sciences货号:15714)中室温固定15分钟。固定后，将样品在室温在0.1M甘氨酸(1st BASE)中淬灭1分钟。然后在4℃将细胞在70％乙醇中透化过夜。
组织样品制备和盖玻片官能化。所有动物护理和实验均遵循新加坡科技研究局(A*STAR)机构实验动物护理与使用委员会(IACUC)的指南执行。根据先前公布方案3的略加修改版本来进行盖玻片官能化和组织处理。简言之，在超声波水浴中用1M KOH清洁盖玻片(Warner Instruments货号:64-1500)20分钟，用MilliQ水冲洗三次，然后用100％甲醇冲洗。然后，在室温将盖玻片浸入氨基硅烷溶液(溶于甲醇中的3％ V/V(3-氨丙基)三乙氧基硅烷[MERCK货号:440140]、5％ V/V乙酸[Sigma货号:537020])中2分钟，然后用MilliQ水冲洗三次并风干。然后，可以立即使用官能化盖玻片，或者将其储存在室温下的干燥脱水的环境中数周。组织学工作由新加坡A*STAR的IMCB高级分子病理学实验室完成。简言之，用氯胺酮对8周龄的C57BL/6NTac小鼠(InVivos)实施安乐死，快速收获肾脏、肝脏、脑和卵巢，切成小块，立即冷冻在最佳切割温度(Optimal Cutting Temperature)化合物(Tissue-TekO.C.T.；VWR,25608-930)中，并储存在-80℃。利用冷冻切片机将新鲜冷冻组织的7μm切片切到官能化盖玻片上。将切片在室温风干5分钟，然后在溶于1x PBS的4％ V/V多聚甲醛中固定15分钟。固定后，用1x PBS冲洗样品一次，并在4℃在70％乙醇中透化过夜或在-80℃储存。
XLOC_010514、MUC5AC和FLNA实验。透化后，将培养的细胞平衡至室温，然后在2x柠檬酸钠盐水(SSC,Axil Scientific货号:BUF-3050-20X1L)中再水化5分钟。将样品在室温在含有10％去离子甲酰胺(AmbionTM货号:AM9342、AM9344)和2x SSC的10％甲酰胺洗涤缓冲液中孵育30分钟。将分离式探针在10％杂交缓冲液中稀释至每种探针20nM的终浓度。10％杂交缓冲液由2x SSC中10％去离子甲酰胺(V/V)和10％硫酸葡聚糖(Sigma货号:D8906)(W/V)构成。将编码探针在加湿室中于37℃染色过夜。在编码探针杂交后，将样品在10％甲酰胺洗涤缓冲液中洗涤两次，每次洗涤在37℃孵育15分钟。然后将样品从10％甲酰胺洗涤缓冲液中取出，并用桥式探针或常规读出探针染色。将探针在10％杂交缓冲液中稀释至10nM的浓度，并在室温染色20分钟。然后在室温用10％甲酰胺洗涤缓冲液洗涤细胞一次，然后用2xSSC洗涤两次。在室温将DAPI(Sigma货号:D9564)在2x SSC中以1μg/mL的浓度染色10分钟。然后将样品用2x SSC洗涤两次，并立即成像或者于4℃在2x SSC中储存不超过12小时，然后再成像。XLOC_010514、MUC5AC和FLNA序列的列表分别可以见于表7、表8和表9。
组织中的多重FISH实验。如上所述对组织样品进行染色，其在杂交和洗涤缓冲液中使用20％的甲酰胺浓度而不是10％。对于组织样品，预杂交也在37℃在20％甲酰胺洗涤缓冲液中延长至3小时。将样品在20％杂交缓冲液中以500μM的最终探针浓度(比常规实验中使用的浓度高2至3倍)染色过夜或更长时间。在两次20％甲酰胺洗涤后，将样品用2x SSC洗涤两次，并立即成像或者于4℃在2x SSC中储存不超过1周，然后再成像。
分离式FISH成像循环。然后将样品安装在流动室(Bioptechs货号:FCS2)中，流动室固定在显微镜载物台上。通过由定制的计算机控制的液流系统控制的缓冲液置换，在流动室中依序地完成桥式和读出探针的杂交。如前所述，该系统由三个用于缓冲液选择的菊链式八通阀和一个为流体流动提供驱动力的蠕动泵组成。桥式探针溶液在10％杂交缓冲液中含有5nM的每种桥式序列。将样品在室温在溶液中孵育10分钟。接下来，将10％杂交缓冲液中的5nM荧光标记的读出探针流入该室，并在室温再孵育10分钟。杂交后，用10％甲酰胺洗涤缓冲液洗涤样品以去除未结合的探针。然后，成像缓冲液流入该室，之后采集图像。成像缓冲液由下列成分组成，即2x SSC、50mM Tris-HCl pH8、10％葡萄糖、2mM Trolox(Sigma,货号:238813)、0.5mg/ml葡萄糖氧化酶(Sigma,货号:G2133)和40μg/ml过氧化氢酶(Sigma,货号:C30)。为了去除荧光信号，用40％甲酰胺洗涤缓冲液洗涤样品。重复这种杂交和洗涤循环，直到所有的位都成像。采用双色成像，在13个循环内完成了26位。如前所述，使用常规探针进行133个基因(修正汉明距离为4)多重FISH成像。常规探针文库与批量RNA-seq相关性良好(图11)。
成像设置1。XLOC_010514和MUC5AC实验是使用定制显微镜进行的，该显微镜基于下列而构建，即Nikon Ti-E镜体、MS-200ASI X-Y载物台、CFI Plan Apoλ100×1.45N.A.油浸物镜和Andor iXon Ultra 888EMCCD摄像头。DAPI由405nm(LuxX,405-20)激发，而Cy5由638nm(LuxX,638-100)固态激光器(Omicron)激发。对于5个不同Z位置，对于每次激光激发获得了相距400nm的Z轴层切扫描(Z-stacks)。曝光时间为1秒。
成像设置2。FLNA和多重FISH实验是使用第二定制显微镜进行的，该显微镜基于下列而构建，即Nikon Ti2-E镜体、Marzhauser SCANplus IM 130x85电动X-Y载物台、NikonCFI Plan Apoλ60x 1.4N.A.油浸物镜和Andor Sona4.2B-11sCMOS摄像头。使用Nikon完美聚焦系统保持聚焦，每个循环每个视野只对一个Z位置进行成像。DAPI通道由相干Obis 405100mW激光器激发。以下两台光纤激光器来自MPB Communications：2RU-VFL-P-1000-647-B1R(1000mW)、2RU-VFL-P-500-750-B1R(500mW)，分别用作Cy5(647nm)和Alexa750(750nm)的照射源。将所有激光通道组合并发射到Newport F-SM8-C-2FCA光纤中。使用AdlOptica6_6系列π整形器对所产生的光束进行准直化和平顶化，然后进行扩展，接着发送到Ti-2后端口附近的300mm透镜，以照射大约230um x 230um的视野。使用了定制多波长滤光片ZET488/532/592/647/750m(Chroma)和ZT488/532/592/647/750rpc-UF2(Chroma)。将包含FF01-433/24-32、FF02-684/24-32和FF01-776/LP-32发射滤光片(Semrock)的FingerLakes Instrumentation HS-632高速滤光片转盘连接到显微镜和摄像头之间的输出端口，从而允许在对各自通道进行成像时使用不同的发射滤光片。曝光时间为500ms。
图像分析。多重FISH图像由自定义Python pipeline处理，遵循先前公布的方法，但修改了预处理、基因标注(callout)过滤和嵌合体拼接程序。简言之，首先对来自每个杂交循环的图像进行场失真和彩色失真校正。然后，利用Scikit-image软件包中提供的亚像素级图像配准算法，通过相位相关性相对于Cy5通道中的选中帧对图像进行平移配准。对于每个数据集，通过汇集每个视野中强度高于第99.9百分位数的所有像素，然后将所汇集像素强度的第50百分位数作为该位的标准化值，来执行全局按位标准化。使用二阶2D带通巴特沃兹滤光片在频域中过滤图像，以去除细胞背景(低频截留点)和摄像头噪声(高频截留点)。然后，将每个对齐像素的n维向量(其中n是位的数量)除以其幅值(L2范数)，将其标准化为单位长度。对这组基因中的每个码字进行相同的标准化。然后计算从像素向量到每个基因的码字的欧氏距离。根据到基因码字的最大欧氏距离(距离阈值)，对所有像素进行过滤，对于常规FISH使用0.52的阈值，而对于分离式FISH使用0.33的阈值。将每个像素向量的L2范数用作第二过滤器(幅度阈值)，以去除强度过低的被调用像素。然后，对于每个基因，将调用和过滤的像素分组为连通区域(四个连通邻域)。只有1个像素的区域要经历第二次更严格强度阈值的过滤。选定产生与批量FPKM计数具有良好相关性和高基因计数的参数集。然后将跨越所有视野中每个基因的区域数相加，并且通过计算皮尔逊相关性，将每个基因的总计数与各自的FPKM值进行比较。来自小鼠组织的批量RNA测序的FPKM值是从ENCODE门户网站(https://www.encodeproject.org/)下载的，具有以下标识符：ENCSR000BZC(卵巢)、ENCFF478QMU(肾脏重复1)、ENCFF638NYA(肾脏重复2)、ENCFF844MJF(肝脏重复1)、ENCFF271DWG(肝脏重复2)、ENCFF653BKJ(额叶皮层重复1)和ENCFF703SOK(额叶皮层重复2)。AML12细胞系的FPKM值是通过在内部进行批量RNA测序获得的。简言之，使用分离物IIRNA小提试剂盒(Bioline)提取RNA，在新加坡A*STAR的GIS下一代测序平台上进行测序，并使用Salmon分析序列。表10中列出了用于皮尔逊相关性分析的FPKM值(或者如果组织有测序重复，则是它们的均值)列表。使用DAPI和RNA图像对细胞进行人工计数。对于分离式FISH文库，对于AML-12、脑、肝脏、卵巢和肾脏实验分别对789、4043、7484、13405和26001个细胞进行成像。对于常规文库，对于AML-12、脑和肝脏实验分别对1382、2581和2729个细胞进行成像。如前所述，MUC5AC和FLNA实验(参见图3和图7)的亮度和斑点计数分析是使用多重高斯拟合算法完成的。对于组织样品中的嵌合拼接，使用来自Scikit-Image的相位相关性算法并加以改进来估算相邻视野(FOV)对齐，以输出相位相关性峰值幅度的值，这指示配准精度。生成了以FOV为顶点和边缘(通过相位相关性峰值的负数加权)的图形。然后，通过计算最小生成树(SciPy)并相应地移动每个视野来拼接整个嵌合体。使用最大强度投影混合重叠区域。
实施例1
首先，针对A549细胞中的MUC5AC转录物，使用单分子FISH对分离式探针序列进行优化(图1)。据推断，桥式探针和任一编码探针之间的互补序列的长度必须比常规多重FISH中的长度更短，以防止任何单个和非配对的脱靶编码探针与读出探针结合。因此，对分离桥式序列的长度进行了标定，发现需要9个或更少的核苷酸来产生几乎无法检测到的非特异性背景信号水平(图1)。进一步筛选了几种配对方案，包括环形、十字形、双“C”形和双“Z”形(图3)，结果发现环形构建体产生最亮的在靶信号。它的平均亮度比双“Z”形构建体高约4.7倍。重要的是，环形构建体方案产生的信号强度与常规读出方案相当，表明RNA亮度并未因消除非特异性探针结合而受到损害。为了进一步测试优化的分离式探针构建体，对长的非编码RNA XLOC_010514进行了单分子FISH，已知其中一种探针与细胞核内的脱靶物非特异性结合，这在以前的研究中已经得到证明(图5)。分离式探针方法成功地抑制了由非特异性结合产生的信号，这表明无需去除或甚至事先知道非特异性“扰乱”序列。
接下来，本发明人专注于优化分离式FISH工作流程(图6a)。研究发现，用于寡聚体文库扩增的引物阻碍了邻接探针对的环化，因此引入了与引物序列相邻的限制性位点，从而允许通过限制性消化将引物切割掉(图2)。还观察到，不同的桥式探针序列产生不同的RNA斑点亮度。因此，筛选了几个序列，并选定了在10分钟的杂交时间内产生最高亮度的序列。通过优化设计，本发明人能够进行杂交和洗涤的多次迭代(至少20轮)，而未出现任何可观察到的FISH信号或RNA计数损失(图7)。
然后在小鼠细胞培养和小鼠组织切片中，将分离式FISH的性能与常规多重FISH进行比较。为了证明RNA的组合标记，随机选择317个基因作为靶标，并设计了26个条形码化桥式序列。通过将两个所需的条形码中的每一个分配给可用编码探针的一半(表1)，设计了“N选2”条形码化方案(表2)。与用常规探针文库染色的样品相比，用分离式探针文库染色的样品显示出非特异性背景降低(估计为所有原始图像的中位值)，在培养的小鼠肝细胞中约为16％(AML12,图8b、c)，在脑组织切片中约为44％(图8d、e)。在AML12中检测到的RNA数量与批量RNA-seq(对数皮尔逊相关性为0.7)和常规多重FISH(10种常见基因，对数皮尔逊相关性为0.97)有较好的相关性(图5a)。AML12中的平均假阳性率(使用每个细胞检测到的空白码字数量来估计)(每个细胞0.13±0.015，S.E.M.，n＝8个重复)与之前报道的在清理的U-2OS细胞系样品中使用常规多重FISH时的假阳性率(每个细胞0.08±0.03)相当。
为了证明分离式FISH在没有任何组织特异性清理的情况下仍能稳健运行，对317个基因使用了相同的探针组，并对另外三种小鼠组织—肾脏、肝脏和卵巢进行了分离式FISH成像。来自所有组织的转录本计数也与批量RNA-seq结果密切相关，对数皮尔逊相关性值为0.54至0.75(图5b)。洗涤后拍摄的图像也证实了脱靶结合是背景信号的主要贡献者，相比之下，在我们的检测通道中组织自体荧光微不足道(图9)。脑、肾脏、肝脏和卵巢中分离式FISH的平均假阳性率分别为每个细胞0.012±0.002、0.0042±0.0004、0.008±0.003和0.03±0.009(S.E.M.，n＝8个重复)。事实上，与常规多重FISH相比(Welch氏t检验，p值分别为0.020和0.014，图5a)，假阳性率降低了约44倍(在脑组织中)和约19倍(在肝脏组织中)，尽管采用了具有较低汉明距离的条形码化方案。这证实了非特异性探针结合促成了假阳性信号。
对于成像的每种组织类型，观察到单细胞转录组的多种定位模式。例如，发现Map4转录本在额叶皮层的神经突中高度富集(图10a)，并且发现Ahnak主要排布在肝脏的门静脉中(图10d)。肾脏组织中某些转录本(例如，Osbpl8、Ppl和Notch 3)的不同分带模式(图10b)表明先前通过单分子FISH在肝脏中观察到的空间分工。一些转录本，诸如Slc12a7、Plxnc1和Dsp，在小鼠卵巢中高度区室化，可能对应于滤泡的不同成熟阶段(图10c)。在小鼠肝脏组织中，发现Son和Abcc2的转录本高度定位到细胞中的核中，这突显了多重FISH区分组织样品中亚细胞特征的能力。
总之，本发明人展示了在多种小鼠组织中对317种基因进行精确的多重FISH，而不需要进行组织清理，这证明了分离式FISH的实力，不仅在简化多重FISH的组织制备方案方面，而且在拓宽可使用组织类型范围方面。
表1：317种基因的分离式文库模板序列。模板序列包括文库扩增所需的正向和反向引物序列。1个靶基因的模板序列如下所示。
表2 317个基因的分离式探针文库中每个基因的码本。分配给317个基因的分离式探针文库中每个基因的二进制码字。
表3 317个基因的分离式探针文库中每个位的桥式序列。每个桥式序列由三个块组成(由空格分隔)：中间是一个分离式探针结合块，两侧是两个读出结合块。在分离式探针结合块中，条形码序列为小写。示出了在AML-12、肾脏、额叶皮层和肝脏实验中使用的桥式序列。B1至B13由Alexa750读出，而B14至B26由Cy5读出。对于卵巢实验，B1、B3、B8至B13、B15和B17至B20由Cy5读出，而B2、B4至B7、B14、B16和B21至B26由Alexa750读出。
| 位 | 桥式序列 |
| B1 | ATTGTAAAGCGTGAGAAA GGgatagtgGCGGTTAAAT ATTGTAAAGCGTGAGAAA(SEQ ID NO:157) |
| B2 | ATTGTAAAGCGTGAGAAA GGtagagtgGCGGTTAAAT ATTGTAAAGCGTGAGAAA(SEQ ID NO:158) |
| B3 | ATTGTAAAGCGTGAGAAA GGattgaggGCGGTTAAAT ATTGTAAAGCGTGAGAAA(SEQ ID NO:159) |
| B4 | ATTGTAAAGCGTGAGAAA GGgtgtgggGCGGTTAAAT ATTGTAAAGCGTGAGAAA(SEQ ID NO:160) |
| B5 | ATTGTAAAGCGTGAGAAA GGgtaagtgGCGGTTAAAT ATTGTAAAGCGTGAGAAA(SEQ ID NO:161) |
| B6 | ATTGTAAAGCGTGAGAAA GGtttggtgGCGGTTAAAT ATTGTAAAGCGTGAGAAA(SEQ ID NO:162) |
| B7 | ATTGTAAAGCGTGAGAAA GGaaggttgGCGGTTAAAT ATTGTAAAGCGTGAGAAA(SEQ ID NO:163) |
| B8 | ATTGTAAAGCGTGAGAAA GGtaatgggGCGGTTAAAT ATTGTAAAGCGTGAGAAA(SEQ ID NO:164) |
| B9 | ATTGTAAAGCGTGAGAAA GGaagaaggGCGGTTAAAT ATTGTAAAGCGTGAGAAA(SEQ ID NO:165) |
| B10 | ATTGTAAAGCGTGAGAAA GGagagttgGCGGTTAAAT ATTGTAAAGCGTGAGAAA(SEQ ID NO:166) |
| B11 | ATTGTAAAGCGTGAGAAA GGtggtttgGCGGTTAAAT ATTGTAAAGCGTGAGAAA(SEQ ID NO:167) |
| B12 | ATTGTAAAGCGTGAGAAA GGgagattgGCGGTTAAAT ATTGTAAAGCGTGAGAAA(SEQ ID NO:168) |
| B13 | ATTGTAAAGCGTGAGAAA GGattagggGCGGTTAAAT ATTGTAAAGCGTGAGAAA(SEQ ID NO:169) |
| B14 | TGATGGGTGCGTGAGTAA GGgtatgagGCGGTTAAAT TGATGGGTGCGTGAGTAA(SEQ ID NO:170) |
| B15 | TGATGGGTGCGTGAGTAA GGgaagttgGCGGTTAAAT TGATGGGTGCGTGAGTAA(SEQ ID NO:171) |
| B16 | TGATGGGTGCGTGAGTAA GGagatgtgGCGGTTAAAT TGATGGGTGCGTGAGTAA(SEQ ID NO:172) |
| B17 | TGATGGGTGCGTGAGTAA GGaggaaagGCGGTTAAAT TGATGGGTGCGTGAGTAA(SEQ ID NO:173) |
| B18 | TGATGGGTGCGTGAGTAA GGgagagggGCGGTTAAAT TGATGGGTGCGTGAGTAA(SEQ ID NO:174) |
| B19 | TGATGGGTGCGTGAGTAA GGtaaggtgGCGGTTAAAT TGATGGGTGCGTGAGTAA(SEQ ID NO:175) |
| B20 | TGATGGGTGCGTGAGTAA GGtgtttggGCGGTTAAAT TGATGGGTGCGTGAGTAA(SEQ ID NO:176) |
| B21 | TGATGGGTGCGTGAGTAA GGttgttggGCGGTTAAAT TGATGGGTGCGTGAGTAA(SEQ ID NO:177) |
| B22 | TGATGGGTGCGTGAGTAA GGagtgtagGCGGTTAAAT TGATGGGTGCGTGAGTAA(SEQ ID NO:178) |
| B23 | TGATGGGTGCGTGAGTAA GGtaggtagGCGGTTAAAT TGATGGGTGCGTGAGTAA(SEQ ID NO:179) |
| B24 | TGATGGGTGCGTGAGTAA GGttgtgtgGCGGTTAAAT TGATGGGTGCGTGAGTAA(SEQ ID NO:180) |
| B25 | TGATGGGTGCGTGAGTAA GGttggaagGCGGTTAAAT TGATGGGTGCGTGAGTAA(SEQ ID NO:181) |
| B26 | TGATGGGTGCGTGAGTAA GGttgagagGCGGTTAAAT TGATGGGTGCGTGAGTAA(SEQ ID NO:182) |
表4：133个基因的常规文库模板序列。模板序列包括文库扩增所需的正向和反向引物序列。用于PCR的引物是‘TGGTTCAATCGTATGCCCGT’(SEQ ID NO:183)和‘TAATACGACTCACTATAGGGGTCACTTAGCCAACGCCGAT’(SEQ ID NO:184)。
*由于表格太大，因此仅在此PDF中显示了第一个基因的模板序列。完整的序列表可以下载为excel文件。
表5：133个基因的常规文库中使用的针对16位中每个位的读出探针序列。
| 位 | 读出序列 |
| B1 | CGCAACGCTTGGGACGGTTCCAATCGGATC/3Cy5Sp/(SEQ ID NO:245) |
| B2 | CGAATGCTCTGGCCTCGAACGAACGATAGC/3Cy5Sp/(SEQ ID NO:246) |
| B3 | ACAAATCCGACCAGATCGGACGATCATGGG/3Cy5Sp/(SEQ ID NO:247) |
| B4 | CAAGTATGCAGCGCGATTGACCGTCTCGTT/3Cy5Sp/(SEQ ID NO:248) |
| B5 | GCGGGAAGCACGTGGATTAGGGCATCGACC/3Cy5Sp/(SEQ ID NO:249) |
| B6 | AAGTCGTACGCCGATGCGCAGCAATTCACT/3Cy5Sp/(SEQ ID NO:250) |
| B7 | CGAAACATCGGCCACGGTCCCGTTGAACTT/3Cy5Sp/(SEQ ID NO:251) |
| B8 | ACGAATCCACCGTCCAGCGCGTCAAACAGA/3Cy5Sp/(SEQ ID NO:252) |
| B9 | /5IRD800CWN/CGCGAAATCCCCGTAACGAGCGTCCCTTGC(SEQ ID NO:253) |
| B10 | /5IRD800CWN/GCATGAGTTGCCTGGCGTTGCGACGACTAA(SEQ ID NO:254) |
| B11 | /5IRD800CWN/CCGTCGTCTCCGGTCCACCGTTGCGCTTAC(SEQ ID NO:255) |
| B12 | /5IRD800CWN/GGCCAATGGCCCAGGTCCGTCACGCAATTT(SEQ ID NO:256) |
| B13 | /5IRD800CWN/TTGATCGAATCGGAGCGTAGCGGAATCTGC(SEQ ID NO:257) |
| B14 | /5IRD800CWN/CGCGCGGATCCGCTTGTCGGGAACGGATAC(SEQ ID NO:258) |
| B15 | /5IRD800CWN/GCCTCGATTACGACGGATGTAATTCGGCCG(SEQ ID NO:259) |
| B16 | /5IRD800CWN/GCCCGTATTCCCGCTTGCGAGTAGGGCAAT(SEQ ID NO:260) |
表6：133个基因的常规文库中每个基因的码本。分配给133个基因的常规文库中每个基因的二进制码字。
表7：XLOC_010514实验中使用的常规、分离式探针对和读出探针的探针序列(图4)。已知的脱靶序列以粗体显示。
XLOC常规探针序列
| XLOC_1 | CATTCCCAGGGACATTCATT TATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:261) |
| XLOC_2 | GATGACTTCTCTATCCCACTTATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:262) |
| XLOC_3 | GAAGTGCCTCGTCATTCTGGTATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:263) |
| XLOC_4 | GCTCCAGTAACTAGCTGACATATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:264) |
| XLOC_5 | AAGCCCAGGGGTACTCCTTATATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:265) |
| XLOC_6 | GGAGCCTTGTAAATACTGATTATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:266) |
| XLOC_7 | GCTGGAACCCTTAGGAAATATATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:267) |
| XLOC_8 | GAGAATGGCAAGAACTCCATTATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:268) |
| XLOC_9 | ATGAACAGGCAGAGGCTAGATATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:269) |
| XLOC_10 | TACTGATCTGAAGCAGCAGGTATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:270) |
| XLOC_11 | CAGACTAAAAGGAGGCCAGGTATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:271) |
| XLOC_12 | AGTGAATTGAGAATATGAGGTATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:272) |
| XLOC_13 | AGGATAGTAACTCAGTAGAATATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:273) |
| XLOC_14 | TGATAGGAGGCATTGTCATTTATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:274) |
| XLOC_15 | TTGTATCAAACCAAGTCTCTTATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:275) |
| XLOC_16 | ACGAGCAGTTGTATGTGAATTATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:276) |
| XLOC_17 | TTCCCCAGTTATAGAAATCATATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:277) |
| XLOC_18 | TATCTGGGGTAATGGAGACATATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:278) |
| XLOC_19 | CGAATTTCCTGCACTGGTAATATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:279) |
| XLOC_20 | TCAGGTTGTATGATATAGTGTATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:280) |
| XLOC_21 | ACTGTCTACTTCACCATTGATATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:281) |
| XLOC_22 | TAAAACATCCATTGCCCTGGTATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:282) |
| XLOC_23 | ACAGACCGGTTAACCATCCATATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:283) |
XLOC分离式探针序列
XLOC读出序列
| 名称 | 读出序列 |
| XLOC_Cy5_Readout | /5Cy5/GTAAGGGTT CGGTGGATA(SEQ ID NO:330) |
表8：MUC5AC实验中使用的探针序列(图1、2和3)。表格8a：图1中使用的非配对、配对(环形)和读出探针的序列。表格8b：用于图3的MUC5AC分离式探针构建体和读出探针的序列。表格8c：用于图2中动力学实验的MUC5AC分离式探针、常规探针、桥式探针和读出探针的序列。小写字母表示靶基因(MUC5AC)结合序列。大写字母表示3核苷酸接头和读出结合序列。
表8a
非配对分离式探针序列
| 名称 | 序列 |
| 12nt_Split_Probe_2 | acagggctgggagtagttccag TAT TATCCACCGAAC(SEQ ID NO:331) |
| 11nt_Split_Probe_2 | acagggctgggagtagttccag TAT TATCCACCGAA(SEQ ID NO:332) |
| 10nt_Split_Probe_2 | acagggctgggagtagttccag TAT TATCCACCGA(SEQ ID NO:333) |
| 9nt_Split_Probe_2 | acagggctgggagtagttccag TAT TATCCACCG(SEQ ID NO:334) |
| 8nt_Split_Probe_2 | acagggctgggagtagttccag TAT ATCCACCG(SEQ ID NO:335) |
| 7nt_Split_Probe_2 | acagggctgggagtagttccag TAT TCCACCG(SEQ ID NO:336) |
配对(环形)分离式探针序列
| 名称 | 序列 |
| 9nt_Split_Probe_1 | AACCCTTAC TAT agaggttgtgctggtggtggga(SEQ ID NO:337) |
| 9nt_Split_Probe_2 | acagggctgggagtagttccag TAT TATCCACCG(SEQ ID NO:338) |
| 8nt_Split_Probe_1 | AACCCTTA TAT agaggttgtgctggtggtggga(SEQ ID NO:339) |
| 8nt_Split_Probe_2 | acagggctgggagtagttccag TAT ATCCACCG(SEQ ID NO:340) |
| 7nt_Split_Probe_1 | AACCCTT TAT agaggttgtgctggtggtggga(SEQ ID NO:341) |
| 7nt_Split_Probe_2 | acagggctgggagtagttccag TAT TCCACCG(SEQ ID NO:342) |
读出序列
| 名称 | 读出序列 |
| 读出 | /5Cy5/GTAAGGGTT CGGTGGATA(SEQ ID NO:343) |
表8b
MUC5AC分离式探针构建体序列
MUC5AC分离式探针桥式序列
| 名称 | 读出序列 |
| Cy5_bridge | /5Cy5/GTAAGGGTT CGGTGGATA(SEQ ID NO:354) |
表8c
MUC5AC共定位Cy3探针序列
共定位读出序列
| 名称 | 读出序列 |
| Readout | /5Cy3/GGGATAGTGCGGTTAAAT(SEQ ID NO:430) |
表8d
动力学实验的探针序列
| 名称 | 序列 |
| MUC5AC_Left_1 | AACCCTTAC TAT agaggttgtgctggtggtggga(SEQ ID NO:431) |
| MUC5AC_Right_1 | acagggctgggagtagttccag TAT TATCCACCG(SEQ ID NO:432) |
| MUC5AC_Conventional | acagggctgggagtagttccag TATCCACCGAACCCTTAC(SEQ ID NO:433) |
动力学实验的桥式序列
| 名称 | 序列 |
| Bridge_1 | TGATGGGTGCGTGAGTAAGTAAGGGTTCGGTGGATATGATGGGTGCGTGAGTAA(SEQ ID NO:434) |
动力学实验的读出序列
| 名称 | 序列 |
| 桥式读出 | /5Cy5/TTACTCACG CACCCATCA(SEQ ID NO:435) |
| 常规读出 | /5Cy5/GTAAGGGTT CGGTGGATA(SEQ ID NO:436) |
表9FLNA实验中使用的探针序列(图2)。模板序列包括用于扩增模板序列的正向和反向引物序列。用于PCR扩增的引物是‘TACCATCTCGTGTTCGTACC’(SEQ ID NO:437)和‘TAATACGACTCACTATAGTTCGTTCCGCTACTCACCAC’(SEQ ID NO:438)。
FLNA分离式探针序列
FLNA分离式探针桥式序列
| 名称 | 桥式序列 |
| FLNA_bridge | ATTGTAAAGCGTGAGAAA GGTAATGGGCGGTTAAAT ATTGTAAAGCGTGAGAAA(SEQ ID NO:589) |
FLNA分离式探针读出序列
| 名称 | 读出序列 |
| Cy5_Readout | /5Cy5/TTTCTCACGCTTTACAAT(SEQ ID NO:590) |
表10分离式文库中317个基因在AML12、小鼠肾脏、肝脏、额叶皮层和卵巢中的参照FKPM值。
317个基因的分离式文库的参照FPKM
序列表
<110> Agency for Science, Technology and Research
<120> 核酸探针
<130> S61014488
<160> 595
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Kpn1限制位点
<400> 1
ggtacc 6
<210> 2
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Kpn1限制位点
<400> 2
ccatgg 6
<210> 3
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EcorR1限制位点
<400> 3
gaattc 6
<210> 4
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EcorR1限制位点
<400> 4
cttaag 6
<210> 5
<211> 12
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 文库设计
<400> 5
cactctacct at 12
<210> 6
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 文库设计
<400> 6
atttaaccg 9
<210> 7
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 读出序列
<400> 7
ttactcacgc acccatca 18
<210> 8
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 读出序列
<400> 8
tttctcacgc tttacaat 18
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物序列
<400> 9
aacgaacgga gggtcattgg 20
<210> 10
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物序列
<400> 10
taatacgact cactataggg aggctctact cgcattaggg 40
<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(22)
<223> n是a, c, g, 或t
<400> 11
tactcgcatt aggggaattc nn 22
<210> 12
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(2)
<223> n是a, c, g, 或t
<400> 12
nngtacccca atgaccctcc gt 22
<210> 13
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 13
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatggg ttactgccgg ctgcagcagc 60
cagaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 14
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 14
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatcgg aggcggaggc cgaggaggca 60
gcgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 15
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 15
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatagc agctccacgg gcttgaccgc 60
gcgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 16
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 16
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatgcg catgatgcgc tcgcgctcgg 60
cggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 17
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 17
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatggc tctttctacc tgtccgagaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 18
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 18
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatctg ttcctggcgg aagctcgagg 60
tggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 19
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 19
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatagt ggctcaggtc tccgaggctg 60
aagaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 20
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 20
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctattgg tgccgggcca gcatgagggc 60
gggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 21
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 21
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatcgc tgcttctctc gctcctcgcg 60
ctgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 22
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 22
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatctc ccgccgcagc agtccctgac 60
gcgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 23
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 23
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatgcg ccgcccgctg ggcgcgctcc 60
cggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 24
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 24
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatgct gctgccggac tcggcctcta 60
aggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 25
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 25
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatcgc gctcccgcag ctcccgggcg 60
cggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 26
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 26
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatgcc gtcgttctcc cgcccgcgcc 60
aggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 27
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 27
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatgtc ttcgtctctc tctaccttct 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 28
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 28
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatccg ggccgtggag cgagcgctct 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 29
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 29
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctataga gaggccacac ctggccatat 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 30
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 30
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctataat accatgtctg ccttctcagt 60
gcgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 31
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 31
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatcta cagggacctt cctcctccca 60
gcgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 32
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 32
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctataag atagagaggt aagtctggga 60
gagaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 33
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 33
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatggg aacaggataa tttgttcacg 60
tggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 34
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 34
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatctg gaggttggag ggcttccatt 60
aagaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 35
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 35
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatgaa ggtagctcta cttcgtaagg 60
cagaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 36
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 36
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatgca gccaaggatc ctaaattgtc 60
ttgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 37
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 37
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatctt caggtataag tgagagggta 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 38
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 38
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatgcc tcccaactcc aggtcaagaa 60
aggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 39
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 39
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatcca cacacacctt ggatgctaaa 60
tggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 40
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 40
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatgac tttccacctt ccctggtgaa 60
gagaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 41
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 41
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatcat tatctcacac gtgacaccta 60
aagaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 42
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 42
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatctg tcttagagac aacaccagtt 60
atgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 43
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 43
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctataat gctcatgctt tgaagtaagt 60
acgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 44
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 44
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatgtc ggtgaggact aagaaaggtg 60
acgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 45
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 45
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatccg tgtacggcaa ctgcaccttc 60
aggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 46
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 46
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatacg tcacatgtga ctctggatct 60
gagaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 47
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 47
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatata tggtctggaa cttgaaggta 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 48
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 48
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactc tacctatcta tctggtatgg gctgactcaa 60
tagaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 49
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 49
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgtct ctccatggga gactacgaac ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 50
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 50
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgctg ctgggctccc tgggcatcgg gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 51
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 51
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccggg cgcaggcctc cagagagcgg gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 52
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 52
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgcac tgctgcagtt tggccaggcg ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 53
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 53
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccggg cggaggccgg ctcctggcgg gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 54
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 54
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccagc gaagctcccg aaggctctcc ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 55
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 55
aacgaacgga gggtcattgg ggtacctgcg ggccgtgagc ggaaccagag ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 56
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 56
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccatct tgcggtcgcg ctcgggtacc ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 57
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 57
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccgcc gctgttcggc gcgcacgcgc ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 58
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 58
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccgcc agctcccgcc gccgctcctc gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 59
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 59
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccggac cagctccgcg cgctcccgcc ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 60
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 60
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgcgc ctcgtggcgc gcccgctcgg ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 61
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 61
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgttc ctgcagctgc tcgtagttct ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 62
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 62
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccctc caagtgcgcc tgatgctccc gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 63
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 63
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgttg gcacgctggg ccctctcctt ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 64
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 64
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccgcg cttcgccgtt ctcgagagag ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 65
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 65
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccagc acggtctgtc cagggcggct gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 66
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 66
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccatt aatggttcat tagtctggag atatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 67
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 67
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccttt ctattccaac ccaaagacac ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 68
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 68
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccttcc ctccgctgct gctacttaaa ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 69
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 69
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccaat tcacagtcta gcgatagctt ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 70
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 70
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccctaa gcagcctcac cgatccagcc ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 71
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 71
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccggct tctgtctgca ggagctggcc ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 72
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 72
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgaac gctgaactaa gtcacagagg gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 73
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 73
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgaat ttaaagaggg aagactcctt ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 74
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 74
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccacaa aggagaccaa caaataacac ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 75
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 75
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccatt tgtctgtgat gcactgccct gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 76
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 76
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccaagc tgacgggtgg atctgagtgg gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 77
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 77
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccagc tttcttctac acaagactcc ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 78
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 78
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccagc tcactgacaa ggaaattaag gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 79
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 79
aacgaacgga gggtcattgg ggtacctcaa gggtagaact ttccatggag gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 80
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 80
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccacct gaagtcgctc agtaaggtgg gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 81
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 81
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccccaa ggtgacagaa acaggaaata ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 82
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 82
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgagc ttctcaagac tgttccttct gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 83
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 83
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccttct tactgtcact aggtctgaat ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 84
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 84
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccatta tccatctact tcagcatcct ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 85
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 85
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctattct tctggcaccg ggtccaccat 60
aggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 86
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 86
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctataag agatcgaggt gcagcaacgg 60
aggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 87
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 87
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatcgc ctcgtaggcc tcgtacaggc 60
cggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 88
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 88
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatggc gggcgaggcc gggaggctgc 60
tggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 89
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 89
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatcgg actcggagct cagggcaccg 60
tcgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 90
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 90
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatggg ccgaagggcg gcccagtggg 60
ttgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 91
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 91
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatgct cggcgcgcac ttggcggacg 60
atgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 92
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 92
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctattgc tcccactggc cgtgggccgc 60
gggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 93
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 93
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatgcg ctcgcactgc tgctgccgcc 60
tcgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 94
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 94
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatctg ctcctgctgc agcttgcgca 60
gcgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 95
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 95
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatggc tcagctcgcg cttctcgcgc 60
tggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 96
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 96
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatgcg cgcggcccaa gctggcctcc 60
aggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 97
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 97
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatctt tgcgctcggc cgcttccttc 60
gcgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 98
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 98
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatcgc gccgggcctt ctgctgcaca 60
gcgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 99
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 99
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatctc actgcgctcc agcttgcgcc 60
cagaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 100
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 100
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatatt tgcggtccag gctggcatgt 60
aggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 101
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 101
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctattca tagtgtggca actggactgg 60
aggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 102
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 102
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctattgg atgtgggtag attgtgccat 60
gtgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 103
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 103
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctattct tgaacacaat tgttagaaag 60
atgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 104
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 104
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctataga cgagctgtgc tttcttggga 60
aagaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 105
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 105
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctattta ttatctgtag atgattgtct 60
aagaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 106
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 106
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatcat cagacactgc ctccacttac 60
gtgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 107
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 107
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctattcc agactgcatt caaggctgga 60
gcgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 108
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 108
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctataac aatagcacag ctccacacag 60
gcgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 109
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 109
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatagt gatgctttgg atccaagaga 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 110
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 110
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctattaa tgccagcaat ccatgtcacc 60
aggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 111
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 111
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctataac tgaaccttct gaccagggag 60
cggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 112
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 112
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctataga cacactaaca cgtctaatgc 60
aggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 113
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 113
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatgaa cccacccact caagaaacaa 60
gcgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 114
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 114
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctattca gaagcaaccc agggaccaca 60
aggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 115
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 模板序列
<400> 115
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctattcg ctcgcgtgct tcccagtgct 60
tggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 116
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 116
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatccg tcattctcgt ttgcacaaac 60
tagaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 117
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 117
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatcca aatcctgatg gtacattaca 60
ctgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 118
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 118
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctattta catagtggtt ctctcagtgt 60
ctgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 119
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 119
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatggt taggtataga gatgtgagcc 60
acgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 120
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 120
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccactt accctatgaa agaaacatga acatttcttt 60
aggaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 121
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 121
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgaac ctcgttcttt gttggagtcc ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 122
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 122
aacgaacgga gggtcattgg ggtacctgct cccgacgtcc accttctgcc ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 123
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 123
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccggcc acgcgcatgg agcggcccgg gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 124
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 124
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgctg ctgcagctgc tgctgctgcc ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 125
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 125
aacgaacgga gggtcattgg ggtacctccg gcgggagagc gagtccagcg atatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 126
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 126
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgtgc agacgacgcc gagcccgcgg gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 127
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 127
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgctc cacatgctgg gctgtctgcg gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 128
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 128
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccgct gctccagcaa caggcgctct ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 129
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 129
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccgcg gcctcgcgct cctcccggcc ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 130
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 130
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgtcg tcccgcgcgg cgcgttccac ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 131
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 131
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgttg gccctcttgc cgctctcggg ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 132
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 132
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccagct ccgcaggccc tcccgctcct ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 133
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 133
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgccg accctggagc tcctctctcc gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 134
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 134
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccttc ggccacctgc gccgcgtgct gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 135
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 135
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccggcc tgcagcagct cgcggcggcg gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 136
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 136
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgggc ctctcgcacc atgcggtcaa atatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 137
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 137
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgcct ggagtttggt caaggtgact atatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 138
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 138
aacgaacgga gggtcattgg ggtacctttc caaatggagt aagtctgtaa atatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 139
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 139
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccccaa ggcagctgtg gcagagagcc ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 140
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 140
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccttca agtcctgtgc aacttgtatt ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 141
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 141
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccagaa agccaaggga ctcaactgaa atatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 142
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 142
aacgaacgga gggtcattgg ggtacctcac cttccatgga agcctcatgg gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 143
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 143
aacgaacgga gggtcattgg ggtacctaag caagagtggc ctgggcaggc atatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 144
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 144
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccttct agcccttcag ccaccacagg ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 145
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 145
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgagg taccagaaga gttgatggcc ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 146
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 146
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccacaa actaggctaa cagctgtcct ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 147
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 147
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccttgg tattgcaagt accaagtacc ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 148
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 148
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccgtc tctaccctga ttcctttctt ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 149
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 149
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccagt acatagctcc tttcctggta ctatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 150
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 150
aacgaacgga gggtcattgg ggtacccaaa ggaccataat cacattaatt ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 151
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 151
aacgaacgga gggtcattgg ggtacctcag aacacccgat tgcctcctca atatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 152
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 152
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccgctc aggaaccatg atctcagttc ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 153
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 153
aacgaacgga gggtcattgg ggtaccacag tacggcgcag gagccatgga gtatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 154
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 154
aacgaacgga gggtcattgg ggtacctttg tcaacattct ggcctgggcc ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 155
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 155
aacgaacgga gggtcattgg ggtacctgtc caacttcagt agagtatcct atatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 156
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccdc177模板序列
<400> 156
aacgaacgga gggtcattgg ggtacctata caggtgattc tccttgcatt ttatatttaa 60
ccgaattccc ctaatgcgag tagagcct 88
<210> 157
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 157
attgtaaagc gtgagaaagg gatagtggcg gttaaatatt gtaaagcgtg agaaa 55
<210> 158
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 158
attgtaaagc gtgagaaagg tagagtggcg gttaaatatt gtaaagcgtg agaaa 55
<210> 159
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 159
attgtaaagc gtgagaaagg attgagggcg gttaaatatt gtaaagcgtg agaaa 55
<210> 160
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 160
attgtaaagc gtgagaaagg gtgtggggcg gttaaatatt gtaaagcgtg agaaa 55
<210> 161
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 161
attgtaaagc gtgagaaagg gtaagtggcg gttaaatatt gtaaagcgtg agaaa 55
<210> 162
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 162
attgtaaagc gtgagaaagg tttggtggcg gttaaatatt gtaaagcgtg agaaa 55
<210> 163
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 163
attgtaaagc gtgagaaagg aaggttggcg gttaaatatt gtaaagcgtg agaaa 55
<210> 164
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 164
attgtaaagc gtgagaaagg taatggggcg gttaaatatt gtaaagcgtg agaaa 55
<210> 165
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 165
attgtaaagc gtgagaaagg aagaagggcg gttaaatatt gtaaagcgtg agaaa 55
<210> 166
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 166
attgtaaagc gtgagaaagg agagttggcg gttaaatatt gtaaagcgtg agaaa 55
<210> 167
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 167
attgtaaagc gtgagaaagg tggtttggcg gttaaatatt gtaaagcgtg agaaa 55
<210> 168
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 168
attgtaaagc gtgagaaagg gagattggcg gttaaatatt gtaaagcgtg agaaa 55
<210> 169
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 169
attgtaaagc gtgagaaagg attaggggcg gttaaatatt gtaaagcgtg agaaa 55
<210> 170
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 170
tgatgggtgc gtgagtaagg gtatgaggcg gttaaattga tgggtgcgtg agtaa 55
<210> 171
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 171
tgatgggtgc gtgagtaagg gaagttggcg gttaaattga tgggtgcgtg agtaa 55
<210> 172
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 172
tgatgggtgc gtgagtaagg agatgtggcg gttaaattga tgggtgcgtg agtaa 55
<210> 173
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 173
tgatgggtgc gtgagtaagg aggaaaggcg gttaaattga tgggtgcgtg agtaa 55
<210> 174
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 174
tgatgggtgc gtgagtaagg gagaggggcg gttaaattga tgggtgcgtg agtaa 55
<210> 175
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 175
tgatgggtgc gtgagtaagg taaggtggcg gttaaattga tgggtgcgtg agtaa 55
<210> 176
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 176
tgatgggtgc gtgagtaagg tgtttgggcg gttaaattga tgggtgcgtg agtaa 55
<210> 177
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 177
tgatgggtgc gtgagtaagg ttgttgggcg gttaaattga tgggtgcgtg agtaa 55
<210> 178
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 178
tgatgggtgc gtgagtaagg agtgtaggcg gttaaattga tgggtgcgtg agtaa 55
<210> 179
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 179
tgatgggtgc gtgagtaagg taggtaggcg gttaaattga tgggtgcgtg agtaa 55
<210> 180
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 180
tgatgggtgc gtgagtaagg ttgtgtggcg gttaaattga tgggtgcgtg agtaa 55
<210> 181
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 181
tgatgggtgc gtgagtaagg ttggaaggcg gttaaattga tgggtgcgtg agtaa 55
<210> 182
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式序列
<400> 182
tgatgggtgc gtgagtaagg ttgagaggcg gttaaattga tgggtgcgtg agtaa 55
<210> 183
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物序列
<400> 183
tggttcaatc gtatgcccgt 20
<210> 184
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物序列
<400> 184
taatacgact cactataggg gtcacttagc caacgccgat 40
<210> 185
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 185
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt gtctgattca 60
aataagtcaa accacacctt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 186
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 186
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt acctgtgatt 60
gtaatagata ctatttcaaa ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 187
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 187
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt ggagctttcc 60
tgtaaactta atatacactg ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 188
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 188
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt aaggttcaga 60
cagtcttatc tctttccttt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 189
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 189
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt ggactaggag 60
atatagttat atatatattt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 190
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 190
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt agctggatcc 60
ttccttctaa gcagacacta ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 191
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 191
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt gagcgtatgc 60
acgcatgtgc aaatgcacat ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 192
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 192
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt caactggatc 60
tctacaacat ccatgcattt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 193
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 193
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt aatgaaatga 60
ttgagccatc taactttaaa ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 194
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 194
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt acattcgcct 60
tctctctctc tccctcttct ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 195
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 195
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt aaacccaaac 60
ccaacaacaa caacaacaaa gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 196
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 196
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt tgtgatctct 60
ttatcatgtg ccttacgaat gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 197
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 197
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt agacagtctt 60
tagtctggcc agcctctaaa gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 198
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 198
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt aatacaagtg 60
ttaggaaagg gtgtgtctaa gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 199
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 199
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt tattgttatt 60
tggtaggtgt ttcgatgttt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 200
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 200
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt atgaatgacc 60
aaatattact ttcaggtttc gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 201
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 201
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt tgcgcatcct 60
cccaagtgca caaaccataa gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 202
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 202
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt tgtgtttggc 60
aaactgagta gagtctcatt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 203
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 203
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt acaatcttgc 60
tatatacata gagaacattt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 204
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 204
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt ttccttgcat 60
cctagcaatt caagggttct gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 205
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 205
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt catcaccctt 60
ggcctttaaa gtgtgataaa cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 206
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 206
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt taaatgtaag 60
ataatgattc agttagttac cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 207
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 207
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt cttccctttc 60
tttgtcagta gataagccca cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 208
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 208
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt taagggaacc 60
attcataaac cacctctaca cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 209
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 209
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt agttggagag 60
aattaggtat tggataaagg cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 210
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 210
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt caaacaaggg 60
caagactaca tctgctacag cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 211
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 211
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt atttcaattg 60
ggcagtgaca tttagaattt cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 212
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 212
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt attattatga 60
ttaattagta caattaattt cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 213
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 213
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt aaatcaacag 60
gaaaccaaac aatcaacaaa cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 214
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 214
tggttcaatc gtatgcccgt cccatgatcg tccgatctgg tcggatttgt acaatttacc 60
tccatagcaa agtctacaaa cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 215
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 215
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc gactgagtcc 60
ttagcttgtc actaattagt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 216
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 216
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc aaacgaaatg 60
agactaggtg atagatcaac gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 217
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 217
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc attccttcct 60
acctatcttt atagttcttt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 218
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 218
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc acttcagatt 60
gggtgaagta ttgccaattt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 219
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 219
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc aatgtaatta 60
ctaaagaaag atataccatt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 220
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 220
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc cccagttgaa 60
tgcatccaac acatttccag gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 221
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 221
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc cagctagaca 60
agatgattag actctgtaaa gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 222
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 222
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc atactatagg 60
attaagcact agcattgaaa gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 223
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 223
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc tcaagtactt 60
tcttaaagaa acaatagcac gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 224
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 224
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc tcttaggctc 60
caggctttcg tttgttgttt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 225
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 225
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc agcaaaggat 60
cctgcggtga tgtggcattt cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 226
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 226
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc agtgtttagc 60
agtaggtaca atgtaaatat cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 227
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 227
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc taaataattg 60
agttggaagg ctgctgattt cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 228
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 228
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc ctggcggaag 60
gagagctaaa ggtgtccttt cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 229
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 229
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc tttacacaag 60
ttcactttgg gcaagagaaa cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 230
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 230
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc gagaacctca 60
ggcttgagaa ggaagaattt cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 231
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 231
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc catgtacaca 60
gacatgccac atttcacatt cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 232
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 232
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc acttccttct 60
gagtcttggg catgtcagtg cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 233
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 233
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc caaatgtctc 60
ctgccgtgtg acatgctggg cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 234
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 234
tggttcaatc gtatgcccgt ttagtcgtcg caacgccagg caactcatgc acttgtgagt 60
gacacatagt tgaaaggtgg cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 235
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 235
tggttcaatc gtatgcccgt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg taaatgtccc 60
tttctatcaa tcttgagtca cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 236
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 236
tggttcaatc gtatgcccgt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg taattaatta 60
ccctttaatg agagtggata cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 237
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 237
tggttcaatc gtatgcccgt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg agatgttaga 60
gcaatgtcac atttcaattt cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 238
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 238
tggttcaatc gtatgcccgt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg acagatctgg 60
agaaggccac ctatgtgttt cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 239
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 239
tggttcaatc gtatgcccgt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg ggagctacat 60
tgttagtggg ttatttacag cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 240
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 240
tggttcaatc gtatgcccgt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg cacagcttca 60
ccaataagaa cttggatatt cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 241
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 241
tggttcaatc gtatgcccgt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg ctttatcttc 60
aagaagtcac agaggcagat cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 242
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 242
tggttcaatc gtatgcccgt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg tagattataa 60
tggagagatg tattacattt cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 243
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 243
tggttcaatc gtatgcccgt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg aaggattgaa 60
ccagatatgg cttgttattt cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 244
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Igf1模板序列
<400> 244
tggttcaatc gtatgcccgt gtaagcgcaa cggtggaccg gagacgacgg agccatagcc 60
tgtgggcttg ttgaagtaaa cggccgaatt acatccgtcg taatcgaggc atcggcgttg 120
gctaagtgac 130
<210> 245
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 245
cgcaacgctt gggacggttc caatcggatc 30
<210> 246
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 246
cgaatgctct ggcctcgaac gaacgatagc 30
<210> 247
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 247
acaaatccga ccagatcgga cgatcatggg 30
<210> 248
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 248
caagtatgca gcgcgattga ccgtctcgtt 30
<210> 249
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 249
gcgggaagca cgtggattag ggcatcgacc 30
<210> 250
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 250
aagtcgtacg ccgatgcgca gcaattcact 30
<210> 251
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 251
cgaaacatcg gccacggtcc cgttgaactt 30
<210> 252
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 252
acgaatccac cgtccagcgc gtcaaacaga 30
<210> 253
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 253
cgcgaaatcc ccgtaacgag cgtcccttgc 30
<210> 254
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 254
gcatgagttg cctggcgttg cgacgactaa 30
<210> 255
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 255
ccgtcgtctc cggtccaccg ttgcgcttac 30
<210> 256
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 256
ggccaatggc ccaggtccgt cacgcaattt 30
<210> 257
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 257
ttgatcgaat cggagcgtag cggaatctgc 30
<210> 258
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 258
cgcgcggatc cgcttgtcgg gaacggatac 30
<210> 259
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 259
gcctcgatta cgacggatgt aattcggccg 30
<210> 260
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> readout probe
<400> 260
gcccgtattc ccgcttgcga gtagggcaat 30
<210> 261
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_1
<400> 261
cattcccagg gacattcatt tatccaccga acccttac 38
<210> 262
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_2
<400> 262
gatgacttct ctatcccact tatccaccga acccttac 38
<210> 263
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_3
<400> 263
gaagtgcctc gtcattctgg tatccaccga acccttac 38
<210> 264
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_4
<400> 264
gctccagtaa ctagctgaca tatccaccga acccttac 38
<210> 265
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_5
<400> 265
aagcccaggg gtactcctta tatccaccga acccttac 38
<210> 266
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_6
<400> 266
ggagccttgt aaatactgat tatccaccga acccttac 38
<210> 267
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_7
<400> 267
gctggaaccc ttaggaaata tatccaccga acccttac 38
<210> 268
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_8
<400> 268
gagaatggca agaactccat tatccaccga acccttac 38
<210> 269
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_9
<400> 269
atgaacaggc agaggctaga tatccaccga acccttac 38
<210> 270
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_10
<400> 270
tactgatctg aagcagcagg tatccaccga acccttac 38
<210> 271
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_11
<400> 271
cagactaaaa ggaggccagg tatccaccga acccttac 38
<210> 272
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_12
<400> 272
agtgaattga gaatatgagg tatccaccga acccttac 38
<210> 273
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_13
<400> 273
aggatagtaa ctcagtagaa tatccaccga acccttac 38
<210> 274
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_14
<400> 274
tgataggagg cattgtcatt tatccaccga acccttac 38
<210> 275
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_15
<400> 275
ttgtatcaaa ccaagtctct tatccaccga acccttac 38
<210> 276
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_16
<400> 276
acgagcagtt gtatgtgaat tatccaccga acccttac 38
<210> 277
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_17
<400> 277
ttccccagtt atagaaatca tatccaccga acccttac 38
<210> 278
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_18
<400> 278
tatctggggt aatggagaca tatccaccga acccttac 38
<210> 279
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_19
<400> 279
cgaatttcct gcactggtaa tatccaccga acccttac 38
<210> 280
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_20
<400> 280
tcaggttgta tgatatagtg tatccaccga acccttac 38
<210> 281
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_21
<400> 281
actgtctact tcaccattga tatccaccga acccttac 38
<210> 282
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_22
<400> 282
taaaacatcc attgccctgg tatccaccga acccttac 38
<210> 283
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_23
<400> 283
acagaccggt taaccatcca tatccaccga acccttac 38
<210> 284
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_1
<400> 284
aacccttact ataaattaac atgctcggcc ag 32
<210> 285
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_2
<400> 285
aacccttact ataattctcc ttgaagatca tt 32
<210> 286
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_3
<400> 286
aacccttact attcagacac aggtgcagat ag 32
<210> 287
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_4
<400> 287
aacccttact attccagtaa ctagctgaca tg 32
<210> 288
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_5
<400> 288
aacccttact atctgatgaa gtgattaagg ag 32
<210> 289
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_6
<400> 289
aacccttact ataattacac tgcctggcac at 32
<210> 290
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_7
<400> 290
aacccttact atagtgcctc agacactgcc tg 32
<210> 291
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_8
<400> 291
aacccttact attatccatg ggctgctgga ac 32
<210> 292
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_9
<400> 292
aacccttact attctgagaa tggcaagaac tc 32
<210> 293
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_10
<400> 293
aacccttact atgcagaggc tagagatgct ca 32
<210> 294
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_11
<400> 294
aacccttact atagcaggtc cacgcccagg tg 32
<210> 295
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_12
<400> 295
aacccttact atccatccaa ctgagttcat tc 32
<210> 296
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_13
<400> 296
aacccttact atgtagaaag agtgaattga ga 32
<210> 297
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_14
<400> 297
aacccttact attagatgat aggaggcatt gt 32
<210> 298
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_15
<400> 298
aacccttact atcgagcagt tgtatgtgaa tg 32
<210> 299
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_16
<400> 299
aacccttact atacatcctc cattgcaccg ca 32
<210> 300
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_17
<400> 300
aacccttact attcgaacga atttcctgca ct 32
<210> 301
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_18
<400> 301
aacccttact attttcaggt tgtatgatat ag 32
<210> 302
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_19
<400> 302
aacccttact attccacctc atggccacag ac 32
<210> 303
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_20
<400> 303
aacccttact attaacttga ttgtgatgat gg 32
<210> 304
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_21
<400> 304
aacccttact attttaggag ggaggaatta cc 32
<210> 305
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_22
<400> 305
aacccttact atacaaacaa atctatagtg at 32
<210> 306
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitLeft_23
<400> 306
aacccttact atccgtggtg gtttcggggc ag 32
<210> 307
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_1
<400> 307
gcgcggtggc tcacacctgt tattatccac cg 32
<210> 308
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_2
<400> 308
cccagggaca ttcatttgct tattatccac cg 32
<210> 309
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_3
<400> 309
atgacttctc tatcccactt tattatccac cg 32
<210> 310
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_4
<400> 310
gaagtgcctc gtcattctgg tattatccac cg 32
<210> 311
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_5
<400> 311
ccttgtaaat actgattaaa tattatccac cg 32
<210> 312
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_6
<400> 312
agtaggtgct caatgaattg tattatccac cg 32
<210> 313
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_7
<400> 313
gcacacagca ggtgctcaat tattatccac cg 32
<210> 314
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_8
<400> 314
ccttaggaaa taatagctag tattatccac cg 32
<210> 315
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_9
<400> 315
cattaactct cttctccaaa tattatccac cg 32
<210> 316
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_10
<400> 316
ttcctaaagg gatcaaataa tattatccac cg 32
<210> 317
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_11
<400> 317
cagattgtcc cagatgaaca tattatccac cg 32
<210> 318
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_12
<400> 318
tgatacctac tgatctgaag tattatccac cg 32
<210> 319
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_13
<400> 319
atatgaggaa tgagagtggg tattatccac cg 32
<210> 320
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_14
<400> 320
cattactagg atagtaactc tattatccac cg 32
<210> 321
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_15
<400> 321
cattgtatca aaccaagtct tattatccac cg 32
<210> 322
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_16
<400> 322
tatttgcttt ctgtattccc tattatccac cg 32
<210> 323
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_17
<400> 323
ggtaactagg tgaagaattt tattatccac cg 32
<210> 324
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_18
<400> 324
tgcctgacaa ctctccattt tattatccac cg 32
<210> 325
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_19
<400> 325
cggttaacca tccatataaa tattatccac cg 32
<210> 326
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_20
<400> 326
cttcacaggt gtacacagct tattatccac cg 32
<210> 327
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_21
<400> 327
aaagggcatg agaacacttt tattatccac cg 32
<210> 328
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_22
<400> 328
agaaagttgg tcagcggttt tattatccac cg 32
<210> 329
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_SplitRight_23
<400> 329
aagcccaggg gtactcctta tattatccac cg 32
<210> 330
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> XLOC_Cy5_Readout
<400> 330
gtaagggttc ggtggata 18
<210> 331
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 12nt_Split_probe_2
<400> 331
acagggctgg gagtagttcc agtattatcc accgaac 37
<210> 332
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 11nt_Split_probe_2
<400> 332
acagggctgg gagtagttcc agtattatcc accgaa 36
<210> 333
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 10nt_Split_probe_2
<400> 333
acagggctgg gagtagttcc agtattatcc accga 35
<210> 334
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 9nt_Split_probe_2
<400> 334
acagggctgg gagtagttcc agtattatcc accg 34
<210> 335
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 8nt_Split_probe_2
<400> 335
acagggctgg gagtagttcc agtatatcca ccg 33
<210> 336
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 7nt_Split_probe_2
<400> 336
acagggctgg gagtagttcc agtattccac cg 32
<210> 337
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 9nt_Split_probe_1
<400> 337
aacccttact atagaggttg tgctggtggt ggga 34
<210> 338
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 9nt_Split_probe_2
<400> 338
acagggctgg gagtagttcc agtattatcc accg 34
<210> 339
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 8nt_Split_probe_1
<400> 339
aacccttata tagaggttgt gctggtggtg gga 33
<210> 340
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 8nt_Split_probe_2
<400> 340
acagggctgg gagtagttcc agtatatcca ccg 33
<210> 341
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 7nt_Split_probe_1
<400> 341
aaccctttat agaggttgtg ctggtggtgg ga 32
<210> 342
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 7nt_Split_probe_2
<400> 342
acagggctgg gagtagttcc agtattccac cg 32
<210> 343
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 读出序列
<400> 343
gtaagggttc ggtggata 18
<210> 344
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Circular_probe_1
<400> 344
aacccttact atagaggttg tgctggtggt ggga 34
<210> 345
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Circular_probe_2
<400> 345
acagggctgg gagtagttcc agtattatcc accg 34
<210> 346
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Cruciform_probe_1
<400> 346
agaggttgtg ctggtggtgg gatataaccc ttac 34
<210> 347
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Cruciform_probe_2
<400> 347
tatccaccgt atacagggct gggagtagtt ccag 34
<210> 348
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Double_'C'_probe_1
<400> 348
agaggttgtg ctggtggtgg gatataaccc ttac 34
<210> 349
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Double_'C'_probe_2
<400> 349
acagggctgg gagtagttcc agtattatcc accg 34
<210> 350
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Double_'Z'_probe_1
<400> 350
agaggttgtg ctggtggtgg gatattatcc accg 34
<210> 351
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Double_'Z'_probe_2
<400> 351
acagggctgg gagtagttcc agtataaccc ttac 34
<210> 352
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Conventional_probe
<400> 352
tatccaccga acccttacag aggttgtgct ggtggtggga acagggctgg gagtagttcc 60
ag 62
<210> 353
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 阴性对照
<400> 353
aacccttact atagaggttg tgctggtggt ggga 34
<210> 354
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Cy5_bridge
<400> 354
gtaagggttc ggtggata 18
<210> 355
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_1
<400> 355
tgtccctcag cagcctctga tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 356
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_2
<400> 356
actcattgtg tggacggcgg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 357
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_3
<400> 357
tcctgggcat ggcctgtatg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 358
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_4
<400> 358
gtagctggat tcggaggagc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 359
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_5
<400> 359
ataggagaga gggcagggtg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 360
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_6
<400> 360
agatgggaag acagtcgccc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 361
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_7
<400> 361
ttggaggctc gtaccacagg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 362
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_8
<400> 362
ggtcttgtag tggaagctgc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 363
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_9
<400> 363
gaacacgtag ttgcagaggc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 364
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_10
<400> 364
aaatcctcgt aggcggcacc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 365
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_11
<400> 365
atgaggaccc tgctcagcgt tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 366
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_12
<400> 366
gatgaccacg ccatccacct tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 367
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_13
<400> 367
ttgaccagga cggagccctt tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 368
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_14
<400> 368
agactggctg aagggcagca tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 369
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_15
<400> 369
tgctctgctg aatgaggacc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 370
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_16
<400> 370
gcctccacct tggtgtagct tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 371
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_17
<400> 371
acatgaggac aaggcccagc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 372
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_18
<400> 372
agcaggctgt catcgtggtt tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 373
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_19
<400> 373
gtatttggtg tccagctcca tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 374
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_20
<400> 374
acgggcatcc cgttgaagtc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 375
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_21
<400> 375
gcttggtgtt gtgggagagg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 376
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_22
<400> 376
ttcccgaatt ccatgggtgt tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 377
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_23
<400> 377
acagggtcct gacactggtc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 378
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_24
<400> 378
agccagtgga gcagttcctc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 379
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_25
<400> 379
aggagctcct cacagatgcc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 380
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_26
<400> 380
acgcagccag agaacagctg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 381
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_27
<400> 381
tgcaagcctc caggtagctg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 382
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_28
<400> 382
tcacagaagc agaggtcttg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 383
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_29
<400> 383
tactcggcaa gggtgtggca tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 384
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_30
<400> 384
tggtactgca tgttgttggg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 385
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_31
<400> 385
ttggagcagg tgtctgcgca tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 386
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_32
<400> 386
acacagtggt cctcacaggc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 387
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_33
<400> 387
atgtcgtcaa gcaccgtccc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 388
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_34
<400> 388
ttgacacagg gacacagccg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 389
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_35
<400> 389
ccgttgtaga cgcaggcaca tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 390
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_36
<400> 390
agtctgtgga gtaggtggcc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 391
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_37
<400> 391
atggaacctc ctggcagctc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 392
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_38
<400> 392
aagcacagag caggtacccg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 393
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_39
<400> 393
acgttgagaa gtgggcacct tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 394
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_40
<400> 394
accgtgtatt gcttcccgtc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 395
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_41
<400> 395
cacatagctg cagtcgccgt tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 396
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_42
<400> 396
tgctgtcaca gggcttggtc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 397
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_43
<400> 397
tcagccagta cagtgaaggc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 398
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_44
<400> 398
ttcaggcagg tctcgctgtc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 399
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_45
<400> 399
atccaggctc agtgtcacgc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 400
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_46
<400> 400
tgatcaccac caccgtctgc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 401
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_47
<400> 401
ctggttcagg aacacttccc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 402
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_48
<400> 402
agatgggcag ctgggtgtag tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 403
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_49
<400> 403
aagatggtga cgttggctgc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 404
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_50
<400> 404
gatgaagaag gttgagggtc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 405
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_51
<400> 405
agctgcaggt tcagctgcag tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 406
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_52
<400> 406
gaacagctgc atggtgggca tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 407
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_53
<400> 407
ttcccacaga gaccgcaggt tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 408
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_54
<400> 408
atcggcctgg atgctgttga tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 409
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_55
<400> 409
ttgaagaagg ccgcagcggt tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 410
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_56
<400> 410
aagctgttcc tgatgttggg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 411
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_57
<400> 411
tctccacgct cagagagcag tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 412
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_58
<400> 412
cagtgctgag catacttctc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 413
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_59
<400> 413
agtaggttcc cggcttcacg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 414
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_60
<400> 414
gtgtcaaaca tgcagttcga tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 415
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_61
<400> 415
tcctcgctcc gctcacagtt tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 416
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_62
<400> 416
ataggcttcg tgcagacgcc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 417
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_63
<400> 417
tggtacgtca ttgacttggg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 418
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_64
<400> 418
ctggcaggtg ctgacatggt tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 419
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_65
<400> 419
aacactgcag gtgatgtccc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 420
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_66
<400> 420
acagatgcag ccatccacgg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 421
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_67
<400> 421
tcgtccagga aggtgccctt tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 422
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_68
<400> 422
tgctggcctg cacacacttg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 423
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_69
<400> 423
cctctgtggt agcagggaca tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 424
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_70
<400> 424
tgtgcaggtg cagatagccc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 425
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_71
<400> 425
cgatgcagct cagcttccca tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 426
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_72
<400> 426
aacaccatgg gcgcagcaca tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 427
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_73
<400> 427
cgtggcattt cggcagtcaa tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 428
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_74
<400> 428
agctcttctg acagccagcc tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 429
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Cy3_75
<400> 429
caggtcatgt ccagtgtgtg tatatttaac cgcactatcc c 41
<210> 430
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 读出序列
<400> 430
gggatagtgc ggttaaat 18
<210> 431
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Left_1
<400> 431
aacccttact atagaggttg tgctggtggt ggga 34
<210> 432
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Right_1
<400> 432
acagggctgg gagtagttcc agtattatcc accg 34
<210> 433
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_Conventional
<400> 433
acagggctgg gagtagttcc agtatccacc gaacccttac 40
<210> 434
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Bridge_1
<400> 434
tgatgggtgc gtgagtaagt aagggttcgg tggatatgat gggtgcgtga gtaa 54
<210> 435
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式读出
<400> 435
ttactcacgc acccatca 18
<210> 436
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Conventional Readout
<400> 436
gtaagggttc ggtggata 18
<210> 437
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Primer
<400> 437
taccatctcg tgttcgtacc 20
<210> 438
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Primer
<400> 438
taatacgact cactatagtt cgttccgcta ctcaccac 38
<210> 439
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_1
<400> 439
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatcag ggagcagagg ttgcgctgct 60
gtgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 440
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_2
<400> 440
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatgga gccgcgcctg ctgcgctctg 60
gcgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 441
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_3
<400> 441
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatagg tccttctcgg tggccggcat 60
ctgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 442
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_4
<400> 442
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatcac cagcgcgtga aagtgttctg 60
ctgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 443
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_5
<400> 443
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatagg tccgtctgca ggttggcgat 60
gcgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 444
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_6
<400> 444
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatatc ttcttctggc tgagcacctc 60
cagaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 445
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_7
<400> 445
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatacg ttctcaagct gcatttggcg 60
gagaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 446
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_8
<400> 446
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctattcg atggacacca gtttgatgct 60
ctgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 447
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_9
<400> 447
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatgag tagtgcagga tcagggtcca 60
gagaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 448
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_10
<400> 448
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatgtc tgcttcttgg cctcctcatc 60
ctgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 449
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_11
<400> 449
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatatg ggcagctgcg gcagcttgtt 60
ctgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 450
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_12
<400> 450
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctattcc accagggcgc ccagggcccg 60
gcgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 451
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_13
<400> 451
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatggt aacgggcttg ctggcgtccc 60
aagaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 452
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_14
<400> 452
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatggc ccgtaggcac gggctttctt 60
cggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 453
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_15
<400> 453
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatgga cgtaccagac ggagaaggtg 60
cggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 454
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_16
<400> 454
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatggc tcttggcgat gtgctggcca 60
gcgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 455
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_17
<400> 455
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatgcc gtaaagatct caaagtaggt 60
gggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 456
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_18
<400> 456
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatagg gatgggcacg ccggcaaacg 60
tggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 457
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_19
<400> 457
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatccg cccggcaggc actcgggtta 60
cagaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 458
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_20
<400> 458
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatcac cttgaagtca gctgtctcct 60
tcgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 459
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_21
<400> 459
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatctc ggtgcccacc ttcacttcga 60
aggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 460
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_22
<400> 460
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatcac cacaaagtct gctgacttgc 60
cagaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 461
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_23
<400> 461
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctattta gcctgcgatg gcccttccac 60
cggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 462
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_24
<400> 462
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctattgc ggccagtagc gcacatcaca 60
gggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 463
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_25
<400> 463
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatagg cggatgtctt cgctgttgca 60
cagaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 464
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_26
<400> 464
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatttc tccaatccag gcccacgtgc 60
ctgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 465
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_27
<400> 465
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatccg tgcttggcat ccactgtgaa 60
ctgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 466
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_28
<400> 466
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatcaa cgcctccaca gggcagcctt 60
cagaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 467
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_29
<400> 467
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatcgg cttcctgggc acgtaggagc 60
aggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 468
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_30
<400> 468
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatgcc agcctcggcg cagtccacag 60
tggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 469
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_31
<400> 469
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatagg tgtcattgtc attgcggatg 60
atgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 470
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_32
<400> 470
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatgtg ggcgtggcct ggtcagcaaa 60
gagaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 471
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_33
<400> 471
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatcgg ccttcacctt actggcgtca 60
tggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 472
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_34
<400> 472
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctattga agtgggtggg cttgccaagc 60
tcgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 473
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_35
<400> 473
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatgtg taggtgttgt catggtggtc 60
gagaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 474
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_36
<400> 474
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatcca taagtgacat tgacgcctac 60
tggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 475
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_37
<400> 475
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctattcc aggcttggag atactgccac 60
tggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 476
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_38
<400> 476
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctattct ttgccaacgt ccaccttctc 60
tcgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 477
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_39
<400> 477
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatgat gccactttgc cttgaccacc 60
aggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 478
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_40
<400> 478
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatacg ggcacgccgt cataggtcac 60
ctgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 479
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_41
<400> 479
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatggc ccaggccacc tgtgccggcg 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 480
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_42
<400> 480
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatgca cttgactttg gatgcgtcaa 60
aggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 481
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_43
<400> 481
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatagc tccgcgctgc ccgcgctcga 60
gcgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 482
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_44
<400> 482
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctattgg tgtgcgtgcc atcaccgtgg 60
tcgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 483
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_45
<400> 483
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatggg aagttgggca cgggctggcc 60
gcgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 484
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_46
<400> 484
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatcca tagcactgga caccggaagt 60
gtgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 485
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_47
<400> 485
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctataca ctgaactcag tggtggcctc 60
acgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 486
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_48
<400> 486
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatgcc acacgggcct tgacgtgcgg 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 487
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_49
<400> 487
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctataca tgccatcgcc acggtcctga 60
acgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 488
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_50
<400> 488
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatagg tcacgtccac ggagtgcagt 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 489
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_51
<400> 489
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatccg agcagctgcc gtccttgtta 60
tcgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 490
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_52
<400> 490
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatcac cataggtgac gttgaggctg 60
tagaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 491
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_53
<400> 491
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatcat ctgtcacatc atgcacaggg 60
acgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 492
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_54
<400> 492
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctattgg cacgaaccat gcctgggctc 60
aggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 493
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_55
<400> 493
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatgtc cactggctcc accaggcctt 60
tggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 494
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_56
<400> 494
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatttc tcggctgggc acataattga 60
cggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 495
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_57
<400> 495
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctattgg ccttcacctt gctggcatca 60
tggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 496
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_58
<400> 496
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctattgg tgaactccac gggcaggctg 60
gcgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 497
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_59
<400> 497
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatttc ttcggcttgc cttcgggatc 60
cggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 498
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_60
<400> 498
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctattct ggcacgtagg ccactgtata 60
cggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 499
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_61
<400> 499
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatact ttgcctttgc ctgccgcctt 60
aggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 500
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_62
<400> 500
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctattcc accacgtcca catccacctc 60
tggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 501
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_63
<400> 501
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatggc acgtgctcgc caccaaagcg 60
cagaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 502
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_64
<400> 502
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatttg tcagtgatgg tgggctgcgc 60
cagaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 503
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_65
<400> 503
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctattcg tgcaggccag cctcgctggg 60
tggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 504
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_66
<400> 504
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatcat aggcagtgac atggccacag 60
ttgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 505
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_67
<400> 505
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatctg catccttggt gttgacggtg 60
aagaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 506
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_68
<400> 506
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatagt gcagctgatt tctgctttgg 60
acgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 507
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_69
<400> 507
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatggg ctgcctggga cgtgctgttc 60
atgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 508
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_70
<400> 508
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatgga ccacagtggc cgtcagcagg 60
ctgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 509
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_71
<400> 509
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatcgt ggccattacg cagccgcttc 60
aggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 510
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_72
<400> 510
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatgtg tggccttcgt gaaggccctg 60
acgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 511
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_73
<400> 511
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatagc ccaccatagc ctgcatcgcg 60
gggaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 512
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_74
<400> 512
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatcgt gctggtcggc aaacttgatg 60
ttgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 513
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_75
<400> 513
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat tacctatggg tgatgctctc tttcacccgg 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 514
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_76
<400> 514
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccctga gagcgaccgg tgaccgatga ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 515
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_77
<400> 515
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccgccc gagagtggga gctactcatt ttatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 516
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_78
<400> 516
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccgcgt cccgcgtgtc gacgccgccg ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 517
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_79
<400> 517
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccatct tcttccacgg cgcgtcctcc gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 518
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_80
<400> 518
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccttgc tcacgcactt caggtgctcg ttatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 519
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_81
<400> 519
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccagcg cgataagccg cagcccgtcg ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 520
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_82
<400> 520
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccgtgg gccgctggtt gtgcttgcgg ttatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 521
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_83
<400> 521
taccatctcg tgttcgtacc ggtacccggt ccaggaactc gagcgccacc gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 522
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_84
<400> 522
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccaggc ccaggatcag cttcaggttc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 523
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_85
<400> 523
taccatctcg tgttcgtacc ggtacctcct cgtcccacat gggcatggag atatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 524
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_86
<400> 524
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccatcc agcccaggag cctctgcttg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 525
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_87
<400> 525
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccctct gccagtcccg gctgaagttg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 526
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_88
<400> 526
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccgtcc cagtcaggac acaggcccgg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 527
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_89
<400> 527
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccttca gtttgggccg caagggagcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 528
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_90
<400> 528
taccatctcg tgttcgtacc ggtacctctt gtcgttattg gcggtcactt ttatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 529
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_91
<400> 529
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccagag cacagtaacc ttatgagtcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 530
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_92
<400> 530
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccttgt tggcgatgtt gccactgggc ttatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 531
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_93
<400> 531
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccgtgc acggtgtgga cgccctccat gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 532
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_94
<400> 532
taccatctcg tgttcgtacc ggtacccttg gccaacagtg acagtgtagg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 533
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_95
<400> 533
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccgc acacccttgg gctggaggcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 534
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_96
<400> 534
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccactg cgcccgatgt tctgaccacc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 535
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_97
<400> 535
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccgacg ccgccctcca gcccagggcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 536
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_98
<400> 536
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccaagc ccagcgtgcc cacgtcgtcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 537
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_99
<400> 537
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccgt cgcccttgtc gtcacattcg atatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 538
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_100
<400> 538
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccacgt gaacggcata ctcgccagcc ttatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 539
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_101
<400> 539
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccaccc tgtctgggtg gaagtcctgg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 540
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_102
<400> 540
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccgctg gcttgttgac ggccacacct gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 541
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_103
<400> 541
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccgtcc tggacttgga cccgaagtgg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 542
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_104
<400> 542
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccgtaa gtgccattgc cgttgtcctt gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 543
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_105
<400> 543
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccgtag gtgggctcgt gggccttgag ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 544
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_106
<400> 544
taccatctcg tgttcgtacc ggtacccgaa gtcgatgtca gcttcggcgg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 545
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_107
<400> 545
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccacca taatggtgta gctgccagcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 546
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_108
<400> 546
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccaggg ctccaccttg actcggatgg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 547
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_109
<400> 547
taccatctcg tgttcgtacc ggtacccacc agtgcgactg aggccagggc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 548
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_110
<400> 548
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccatgt ccacatctcg cactgcatcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 549
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_111
<400> 549
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccct gctggacagg cgtgtacttg atatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 550
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_112
<400> 550
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccaaag ggctcttagg gatgggatcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 551
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_113
<400> 551
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccaggc cagacacctt gatcttgctg atatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 552
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_114
<400> 552
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccct ttgatttgac tgtgaactcc ttatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 553
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_115
<400> 553
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccacct catagggccc ttcctcacgg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 554
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_116
<400> 554
taccatctcg tgttcgtacc ggtacctggt gtcgatggtg aagcgggcgg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 555
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_117
<400> 555
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccggga accacgtggg ccttgaatgg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 556
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_118
<400> 556
taccatctcg tgttcgtacc ggtacctcca cttggaattg gcccacctcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 557
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_119
<400> 557
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccggat gtacacctcg gccggaagcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 558
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_120
<400> 558
taccatctcg tgttcgtacc ggtacctact tgatggtgac ggtgtaggcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 559
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_121
<400> 559
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccaccg caggttccac ctgcagcttg ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 560
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_122
<400> 560
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccaaga caccctggcc ctcaatacca gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 561
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_123
<400> 561
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccgg tctgtgtcag agcccgggcg ttatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 562
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_124
<400> 562
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccaggt ctccgtcagg ttgcctgagg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 563
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_125
<400> 563
taccatctcg tgttcgtacc ggtacccctc gtaaggcgtg tactccactt ttatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 564
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_126
<400> 564
taccatctcg tgttcgtacc ggtacctgca ggacatcttg gcctcggagg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 565
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_127
<400> 565
taccatctcg tgttcgtacc ggtacctgcc agcctcataa gggatgtact ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 566
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_128
<400> 566
taccatctcg tgttcgtacc ggtacctgaa aggactgcct ggcacttgat gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 567
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_129
<400> 567
taccatctcg tgttcgtacc ggtacccggg cccagagcac ttgaccttgg atatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 568
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_130
<400> 568
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccct tgcactttga cctgcaatgg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 569
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_131
<400> 569
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccctgg gtgccatcag cgttgtctac ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 570
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_132
<400> 570
taccatctcg tgttcgtacc ggtacctagg cagcaccttg accttgaagg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 571
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_133
<400> 571
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccgcac gccagtggtg ttgagcccgg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 572
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_134
<400> 572
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccatct ggacagccag caggccctcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 573
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_135
<400> 573
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccgt catggttgtc ttggatgtgt gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 574
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_136
<400> 574
taccatctcg tgttcgtacc ggtacctcca cagtgatcac cgtctcctcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 575
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_137
<400> 575
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccccat caggcgtgca cacggtgcac gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 576
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_138
<400> 576
taccatctcg tgttcgtacc ggtacccaga tgacgtattt gcccggctgg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 577
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_139
<400> 577
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccttgc ctgagggcat ccgaacctcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 578
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_140
<400> 578
taccatctcg tgttcgtacc ggtacctacc gcacggtcac ggtgccgtct ttatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 579
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_141
<400> 579
taccatctcg tgttcgtacc ggtacccgta atccacatag aactgcaagg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 580
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_142
<400> 580
taccatctcg tgttcgtacc ggtacctggc aggcttgttc actactccat gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 581
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_143
<400> 581
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccgccc tcaatggcca gagacaggcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 582
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_144
<400> 582
taccatctcg tgttcgtacc ggtacctact tgactagaat gctgtagtcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 583
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_145
<400> 583
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccgatc cgtctctgag atgttgatgg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 584
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_146
<400> 584
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccaaca gggctcctcc cggcccgagg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 585
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_147
<400> 585
taccatctcg tgttcgtacc ggtaccgaga cccgaacacg actggcatcc ctatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 586
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_148
<400> 586
taccatctcg tgttcgtacc ggtacctcaa tgataaactc tgcaggctca atatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 587
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_149
<400> 587
taccatctcg tgttcgtacc ggtacctgat gtagttgcct ggctctgtgg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 588
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA_150
<400> 588
taccatctcg tgttcgtacc ggtacccgcc tgtcaccttc acagagaagg gtatatttaa 60
ccgaattcgt ggtgagtagc ggaacgaa 88
<210> 589
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLNA桥式
<400> 589
attgtaaagc gtgagaaagg taatgggcgg ttaaatattg taaagcgtga gaaa 54
<210> 590
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Cy5 Readout
<400> 590
tttctcacgc tttacaat 18
<210> 591
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC转录本多态性重复区
<400> 591
ctggaactac tcccagccct gttcccacca ccagcacaac ctct 44
<210> 592
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 第一探针结合臂
<400> 592
atttaaccg 9
<210> 593
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 第二探针结合臂
<400> 593
cccattacc 9
<210> 594
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 桥式探针
<400> 594
ggtaatgggc ggttaaat 18
<210> 595
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 读出序列
<400> 595
attgtaaagc gtgagaaa 18
Claims (30)
1.用于检测多核苷酸分析物的非天然存在的核酸探针对，包含：
ⅰ第一核酸探针，其包含：
a)第一探针结合臂，其与桥式探针的第一探针靶区域互补；和
b)第一多核苷酸分析物结合臂，其与多核苷酸分析物的第一分析物靶区域互补，以及
ⅱ第二核酸探针，其包含：
a)第二探针结合臂，其与所述桥式探针的第二探针靶区域互补；其中所述第一探针靶区域位于所述桥式探针上所述第二探针靶区域的下游，和
b)第二多核苷酸分析物结合臂，其与所述多核苷酸分析物的第二分析物靶区域互补，其中所述第二分析物靶区域位于所述多核苷酸分析物上所述第一分析物靶区域的下游，
其中所述第一多核苷酸分析物结合臂与所述第一分析物靶区域的结合以及所述第二多核苷酸分析物结合臂与所述第二分析物靶区域的结合允许所述第一探针结合臂与第一桥式探针靶区域的结合以及所述第二探针结合臂与第二桥式探针靶区域的结合，从而检测所述多核苷酸分析物。
2.权利要求1所述的非天然存在的核酸探针对，其中所述第一和/或第二核酸探针中的所述多核苷酸分析物结合臂由20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个核苷酸组成。
3.权利要求1或2所述的非天然存在的核酸探针对，其中所述第一和/或第二核酸探针中的所述探针结合臂由9或10个核苷酸组成。
4.权利要求1至3中任一项所述的非天然存在的核酸探针对，其中所述第一和/或第二核酸探针中的所述探针结合臂包含用于结合独特桥式探针的识别部分。
5.权利要求1至4中任一项所述的非天然存在的核酸探针对，其中所述第一和第二核酸探针包含置于所述探针结合臂和所述多核苷酸分析物结合臂之间的接头。
6.权利要求5所述的非天然存在的核酸探针对，其中所述接头由1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个核碱基组成。
7.权利要求1至6中任一项所述的非天然存在的核酸探针对，其中所述桥式探针是与标记物(如荧光标记物)偶联或缀合的读出探针。
8.权利要求1至6中任一项所述的非天然存在的核酸探针对，其中通过与缀合至标记物(如荧光标记物)的读出探针的杂交来检测所述桥式探针。
9.权利要求8所述的非天然存在的核酸探针对，其中所述读出探针与所述桥式探针的末端区域杂交。
10.权利要求8所述的非天然存在的核酸探针对，其中所述读出探针与所述桥式探针的中心区域杂交。
11.权利要求1至10中任一项所述的非天然存在的核酸探针对，其中所述第一分析物靶区域紧邻所述第二分析物靶区域。
12.权利要求1至11中任一项所述的非天然存在的核酸探针对，其中所述第一分析物靶区域与所述第二分析物靶区域之间的间隔不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个核碱基。
13.权利要求1至12中任一项所述的非天然存在的核酸探针对，其中所述第一探针靶区域紧邻所述第二探针靶区域。
14.权利要求1至13中任一项所述的非天然存在的核酸探针对，其中所述第一探针靶区域与所述第二探针靶区域之间的间隔不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个核碱基。
15.一种探针系统，其包含权利要求1至14中任一项的非天然存在的核酸探针对。
16.权利要求15所述的探针系统，其中所述探针系统还包括桥式探针。
17.一种检测样品中的多核苷酸分析物的方法，所述方法包括：
(a)使所述样品与根据权利要求1至14中任一项的非天然存在的核酸探针对或者权利要求15或16的探针系统接触；和
(b)在所述多核苷酸分析物存在的情况下，基于与独特桥式探针的杂交来检测所述多核苷酸分析物。
18.一种用于检测样品中的两种或更多种多核苷酸分析物的文库；所述文库包含两种或更多种根据权利要求1至14中任一项的非天然存在的核酸探针对或者多种根据权利要求15或16的探针系统，
其中每种核酸探针对对于每种多核苷酸分析物而言都是特异性的；并且
其中将每种核酸探针对配置为在所述多核苷酸分析物存在的情况下与独特桥式探针杂交。
19.一种检测样品中的两种或更多种多核苷酸分析物的方法，所述方法包括：
a)使样品与根据权利要求18的文库接触，和
b)在所述多核苷酸分析物存在的情况下，基于与独特桥式探针的杂交来检测每种多核苷酸分析物。
20.权利要求19所述的方法，其中所述方法包括使所述样品与针对每种多核苷酸分析物的独特桥式探针接触。
21.权利要求20所述的方法，其中所述独特桥式探针包含特定的标签或条形码序列。
22.权利要求19至21中任一项所述的方法，其中基于与针对每种多核苷酸分析物的独特桥式探针的杂交，同时检测所述两种或更多种多核苷酸分析物。
23.权利要求19至22中任一项所述的方法，其中基于与针对每种多核苷酸分析物的独特桥式探针的多轮杂交，序贯地检测所述两种或更多种多核苷酸分析物。
24.权利要求19至23中任一项所述的方法，其中所述方法包括通过与缀合至标记物的读出探针的杂交来检测所述独特桥式探针。
25.权利要求24所述的方法，其中所述方法包括使所述样品与针对每种多核苷酸分析物的独特读出探针接触。
26.权利要求19至25中任一项所述的方法，其中所述方法包括在每种多核苷酸分析物的检测之间，去除任何结合的或未结合的桥式探针和/或读出探针。
27.权利要求19至26中任一项所述的方法，其中所述方法包括在每种多核苷酸分析物的检测之间，去除来自任何结合的或未结合的读出探针的任何信号。
28.一种对样品中的一种或多种多核苷酸分析物的表达进行检测或可视化的方法，所述方法包括a)使样品与根据权利要求18的文库接触，和b)在所述一种或多种多核苷酸分析物存在的情况下，基于与独特桥式探针的杂交来对所述一种或多种多核苷酸分析物进行检测或可视化。
29.一种试剂盒，其包含根据权利要求1至14中任一项的非天然存在的核酸探针对或者多种根据权利要求15或16的探针系统或者根据权利要求18的文库。
30.权利要求29所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括一种或多种桥式探针。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SG10202001453Y | 2020-02-18 | ||
| SG10202001453Y | 2020-02-18 | ||
| PCT/SG2020/050353 WO2021167526A1 (en) | 2020-02-18 | 2020-06-24 | Nucleic acid probes |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115917007A true CN115917007A (zh) | 2023-04-04 |
Family
ID=77391110
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202080099895.2A Pending CN115917007A (zh) | 2020-02-18 | 2020-06-24 | 核酸探针 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20230083623A1 (zh) |
| EP (1) | EP4107288A4 (zh) |
| JP (1) | JP2023514684A (zh) |
| KR (1) | KR20220142501A (zh) |
| CN (1) | CN115917007A (zh) |
| CA (1) | CA3172041A1 (zh) |
| IL (1) | IL295711A (zh) |
| WO (1) | WO2021167526A1 (zh) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20230279475A1 (en) | 2022-01-21 | 2023-09-07 | 10X Genomics, Inc. | Multiple readout signals for analyzing a sample |
| WO2023192616A1 (en) | 2022-04-01 | 2023-10-05 | 10X Genomics, Inc. | Compositions and methods for targeted masking of autofluorescence |
| US20230323427A1 (en) | 2022-04-06 | 2023-10-12 | 10X Genomics, Inc. | Methods and compositions for multiplex cell analysis |
| WO2023239805A1 (en) * | 2022-06-07 | 2023-12-14 | The Johns Hopkins University | In situ nucleic acid analysis using probe pair ligation |
| US20240035071A1 (en) | 2022-06-17 | 2024-02-01 | 10X Genomics, Inc. | Catalytic de-crosslinking of samples for in situ analysis |
| WO2024081869A1 (en) | 2022-10-14 | 2024-04-18 | 10X Genomics, Inc. | Methods for analysis of biological samples |
| US20240167081A1 (en) | 2022-11-08 | 2024-05-23 | 10X Genomics,Inc. | Immobilization methods and compositions for in situ detection |
| US20240158852A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-16 | 10X Genomics, Inc. | Methods and compositions for assessing performance of in situ assays |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6235472B1 (en) * | 1994-02-16 | 2001-05-22 | Ulf Landegren | Nucleic acid detecting reagent |
| CN105985945A (zh) * | 2015-01-30 | 2016-10-05 | 深圳华大基因研究院 | mRNA片段化方法及基于其构建测序文库的方法 |
| WO2017200870A1 (en) * | 2016-05-15 | 2017-11-23 | Ultivue, Inc. | Multiplexed imaging using strand displacement |
| WO2018160397A1 (en) * | 2017-03-01 | 2018-09-07 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Highly specific circular proximity ligation assay |
| WO2019148001A1 (en) * | 2018-01-25 | 2019-08-01 | Apton Biosystems, Inc. | Methods and composition for high throughput single molecule protein detection systems |
-
2020
- 2020-06-24 CN CN202080099895.2A patent/CN115917007A/zh active Pending
- 2020-06-24 IL IL295711A patent/IL295711A/en unknown
- 2020-06-24 WO PCT/SG2020/050353 patent/WO2021167526A1/en unknown
- 2020-06-24 KR KR1020227032164A patent/KR20220142501A/ko active Search and Examination
- 2020-06-24 CA CA3172041A patent/CA3172041A1/en active Pending
- 2020-06-24 JP JP2022549463A patent/JP2023514684A/ja active Pending
- 2020-06-24 US US17/904,348 patent/US20230083623A1/en active Pending
- 2020-06-24 EP EP20920329.8A patent/EP4107288A4/en active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6235472B1 (en) * | 1994-02-16 | 2001-05-22 | Ulf Landegren | Nucleic acid detecting reagent |
| CN105985945A (zh) * | 2015-01-30 | 2016-10-05 | 深圳华大基因研究院 | mRNA片段化方法及基于其构建测序文库的方法 |
| WO2017200870A1 (en) * | 2016-05-15 | 2017-11-23 | Ultivue, Inc. | Multiplexed imaging using strand displacement |
| WO2018160397A1 (en) * | 2017-03-01 | 2018-09-07 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Highly specific circular proximity ligation assay |
| WO2019148001A1 (en) * | 2018-01-25 | 2019-08-01 | Apton Biosystems, Inc. | Methods and composition for high throughput single molecule protein detection systems |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| HARRY M.T.CHOI ET AL.: ""Third-generation in situ hybridization chain reaction: multiplexed, quantitative, sensitive, versatile, robust"", 《DEVELOPMENT》, vol. 145, 26 June 2018 (2018-06-26), pages 1 - 8 * |
| JOLENE JIE LIN GOH ET AL.: ""Highly specific multiplexed RNA imaging in tissues with split-FISH"", 《NATURE METHODS 》, 15 June 2020 (2020-06-15), pages 689 - 693 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2021167526A1 (en) | 2021-08-26 |
| KR20220142501A (ko) | 2022-10-21 |
| US20230083623A1 (en) | 2023-03-16 |
| JP2023514684A (ja) | 2023-04-07 |
| CA3172041A1 (en) | 2021-08-26 |
| EP4107288A1 (en) | 2022-12-28 |
| EP4107288A4 (en) | 2024-04-03 |
| IL295711A (en) | 2022-10-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN115917007A (zh) | 核酸探针 | |
| US11473129B2 (en) | Multiplex labeling of molecules by sequential hybridization barcoding | |
| US11174507B2 (en) | Genomic probes | |
| US20230032082A1 (en) | Spatial barcoding | |
| KR102490693B1 (ko) | 샘플 중 표적 핵산을 검출하는 방법 | |
| JP7372927B2 (ja) | 遺伝子およびタンパク質の発現を検出する生体分子プローブおよびその検出方法 | |
| CN110225980B (zh) | 化学组合物及其使用方法 | |
| JP2022537048A (ja) | 試料中の分析物のシグナルコード化方法 | |
| AU2020282024A1 (en) | Method of detecting target nucleic acid molecules | |
| EP3539036A1 (en) | Matrix imprinting and clearing | |
| US11512344B2 (en) | Consecutive hybridization for multiplexed analysis of biological samples | |
| JP7091363B2 (ja) | 多種多様なライゲーションによるオリゴヌクレオチドプローブの標識 | |
| CN116406428A (zh) | 用于使用酶促核酸延伸进行原位单细胞分析的组合物和方法 | |
| Peng et al. | A versatile single-molecule counting-based platform by generation of fluorescent silver nanoclusters for sensitive detection of multiple nucleic acids | |
| US20230265504A1 (en) | Highly multiplexed detection of gene expression with hybridization chain reaction | |
| CN118265800A (zh) | 用于多路fish的比率计量符号与顺序编码 | |
| WO2023122345A1 (en) | Suppression of non-specific signals by exonucleases in fish experiment | |
| EP4453247A1 (en) | Suppression of non-specific signals by exonucleases in fish experiment | |
| WO2024167929A1 (en) | Target probes with landmark sequences for localizing gene transcripts by fluorescence in situ hybridization | |
| CN117343993A (zh) | 原位检测样品中的靶核酸序列的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |