CN115697333A - 包含阿西替尼的组合物和治疗眼部疾病的方法 - Google Patents

Abstract

本公开总体涉及眼科疗法，并且更具体地涉及允许将流体药物制剂输注到眼后部组织中以用于靶向局部治疗的方法和装置，例如，用于治疗人类患者的湿性AMD。所述药物制剂可以注射到眼睛的脉络膜上腔(SCS)或视网膜下腔中。所述药物制剂可以包括酪氨酸激酶抑制剂，诸如阿西替尼。

Description

包含阿西替尼的组合物和治疗眼部疾病的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2020年2月19日提交的美国临时申请号62/978,540的优先权；将其以引用方式全文并入本文。

背景技术

新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD，也称为“湿性”AMD)是工业化世界视力丧失的主要原因。它是由脉络膜毛细血管异常血管生长引起的，脉络膜毛细血管层是紧邻布鲁赫膜下方的一层毛细血管。脉络膜新生血管导致血液、脂质和血清渗入视网膜层，这可能导致对光敏感的视网膜细胞的永久性损伤和不可逆的中心视力扭曲。

尽管尚未完全阐明，但对nAMD的发病机制了解很多。血管内皮生长因子(VEGF)信号传导通路已被证明与10％至15％的AMD诊断有关，这些诊断被归类为新生血管型(nAMD)。在该通路中，VEGF信号传导配体与不同的VEGF受体(VEGFR)同工型结合，以激活促进新脉管系统生长的细胞过程。具体而言，作用于VEGFR-1和VEGFR-2的VEGF-A已被证明可促进异常血管生长，因此是治疗的最佳靶点。目前，抗VEGF-A药物是治疗nAMD的标准疗法；然而，显著改善和维持患者视力的需求仍未得到满足。

脉络膜新生血管(CNV)是眼睛脉络膜层中新血管的形成。脉络膜新生血管是nAMD的常见原因和/或可能与nAMD相关。CNV可在脉络膜最内层布鲁赫膜缺陷的个体中迅速发生。它还与过量的VEGF有关。CNV也经常发生在罕见的遗传病弹性假黄瘤中，很少发生在更常见的视盘玻璃疣中。CNV也与极度近视或恶性近视变性有关，其中脉络膜新生血管主要发生在视网膜黄斑组织内存在裂缝(称为漆样裂缝)的情况下。CNV会导致中央视力突然恶化，在几周内就会很明显。其他可能出现的症状包括颜色紊乱和变形(直线呈波浪状的变形)。新血管的出血可加速CNV症状的发作。

目前，即使是最成功的nAMD和CNV治疗也不排除复发，因此可能进行多种治疗。此外，目前可用的治疗方法不能恢复已经失去的视力。因此，本领域需要治疗突破，以便在不重复使用激光的情况下更长时间地保持视力。

发明内容

提供了用于治疗新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD；本文也称为湿性AMD)、脉络膜新生血管(CNV)、与CNV相关的nAMD、糖尿病性视网膜病、糖尿病性黄斑水肿(DME)和相关疾病的方法和组合物。所述组合物包含一种或多种酪氨酸激酶抑制剂，并通过非外科方法递送至眼睛的脉络膜上腔。在一些实施方案中，酪氨酸激酶抑制剂具有抗血管内皮生长因子(VEGF)和/或血小板衍生生长因子(PDGF)的活性。在一些实施方案中，酪氨酸激酶抑制剂是阿西替尼。在一些实施方案中，本公开提供了阿西替尼制剂CLS-AX。

在一些实施方案中，本公开提供了用于治疗nAMD、脉络膜新生血管(CNV)、与CNV相关的nAMD和/或DME的方法，所述方法包括向有需要的受试者的眼睛的脉络膜上腔施用包含阿西替尼的制剂。在一些实施方案中，所述方法包括向眼睛施用约0.01mg至约3.0mg的阿西替尼。在一些实施方案中，所述方法包括向眼睛施用约0.01mg至约0.5mg的阿西替尼。在一些实施方案中，所述方法包括向眼睛施用约0.01mg至约0.3mg的阿西替尼。在其他实施方案中，所述方法包括向眼睛施用约0.03至约0.1mg的阿西替尼。在一些实施方案中，所述方法包括向眼睛施用约0.01、约0.02、约0.03、约0.04、约0.05、约0.06、约0.07、约0.08、约0.09、约0.10、约0.2、约0.3、约0.4、约0.5、约1.0、约2.0或约3.0mg的阿西替尼。在一些实施方案中，所述方法包括向眼睛施用约0.03mg的阿西替尼。在一些实施方案中，所述方法包括向眼睛施用约0.06mg的阿西替尼。在一些实施方案中，所述方法包括向眼睛施用约0.1mg的阿西替尼。在一些实施方案中，所述方法包括向眼睛施用约0.3mg的阿西替尼。在一些实施方案中，阿西替尼以约100μL的体积施用。因此，在一些实施方案中，所述方法包括以约0.1mg/mL至约1mg/mL、或约0.1mg/mL、约0.3mg/mL、约0.6mg/mL、或约1.0mg/mL的浓度施用阿西替尼制剂。在一些实施方案中，所述方法包括将阿西替尼以非外科方式施用至眼睛。例如，在实施方案中，所述方法包括将阿西替尼通过非外科脉络膜上腔注射施用至眼睛。在实施方案中，通过使用包括针的注射装置施用阿西替尼实现非外科脉络膜上腔注射，其中该针具有约500至约2000微米的有效长度。

在一些实施方案中，所述方法包括以至少一个剂量将阿西替尼施用至眼睛。在一些实施方案中，所述方法包括以两个剂量将阿西替尼施用至眼睛，其中所述两个剂量间隔至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月或至少约12个月。

在一些实施方案中，在将阿西替尼施用至受试者的眼睛之后，受试者未经历视力丧失，如通过最佳矫正视力(BCVA)所测量。在一些实施方案中，在将阿西替尼施用至受试者的眼睛之后，受试者经历极小视力丧失，如通过最佳矫正视力(BCVA)所测量。在实施方案中，极小视力丧失是不超过2个字母的丧失。在其他实施方案中，与施用阿西替尼制剂之前受试者的视力相比，受试者经历≥10个字母、≥15个字母或≥25个字母的BCVA的改善。在实施方案中，受试者在施用阿西替尼制剂后2个月、3个月、4个月、5个月、6个月或更长的时间未经历视力丧失，如通过BCVA所测量。在实施方案中，受试者在施用阿西替尼制剂后2个月、3个月、4个月、5个月、6个月或更长的时间经历极小视力丧失，如通过BCVA所测量。在实施方案中，受试者在施用阿西替尼制剂后2个月、3个月、4个月、5个月、6个月或更长的时间经历视力改善，如通过BCVA所测量。

在一些实施方案中，在将阿西替尼施用至受试者的眼睛之后，受试者在施用本文提供的药物之后的任何给定时间点经历视网膜厚度相对于基线的减小(例如，治疗前的视网膜厚度诸如中心子域厚度(CST))，例如，减小至少约20μm、或至少约40μm、或至少约50μm、或至少约100μm、或至少约150μm或至少约200μm、或约50-100μm，以及其间的所有值。在另一个实施方案中，患者在施用阿西替尼后经历视网膜厚度(例如CST)的≥5％、≥10％、≥15％、≥20％、≥25％的减小。在一个实施方案中，例如通过谱域光学相干断层扫描(SD-OCT)测量视网膜厚度相对于基线的变化作为CST的变化。在实施方案中，受试者在施用阿西替尼制剂后2个月、3个月、4个月、5个月、6个月或更长的时间经历视网膜厚度减小。在实施方案中，受试者在施用阿西替尼制剂后2个月、3个月、4个月、5个月、6个月或更长的时间没有经历视网膜厚度增加。

在一些实施方案中，阿西替尼是形式IX阿西替尼。在一些实施方案中，阿西替尼在制剂中的存在量为约0.5mg/mL至约100mg/mL，例如约1mg/mL至约10mg/mL或约20mg/mL至约80mg/mL。在实施方案中，阿西替尼在制剂中的存在量为约1mg/mL或约40mg/mL。在一些实施方案中，本公开提供了包含阿西替尼和聚山梨酯80的制剂。在其他实施方案中，本公开提供了包含羧甲基纤维素钠、聚山梨酯80、氯化钠和磷酸钠的制剂。在其他实施方案中，制剂包含w/v为约0.025％至约0.2％的聚山梨酯80。在一些实施方案中，聚山梨酯80以约0.05％至约0.1％的量存在于制剂中。在一些实施方案中，聚山梨酯80以约0.05％或约0.1％的量存在于制剂中。在一些实施方案中，制剂包含约0.04％w/v至约0.07％w/v磷酸钠(磷酸二氢钠一水合物)。在其他实施方案中，制剂包含约0.059％w/v磷酸钠(磷酸二氢钠一水合物)。在一些实施方案中，制剂包含约0.05％w/v至约0.09％w/v的磷酸钠(无水磷酸氢二钠)。在一些实施方案中，制剂包含约0.079％w/v的磷酸钠(无水磷酸氢二钠)。在一些实施方案中，制剂包含约0.5％w/v至约1.0％w/v氯化钠。在其他实施方案中，制剂包含约0.7％w/v至约0.9％w/v氯化钠。在一些实施方案中，制剂包含约0.79％w/v氯化钠。在一些实施方案中，制剂包含约0.25％w/v至约0.75％w/v羧甲基纤维素钠。在其他实施方案中，制剂包含约0.3％w/v至约0.7％w/v羧甲基纤维素钠。在一些实施方案中，制剂包含约0.5％w/v羧甲基纤维素钠。在一些实施方案中，阿西替尼制剂包含含有阿西替尼的微粒。在一些实施方案中，对于D₉₀分布，微粒的尺寸为约1-20微米。在一些实施方案中，对于D₅₀分布，微粒的尺寸为约1-10微米。在一些实施方案中，对于D₁₀分布，微粒的尺寸为约1-4微米。在一些实施方案中，对于D₉₀分布，微粒的尺寸为约3-5微米。在一些实施方案中，对于D₉₀分布，微粒的尺寸为约3微米。在一些实施方案中，对于D₉₀分布，微粒的尺寸为约10微米。在一些实施方案中，CLS-AX的临床制剂包含对于D₉₀分布的尺寸为约10微米的阿西替尼微粒。在一些实施方案中，CLS-AX的临床制剂包含对于D₁₀分布的尺寸为约2微米的阿西替尼微粒。在一些实施方案中，CLS-AX的临床制剂包含对于D₅₀分布的尺寸为约5微米的阿西替尼微粒。在一些实施方案中，CLS-AX的临床制剂包含对于D₉₀分布为约10微米的阿西替尼微粒。

附图说明

图1A和图1B示出了在将CLS-AX脉络膜上注射到雄性荷兰束带兔的眼睛中之后，在所示组织中的平均(±SD)CLS-AX浓度。图1A示出了在直至第91天的指定时间点，巩膜/脉络膜/RPE(上图)中的药物残留(mg)和视网膜和玻璃体中的药物浓度(nM)(下图)。图1B示出了在玻璃体液、巩膜/脉络膜/RPE或视网膜中较低(0.03mg/眼)或较高(0.1mg/眼)剂量下阿西替尼的浓度(ng/g或ng/mL)。

图2A示出了大鼠中激光CNV模型的荧光素血管造影术(FA)分级量表。图2B示出了第21天对照动物与CLS-AX受体动物的IV级损伤百分比*，Fischer精确p值＝0.0002。

图3A和图3B示出了猪CNV模型中血管渗漏研究的结果。图3A是示出激光治疗诱导视网膜损伤后7天或14天的血管渗漏面积的柱状图。OS＝左眼；OD＝右眼；BSS＝平衡盐溶液；SCS＝脉络膜上腔。OS-BSS治疗在两个时间点均显示为左边的柱，OD-CLS-AX治疗在两个时间点显示为右边的柱。图3B提供了来自BSS治疗的眼睛和CLS-AX治疗的眼睛的代表性图像。

图4A和图4B示出了视网膜平片上的凝集素IB4的平均值(±SEM)。图4A提供了代表性图像。比例尺＝100μm。图4B示出了凝集素IB4信号的平均值±SEM。CLS-AX组的信号显著低于BSS治疗组(p＝0.0297；t检验[27个部位测量的OS；354个部位测量的OD])。

具体实施方式

本公开总体涉及眼科疗法，并且更具体地涉及允许将流体药物制剂输注到眼后部组织中以用于靶向局部治疗的方法和装置，例如，用于治疗与新生血管相关的眼部疾病和病症。例如，这些疾病和病症包括新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD；本文也称为湿性AMD)、非渗出性AMD、脉络膜新生血管(CNV)、视网膜静脉阻塞(RVO)、与RVO相关的nAMD、与CNV相关的nAMD、视网膜病、糖尿病性视网膜病和糖尿病性黄斑水肿(DME)。

在一些实施方案中，所述制剂包含一种或多种酪氨酸激酶抑制剂，并且通过非外科手段例如通过空心微针和/或包括空心针的注射装置施用至眼睛的脉络膜上腔(SCS)，其中该针具有约500至约2000微米的有效长度。本文提供的方法和制剂允许有效的后段药物递送，并且通常体现以下特征：(1)这些方法是非外科的，并且因此是微创且安全的；(2)药物制剂的施用方式使得它们能很好地靶向眼睛的后段和/或眼睛的脉络膜上腔(SCS)和/或眼睛的睫状体上腔和/或眼睛的视网膜上腔和/或眼睛的视网膜下腔，同时限制药物暴露于眼前的前段或眼睛的其他区域；(3)这些方法和制剂能够以持续和/或受控的方式递送药物；(4)这些方法和装置很人性化。本文所述的非外科SCS递送方法和用于SCS递送的药物制剂实现了这些所需特性。

阿西替尼是一种酪氨酸激酶抑制剂(TKI)，可拮抗血管内皮生长因子受体VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3，以及血小板衍生生长因子受体(PDGFR)和c-Kit受体。阿西替尼最初于2012年被批准为口服片剂制剂

剂量为5mg，每日两次，用于治疗先前全身治疗失败后的晚期肾细胞癌。本文提供了适合递送至眼睛的阿西替尼制剂。在一些实施方案中，本文提供的适合递送至眼睛的阿西替尼制剂是“CLS-AX”。表1A和表1B中提供了示例性CLS-AX制剂。

术语“脉络膜上腔”在本文中与脉络膜上、SCS、脉络膜上层、脉络膜周隙可互换使用；并描述了位于巩膜与脉络膜之间的眼睛区域中的潜在空间。该区域主要由来自两个相邻组织中的每一个的长着色过程的紧密堆积层组成；然而，由于脉络膜上腔和相邻组织中的流体或其他物质积聚，该区域可能形成一个空间。本领域技术人员将理解，脉络膜上腔经常由于眼睛中的某些疾病状态或由于某些外伤或外科干预而因流体积聚而扩大。然而，在本说明书中，在一些实施方案中，通过将药物制剂输注到脉络膜上层以产生脉络膜上腔(其充满药物制剂)来有意地产生流体积聚。不希望受理论束缚，据信SCS区域用作葡萄膜巩膜外流的路径(即，眼睛将流体从眼睛的一个区域移动到另一个区域的自然过程)并在脉络膜与巩膜脱离的情况下变成一个真实空间。

如本文所用，“非外科”眼部药物输送装置和方法是指不需要全身麻醉和/或眼球后麻醉(也称为眼球后阻滞)的用于药物递送的方法和装置。替代地或附加地，“非外科”眼部药物递送方法使用具有有效长度小于2000微米的针的器械进行；和/或具有直径为28号或更小的针的器械。替代地或附加地，“非外科”眼部药物递送方法不需要经由分流器或套管的眼部药物递送通常所需的引导机构。本文提供的非外科眼部药物递送方法可用于诊所或门诊环境，并且不需要医院环境。如本文所用，“外科”眼部药物递送包括通过外科手段插入装置或施用药物，例如，经由切口以暴露并提供进入眼睛的区域(包括后部区域)，和/或经由插入支架、分流器或套管和/或经由需要麻醉的方法(例如，全身麻醉或眼球后麻醉)。

本文所述的外科和非外科眼后部疾病治疗方法和装置尤其可用于将药物局部递送至眼睛的后部区域，例如眼睛的后段中的视网膜脉络膜组织、黄斑、视网膜色素上皮(RPE)和视神经。在一个实施方案中，本文提供的非外科方法可用于将药物递送靶向特定的眼后部组织或眼内或邻近组织中的区域。在一个实施方案中，本文所述的方法将药物特异性地递送至需要治疗的人类受试者的眼睛中的巩膜、脉络膜、布鲁赫膜、视网膜色素上皮、视网膜下腔、视网膜、黄斑、视盘、视神经、睫状体、小梁网、房水、玻璃体液和/或其他眼部组织或邻近组织。在一个实施方案中，本文提供的方法可用于将药物递送靶向特定的眼后部组织或眼内或邻近组织中的区域。

如通篇所提供的，在一个实施方案中，本文所述的方法使用穿刺构件进行，该穿刺构件可包括空心或实心微针，例如刚性微针。如本文所用，术语“微针”是指具有适于插入巩膜和其他眼部组织中的基部、轴和尖端并且具有适于如本文所述的微创插入和药物制剂输注的尺寸的导管主体。微针的“长度”和“有效长度”包括微针的轴的长度和微针的斜面高度。在一些实施方案中，本文使用的针是微针，因为它们具有小于2000微米的有效长度。例如，在一些实施方案中，用于本文所述方法的针是微针，因为它们具有约50微米至约2000微米、或约500微米至约1800微米、或约700微米至约1500微米、或约900微米至约1200微米的有效长度。在一些实施方案中，用于本文所述方法的针是微针，因为它们具有约800微米、约900微米、约1000微米、约1100微米或约1200微米的有效长度。在一些实施方案中，用于实施本文所述方法的装置包括2017年1月10日发布的美国专利号9,539,139或2014年5月2日提交的标题为“Apparatus and Method for Ocular Injection”的国际专利申请公开号WO2014/179698(申请号PCT/US2014/036590)中公开的装置之一，出于所有目的将其各自以引用方式全文并入本文。在一些实施方案中，用于实施本文所述方法的装置包括2013年8月27日提交的标题为“Apparatus and Method for Drug Delivery Using Microneedles”的国际专利申请公开号WO2014/036009(申请号PCT/US2013/056863)中公开的装置之一，出于所有目的将其以引用方式全文并入本文。在一些实施方案中，微针是如本文所述的SCS微注射器。

如本文所用，术语“空心”包括穿过微针中心的单个直孔，以及多个孔、沿着复杂路径穿过微针的孔、来自孔的多个入口和出口点，以及孔的交叉或网络。也就是说，空心微针具有包括一个或多个从微针的基部到微针的轴和/或尖端部分中远离基部的出口点(开口)的连续路径的结构。

在一个实施方案中，微针装置包括用于容纳例如作为溶液或悬浮液的治疗制剂(例如，药物或细胞制剂)的流体贮存器和在远离微针尖端的位置处与微针的孔可操作地连通的药物贮存器(其可以包括任何治疗制剂)。流体贮存器可以与微针成一体、与细长主体成一体或与微针和细长主体两者分开。

在一些实施方案中，装置、制剂和方法的特征提供于美国专利号9,636,332、美国专利申请公开号2018-0042765、国际专利申请公开号WO2014/074823(申请号PCT/US2013/069156)、WO2015/195842(申请号PCT/US2015/036299)、美国专利公开号2019-0269702、WO2017/120600(申请号PCT/US2017/012755)和/或WO2017/120601(申请号PCT/US2017/012757)中，出于所有目的将其各自以引用方式全文并入本文。

在一个实施方案中，用于执行本文所述方法之一的装置包括描述于2014年10月14日提交的标题为“Medical Injector for Ocular Injection”的美国外观设计专利申请序列号29/506,275中的装置，出于所有目的将其公开内容以引用方式全文并入本文。在一个实施方案中，用于执行本文所述方法之一的装置包括描述于美国专利公开号2015/0051581或美国专利公开号2017/0095339中，出于所有目的将其各自以引用方式全文并入本文。在一些实施方案中，这样的装置是如本文所述的SCS微注射器。

如本文所用，术语“约”和“大约”通常是指所述值的正负10％。例如，约0.5将包括0.45和0.55，约10将包括9至11，约1000将包括900至1100。

本文提供的微针和/或微注射器的可能的制造技术的更多细节描述于例如2014年5月2日提交的美国专利申请公开号2006/0086689、美国专利申请公开号2006/0084942、美国专利申请公开号2005/0209565、美国专利申请公开号2002/0082543、美国专利号6,334,856、美国专利号6,611,707、美国专利号6,743,211和PCT/US2014/36590中，出于所有目的将所有这些文献以引用方式全文并入本文。

本文所述的任何方法都可以使用本文所示和所述类型的任何合适的注射器来执行。在一些实施方案中，根据本文所述的方法，药物剂量具有至少约20μL、至少约50uL、至少约100μL、至少约200μL或至少约500μL的递送体积。在一个实施方案中，从本文所述的装置递送至脉络膜上腔中的治疗制剂的量为约10μL至约200μL，例如约50μL至约150μL。在另一个实施方案中，将约10μL至约500μL，例如约50μL至约250μL，以非外科方式施用至脉络膜上腔。在一些实施方案中，将约100μL的药物制剂以非外科方式施用至脉络膜上腔。在一些实施方案中，药物制剂包含100μL的阿西替尼制剂，例如CLS-AX。

与先前已知的针装置相比，本文提供的SCS药物递送方法允许在较大的组织面积上递送药物制剂并且更难以在单次施用中靶向组织。不希望受理论束缚，据信在进入SCS时，药物制剂从插入部位周向流向眼后段中的视网膜脉络膜组织、黄斑和视神经，并向前流向葡萄膜和睫状体。此外，输注的药物制剂的一部分可以作为贮库保留在SCS中，或者保留在覆盖SCS的组织中，例如微针插入部位附近的巩膜中，用作随后可以扩散到SCS中和其他相邻的后部组织中的药物制剂的附加贮库。

术语“受试者”在本文中可与术语“患者”互换使用。受试者可以是任何哺乳动物。优选地，受试者是人类受试者。用本文提供的方法和装置治疗的人类受试者可以是成人或儿童。在一个实施方案中，受试者呈现出大于300μm的视网膜厚度(例如，如通过光学相干断层扫描测量的中心子场厚度)。在另一个实施方案中，需要治疗的受试者的BCVA评分为每只眼睛阅读≥20个字母(例如，20/400斯内伦近似)。在又一个实施方案中，需要治疗的受试者的BCVA评分为每只眼睛阅读≥20个字母(例如，20/400斯内伦近似)，但需要治疗的眼睛阅读≤70个字母。

在一个实施方案中，治疗反应通过治疗后一和/或两个月时的视力测量(例如，通过测量最佳矫正视力(BCVA)相对于基线(即，治疗前)的平均变化)来评估。在一个实施方案中，与施用阿西替尼前患者的BCVA相比，通过本文提供的一种或多种方法治疗的患者在任何给定时间点(例如，施用后2周、施用后4周、施用后2个月、施用后3个月)经历相对于基线至少2个字母、至少3个字母、至少5个字母、至少8个字母、至少12个字母、至少13个字母、至少15个字母、至少20个字母以及介于其间的所有值的BCVA的改善。

在一个实施方案中，与接受治疗前患者的BCVA测量相比，患者在施用阿西替尼后的BCVA测量中增加约5个字母或更多、约10个字母或更多、15个字母或更多、约20个字母或更多、约25个字母或更多。在又一个实施方案中，与用阿西替尼治疗前患者的BCVA测量相比，患者在BCVA测量中增加约5至约30个字母、10至约30个字母、约15个字母至约25个字母或约15个字母至约20个字母。在一个实施方案中，BCVA增加是在施用阿西替尼后约2周、约1个月、约2个月、约3个月或约6个月。在另一个实施方案中，在施用阿西替尼后至少约2周、至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月或至少约6个月测量BCVA。

在一个实施方案中，BCVA基于糖尿病性视网膜病研究早期治疗(ETDRS)视力表并在4米的起始距离处进行评估。

在另一个实施方案中，与接受治疗前患者的BCVA测量相比，接受治疗方法的患者例如使用本文提供的装置之一在治疗后基本上保持他或她的视力(例如，单次施用或多次施用阿西替尼至眼睛的脉络膜上腔)，如通过在最佳矫正视力(BCVA)测量中丧失少于15个字母所测量。在另一个实施方案中，与接受治疗前患者的BCVA测量相比，患者在BCVA测量中丧失少于10个字母、少于8个字母、少于6个字母、少于5个字母或少于2个字母。在一些实施方案中，患者在用阿西替尼治疗后没有经历进一步的视力丧失(例如，患者经历0个字母的丧失，如通过BCVA所测量)。在一些实施方案中，患者在治疗(例如，单次施用或多次施用阿西替尼至眼睛的脉络膜上腔)后经历视力增加。例如，在一些实施方案中，患者经历至少2个、至少5个、至少10个、至少15个、至少20个或更多个字母的增加。在一些实施方案中，如本文所用的“极小视力丧失”意指丧失不超过1个字母、不超过2个字母、不超过3个字母、不超过4个字母、不超过5个字母、不超过6个字母、不超过7个字母、不超过8个字母、不超过9个字母、不超过10个字母、不超过12个字母或不超过15个字母。在一些实施方案中，相对于治疗前患者的基线视力，患者在2、6、12、18或24个月内经历极小视力丧失。在一些实施方案中，相对于治疗前患者的基线视力，患者在2、6、12、18或24个月内经历视力增加。

视网膜厚度和/或黄斑厚度的减小是本文提供的方法的治疗功效的一种量度。例如，在一个实施方案中，患有通过本文提供的方法之一治疗的nAMD的患者(例如，向眼睛的脉络膜上腔施用药物(例如，阿西替尼))经历视网膜厚度相对于基线的减小。例如，在一个实施方案中，患者在施用药物后的任何给定时间点经历中心子域厚度(CST)的减小，例如减小至少约20μm、或至少约40μm、或至少约50μm、或至少约100μm、或至少约150μm或至少约200μm、或约50-100μm，以及其间的所有值。在另一个实施方案中，患者在施用药物后经历视网膜厚度(例如CST)的≥5％、≥10％、≥15％、≥20％、≥25％的减小。在一些实施方案中，相对于治疗前患者的基线CST，患者经历CST减小至少2、6、12、18或24个月。

在一个实施方案中，通过本文提供的方法治疗的患者在任何给定时间点经历视网膜厚度从基线(即治疗前的视网膜厚度)降低约20μm至约200μm，约40μm至约200μm，约50μm至约200μm，约100μm至约200μm或约150μm至约200μm。在一个实施方案中，例如通过谱域光学相干断层扫描(SD-OCT)测量视网膜厚度相对于基线的变化作为CST的变化。

在一个实施方案中，在施用药物后约2周、约1个月、约2个月、约3个月、约6个月、约12个月、约18个月或约24个月测量视网膜厚度减小。在另一个实施方案中，在施用药物后至少约2周、至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约6个月、至少约12个月、至少约18个月或至少约24个月测量视网膜厚度减小。在一个实施方案中，在采用多次给药疗程的情况下，患者在每次药物施用后视网膜厚度减小维持至少约2周、至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月或至少约6个月。

眼内眼部损伤的频率和/或严重程度的降低也是本文提供的方法的治疗功效的一种量度。

在一个实施方案中，足以在用非外科SCS药物递送方法治疗的人类受试者中实现治疗反应的脉络膜上药物剂量小于足以引起相同或基本相同治疗反应的玻璃体内、胃肠外、前房内、局部或口服药物剂量。在另一个实施方案中，脉络膜上药物剂量比足以达到相同或基本相同治疗反应的口服、胃肠外或玻璃体内剂量少至少10％。在另一个实施方案中，脉络膜上剂量比足以实现相同或基本相同治疗反应的口服、胃肠外、前房内、局部或玻璃体内剂量少约10％至约25％、或少约10％至约50％。

在一些实施方案中，根据本文所述的方法的阿西替尼的非外科施用减少了向受试者施用VEGF调节剂的次数和/或频率。因此，在一些实施方案中，阿西替尼的施用增加了VEGF调节剂治疗的有效性和/或持久性。例如，在一些实施方案中，阿西替尼的SCS施用导致需要更少地施用VEGF调节剂，和/或导致施用VEGF调节剂之间的时间段更长。

在一些实施方案中，根据本文所述的方法的阿西替尼的非外科施用导致在阿西替尼的初始剂量后，受试者的BCVA改善和/或CST改善维持至少12周、至少16周、至少20周、至少24周、至少30周、至少36周、至少40周、至少44周、至少48周或更长。在一些实施方案中，根据本文所述的方法的阿西替尼的非外科施用导致在阿西替尼的第二剂量后，受试者的BCVA改善和/或CST改善维持至少12周、至少16周、至少20周、至少24周、至少30周、至少36周、至少40周、至少44周、至少48周、至少52周或更长。

在一个实施方案中，与通过玻璃体内、前房内、口服或胃肠外施用相同药物剂量所引起的副作用或临床表现的数量相比，根据本文提供的方法将阿西替尼非外科施用至眼睛导致所治疗患者的有害副作用或临床表现的数量减少；或与先前用于治疗疾病的药物的施用所引起的那些相比，导致所治疗患者的有害副作用或临床表现的数量减少。

可以减轻或改善的副作用和临床表现的示例包括但不限于炎症、胃肠副作用(例如腹泻、恶心、胃肠炎、呕吐、胃肠出血、直肠出血和十二指肠出血、出血性胰腺炎、大肠穿孔黑便或血便和/或咳血)；血液学副作用(例如白细胞减少症、贫血、全血细胞减少症和粒细胞缺乏症、血小板减少症、中性粒细胞减少症、纯红细胞再生障碍(PRCA)、深静脉血栓形成、易瘀伤和/或鼻、口、阴道或直肠的异常出血)；免疫副作用/临床表现(例如免疫抑制、免疫抑制导致败血症、机会性感染(单纯疱疹病毒、带状疱疹和侵入性念珠菌感染)和/或感染增加)；肿瘤副作用/临床表现(例如淋巴瘤、淋巴增生性疾病和/或非黑素瘤皮肤癌)；肾脏副作用/临床表现(例如排尿困难、尿急、尿路感染、血尿、肾小管坏死和/或BK病毒相关肾病)；代谢副作用/临床表现(例如水肿、高磷血症、低钾血症、高血糖症、高钾血症、肿胀、快速体重增加和/或甲状腺肿大)；呼吸副作用/临床表现(例如、呼吸道感染、呼吸困难、咳嗽加重、原发性肺结核干咳、喘息和/或鼻塞)；皮肤副作用/临床表现(例如痤疮、皮疹、多汗性湿疹、丘疹鳞屑性银屑病样皮疹、水疱、渗血、口腔溃疡和/或脱发)；肌肉骨骼副作用/临床表现(例如肌病和/或肌肉疼痛)、肝副作用/临床表现(例如肝毒性和/或黄疸)、腹痛、妊娠早期流产的发生率增加、月经推迟、严重头痛、精神混乱、精神状态改变、视力丧失、癫痫发作(抽搐)、对光敏感性增加、干眼症、红眼症、眼睛发痒和/或高血压。

如全文所提供的，在一个实施方案中，本文施用的组合物，本文所述的方法包括施用酪氨酸激酶抑制剂。用于本文所述方法中的示例性酪氨酸激酶包括但不限于阿来替尼

血管激酶抑制剂诸如尼达尼布

阿法替尼

和莫特塞尼；阿帕替尼；阿昔替尼；卡博替尼

卡拉替尼；克雷诺拉尼；单宁卡；福瑞替尼；福他替尼；生长因子受体抑制剂；依鲁替尼

埃克替尼；伊马替尼

利尼替尼；穆布替尼；拉多替尼；T790M；V600E；瓦塔拉尼布；维莫非尼

AEE788(TKI，VEGFR-2、EGFR：Novartis)；ZD6474(TKI，VEGFR-1、-2、-3、EGFR：凡德他尼：AstraZeneca)；AZD2171(TKI，VEGFR-1、-2：AstraZeneca)；SU 11248(TKI，VEGFR-1、-2、PDGFR：舒尼替尼：Pfizer)；AG13925(TKI，VEGFR-1、-2：Pfizer)；AG013736(TKI，VEGFR-1、-2：Pfizer)；CEP-7055(TKI，VEGFR-1、-2、-3：Cephalon)；CP-547,632(TKI，VEGFR-1、-2：Pfizer)；GW7S6024(TKL，VEGFR-1、-2、-3：GlaxoSmithKline)；GW786034(TKI，VEGFR-1、-2、-3：GlaxoSmithKline)；索拉非尼(TKI，Bay 43-9006，VEGFR-1、-2、PDGFR：Bayer/Onyx)；SU4312(TKI，VEGFR-2，PDGFR：Pfizer)；AMG706(TKI，VEGFR-1、-2、-3：Amgen)；XL647(TKI，EGFR，HER2，VEGFR，ErbB4：Exelixis)；XL999(TKI，FGFR，VEGFR，PDGFR，FII-3：Exelixis)；PKC412(TKI，KIT，PDGFR，PKC，FLT3，VEGFR-2：Novartis)；AEE788(TKI，EGFR，VEGFR2，VEGFR-1：Novartis)：OSI-030(TKI，c-kil，VEGFR：OSI Pharmaceuticals)；OS1-817(TKI c-kit，VEGFR：OSI Pharmaceuticals)；DMPQ(TKI，ERGF，PDGFR，ErbB2.p56.pkA，pkC)；MLN518(TKI，Flt3，PDGFR，c-KIT(T53518：Millennium Pharmaceuticals)；lestaurinib(TKI，FLT3，CEP-701，Cephalon)；ZD 1839(TKI，EGFR：吉非替尼，Iressa：AstraZcneca)；OSI-774(TKI，EGFR：埃罗替尼：Tarceva：OSI Pharmaceuticals)；拉帕替尼(TKI，ErbB-2，EGFR和GD-2016：Tykerb：GlaxoSmithKline)。

阿西替尼是血管内皮生长因子受体VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3的有效酪氨酸激酶抑制剂。这些受体涉及病理性血管生成、肿瘤生长和癌症的转移进展。阿西替尼已被证明在皮摩尔浓度下有效且选择性地抑制VEGF介导的信号传导和内皮细胞增殖和存活。阿西替尼还在低纳摩尔浓度下抑制其他RTK，包括PDGFR-α、PDGFR-β和c-Kit。阿西替尼、N-葡糖苷酸(M7)和亚砜(M12)的最常见代谢物对VEGFR-2的效力低≥-400倍。

“CLS-AX”在本文中用于描述包含阿西替尼的制剂。示例性制剂提供于表1A和表1B以及整个公开内容中。

在一个实施方案中，酪氨酸激酶抑制剂(例如，阿西替尼)可以与本文列出的一种或多种药剂或与本领域已知的其他药剂组合以单一或多种制剂使用。在一个实施方案中，该药剂是VEGF调节剂，并且玻璃体内施用于需要治疗的患者。在一个实施方案中，VEGF调节剂是VEGF拮抗剂。在一个实施方案中，第二药物是VEGF拮抗剂，包括但不限于VEGF受体激酶拮抗剂、抗VEGF抗体或其片段、抗VEGF受体抗体、抗VEGF适体、小分子VEGF拮抗剂、噻唑烷二酮、喹啉或设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)。在一个实施方案中，VEGF拮抗剂包括但不限于阿柏西普、ziv-阿柏西普、贝伐单抗、松匹珠单抗、VEGF粘阱(sticky trap)、卡博替尼、福瑞替尼、凡德他尼、尼达尼布、瑞戈非尼、西地拉尼、雷珠单抗、拉帕替尼、舒尼替尼、索拉非尼、普利辛、瑞格非尼、维替泊芬、布西拉明、阿西替尼、帕唑帕尼、氟轻松、尼达尼布、AL8326、2C3抗体、AT001抗体、XtendVEGF抗体、HuMax-VEGF抗体、R3抗体、AT001/r84抗体、HyBEV、ANG3070、APX003抗体、APX004抗体、普纳替尼(ponatinib)、BDM-E、VGX100抗体、VGX200、VGX300、COSMIX、DLX903/1008抗体、ENMD2076、INDUS815C、R84抗体、KD019、NM3、MGCD265、MG516、MP0260、NT503、抗DLL4/VEGF双特异性抗体、PAN90806、Palomid 529、BD0801抗体、XV615、卢西他尼、二磷酸莫特沙尼、AAV2-sFLT01、可溶性Flt1受体、AV-951、伏拉塞替(Volasertib)、CEP11981、KH903、乐伐替尼、甲磺酸乐伐替尼、特美普罗科(terameprocol)、PF00337210、PRS050、SP01、羧基氨基三唑乳清酸盐、羟氯喹、利尼伐尼、ALG1001、AGN150998、MP0112、AMG386、普纳替尼、PD173074、AVA101、BMS690514、KH902、戈伐替尼(E7050)、多维替尼、乳酸多维替尼(TKI258、CHIR258)、ORA101、ORA102、阿昔替尼(Inlyta、AG013736)、PTC299、哌加他尼钠、肌钙蛋白、EG3306、伐他拉尼、Bmab100、GSK2136773、抗VEGFR交替酶、阿维拉、CEP7055、CLT009、ESBA903、GW654652、HMPL010、GEM220、HYB676、JNJ17029259、TAK593、Nova21012、Nova21013、CP564959、smart抗VEGF抗体、AG028262、AG13958、CVX241、SU14813、PRS055、PG501、PG545、PTI101、TG100948、ICS283、XL647、恩扎司他林盐酸盐、BC194、COT601M06.1、COT604M06.2、MabionVEGF、阿帕替尼、RAF265(CHIR-265)、二磷酸莫替沙尼(AMG-706)、乐伐替尼(E7080)、TSU-68(SU6668、奥兰替尼(Orantinib))、布立尼布(BMS-540215)、MGCD-265、AEE788(NVP-AEE788)、ENMD-2076、OSI-930、CYC116、Ki8751、替拉替尼、KRN 633、SAR131675、多韦替尼(TKI-258)二乳酸、阿帕替尼、BMS-794833、丙氨酸布立尼布(BMS-582664)、戈伐替尼(E7050)、司马沙尼(SU5416)、ZM323881HCl、苹果酸卡博替尼(XL184)、ZM 306416、AL3818、AL8326、2C3抗体、AT001抗体、HyBEV、贝伐单抗

ANG3070、APX003抗体、APX004抗体、帕纳替尼(AP24534)、BDM-E、VGX100抗体(VGX100 CIRCADIAN)、VGX200(c-fos诱导生长因子单克隆抗体)、VGX300、COSMIX、DLX903/1008抗体、ENMD2076、苹果酸舒尼替尼

INDUS815C、R84抗体、KD019、NM3、与抗VEGF拮抗剂(例如，抗VEGF抗体)组合的同种异体间充质前体细胞、MGCD265、MG516、VEGF受体激酶抑制剂、MP0260、NT503、抗DLL4/VEGF双特异性抗体、PAN90806、Palomid 529、BD0801抗体、XV615、卢西他尼(AL3810、E3810)、AMG706(二磷酸莫替沙尼)、AAV2-sFLT01、可溶性Flt1受体、西地尼布(Recentin^TM)、AV-951、替沃扎尼(KRN-951)、瑞格拉非尼

伏拉塞替(BI6727)、CEP11981、KH903、乐伐替尼(E7080)、甲磺酸乐伐替尼、特美丙醇(EM1421)、雷珠单抗

盐酸帕唑帕尼(Votrient^TM)、PF00337210、PRS050、SP01(姜黄素)、羧基氨基三唑乳清酸盐、羟化氯喹、利尼伐尼(ABT869、RG3635)、氟轻松

ALG1001、AGN150998、DARPin MP0112、AMG386、帕纳替尼(AP24534)、AVA101、尼达尼布(Vargatef^TM)、BMS690514、KH902、戈伐替尼(E7050)、依维莫司

多韦替尼乳酸盐(TKI258、CHIR258)、ORA101、ORA102、阿西替尼(

AG013736)、普利肽(plitidepsin)

PTC299、阿柏西普

哌加他尼钠(Macugen^TM、LI900015)、维替泊芬

布西拉明(Rimatil、Lamin、Brimani、Lamit、Boomiq)、R3抗体、AT001/r84抗体、肌钙蛋白(BLS0597)、EG3306、瓦他拉尼(PTK787)、Bmab100、GSK2136773、抗VEGFR Alterase、阿维拉、CEP7055、CLT009、ESBA903、HuMax-VEGF抗体、GW654652、HMPL010、GEM220、HYB676、JNJ17029259、TAK593、XtendVEGF抗体、Nova21012、Nova21013、CP564959、Smart抗VEGF抗体、AG028262、AG13958、CVX241、SU14813、PRS055、PG501、PG545、PTI101、TG100948、ICS283、XL647、恩扎司他林盐酸盐(LY317615)、BC194、喹啉、COT601M06.1、COT604M06.2、MabionVEGF、与抗VEGF或VEGF-R抗体偶联的SIR-Spheres、阿帕替尼(YN968D1)或AL3818。

在实施方案中，本文提供的组合物和方法用于治疗眼部疾病和病症。示例性眼部疾病和病症包括但不限于湿性AMD、非渗出性AMD、CNV、RVO(包括中央RVO、半-RVO、分支RVO)、视网膜病、糖尿病性视网膜病和糖尿病性黄斑水肿(DME)。在实施方案中，疾病或病症是黄斑水肿(ME)。ME可能与中央RVO、半侧RVO、分支RVO、炎症、葡萄膜炎或CNV相关和/或由其引起。在实施方案中，疾病或病症是地图状萎缩，例如来自AMD、退行性视网膜病症或遗传性视网膜病症。在实施方案中，疾病或病症是视网膜新生血管。例如，在实施方案中，视网膜新生血管可由缺血原因导致，例如糖尿病性视网膜病、中央RVO、半视网膜RVO、分支RVO、中央视网膜动脉阻塞、分支视网膜动脉阻塞、镰状细胞性视网膜病或早熟性视网膜病。在实施方案中，视网膜新生血管可导致炎症和葡萄膜炎疾病。

脉络膜新生血管可能发生的具体病症包括湿性AMD、血管样条纹、前部缺血性视神经病、细菌性心内膜炎、Best病、鸟枪弹性视网膜病变、脉络膜血管瘤、脉络膜痣、脉络膜非灌注、脉络膜骨瘤、脉络膜破裂、脉络膜皮肤病、慢性视网膜微感、视网膜缺损、糖尿病、玻璃疣、内源性念珠菌眼内炎、视网膜色素上皮的乳头外血肿、眼底黄色增生、特发性病症、黄斑裂孔、恶性黑色素瘤、膜性肾小球肾炎(II型)、金属眼内异物、早晨-灰纹盘综合征、色素性视网膜炎、视网膜脉络膜缺损、风疹、结节病、浆液性或地图样脉络膜炎、视网膜下积液、倾斜盘综合征、弓形视网膜脉络膜炎、结核病、福格特-小柳-原田综合征(Vogt-Koyanagi-Harada syndrome)、特发性息肉血管狭窄、眼部缺血综合征和血管狭窄。

实施例

通过参考以下实施例进一步说明本发明。然而，应当注意的是，这些实施例与上述实施方案类似，是例示性的，并且不应解释为以任何方式限制本发明的范围。

实施例1.阿西替尼制剂

表示为CLS-AX的一种示例性阿西替尼制剂包含以下组分。

表1A.示例性阿西替尼制剂

成分	CLS-AX(％w/v或如上所述)
		阿西替尼	40mg/mL
羧甲基纤维素钠(NaCMC)	0.5％
		聚山梨酯80(PS-80)	0.1％
氯化钠	0.79％
		磷酸二氢钠一水合物	0.059％
无水磷酸氢二钠	0.079％
		注射用水	适量
氢氧化钠/盐酸	调节pH至6.8

一种示例性阿西替尼制剂(在下表中也表示为CLS-AX)是1mg/mL制剂并且包含以下组分。

表1B.示例性阿西替尼制剂

在示例性阿西替尼制剂中，阿西替尼以1mg/mL或10mg/mL的浓度存在。此外，在一些示例性阿西替尼制剂中，聚山梨酯80以约0.04％w/v至约0.05％w/v存在于制剂中。此外，在一些示例性实施方案中，氯化钠以0.8％的浓度存在，和/或磷酸钠(磷酸二氢钠一水合物)以0.05％w/v存在；和/或磷酸钠(无水磷酸氢二钠)以0.085％w/v存在。因此，聚山梨酯80的浓度可在约0.04％w/v至约0.1％w/v的范围内，氯化钠的浓度可在约0.7％w/v至约0.9％w/v的范围内，磷酸钠(磷酸二氢钠一水合物)的浓度可在约0.05％至约0.06％w/v的范围内，并且磷酸钠(无水磷酸氢二钠)的浓度可在约0.075％w/v至约0.085％w/v的范围内。

在一些实施方案中，NaCMC或类似化合物作为粘度调节剂包含在制剂中。在一些实施方案中，聚山梨酯80(PS-80)或类似试剂作为活性药物成分阿西替尼的表面活性剂润湿剂包含在制剂中。在一些实施方案中，氯化钠作为张力调节剂包含在制剂中。在一些实施方案中，磷酸二氢钠一水合物和/或无水磷酸氢二钠作为pH缓冲剂包含在内。在一些实施方案中，氢氧化钠/盐酸作为pH调节剂包含在制剂中。在一些实施方案中，注射用水是制剂的溶剂。

在一些实施方案中，不存在防腐剂。在一些实施方案中，制剂通过高压灭菌器进行最终灭菌。

提供示例性CLS-AX组合物(活性药物成分(API)和药物产品)的溶解度、粒度、粘度和其他产品概况参数的更多信息在表1C中提供。

表1C.示例性产品概况

实施例2.脉络膜上施用于有色兔后CLS-AX的眼部分布

以下研究的目的是评估单次双侧脉络膜上微针注射CLS-AX至雄性有色荷兰束带兔后的药代动力学和眼部组织分布。在一项研究中，CLS-AX以4mg/眼(100μL/注射)的剂量施用。在单独的研究中，CLS-AX以0.1mg/眼或0.03mg/眼的剂量施用。动物的眼睛由经委员会认证的兽医眼科医师使用裂隙灯生物显微镜和间接检眼镜检查。检查发生在给药前和处死前的指定研究日(如适用)。在指定的日子里，对至少两只动物/时间点实施安乐死以收集血液(血浆)和眼部组织(房水、玻璃体液、视网膜和巩膜/脉络膜-RPE)。使用液相色谱/质谱分析血浆和眼组织的CLS-AX浓度。

对于初始研究，在给药前使动物适应研究条件16天。给药时，动物体重为1721-1941g，年龄为5个月。在适应和测试期间，所有动物都被圈养在单独悬挂的不锈钢笼子中。提供经认证的高纤维兔饮食#5325(PMI)。每天提供新鲜水，让它们随意饮用。在适应和测试期间，所有动物都被圈养在单独悬挂的不锈钢笼子中。将动物室的环境控制设定为维持16-22℃(偏差)的温度，50±20％(偏差)的相对湿度和12小时光照/12小时黑暗循环。必要时，中断12小时黑暗循环以适应研究程序。为每只动物分配一个临时标识号。在选择时，分配永久动物编号(偏差)。在动物选择之前，每只动物都使用单独编号的笼卡进行唯一识别，并在分配到研究时使用可植入的微芯片识别装置进行识别。在给药前，立即通过肌内(IM)注射氯胺酮、右美托咪定和格隆溴铵来麻醉动物。在施用局部麻醉剂后，用碘溶液冲洗眼睛，然后用盐水冲洗。在给药施用前不给动物禁食。

使用标准21号1英寸针头将给药制剂吸入1-mL鲁尔锁注射器；挤出任何气泡，用长度为700μm的30号微针代替标准针。根据研究特定的程序，由OSOD代表在大约5-10秒内向每只眼睛(距角膜缘3-4mm，在颞上象限中)给予100μL的单次脉络膜上注射。注射后，将针在眼睛中保持约20秒，然后拔出。在拔出微针后，将棉头涂药器(CTA，剂量擦拭巾)放置在注射部位上约10秒；丢弃剂量擦拭巾。由OSOD代表检查眼睛以确认注射的准确性。首先对右眼给药；所有给药后时间基于第二只(左)眼睛的给药时间。记录任何给药观察结果。

如适用，在镇静前和第一次氟尼辛施用后约24小时(每只动物0.08mL)给动物肌内(IM)注射氟尼辛(2mg/kg)。皮下(SQ)施用丁丙诺啡缓释剂(SR，0.2mg/kg)并在恢复时将温和的眼用软膏施用于每只眼睛。在研究第1天给药后一次和在研究第2天和第3天每天两次给予动物双眼的局部眼部新聚-bac软膏和阿托品软膏。

每天两次(上午和下午)，观察动物的死亡率以及疼痛和痛苦的迹象。每天观察一次笼内动物的总体健康状况和外观，特别注意眼睛。

如适用，在到达当天、在动物选择时、在给药施用当天以及在整个研究的剩余时间每周进行体重测量。

委员会认证的兽医眼科医师在给药前和研究第4、15、28和91天进行眼科检查。在每个时间点，使用裂隙灯生物显微镜检查每只眼睛的附件和前部，进行外部检查。此外，用散瞳剂扩张眼睛，并用间接检眼镜检查每只眼睛的眼底。

收集以下样品进行分析。

血液和血浆：在给药后24、72和168小时以及研究第15、29、61和91天，用过量戊巴比妥钠对两只动物/时间点实施安乐死，并通过心脏穿刺将血液(约5mL)收集到含有K₂EDTA的试管中。将样品保持在湿冰上直至离心以获得血浆。将所有血浆样品置于干冰上，然后在约-70℃下储存直至分析。弃去细胞级分。收集并丢弃另外的血液以促进眼部组织的收集。

眼部组织：在处死时，立即摘除双眼。收集房水，并将每只眼睛在液氮中快速冷冻15-20秒，然后置于干冰上至少2小时(偏差)。在大约一天内，收集房水、视网膜、巩膜/脉络膜(包括视网膜色素上皮)和玻璃体液组织。用盐水冲洗眼部组织并适当吸干，称重，并置于干冰上，直至在约-70℃下储存直至分析。弃去剩余尸体和剩余眼部组织。

使用液相色谱/质谱分析血浆和眼组织的CLS-AX浓度。

来自诸如天平的仪器的值报告为由每个仪器生成(或记录)。除非另有说明，否则平均值和标准偏差的计算值报告为三位有效数字。统计分析仅限于描述性统计数据，诸如平均值和标准偏差。由于数据是由计算机生成并经过适当四舍五入以包含在报告中，因此在某些情况下，使用报告值来计算后续参数将产生与表中所列参数的微小差异。用使用Excel版本14.0(Microsoft Corporation)计算的值编辑剂量表。如适用，对于各个动物，通过目视检查原始数据获得血浆、房水、视网膜、巩膜/脉络膜-RPE(SCR)和玻璃体液中的最大浓度(C_max)和达到最大浓度的时间(T_max)。计算的药代动力学参数包括半衰期(t_1/2)、从时间0到最后一个可测量时间点的浓度-时间曲线下面积(AUC_0-t)和从0到无穷大的浓度-时间曲线下面积(AUC_0-∞)。使用Phoenix Winnonlin版本6.2.1(Pharsight Corporation)计算药代动力学参数。

所有动物在整个适应过程中在临床上表现为健康的，并从适应中释放并批准用于研究。在研究期间，脉络膜上施用CLS-AX对体重没有有害影响。

在整个研究过程中发现了零星的低食物消耗情况。对于实验室环境中的物种，这些观察结果的不频繁发生被认为是正常的。

结果.在测试制品施用之前所有动物都没有眼科发现。在研究第91天以4mg/眼(100μL/注射)脉络膜上施用CLS-AX耐受良好。一旦对注射的初始结膜反应消退，则通常在随后的时间间隔观察到可能代表测试制品的结膜下白色斑块。观察到的白色斑块与上述给药观察结果一致，表明斑块可能在给药后从CLS-AX的小回流进入结膜下空间。在研究的第15天和之后，在注射部位附近的一些眼睛中也观察到充满透明流体的透明结膜下通道。尽管这些通道的确切性质尚不清楚，但它们可能代表充血的水静脉或淋巴样血管。在给药阶段的第91天，在一只眼睛中观察到RPE色素斑，表明该组织受到注射或测试制品的干扰。

在组织收集过程中观察到白色沉积物。给药后长达61天，在眼睛外部观察到白色沉积物，并可以将其与球结膜一起除去。然而，在研究的第91天，一旦除去结膜，就试图除去粘附在巩膜上的白色沉积物。这些尝试均未成功，表明沉积物位于巩膜下。沉积物的外观可能更明显，因为白色测试制品位于半透明巩膜与深色素沉着的脉络膜之间。在检查眼底时没有看到这些白色沉积物，表明该沉积物最可能是位于脉络膜上腔中的CLS-AX，这可以在眼睛的外部检查期间观察到。

在多次注射后，少量的测试材料可能在针头拔出时留在结膜下或巩膜内。对于检查者来说，回流的物质可能已经作为结膜下白色斑块。与给药后观察结果和检查结果一致，在组织采集期间观察到白色沉积物。给药后长达61天，在眼睛外部观察到白色沉积物，并可以将其与球结膜一起除去，直到研究第91天，表明该沉积物位于部分脉络膜上。

图1A以图形方式提供了4mg/眼研究的结果。药代动力学分析结果示于表2。图1B以图形方式提供了0.1mg/眼或0.03mg/眼研究的结果。

在单次双侧脉络膜上施用CLS-AX(4mg/眼)后，在血浆或房水样品中均未观察到可定量水平的分析物。施用4mg/眼后，在玻璃体液、视网膜和巩膜/脉络膜-RPE(SCR)中的所有时间点，CLS-AX均是可定量的。在组织中存在CLS-AX的浓度梯度，其中剂量贮库(SCR)最高，其次是视网膜，最后是最低浓度的玻璃体液(图1A)。剂量贮库(SCR)外推的初始浓度(C₀)为17.2mg/g。SCR中CLS-AX的平均浓度在研究的第4天略有上升，最可能是由于动物间的变异性。CLS-AX的剂量贮库(SCR)浓度在研究早期最高，然后在研究第8天至研究第91天开始下降(图1A，上图)。剩余的高水平CLS-AX与巩膜下白色斑块的观察结果一致，表明这些斑块是剩余的剂量贮库。计算消除半衰期(t_1/2)为102天；在注射后3个月时超过60％的CLS-AX保留在SCR中(图1A，上图)。视网膜中CLS-AX的水平比阿西替尼对其受体(VEGFr和PDGFr)的IC50高100,000倍(图1A，下图)。观察到的剂量贮库的暴露(AUC_0-t)值为1260μg*天/g。

尽管CLS-AX是以在水性溶剂中具有有限溶解度的悬浮液形式给药，但CLS-AX在给药后24小时立即存在于视网膜和玻璃体液中，表明在给药后测试制品突然释放到组织中。视网膜和玻璃体液中的CLS-AX水平随时间增加，分别达到325μg/g和0.857μg/mL的最大平均浓度(C_max)。在研究的第4天(T_max)，在玻璃体液中达到C_max水平，然后下降，虽然有一些变化。从研究第2天直到研究第15天，视网膜中的平均浓度相似，然后在研究第29天增加约3倍。在研究的第91天，视网膜中CLS-AX的浓度与C_max相似。在视网膜和玻璃体液中观察到的CLS-AX(AUC_0-t)暴露与两种组织之间的浓度梯度一致。CLS-AX的视网膜浓度在整个研究期间保持高于44μg/g。

血浆、房水、视网膜、巩膜/脉络膜-RPE(SCR)和玻璃体液中CLS-AX的各个浓度呈现于表2中。使用液相色谱与串联质谱(LC-MS/MS)方法测定CLS-AX的浓度。使用经验证的方法进行样品分析。使用

软件(版本1.6.2)捕获LC-MS/MS数据并对峰面积进行积分。使用Watson LIMS软件(版本7.4.1)进行数据存储、管理和报告。

如上所述，所有血浆样品和房水样品中CLS-AX的浓度低于定量限(BLQ)。在视网膜样品中，CLS-AX的浓度范围为2750ng/mL至60,100ng/mL匀浆和44,500ng/g至1,220,000ng/g组织。在SCR中，CLS-AX的浓度范围为1,870,000ng/mL至3,360,000ng/mL匀浆和9,790,000ng/g至24,400,000ng/g组织。在玻璃体液中，CLS-AX的浓度范围为60ng/mL至6,030ng/mL。

总之，在脉络膜上施用CLS-AX(4mg/眼)后，在整个研究期间，在血浆或房水样品中均未观察到可定量水平(定量下限＝1ng/mL)的分析物。然而，在玻璃体液、视网膜和巩膜/脉络膜-RPE(SCR)中的所有时间点，CLS-AX均是可定量的。

在第二项研究中，在整个研究期间(67天)，两种剂量的CLS-AX在视网膜和脉络膜-RPE/巩膜中均可检测到远高于IC50(图1B)。在玻璃体中检测到的浓度显著低于在后部组织中检测到的浓度，并且到第14天在玻璃体中不再检测到CLS-AX(图1B)。

下文和表1C提供了第二项研究的其他数据。对于两种剂量，在SCR、视网膜和玻璃体液中的平均阿西替尼浓度在第1天达到最大值。对于0.03和0.1mg/眼SCR药物贮库，分别计算257和379小时的消除t_1/2值。0.1mg/眼的平均C_max和AUC_0-∞值分别比0.03mg/眼的参数高约6倍和7倍。

在双侧脉络膜上施用后，对于0.03mg/眼和0.1mg/眼，阿西替尼平均视网膜浓度在研究第2天(t_max＝给药后24小时)分别达到4480和6260ng/g的C_max值。在研究第2天之后，较低剂量组的平均视网膜浓度急剧下降，到第15天基本上低于定量限(16.7ng/g)，在第31天和第61天4只眼睛中只有1只具有可定量水平的阿西替尼。较高剂量的平均视网膜浓度也在给药后24小时后急剧下降，并且在第45至66天4只眼睛中只有1只可定量。较高剂量平均C_max和AUC_0-t值分别比较低剂量参数高1.4倍和1.6倍。这些浓度和暴露比例小于剂量比例。

在第2天之后，在第8天每组中只有几只眼睛的平均玻璃体液浓度是可定量的。两个剂量组的玻璃体液的平均C_max值非常相似，表明CLS-AX不容易分配到玻璃体液中，与剂量水平无关。

表1D.阿西替尼在兔子体内的药代动力学参数，通过SCS注射给药，CLS-AX剂量为0.03mg/眼或0.1mg/眼

总之，研究结果表明，在所有测试剂量(4mg/眼、0.1mg/眼、0.03mg/眼)下，向脉络膜上腔单次双侧施用CLS-AX悬浮液具有良好的耐受性，并且表现出良好的眼部分布和药代动力学，可持久治疗眼后部疾病。实现了最少或没有全身暴露、最少的前段暴露、后段的高吸收以及比预期长得多的半衰期。较长的半衰期减少或消除了重复注射阿西替尼的需要。对眼后段进行有效的药物施用而没有重复注射的有害副作用或与全身暴露相关的副作用的问题一直是本领域技术人员难以解决的问题。通过在本申请中公开并在权利要求中陈述的用于治疗眼后部疾病的阿西替尼药物制剂的SCS递送，提供了对治疗眼后部疾病的方法的意想不到的改进。

表2：通过脉络膜上注射阿西替尼(4mg/眼)给药的雄性荷兰束带兔的视网膜、巩膜/脉络膜-RPE及玻璃体液的平均药物动力学参数

NC 未计算。

RPE 视网膜色素上皮。

a计算的半衰期值应谨慎解释，因为该值是在少于两个半衰期的情况下计算的。

实施例3.大鼠激光诱导的脉络膜新生血管模型

本研究的目的是使用改良的微针/SCS微量注射器在激光诱导的棕色挪威大鼠脉络膜新生血管模型中测定脉络膜上注射CLS-AX的潜在功效。

在第1天，在脉络膜新生血管形成之前，将散瞳药滴剂施用于双眼，并在开始以下手术之前将动物麻醉。在每只眼睛的视盘周围的主要视网膜血管之间形成4点图案。根据需要调整激光参数以确保布鲁赫膜破裂。此后，在麻醉下，使用配备有改良的Clearside微针(33号，<400μm)的100μL Hamilton注射器，通过徒手双侧脉络膜上注射，向雄性大鼠组(10只/组)的双眼施用对照物品(注射用氯化钠，美国药典[USP])或CLS-AX(批号50311-1，40mg/mL)。在第1天和第8天分别以0或0.4mg/眼/剂量(每次给药施用0.2mg/眼)的剂量进行给药。每只动物的目标剂量体积为5μL/眼/注射。

研究期间评估的参数包括研究前和给药后第1天的死亡率、临床体征、体重、食物消耗、眼科(间接检眼镜检查和裂隙灯生物显微镜检查)；以及研究前和第7天(给药前)、第14天和第21天的荧光素血管造影(FA)。荧光素血管造影是一种用于评估眼部新生血管病变的血管渗漏的技术。由2名独立的阅片人以0级至IV级的等级半定量地评估静态图像上的各个激光点的泄漏，随后确定共识评分。标度如图2A所示。在第22天处死动物，收集眼睛和视神经并保存在戴维森固定剂中。

研究设计见表3。

表3：大鼠激光诱导脉络膜新生血管研究设计

缩写：USP＝美国药典；^a第1组在第1天和第8天给药。^b第2组在第1天和第8天给药(每次0.2mg/眼)。

没有死亡，也没有与治疗相关的临床症状或对体重、体重增加或食物消耗的影响。轻微的视网膜医源性创伤是由注射过程中施加的力引起的，但在第一次注射后没有立即观察到临床上重要的眼部并发症。

使用微针施用CLS-AX在大多数动物中成功地进行了CLS-AX的脉络膜上和/或视网膜下注射，尽管对照组中注射后结果的评估由于对照物品的透明度而变得复杂。在眼科检查时，CLS-AX呈白色，在第2组中，如间接检眼镜检查所记录的，SCS中总共有11/20只眼睛有白色测试物品，9/20只眼睛有视网膜下测试物品。在4只眼睛中，在视网膜下和脉络膜上腔中均观察到CLS-AX。在5/20只眼睛中，可在针尖附近观察到测试物品，并且似乎已进行了巩膜下或脉络膜上注射，但在这些眼睛中，在眼底镜检查中可能显示测试物品是阴性的。这些眼睛中CLS-AX的确切定位仍然不确定，但不太可能是结膜下，因为在注射过程中结膜没有升高。

大多数眼睛的反流极轻微，并且在参考组和CLS-AX组中相似。观察到参照组六只眼睛和CLS-AX组10只眼睛有明显的反流。CLS-AX组的发病率较高可能是由于CLS-AX因其白色而更易于可视化。本研究中观察到的反流可能是由于难以在大鼠中徒手注射造成的，并且预计在使用显微注射器向人施用CLS-AX时不会发生。

对照动物从第7天到第21天，除了20只眼睛中的2只眼睛之外，来自2只不同动物的渗漏总体上没有减少。该比率是大鼠中激光诱导的脉络膜新生血管模型的典型比率，表明该模型按预期进行。在施用CLS-AX的大鼠中观察到使用FA评估的临床重要病变的发生率降低(评分为3或4)，其中20只眼睛中的8只显示出改善(评分为0至2)。比较对照组与经治疗的眼睛的平均分数表明，CLS-AX治疗的动物在第21天时具有统计学上显著较低的评分，这支持模型中CLS-AX的活性。此外，与对照组相比，CLS-AX组第21天IV级病变的百分比显著更低(分别为63.8％和88.8％；图2B)。药物反流似乎与CLS-AX治疗的益处减少无关。

该研究证明，与用盐水治疗的对照大鼠相比，通过脉络膜上注射以0.4mg/眼/剂量每周一次施用CLS-AX持续2周在大鼠中具有良好的耐受性，并且在第21天导致临床重要病变显著减少。

实施例4.猪激光诱导的脉络膜新生血管模型

本研究的目的是评估在激光诱导的猪脉络膜新生血管模型中单次SC注射CLS-AX对脉络膜新生血管形成的影响。这是脉络膜中发生的人眼后段新生血管疾病诸如nAMD的模型。

在8只雄性断奶仔猪中评估了单次SC注射CLS-AX的潜在功效。在第1天，将散瞳滴剂施用于双眼，并在脉络膜新生血管外科之前对动物进行麻醉。通过激光间接耳机传递二极管激光能量，在每只眼睛的视神经周围产生6个均匀的白色激光损伤。在激光治疗后立即使用配备有微针(30号，<400μm)的注射器将对照物品(平衡盐溶液[BSS])以100μL/眼的剂量体积通过徒手SC注射向左眼施用对照物品，并以4mg的剂量向右眼施用CLS-AX(浓度40mg/mL)。

在研究的生命周期中评估的参数包括治疗后立即以及治疗后1周和2周的眼底照相和FA。治疗后2周对猪实施安乐死，摘除眼睛并处理视网膜平片。进行异凝集素IB₄染色(一种用于评估新生血管的技术)以定量视网膜平片中新形成的血管。

实验设计提供于表4中。

表4：猪激光诱导脉络膜新生血管研究设计

缩写：BSS＝平衡盐溶液；OD＝右眼；OS＝左眼；OU＝双眼

通过眼底照相和FA容易观察到激光诱导的视网膜病变。随着时间的推移，所有病变都变得不那么白并变得更清晰，但在激光治疗后即刻以及激光治疗后1周和2周时接受BSS(OS[左眼])或CLS-AX(OD[右眼])给药的眼睛之间没有明显差异。在FA上，在激光治疗后1和2周，与给予BSS的对照眼睛相比，用CLS-AX治疗的眼睛的荧光面积分别平均减少了10.5％(P＝0.009)和16.0％(P＝0.0015)(图3A)，表明用CLS-AX治疗显著减少了视网膜激光损伤部位的血管渗漏和新血管的生长。图3B提供了BSS治疗的眼睛和CLS-AX治疗的眼睛的代表性图像。

在视网膜平片组织上进行的新形成的血管的定量(通过凝集素IB₄信号—新形成的血管系统的标志物测量)显示，相对于BSS治疗的眼睛，用CLS-AX治疗的眼睛的凝集素IB₄信号面积减少了18％(代表性样品；图4A；平均IB₄信号的定量，图4B)。这些数据表明，相对于施用BSS的对照眼睛，CLS-AX治疗显著抑制了新血管形成(P＝0.0297)。

因此，与BSS的对照治疗相比，以4mg/眼的剂量单次SCS注射CLS-AX显著减少了猪视网膜激光损伤部位的血管渗漏(如荧光素信号减少所证明的)和新血管生长(如凝集素IB₄信号减少所评估)。

总之，本文提供的药代动力学和药效学数据表明，在SCS施用后，CLS-AX在大鼠、兔和猪中通常具有良好的耐受性，没有明显的毒性迹象。在整个PK研究中，在眼部组织中观察到阿西替尼的持续和高暴露，其中巩膜/脉络膜/RPE中的水平最高，其次是视网膜，然后是玻璃体。在血浆或房水中均未检测到可定量的阿西替尼。在大鼠中，与对照组相比，CLS-AX降低了临床上重要的新生血管病变(评分为3或4)的发生率，其中8/20只眼睛(40％)在第21天时表现出总体改善，临床上重要的病变减少。在猪中，与盐水治疗相比，CLS-AX显著减少了视网膜激光损伤部位的荧光素渗漏(在第1周为105％和16％)和新血管的生长(18％)。因此，对于nAMD是有效的抗血管生成/抗新血管形成治疗，并且当非外科施用于眼睛的SCS时非常有效。CLS-AX具有作为nAMD的治疗例如两年治疗的潜力，因为它通过受体阻断的泛VEGF抑制以及药效学效应、延长的持续时间、直接靶向受影响的组织层的能力和如本文提供的研究中揭示的高效力。

实施例5.临床研究

将进行1/2a期临床研究，以评估向nAMD患者眼部脉络膜上腔非外科施用阿西替尼的安全性和有效性。部分地，待测试的剂量与本文公开的药效学研究中获得的数据一致。

在发达国家，新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)是不可逆中枢性失明的主要原因(Santarelli,2015)。尽管AMD的发病机制很复杂并且仍未完全理解，但是所涉及的许多机制已经部分已知，并且特别是对于归类为湿型(nAMD)的10％-15％的AMD，包括血管内皮生长因子(VEGF)信号传导途径。在nAMD中，异常血管生长、视网膜和黄斑下方布鲁赫膜正下方的脉络膜血管层中的脉络膜新生血管(CNV)导致血液、脂质和血清渗漏到视网膜层中并导致黄斑从其正常位置鼓起或隆起，扭曲或破坏中央视力。在nAMD中，作用于VEGF受体1和2(VEGFR-1、VEGFR-2)的VEGF-A已被证明可促进异常血管生长，因此是治疗的最佳靶点。目前，抗VEGF药物是治疗这种疾病的标准药物；然而，对于显著改善和维持大多数患者的视力仍存在显著未满足的需求(Martin,2012)。此外，目前频繁进行玻璃体内注射的治疗模式很繁琐；例如，最近对近50,000只湿性AMD眼睛的“真实世界”回顾性研究表明，患者平均仅用7.3次注射治疗不足，在1年时仅增加1个字母(Ciulla,2019)。

主要终点：评估CLS-AX在患有新生血管性年龄相关性黄斑变性的受试者中的安全性和耐受性，这些受试者在过去5个月内在≥3次注射玻璃体内抗VEGF治疗后表现出稳定的视力(无丧失)。

次要终点：评估并比较3组CLS-AX治疗方案在3个月内对视功能和解剖结构的影响以及对玻璃体内阿柏西普额外治疗的需要。

研究设计：这是1/2a期开放标记、剂量递增研究，以评估在nAMD受试者中在至少3次先前用玻璃体内(IVT)抗VEGF剂治疗(最后一次将在筛选访视时施用)后脉络膜上施用的单剂量CLS-AX的安全性和耐受性。研究设计包括3个剂量组，每组5名受试者。在第1次访视筛选时(第-28±3天)确定受试者合格性。合格受试者将在第1次访视筛选时(第-28±3天)接受阿柏西普IVT注射，2mg(0.05mL)，随后在第2次访视基线时(第0天)接受脉络膜上注射CLS-AX。受试者返回接受安全性和耐受性评估、视功能和眼睛解剖结构评估，以及在第3、4和5次访视(第4、8和12周)(随访期)时需要额外治疗。此外，将基于PRN标准在第3次和第4次访视(第4周和第8周)施用额外的治疗，并且将由通过IVT注射施用的阿柏西普(2mg(0.05mL))组成，除非医学上需要其他治疗。将对所有受试者进行随访，直至第5次访视(第12周，退出研究)，无论是否给予额外治疗。3个剂量组将包括以下内容：

·组1(最低剂量组)：脉络膜上注射0.03mg的CLS-AX

·组2(中等剂量组)：脉络膜上注射0.06mg的CLS-AX

·组3(高剂量组)：脉络膜上注射0.10mg的CLS-AX

如时间和事件时间表中所述，将评估所有组的安全性和耐受性以及对视功能和解剖结构的影响。

受试者数量(计划)：大约15名。

入选标准：如果受试者在筛选访视(第1次访视)和基线访视(第2次访视)时满足以下所有标准，则其有资格参与本研究：

1.研究眼睛中新生血管性年龄相关性黄斑变性的诊断

2.研究眼睛中继发于任何病变类型AMD的活动的中心凹下脉络膜新生血管(CNV)，照片和/或荧光素血管造影(FA)和/或谱域光学相干断层扫描(SD-OCD)显示：a.总病变面积(包括血液、新生血管和瘢痕/萎缩)≤30mm²，b.CNV成分面积≥总病变面积的50％，c.CNV不得与中心凹下出血、中心凹下纤维化或中心凹下萎缩相关。

3.在筛选时，基于研究者的意见，在筛选前4个月(第1次访视)进行两种或更多种抗VEGF治疗(阿柏西普、雷珠单抗、贝伐单抗、布鲁珠单抗)，其中在筛选前至少4周(第1次访视)施用最后一次治疗，以获得研究眼睛中的新生血管AMD，该新生血管AMD具有有意义的反应，例如视力和/或渗出的改善。

4.研究眼睛中早期治疗糖尿病性视网膜病变研究(ETDRS)最佳矫正视力(BCVA)评分为≥20个字母阅读(20/400斯内伦当量)和≤读取75个字母阅读(20/32斯内伦当量)，在第1次访视与第2次访视之间BCVA变化小于5个字母(筛选和基线)

5.理解知情同意书的语言；愿意并能够在任何研究程序之前提供书面知情同意书；愿意遵守指示并参加所有计划的研究访视

6.至少50岁

眼科排除标准：如果受试者符合以下任何标准，则她/他没有资格参加本研究：

1.通过谱域光学相干断层扫描评估的研究眼睛中心凹中的任何萎缩或纤维化

2.研究眼睛中有明显的介质不透明性，无法评估视网膜和玻璃体

3.在患有AMD以外病因的研究眼睛中有黄斑水肿或CNV；在患有AMD以外的研究眼睛中有任何活动性眼部疾病或感染；研究眼睛中有CNV，照片和/或FA和/或SD-OCT上有以下任何一项：a.总病变面积(包括CNV、出血、纤维化、萎缩)>30mm2，b.CNV组分面积<总病变面积的50％，c.中心凹下出血、中心凹下纤维化或中心凹下萎缩，d.视网膜色素上皮撕裂，视网膜血管瘤增生(RAP)

4.除IVT注射阿柏西普、雷珠单抗、贝伐单抗或布鲁珠单抗之外，先前治疗研究眼睛中的CNV。

5.第1次访视时研究眼睛中的眼内压≥25mmHg或不受控制的青光眼(开角或闭角)；如果研究眼睛中的眼内压(IOP)<25mmHg且不超过1种IOP降低药物，则不排除受试者；或杯盘比>0.8

6.任何玻璃体视网膜外科史(实例包括但不限于巩膜扣带术、睫状体平坦部玻璃体切除术、摘除脱落的核或人工晶状体)或研究眼睛中的全视网膜或黄斑激光光凝术史；玻璃体内注射是可接受的；允许既往白内障摘除术，钇铝石榴石激光晶状体囊切开术，但不得在筛选后3个月内(第1次访视)

7.在第1次访视前3个月内，在研究眼睛中进行了睫状体破坏性手术或过滤手术

8.研究眼睛中的高度近视定义为等效球镜>-6屈光度或眼轴长度≥26mm。既往有高度近视史，如果是假性晶状体

9.在第1次访视前6个月内研究眼睛中已进行光凝或冷冻治疗

10.在研究眼睛中，在第2次访视(第0天)治疗前10天内的任何局部眼部皮质类固醇；任何眼内或眼周皮质类固醇注射

11.与任何可能对晶状体、视网膜或视神经有毒的药物合并治疗

12.在筛选时，正在对侧眼接受抗VEGF治疗，或预期在研究期间在对侧眼中接受抗VEGF治疗。

一般排除标准：如果受试者符合以下任何标准，则她/他没有资格参加本研究：

12.怀孕、哺乳或计划怀孕的女性受试者。有生育能力的女性必须同意在筛选时进行妊娠试验，并同意在参与本研究期间使用可接受的避孕方法。可接受的避孕方法包括双重屏障方法(带有杀精剂的避孕套或带有杀精剂的隔膜)、激素方法(口服避孕药、植入式避孕药、透皮式避孕药或注射式避孕药)或有记录的每年失败率低于1％的宫内避孕装置。根据研究者的判断，禁欲可以被认为是一种可接受的避孕方法，但如果受试者变得性活跃，则她必须同意使用可接受的避孕方法之一。

13.研究者认为可能妨碍参与研究的任何不受控制的全身性疾病(例如，不稳定的医学状态，包括不受控制的血压升高、心血管疾病和血糖控制)或由于研究治疗或程序而使受试者处于风险中

14.在第2次访视前2周内，对于口服泼尼松(或对于其他皮质类固醇的等效物)，以大于20mg/天的剂量服用全身皮质类固醇；如果在研究期间预期剂量没有增加，则可以招募每天服用20mg或更少的受试者

15.可能需要在研究期内住院或外科，包括计划的择期手术或无法延迟的住院

16.对CLS-AX的任何组分、荧光素或局部麻醉剂超敏反应

17.目前参加了研究药物或器械研究，或在第1次访视后30天内使用研究药物或器械

研究产品、剂量和给药方式：CLS-AX，阿西替尼注射混悬液，以100μL中0.03mg、0.06mg和0.10mg的剂量进入脉络膜上腔，与SCS显微注射器一起施用

评估标准包括按器官系统、与研究治疗的相关性和严重程度(主要)分组的治疗紧急不良事件(TEAE)和严重不良事件的发生率；以及眼部安全性参数变化的发生率/描述性统计、CLS-AX施用后额外阿柏西普治疗的次数、中心子域厚度相对于基线的平均变化、ETDRS BCVA字母评分相对于基线的平均变化，以及全身和眼部结果(次要)。

所有受试者将在筛选(第1次访视)时接受2mg(0.05mL)IVT注射阿柏西普，然后在基线(第2次访视)时脉络膜上施用单剂量的CLS-AX。将审查CLS-AX SC注射后第4周访视(第3次访视)、第8周访视(第4次访视)和第12周访视(第5次访视)的安全性评估。将在第3、4和5次访视(第4、8和12周)时评估受试者的额外治疗。将在第3次访视和第4次访视(第4和8周)时施用附加的治疗，包括基于下文提供的“附加的治疗标准”IVT注射2mg(0.05mL)阿柏西普(除非医学上需要其他治疗)。

SC CLS-AX注射前(注射当天)必须执行以下程序：评估不良事件，审查伴随用药变化，进行静息心率和血压测量，收集血液进行PK分析，收集尿液进行育龄女性妊娠试验，并对研究眼睛进行眼科评估。眼科评估包括ETDRS BCVA、裂隙灯生物显微镜检查(包括散瞳晶状体分级)、双眼眼内压(IOP)测量、散瞳间接检眼镜检查、SD-OCT和OCT-A。将进行以下照相评价：荧光素血管造影和眼底照相。

合格的受试者将接受脉络膜上注射100μL的CLS-AX。在脉络膜上注射后进行以下评估：评估不良事件，审查伴随用药变化，注射后至少30分钟进行静息心率(静息5分钟)和血压测量，注射后至少30分钟进行12导联心电图，注射后约60分钟收集血液进行药代动力学分析，并进行眼科评估。眼科评估包括：注射后立即进行间接检眼镜检查、裂隙灯生物显微镜检查，并在注射后10至30分钟评估IOP。如果IOP仍然升高，受试者必须留在研究中心，直到IOP根据研究者的最佳医学判断得到控制。如果IOP<30mmHg，则受试者可离开诊所。在非给药访视日，研究者将联系受试者并评估不良事件并审查伴随用药变化。

在第3次访视(第4周)和第4次访视(第8周)以及第5次访视(第12周)时，执行以下程序：评估不良事件，审查伴随用药变化，进行静息心率和血压测量，进行12导联心电图，采集血液进行PK分析，采集血液和尿液样本进行荧光素血管造影前的中心实验室检查，并对研究眼睛进行眼科评估。眼科评估包括ETDRS BCVA、裂隙灯生物显微镜检查(包括散瞳晶状体分级)、双眼眼内压(IOP)测量、散瞳间接检眼镜检查、SD-OCT和OCT-A。将进行以下照相评价：荧光素血管造影和眼底照相。将评估受试者是否需要使用阿柏西普进行额外治疗。

如果满足下述预定标准(“附加的治疗标准”)，则施用IVT阿柏西普。施用后，将进行以下评估：评估不良事件，审查伴随用药变化，对研究眼睛进行眼科评估。眼科评估将包括：注射后立即通过间接检眼镜检查评估研究眼睛，进行裂隙灯生物显微镜检查，并在注射后10至30分钟评估IOP。如果IOP仍然升高，受试者必须留在研究中心，直到IOP根据研究者的最佳医学判断得到控制。如果IOP<30mmHg，则受试者可离开诊所。

研究药物描述：每组的治疗由在第1次访视时在研究眼睛中单次单侧注射IVT阿柏西普(筛选；第-14至-1天)和在第2次访视(第0天)时施用100μL单次单侧脉络膜上注射(给药水平为0.03mg、0.06mg或0.10mg)CLS-AX组成。将在第3、4和5次访视(第4、8和12周)时评估受试者的额外治疗。将根据下文的PRN标准(“附加的治疗标准”)施用附加的治疗，并且将由2mg IVT阿柏西普组成，除非医学上需要其他治疗。

加入下一个较高剂量组将基于在审查安全性数据后SMC的建议。每个组将加入五名受试者。

附加的治疗标准：在第3、4和5次访视(第4、8和12周)时，将根据以下标准评估受试者是否需要对新生血管性AMD进行额外治疗。如果在第3次访视(第4周)和第4次访视(第8周)时研究眼睛中满足以下任何标准，则将施用IVT阿柏西普(2mg(0.05mL))：

·与研究者观察到的视网膜内或视网膜下液导致的研究眼睛中最佳先前研究评估的BCVA相比，BCVA中丧失10个或更多个字母，或

·在研究眼睛中，与基线(第2次访视)相比，中心子域视网膜厚度增加大于75微米，或

·研究眼睛中存在由AMD引起的威胁视力的出血。

额外治疗为IVT阿柏西普2mg，除非医学上需要其他治疗；即使给予额外治疗，仍将随访受试者直到研究结束。

由合格的研究人员通过静脉穿刺从那些同意的受试者收集阿西替尼全身血液浓度，并用于估计标准人群PK参数。将在以下时间点从每个受试者获得一份血液样本：给药前第2次访视(第0天)，给药后约60分钟的第2次访视(第0天)以及第3次和第5次访视(第4周和第12周)。

最佳矫正视力(BCVA)将通过ETDRS使用标准化照明和标准化通道进行评价。结果应报告为阅读的字母数。视力测试应先于任何需要接触眼睛的检查。为了在研究期间提供BCVA的标准化和良好控制的评估，所有BCVA评估必须由在研究程序上使用经认证的VA设备/通道认证的经培训的人员进行。

视网膜厚度和疾病特征将通过谱域光学相干断层扫描(SD-OCT)进行评估。在筛选任何受试者之前，必须对SD-OCT仪器和技术人员进行认证。鼓励技术人员在整个受试者的研究参与过程中使用相同的认证设备。所有图像应尽可能由同一技术人员在每个研究中心的每名受试者上拍摄。图像将被发送到中央阅读中心进行分析和解释。

将对脉络膜新生血管膜进行分类，并通过光学相干断层扫描血管造影术(OCT-A)评估脉络膜上注射后的后续结构变化。在筛选任何受试者之前，必须对OCT-A仪器和技术人员进行认证。鼓励技术人员在整个受试者的研究参与过程中使用相同的认证设备。所有图像应尽可能由同一技术人员在每个研究中心的每名受试者上拍摄。

将通过压平眼压计测量眼内压(IOP)，并以mmHg记录结果。如有可能，应在所有访视时使用Goldmann压平眼压计。Tonopens可用于注射后压力检查以及在没有Goldmann可用的情况下。鼓励技术人员在整个受试者的研究参与过程中使用相同的眼压计方法。在基线时，当施用脉络膜上CLS-AX时，将测量IOP 2次：脉络膜上CLS-AX注射前和脉络膜上CLS-AX注射后。在研究期间，在该研究中心进行首次受试者筛选之前，必须根据制造商的说明书校准眼压计的准确性，直到最后一个受试者在该研究中心退出研究。

裂隙灯生物显微镜检查(包括放大)将按照标准临床实践进行。该程序应以相同的方式对所有受试者进行，并将包括对以下各项正常或异常的评估：眼睑、巩膜和结膜、角膜、前房、虹膜和晶状体。将描述所有异常发现。虹膜的裂隙灯检查是为了排除虹膜的新生血管(NVI)。

白内障晶状体评级：如果在裂隙灯检查过程中发现白内障异常，则应该对白内障的核乳光、皮质混浊和后囊下混浊进行分级。分级者必须验证对分级程序的培训。白内障分类将基于晶状体混浊分类系统III(LOCS III)分级量表(Chylack,1993)。

间接检眼镜应根据研究者的标准程序进行。对于在研究者中心观察到的所有受试者，该程序应相同。对眼底进行彻底检查，并评估以下变量为正常或异常(包括但不限于)：玻璃体、视网膜、脉络膜和视神经/视盘、血管外观和无新生血管。

将进行荧光素血管造影以进行解剖学评估，并将包括荧光素渗漏面积、毛细血管未灌注面积、视网膜血管和视神经乳头染色的存在，以及视网膜色素上皮异常。将对数字设备进行注册，并对摄影师进行成像程序认证。将把去识别的图像上传到中央读取中心。

将获得彩色眼底照片。建议在荧光素血管造影术之前拍摄眼底照片。所有照片应尽可能由同一摄影师在每个研究中心的所有受试者上拍摄。将对数字设备进行注册，并对摄影师进行成像程序认证。将把去识别的图像上传到中央读取中心。

统计方法：这是一项开放标签1期研究。将描述性总结每个组的观察结果和基线变化。通过计数和百分比总结分类变量，通过描述性统计总结连续变量(n、平均值、标准偏差、标准误差、中值、最小值和最大值)。基线定义为施用CLS-AX之前的最后一次评估。

剂量递增标准：所有受试者将在筛选时接受IVT阿柏西普(第1次访视)，然后在基线时脉络膜上施用CLS-AX(第2次访视)。将在CLS-AX注射后4、8和12周评估安全性数据。如果出现以下情况，剂量递增将不会进行到下一个最高剂量：

·报告了与治疗相关的严重不良事件

·基于CTCAE严重程度分级量表，≥2名受试者经历了3级或更高级别的非严重治疗相关不良事件

·同一剂量组中≥3名受试者在同一MedDRA系统器官分类中经历了2级或更高级别的非严重治疗相关不良事件

·同一剂量组中≥4名受试者在任何MedDRA系统器官分类中经历了2级或更高级别的非严重治疗相关不良事件

·与注射前的视觉活动相比，BCVA减少了30个字母

·IOP升高导致持续(>15分钟)光感缺失

·IOP升高或降低20mmHg，在事件发生后7天内未恢复到注射前水平

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参考文献

Busbee BG，Ho AC，Brown DM，Heier JS，

IJ，Li Z，Rubio RG，Lai P，HARBORStudy Group.Twelve-month efficacy and safety of 0.5mg or 2.0mg ranibizumab inpatients with subfoveal neovascular age-related maculardegeneration.Ophthalmology.2013；120：1046-1056.

Cabral T，Lima LH，Mello LGM，Polido J，Correa EP，Akiyoshi Oshima，JimmyDuong，Pedro Serracarbassa，Caio V.Regatieri，Vinit B.Mahajan，RubensBelfor.Bevacizumab injection in patients with neovascular age-related maculardegeneration increases angiogenic biomarkers.Ophthalmol Retina.2018；2(1)：31-37.doi：10.1016/j.oret.2017.04.004.

Chylack LT，Wolfe JK，Singer DM，Leske MC，Bullimore MA，Bailey IL，FriendJ，Wu SY.The lens opacities classification system III.The longitudinal studyof cataract study group.Archives of ophthalmology.1993；111(6)：831-836.

Ciulla TA，Hussain RM，Pollack JS，Williams DF.Visual Acuity Outcomesand Anti-Vascular Endothelial Growth Factor Therapy Intensity in NeovascularAge-Related Macular Degeneration Patients：A Real-World Analysis of 49，485Eyes.Ophthalmol Retina.2019 May 25.pii：S2468-6530(19)30280-5.

Giddabasappa A，Lalwani K，Norberg R，Gukasyan HJ，Paterson D，SchacharRA，Rittenhouese K，Klamerus K，Mosyak L，Eswaraka J.Axitinib inhibits retinaland choroidal neovascularization in in-vitro and in-vivo models.Exp EyeRes.2016，145：373-379.

Heier JS，Brown DM，Chong V，Korobelnik JF，Kaiser PK，Nguyen QD，KirchhofB，Ho A.Ogura Y，Yancopoulos GD，Stahl N，VittiR，Berliner AJ，Soo Y，Anderesi M，Groetzbach G，Sommerauer B，Sandbrink R，Simader C，Schmidt-Erfurth UIntravitreal aflibercept(VEGF trap-eye)in wet age-related maculardegeneration.Ophthalmology.2012；119：2537-2548.

Hu-Lowe D，Zou HY，Grazzini ML，Hallin ME，Wickman GR，Amundson K，Chen JH，Rewolinski DA，Yamazaki S，Wu EY，McTigue MA，Murray BW，Kania RS，O’Connor P，Shalinsky DR，Bender SL.Nonclinical antiangiogenesis and antitunor activitiesof axitinib(AG-13736)，an oral，potent，and selective inhibitor of vascularendothelial arowth factor receptor tyrosine kinases 1，2，3.Clin CancerRes.2008；14(22)：7272-7283.

Kang S，Roh CR，Cho WK，Park KC，Yang KJ，Choi HS，So-Hee K，RohYJ.Antiangiogenic effects of Axitinib，an inhibitor of vascular endothelialgrowth factor receptor tyrosine kinase，on laser-induced choroidalneovascularization in mice.Curr Eye Res.2012；8(1)：119-127.

Lieu CH，Tran H，Jiang ZQ，Mao M，Overman MJ，Lin E，Eng C，Morris J，EllisL，Heymach JV，Kopetz S.The Association of alternate VEGF ligands withresistance to anti-VEGF therapy in metastatic colorectal cancer.PLoSONE.2013；8(10)：e77117.

Martin DF，Maureen GM，Fine SL，Ying G，Jaffe GJ，Grunwald JE，Toth C，Redford M，Ferris FL.Ranibizumab and Bevacizumab for treatment of neovascularage-related macular degeneration.Ophthalmology.2012；119(7)：1388-98.doi：10.1016/j.ophtha.2012.03.053.

Nakano A，Nakahara T，Mori A，Ushikubo H，Sakamoto K，Ishii K.Short-termtreatment with VEGF receptor inhibitors induces retinopathy of prematurity-like abnormal vascular growth in neonatal Rats.Exp Eye Res.2016；143：120-131.

Rao P，Lum F，Wood K，SalmanC，Burugapalli B，Hall R，Singh S，Parke II DW，Williams GA.Real-world vision in age-related macular degeneration patientstreated with single anti-VEGF drug type for 1 year in the IRISRegistry.Ophthalmology.2018；125：522e528.

Riquelme ML，Campos-Mollo E，Fernández-Sánchez L.Topical axitinib is apotent inhibitor of corneal neovascularization.Clinical and ExperimentalOphthalmology 2018；46：1063-1074.

Santarelli M，Diplotti L，Samassa F，Veritti D，Kuppermann BD，LanzettaP.Advances in pharmacotherapy for wet age-related macular degeneration，ExpertOpinion on Pharmacotherapy.2015；16(12)：1769-1781，DOI：10.1517/146565662015.1067679.

Schmidt-Erfurth U，Kaiser PK，Korobelnik JF，Brown DM，Chong V，Nguyen QD，Ho AC，Ogura Y，Simader C，Jaffe GJ，Slakter JS，Yancopoulos GD，Stahl N，VittiR，Berliner AJ，Soo Y，Anderesi M，Sowade O，Zeitz O，Norenberg C，Sandbrink R， HeierJS.Intravitreal aflibercept injection for neovascular age-related maculardegeneration：ninety-six-week results of the VIEW studies.Ophthalmology.2014；121(1)：193-201.

Thiele S，Liegl RG，

S，Siedlecki J，Langer J，Eibl K，Haritoglou C，Kampik A，Kernt M.Multikinase Inhibitors as a New Approach in Neovascular Age-Related Macular Degeneration(AMD)Treatment：In Vitro Safety Evaluations ofAxitinib，Pazopanib and Sorafenib for Intraocular Use.Klin MonatsblAugenheilkd 2013；230：247-254.

Yuan X，Marcano DC，Shin CS，Hua X，Isenhart LC，Pflugfelder SC，AcharyaG.Ocular drug delivery nanowafer with enhanced therapeutic efficacy.ACSNano.2015；9(2)：1749-58.

本文引用的出版物、专利和专利申请的全文以引用方式具体并入。虽然已参考具体实施方案描述了所描述的发明，但是本领域技术人员应当理解，在不脱离本发明的真实精神和范围的情况下，可以进行各种改变并且可以替换等同物。另外，在所描述的本发明的客观精神和范围内，可以进行许多修改以采用特定情况、材料、物质组成、过程、一个或多个过程步骤。所有此类修改意图为处于所附权利要求书的范围内。

Claims (26)

1.一种治疗有需要的人类受试者的新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)、脉络膜新生血管(CNV)或与CNV相关的nAMD的方法，所述方法包括：

将有效量的包含阿西替尼的制剂以非外科方式施用至需要治疗的所述人类受试者的眼睛的脉络膜上腔(SCS)，其中所述有效量包含介于约0.01和约0.3mg之间的阿西替尼。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述有效量包含介于约0.03mg和约0.1mg之间的阿西替尼。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述有效量包含约0.03mg的阿西替尼。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述有效量包含约0.06mg的阿西替尼。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述有效量包含约0.1mg的阿西替尼。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述有效量包含约0.3mg的阿西替尼。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述方法包括以第一剂量和第二剂量向所述受试者施用所述阿西替尼，其中在所述第一剂量后至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月或至少6个月施用所述第二剂量。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述方法还包括向所述受试者施用VEGF拮抗剂。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述VEGF拮抗剂通过玻璃体内注射施用。

10.如权利要求8所述的方法，其中所述VEGF拮抗剂选自由阿柏西普、贝伐单抗、兰尼单抗和哌加他尼钠组成的组。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述方法导致与施用所述制剂之前需要治疗的所述患者的眼睛的视网膜厚度相比，经治疗的眼睛的视网膜厚度减小，如通过谱域光学相干断层扫描(SD-OCT)所测量。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述视网膜厚度减小≥25μm、≥50μm、≥75μm或≥100。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述视网膜厚度减小≥5％、≥10％或≥25％。

14.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述方法导致与未施用包含阿西替尼的制剂的受试者的眼睛的视网膜厚度相比，眼睛的视网膜厚度减小，如通过SD-OCT所测量。

15.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述患者在施用包含阿西替尼的所述制剂后12周内未表现出所述眼睛的视网膜厚度增加。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述患者在施用包含阿西替尼的所述制剂后2、3、4、5或6个月内未表现出所述眼睛的视网膜厚度增加。

17.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中与施用所述制剂之前所述患者的最佳矫正视力(BCVA)测量相比，所述患者经历极小视力丧失，如通过BCVA测量所测量，其中极小视力丧失是丧失不超过2个字母。

18.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中与施用所述制剂之前所述患者的最佳矫正视力(BCVA)测量相比，所述患者经历极小视力丧失，如通过BCVA测量所测量，其中极小视力丧失是丧失不超过5个字母。

19.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中与施用所述制剂之前所述患者的BCVA测量相比，所述患者未经历视力丧失，如通过BCVA所测量。

20.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中与施用所述制剂之前所述患者的BCVA相比，所述患者经历视力改善，如通过在BCVA测量中增加≥5个字母、≥10个字母或≥15个字母所测量。

21.如权利要求20所述的方法，其中所述患者在施用包含阿西替尼的所述制剂后经历BCVA改善持续至少2、3、4、5或6个月。

22.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述患者在施用包含阿西替尼的所述制剂后经历极小视力丧失持续2、3、4、5或6个月，其中所述极小视力丧失是丧失不超过2个字母，如通过BCVA所测量。

23.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述患者在施用包含阿西替尼的所述制剂后经历极小视力丧失持续2、3、4、5或6个月，其中所述极小视力丧失是丧失不超过5个字母，如通过BCVA所测量。

24.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述患者在施用包含阿西替尼的所述制剂后2、3、4、5或6个月内没有经历视力丧失，其中所述视力通过BCVA测量。

25.如权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述阿西替尼制剂包含约1mg/mL的阿西替尼。

26.如权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述阿西替尼制剂包含约0.05％的聚山梨酯80、约0.5％的羧甲基纤维素钠、约0.79％的氯化钠、约0.06％的磷酸二氢钠和约0.08％的磷酸氢二钠。

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