CN115885976A - 一种外周血添加冻存保护剂的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种外周血添加冻存保护剂的方法，所述方法的步骤包括：将外周血样品注入所述无菌胶塞玻璃瓶中；将注入了所述外周血样品的所述无菌胶塞玻璃瓶放置在所述冰水槽中；开启所述摇床，启动所述微量泵，向所述无菌胶塞玻璃瓶中注入冻存保护剂，与所述外周血样品混合。本发明的有益效果是：采用微量泵控制冻存保护剂的加入量，可达到精准的控制量和控制过程，采用摇床使冻存保护剂与外周血充分均匀混合，操作方便，可显著改善冻存保护剂的加入效果，采用输液针插入无菌胶塞玻璃瓶的方式加入冻存保护剂，可有效避免外周血被污染。

Description

一种外周血添加冻存保护剂的方法

技术领域

本发明属于造血干细胞冻存方法，尤其涉及一种外周血添加冻存保护剂的方法。

背景技术

外周血的冻存和使用涉及采集分离，细胞分装，冻存保护剂添加，程控降温和深低温保存等多个环节，任何一个环节的微小失误均有可能影响外周血后续的治疗效果。外周血采集后，需按照临床医生后续的治疗需求，将外周血中的造血干细胞等单个核细胞进行分离制备，再将制备后的造血干细胞按临床治疗要求的细胞数，分装到不同容积的冷冻袋或冻存管中，并加装对应比例的冻存保护剂后进行程控降温和深低温保存。由于制备好的造血干细胞对细胞体积准确度要求高，而且不同个体造血干细胞体积差异较大，常规流程中添加冷冻保护剂时只能采取人工逐滴加入的方式，加入速度和加入量均不好控制。同时人工逐滴加入时冻存管处于开放操作状态，为造血干细胞与冷冻保护剂混匀增加了难度，也存在造血干细胞被污染的风险，影响整体的冻存质量。

发明内容

本发明的目的是提出一种外周血添加冻存保护剂的方法的技术方案，改进外周血冻存保护剂的添加过程。

为了实现上述目的，本发明的技术方案是：一种外周血添加冻存保护剂的方法，所述方法使用的器具包括无菌胶塞玻璃瓶、微量泵、注射器、摇床和冰水槽，所述方法的步骤包括：

a. 将含有冰块的冰水注入所述冰水槽中；

b. 将所述冰水槽安置在所述摇床上；

c. 将外周血样品注入所述无菌胶塞玻璃瓶中；

d. 将注入了所述外周血样品的所述无菌胶塞玻璃瓶放置在所述冰水槽中；

e. 所述注射器吸入冻存保护剂，并将所述注射器安置在微量泵上；

f. 将输液针管连接所述注射器，所述输液针管的针头插入所述无菌胶塞玻璃瓶的瓶口胶塞，并在瓶口胶塞插入一只排气针；

g. 开启所述摇床，启动所述微量泵，向所述无菌胶塞玻璃瓶中注入冻存保护剂，与所述外周血样品混合。

更进一步，为了给冻存保护剂留有充分的注入空间、并与外周血样品均匀混合，步骤c中，注入所述无菌胶塞玻璃瓶中的所述外周血样品的容量不大于所述无菌胶塞玻璃瓶总容量的60%。

更进一步，为避免冰水带来污染风险，所述无菌胶塞玻璃瓶是容量为50ml～200ml的无菌胶塞玻璃瓶，步骤a注入冰水的液面高度，使步骤d中所述无菌胶塞玻璃瓶的瓶口胶塞高出所述冰水的液面不小于30mm。

更进一步，一种较佳的冻存保护剂注入和摇匀方法是，步骤g中，所述微量泵控制的输出量为20ml/h～50ml/h，所述摇床水平转动速度为20r/min～30r/min。

更进一步，为了使无菌胶塞玻璃瓶稳定的保持在冰水槽内，冰水槽是泡沫保温槽体，所述冰水槽的槽底设有与所述无菌胶塞玻璃瓶的瓶底对应的定位槽，所述无菌胶塞玻璃瓶的瓶底嵌入所述定位槽。

本发明的有益效果是：采用微量泵控制冻存保护剂的加入量，可达到精准的控制量和控制过程，采用摇床使冻存保护剂与外周血充分均匀混合，操作方便，可显著改善冻存保护剂的加入效果，采用输液针插入无菌胶塞玻璃瓶的方式加入冻存保护剂，可有效避免外周血被污染。

下面结合附图和实施例对本发明进行详细描述。

附图说明

图1 是本发明涉及的器具结构图；

图2是本发明涉及的器具立面图。

具体实施方式

如图1、图2，一种外周血添加冻存保护剂的方法，所述方法使用的器具包括无菌胶塞玻璃瓶10、微量泵20、注射器30、摇床40和冰水槽50，所述方法的步骤包括：

a. 将含有冰块的冰水51注入所述冰水槽50中；

b. 将所述冰水槽50安置在所述摇床40上；

c. 将外周血样品注入所述无菌胶塞玻璃瓶10中；

d. 将注入了所述外周血样品的所述无菌胶塞玻璃瓶放置在所述冰水槽50中；

e. 所述注射器30吸入冻存保护剂，并将所述注射器安置在微量泵20上；

f. 将输液针管31连接所述注射器30，所述输液针管的针头32插入所述无菌胶塞玻璃瓶的瓶口胶塞11，并在瓶口胶塞插入一只排气针33；

g. 开启所述摇床40，启动所述微量泵20，向所述无菌胶塞玻璃瓶中注入冻存保护剂，与所述外周血样品混合。

步骤c中，注入所述无菌胶塞玻璃瓶中的所述外周血样品的容量不大于所述无菌胶塞玻璃瓶总容量的60%。

所述无菌胶塞玻璃瓶是容量为50ml～200ml的无菌胶塞玻璃瓶，步骤a注入冰水的液面高度，使步骤d中所述无菌胶塞玻璃瓶的瓶口胶塞高出所述冰水的液面H不小于30mm。

步骤g中，所述微量泵控制的输出量为20ml/h～50ml/h，所述摇床水平转动速度为20r/min～30r/min。

冰水槽是泡沫保温槽体，所述冰水槽的槽底设有与所述无菌胶塞玻璃瓶的瓶底对应的定位槽52，所述无菌胶塞玻璃瓶的瓶底嵌入所述定位槽52。

实施例一：

如图1、图2，一种外周血添加冻存保护剂的方法，本实施例使用的器具包括无菌胶塞玻璃瓶10、微量泵20、注射器30、摇床40和冰水槽50。无菌胶塞玻璃瓶10设有密封的瓶口胶塞11，根据外周血样品的含量，通常选用容量为50ml～200ml的无菌胶塞玻璃瓶。微量泵20推动注射器30，将注射器的输出量控制在20ml/h～50ml/h。摇床40是水平摇床。冰水槽50是泡沫保温槽体，类似于常见的泡沫保鲜盒，冰水槽的槽底设有多个定位槽52，定位槽52的直径与无菌胶塞玻璃瓶10的直径对应，即定位槽52的直径可略小于无菌胶塞玻璃瓶10的直径，使无菌胶塞玻璃瓶的瓶底对应能够较紧的嵌入定位槽52中，使无菌胶塞玻璃瓶可较牢固安置在冰水槽内。

本实施例采用如下步骤将冻存保护剂添加到外周血样品中：

a. 将含有冰块的冰水51注入冰水槽50中，冰水的注入量应使无菌胶塞玻璃瓶置入冰水槽后，无菌胶塞玻璃瓶的瓶口胶塞高出冰水的液面H不小于30mm。

b. 将冰水槽50安置在摇床40上，通常摇床上设有固定架，可适用与各类实验物品的固定，本实施例未再详细描述冰水槽在摇床的固定方式。

c. 采用一只容量为50ml的无菌胶塞玻璃瓶，将外周血样品30ml注入无菌胶塞玻璃瓶10中；为了给冻存保护剂留有充分的注入空间、并与外周血样品均匀混合，注入无菌胶塞玻璃瓶中的外周血样品的容量应不大于无菌胶塞玻璃瓶总容量的60%。

d. 将注入了外周血样品的无菌胶塞玻璃瓶10放置在冰水槽50中；即将无菌胶塞玻璃瓶10的瓶底嵌入在定位槽52中，注意观察无菌胶塞玻璃瓶的瓶口胶塞高出冰水的液面H不小于30mm，以避免在摇动时冰水浸没瓶口胶塞，带来污染风险。

e. 加入的冻存保护剂与外周血的比例为1:4，注射器30吸入7.5ml冻存保护剂，并将注射器安置在微量泵20上。

f. 将输液针管31连接注射器30，输液针管的针头32插入无菌胶塞玻璃瓶的瓶口胶塞11，为保证冻存保护剂能够正常输注，瓶口胶塞上还需插入一只排气针33。

g. 开启摇床40，启动微量泵20，向无菌胶塞玻璃瓶中注入冻存保护剂，与外周血样品混合，根据应用实践，较佳的控制过程是，微量泵控制的输出量设定为30ml/h，摇床水平转动速度为30r/min。

Claims (5)

1.一种外周血添加冻存保护剂的方法，其特征在于，所述方法使用的器具包括无菌胶塞玻璃瓶、微量泵、注射器、摇床和冰水槽，所述方法的步骤包括：

a. 将含有冰块的冰水注入所述冰水槽中；

b. 将所述冰水槽安置在所述摇床上；

c. 将外周血样品注入所述无菌胶塞玻璃瓶中；

d. 将注入了所述外周血样品的所述无菌胶塞玻璃瓶放置在所述冰水槽中；

e. 所述注射器吸入冻存保护剂，并将所述注射器安置在微量泵上；

f. 将输液针管连接所述注射器，所述输液针管的针头插入所述无菌胶塞玻璃瓶的瓶口胶塞，并在瓶口胶塞插入一只排气针；

g. 开启所述摇床，启动所述微量泵，向所述无菌胶塞玻璃瓶中注入冻存保护剂，与所述外周血样品混合。

2.根据权利要求1所述的一种外周血添加冻存保护剂的方法，其特征在于，步骤c中，注入所述无菌胶塞玻璃瓶中的所述外周血样品的容量不大于所述无菌胶塞玻璃瓶总容量的60%。

3.根据权利要求1所述的一种外周血添加冻存保护剂的方法，其特征在于，所述无菌胶塞玻璃瓶是容量为50ml～200ml的无菌胶塞玻璃瓶，步骤a注入冰水的液面高度，使步骤d中所述无菌胶塞玻璃瓶的瓶口胶塞高出所述冰水的液面不小于30mm。

4.根据权利要求1所述的一种外周血添加冻存保护剂的方法，其特征在于，步骤g中，所述微量泵控制的输出量为20ml/h～50ml/h，所述摇床水平转动速度为20r/min～30r/min。

5.根据权利要求1所述的一种外周血添加冻存保护剂的方法，其特征在于，冰水槽是泡沫保温槽体，所述冰水槽的槽底设有与所述无菌胶塞玻璃瓶的瓶底对应的定位槽，所述无菌胶塞玻璃瓶的瓶底嵌入所述定位槽。

Images