CN115916235A - 包含d-氨基酸的拉瑞唑来衍生物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了组合物，其包含有效量的用于促进紧密连接完整性的具有氨基酸序列Gly‑Gly‑(d)Val‑(d)Leu‑(d)Val‑(d)Gln‑(d)Pro‑Gly(SEQ ID NO:6)的肽，或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。本发明进一步提供了在有需要的患者中使用用于促进紧密连接完整性的拉瑞唑来衍生物组合物的方法。

Description

包含D-氨基酸的拉瑞唑来衍生物

技术领域

本发明提供了用于治疗和预防与紧密连接通透性(包括肠上皮的紧密连接通透性)相关的疾患的组合物、制剂和方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2020年4月15日提交的美国临时申请第63/010,135号和2020年11月17日提交的美国临时申请第63/114,756号的优先权和利益，所述美国临时申请据此通过引用以其整体并入。

以电子方式提交的文本文件的描述

随本申请以电子方式提交的下面的文本文件的内容通过引用以其整体并入本文：序列表的计算机可读格式拷贝(文件名称：“NMT-024PC_ST25.txt”；记录日期：2021年4月15日；文件大小：2,378字节)。

背景技术

肠上皮是形成胃肠(GI)道的小肠和大肠的腔面的细胞层，并且代表外部环境和内部环境之间的最大界面(超过400m²)。肠上皮具有两个重要功能：吸收营养，以及提供抵御有害环境物质诸如细菌、病毒、毒素和食物过敏原的屏障。

肠上皮的屏障特性由称为紧密连接的特殊质膜结构调节。紧密连接的改变可能导致肠屏障功能的破坏和肠通透性的增加。完整的肠屏障可防止病原体、抗原、内毒素和其他促炎物质渗透到体内，而肠不完整性允许它们进入，这可能引发局部或全身性的炎性疾病。

拉瑞唑来是促进紧密连接完整性的肽剂。拉瑞唑来具有氨基酸序列：Gly Val LeuVal Gln Pro Gly(SEQ ID NO:1)，并且可以被配制用于在GI的受累部分(例如，小肠和/或大肠)中靶向释放或者被递送至其他表现出紧密连接完整性降低的组织。拉瑞唑来已被描述为表现出反向剂量反应，其中较高剂量显示出减弱的活性或根本没有活性。这种反向剂量反应可能会限制药物的整体功效，并且需要不合意的给药方案。

因此，仍然需要对上皮或内皮屏障功能障碍的有效治疗。

发明内容

本发明提供了涉及改善组织中紧密连接完整性的药物组合物和方法。该药物组合物包含有效量的用于促进紧密连接完整性的具有含有一种或多种(d)-氨基酸的氨基酸序列SEQ ID NO:1(Gly-Gly-Val-Leu-Val-Gln-Pro-Gly)的肽。在各种实施方案中，该药物组合物包含具有氨基酸序列Gly-Gly-(d)Val-(d)Leu-(d)Val-(d)Gln-(d)Pro-Gly(SEQ IDNO:6)的肽。这种肽，在本文中也称为“(d)-拉瑞唑来”或“全d-拉瑞唑来”，与拉瑞唑来相比，在实质上较低的浓度下有效促进上皮和内皮组织的紧密连接完整性。因此，在各种实施方案中，该药物组合物含有少于约0.5mg的该肽。例如，该组合物可以含有约0.25mg或更少的该肽，或约0.1mg或更少的该肽。此外，在一些实施方案中，(d)-拉瑞唑来表现出减少的由肽片段(例如，由刷状缘酶产生)引起的抑制，因此表现出不太突出的反向剂量反应。在这些实施方案中，该肽在较高浓度下比拉瑞唑来更有效。因此，在一些实施方案中，本发明考虑了药物组合物含有多于约0.5mg的该肽。例如，该组合物可以含有约0.75mg或更多的该肽，或约1.0mg或更多的该肽，或约2.0mg或更多的该肽。

在各种实施方案中，该肽被配制用于肠内、肠胃外、鼻内或肺部递送，以促进靶组织中上皮和/或内皮紧密连接的完整性。

在各种实施方案中，该组合物被配制用于递送至肠道，诸如小肠。例如，该组合物可以被配制用于递送至十二指肠、空肠和/或回肠中的一者或多者。替代地或此外地，该组合物被配制用于递送至大肠。具体而言，该组合物可被配制用于递送至盲肠、升结肠、横结肠、降结肠和/或乙状结肠中的一者或多者。

例如，就肠递送而言，该肽可被配制用于靶向释放，或者可被配制用于持续释放或改良释放。在一些实施方案中，本发明考虑延迟释放制剂，以在胃肠道的目标区域开始释放。在一些实施方案中，该组合物含有含肽珠粒，该珠粒可具有这样的包衣，该包衣在胃液中稳定并且在肠液中不稳定以避免在胃中释放，但是使该肽在小肠的一个或多个目标位置中实质性地释放，或者以启动该肽在小肠的目标区域中的释放。

在各种其他实施方案中，该肽被配制用于通过其他途径(诸如肺部递送、肠胃外递送、鼻内递送和眼部递送)递送。

在多个方面和实施方案中，本发明提供了用于治疗例如各种涉及功能失调的上皮和/或内皮屏障的生物学疾患、炎性疾患和受肠道微生物组(例如，肠菌群失调)影响的疾患的方法。此类疾患包括但不限于乳糜泻、炎性肠病(IBD)(例如，克罗恩病或溃疡性结肠炎)、环境性肠病、坏死性小肠结肠炎、肠缺血、脂肪肝疾病(包括但不限于NAFLD、NASH、ASH)、糖尿病、胰岛素抗性、高甘油三酯血症、慢性肾病、IgA肾病变、呼吸道炎性疾患(如哮喘、COPD、肺部纤维化、囊性纤维化、ALI、ARDS、肺气肿、支气管炎、肺炎、肺癌，或呼吸道感染)、自身免疫性疾病(例如，类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、狼疮、1型糖尿病或多发性硬化症)、癌症(包括接受免疫治疗或化疗的患者的癌症)和中枢神经系统疾患(例如，帕金森病、阿尔茨海默病、多发性硬化症或痴呆症)、多器官衰竭、与接受全肠胃外营养相关的疾病和其他炎性疾病(例如，川崎病、Mis-C和全身炎性反应综合征)。

本发明的其他方面和实施方案将从以下具体实施方式中显而易见。

附图说明

图1描绘了测量受缺血性损伤的猪空肠的跨上皮电阻(TEER)的离体测定的结果，并显示拉瑞唑来以“钟形”剂量依赖性方式诱导受缺血性损伤的肠的修复。较高剂量的拉瑞唑来片段的积聚可能会抑制拉瑞唑来的作用。

图2示出了离体测试模型的结果，该模型测量与几种拉瑞唑来衍生的类似物的施加有关的受缺血性损伤的猪空肠组织的恢复。

图3描绘了离体测试的结果，该离体测试测量类似物#5和类似物#6在使受缺血性损伤的猪空肠组织恢复方面的恢复效果。

图4示出了拉瑞唑来与类似物#6((d)-拉拉唑肽)随着时间的推移在受缺血性损伤的猪空肠组织中的降解特征之间的差异。

图5描绘了一项实验的结果，在该实验中，拉瑞唑来和类似物#6均以1μM浓度被施加至受缺血性损伤的肠组织，并在240分钟的恢复期内测量跨上皮/跨内皮电阻。

图6描绘了一项实验，其中在类似物#6分别以0.01μM、0.1μM、1μM和10μM的浓度被施加至受缺血性损伤的肠组织时测量跨上皮/跨内皮电阻。以1μM浓度施加的拉瑞唑来用作对照。

图7描绘了当拉瑞唑来被单独地以及与以下拉瑞唑来片段组合被施加至受缺血性损伤的肠组织时该拉瑞唑来片段的抑制效果：1μM拉瑞唑来；10μM片段#1；10μM片段#2；10μM片段#1+1μM拉瑞唑来；和10μM片段#2+1μM拉瑞唑来。未接受活性剂的非缺血性和缺血性肠组织用作对照。在240分钟的恢复期内测量跨上皮/跨内皮电阻。

图8描绘了在存在和不存在如下的片段A6F1(类似物#6的片段#1)的情况下施加的(d)-拉瑞唑来类似物的结果：0.1μM类似物#6；1μM类似物#6；10μM A6F1；10μM A6F1+0.1μM类似物#6；和非缺血性组织对照。

图9描绘了在存在和不存在如下的片段A6F2(类似物#6的片段#2)的情况下施加的(d)-拉瑞唑来类似物的结果：0.1μM类似物#6；1μM类似物#6；10μM A6F2；10μM A6F2+0.1μM类似物#6；和非缺血性组织对照。

图10描绘了图8和图9组合的结果，其中A6F1和A6F2片段二者是与类似物#6结合施加的。

图11描绘了在小鼠被给予媒介物、拉瑞唑来或全d-拉瑞唑来时在BLM施用后的21天过程中体重的变化。

图12描绘了在小鼠被给予媒介物、拉瑞唑来或全d-拉瑞唑来时在BLM施用后的21天过程中的存活百分比。

图13示出了肺部纤维化模型小鼠在处死当天(第21天)的体重。

图14描绘了肺部纤维化模型小鼠在处死当天(第21天)的左肺重量。

图15描绘了肺部纤维化模型小鼠在处死当天(第21天)的后腔静脉叶重量。

图16示出了根据羟脯氨酸标准曲线计算的肺羟脯氨酸浓度。肺羟脯氨酸含量以μg/左肺表示。

图17描绘了施用媒介物、拉瑞唑来和全d-拉瑞唑来的肺部纤维化模型小鼠的右肺组织的染色切片的照片。

图18描绘了根据Ashcroft评估和分级标准的染色的右肺切片的分级结果图。

具体实施方式

本发明提供了拉瑞唑来衍生物及其组合物，所述拉瑞唑来衍生物及其组合物在实质上低于拉瑞唑来的剂量下有效，并且在各种实施方案中，不表现出实质性的反向剂量反应。因此，与拉瑞唑来相比，所述拉瑞唑来衍生物可以在大剂量范围内和/或以更理想的给药方案有效递送。

“拉瑞唑来”是具有序列GGVLVQPG(SEQ ID NO:1)的八氨基酸肽，其可替代地使用式G1-G2-V3-L4-V5-Q6-P7-G8来描绘以指示氨基酸序列编号。拉瑞唑来在用乙酸制成盐时是乙酸拉瑞唑来。拉瑞唑来促进上皮和内皮组织(包括肠上皮)的紧密连接完整性，并且正在作为乳糜泻(CeD)患者的疗法被评估。

根据某些方面和实施方案，本发明提供了拉瑞唑来衍生物，其赋予增加的对外肽酶降解(包括氨肽酶降解)的抗性。蛋白酶或肽酶是催化肽键水解降解的酶。肽酶可以是外肽酶或内肽酶。外肽酶催化末端或倒数第二个肽键的切割。根据氨基酸是从氨基末端还是羧基末端释放，外肽酶进一步分别被描述为氨肽酶或羧肽酶。氨肽酶，诸如在小肠刷状缘中发现的酶，将从肽的氨基末端切割一个或多个氨基酸。羧肽酶，诸如存在于刷状缘和消化胰液中的酶，将从肽的羧基末端切割一个或多个氨基酸。肽可以经历多轮N端或C端切割。

拉瑞唑来已在临床试验中显示出特别是在较低剂量(例如，0.5mg剂量)下减轻乳糜泻症状的显著益处。参见据此通过引用以其整体并入的US 2016/0022760，特别是其中概述的制剂和剂量。较高剂量(例如，1mg和2mg剂量)显示出活性减弱，或根本没有活性。根据本公开，据信，位于腔面的刷状缘内的外肽酶(诸如氨肽酶)可以产生拉瑞唑来衍生的片段，包括缺失N-末端甘氨酸残基的片段。例如，片段GVLVQPG(SEQ ID NO：7)(本文称为“片段1”)和VLVQPG(SEQ ID NO：8)(本文称为“片段2”)作为紧密连接调节处调节剂是无活性的。此外，当这两个片段与全长拉瑞唑来混合时，活性完全消失。这些无活性的拉瑞唑来片段的局部堆积(由于拉瑞唑来的剂量过量)事实上可能会竞争和阻断肽的功能。这将解释临床观察结果，即低剂量的拉瑞唑来通过避免蓄积竞争性无活性片段而发挥最佳作用。

本发明提供了这样的化合物，其促进紧密连接完整性(例如，上皮或内皮紧密连接完整性)，并且与拉瑞唑来相比，在较高剂量下表现出实质上较小的反向剂量反应。例如，拉瑞唑来衍生物的剂量反应不像拉瑞唑来那样呈“钟形”，较低剂量和较高剂量与拉瑞唑来相比都更有效。在一些实施方案中，将本发明的药物组合物施用于有需要的患者避免了非活性肽片段的大量积聚。在各种实施方案中，拉瑞唑来的肽衍生物含有D氨基酸。在一些实施方案中，拉瑞唑来的肽衍生物含有1、2、3、4或5个D氨基酸。D-氨基酸在本文中使用“(d)”来描绘以指示以下氨基酸处于D构象。在一些实施方案中，拉瑞唑来衍生物具有氨基酸序列Gly-Gly-Val-Leu-Val-Gln-(d)Pro-Gly(SEQ ID NO:9)。该肽在本文中称为“(d)-Pro”或(d)-Pro拉瑞唑来。在其他实施方案中，拉瑞唑来衍生物具有氨基酸序列Gly-Gly-(d)Val-(d)Leu-(d)Val-(d)Gln-(d)Pro-Gly(SEQ ID NO:6)。这种肽在本文中称为“(d)-拉瑞唑来”。如本文所证明的，(d)-拉瑞唑来与拉瑞唑来相比在实质上较低的浓度下在促进紧密连接完整性方面出人意料地有效。这是一个令人惊讶的观察结果，因为通常在肽药物中用D氨基酸代替L氨基酸会导致效力丧失。也就是说，与具有天然L氨基酸的肽相比，具有D氨基酸的肽预计将以较低的亲和力与受体功能结合。

本发明提供了与拉瑞唑来相比在实质上较低的剂量下令人惊讶地有效的拉瑞唑来衍生物。因此，本发明的药物组合物(或其盐)可以含有少于约0.5mg的拉瑞唑来衍生物。例如，在一些实施方案中，该药物组合物含有约0.4mg或更少的肽，或约0.3mg或更少的肽，或约0.25mg或更少的肽，或约0.2mg或更少的肽，或约0.15mg或更少的肽，或约0.1mg或更少的肽，或约50μg或更少的肽，或约25μg或更少的肽。在一些实施方案中，该药物组合物含有约50μg至约400μg，或约50μg至约200μg，或约50μg至约150μg的肽。在一些实施方案中，这些较低的剂量被施加于或靶向于未受伤的组织(例如，GI上皮)以防止紧密连接完整性的丧失，或在其他实施方案中，被施加于受伤或发炎的组织，以促进屏障功能的恢复。

在其他实施方案中，本发明考虑了一种药物组合物，其含有超过约0.5mg的肽，并且实质性地降低了在拉瑞唑来情况下观察到的反向剂量或“钟形”反应。例如，在一些实施方案中，该药物组合物含有约0.6mg或更多的肽，或约0.75mg或更多的肽，或约1.0mg或更多的肽，或约1.25mg或更多的肽，或约1.5mg或更多的肽，或约2.0mg或更多的肽。在一些实施方案中，这些剂量被施加于或靶向于未受伤的组织(例如，GI上皮)以防止紧密连接完整性的丧失，或在其他实施方案中，被施加于受伤或发炎的组织，以促进屏障功能的恢复。

在一些实施方案中，该肽(例如，(d)-拉瑞唑来或(d)-Pro)以约0.5mg施用。例如，该肽在0.5mg剂量下可能比拉瑞唑来更有效。

在各种实施方案中，与拉瑞唑来(SEQ ID NO：1的肽)相比，本发明的拉瑞唑来衍生物表现出增加的对肽酶降解的抗性。可以使用任何合适的肽酶活性测定来量化抗性程度。本领域技术人员将理解其中可以测量蛋白质降解以便确定对肽酶活性的敏感性的各种定量和定性方法。在一些实施方案中，该肽表现出对外肽酶、氨肽酶或羧肽酶活性的抗性，以及在一些实施方案中，对在人肠腔表面的刷状缘中发现的人氨肽酶的抗性。在一些实施方案中，该肽表现出对羧肽酶，诸如人羧肽酶的抗性。在一些实施方案中，该羧肽酶是脯肽酶(proliase)、脯氨酸特异性外肽酶或内肽酶。在一些实施方案中，该外肽酶是C-末端脯氨酸特异性外肽酶(例如，羧肽酶P)。

在各种实施方案中，本发明提供了通过向受试者或患者施用本文所述的肽或药物组合物来促进组织的紧密连接完整性(包括上皮细胞或内皮细胞的紧密连接完整性)的方法。术语“受试者”和“患者”在本文中可互换使用，并且一般是指哺乳动物受试者/患者。在一些实施方案中，受试者是人受试者。因此，该组合物可以被配制用于施用至胃肠道(GI)、肠胃外递送、鼻内递送、颊部递送、眼部递送或肺部递送。

在一些实施方案中，将肽或药物组合物施用至胃肠道(GI)以防止或降低胃肠上皮通透性和/或降低微生物菌群失调。在一些实施方案中，施用肽或药物组合物以防止或降低其他组织中的上皮通透性。药物组合物可以被配制用于在GI(例如，小肠和/或大肠)的受累部分中靶向释放。在其他实施方案中，全身地(例如，静脉内或通过皮下注射)施用拉瑞唑来衍生物。在一些实施方案中，将肽组合物作为溶液气雾剂或粉末施用至肺。在一些实施方案中，将肽组合物作为鼻溶液或鼻乳液施用至鼻上皮。在一些实施方案中，将肽组合物作为液体或颊部片剂溶液施用至口腔上皮。在一些实施方案中，将肽组合物施用至眼表或者经眼内施用肽组合物。

本发明的拉瑞唑来衍生物可以任何合适的形式(包括作为盐)施用。例如，肽可以作为乙酸盐施用。可以采用替代盐，包括任何药学上可接受的盐诸如Journal ofPharmaceutical Science,66,2-19(1977)和The Handbook of Pharmaceutical Salts；Properties,Selection,and Use.P.H.Stahl和C.G.Wermuth(编辑),Verlag,Zurich(瑞士)2002中列出的那些盐，该文献据此通过引用以其整体并入本文。

在各种实施方案中，该肽被配制为药物组合物，该药物组合物可以采取片剂、丸剂、微丸、胶囊、含有液体的胶囊、含有多颗粒物的胶囊、粉末、溶液、乳液、滴剂、栓剂、乳剂、气雾剂、喷雾剂、悬浮液、延迟释放制剂、持续释放制剂、改良释放制剂、受控释放制剂或任何其他适合于使用的形式。

在一些实施方案中，药物组合物被配制成适于肠胃外施用的组合物。适合于肠胃外施用(例如静脉内、肌内、皮下或腹膜内注射和输注)的剂型包括例如溶液、悬浮液、分散体、乳剂等。它们也可以无菌固体组合物(例如冻干组合物)的形式制造，该无菌固体组合物可在临使用前溶解或悬浮于无菌可注射介质中。它们可含有例如助悬剂或分散剂。在这些实施方案中，该组合物可有效治疗涉及全身炎症或损伤或发炎的内皮组织的疾患(例如，血管炎)。

在一些实施方案中，通过接触胃肠道的上皮组织或粘膜表面将该组合物施用于受试者。例如，该组合物可以被配制用于递送至小肠和大肠中的一者或多者。通过使该肽在一个或多个受累区域(例如十二指肠、空肠和回肠、横结肠、降结肠、升结肠、乙状结肠和盲肠)中靶向性释放，GI的任何部分处的紧密连接不完整性或微生物菌群失调都可以得到改善。该肽的靶向递送可以通过用该肽连同防止在胃中释放并且在一个或多个靶向位置处或附近降解的延迟释放包衣包裹珠粒或颗粒来实现。

在一些实施方案中，该肽被配制用于在GI的一个或多个位置中持续递送或改良递送或受控递送。例如，本发明考虑了一种持续释放或受控释放制剂，该制剂可以在至少约2小时的过程中，或在至少约2.5小时的过程中，或在至少约3小时的过程中，或在至少约4小时的过程中，或在至少约5小时的过程中在小肠和/或大肠中功能性地释放该肽。在一些实施方案中，持续释放或受控释放组合物在暴露于模拟肠液的约10至约30分钟内开始来开始释放肽，其中肽的释放持续暴露于模拟肠液的至少约180分钟，或至少约210分钟，或在至少约240分钟，或至少约280分钟。例如，可以使用具有不同肠溶聚合物包裹物的组合物和/或不同的聚合物包裹物厚度来制作释放谱。在一些实施方案中，本发明提供了一种组合物，该组合物包含有效量的该肽或其盐，该肽或其盐被包含在可生物降解或可侵蚀的聚合物基质内，该组合物还包含肠溶包衣。据此通过引用以其整体并入的WO 2021/034629中描述了采用可生物降解或可侵蚀基质的制剂。进一步地，可侵蚀聚合物基质可以包含多糖基质。在一些实施方案中，该基质包含以下中的一种或多种：纤维素、甲壳素、壳聚糖、海藻酸盐、直链淀粉、果胶、胼胝质、昆布多糖、金藻昆布多糖、木聚糖、阿拉伯木聚糖、甘露聚糖、褐藻糖胶、半乳甘露聚糖、黄原胶、葡聚糖、文莱胶、结冷胶、迪特胶、普鲁兰多糖、透明质酸以及它们的衍生物。在进一步的实施方案中，该基质包含微晶纤维素。在这些实施方案中，该组合物利用低有效剂量的肽(例如，(d)-拉瑞唑来或(d)-Pro)，同时还使无活性片段的任何局部积聚最小化。进一步地，这些实施方案中的制剂具有用小剂量的在转运过程中连续沉积的肽处理GI的大表面的益处。

在各种实施方案中，该药物组合物可被配制成具有延迟释放谱，即在摄入后不立即释放一种或多种活性成分；而是，推迟一种或多种活性成分的释放，直到肽通过胃并且位于胃肠道的较低位置中；例如，用于在小肠(例如，十二指肠、空肠、回肠中的一者或多者)或大肠(例如，盲肠，结肠的升部、横部、降部或乙状结肠部分中的一者或多者)中释放。在一个实施方案中，该药物组合物被配制成具有如例如美国专利第8,168,594号中所述的延迟释放谱，该专利的全部内容据此通过引用并入。

例如，该肽可以作为含有该肽的经口给药的延迟释放组合物施用至患者的至少十二指肠。在此类实施方案中，该组合物包含第一珠粒群，该第一珠粒群具有在胃液中稳定而在肠液中不稳定从而在十二指肠中降解并且使肽实质性地释放的包衣。该组合物还可包含第二珠粒群，该第二珠粒群具有用于影响肽在患者的空肠和/或回肠中的释放的pH依赖性包衣。例如，第二珠粒群可以释放肽达在珠粒在十二指肠中释放肽之后的约30分钟或约45分钟。该经口给药的组合物可以是胶囊或片剂的形式。该pH依赖性包衣在一些实施例中是甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的1:1共聚物，其中层的厚度决定了每个珠粒的释放谱。该珠粒可具有一种或多种额外的包衣(coating)，诸如底包裹物(base coat)、分离层和外包裹物层。在这些实施方案中，该珠粒的内含物将以更大的团注方式在靶向位置释放，但(d)-拉瑞唑来或(d)-Pro的特性将比具有此类释放谱的拉瑞唑来更有效。

在示例性经口给药的组合物中，有效量的肽(例如，呈乙酸盐形式)以能够在患者十二指肠中释放肽的第一延迟释放颗粒和能够在患者的空肠中释放肽的第二延迟释放颗粒的形式提供。每个颗粒均具有芯颗粒、包含位于芯颗粒上方的肽(例如，(d)-拉瑞唑来或(d)-Pro)的包裹物，以及位于包含该肽的包裹物外部的延迟释放包衣(例如，丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的1:1共聚物)。然而，第一延迟释放颗粒通过暴露于pH大于5的模拟肠液的约60分钟而释放第一延迟释放颗粒中的肽的至少70％；而第二延迟释放颗粒通过暴露于pH大于5的模拟肠液的约30和约90分钟而释放该肽的至少70％。

对于可能具有溃疡性结肠炎和/或克罗恩病的额外症状或涉及大肠症状的症状的患者，可将珠粒进一步配制用于包括结肠在内的大肠的节段。参见美国专利8,796,203，该专利据此通过引用以其整体并入。例如，在一些实施方案中，受试者患有环境性肠病或者处于环境性肠病的风险中，该环境性肠病如据此通过引用以其整体并入的US 2019/0358288中所述。

一般地，延迟释放包衣可以随着时间的变化而降解，而与pH和/或酶的存在无关。此种包衣可以包含例如水不溶性聚合物。因此，该包衣的溶解度不依赖于pH。如本文所用的术语“非pH依赖性”意指聚合物的透水性及其释放药物成分的能力不随着pH而变化以及/或者仅非常轻微地依赖于pH。此类包衣可以被用于制备例如持续释放制剂。合适的水不溶性聚合物包括但不限于纤维素醚、纤维素酯或纤维素醚-酯，即其中纤维素骨架上的一些羟基被烷基取代并且一些羟基被烷酰基修饰的纤维素衍生物。实例包括乙基纤维素、乙酰基纤维素、硝基纤维素等。不溶性聚合物的其他实例包括但不限于漆、和丙烯酸和/或甲基丙烯酸酯聚合物、具有低季铵含量的丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯的聚合物或共聚物、或其混合物等。不溶性聚合物的其他实例包括EUDRAGIT

EUDRAGIT

和EUDRAGIT

可用于本发明的不溶性聚合物包括例如聚乙烯酯、聚乙烯缩醛、聚丙烯酸酯、丁二烯苯乙烯共聚物等。

用于将活性剂延迟但大量地递送至GI道的各种类型的肠溶包衣是已知的。在一些实施方案中，持续释放组合物包含肠溶剂，该肠溶剂在酸性环境中实质上稳定而在接近中性至碱性环境中实质上不稳定。在一个实施方案中，持续释放包衣含有在胃液中实质上稳定的肠溶剂。肠溶剂可以选自例如以下的溶液或分散体：甲基丙烯酸共聚物、乙酸邻苯二甲酸纤维素、邻苯二甲酸羟丙甲纤维素、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯、羧甲基乙基纤维素和

型聚合物(聚(甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯)、乙酸琥珀酸羟丙甲纤维素、乙酸偏苯三酸纤维素、虫胶或其他合适的肠溶包衣聚合物。

型聚合物包括例如

FS 30D、L 30D-55、L 100-55、L 100、L 12,5、L 12,5P、RL 30D、RLPO、RL 100、RL12,5、RS 30D、RS PO、RS 100、RS 12,5、NE 30D、NE 40D、NM30D、S 100、S 12,5和S12,5P。在一些实施方案中，使用

FS 30D、L 30D-55、L 100-55、L 100、L12,5、L 12,5P、RL 30D、RL PO、RL 100、RL 12,5、RS 30D、RS PO、RS 100、RS 12,5、NE 30D、NE 40D、NM 30D、S 100、S 12,5和S12,5P中的一种或多种。肠溶剂可以是前述溶液或分散体的组合。在一些实施方案中，肠溶剂是EUDRAGIT F30D，其包含丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸的共聚物。该共聚物具有约1:10的游离羰基与酯基的比率。

在一些实施方案中，该珠粒包含肠溶包衣，该肠溶包衣实质上能抵抗在模拟胃液中的溶出。该组合物在胃液中基本上保持完整，或可以基本上不溶。抗胃液包衣的稳定性可以是pH依赖性的。例如，该肠溶包衣可以防止肽在模拟胃液以及具有约5.5的pH的模拟肠液中大量释放。在一些实施方案中，该基质提供肽在具有约6或更高(诸如约6.5至约7.0)的pH的模拟肠液中的持续释放。因此，该肠溶包衣在模拟胃液中稳定，但在具有约6.0以上的pH的模拟肠液中不稳定。此类实施方案中的肠溶包衣实质上不会使肽在十二指肠中释放，而是延迟释放直到该组合物进入空肠，然后在空肠和回肠中提供持续释放。

在一些实施方案中，该组合物是包含珠粒群的用于经口递送的胶囊，该珠粒群包含被包含在可侵蚀的聚合物基质内的有效量的肽(例如，(d)-拉瑞唑来或(d)-Pro或其盐)，该珠粒还包含有可包含丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸的共聚物的肠溶包衣。该共聚物中的游离羰基与酯基的比率可以为约1:10(例如，EUDRAGIT F30D)。在此类实施方案中，肠溶包衣可以是组合物的总重量的约20％至约30％。在一些实施方案中，可侵蚀的基质包含微晶纤维素。在一些实施方案中，该组合物在模拟胃液中在约2小时之后提供小于约15％的肽的释放。进一步地，该组合物在具有约5.5的pH的模拟肠液中约2小时之后提供小于约25％的肽的释放。在各种实施方案中，该组合物在具有约7.0的pH的模拟肠液中约2小时之后释放至少约40％但不超过约80％的肽。在各种实施方案中，在具有约7的pH的模拟肠液中的100％释放直到至少三小时才达到，或者在一些实施方案中，至少约3.5或至少约四小时才达到。

在一些实施方案中，该药物组合物涉及经包裹的片剂或经包裹的珠粒或颗粒体，该经包裹的片剂或经包裹的珠粒或颗粒体具有例如美国专利第8,168,594号中所述的延迟释放谱，该专利的全部内容据此通过引用并入。示例性肠溶包衣包含丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的共聚物，其在一些实施方案中为1:1共聚物。其他填充剂、粘合剂和增塑剂(包括用于密封包裹物或面包裹物的那些)描述于US8,168,594中，该专利据此通过引用并入。

在各种实施方案中，该组合物可以包含一个或多个分离层。分离层将芯片剂或颗粒与延迟释放包衣分离。分离层可以通过通常与包衣设备(诸如包衣锅、包衣造粒机)一起使用或者被用于使用水和/或有机溶剂进行包衣过程的流化床装置中的包裹或分层程序被施加至芯。作为替代方案，分离层可以通过使用粉末包衣技术被施加至芯材料。用于分离层的材料是单独或混合使用的药学上可接受的化合物诸如像糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等。分离层中还可以包含添加剂诸如增塑剂、着色剂、颜料、填充剂、抗粘剂和抗静电剂，诸如像硬脂酸镁、二氧化钛、滑石和其他添加剂。

肠溶包衣组合物可以分散或溶解在水中或合适的有机溶剂中，并通过本领域普通技术人员熟知的方法施加至芯颗粒。可以将一种或多种延迟释放包衣施加至经包裹的芯颗粒。

肠溶包衣或其他包裹物可以包含一种或多种惰性加工助剂，包括但不限于滑石、二氧化硅、硬脂酸镁等。肠溶包衣组合物还可以含有药学上可接受的增塑剂以获得所需的机械特性诸如柔度和硬度。此类增塑剂包括但不限于三乙酸甘油酯、柠檬酸酯、邻苯二甲酸酯、癸二酸二丁酯、鲸蜡醇、聚乙二醇、聚山梨醇酯或其他增塑剂。

例如，在一些实施方案中，经包裹的颗粒或片剂可以进一步覆盖有外包裹物层。外包裹物材料是单独或混合使用的药学上可接受的化合物诸如糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等。外包裹物材料可以防止用肠溶包衣包裹的颗粒的潜在团聚，保护该包衣在压实过程中不破裂或增强压片过程。

因此，在一些实施方案中，该基质包含一种或多种粘合剂、填充剂或增塑剂。此类组分包括纤维素或纤维素衍生物、脂肪酸盐或合成聚合物中的一者或多者。例如，粘合剂、填充剂或增塑剂可以包含合成聚合物，并且聚合物任选地是乙烯基吡咯烷和乙酸乙烯酯的共聚物。替代地，粘合剂、填充剂或增塑剂包含纤维素衍生物，该纤维素衍生物任选地包括乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和羧甲基纤维素中的一者或多者。在一些实施方案中，粘合剂、填充剂或增塑剂包含脂肪酸盐，该脂肪酸盐任选地选自C8至C18脂肪酸盐，该C8至C18脂肪酸盐任选地为硬脂酸盐(例如，硬脂酸镁)。在一些实施方案中，肠溶包衣包含增塑剂，该增塑剂任选地为柠檬酸三乙酯。

该经口给药的组合物可以是包含颗粒体或珠粒的胶囊形式，或者可以是肠溶包衣片剂，或其他形式。在一些实施方案中，该组合物包含含有可被包含在胶囊内的基质和肠溶包衣的珠粒群或颗粒体群。例如，在一些实施方案中，珠粒包含有包含丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸的共聚物的肠溶包衣，并且该共聚物可以任选地具有约1:10的游离羰基与酯基的比率。此种肠溶包衣可以为组合物的约15重量％至约40重量％。在一些实施方案中，肠溶包衣为组合物的约20重量％至约30重量％，或组合物的约20重量％至约25重量％。

可以选择聚合物基质以使其以实质上非pH依赖性的方式降解或侵蚀。在其他实施方案中，聚合物基质以pH依赖性的方式降解或侵蚀。示例性聚合物基质包含多糖基质，诸如包含以下中的一者或多者的基质：纤维素、甲壳素、壳聚糖、海藻酸盐、直链淀粉、果胶、胼胝质、昆布多糖(laminarin)、金藻昆布多糖(chrysolaminarin)、木聚糖、阿拉伯木聚糖、甘露聚糖、褐藻糖胶、半乳甘露聚糖、黄原胶、葡聚糖、文莱胶(welan gum)、结冷胶、迪特胶(diutan gum)、普鲁兰多糖、透明质酸以及它们的衍生物。纤维素的衍生物例如包括烷基、羟基和羧化衍生物。在一些实施方案中，该基质包含微晶纤维素。在又其他实施方案中，该基质包含本领域已知的各种可生物降解的合成聚合物。

在一些实施方案中，诸如对于患有无反应性或难治性乳糜泻或IBS的患者，患者可以接受辅助疗法，该辅助疗法在一些实施方案中与拉瑞唑来治疗协同作用。在一些实施方案中，额外的治疗剂是抗炎剂，诸如类固醇抗炎剂或非类固醇抗炎剂(NSAID)。类固醇，特别是肾上腺皮质类固醇及其合成类似物是本领域众所周知的。皮质类固醇的实例包括但不限于，羟基曲安西龙、α-甲基地塞米松、β-甲基倍他米松、二丙酸倍氯米松、戊酸氯倍他索、地松奈德、去氧甲米松、地塞米松、二醋酸双氟拉松、戊酸双氟可龙、氟羟可舒松(fluadrenolone)、氟氯奈德(fluclorolone acetonide)、新戊酸氟米松、肤轻松醋酸酯、肤轻松、氟科汀丁酯、氟可龙、醋酸氟泼尼定(氟泼尼立定)(fluprednidene(fluprednylidene)acetate)、氟氢缩松、哈西奈德、甲基强的松龙、曲安奈德、可的松、可托多松、氟西奈德、氟氢可的松、双醋酸双氟若松、氟轻可舒松奈德、甲羟松、安西那非、安西非特、倍他米松及其酯的平衡量、氯泼尼松、氯可托龙、地西龙、二氯松、二氟泼尼酯、氟二氯松、氟尼缩松、氟米龙、氟培龙、氟泼尼龙、氢化可的松、甲泼尼松、帕拉米松、泼尼松龙、强的松和布地奈德。可以在本发明中使用的NSAID包括但不限于水杨酸、乙酰水杨酸、水杨酸甲酯、水杨酸二醇酯、水杨酰胺、苄基-2,5-二乙酰氧基苯甲酸、布洛芬、富林达克、萘普生、酮洛芬、依托芬那酯、苯基丁氮酮和吲哚美辛。

在一个实施方案中，额外的治疗剂是免疫抑制剂，诸如硫唑嘌呤、环孢菌素、英夫利昔单抗和阿仑单抗。

在一些实施方案中，额外的治疗剂是止泻剂。适用于本发明的止泻剂包括但不限于DPP-IV抑制剂、天然阿片类药物(诸如鸦片酊剂、复方樟脑酊(paregoric)和可待因)，合成阿片类药物(诸如地芬诺酯、地芬诺辛和洛哌丁胺)、碱式水杨酸铋、兰瑞肽(lanreotide)、伐普肽(vapreotide)和奥曲肽(octreotide)、蠕动素拮抗剂(motilnantagonist)、COX2抑制剂(如塞来昔布、谷氨酰胺、沙利度胺)和传统止泻药(如高岭土、果胶、小檗碱和毒蕈碱剂)。

在一些实施方案中，额外的治疗剂是抗细菌剂，诸如抗生素。适用于本发明的抗生素包括但不限于头孢菌素抗生素类(头孢氨苄、头孢呋辛、头孢羟氨苄、头孢唑啉、头孢噻吩、头孢克洛、头孢孟多、头孢西丁、头孢丙烯(cefprozil)和头孢吡普(ceftobiprole))；氟喹诺酮抗生素类(环丙沙星(cipro)、左氧氟沙星(Levaquin)、氧氟沙星(floxin)、加替沙星(tequin)、莫西沙星(avelox)和诺氟沙星(norflox))；四环素抗生素类(四环素、米诺环素、氧四霉素(oxytetracycline)和多西环素)；青霉素抗生素类(阿莫西林、氨苄青霉素、青霉素V、双氯西林、羧苄青霉素、万古霉素和甲氧西林)；单环β-内酰胺类抗生素类(氨曲南)；和碳青霉烯抗生素类(厄他培南、多利培南，亚胺培南/西司他丁和美罗培南)。

在一些实施方案中，额外的治疗剂是益生菌。适用于本发明的益生菌包括但不限于布拉酵母(Saccharomyces boulardii)；鼠李糖乳杆菌GG(Lactobacillus rhamnosusGG)；植物乳杆菌299v(Lactobacillus plantarum 299v)；丁酸梭菌M588(Clostridiumbutyricum M588)；艰难梭菌VP20621(Clostridium difficile VP20621)(非产毒性艰难梭菌菌株)；干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)的组合(Bio-K+CL1285)；干酪乳杆菌、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)(Actimel)的组合；嗜酸乳杆菌、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)(Florajen3)的组合；嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus bulgaricus delbrueckii subsp.bulgaricus)、保加利亚干酪乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus casei)、保加利亚植物乳杆菌(Lactobacillus bulgaricusplantarum)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)和唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcussalivarius subsp.thermophilus)(VSL#3)的组合)。

根据某些实施方案，每天施用该组合物一次或多次以促进受试者的GI紧密连接完整性。例如，该组合物可以约每天一次、约每天两次，或约每天三次地被施用。在各种实施方案中，每天一次至每天三次的方案持续一段延长的时间。在一些实施方案中，该方案持续至少约1个月、至少约2个月、最少约4个月、最少约6个月或至少约8个月。在一些实施方案中，治疗是连续的以延迟或预防疾病进展或者以减轻或改善慢性病的症状。

在一些实施方案中，受试者患有乳糜泻，并且该肽被配制用于在包括十二指肠和空肠(以及任选地回肠)在内的小肠中释放。用拉瑞唑来制剂治疗的方法公开于US 2016/0022760中，其据此通过引用以其整体并入。

在一些实施方案中，受试者患有炎性肠病(IBD)，诸如克罗恩病或溃疡性结肠炎(UC)，在此情况下该组合物被配制用于将该肽递送至GI的受累部分。

在一些实施方案中，受试者患有环境性肠病或坏死性小肠结肠炎(参见US 2019/0358288，其据此通过引用以其整体并入)。在此类实施方案中，该组合物被配制用于将肽递送到GI的患病部分，该GI可以包括小肠和/或大肠。

在一些实施方案中，受试者患有脂肪性肝病，包括但不限于NAFLD、NASH、酒精性脂肪性肝炎(ASH)，或由以下引起的脂肪性肝病：肝炎、肥胖症、糖尿病、胰岛素抗性、高甘油三酯血症、慢性肾病、IgA肾病变(也称伯杰氏病(Berger's disease))、无β脂蛋白血症、糖原贮积病、韦伯-克莱斯坦(Weber-Christian)病、沃尔曼(Wolmans)病、妊娠期急性脂肪肝和脂肪营养不良(lipodystrophy)。在一些实施方案中，肠屏障功能(例如小肠)的改善限制了进入循环并最终会加重疾病或促进疾病进展的毒素(诸如LPS)的量。IgA肾病变，也称为伯杰氏病，是一种肾病，该肾病在IgA沉积物在肾中积聚时发生，导致损害肾组织的炎症。在另其他实施方案中，受试者患有肠缺血。参见US 2019/0358289和2021/0069286，其据此通过引用以其整体并入。

在一些实施方案中，受试者患有呼吸道或其他非胃肠器官或组织的炎性疾患。肠微生物组在免疫系统发育和组织稳态中起着至关重要的作用。肠微生物组影响GI道的免疫反应，也影响包括肺在内的远端器官的免疫力。因此，在一些实施方案中，本文所述的用于施用至GI的组合物有效改善GI上皮组织的完整性和控制微生物菌群失调，这对包括肺、皮肤、肝、肾、胰腺、心脏、神经系统(例如CNS)等在内的其他组织和器官的健康具有积极影响。在一些实施方案中，受试者患有呼吸系统疾病。在一些实施方案中，受试者患有哮喘、慢性阻塞性肺部疾病(COPD)、间质性肺病、肺部纤维化(例如，特发性肺部纤维化)、囊性纤维化(CF)、急性肺损伤(ALI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺癌或呼吸道感染(包括病毒感染，诸如冠状病毒感染、Flu或RSV感染)。

如本文所证明的，在肺部纤维化小鼠模型中经口提供的(d)-拉瑞唑来显示出比拉瑞唑来更好的治疗效果。因此，在一些实施方案中，受试者患有肺部纤维化或者处于肺部纤维化的风险中。肺部纤维化的特征是肺中过多的结缔组织积聚。肺部纤维化的原因包括施用诸如博来霉素和环磷酰胺的药物；暴露于某些环境因素，诸如气体、石棉和二氧化硅，以及微生物感染。一些全身性炎性疾病，诸如类风湿性关节炎和SLE也可能还使得易患肺部纤维化。肺部纤维化的症状包括呼吸困难、无痰干咳、发烧和肺细胞损害。肺部纤维化可以借助胸部x射线摄影、高分辨率计算机断层扫描和肺部功能测试结果进行诊断。

在一些实施方案中，患者患有间质性肺病或者有发展成间质性肺病的风险，该间质性肺病为诸如选自结节病和特发性肺部纤维化(IPF)的间质性肺病。在各种实施方案中，患者除了患有肺部纤维化之外还患有慢性炎性肺疾病或疾患，或者该慢性炎性肺疾病或疾患可能会使得易患肺部纤维化或者使肺部纤维化加重。示例性炎性疾病或疾患包括囊性纤维化、哮喘、慢性阻塞性肺部疾病(COPD)、肺气肿、慢性支气管炎和慢性肺炎。

在一些实施方案中，处于肺部纤维化的风险中的患者是至少60岁，或至少70岁。在一些实施例中，处于风险中的患者是吸烟者或既往吸烟者。在一些实施方案中，患者在遗传上易于发展为肺部纤维化。在这些或其他实施方案中，患者患有慢性胃肠反流。

在一些实施方案中，处于风险中的患者患有慢性或复发性呼吸道感染。可能易患肺部纤维化的示例性微生物感染包括绿脓假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia)和分枝杆菌属(结核或非结核分枝杆菌)的感染。其他微生物感染包括病毒感染，诸如副流感和冠状病毒，诸如Sars-CoV2。

在一些实施方案中，患者患有结节病，这是一种以通常在肺和淋巴结中的肉芽肿为特征的疾病。结节病可影响其他器官。替代地，患者可能患有IPF。IPF是一种在没有明确病因的情况下肺出现疤痕的疾患。

在另其他实施方案中，患者患有药物诱导的肺部纤维化或处于药物诱导的肺部纤维化的风险中。例如，患者可能正在经受用诱导肺部纤维化的抗生素(例如，呋喃妥因)、甲氨蝶呤、胺碘酮和癌症化学疗法(例如，博来霉素或烷化剂诸如环磷酰胺)进行的治疗。因此，在一些实施方案中，患者正在经受使用诱导肺部纤维化的剂的疗法，并且用肽进行的治疗被预防性地提供。

在另其他实施方案中，患有肺部纤维化或处于肺部纤维化风险中的患者具有显著的石棉职业暴露。

在各种实施方案中，患有肺部纤维化的患者患有轻度或中度肺部纤维化。在另其他实施方案中，肺部纤维化是严重的。该疾病的严重程度可以使用例如肺功能测试(例如，用力肺活量FVC)、高分辨率CT扫描(HRCT)以及/或者诸如呼吸困难和咳嗽的症状的严重程度来确定。

在另其他实施方案中，患者患有呼吸疾患(包括上述那些)或处于该呼吸疾患的风险中，并且包含该肽的组合物被配制成直接施用至肺(肺部递送)或全身递送(例如，肠胃外递送)。在一些实施方案中，患者患有以下或者处于以下的风险中：急性肺损伤(ALI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、间质性肺病(例如，肺部纤维化，诸如特发性肺部纤维化)、囊性纤维化或细菌或病毒感染(例如冠状病毒感染诸如SARS-CoV、流感病毒感染或RSV感染)。用于肺部递送的示例性制剂(包括粉末和溶液气雾剂)在US 10,723,763中有描述，该专利据此通过引用以其整体并入。

在一些实施方案中，受试者患有自身免疫性疾病，诸如但不限于类风湿性关节炎、幼年类风湿性关节炎、狼疮、1型糖尿病或多发性硬化症。类风湿性关节炎是一种慢性炎性病症，在此病症下身体的免疫系统会攻击关节组织，并且在严重的情况下还会攻击内脏器官。在很长一段时间内，与类风湿性关节炎相关的炎症会导致骨侵蚀和关节畸形。幼年类风湿性关节炎，也称为幼年特发性关节炎，是一类会导致16岁或16岁以下儿童的关节炎症和僵硬超过6周的关节炎。狼疮是一种当身体的免疫系统攻击其自身的组织和包括关节、皮肤、肾、血细胞、大脑、心脏和肺在内的器官时发生的疾病。1型糖尿病是一种自身免疫性疾病，在此疾病下身体的免疫系统会攻击并破坏产生胰岛素的胰腺细胞。多发性硬化症是一种自身免疫性病症，在此病症下身体的免疫系统会攻击并破坏神经的保护覆盖层。在这些实施方案中，该组合物可以被配制用于如本文所述的那样递送至GI，但任选地全身(例如，肠胃外)或局部递送至受累组织(包括肺、皮肤或眼睛)。

在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗或预防赘生物(例如，实体瘤或血癌)的方法。例如，内源性和外源性微生物体可以促进各种赘生物的发病机制。参见Hamada T等人，Integration of microbiology,molecular pathology,and epidemiology:a new  paradigm to explore the pathogenesis of microbiome-driven neoplasms.JPathol2019；247:615–628。在各种实施方案中，该癌症可以是原发性癌症。原发性癌症是指位于起源部位处的癌细胞变得在临床上可以检测到，并且可能是原发性肿瘤。例如，该癌症可以是I期或II期癌症。“转移”是指癌症从原始位点扩散至身体的其它地方。癌细胞可脱离原发性肿瘤，渗透到淋巴管和血管中，循环通过血流，并且在身体其它部位的正常组织的远距离病灶(转移)处生长。转移可以是局部的或远距离的。在这些实施方案中，该组合物可被配制用于如本文所述的那样递送至GI，但任选地全身(例如，肠胃外)递送。

在一些实施方案中，该癌症可起源于任何组织。例如，在实施方案中，该癌症起源于皮肤、结肠、乳腺或前列腺，并且因此可由最初分别为皮肤、结肠、乳腺或前列腺的细胞组成。在一些实施方案中，该癌症是实体瘤，诸如肉瘤或癌(carcinoma)。在一些实施方案中，该癌症也可以是血液系统恶性肿瘤，该血液系统恶性肿瘤可以是淋巴瘤或白血病。在一些实施方案中，原发性或转移性癌症是肺癌、乳腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、胰腺癌、黑色素瘤、卵巢癌、骨癌、尿路上皮癌、胃癌、头颈部癌、胶质母细胞瘤、头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌(SCLC)、膀胱癌、前列腺癌(例如激素难治性)。在一些实施方案中，该癌症为黑色素瘤、结直肠癌或头颈部癌。在一些实施方案中，受试者患有结肠直肠癌或处于结肠直肠癌的风险中(包括处于复发性结肠直肠癌的风险中)。

在一些实施方案中，该癌症是进行性、局部晚期或转移性癌。在一些实施方案中，该癌症是转移性黑色素瘤，并且可能是复发性的。在一些实施方案中，该转移性黑色素瘤是III期或IV期，并且可以是IVA期、IVB期或IVC期。转移可以是区域性的或远距离的。在一些实施方案中，实体瘤是复发性或难治性实体瘤。

在一些实施方案中，受试者患有赘生物(例如，实体瘤或血癌)，并且可能正在经受癌症疗法，诸如但不限于化学疗法、放射疗法或免疫疗法(例如，过继细胞疗法、CAR-T疗法、免疫检查点抑制剂疗法)。在此类实施方案中，包含肽(例如，(d)-拉瑞唑来)的组合物可以增强免疫疗法，提供协同效果。参见WO 2019/183036，其据此通过引用以其整体并入。在一些实施方案中，受试者正在接受、已经接受或将接受使用免疫检查点抑制剂的疗法。检查点抑制剂药物的实例包括但不限于：伊匹木单抗(Ipilimumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、纳武利尤单抗(nivolumab)、西米单抗(cemiplimab)、阿替利珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)和德瓦鲁单抗(durvalumab)。在这些实施方案中，该组合物可被配制用于如本文所述的那样递送至GI，但任选地全身(例如，肠胃外)递送。优选地，该组合物被递送至GI。

在各种实施方案中，该组合物的施用增加或恢复免疫检查点抑制剂疗法的功效。例如，在一些实施方案中，患有癌症的受试者先前对免疫检查点抑制剂没有反应或已经变得对免疫检查点抑制剂具有抗性。在一些实施方案中，该癌症对免疫疗法诸如抗CTLA-4、抗PD-1或抗PD-L1和/或PD-L2剂来说是难治的或反应不足的。在一些实施方案中，癌症受试者在用抗CTLA-4、抗PD-1或抗PD-L1和/或PD-L2剂(包括例如伊匹木单抗、曲美木单抗、帕博利珠单抗和纳武利尤单抗中的一者或多者)治疗之后或期间已进展，或在至少约4周、或至少约8周、或至少约12周的治疗内对此种治疗未表现出反应。

在一些实施方案中，受试者正在经受化学疗法，并且处于风险中或正在经历化学疗法诱导的结肠炎。在各种实施方案中，用来治疗癌症的化学疗法药物(特别是高剂量化学疗法)破坏了结肠中细菌的正常平衡，从而导致结肠炎。

在一些实施方案中，受试者患有使中枢神经系统(CNS)受累的疾患，该疾患包括但不限于神经退行性疾病和脱髓鞘疾病。在一些实施方案中，该疾病是帕金森病、阿尔茨海默病、多发性硬化症或痴呆。在这些实施方案中，该组合物可被配制用于如本文所述的那样递送至GI，但任选地全身(例如，肠胃外)递送。优选地，该组合物被递送至GI。

在一些实施方案中，本发明考虑了对危重病受试者的治疗，其中该危重病是具有显著死亡风险的威胁生命的多系统过程。在各种实施方案中，该受试者处于多器官衰竭的风险中。

在一些实施方案中，该受试者正在接受肠胃外营养。在这些实施方案中，该组合物预防或改善或治疗全肠胃外营养(TPN)诱导的病症，包括但不限于全肠胃外营养(TPN)诱导的肠粘膜萎缩或全肠胃外营养(TPN)诱导的肝病。全肠胃外营养(TPN)导致小肠萎缩和肠功能衰减。此外，患有TPN诱导的肝病的受试者可能表现出胆汁淤积、髓外造血以及微泡性和大泡性脂肪变性。在这些实施方案中，该组合物可以被配制用于如本文所述的那样递送至GI。

在另一些其他实施方案中，受试者患有炎性疾病，诸如但不限于川崎病、儿童多系统炎性综合征(Mis-C)或全身炎性反应综合征。川崎病，也称为皮肤粘膜淋巴结综合征，是一种引起血管(尤其是冠状动脉)的炎症的疾患，并且最常见于婴儿和幼儿。儿童多系统炎性综合征(Mis-C)是一种原因不明的疾患，在此种疾患下不同的身体部位会发炎，该身体部位包括心脏、肺、肾、大脑、皮肤、眼睛或胃肠器官。在一些实施方案中，受试者患有全身性炎性反应综合征，该全身性炎性反应综合征可以是身体对有害应激源(例如感染、创伤、手术、急性炎症、缺血或再灌注或恶性肿瘤)的过度防御反应。在这些实施方案中，该组合物可以被配制用于如本文所述的那样递送至GI，但任选地全身(例如，肠胃外)或局部递送至受累组织(包括肺、皮肤或眼睛)。

在各种实施方案中，可以每天一次或多次，诸如每天一次到三次施用包含该肽的组合物。虽然在CeD的临床试验期间，拉瑞唑来一般每天给药3次，但鉴于更高的稳定性和改进的效力，包含一种或多种D-氨基酸的本文所述的肽(例如，(d)-拉瑞唑来或(d)-Pro拉瑞唑来)可以作为长效类似物以更方便的给药计划表提供。例如，在一些实施方案中，(d)-拉瑞唑来或(d)-Pro拉瑞唑来组合物被每天一次或两次，或每周一次或两次地施用至GI道(例如，经口施用)。在一些实施方案中，(d)-拉瑞唑来或(d)-Pro拉瑞唑来被每天一次地施用至GI道(例如，经口施用)。在一些实施方案中，(d)-拉瑞唑来或(d)-Pro拉瑞唑来组合物约每天一次或两次或每周一次或两次地经由另一种途径(诸如肠胃外、鼻内、肺部或眼部施用)被施用。

现在将参考以下实施例描述本发明的实施方案。

如本文所用，除非上下文另有要求，否则术语“约”意指相关数值的±10％。

实施例

实施例1：具有改进的活性谱的拉瑞唑来类似物的开发拉瑞唑来剂量依赖性反应 模型

为了评估拉瑞唑来和拉瑞唑来类似物的活性谱，采用离体测定法测量受缺血性损伤的猪空肠的跨上皮电阻(TEER)。图1显示拉瑞唑来以“钟形”剂量依赖性方式诱导受缺血性损伤的肠的修复。拉瑞唑来的修复作用归因于紧密连接重组装。也就是说，在中等剂量范围内发现最大和最深远的影响，而在低剂量和高剂量水平下没有显着影响。由于粘蛋白层中存在的刷状缘酶氨基肽酶的活性，剂量范围的低端和高端几乎没有影响。因此，当以高剂量给予拉瑞唑来时，拉瑞唑来的作用可能会被过量浓度的抑制性片段阻断。当以低剂量给药时，拉瑞唑来的活性被过度降解本身抑制。这种“钟形”剂量-活性关系使得拉瑞唑来在临床环境中的给药具有挑战性。拉瑞唑来类似物被设计用于探究类似物是否可能具有更期望的剂量-活性谱。

拉瑞唑来类似物设计

D-拉瑞唑来类似物是手性修饰的拉瑞唑来类似物，被设计用于阻碍刷状缘酶识别以降解，并防止其碎裂，同时保持拉瑞唑来的恢复功效。以下类似物被设计用于离体测试：

表1：设计的拉瑞唑来类似物列表

拉瑞唑来类似物的离体测试

最初在测量受缺血性损伤的猪空肠组织的恢复情况的离体模型中测试了几种拉瑞唑来类似物。

将六至八周龄的约克郡(Yorkshire)杂交猪(无论是何种性别)单独饲养，并用商业化粒状饲料喂养。实验手术前，让猪禁食12小时。用甲苯噻嗪(1.5mg/kg IM)、氯胺酮(11mg/kg IM)诱导全身麻醉，接着通过面罩递送在100％ O₂中蒸发的异氟烷。随后对猪进行口气管插管，接着继续递送在100％ O₂中的异氟烷以维持外科手术麻醉平面。将静脉导管置于耳静脉中以在手术期间递送流体(乳酸林格溶液，15ml·kg^-1·h^-1，IV)。经由腹中线切口接近远端空肠。通过用2-0丝线以8-10厘米间隔结扎肠来勾划出空肠节段，并通过用2-0丝线结扎局部肠系膜血液供应45分钟来使该空肠段经受节段性缺血。

尤斯室研究

缺血45分钟后，对猪实施安乐死，并收集肠节段。此时还收集了非缺血性对照组织。组织采集后，从黏膜剥离浆肌层，同时将组织在经充氧(95％ O₂、5％ CO₂)的林格溶液(以mmol/L为单位：154Na⁺、6.3K⁺、137Cl^-、和24HCO₃ ^-；pH 7.4)中冲洗。随后将粘膜安装在1.1-cm²孔径的尤斯室中，如以下通过引用以其整体并入本文的先前研究所述：Moeser,A.J.；Nighot,P.K.；Ryan,K.A.；Wooten,J.G.；Blikslager,A.T.Prostaglandin-mediated  inhibition of Na+/H+exchanger isoform2stimulates recovery of barrier function  in ischemia-injured intestine.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol(2006),291,G885-94；以及Jin,Y.；Blikslager,A.T.Myosin light chain kinase mediates  intestinal barrier dysfunction via occludin endocytosis during anoxia/ reoxygenation injury.Am J Physiol Cell Physiol(2016),311,C996-C1004。用10mL林格溶液冲洗粘膜和浆膜两侧上的组织。粘膜冲洗溶液含有10mM甘露醇，而浆膜侧用10mM葡萄糖进行渗透平衡。给冲洗溶液充氧(95％ O₂，5％ CO₂)并使该冲洗溶液在水套式储库中循环。使用连接到甘汞电极的林格-琼脂桥测量自发电位差(PD)，并使用经过流体阻力校正的电压钳通过Ag-AgCl电极使PD短路。由自发PD和短路电流(I_sc)计算出TER(Ω·cm²)。如果自发PD介于-1.0和1.0mV之间，则将组织电流钳在±100μA并保持5秒，并记录PD。在4小时的实验中，每隔15分钟记录I_sc和PD。在将组织安装在尤斯室上后，让所有组织适应30分钟的时间以建立稳定的基线测量值，之后将拉瑞唑来或拉瑞唑来类似物的实验处理剂添加到顶端室中。通过测量跨上皮阻力(TER)监测组织240分钟。在选定的时间点收集林格溶液样品并且将其用5％三氟乙酸(TFA)溶液(在80％乙腈(ACN)中：20％ DI水中)淬灭。将经淬灭的样品以13000xg离心5分钟，并将所得上清液储存在-80℃以供将来进行MS分析。

图2描绘了类似物#1、2和3的测试结果，其显示没有显著诱导受缺血性损伤的组织的恢复。

在针对受缺血性损伤的猪空肠组织的恢复的体外测试中，也比较了类似物#5和6的恢复效果。如图3所示，与将Val改变为D-氨基酸的类似物#5相比，类似物#6(全D-氨基酸拉瑞唑来类似物)表现出明显的恢复效果。对类似物#5和6的肽稳定性进行了进一步比较——在将1μm的类似物#5(D-Val)、类似物#6(全D)和拉瑞唑来中的每一种添加到猪缺血性空肠组织中后的T0、30和120分钟测量它们的浓度。如下表2所示，与拉瑞唑来和类似物#5相比，全D拉瑞唑来(类似物#6)表现出对刷状缘酶降解的显著抗性。

表2：肽稳定性的离体评价

最初的拉瑞唑来类似物测试的结果产生了几个发现。首先，表明延长拉瑞唑来的N末端不会产生对空肠刷状缘酶的降解的抗性。关于将拉瑞唑来的全部(非甘氨酸)氨基酸的手性构型改变为D氨基酸，这种“全D氨基酸”肽表现出(1)对上皮刷状缘酶降解的显著抗性效果，以及(2)明显的紧密连接恢复效果。

实施例2：全D氨基酸拉瑞唑来类似物比拉瑞唑来更有效

进行了一组实验，以比较全D氨基酸拉瑞唑来类似物(类似物#6)与拉瑞唑来在降解特征、恢复效果和剂量反应谱方面的差异。在评估拉瑞唑来与类似物#6随时间推移的降解特征之间的差异的实验中，图4显示类似物#6比拉瑞唑来显著地更能抵抗降解。也就是说，类似物#6在空肠上皮刷状缘酶作用下的降解速度显著慢于拉瑞唑来。

进行了一项评估类似物#6是否能诱导受缺血性损伤的肠恢复的离体研究，图5显示全D-氨基酸拉瑞唑来类似物在240分钟的恢复期内诱导的恢复程度与拉瑞唑来实质上相同。具体地，拉瑞唑来和类似物#6均以1μM浓度被施加至受缺血性损伤的肠组织，并在240分钟的恢复期内测量跨上皮/跨内皮电阻。还进行了未施用活性剂的非缺血性组织对照。令人惊讶的是，全D-氨基酸拉瑞唑来类似物在诱导受缺血性损伤的肠恢复方面与拉瑞唑来一样有效。虽然预计L氨基酸被D氨基酸取代的肽药物会由于对受体结合位点的亲和力丧失而失去效力，但d-拉瑞唑来没有表现出这种行为。

进行剂量反应研究以比较类似物#6和拉瑞唑来的活性谱。具体地，图6描绘了一项实验，其中在类似物#6分别以0.01μM、0.1μM、1μM和10μM的浓度被施加至受缺血性损伤的肠组织时测量跨上皮/跨内皮电阻。以1μM浓度施加的拉瑞唑来用作对照。未接受任何活性剂的非缺血组织也用作对照。实验结果表明，类似物#6以不同于拉瑞唑来的剂量反应方式诱导受损伤的肠修复，并且没有表现出拉瑞唑来的显着的钟形剂量反应。如图6所示，0.1μM的类似物#6诱导TER的良好恢复，在较高浓度下观察到类似的活性。

实施例3：全D氨基酸拉瑞唑来类似物诱导的回收不受过量D-拉瑞唑来片段的抑制

为了确定类似物#6的活性是否会与拉瑞唑来作用的情况一样被过量的类似物#6片段抑制，进行了若干实验。

已知的抑制拉瑞唑来活性的拉瑞唑来片段是Gly-Val-Leu-Val-Gln-Pro-Gly(片段1)和Val-Leu-Val-Gln-Pro-Gly(片段2)。为了说明目的，图7描绘了当拉瑞唑来被单独地或者在添加以下拉瑞唑来片段后不久(例如，约30分钟后)被施加至受缺血性损伤的肠组织时该拉瑞唑来片段(10倍过量)的抑制效果：1μM拉瑞唑来；10μM片段#1；10μM片段#2；10μM片段#1+1μM拉瑞唑来；和10μM片段#2+1μM拉瑞唑来。未接受活性剂的非缺血性和缺血性肠组织用作对照。在240分钟的恢复期内测量跨上皮/跨内皮电阻。

然后进行实验以评估d-拉瑞唑来片段对类似物#6活性的影响。具体来说，在全D氨基酸拉瑞唑来类似物(类似物#6)施加前不久(30分钟前)施加d-拉瑞唑来片段Gly-(d)Val-(d)Leu-(d)Val-(d)Gln-(d)Pro-Gly(A6F1，类似物#6的片段#1)和(d)Val-(d)Leu-(d)Val-(d)Gln-(d)Pro-Gly(A6F2，类似物#6的片段#2)。图8描绘了在存在和不存在如下的片段A6F1的情况下施加的全-D氨基酸拉瑞唑来类似物的结果：0.1μM类似物#6；1μM类似物#6；10μM A6F1；10μM A6F1+0.1μM类似物#6；和非缺血性组织对照。结果表明，过量100倍的A6FI似乎对全D氨基酸拉瑞唑来类似物(类似物#6)的作用没有太大影响。图9描绘了在存在和不存在如下的片段A6F2的情况下施加的全D氨基酸拉瑞唑来类似物的结果，如下所示：0.1μM类似物#6；1μM类似物#6；10μM A6F2；10μM A6F2+0.1μM类似物#6；和非缺血性组织对照。结果显示全D氨基酸拉瑞唑来类似物(类似物#6)的作用似乎没有被100倍过量浓度的A6F2有意义地阻断。

图10描绘了图8和图9的组合结果，其中A6F1和A6F2片段二者是与类似物#6结合施加的。结果表明，100倍过量的全D-氨基酸拉瑞唑来类似物片段表现出较不显著的对抗类似物#6的活性的竞争抑制趋势。

总体而言，结果表明，与拉瑞唑来降解片段相反，全D-氨基酸拉瑞唑来片段表现出较少的竞争抑制。此外，全D-氨基酸拉瑞唑来类似物促进受损伤的上皮中的紧密连接恢复，比拉瑞唑来具有更高的稳定性，并且由于抑制性片段的减少而具有可能延长的活性。

实施例4：全D-氨基酸拉瑞唑来类似物诱导肺部纤维化模型的恢复

在博莱霉素(BLM)诱导的肺部纤维化模型中进行了一项实验来评估拉瑞唑来和全d-氨基酸拉瑞唑来对肺纤维化的影响。

该实验由3个研究组组成：(1)第1组，该组代表由12只BLM诱导的肺部纤维化模型小鼠组成的媒介物组，该小鼠从第0天至第20天每天一次地被经口施用10mL/kg体积的媒介物(纯水)；(2)第2组，该组代表由12只BLM诱导的肺部纤维化模型小鼠组成的拉瑞唑来组，该小鼠从第0到20每天一次地被经口施用10mL/kg体积的以1mg/kg的剂量补加有拉瑞唑来的媒介物；和第3组，该组代表由12只BLM诱导的肺部纤维化模型小鼠组成的全d-拉瑞唑来组，该小鼠从第0天到第20天每天一次地被施用了10mL/kg体积的以1mg/kg的剂量补加有d-拉瑞唑来的媒介物。

每天监测动物的活力、临床症状和行为。每天记录体重，并观察小鼠的毒性、濒死和死亡的显著临床体征。图11描绘了在小鼠被给予媒介物、拉瑞唑来或全d-拉瑞唑来时在BLM施用后以天数计的研究过程中体重的变化。图12示出了研究过程中的存活率。

在第21天处死动物(图13示出处死当天小鼠的体重)，并收集肺样品。具体来说，结扎左和后腔静脉叶支气管，以避免固定物泄漏。图14示出左肺重量，并且图15示出处死当天小鼠的后腔静脉叶重量。将留置针插入到气管中并连接到注射器的滴注路径。然后给注射器加载10％中性缓冲福尔马林并且将注射器保持在20cm的高度。然后，向上叶(A)、中叶(B)和下叶(C)滴注10％中性缓冲福尔马林并且在膨胀后将它们结扎。收获了三个固定叶(用于组织学分析)、未固定的左肺(E)(用于生物化学)和未固定的后腔静脉叶(D)。用冷盐水洗涤两个未固定的叶并测量它们的湿重。将三个固定叶在10％中性缓冲福尔马林中固定24小时。固定后，继续对这些标本进行石蜡包埋以进行马森三色(Masson's trichrome)染色。

为了量化肺羟脯氨酸含量，如下通过酸水解方法处理冷冻的左肺样品。将肺样品在121℃下用300μL 6N HCl酸水解20分钟，然后用含有10mg/mL活性炭的300μL 4N NaOH中和。然后向样品中加入AC缓冲液(2.2M乙酸/0.48M柠檬酸，300μL)，接着离心以收集上清液。用16μg/mL、8μg/mL、4μg/mL、2μg/mL、1μg/mL和0.5μg/mL的反式-4-羟基-L-脯氨酸(Sigma-Aldrich Co.LLC.,USA Code:54409)构建羟脯氨酸的标准曲线。将制备的样品和标准品(各400μL)与400μL氯胺T溶液(NACALAI TESQUE,INC.，日本：代码：08005-52)混合，并且在室温下孵育25分钟。然后将样品与Ehrlich溶液(400μL)混合并且在65℃下加热20分钟以显色。在将样品在冰上冷却并且离心以去除沉淀物后，在560nm处测量每种上清液的光密度。由如图16所描绘的羟脯氨酸标准曲线计算羟脯氨酸浓度。肺羟脯氨酸含量以μg/左肺表示。

还进行了样品的组织学分析。将预固定在10％中性缓冲福尔马林中的右肺组织包埋在石蜡中，并以4μm切片。对于马森三色染色，将切片脱蜡并且再水化，接着用波恩氏溶液(Bouin's solution)重新固定15分钟。将该切片在魏格特氏铁苏木精(Weigert’s ironHematoxylin)工作溶液(Sigma-Aldrich)、比布列希猩红-酸性品红溶液(Biebrichscarlet-Acid fuchsin solution)(SigmaAldrich)、磷钨/磷钼酸溶液、苯胺蓝溶液和1％乙酸溶液(Sigma-Aldrich)中染色。

对于肺纤维化区域的定量分析，使用数码相机(DFC295；Leica，Germany)在100倍放大率下随机捕获经马森三色染色的切片的明视野图像，并且根据如下所示的肺纤维化分级标准对20个视野/小鼠中的胸膜下区域进行评估(Ashcroft,T.等人,J Clin Pathol,1988；41:467-70)：

表3：肺纤维化分级标准

图17示出了在经受上述染色过程之后分别被施用媒介物、拉瑞唑来和全d-拉瑞唑来的小鼠的右肺组织切片。图18描绘了根据Ashcroft评估和分级标准的染色的右肺切片的分级结果。全d-拉瑞唑来右肺样品表现出比媒介物或拉瑞唑来样品都少的纤维化。

等效方案

尽管已经结合本发明的具体实施方案描述本发明，但应理解本发明能够具有进一步的修改，并且本申请旨在涵盖大体上符合本发明原理的、包括虽然不属于本发明所公开内容范围但属于本发明所属领域的公知技术或常用的技术手段并可以应用于上文中阐述和所附权利要求的范围所列出的必要特征中的任何变型、用途或者变更。

本领域技术人员将认识到或能够仅使用常规实验来确定本文具体描述的具体实施方案的许多等效物。此类等效物旨在涵盖在所附权利要求的范围内。

通过引用并入

本文引用的所有专利和出版物均据此通过引用以其整体并入。

序列表

<110> 九米特生物制药有限公司(9 Meters Biopharma, Inc.)

<120> 包含D-氨基酸的拉瑞唑来衍生物

<130> NMT-024PC/116031-5024

<150> US 63/010,135

<151> 2020-04-15

<150> US 63/114,756

<151> 2020-11-17

<160> 9

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成聚合物.

<400> 1

Gly Val Leu Val Gln Pro Gly

1               5

<210> 2

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成聚合物.

<220>

<221> (d)-氨基酸

<222> (4)..(4)

<400> 2

Gly Gly Val Leu Val Gln Pro Gly

1               5

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成聚合物.

<220>

<221> (d)-氨基酸

<222> (1)..(1)

<400> 3

Val Gly Gly Val Leu Val Gln Pro Gly

1               5

<210> 4

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成聚合物.

<400> 4

Val Gly Gly Val Leu Val Gln Pro Gly

1               5

<210> 5

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成聚合物.

<220>

<221> (d)-氨基酸

<222> (3)..(3)

<400> 5

Gly Gly Val Leu Val Gln Pro Gly

1               5

<210> 6

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成聚合物.

<220>

<221> (d)-氨基酸

<222> (3)..(3)

<220>

<221> (d)-氨基酸

<222> (4)..(4)

<220>

<221> (d)-氨基酸

<222> (5)..(5)

<220>

<221> (d)-氨基酸

<222> (6)..(6)

<220>

<221> (d)-氨基酸

<222> (7)..(7)

<400> 6

Gly Gly Val Leu Val Gln Pro Gly

1               5

<210> 7

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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<223> 合成聚合物.

<400> 7

Gly Val Leu Val Gln Pro Gly

1               5

<210> 8

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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<223> 合成聚合物.

<400> 8

Val Leu Val Gln Pro Gly

1               5

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<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成聚合物.

<220>

<221> (d)-氨基酸

<222> (7)..(7)

<400> 9

Gly Gly Val Leu Val Gln Pro Gly

1               5

Claims (75)

1.一种药物组合物，其包含有效量的用于促进紧密连接完整性的具有含有一种或多种(d)-氨基酸的氨基酸序列Gly-Gly-Val-Leu-Val-Gln-Pro-Gly(SEQ ID NO:1)的肽，或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述肽具有氨基酸序列Gly-Gly-(d)Val-(d)Leu-(d)Val-(d)Gln-(d)Pro-Gly(SEQ ID NO:6)。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述肽具有氨基酸序列Gly-Gly-Val-Leu-Val-Gln-(d)Pro-Gly(SEQ ID NO:9)。

4.如权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物含有小于约0.5mg的所述肽。

5.如权利要求4所述的药物组合物，其中所述组合物含有约0.25mg或更少的所述肽。

6.如权利要求4所述的药物组合物，其中所述组合物含有约50μg至约400μg的所述肽。

7.如权利要求4所述的药物组合物，其中所述组合物含有约50μg至约150μg的所述肽。

8.如权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物含有多于约0.5mg的肽。

9.如权利要求8所述的组合物，其中所述组合物含有至少约1.0mg的肽。

10.如权利要求8所述的组合物，其中所述组合物含有至少2.0mg的所述肽。

11.如前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述肽是乙酸盐。

12.如权利要求1至11中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物被配制用于胃肠递送。

13.如权利要求12所述的药物组合物，其中所述组合物被配制成具有肠溶包衣以将所述肽递送至小肠或大肠。

14.如权利要求13所述的药物组合物，其中所述组合物被配制用于将所述肽递送至十二指肠、空肠和/或回肠中的一者或多者。

15.如权利要求12至14中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物被配制用于将所述肽递送至大肠。

16.如权利要求15所述的药物组合物，其中所述组合物被配制用于将所述肽递送至盲肠、升结肠、横结肠、降结肠和/或乙状结肠中的一者或多者。

17.如权利要求12至16中任一项所述的组合物，其中所述组合物含有含肽珠粒，所述含肽珠粒具有在胃液中稳定而在肠液中不稳定从而使得所述肽在小肠和/或大肠中实质性地释放的肠溶包衣。

18.如权利要求17所述的药物组合物，其中所述药物组合物在暴露于模拟肠液的约15分钟、约30分钟或约45分钟或约60分钟内开始释放所述肽。

19.如权利要求12至18中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物提供所述肽在模拟肠液中的持续释放至少约180分钟，或至少约210分钟，或至少约240分钟。

20.如权利要求19所述的药物组合物，其中所述肽包含在可生物降解或可侵蚀的基质中。

21.如权利要求20所述的药物组合物，其中所述聚合物基质包括多糖基质。

22.如权利要求21所述的药物组合物，其中所述基质包含以下中的一种或多种：纤维素、甲壳素、壳聚糖、海藻酸盐、直链淀粉、果胶、胼胝质、昆布多糖、金藻昆布多糖、木聚糖、阿拉伯木聚糖、甘露聚糖、褐藻糖胶、半乳甘露聚糖、黄原胶、葡聚糖、文莱胶、结冷胶、迪特胶、普鲁兰多糖、透明质酸以及它们的衍生物。

23.如权利要求21所述的组合物，其中所述基质包含微晶纤维素。

24.如权利要求1至23中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物包含一个或多个珠粒群，所述珠粒群具有pH依赖性的延迟释放包衣，所述包衣任选地是丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的1:1共聚物。

25.如权利要求19至23中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物包含肠溶包衣，所述肠溶包衣包含丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸的共聚物。

26.如权利要求25所述的药物组合物，其中所述共聚物中游离羰基与酯基的比率为约1:10。

27.如权利要求1至11中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物被配制用于肠胃外施用。

28.如权利要求27所述的药物组合物，其中所述组合物被配制用于皮下、肌内或静脉内施用。

29.如权利要求1至11中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物被配制用于肺部施用。

30.如权利要求29所述的药物组合物，其中所述组合物被配制成溶液气雾剂或粉末气雾剂。

31.如权利要求1至11中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物被配制用于鼻施用。

32.如权利要求1至11中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物被配制用于眼部施用。

33.一种促进组织紧密连接完整性的方法，其包括向有需要的受试者的组织施用权利要求1至32中任一项所述的组合物。

34.如权利要求33所述的方法，其中所述受试者患有与上皮通透性相关的疾患或者处于与上皮通透性相关的疾患的风险中。

35.如权利要求33或34所述的方法，其中所述组合物每天施用一次或两次，或每周施用一次或两次。

36.一种用于治疗或预防受试者中与胃肠上皮通透性相关的疾患的方法，其包括向所述受试者的GI施用权利要求1至26中任一项所述的组合物。

37.如权利要求36所述的方法，其中所述受试者患有乳糜泻。

38.如权利要求36所述的方法，其中所述受试者患有炎性肠病。

39.如权利要求36所述的方法，其中所述受试者患有溃疡性结肠炎。

40.如权利要求36所述的方法，其中所述受试者患有克罗恩病。

41.如权利要求36所述的方法，其中所述受试者患有环境性肠病或坏死性小肠结肠炎。

42.如权利要求36所述的方法，其中所述受试者患有肠缺血。

43.如权利要求36所述的方法，其中所述受试者患有炎性肝病或者处于炎性肝病的风险中。

44.如权利要求43所述的方法，其中所述受试者患有脂肪性肝病。

45.如权利要求43所述的方法，其中所述受试者患有非酒精性脂肪肝病(NAFLD)或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

46.如权利要求36所述的方法，其中所述受试者患有以下中的一种或多种：肾病、IgA肾病变、病毒性肝炎、糖尿病、高甘油三酯血症和胰岛素抗性。

47.如权利要求46所述的方法，其中所述受试者患有糖尿病。

48.如权利要求36所述的方法，其中所述受试者患有肺部疾患，所述肺部疾患任选地是哮喘、慢性阻塞性肺部疾病(COPD)、囊性纤维化、肺癌和呼吸道感染。

49.如权利要求48所述的方法，其中所述受试者患有肺部纤维化或者处于肺部纤维化的风险中。

50.如权利要求49所述的方法，其中所述肺部纤维化是特发性肺部纤维化或化学疗法诱导的肺纤维化。

51.如权利要求48所述的方法，其中所述受试者患有间质性肺病。

52.如权利要求48所述的方法，其中所述受试者患有急性肺损伤或急性呼吸窘迫综合征或者处于急性肺损伤或急性呼吸窘迫综合征的风险中。

53.如权利要求52所述的方法，其中所述受试者患有冠状病毒感染，所述冠状病毒感染任选地是SARS-CoV2。

54.如权利要求36至53中任一项所述的方法，其中所述组合物约每天一次、约每天两次，或约每天3次地被施用。

55.一种治疗患有肺部疾病或者处于肺部疾病风险中的受试者的方法，其包括向所述患者施用权利要求29至31中任一项所述的组合物。

56.如权利要求55所述的方法，其中所述患者患有肺部疾患，所述肺部疾患任选地是哮喘、慢性阻塞性肺部疾病(COPD)、囊性纤维化、肺癌和呼吸道感染。

57.如权利要求56所述的方法，其中所述患者患有肺部纤维化或者处于肺部纤维化的风险中。

58.如权利要求57所述的方法，其中所述肺部纤维化是特发性肺部纤维化或化学疗法诱导的肺纤维化。

59.如权利要求55所述的方法，其中所述患者患有间质性肺病。

60.如权利要求55所述的方法，其中所述患者患有急性肺损伤或急性呼吸窘迫综合征或者处于急性肺损伤或急性呼吸窘迫综合征的风险中。

61.如权利要求60所述的方法，其中所述受试者患有冠状病毒感染，所述冠状病毒感染任选地是SARS-CoV2。

62.如权利要求55所述的方法，其中所述肺部疾病选自哮喘、慢性阻塞性肺部疾病(COPD)、囊性纤维化(CF)、肺癌和呼吸道感染。

63.如权利要求55至62中任一项所述的方法，其中所述组合物约每天一次、约每天两次，或约每天3次地被施用。

64.一种治疗患有川崎病、儿童多系统炎性综合征(Mis-c)或全身性炎性反应综合征或者处于川崎病、儿童多系统炎性综合征(Mis-c)或全身性炎性反应综合征风险中的受试者的方法，其包括向所述受试者施用权利要求1至32中任一项所述的组合物。

65.一种治疗患有自身免疫性疾病或者处于自身免疫性疾病的风险中的受试者的方法，所述自身免疫性疾病任选地选自类风湿性关节炎、幼年类风湿性关节炎、狼疮、1型糖尿病和多发性硬化症，所述方法包括向所述受试者施用权利要求1至32中任一项所述的组合物。

66.一种治疗患有赘生物或者处于赘生物风险中的受试者的方法，其包括向所述受试者施用权利要求1至33中任一项所述的组合物。

67.如权利要求66所述的方法，其中所述受试者进一步接受癌症免疫疗法。

68.如权利要求67所述的方法，其中所述癌症免疫疗法是使用免疫检查点抑制剂的疗法。

69.如权利要求66所述的方法，其中所述受试者正在接受化学疗法。

70.如权利要求69所述的方法，其中所述受试者患有化疗诱导的结肠炎或者处于化疗诱导的结肠炎的风险中。

71.一种治疗患有中枢神经系统疾患或者处于中枢神经系统疾患风险中的受试者的方法，其包括向所述受试者施用权利要求1至33中任一项所述的组合物。

72.如权利要求71所述的方法，其中所述疾患是帕金森病、阿尔茨海默病、多发性硬化症和痴呆。

73.一种治疗患有全肠胃外营养(TPN)诱导的病症或者处于全肠胃外营养(TPN)诱导的病症风险中的受试者的方法，其包括向所述受试者施用权利要求1至33中任一项所述的组合物。

74.如权利要求73所述的方法，其中所述全肠胃外营养(TPN)诱导的病症选自TPN诱导的肠粘膜萎缩和TPN诱导的肝病。

75.如权利要求73或74所述的方法，其中所述组合物约每天一次、约每天两次或约每天三次地被施用。

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