CN115707472A - C16 Laccer在制备修复脊髓损伤的药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了C16Laccer在制备修复脊髓损伤的药物中的用途。本发明还公开了C16Laccer在制备对脊髓损伤后炎症反应具有抑制作用的药物中的用途，所述药物降低了脊髓损伤区域所产生的活性氧及M1型巨噬细胞的比例。本发明发现了C16Laccer具有抑制脊髓损伤后炎症反应的作用，C16Laccer可能是机体在脊髓损伤后抑制炎症反应的一种途径。因此，本发明可以通过调控脊髓损伤后，损伤微环境中C16Laccer的含量进而实现对炎症反应的调控。
Description
技术领域
本发明具体涉及C16 Laccer作为药物抑制脊髓损伤后炎症反应进而在制备调控脊髓损伤修复的药物中的用途，属于纳米生物技术领域。
背景技术
脊髓损伤后，炎症反应对脊髓损伤修复的作用尤为复杂。一方面，可以清除受损细胞及髓鞘碎片并抵抗病原体入侵，为组织再生及组织重塑提供前提基础；另一方面，脊髓损伤后的炎症反应不能像其他组织中的炎症反应一样，适时终止，异常持续激活的免疫反应是脊髓损伤后难以愈合的主要原因。巨噬细胞/小胶质细胞是脊髓损伤后的主要免疫细胞，且在损伤部位长期存在，巨噬细胞/小胶质细胞具有修复损伤及加重损伤的两种截然不同的作用，这与其极化方向的不同有关。即M1型经典活化的巨噬细胞/小胶质细胞及M2型替代性活化的巨噬细胞/小胶质细胞。M1型巨噬细胞/小胶质细胞能促进炎症反应、促炎因子的产生，增强巨噬细胞/小胶质细胞的杀菌作用，同时也导致脊髓损伤加重。M2型巨噬细胞/小胶质细胞能抑制炎症反应及促炎因子的产生，在炎症反应中修复与保护机体，促进损伤组织的修复与再生。
脊髓损伤后，影响巨噬细胞极化的因素包括，干扰素、细胞因子以及髓鞘碎片，目前，可以通过调节巨噬细胞表面的受体、人为引入细胞因子、miRNA等方式对巨噬细胞的炎症反应进行调控，然而，通过这些方法并未取得良好的治疗效果，进一步的发掘影响巨噬细胞/小胶质细胞炎症反应的因素，对于更好的调控脊髓损伤后的炎症反应具有重要意义。
脂质(lipid)是一类低溶于水而高溶于非极性溶剂的生物有机分子。在机体中，脂质不仅是质膜的主要组成成分，在细胞的相互识别、信号传导、以及作为第二信使在细胞的存活、增殖、分化、凋亡等方面具有重要作用，最近的研究发现，脂质对炎症反应也具有重要的调控作用，例如，富含LacCer的脂筏与中性粒细胞对细菌的吞噬和过氧化物的产生相关。但是，脂质在脊髓损伤后，炎症反应中的作用却鲜有报道。
发明内容
本发明的主要目的在于提供C16 Laccer在制备修复脊髓损伤的药物中的用途，以克服现有技术的不足。
为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明实施例提供了C16 Laccer在制备对脊髓损伤后炎症反应具有抑制作用的药物中的用途。
进一步地，所述药物能够抑制脊髓损伤区域活性氧的产生。
进一步地，所述药物能够抑制促炎因子的表达。
进一步地，所述药物能够降低脊髓损伤区域M1型巨噬细胞的比例。
本发明实施例还提供了C16 Laccer在制备修复脊髓损伤的药物中的用途。
进一步地，所述药物能够抑制脊髓损伤后的炎症反应。
本发明实施例还提供了一种修复脊髓损伤的药物，其包括C16 Laccer及药学上可接受的载体。
较之现有技术，本发明发现了C16 Laccer具有抑制脊髓损伤后炎症反应的作用，C16Laccer可能是机体在脊髓损伤后抑制炎症反应的一种途径。因此，本发明可以通过调控脊髓损伤后，损伤微环境中C16 Laccer的含量进而实现对炎症反应的调控。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明一典型实施例中C16 Laccer对巨噬细胞活性氧产生的影响结果图；
图2A和图2B是本发明一典型实施例中ELISA检测巨噬细胞在促炎环境下，C16Laccer作用24小时后细胞培养上清中，TNF-a、IL-6的含量示意图；
图3A和图3B是本发明一典型实施例中脊髓损伤后7天，C16 Laccer的添加对损伤部位活性氧产生情况影响的示意图；
图4是本发明一典型实施例中脊髓损伤后14天，C16 Laccer的添加对损伤部位M1型巨噬细胞比例的影响结果图；
图5是本发明一典型实施例中脊髓损伤后12周，C16 Laccer的添加对损伤部位M1型巨噬细胞比例的影响结果图。
具体实施方式
鉴于现有技术中的不足，本案发明人经长期研究和大量实践，得出本发明的主要技术方案。如下将对该技术方案、其实施过程及原理等作进一步的解释说明。
本发明涉及的技术术语解释如下：
C16 Laccer(乳糖神经酰胺)：C16 Lactosyl(β)Ceramide(d18:1/16:0)即D-lactosyl-β-1,1'N-palmitoyl-D-erythro-sphingosine属于鞘糖脂，其结构式如下所示：
本案发明人经长期研究表明，C16 Laccer对巨噬细胞的炎症反应具有抑制作用，而巨噬细胞是脊髓损伤后的主要免疫细胞，因此，本案发明人认为，C16 Laccer可能在脊髓损伤后的炎症反应中具有调控作用，针对这一问题，提出本发明的技术方案。
本发明实施例的一个方面提供了C16 Laccer在制备对脊髓损伤后炎症反应具有抑制作用的药物中的用途。
进一步地，所述药物对脊髓损伤区域所产生的活性氧具有抑制作用。
进一步地，所述药物对促炎因子的表达具有抑制作用。
进一步地，所述药物降低了脊髓损伤区域中M1型巨噬细胞的比例。
本发明实施例的另一个方面提供了C16 Laccer在制备修复脊髓损伤的药物中的用途。
进一步地，所述药物能够抑制脊髓损伤后的炎症反应，即，C16 Laccer具有抑制脊髓损伤后炎症反应的作用。
相应的，本发明实施例的另一个方面还提供了一种修复脊髓损伤的药物，其包括C16Laccer及药学上可接受的载体。
进一步地，所述药物能够抑制脊髓损伤后的炎症反应。
进一步地，C16 Laccer可以作为药物，通过调控脊髓损伤后，微环境中C16 Laccer的含量对损伤后的炎症反应进行调控。
其中，本发明的细胞实验中，C16 Laccer抑制巨噬细胞活性氧及促炎因子的产生，最适浓度范围为大于10μmol/L，小于90μmol/L；动物实验中，C16 Laccer抑制损伤部位活性氧的产生及M1型巨噬细胞的比例，最适给药量为9ng-30ng，这些浓度应该是一个范围，即其他相近浓度也会有同样的作用。
其中，本发明技术方案中动物模型为全横断脊髓损伤，为最严重的脊髓损伤，本方案同样适用于其他类型的脊髓损伤，如挫伤性损伤、缺血性损伤。
因此藉由上述技术方案，在本发明中，本案发明人发现了C16 Laccer具有抑制脊髓损伤后炎症反应的作用，进一步了解了脊髓损伤后的炎症反应：C16 Laccer可能是机体在脊髓损伤后抑制炎症反应的一种途径。因此，本发明可以通过调控脊髓损伤后，损伤微环境中C16Laccer的含量进而实现对炎症反应的调控。
下面通过具体实施方式及附图来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员很容易理解，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
1、检测C16 Laccer对大鼠巨噬细胞NR8383炎症反应的影响
1.1检测C16 Laccer对大鼠巨噬细胞NR8383在促炎因子LPS存在条件下活性氧产生的影响
收集NR8383细胞，按照50万/ml的密度重悬细胞，之后按照表1中的分组添加1μg/ml的LPS及C16 Laccer，24小时后，添加DCFH-DA，使其终浓度为10μmol/L，40分钟后，通过酶标仪检测荧光强度(Fluorescience 488/585bottom)，进而对活性氧的产生进行定量。
表1.C16 Laccer对巨噬细胞炎症反应的影响实验分组
1.2检测C16 Laccer对大鼠巨噬细胞NR8383在促炎因子LPS存在条件下促炎因子产生的影响
收集NR8383细胞，按照50万/ml的密度重悬细胞，之后按照表1中的分组添加1μg/ml的LPS及C16 Laccer，24小时后，收集细胞培养上清，通过ELISA检测培养上清中促炎因子TNF-α、IL-6的含量。
2、构建全横断脊髓损伤模型，检测C16 Laccer对脊髓损伤后炎症反应的影响
首先，将不同含量的C16 Laccer担载到胶原纤维支架材料上，获得4mg材料中，分别担载有0ng，3ng，9ng，30ng，80ng C16 Laccer的胶原纤维支架材料；
然后，构建大鼠T8-T9脊髓全横断损伤模型，并将担载有不同含量C16 Laccer的胶原纤维支架材料添加到脊髓横断部位；最后，分别在损伤后7天及14天、12周取材，并通过免疫荧光染色检测损伤部位活性氧及M1型巨噬细胞/小胶质细胞的比例。
3、实验结果
3.1C16 Laccer对大鼠巨噬细胞NR8383炎症反应的影响
活性氧的产生与炎症反应息息相关，因此，本案发明人首先检测了C16 Laccer对巨噬细胞活性氧产生的影响，从图1的结果中可以看出，添加LPS后，巨噬细胞所产生的活性氧明显升高(0组)，而C16 Laccer的添加量为10、30、90μmol/L时，均表现出对活性氧产生的抑制作用，说明，C16 Laccer可能对炎症反应具有抑制作用。为了进一步验证C16 Laccer对炎症反应的作用，本案发明人对促炎因子的表达量进行了检测，从图2A和图2B的ELISA检测结果中可以看出，添加LPS后，巨噬细胞所产生的促炎因子TNF-α、IL-6的表达量均明显提高，而在C16 Laccer的添加量为30μmol/L时，显著抑制促炎因子的表达。图2A和图2B为C16Laccer作用24小时后细胞培养上清中，TNF-a、IL-6的含量。以上细胞实验的结果表明，C16Laccer对巨噬细胞的炎症反应具有抑制作用。
3.2C16 Laccer对脊髓损伤后炎症反应的影响
为了进一步验证C16 Laccer在脊髓损伤后炎症反应中的作用，本案发明人通过全横断脊髓损伤模型检测了C16 Laccer对损伤部位活性氧、M1型巨噬细胞比例的影响，从图3A和图3B中可以看出，脊髓损伤后7天，C16 Laccer的添加量为9、30ng时，明显的抑制了损伤部位活性氧的产生；在损伤后14天，C16 Laccer的添加量为30ng时，损伤部位M1型巨噬细胞的比例显著下降(图4)；在损伤后12周，C16 Laccer的添加量为3、9、30ng时，明显抑制了损伤部位M1型巨噬细胞的比例(图5)，即C16 Laccer的添加量为30ng时，不仅会抑制损伤部位活性氧的产生，同时在损伤后14天及12周均抑制了M1型巨噬细胞的比例。进一步的证明了C16 Laccer在脊髓损伤后，对炎症反应具有抑制作用。因此，C16 Laccer具有作为药物抑制脊髓损伤后炎症反应进而调控脊髓损伤修复的用途。
应当理解，上述实施例仅为说明本申请的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本申请的内容并据以实施，并不能以此限制本申请的保护范围，例如，前述紫杉醇亦可替代为其它化学药物。凡根据本申请精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本申请的保护范围之内。
Claims (10)
1.C16 Laccer在制备对脊髓损伤后炎症反应具有抑制作用的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物对脊髓损伤区域所产生的活性氧具有抑制作用。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物能够抑制促炎因子的表达。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物能够降低脊髓损伤区域M1型巨噬细胞的比例。
5.C16 Laccer在制备修复脊髓损伤的药物中的用途。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述药物能够抑制脊髓损伤后的炎症反应。
7.一种修复脊髓损伤的药物，其特征在于包括C16 Laccer及药学上可接受的载体。
8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于：所述药物能够抑制脊髓损伤后的炎症反应。
9.根据权利要求7所述的药物，其特征在于：所述C16 Laccer的施加量为9ng-30ng。
10.根据权利要求7所述的药物，其特征在于：所述脊髓损伤包括全横断脊髓损伤、挫伤性脊髓损伤或缺血性脊髓损伤。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1897961A (zh) * | 2003-12-23 | 2007-01-17 | Musc研究发展基金会 | 预防和治疗炎性疾病或病症的方法和组合物 |
| CN101123879A (zh) * | 2004-08-20 | 2008-02-13 | 约翰·霍普金斯大学 | 血管新生治疗方法 |
-
2021
- 2021-08-19 CN CN202110956253.6A patent/CN115707472A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1897961A (zh) * | 2003-12-23 | 2007-01-17 | Musc研究发展基金会 | 预防和治疗炎性疾病或病症的方法和组合物 |
| CN101123879A (zh) * | 2004-08-20 | 2008-02-13 | 约翰·霍普金斯大学 | 血管新生治疗方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| KUMKUM SAXENA 等: "Bilayer Properties of Totally Synthetic C16:0-Lactosyl-Ceramide", 《BIOPHYSICAL JOURNAL》, vol. 78, pages 306 - 312 * |
| YEON-HUI JEONG 等: "Anti-Inflammatory Effects of a-Galactosylceramide Analogs in Activated Microglia: Involvement of the p38 MAPK Signaling Pathway", 《PLOS ONE》, vol. 9, no. 2, pages 1 - 10 * |
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