CN115745995A

CN115745995A - Atr抑制剂及其用途

Info

Publication number: CN115745995A
Application number: CN202211562426.7A
Authority: CN
Inventors: 高宇; 高峰; 郭永起; 吴卓
Original assignee: Suzhou Puhe Pharmaceutical Technology Co ltd
Current assignee: Suzhou Puhe Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority date: 2022-01-10
Filing date: 2022-12-07
Publication date: 2023-03-07
Anticipated expiration: 2042-12-07
Also published as: CN115745995B

Abstract

本发明提供了一种ATR抑制剂。本发明还提供了包含所述化合物的药物组合物，及其用途。

Description

ATR抑制剂及其用途

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及ATR抑制剂及其用途。

背景技术

合成致死是指在肿瘤细胞中，两个基因中任一单一基因的失活对肿瘤细胞的存活没有明显影响，但两个基因的同时失活可以导致肿瘤细胞的死亡(Nat Rev DrugDiscov.2020 Jan；19(1):23-38,Cancer Discov.2021 Jul；11(7):1626-1635)。合成致死靶向药物一般可以产生良好的治疗安全窗，同时也增加了某些高突变率但很难成药的靶点的开发可及性。当前，合成致死最成功的案例是PARP1/2抑制剂例如Olaparib、Rucaparib、Niraparib等，这些药物在BRCA1/2突变卵巢癌、乳腺癌等的治疗中获得了优异的疗效并已经相继获批上市(Nat Rev Drug Discov.2020Oct；19(10):711-736,Nat Rev DrugDiscov.2019 Oct；18(11):814,Nat Rev Clin Oncol.2020 Mar；17(3):136-137)。

毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白(ataxia telangiectasia mutated,ATM)和毛细血管扩张性共济失调症Rad3相关蛋白(ataxia telangiectasia and RAD3-related,ATR)在DNA损伤修复、细胞周期调节和细胞凋亡中具有重要作用。ATM和ATR作为DNA损伤的传感器，在DNA损伤和复制应激时被激活，调节下游信号网启动DNA修复过程，保持基因组的稳定性(Cold Spring Harb Perspect Biol.2013Sep 1；5(9):a012716,J CellSci.2015Dec 1；128(23):4255-62)。两者之间功能存在相似性，也分别拥有独特的功能。当前研究已经发现，在肿瘤细胞中经常出现ATM基因突变(Nat Rev Cancer.2015May；15(5):276-89,Mol Cancer Ther.2016；15:1781–91)，而ATM基因突变或功能缺失的肿瘤细胞对于ATR抑制剂具有非常高的敏感性，两者功能的同时缺失具有合成致死特性(CancerRes.2020Jun 1；80(11):2094-2100,Mol Cancer Ther,2020Jan；19(1):26-38,Mol CancerRes.2015；13:120-9,Mol Cancer Ther.2017；16:566–77)。拜耳公司研发的ATR抑制剂BAY1895344的早期临床研究也已经初步验证了这一合成致死特性(J Clin Oncol.2019；37:3007,Cancer Discovery.2021Jan；11(1):80-91)。除ATM基因突变外，也已经有研究报道P53功能缺失和ARID1A功能缺失肿瘤细胞对ATR抑制剂具有高敏感性(Nat ChemBiol.2011Apr 13；7(7):428-30,Nat Commun.2016Dec 13；7:13837)。

除合成致死通路外，ATR抑制剂也可与导致DNA损伤的药物例如化疗药物联用，可进一步增加疗效和扩展应用范围。这些证据显示，ATR抑制剂在肿瘤治疗中具有非常好的应用前景。本发明描述了对ATR蛋白具有高抑制活性的新化合物，并显示出本发明化合物的由ATR介导的抗肿瘤效果。

发明内容

在第一个方面中，本发明提供式(I)所示的化合物，或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体：

其中

R₁选自任选取代的芳基、杂芳基和杂环基，优选地任选取代的苯基、吡啶基、哌啶基和哒嗪基，例如所述芳基、杂芳基和杂环基任选地被1、2或3个选自卤素、氰基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、氨基、C1-4烷硫基、C3-6环烷基、和C_1-4烷基氨基的取代基所取代；

R₂选自氢、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

R₃选自氢、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

R₄选自任选取代的氢、C_1-4烷基、C_3-6环烷基、C_3-6杂环烷基和-L-C_3-6杂环烷基，其中所述C_3-6杂环烷基含有1或2个选自氧、氮和硫的杂原子；例如所述C_1-4烷基、C_3-6环烷基和C_3-6杂环烷基任选地被1、2或3个选自氘、氰基、羟基、卤素和C_1-4烷氧基的取代基所取代；L为-(CH2)n，n选择1、2或3和

R₅选自氢、C_1-4烷基或卤素。

在一个实施方案中，R₁选自苯基、吡啶基、哌啶基和哒嗪基、卤代苯基、氰基苯基、氨基苯基、甲氨基苯基、卤代吡啶基、氰基吡啶基、氨基吡啶基、甲氨基吡啶基、甲氧基吡啶基、卤代哌啶基、氰基哌啶基、氨基哌啶基、甲氨基哌啶基、卤代哒嗪基、氰基哒嗪基、氨基哒嗪基和甲氨基哒嗪基。在另一个实施方案中，R₁选自

Rx选自H、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_3-6环烷基、卤素、NH₂、C_1-4烷基氨基、CN或C_1-4烷硫基；

表示与吡唑环相连。

在另一个实施方案中，卤素选自氟、氯、溴和碘，例如是氟或氯。

在另一个实施方案中，所述C_1-4烷基氨基是甲基氨基或乙基氨基。

在另一个实施方案中，R₂和R₃各自独立地选自氢和甲基，例如R₂和R₃是甲基。

在另一个实施方案中，R₄选自氢、甲基(包括氘代甲基，如-CD₃)、乙基、正丙基、异丙基、三氟甲基、三氟乙基、三氟丙基、三氟丁基、羟甲基、羟乙基、羟丙基、羟丁基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、氰基甲基、氰基乙基、氰基丙基、氰基丁基、HOC(CH₃)₂CH₂-、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、氟代环丙基、二氟代环丙基、氟代环丁基、二氟代环丁基、氧杂环丁基、氧杂环戊基、氧杂环己基和氮杂环丁基。

在一个具体实施方案中，R₄选自甲基(包括氘代甲基如-CD₃)、乙基、环丙基、羟基乙基或HOC(CH₃)₂CH₂-；和/或R₅是氢。

本发明还提供选自以下的化合物：

或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体。

在第二个方面中，本发明提供一种药物组合物，其包含如前所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体，以及可药用载体。

在一个实施方案中，所述药物组合物还包含另外的活性药物成分。

在第三个方面中，本发明提供如前所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体或药物组合物，其用作ATR/ATRIP抑制剂。

作为替代，本发明还提供如前所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体或药物组合物在制备ATR/ATRIP抑制剂中的用途。

作为替代，本发明还提供抑制ATR活性的方法，其包括使ATR与如前所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体或药物组合物相接触。

在第四个方面中，本发明提供如前所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体或药物组合物，其用于预防和/或治疗ATR相关疾病。

作为替代，本发明还提供如前所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体或药物组合物在制备预防和/或治疗ATR相关疾病的药物中的用途。

作为替代，本发明还提供预防和/或治疗ATR相关疾病的方法，其包括向有此需要的对象施用如前所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体或药物组合物。

在一个实施方案中，所述ATR相关疾病选自癌症、年龄相关性黄斑变性(AMD)、脉络膜新生血管(CNV)、糖尿病性视网膜病、糖尿病性黄斑水肿(DME)、进行性骨化性纤维发育不良、炎症、血管生成相关病症和细菌感染。

在一个具体实施方案中，所述ATR相关疾病选自头、颈、眼、口、喉咙、食道、支气管、喉、咽、胸、骨、肺、结肠、直肠、胃、前列腺、膀胱、子宫、子宫颈、乳腺、卵巢、睾丸或其它生殖器官、皮肤、甲状腺、血液、淋巴结、肾、肝、胰腺、脑、中枢神经系统的癌症、实体瘤和血源性肿瘤。

具体实施方式

定义

除非另有说明，本文所用术语具有所属领域技术人员通常理解的含义。

当提到本发明所述化合物时，包括由记载结构式所示的具体化合物，还包括所述化合物的互变异构体、立体异构体(如对映异构体和非对映异构体)、同位素衍生物以及可药用盐和溶剂化物形式。本发明化合物还可以以其前体/前药或代谢物形式来提供。

如本文所用，“可药用盐”可使用无机酸或有机酸(例如下文所述)而形成。“可药用盐”是指这样的盐，在合理的医学判断范围内，其适用于接触人和低等动物的组织，而没有不适当的毒性、刺激性、过敏反应等，具有称得上合理的受益/风险比。如下所述，可以在本发明化合物的最终分离和纯化期间原位制备所述盐，或单独通过将游离碱或游离酸与合适的试剂反应制备所述盐。例如，游离碱功能基可以与合适的酸反应。此外，当本发明的化合物带有酸性部分，其合适的可药用盐可包括金属盐，例如碱金属盐(如钠盐或钾盐)；和碱土金属盐(如钙盐或镁盐)。可药用的无毒酸加成盐的示例是氨基与无机酸(例如，盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)或有机酸(例如，醋酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)形成的盐，或通过使用现有技术中的其他方法如离子交换形成的盐。其他可药用盐包括己二酸盐、海藻酸钠、抗坏血酸盐、天门冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐(hernisulfate)、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。代表性碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等的盐。其他可药用盐包括(适当时)无毒铵盐、季铵盐和用反离子形成的胺阳离子，例如，卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐。

本发明的可药用盐可通过常规方法制备，例如通过将本发明的化合物溶解于与水可混溶的有机溶剂(例如丙酮、甲醇、乙醇和乙腈)，向其中添加过量的有机酸或无机酸水溶液，以使得盐从所得混合物中沉淀，从中除去溶剂和剩余的游离酸，然后分离所沉淀的盐。

本发明所述的前体/前药或代谢物可以是本领域公知的前体/前药或代谢物，只要所述的前体或代谢物通过体内代谢转化形成化合物即可。例如“前药”是指本发明化合物的那些前药，在合理的医学判断范围内，其适用于接触人和更低等动物的组织，而没有不适当的毒性、刺激性、过敏反应等，具有称得上合理的受益/风险比并且对其预期用途有效。术语“前药”是指在体内迅速经转化产生上述式的母体化合物的化合物，例如通过在体内代谢，或本发明化合物的N-去甲基化。

本发明所述的“溶剂化物”意指本发明化合物与一个或多个溶剂分子(无论有机的还是无机的)的物理缔合。该物理缔合包括氢键。在某些情形中，例如当一个或多个溶剂分子纳入结晶固体的晶格中时，溶剂化物将能够被分离。溶剂化物中的溶剂分子可按规则排列和/或无序排列存在。溶剂化物可包含化学计量或非化学计量的溶剂分子。“溶剂化物”涵盖溶液相和可分离的溶剂化物。示例性溶剂化物包括但不限于水合物、乙醇合物、甲醇合物和异丙醇合物。溶剂化方法是本领域公知的。

本发明所述的“立体异构”分为构象异构和构型异构，构型异构还可分为顺反异构和旋光异构(即光学异构)，构象异构是指具有一定构型的有机物分子由于碳、碳单键的旋转或扭曲而使得分子各原子或原子团在空间产生不同的排列方式的一种立体异构现象，常见的有烷烃和环烷烃类化合物的结构，如环己烷结构中出现的椅式构象和船式构象。“立体异构体”是指当本发明化合物含有一个或多个不对称中心，因而可作为外消旋体和外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单一非对映异构体。本发明化合物有不对称中心，每个不对称中心会产生两个光学异构体。用结构式定义本发明化合物时，如果所述结构式未明确记载特定位置的构象/构型，本发明化合物的范围包括所有可能的光学异构体和非对映异构体混合物和纯的或部分纯的化合物。本发明所述的化合物可以以互变异构体形式存在，其通过一个或多个双键位移而具有不同的氢的连接点。例如，酮和它的烯醇形式是酮-烯醇互变异构体。各互变异构体及其混合物都包括在本发明的化合物中。所有式(I)化合物的对映异构体、非对映异构体、外消旋体、内消旋体、顺反异构体、互变异构体、几何异构体、差向异构体及其混合物等，均包括在本发明范围中。

本发明的“同位素衍生物”是指在本文中化合物被同位素标记的分子。通常用作同位素标记的同位素是：氢同位素，²H和³H；碳同位素：¹¹C,¹³C和¹⁴C；氯同位素：³⁵Cl和³⁷Cl；氟同位素：¹⁸F；碘同位素：¹²³I和¹²⁵I；氮同位素：¹³N和¹⁵N；氧同位素：¹⁵O,¹⁷O和¹⁸O和硫同位素³⁵S。这些同位素标记化合物可以用来研究药用分子在组织中的分布情况。尤其是氚³H和碳¹³C，由于它们容易标记且方便检测，运用更为广泛。某些重同位素，比如氘(²H)的取代能增强代谢的稳定性，延长半衰期从而达到减少剂量的目而提供疗效优势的。同位素标记的化合物一般从已被标记的起始物开始，用已知的合成技术象合成非同位素标记的化合物一样来完成其合成。例如本文中提到甲基时，也包括其同位素衍生物，例如氘代甲基(包括-CH₂D、-CHD₂和-CD₃)。相似地，本文中提到术语如乙基、丙基时也包括其同位素衍生物，尤其是氘代衍生物。

如本文所用，所述化学基团如C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_3-6环烷基、C_3-6杂环烷基、芳基、杂芳基和杂环基是任选取代的。当提到这些基团时，也包括它们的任选取代形式。

除非另有定义，否则当取代基被标注为“任选取代的”时，所述取代基选自例如以下取代基，诸如烷基、环烷基、芳基、杂环基、卤素、羟基、烷氧基、氧代、烷酰基、芳基氧基、烷酰基氧基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、芳基烷基氨基、二取代的胺基团(其中2个氨基取代基选自烷基、芳基或芳基烷基)、烷酰基氨基、芳酰基氨基、芳烷酰基氨基、取代的烷酰基氨基、取代的芳基氨基、取代的芳烷酰基氨基、硫基、烷基硫基、芳基硫基、芳基烷基硫基、芳基硫羰基、芳基烷基硫羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基烷基磺酰基、磺酰氨基例如-SO₂NH₂、取代的磺酰氨基、硝基、氰基、羧基、氨基甲酰基例如-CONH₂、取代的氨基甲酰基例如-CONH烷基、-CONH芳基、-CONH芳基烷基或在氮上具有两个选自烷基、芳基或芳基烷基的取代基的情况、烷氧基羰基、芳基、取代的芳基、胍基、杂环基，例如吲哚基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯烷基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、高哌嗪基等和取代的杂环基。

本文使用的术语“烷基”意欲包括具有指定碳原子数的支链和直链饱和脂族烃基团。例如，“C_1-6烷基”表示具有1个至6个碳原子的烷基。烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正丙基和异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、叔丁基)和戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基)。

术语“烷氧基”或“烷基氧基”是指-O-烷基。“C_1-6烷氧基”(或烷基氧基)意欲包括C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆烷氧基。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基和异丙氧基)和叔丁氧基。类似地，“烷基硫基”或“硫代烷氧基”表示具有指定数量碳原子的经硫桥连接的如上文所定义的烷基；例如甲基-S-和乙基-S-。

如本文所用，在“C_1-4烷基”、“C_1-4烷氧基”、“C_3-6环烷基”和“C_3-6杂环烷基”等术语中，“C_m-n”表示m至n个碳原子，例如“C_1-4”表示1至4个碳原子，“C_3-6”表示3至6个碳原子。

具体地，所述C_1-4烷基可以是甲基、乙基、丙基(如正丙基或异丙基)或丁基(如正丁基、异丁基或叔丁基)。所述C_1-4烷氧基可以是甲氧基、乙氧基、丙氧基(如正丙基氧基或异丙基氧基)或丁氧基(如正丁基氧基、异丁基氧基或叔丁基氧基)。所述C_3-6环烷基可以是环丙基、环丁基、环戊基或环己基。所述C_3-6杂环烷基表示至少一个环原子被替换为杂原子(如氮、氧和硫)的3至6员环烷基。

术语“羰基”是指由碳和氧两种原子通过双键连接而成的有机官能团(C＝O)。

术语“芳基”，单独或作为较大部分诸如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳基氧基烷基”的部分，是指具有总计5至12个环成员的单环、二环或三环的环系统，其中所述系统中的至少一个环为芳族的且其中所述系统中的每个环含有3至7个环成员。在本发明的某些实施方案中，“芳基”是指芳族环系统，其包括但不限于苯基、联苯基、茚满基、1-萘基、2-萘基和四氢萘基。术语“芳烷基”或“芳基烷基”是指连接至芳基环的烷基残基。非限制性实例包括苄基、苯乙基等。稠合的芳基可在环烷基环或芳族环的合适位置上连接至另一基团。例从环系统中画出的虚线表明键可连接至任意合适的环原子。

术语“环烷基”是指单环或二环的环状烷基。单环的环状烷基指C_3-8的环状烷基，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和降莰烷基。支化环烷基诸如1-甲基环丙基和2-甲基环丙基包括在“环烷基”的定义中。二环的环状烷基包括桥环、螺环或融合环的环烷基。

术语“环烯基”是指单环或二环的环状烯基。单环的环状烯基指C₃-C₈的环状烯基，包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基和降莰烯基。支化环烯基诸如1-甲基环丙烯基和2-甲基环丙烯基包括在“环烯基”的定义中。二环的环状烯基包括桥环、螺环或融合环的环状烯基。

“卤”、“卤代”或“卤素”包括氟、氯、溴和碘，特别地表示氟或氯。“卤代烷基”意欲包括具有指定碳原子数且取代有1个或更多个卤素的支链和直链饱和脂族烃基团。卤代烷基的实例包括但不限于氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、五氯乙基、2,2,2-三氟乙基、七氟丙基和七氯丙基。卤代烷基的实例还包括意欲包括具有指定碳原子数且取代有1个或更多个氟原子的支链和直链饱和脂族烃基团的“氟烷基”。

“卤代烷氧基”或“卤代烷基氧基”表示具有指定数量碳原子的经氧桥连接的如上文所定义的卤代烷基。例如，“C1-C6卤代烷氧基”意欲包括C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆卤代烷氧基。卤代烷氧基的实例包括但不限于三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基和五氟乙氧基。类似地，“卤代烷基硫基”或“硫代卤代烷氧基”表示具有指定数量碳原子的经硫桥连接的如上文所定义的卤代烷基；例如三氟甲基-S-和五氟乙基-S-。

本文中，当提到一些取代基团时使用C_x1-C_x2或C_x1-x2的表述，这表示所述取代基团中的碳原子数可以是x1至x2个。例如，C0-C8表示所述基团含有0、1、2、3、4、5、6、7或8个碳原子，C1-C8表示所述基团含有1、2、3、4、5、6、7或8个碳原子，C₂-C₈表示所述基团含有2、3、4、5、6、7或8个碳原子，C₃-C₈表示所述基团含有3、4、5、6、7或8个碳原子，C₄-C₈表示所述基团含有4、5、6、7或8个碳原子，C₀-C₆表示所述基团含有0、1、2、3、4、5或6个碳原子，C₁-C₆表示所述基团含有1、2、3、4、5或6个碳原子，C₂-C₆表示所述基团含有2、3、4、5或6个碳原子，C₃-C₆表示所述基团含有3、4、5或6个碳原子。

本文中，当提到环状基团(例如芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基)时使用“x1-x2元环”的表述，这表示该基团的环原子数可以是x1至x2个。例如，所述3-12元环状基团(如环烷基或杂环烷基)可以是3、4、5、6、7、8、9、10、11或12元环，其环原子数可以是3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个；3-6元环表示该环状基团可以是3、4、5或6元环，其环原子数可以是3、4、5或6个；3-8元环表示该环状基团可以是3、4、5、6、7或8元环，其环原子数可以是3、4、5、6、7或8个；3-9元环表示该环状基团可以是3、4、5、6、7、8或9元环，其环原子数可以是3、4、5、6、7、8或9个；4-7元环表示该环状基团可以是4、5、6或7元环，其环原子数可以是4、5、6或7个；5-8元环表示该环状基团可以是5、6、7或8元环，其环原子数可以是5、6、7或8个；5-12元环表示该环状基团可以是5、6、7、8、9、10、11或12元环，其环原子数可以是5、6、7、8、9、10、11或12个；6-12元环表示该环状基团可以是6、7、8、9、10、11或12元环，其环原子数可以是6、7、8、9、10、11或12个。所述环原子可以是碳原子或杂原子，例如选自N、O和S的杂原子。当所述环是杂环时，所述杂环可以含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个环杂原子，例如选自N、O和S的杂原子。

术语“杂芳基”意指稳定的3元、4元、5元、6元、或7元芳香单环或芳香二环或7元、8元、9元、10元、11元、12元芳香多环杂环，其为完全不饱和的、部分不饱和的，且其含有碳原子和1个、2个、3个或4个独立地选自N、O和S的杂原子；且包括任何以下多环基团，其中上文所定义的任意杂环与苯环稠合。氮和硫杂原子可任选地被氧化。氮原子为取代的或未取代的(即N或NR，其中R为H或如果被定义，则为另一取代基)。杂环可在得到稳定结构的任何杂原子或碳原子处连接至其侧基。如果所得化合物是稳定的，则本文所述的杂环基可在碳或氮原子上被取代。杂环中的氮可任选地被季铵化。优选地，当杂环中S和O原子的总数超过1时，则这些杂原子彼此不相邻。优选地，杂环中S和O原子的总数不大于1。当使用术语“杂环”时，其意欲包括杂芳基。芳杂基的实施例包括但不限于吖啶基、氮杂环丁基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噁唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、色满基、色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、咪唑并吡啶基、假吲哚基(indolenyl)、二氢吲哚基、吲嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、靛红酰基(isatinoyl)、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噻唑并吡啶基、异噁唑基、异噁唑并吡啶基、亚甲基二氧基苯基、吗啉基、二氮杂萘基、八氢异喹啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑并吡啶基、噁唑烷基、萘嵌间二氮杂苯基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁噻基、吩噁嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑并吡啶基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑基、吡啶并咪唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2-吡咯烷酮基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四唑基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻唑并吡啶基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和呫吨基、喹啉基、异喹啉基、酞嗪基、喹唑啉基、吲哚基、异吲哚基、二氢吲哚基、1H-吲唑基、苯并咪唑基、1,2,3,4-四氢喹啉基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、5,6,7,8-四氢-喹啉基、2,3-二氢-苯并呋喃基、色满基、1,2,3,4-四氢-喹喔啉基和1,2,3,4-四氢-喹唑啉基。术语“杂芳基”还可以包括由上述所定义的“芳基”与单环“杂芳基”所形成的联芳基结构，例如但不限于“-苯基联吡啶基-”、“-苯基联嘧啶基”、“-吡啶基联苯基”、“-吡啶基联嘧啶基-”、“-嘧啶基联苯基-”；其中本发明还包括含有例如上述杂环的稠环和螺环化合物。

术语“杂环基”是指至少一个环原子被杂原子(如氮、氧、硫或磷)替换的环状基团。所述杂环基可以是芳香性的或者非芳香性的，例如是杂芳基或杂环烷基。

本文使用的术语“杂环烷基”指的是一个单环杂环烷基体系，或为一个二环杂环烷基体系，同时还包括螺杂环或桥杂环烷基。单环的杂环烷基指的是3-8元、且至少含一个选自O、N、S、P的饱和或不饱和但不为芳香性的环状烷基体系。二环杂环烷基体系指的是一个杂环烷基融合到一个苯基、或一个环烷基、或一个环烯基、或一个杂环烷基或一个杂芳基。

通式(I)化合物合成的通用路线：

实施例

本发明所采用的试剂为直接购买的商业化试剂或经本领域熟知的常用方法合成。

如下示例的具体反应路线或步骤为本发明所用，具体如下：

实施例1

关键中间体的制备

中间体a1的合成

第一步：氮气保护下，将R构型2-甲基吗啉a1-1(5.0g,49.4mmol)和DIEA(12.8g,98.9mmol)溶于100mL四氢呋喃中，加入醋酐(7.5g，74.1mmol)，室温下搅拌12小时，LC-MS检测反应完成，停止反应。将反应液倒入400mL冰水中，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到黄色油状物a1-2(5.9g)，LC-MS:[M+H]⁺＝144。

第二步：将上步中间体a1-2(5.9g，41.2mmol)和原料a1-3(5.8g,37.1mmol)溶于120mL二氯乙烷中，缓慢滴加三氯氧磷(12.6g,82.4mmol)。升温至40℃下搅拌12小时，停止反应。将反应液倒入冰水中，并用饱和NaHCO₃水溶液调节PH-8左右，二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(PE/EA＝5/1)得到黄色油状物a1-4(7.0g)，收率：61％，LC-MS:[M+H]⁺＝281。

第三步：冰浴，氮气保护下，将上步中间体a1-4(7.0g，25.0mmol)溶于100mL DMF中，逐滴加入LiHMDS(1M,54.9mL)，冰浴下搅拌1小时。向反应液中加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(DCM/MeOH＝20/1)得到黄色固体a1(4.0g)，收率:65％，LC-MS:M+H⁺＝249。

中间体a2的合成

第一步：冰浴，氮气保护下，将中间体a1(4.0g，16.1mmol)和DIEA(6.2g,48.3mmol)溶于80mL二氯甲烷中，逐滴加入N(Tf)₂(12.1g,33.8mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)，升温至室温反应12小时。停止反应，将反应液中浓缩，柱层析分离(PE/EA＝9/1)得到黄色油状物a2-1(5.6g)，收率:91％，LC-MS:M+H⁺＝381。

第二步：氮气保护下，将原料3,5-二甲基-1H-吡唑硼酸频哪醇酯a2-2(3.5g,15.8mmol)和Na₂CO₃(2.2g,21.0mmol)溶于96mL乙二醇二甲醚和水的混合溶液中(v/v＝5/1)中，加入Pd(dppf)Cl₂(0.8g,1.1mmol)，升温至80℃。向该反应液中逐滴加入中间体a2-1(4.0g,10.5mmol)的DME溶液(20mL，滴加时长1小时)，该反应液继续在80℃下反应1小时，停止反应，过滤，滤液浓缩，flash柱层析分离，得到黄色固体a2(1.3g)，收率:38％，LC-MS:M+H⁺＝327。

中间体a3，a6的合成

第一步：氮气保护下，将中间体a2(1.0g,3.1mmol)和N-溴代琥珀酰亚胺NBS(655mg,3.7mmol)溶于20mL乙腈中，室温下搅拌1小时，LC-MS监测反应完成。将反应液浓缩，flash柱层析分离，得到黄色固体a3-1(0.9g)，收率：73％，LC-MS:[M+H]⁺＝405。

第二步：氮气保护下，将上步中间体a3-1(1.0g,2.5mmol)和Na₂CO₃(800mg,7.4mmol)溶于25mL四氢呋喃和水的混合溶液中(v/v＝4/1)中，加入Pd(PPh₃)₄(300mg,0.2mmol),升温至90℃。向该反应液中逐滴加入原料a3-2(2.1g,7.4mmol)的四氢呋喃溶液(4mL)，该反应液继续在90℃下继续反应3小时，停止反应，过滤，滤液浓缩，flash柱层析分离，得到黄色固体a3(800mg)，收率:54％，LC-MS:M+H⁺＝477。

参照化合物a3的合成路线，采用类似适当的原料，合成如下中间体。

中间体a4的合成

第一步：氮气保护下，将原料4-溴-3,5-二甲基-1H-吡唑a4-1(10.0g,57.1mmol)，Cs₂CO₃(37.2g,114.2mmol)和3-溴吡啶P1-1(11.7g,74.2mmol)溶于100mL DMF中，加入CuI(2.1g,11.4mmol)和N,N-二甲基甘氨酸DMG(2.3g,22.8mmol)，升温至140℃下反应12小时，LC-MS监测反应完成70％。过滤，滤液中加入500mL水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(PE/EA＝15/1)，得到白色固体a4-2(11.7g)，收率:81％，LC-MS:M+H⁺＝252。

第二步：氮气保护下，将上步中间体a4-2(8.0g,31.7mmol)、三乙胺(6.42g,63.4mmol)和4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二硼烷a4-3(48.0g,38.0mmol)溶于80mL乙酸乙酯中，加入Pd₂(dba)₃(2.9g,3.1mmol)和Xphos(3.0g,6.3mmol)，升温至80℃下反应1小时，LC-MS监测反应完成。过滤，滤液中加入200mL水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(PE/EA＝25/1)，得到白色固体a4(4.6g)，收率:39％，LC-MS:M+H⁺＝300。

中间体a5的合成

第一步：冰浴下，将原料2-甲基-3-氨基-6-氯吡啶a5-1(9.1g，63.8mmol)和醋酸(4.6g,76.5mmol)溶于90mL甲醇中，逐滴加入液Br₂(11.2g,70.0mmol)，室温下反应12小时。向反应液中加入300mL饱和硫代硫酸钠水溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(PE/EA＝9/1)得到黄色固体a5-2(7.7g)，收率:55％，LC-MS:M+H⁺＝221。

第二步：冰浴，氮气保护下，将上步中间体a5-2(7.5g，33.8mmol)、KOAc(5.7g,58.6mmol)和醋酸(37.5mL)溶于150mL甲苯中，逐滴加入亚硝酸异戊酯(9.9g,68.0mmol)，保持冰浴下反应3小时。向反应液中加入300mL冰水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(PE/EA＝10/1)得到黄色固体a5-3(2.3g)，收率:34％，LC-MS:M+H⁺＝232。

第三步：将上步中间体a5-3(2.4g，10.3mmol)、Cs₂CO₃(6.7g,20mmol)和SEMCl(2.1g,12.9mmol)溶于24mL四氢呋喃中，室温下反应12小时，LC-MS监测反应完全。向反应液中加入100mL冰水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(PE/EA＝3/1)得到黄色固体a5(3.2g)，收率:85％，LC-MS:M+H⁺＝361。

中间体b1的合成

第一步：氮气保护下，将中间体a4(3.4g,11.3mmol)、K₃PO₄(4.8g,22.7mmol)和中间体a5(4.1g,11.3mmol)溶于36mL甲苯和水的混合溶液(v/v＝5/1)中，加入Pd(OAc)₂(0.1g,0.5mmol)和PCy₃(0.3g,1.1mmol)，升温至100℃下反应12小时，LC-MS监测反应完成。过滤，滤液中加入100mL水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，flash柱层析分离，得到黄色油状物b1-1(1.9g)，收率:37％，LC-MS:M+H⁺＝455。

第二步：氮气保护下，将上步中间体b1-1(1.5g,3.2mmol)、Cs₂CO₃(2.1g,6.5mmol)和R构型2-甲基吗啉a1-1(0.5g,4.9mmol)溶于15mL 1,4-二氧六环中，加入Pd₂(dba)₃(0.3g,0.3mmol)和Xantphos(0.4g,0.6mmol)，升温至100℃下反应12小时，LC-MS监测反应完成。过滤，滤液中加入60mL水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，flash柱层析分离，得到黄色油状物b1-2(0.6g)，收率:35％，LC-MS:M+H⁺＝520。

第三步：将上步中间体b1-2(0.6g,1.1mmol)溶于6mL乙腈中，加入N-溴代琥珀酰亚胺NBS(0.2g,1.1mmol)，室温下反应12小时，停止反应。反应液浓缩，flash柱层析分离，得到黄色固体b1(240mg)，收率:35％，LC-MS:M+H⁺＝598。

实施例2

目标分子P1-P7，P20的制备

第一步：氮气保护下，将中间体a3(150mg,0.3mmol)，Cs₂CO₃(205mg,0.6mmol)和3-溴吡啶P1-1(100mg,0.6mmol)溶于4mL DMF中，加入CuI(12mg,0.06mmol)和N,N-二甲基甘氨酸DMG(13.0mg,0.12mmol)，升温至130℃下反应12小时，LC-MS监测反应完成。过滤，滤液浓缩，flash柱层析分离，得到黄色固体P1-2(130mg)，收率:75％，LC-MS:M+H⁺＝554。

第二步：氮气保护下，将上步中间体P1-2(130mg,0.2mmol)溶于4mL的氯化氢的甲醇溶液中(4M)，室温下反应1小时。停止反应，反应液减压浓缩，用氨水调节pH-8左右，flash柱层析分离，得到白色固体P1(58mg，收率53％)，LC-MS:[M+H]⁺＝470。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ13.16(s,1H),8.88(d,J＝2.5Hz,1H),8.66(dd,J＝4.7,1.5Hz,1H),8.34–7.99(m,1H),7.62(dd,J＝8.2,4.8Hz,2H),7.07(s,1H),6.92(s,1H),4.44(s,1H),4.04(dd,J＝27.0,11.6Hz,2H),3.73(d,J＝7.9Hz,5H),3.56(t,J＝10.8Hz,1H),3.17(t,J＝11.9Hz,1H),2.25(s,3H),2.15(s,3H),1.19(d,J＝6.5Hz,3H).

参照化合物P1的合成路线，采用类似的原料/中间体结构，合成如下目标分子。

实施例2

目标分子P8的制备

第一步：氮气保护下，将中间体a3(200mg,0.42mmol)、原料P8-1(469mg,1.68mmol)和Cs₂CO₃(547mg,1.68mmol)溶于6mL四氢呋喃中，升温至80℃下反应48小时。停止反应，反应液过滤，滤液浓缩，flash柱层析分离，得到白色固体P8-2(150.0mg)，收率：54％，LC-MS:[M+H]⁺＝660。

第二步：氮气保护下，将上步中间体P8-1(150mg,0.23mmol)溶于6mL的氯化氢的甲醇溶液中(4M)，室温下反应1小时。停止反应，反应液减压浓缩，用氨水调节pH-8左右，flash柱层析分离，得到白色固体P1(22mg，收率20％)，LC-MS:[M+H]⁺＝476。

¹H NMR:(300MHz,DMSO-d₆):δ7.66(d,J＝1.8Hz,1H),7.05(d,J＝1.9Hz,1H),6.81(s,1H),4.42(d,J＝7.5Hz,1H),4.20(s,1H),4.02(dd,J＝24.3,12.1Hz,1H),3.73(t,J＝8.8Hz,1H),3.59(s,3H),3.12(dd,J＝27.7,13.0Hz,3H),2.64(t,J＝12.1Hz,2H),2.14(s,3H),2.10–1.72(m,6H),1.17(d,J＝6.5Hz,3H).

实施例3

目标分子P9的制备

第一步：将中间体b1(220mg,0.3mmol)溶于2mL二氯甲烷中，逐滴加入2mL三氟乙酸，室温下反应5小时。停止反应，反应液减压浓缩，用氨水调节pH-8左右，flash柱层析分离，得到黄色固体P9-1(115mg)，收率67％，LC-MS:[M+H]⁺＝468。

第二步：氮气保护下，将上步中间体P9-1(105mg,0.2mmol)、原料a3-2(187mg,0.6mmol)和Cs₂CO₃(219mg,0.6mmol)溶于2mL四氢呋喃和水的混合溶液(v/v＝4/1)中，加入Pd(PPh₃)₄(26mg,0.02mmol)，升温至90℃下反应12小时。停止反应，反应液过滤，滤液浓缩，flash柱层析分离，得到黄色固体P9-2(120mg)，收率：69％，LC-MS:[M+H]⁺＝540。

第三步：氮气保护下，将上步中间体P9-2(30mg,0.05mmol)溶于0.5mL的氯化氢的甲醇溶液中(4M)，室温下反应1小时。停止反应，反应液减压浓缩，用氨水调节pH-8左右，HPLC制备色谱分离，得到白色固体P1(10mg，收率39％)，LC-MS:[M+H]⁺＝456。

¹H NMR:(300MHz,DMSO-d₆):δ13.18(s,1H),8.80(d,J＝2.6Hz,1H),8.60(dd,J＝4.7,1.5Hz,1H),7.99(ddd,J＝8.2,2.7,1.5Hz,1H),7.57(dd,J＝8.3,4.7Hz,1H),7.53(s,1H),6.99(s,1H),6.91(s,1H),4.39(s,1H),4.02(s,1H),3.94(d,J＝11.3Hz,1H),3.70(t,J＝9.3Hz,2H),3.50(t,J＝11.0Hz,1H),3.12(t,J＝11.9Hz,1H),2.21(d,J＝14.1Hz,7H),1.14(d,J＝6.5Hz,3H).

实施例4

目标分子P10的制备

第一步：冰浴下，将实施例3的中间体P9-2(80mg,0.1mmol)溶于1mL无水四氢呋喃中，缓慢加入NaH(4.2mg,0.12mmol)，升温至室温反应30分钟，向反应液中加入原料碘甲烷(27.3mg,0.12mmol)，继续在室温下反应1小时，LC-MS监测反应完全。向反应液中加入10mL冰水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离，得中间体P10-1和P1-2的混合物(50mg)，收率61％，LC-MS:[M+H]⁺＝553。

第二步：将上步混合物(50mg,0.09mmol)溶于0.5mL的氯化氢的甲醇溶液中(4M)，室温下反应30分钟。停止反应，反应液减压浓缩，用氨水调节pH-8左右，HPLC制备色谱分离，得到白色固体P10(0.7mg，收率1.6％)，LC-MS:[M+H]⁺＝470。HPLC纯度：99.4％。

实施例5

目标分子P11-P18的制备

第一步：冰浴下，将实施例3的中间体P9-2(20mg,0.03mmol)溶于1mL无水四氢呋喃中，缓慢加入Cs₂CO₃(24mg,0.07mmol)和氘代碘甲烷(6.5mg,0.04mmol)，升温至室温下反应4小时，LC-MS监测反应完全。向反应液中加入10mL冰水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，flash反向柱层析分离，得化合物P11-1(20mg)，收率：91％，LC-MS:[M+H]⁺＝557。

第二步：将上步化合物P11-1(20mg,0.03mmol)溶于0.5mL的氯化氢的甲醇溶液中(4M)，室温下反应30分钟。停止反应，反应液减压浓缩，用氨水调节pH-8左右，HPLC制备色谱分离，得到白色固体P11(6.9mg，收率：41％)，LC-MS:[M+H]⁺＝473。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ13.08(d,J＝88.8Hz,1H),8.92–8.85(m,1H),8.66(dd,J＝4.7,1.5Hz,1H),8.14–8.05(m,1H),7.68–7.57(m,1H),7.04(s,1H),6.93(s,1H),4.44(s,1H),4.08(s,1H),4.00(d,J＝11.2Hz,1H),3.81–3.65(m,2H),3.62–3.48(m,1H),3.17(t,J＝12.1Hz,1H),2.26(s,3H),2.16(s,3H),1.19(d,J＝6.6Hz,3H).

参照化合物P11的合成路线，采用类似的原料/中间体结构，合成如下目标分子。

实施例6

目标分子P19的制备

第一步：氧气条件下(1atm)，将实施例3的中间体P9-2(20mg,0.03mmol)、碳酸钠(7.8mg,0.07mmol)和环丙基硼酸(4.7mg,0.05mmol)溶于1mL二氯乙烷中，加入催化剂Cu(OAc)₂(1.4mg)和2,2-联吡啶(2.3mg)，升温至70℃下反应14小时，停止反应，过滤。粗品经flash反向柱层析分离，得化合物P19-1(20.0mg)，LC-MS:[M+H]⁺＝580。

第二步：将上步化合物P19-1(20mg,0.03mmol)溶于0.5mL的氯化氢的甲醇溶液中(4M)，室温下反应30分钟。停止反应，反应液减压浓缩，用氨水调节pH-8左右，HPLC制备色谱分离，得到白色固体P19(5.5mg)，LC-MS:[M+H]⁺＝496。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆,ppm)δ13.07(d,J＝84.3Hz,1H),8.87(d,J＝2.6Hz,1H),8.65(dd,J＝4.7,1.5Hz,1H),8.07(d,J＝8.0Hz,1H),7.61(dd,J＝8.2,4.7Hz,1H),7.03(s,0H),6.94(s,1H),4.44(s,1H),4.08(s,1H),4.00(d,J＝10.9Hz,1H),3.75(t,J＝9.5Hz,2H),3.56(t,J＝11.0Hz,1H),3.43(s,1H),3.19(d,J＝12.9Hz,1H),2.26(d,J＝1.5Hz,3H),2.17(d,J＝1.4Hz,3H),1.19(d,J＝6.6Hz,3H),0.94(s,2H),0.69–0.61(m,2H).

实施例7

本发明化合物对于ATR/ATRIP活性抑制效果：

在384孔微板(PerkinElmer,目录号：6008280)中依次加入2.5μL含有不同稀释浓度化合物的反应液、2.5μL含有GST标记p53(Eurofins，目录号：14-952)的反应液、2.5μL含有活性ATR/ATRIP(Eurofins，目录号：14-953)的反应液以及2.5μL含有ATP的反应液，总体积为10μL，1000rpm离心1分钟，然后室温避光孵育30分钟，加入5μL反应终止液，随后加入5μL含有Anti-phospho-p53(ser15)-K(Cisbio,目录号：61P08KAE)和Anti-GST-d2的抗体混合液，使用BMG plate reader在615nm和665nm波长读板并记录信号值。

使用以下公式计算相对比值RR：

RR＝实验孔读值(665nm)/实验孔读值(615nm)-背景读值(665nm)/背景读值(615nm)

使用以下公式计算抑制率(％)：

抑制率(％)＝[1-(RR_化合物-RR_阳性孔)/(RR_阴性孔-RR_阳性孔)]×100

使用以下公式计算IC₅₀值：

Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC₅₀-X)×HillSlope))

X：化合物浓度对数值；Y：抑制率(％)

表1：化合物对于ATR/ATRIP抑制实验结果

实施例8

本发明化合物对于p-CHK1磷酸化活性抑制效果：

HT-29细胞培养于包含10％胎牛血清的McCoy's 5A Medium Modified培养基中。将HT-29细胞以12000细胞/25μl/孔接种于384孔板中，37℃、5％ CO₂孵育箱中孵育过夜；使用Echo(PE，型号：550)在各孔中加入不同浓度化合物，孵育箱中温孵2小时；使用Echo在各孔中加入吉西他滨(MCE，目录号：HY-B0003)，孵育箱中孵育4小时；每孔中加入25μl 8％多聚甲醛，室温温孵20分钟；移除多聚甲醛溶液并在每孔中加入0.1％ Triton X-100，室温孵育30分钟；每孔中加入50μl Odessey blocking buffer，室温温孵1.5小时；移除阻断液，每孔中加入anti-Phospho-Chk1(Ser345)(133D3)Rabbit mAb(CST，目录号：2348S)和anti-Chk1(2G1D5)Mouse mAb(CST，目录号：2360)抗体稀释液，4℃孵育过夜；移除抗体溶液，使用含有0.1％ Tween-20的磷酸缓冲液清洗5次；在各孔中加入二抗IRDye 800CW Goat anti-Rabbit IgG(H+L)(LI-COR，目录号：926-32211)和IRDye680CW Goat anti-Mouse IgG(H+L)(LI-COR，目录号：926-68070)稀释液，室温孵育1小时；移除二抗液，使用含有0.1％ Tween-20的磷酸缓冲液清洗5次，移除清洗液并使用Odyssey(LI-COR，型号：CLX)检测。

使用以下公式计算相对比值RR：

RR＝读值(通道800)/读值(通道700)

使用以下公式计算抑制率(％)：

抑制率(％)＝[1-(RR_化合物-RR_阴性孔)/(RR_阳性孔-RR_阴性孔)]×100

使用以下公式计算IC₅₀值：

Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC₅₀-X)×HillSlope))

X：化合物浓度对数值；Y：抑制率(％)

表2：化合物对于HT-29细胞内p-CHK1的磷酸化抑制效果

以上结果表明：本发明对于ATR在细胞内水平也具有良好的抑制效果，且活性远高于临床分子AZD6378。

实施例9

将ATM突变的结直肠癌细胞Lovo细胞培养于包含12％FBS和1％青链霉素的DMEM培养基中，置于37℃，5％CO₂恒温培养箱培养，在384孔微板中每孔加入40μL细胞悬液。使用Echo在每孔中加入40nL不同浓度的化合物，置于37℃，5％CO₂恒温培养箱培养5天。在每孔中加入40μL的CTG溶液(Promega，Cat No.G7573)，置于37℃，5％CO₂恒温培养箱避光温孵30分钟。用Envision多功能酶标仪(Perkin Elmer，目录号Envision 2104)读取发光值，光信号和体系中ATP量成正比，而ATP的含量直接表征体系中的活细胞数。

IC₅₀值计算：

Y＝下平台信号+(上平台信号-下平台信号)/(1+10^((LogIC₅₀-X)×希尔斜率))

X:化合物浓度log值

Y:抑制率(％)

表3：化合物对于ATM突变的结直肠癌Lovo细胞系的2D抗增殖效果

以上结果表明：本发明对于ATM突变的肿瘤细胞具有良好的抗增殖效果，且活性远高于临床分子AZD6378和对照分子。

实施例10

小鼠药代动力学评价实验

以CD1雌性小鼠为受试动物，口服/静脉给药(口服给药量为10mg/kg，静脉为2mg/kg)。口服溶媒：0.1％ Tween 80+0.5％甲基纤维素。静脉溶媒：5％ DMSO/95％ HP-β-环糊精。

实验方案：口服组每组3只，静脉组每组三只。口服：收集给药前(0h)和给药后(0.25,0.5,1,2,4,8,24h)的血浆样品；静脉：收集给药前(0h)和给药后(0.083,0.25,0.5,1,2,4,8,24h)的血浆样品；用LC/MS/MS法分别测定小鼠口服和静脉给药后的血浆的血液浓度，采集的数据用AB Sciex QTRAP 6500软件计算，实验结果如下：

表4：化合物的小鼠药代动力学结果

以上实验结果表明，本发明化合物具有良好的口服吸收效果，较低的动物体内清除速率和非常高的生物利用度，临床上有望以更低的剂量带来更好的治疗效果。

Claims

1.式(I)所示的化合物，或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体：

其中

R₁选自任选取代的芳基、杂芳基和杂环基，优选地任选取代的苯基、吡啶基、哌啶基和哒嗪基，例如所述芳基、杂芳基和杂环基任选地被1、2或3个选自卤素、氰基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、氨基、C_1-4烷硫基、C_3-6环烷基、和C_1-4烷基氨基的取代基所取代；

R₂选自氢、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

R₃选自氢、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

R₄选自任选取代的氢、C_1-4烷基、C_3-6环烷基、C_3-6杂环烷基和-L-C_3-6杂环烷基，其中所述C_3-6杂环烷基含有1或2个选自氧、氮和硫的杂原子；例如所述C_1-4烷基、C_3-6环烷基和C_3-6杂环烷基任选地被1、2或3个选自氘、氰基、羟基、卤素和C_1-4烷氧基的取代基所取代，；L为-(CH₂)_n，n选择1、2或3和

R₅选自氢、C_1-4烷基或卤素。

2.如权利要求1所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体，其中R₁选自苯基、吡啶基、哌啶基和哒嗪基、卤代苯基、氰基苯基、氨基苯基、甲氨基苯基、卤代吡啶基、氰基吡啶基、氨基吡啶基、甲氨基吡啶基、甲氧基吡啶基、卤代哌啶基、氰基哌啶基、氨基哌啶基、甲氨基哌啶基、卤代哒嗪基、氰基哒嗪基、氨基哒嗪基和甲氨基哒嗪基。

3.如权利要求1所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体，其中R₁选自

表示与吡唑环相连。

4.如权利要求1至3所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体，其中卤素是氟或氯，和/或所述C_1-4烷基氨基是甲基氨基或乙基氨基。

5.如权利要求1至4中任一项所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体，其中R₂和R₃各自独立地选自氢和甲基，例如R₂和R₃是甲基。

6.如权利要求1至5中任一项所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体，其中R₄选自氢、甲基(包括氘代甲基如-CD₃)、乙基、正丙基、异丙基、三氟甲基、三氟乙基、三氟丙基、三氟丁基、羟甲基、羟乙基、羟丙基、羟丁基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、氰基甲基、氰基乙基、氰基丙基、氰基丁基、HOC(CH₃)₂CH₂-、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、氟代环丙基、二氟代环丙基、氟代环丁基、二氟代环丁基、氧杂环丁基、氧杂环戊基、氧杂环己基和氮杂环丁基。

7.如权利要求1至6任一项所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体，其中R₄选自甲基(包括氘代甲基如-CD₃)、乙基、环丙基、羟基乙基、三氟乙基、二氟乙基或HOC(CH₃)₂CH₂-；R₅是氢。

8.如权利要求1至6任一项所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体，其中R₄选自甲基(包括氘代甲基如-CD₃)、乙基、环丙基、羟基乙基、三氟乙基、二氟乙基或HOC(CH₃)₂CH₂-；R₅是甲基。

9.化合物，选自：

或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体。

10.一种药物组合物，其包含如权利要求1至9中任一项所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体，以及可药用载体；优选地，其还包含另外的活性药物成分。

11.如权利要求1至9中任一项所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体或如权利要求10所述的药物组合物，其用作ATR/ATRIP抑制剂。

12.如权利要求1至9中任一项所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体或如权利要求10所述的药物组合物，其用于预防和/或治疗ATR相关疾病。

13.如权利要求11所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体或药物组合物，其中所述ATR相关疾病选自癌症、年龄相关性黄斑变性(AMD)、脉络膜新生血管(CNV)、糖尿病性视网膜病、糖尿病性黄斑水肿(DME)、进行性骨化性纤维发育不良、炎症、血管生成相关病症和细菌感染。

14.如权利要求12或13所述的化合物或其可药用盐或互变异构体或对映异构体或非对映异构体或药物组合物，其中所述ATR相关疾病选自头、颈、眼、口、喉咙、食道、支气管、喉、咽、胸、骨、肺、结肠、直肠、胃、前列腺、膀胱、子宫、子宫颈、乳腺、卵巢、睾丸或其它生殖器官、皮肤、甲状腺、血液、淋巴结、肾、肝、胰腺、脑、中枢神经系统的癌症、实体瘤和血源性肿瘤。