CN115812593A - 一种抗早衰薄皮甜瓜种质资源的创制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及甜瓜种质创新技术领域，具体涉及一种抗早衰薄皮甜瓜种质资源的创制方法，该方法首先利用具有强分枝能力的野生甜瓜种质材料进行实验并确定分枝能力的生理规律，得出甜瓜分枝能力主要与茎基部的反式玉米素核苷的含量相关，再通过遗传学规律分析确定反式玉米素核苷高含量相对于低含量为显性；然后利用野生甜瓜对选用的抗早衰能力弱、品质优的甜瓜品种进行改良，通过2代自交、1代回交、6代自交的系统选育方法创制得到抗早衰能力强、品质优的甜瓜种质资源。本发明方法创制出了品质优、口感好、生长势强、抗早衰能力强的薄皮甜瓜新种质。
Description
技术领域
本发明涉及甜瓜种质创新技术领域，具体涉及一种抗早衰薄皮甜瓜种质资源的创制方法。
背景技术
薄皮甜瓜在我国各地广泛栽培，栽培历史悠久，是一种原产于我国的瓜果，具有香味浓、酥脆可口、软而不腻、瓜瓤可食的优点，深受消费者喜爱。薄皮甜瓜主要产区包括东北地区、华北地区、华中地区、华东地区、华南地区、西南地区，露地和设施均有栽培，以露地栽培为主，设施栽培面积在稳步增加。甜瓜是高附加值经济作物，是农业增效、农民增收的重要突破口，在满足城乡居民消费需求、增加农民收入和乡村振兴方面发挥重要作用。
甜瓜早衰俗称“倒秧”，是甜瓜栽培中经常发生的一种生理性现象。症状主要表现为植株矮小，茎秆细弱，叶片小，叶色失绿黄化，叶片失水萎蔫，坐瓜节附近的叶片尤为严重，后期干枯；根系发黄、入土浅而小；化瓜严重，易出现畸形瓜、僵硬瓜。全株呈显病态，初发时晴天中午瓜秧萎蔫，早晚可以恢复，反复几天后瓜秧干枯死亡，尤以膨瓜期植株对水分和养分需求骤增最为明显。随着甜瓜种植产业的快速发展，该现象呈现出逐年加重的趋势，严重影响了甜瓜的品质及产量，给农户们造成了极大的损失。因此，市场急需抗早衰薄皮甜瓜新品种。
种质资源是作物育种的物质基础，作物育种的实质就是对种质资源的加工改造，从而培育出新品种。抗早衰种质资源是选育抗早衰品种的基础和前提。在薄皮甜瓜种质资源创制过程中，多采用自交、杂交、回交、分子标记辅助选择、诱变等传统育种手段，借助对植株长势、叶片萎蔫、根系活力的田间观察，存在育种效率较低、受人为和环境因素影响较大的问题。突破抗早衰薄皮甜瓜种质资源创制的方法，提高种质筛选效率，加快种质创制速度成为当前急需解决的问题。
针对上述问题，确立“果实梨形、品质优、口感好、生长势强、抗早衰能力强”的种质资源创制目标，并得到本申请的技术方案。
发明内容
本发明的目的在于研究出薄皮甜瓜分枝能力强的内在影响因素，探明相关遗传规律，进而提供一种抗早衰薄皮甜瓜种质资源的创制方法，并在此基础上创制出品质优、口感好、生长势强、抗早衰能力强的薄皮甜瓜新种质。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种抗早衰薄皮甜瓜种质资源的创制方法，所述方法首先利用具有强分枝能力的野生甜瓜种质材料进行实验并确定分枝能力的生理规律，得出甜瓜分枝能力主要与茎基部的反式玉米素核苷的含量相关，再通过遗传学规律分析确定反式玉米素核苷高含量相对于低含量为显性；
然后利用野生甜瓜“迷你香”对选用的抗早衰能力弱、品质优的甜瓜品种“翡翠绿宝”进行转育改良，通过2代自交、1代回交、6代自交创制获得薄皮甜瓜新种质“甬甜2074”。
作为一种示例，以分枝能力强、抗早衰能力强的野生甜瓜“迷你香”为母本，抗早衰能力弱、品质优的“翡翠绿宝”为父本进行杂交获得F1代种子，F1代自交2代获得F3代，F3代与父本“翡翠绿宝”进行回交获得F3BC1代，F3BC1代再经6代自交创制得到抗早衰能力强、品质优的甜瓜种质资源“甬甜2074”。
作为一种示例，第一年春季以“迷你香”为母本，以“翡翠绿宝”为父本进行杂交，获得F1代种子，第一年秋季种植F1代种子并进行自交获得F2代种子；
第二年春季首先对F2代种子进行大群体筛选，田间种植去除生长势弱、生长不健康单株，成熟期拔掉去除果实畸形、结实能力差单株，对剩余的植株取样检测反式玉米素核苷，挑选反式玉米素核苷含量最高的单株自交得到F3代种子；第二年秋季种植F3代种子，去除生长势弱、生长不健康的单株，然后对F3代群体与“翡翠绿宝”进行回交，成熟期拔掉去除果实畸形、结实能力差的单株，对剩余的植株取样检测反式玉米素核苷，挑选反式玉米素核苷(TZR)含量最高的单株入选获得F3BC1代种子；
第三年春季种植F3BC1群体，去除生长势弱、生长不健康的单株，然后对F3BC1群体进行自交，成熟期拔掉去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差的单株，对剩余的植株取样检测反式玉米素核苷，挑选反式玉米素核苷含量最高的单株入选获得F3BC2代种子；第三年秋季，种植F3BC2群体植株，去除生长势弱、生长不健康的单株，然后对F3BC2群体进行自交，成熟期去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差、果形不符合目标性状的单株，对剩余的植株取样检测反式玉米素核苷，挑选反式玉米素核苷含量最高的单株入选获得F3BC3；
第四年春季种植F3BC3群体植株，去除生长势弱、生长不健康的单株，然后对F3BC3群体进行自交，成熟期去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差、果形不符合目标性状的单株，对剩余的植株取样检测反式玉米素核苷，挑选反式玉米素核苷含量最高的单株入选并获得F3BC4代种子；第四年秋季，种植F3BC4群体植株，对F3BC4群体进行自交，成熟期去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差、果形不符合目标性状的单株，对剩余的植株取样检测反式玉米素核苷，挑选反式玉米素核苷含量最高的单株入选获得F3BC5代种子；第五年春季，种植F3BC5群体植株，对F3BC5群体进行自交，已纯合，获得抗早衰能力强、品质优的甜瓜种质资源的稳定自交系。
作为一种示例，将等量的野生薄皮甜瓜种子和抗早衰能力弱、品质优的甜瓜种子催芽后，播种于50孔穴盘，一叶一心期定植于田间，采用单蔓整枝，坐果节位为第10-12节侧枝，主蔓第22-25节摘心，之后植株不再整枝，任由其生发侧枝，在果实成熟期分别在两种甜瓜的3株植株上取长2cm的茎基部主茎样品，检测茎基部细胞分裂素(TZR、Zeatin、TZeatin、IP、IPA)、生长素、赤霉素、茉莉酸的含量；
通过分析确定薄皮甜瓜的分枝能力和抗早衰能力越强，茎基部的反式玉米素核苷含量越高。
作为一种示例，选择分枝能力强、抗早衰能力好的材料“迷你香”和分枝能力弱、抗早衰能力差的品种“翡翠绿宝”，将两者相互杂交，获得杂交种F1和RF1，然后对F1进行自交获得F2代；
对“迷你香”、“翡翠绿宝”、F1、RF1及F2进行育苗及定植，并考察茎蔓分枝能力和抗早衰能力，确定薄皮甜瓜的分枝能力和抗早衰能力越强，茎基部反式玉米素核苷的含量越高，得到反式玉米素核苷高含量相对低含量为显性的遗传规律；
进而确定在抗早衰薄皮甜瓜种质资源创制过程中至少保证一个亲本的茎基部反式玉米素核苷较高。
本发明和现有技术相比具有如下的有益效果：
1、本发明提供一种抗早衰薄皮甜瓜种质资源的创制方法，首先从野生甜瓜种质材料的实验中确定分枝能力生理规律，得出甜瓜分枝能力主要与茎基部反式玉米素核苷(TZR)含量相关，之后通过遗传学规律确定反式玉米素核苷(TZR)高含量相对低含量为显性，进而选用抗早衰能力弱、品质优的材料，利用野生甜瓜抗早衰能力强的特点对其进行改良，通过自交、回交的系统选育方法创制出抗早衰能力强、品质优的甜瓜种质资源“甬甜2074”。
2、作为具体案例，本发明对原有品种“翡翠绿宝”进行改良，将在田间发现的分枝能力强、生长势强、抗早衰能力强的野生薄皮甜瓜种质资源“迷你香”的抗早衰特性转育到商品种“翡翠绿宝”，创造性地利用植株茎基部细胞分裂素(TZR)的含量差异来筛选抗早衰薄皮甜瓜种质资源，创制抗早衰薄皮甜瓜新种质“甬甜2074”，探明了细胞分裂素(TZR)的遗传规律，建立了一种快速、准确鉴定抗早衰薄皮甜瓜种质资源的方法，提高了抗早衰薄皮甜瓜种质资源筛选的准确性和效率，加快了种质资源创制和新品种选育的速度。
3、本发明选育出的甜瓜种质资源“甬甜2074”，植株蔓生、生长势强、分枝能力强、抗早衰能力强、果实为梨形、深绿皮绿肉、糖度高，酥软可口，品质优。培育的该新品种的分枝能力、抗早衰能力和品质较原始亲本“翡翠绿宝”均得到了明显改良。
附图说明
图1为本发明示例的种质资源“甬甜2074”的系统选育示意图；
图2为本发明原始亲本“迷你香”果实的实物照片；
图3为本发明原始亲本“迷你香”果实剖面的实物照片；
图4为本发明原始亲本“迷你香”田间种植情况的照片；
图5为本发明原始亲本“翡翠绿宝”果实的实物照片；
图6为本发明原始亲本“翡翠绿宝”田间种植情况的照片；
图7为本发明中“甬甜2074”果实的实物照片；
图8为本发明中“甬甜2074”果实剖面的实物照片；
图9为本发明中“甬甜2074”田间种植情况的照片。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例的附图，对本发明实施例的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于所描述的本发明的实施例，本领域普通技术人员在无需创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
杂交种F1是以“迷你香”为母本，“翡翠绿宝”为父本的杂交种。
杂交种RF1以“翡翠绿宝”为母本，以“迷你香”为父本的杂交种。
本发明涉及使用的遗传资源信息如下：
母本，迷你香，已申请植物新品种权，申请号：20191003771，种子已保藏。
父本，翡翠绿宝，已申请植物新品种权，申请号：20191000014，种子已保藏，已申请品种登记，登记编号：GPD甜瓜(2019)330177。
在本领域内，在育种过程中，单株按顺序编号，以便于后续的淘汰、留种工作，以下实施例提及的编号就是实际育种过程中入选的编号。
一种抗早衰薄皮甜瓜种质资源的创制方法，包括如下步骤：
(1)确定分枝能力的生理规律
在育种过程中，发现1份分枝能力极强的野生薄皮甜瓜种质资源“迷你香”，其抗早衰能力显著优于主栽的薄皮甜瓜品种“翡翠绿宝”。选择野生种质资源“迷你香”、主栽品种“翡翠绿宝”，播种育苗后定植。
在果实发育期考察植株茎蔓分枝能力和植株早衰发生情况，评价材料抗早衰能力。
对材料的茎基部细胞分裂素(TZR、Zeatin、TZeatin、IP、IPA)、生长素(IAA)、赤霉素(GA)、茉莉酸(JA)进行测定，确定薄皮甜瓜分枝能力和抗早衰能力主要与茎基部反式玉米素核苷(TZR)含量相关，“迷你香”的反式玉米素核苷含量(TZR)显著高于“翡翠绿宝”，分枝能力和抗早衰能力强的材料反式玉米素核苷(TZR)在茎基部和根部含量较高。
(2)确定遗传规律
选择分枝能力强、抗早衰能力好的材料“迷你香”和分枝能力弱、抗早衰能力差的品种“翡翠绿宝”，将两者相互杂交，获得杂交种F1和RF1，然后对F1进行自交获得F2代。对“迷你香”、“翡翠绿宝”、F1、RF1及F2进行育苗及定植，并考察茎蔓分枝能力和抗早衰能力，并根据步骤(1)中的评价方法，测定F1和RF1的反式玉米素核苷(TZR)含量，F1和RF1的反式玉米素核苷(TZR)含量高于父母本的平均值，数值更靠近“迷你香”，据此确定分枝能力的遗传规律：反式玉米素核苷(TZR)高含量相对低含量为显性。
因此，在抗早衰薄皮甜瓜种质资源创制过程中，其中至少一个亲本的茎基部反式玉米素核苷(TZR)较高。
(3)抗早衰薄皮甜瓜种质资源创制
根据步骤(1)和(2)，“迷你香”是抗早衰性能好、反式玉米素核苷(TZR)含量高的野生薄皮甜瓜种质资源，“翡翠绿宝”是抗早衰性能差、品质优、反式玉米素核苷(TZR)含量低、应用范围较大的商品种，选择“迷你香”和“翡翠绿宝”为亲本，双方优缺点可以互补，利于转育工作进行。最终确定以“迷你香”为母本，以“翡翠绿宝”为父本进行杂交，后续对F1材料进行系统选育，如图1所示。
2018年秋种植F1代材料10株，采用主蔓单蔓整枝，10-12节留果，去除其他节位侧枝，23节摘心打顶，对单株进行自交，筛选比较后第2株入选。2019年春首先对F2材料进行大群体筛选，田间种植80株，拔掉去除生长势弱、生长不健康的26个单株，成熟期拔掉去除果实畸形、结实能力差的35个单株，对剩余的19株取样进行反式玉米素核苷(TZR)检测，挑选反式玉米素核苷(TZR)含量最高的单株，第18株入选。2019年秋，种植F3代材料40株，拔掉去除生长势弱、生长不健康的9个单株，然后对F3代群体与“翡翠绿宝”进行回交，成熟期拔掉去除果实畸形、结实能力差的14个单株，对剩余的17株取样进行反式玉米素核苷(TZR)检测，挑选反式玉米素核苷(TZR)含量最高的单株，第11株入选。2020年春，种植F3BC1群体30棵，拔掉去除生长势弱、生长不健康的6个单株，然后对F3BC1群体进行自交，成熟期拔掉去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差的18个单株，对剩余的6株取样进行反式玉米素核苷(TZR)检测，挑选反式玉米素核苷(TZR)含量最高的单株，第5株入选。2020年秋，种植F3BC2群体20棵，拔掉去除生长势弱、生长不健康的1个单株，然后对F3BC2群体进行自交，成熟期拔掉去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差、果形不符合目标性状的9个单株，对剩余的10株取样进行反式玉米素核苷(TZR)检测，挑选反式玉米素核苷(TZR)含量最高的单株，第7株入选。2021年春，种植F3BC3群体20棵，拔掉去除生长势弱、生长不健康的1个单株，然后对F3BC3群体进行自交，成熟期拔掉去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差、果形不符合目标性状的5个单株，对剩余的14株取样进行反式玉米素核苷(TZR)检测，挑选反式玉米素核苷(TZR)含量最高的单株，第9株入选。2021年秋，种植F3BC4群体15棵，对F3BC4群体进行自交，成熟期拔掉去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差、果形不符合目标性状的1个单株，对剩余的14株取样进行反式玉米素核苷(TZR)检测，挑选反式玉米素核苷(TZR)含量最高的单株，第5株入选。2022年春，种植F3BC5群体15棵，对F3BC5群体进行自交，材料已纯合，将其命名为“甬甜2074”，第3株入选，获得稳定自交系YT2074-2-18-11-5-7-9-5-3，简称为“甬甜2074”。“甬甜2074”的反式玉米素核苷(TZR)介于“迷你香”和“翡翠绿宝”之间，特征特性表现为分枝能力强、生长势强、果实品质优、抗早衰性好。
以下提供宁波市农科院蔬菜所具体实施的一个示意案例，以便于更好地理解本发明的技术方案。
实施例1
具体提供抗早衰能力强、品质优的种质资源“甬甜2074”的创制方法，包括如下步骤：
(1)分枝能力生理规律确定
选择2份薄皮甜瓜材料，其中包括1份野生薄皮甜瓜种质资源“迷你香”和1个主栽薄皮甜瓜品种“翡翠绿宝”。
将8份材料的种子催芽后，播种于50孔穴盘，一叶一心期定植于田间。采用单蔓整枝，坐果节位为第10-12节侧枝，主蔓第22-25节摘心，之后植株不再整枝，任由其生发侧枝。在果实成熟期取茎基部主茎，样品长约2cm，每份材料取3株。对材料的茎基部细胞分裂素(TZR、Zeatin、TZeatin、IP、IPA)、生长素(IAA)、赤霉素(GA)、茉莉酸(JA)进行测定，确定薄皮甜瓜分枝能力和抗早衰能力主要与茎基部反式玉米素核苷(TZR)含量相关，分枝能力和抗早衰能力强的材料反式玉米素核苷(TZR)在茎基部含量较高。
(2)遗传规律确定
选择分枝能力强、抗早衰能力好的材料“迷你香”和分枝能力弱、抗早衰能力差、品质优的品种“翡翠绿宝”，其茎基部反式玉米素核苷(TZR)含量分别为3.52ng/mL和0.82ng/mL。
将两者相互杂交，获得杂交种F1和RF1，然后对F1进行自交获得F2代，对“迷你香”、“翡翠绿宝”、F1、RF1及F2进行育苗及定植，在果实成熟期检测茎基部反式玉米素核苷(TZR)含量。结果F1和RF1的茎基部反式玉米素核苷(TZR)含量分别为2.52ng/mL和2.45ng/mL，相对接近于高含量亲本“迷你香”，具体结果汇总如下表1所示。
同时，F2群体茎基部反式玉米素核苷(TZR)含量分布呈现连续性分布，且反式玉米素核苷(TZR)显著偏向于高含量。因此，薄皮甜瓜反式玉米素核苷(TZR)含量为数量性状，反式玉米素核苷(TZR)高含量相对低含量为显性。
因此，在抗早衰薄皮甜瓜种质资源创制过程中，双亲选择时其中至少一个亲本茎基部反式玉米素核苷(TZR)较高。
表1
根据表1亲本“迷你香”、“翡翠绿宝”及其相互杂交的子代F1、RF1的遗传数据以及结合F1进行自交获得F2代的结果可知，反式玉米素核苷(TZR)的遗传为显性遗传，也即茎基部反式玉米素核苷(TZR)含量高的材料，其分枝能力较强。
(3)创制抗早衰薄皮甜瓜种质资源
抗早衰薄皮甜瓜种质资源“甬甜2074”的选育系谱图如图1所示。
2018年春以“迷你香”为母本，以“翡翠绿宝”为父本进行杂交，获得F1代种子。2018年秋种植F1代材料10株，并进行自交，比较不同单株的长势、结果性和抗性，第2株入选。2019年春首先对F2材料进行大群体筛选，田间种植80株，拔掉去除生长势弱、生长不健康的26个单株，成熟期拔掉去除果实畸形、结实能力差的35个单株，对剩余的19株取样进行反式玉米素核苷(TZR)检测，挑选反式玉米素核苷(TZR)含量最高的单株，第18株入选。2019年秋，种植F3代材料40株，拔掉去除生长势弱、生长不健康的9个单株，然后对F3代群体与“翡翠绿宝”进行回交，成熟期拔掉去除果实畸形、结实能力差的14个单株，对剩余的17株取样进行反式玉米素核苷(TZR)检测，挑选反式玉米素核苷(TZR)含量最高的单株，第11株入选。2020年春，种植F3BC1群体30棵，拔掉去除生长势弱、生长不健康的6个单株，然后对F3BC1群体进行自交，成熟期拔掉去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差的18个单株，对剩余的6株取样进行反式玉米素核苷(TZR)检测，挑选反式玉米素核苷(TZR)含量最高的单株，第5株入选。2020年秋，种植F3BC2群体20棵，拔掉去除生长势弱、生长不健康的1个单株，然后对F3BC2群体进行自交，成熟期拔掉去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差、果形不符合目标性状的9个单株，对剩余的10株取样进行反式玉米素核苷(TZR)检测，挑选反式玉米素核苷(TZR)含量最高的单株，第7株入选。2021年春，种植F3BC3群体20棵，拔掉去除生长势弱、生长不健康的1个单株，然后对F3BC3群体进行自交，成熟期拔掉去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差、果形不符合目标性状的5个单株，对剩余的14株取样进行反式玉米素核苷(TZR)检测，挑选反式玉米素核苷(TZR)含量最高的单株，第9株入选。2021年秋，种植F3BC4群体15棵，对F3BC4群体进行自交，成熟期拔掉去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差、果形不符合目标性状的1个单株，对剩余的14株取样进行反式玉米素核苷(TZR)检测，挑选反式玉米素核苷(TZR)含量最高的单株，第5株入选。2022年春，种植F3BC5群体15棵，对F3BC5群体进行自交，材料已纯合，将其命名为“甬甜2074”，第3株入选，获得稳定自交系YT2074-2-18-11-5-7-9-5-3，简称为“甬甜2074”。
“甬甜2074”的反式玉米素核苷(TZR)介于“迷你香”和“翡翠绿宝”之间，特征特性表现为分枝能力强、生长势强、果实品质优、抗早衰性好。
效果测试
抗早衰薄皮甜瓜种质资源“甬甜2074”果实性状与亲本对比
(1)育苗
2022年秋对“甬甜2074”、“迷你香”、“翡翠绿宝”进行品比试验。种子催芽后于8月2日播种，选用50孔的穴盘育苗。
(2)整地
“甬甜2074”不耐高肥，要控制基肥施用量。基肥一般每亩施农家肥400～600kg或商品有机肥200kg，加入N、P、K三元复合肥(15：15：15)15kg和过磷酸钙15kg，混匀后开沟施入。避免与葫芦科作物连作，覆盖地膜后可铺设滴灌，在棚四周铺设20～30目防虫网。不宜施对甜瓜品质有影响的含氯肥料及硝酸铵、硝酸钾、碳酸氢铵等。
立架栽培：跨度6m以上大棚栽培，畦宽1m左右、畦高30cm以上，沟宽60cm左右，覆盖地膜，有条件的可铺设滴灌。爬地栽培：跨度6m以上大棚栽培，畦宽1.5m～2m，畦高25cm以上，沟宽60cm左右。
(3)定植
立架栽培：单行定植，株距40～45cm，每亩栽种1200～1500株。8月13
日一叶一心期定植于田间。
(4)整枝
采用单蔓整枝，坐果节位为第10-12节侧枝，主蔓第22-25节摘心，之后植株不再整枝，任由其生发侧枝。
(5)授粉留瓜
9月8日-9月13日为花期。授粉前2～3天对侧枝进行摘心，保留侧枝第一朵雌花以上的1个叶片(及结果枝保留2片叶片)，同时将12叶节以上的侧枝全部及时摘除。
(6)追肥
果实鸡蛋大小时追施膨瓜肥，每亩施用硫酸钾型三元复合肥10kg。坐果后每隔7天左右叶面喷施1次0.3％磷酸二氢钾溶液，连续3～4次，可结合施药进行。采收前10天，控制水分，以改善果实品质。
(7)病虫害防治
甜瓜病害主要有霜霉病、白粉病、黄化褪绿病毒病、蔓枯病、枯萎病，虫害主要有烟粉虱、蚜虫、斑潜蝇，注意及时防治。
(8)适时采收
10月8日-10月12日为果实成熟期。开花授粉约33天后，当功能叶衰退，近果柄处卷须干枯，果蒂处按压变软，结合授粉标记，适时采收，可先试采查看成熟度。果实性状的品比结果如下表2所示。
表2果实性状的品比结果
(9)茎基部反式玉米素核苷(TZR)含量差异
2022年10月8日，对3份材料进行取样检测，取茎基部主茎约2cm，每份材料取3株作为样品。提取样品中的植物内源激素，而后以安捷伦1290高效液相色谱仪串联AB公司Qtrap6500质谱仪(液相条件参数为色谱柱：poroshell 120SB-C18反相色谱柱(2.1×150,2.7um)；柱温：30℃；流动相：A：B＝(甲醇/0.1％甲酸)：(水/0.1％甲酸)；洗脱梯度见表3。)，来测定植物内源激素反式玉米素核苷(TZR)，并在提取液中加入内标物质(TZR标准品)校正检测结果。检测结果见表4。
表3液相梯度参数
| 时间(min) | 流速(mL/min) | A％ |
| 0-1 | 0.3 | 20 |
| 1-3 | 0.3 | 由20递增至50 |
| 3-9 | 0.3 | 由50递增至80 |
| 9-10.5 | 0.3 | 80 |
| 10.5-10.6 | 0.3 | 80递减至20 |
| 10.6-13.5 | 0.3 | 20 |
“甬甜2074”的反式玉米素核苷(TZR)含量为1.46ng/mL，较“迷你香”的3.42ng/mL低1.96ng/mL，较“翡翠绿宝”的0.89ng/mL高0.57ng/mL。“甬甜2074”的反式玉米素核苷(TZR)含量介于“迷你香”和“翡翠绿宝”之间，且数值偏向于反式玉米素核苷(TZR)含量高的“迷你香”。
表4不同品种茎基部反式玉米素核苷(TZR)含量差异
| 品种 | 细胞分裂素含量(TZR)(ng/mL) |
| 甬甜2074 | 1.46 |
| 迷你香 | 3.42 |
| 翡翠绿宝 | 0.89 |
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。
Claims (5)
1.一种抗早衰薄皮甜瓜种质资源的创制方法，所述方法首先利用具有强分枝能力的野生甜瓜种质材料进行实验并确定分枝能力的生理规律，得出甜瓜分枝能力主要与茎基部的反式玉米素核苷的含量相关，再通过遗传学规律分析确定反式玉米素核苷高含量相对于低含量为显性；
然后利用野生甜瓜“迷你香”对选用的抗早衰能力弱、品质优的甜瓜品种“翡翠绿宝”进行转育改良，通过2代自交、1代回交、6代自交创制获得薄皮甜瓜新种质“甬甜2074”。
2.根据权利要求1所述的抗早衰薄皮甜瓜种质资源的创制方法，其特征在于，以分枝能力强、抗早衰能力强的野生甜瓜“迷你香”为母本，抗早衰能力弱、品质优的“翡翠绿宝”为父本进行杂交获得F1代种子，F1代自交2代获得F3代，F3代与父本“翡翠绿宝”进行回交获得F3BC1代，F3BC1代再经6代自交创制得到抗早衰能力强、品质优的甜瓜种质资源“甬甜2074”。
3.根据权利要求2所述的抗早衰薄皮甜瓜种质资源的创制方法，其特征在于，第一年春季以“迷你香”为母本，以“翡翠绿宝”为父本进行杂交，获得F1代种子，第一年秋季种植F1代种子并进行自交获得F2代种子；
第二年春季首先对F2代种子进行大群体筛选，田间种植去除生长势弱、
生长不健康单株，成熟期拔掉去除果实畸形、结实能力差单株，对剩余的植株取样检测反式玉米素核苷，挑选反式玉米素核苷含量最高的单株自交得到F3代种子；第二年秋季种植F3代种子，去除生长势弱、生长不健康的单株，然后对F3代群体与“翡翠绿宝”进行回交，成熟期拔掉去除果实畸形、结实能力差的单株，对剩余的植株取样检测反式玉米素核苷，挑选反式玉米素核苷含量最高的单株入选获得F3BC1代种子；
第三年春季种植F3BC1群体，去除生长势弱、生长不健康的单株，然后对F3BC1群体进行自交，成熟期拔掉去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差的单株，对剩余的植株取样检测反式玉米素核苷，挑选反式玉米素核苷含量最高的单株入选获得F3BC2代种子；第三年秋季，种植F3BC2群体植株，去除生长势弱、生长不健康的单株，然后对F3BC2群体进行自交，成熟期去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差、果形不符合目标性状的单株，对剩余的植株取样检测反式玉米素核苷，挑选反式玉米素核苷含量最高的单株入选获得F3BC3；
第四年春季种植F3BC3群体植株，去除生长势弱、生长不健康的单株，然后对F3BC3群体进行自交，成熟期去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差、果形不符合目标性状的单株，对剩余的植株取样检测反式玉米素核苷，挑选反式玉米素核苷含量最高的单株入选并获得F3BC4代种子；第四年秋季，种植F3BC4群体植株，对F3BC4群体进行自交，成熟期去除果实畸形、果实糖度低、结实能力差、果形不符合目标性状的单株，对剩余的植株取样检测反式玉米素核苷，挑选反式玉米素核苷含量最高的单株入选获得F3BC5代种子；
第五年春季，种植F3BC5群体植株，对F3BC5群体进行自交，已纯合，获得抗早衰能力强、品质优的甜瓜种质资源的稳定自交系。
4.根据权利要求1所述的抗早衰薄皮甜瓜种质资源的创制方法，其特征在于，将等量的野生薄皮甜瓜种子和抗早衰能力弱、品质优的甜瓜种子催芽后，播种于50孔穴盘，一叶一心期定植于田间，采用单蔓整枝，坐果节位为第10-12节侧枝，主蔓第22-25节摘心，之后植株不再整枝，任由其生发侧枝，在果实成熟期分别在两种甜瓜的3株植株上取长2 cm的茎基部主茎样品，检测茎基部细胞分裂素、生长素、赤霉素、茉莉酸的含量；
通过分析确定薄皮甜瓜的分枝能力和抗早衰能力越强，茎基部的反式玉米素核苷含量越高。
5.根据权利要求4所述的抗早衰薄皮甜瓜种质资源的创制方法，其特征在于，选择分枝能力强、抗早衰能力好的材料“迷你香”和分枝能力弱、抗早衰能力差的品种“翡翠绿宝”，将两者相互杂交，获得杂交种F1和RF1，然后对F1进行自交获得F2代；
对“迷你香”、“翡翠绿宝”、F1、RF1及F2进行育苗及定植，并考察茎蔓分枝能力和抗早衰能力，确定薄皮甜瓜的分枝能力和抗早衰能力越强，茎基部反式玉米素核苷的含量越高，得到反式玉米素核苷高含量相对低含量为显性的遗传规律；
进而确定在抗早衰薄皮甜瓜种质资源创制过程中至少保证一个亲本的茎基部反式玉米素核苷较高。
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 马二磊等: "优质多抗薄皮甜瓜新品种翡翠绿宝的选育", 《中国蔬菜》 * |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114836462A (zh) * | 2022-03-28 | 2022-08-02 | 武汉市农业科学院 | 一种高效的农杆菌介导甜瓜遗传转化方法 |
| CN114836462B (zh) * | 2022-03-28 | 2024-03-26 | 武汉市农业科学院 | 一种高效的农杆菌介导甜瓜遗传转化方法 |
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|---|---|
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