CN115677824A

CN115677824A - 可诱导sos1蛋白质降解的化合物、制备方法和用途

Info

Publication number: CN115677824A
Application number: CN202110844956.XA
Authority: CN
Inventors: 徐田锋; 郑明月; 周泽惠; 周川; 张素林; 樊子生; 谢如良
Original assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Current assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Priority date: 2021-07-26
Filing date: 2021-07-26
Publication date: 2023-02-03

Abstract

本发明公开了一种可诱导SOS1蛋白质降解的化合物、制备方法和用途，该化合物结构如式I所示。本发明的化合物可诱导SOS1蛋白质降解，用作SOS1降解剂，用于预防和/或治疗肿瘤。SOS1蛋白配体─连接基团L─E3连接酶配体(I)。

Description

可诱导SOS1蛋白质降解的化合物、制备方法和用途

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及可诱导SOS1蛋白质降解的化合物、制备方法，含有这类化合物的药物组合物以及它们的医学用途，作为SOS1降解剂，用于预防和/或治疗肿瘤。

背景技术

研究发现在约30％的肿瘤中检测到RAS基因突变，该突变在肿瘤的早期形成及发展过程中起着重要的作用。人体可编码三种RAS基因，分别为KRAS,HRAS和NRAS，其中KRAS突变在所有RAS突变的肿瘤中占的比例最大，约为86％。在致死率比较高的胰腺导管腺癌、结直肠腺癌以及肺腺癌患者中均监测到比较高的KRAS突变比例，分别为97.7％，44.7％和30.9％。KRAS突变会导致RAF-MAPK以及PI3K-AKT等信号通路持续激活，进而影响肿瘤细胞增殖、分化以及迁移等过程。KRAS在细胞中存在两种状态，一种是与GTP结合的活化状态，一种是与GDP结合的非活化状态。细胞中有两类蛋白参与调控KRAS在这两种状态之间的转换，分别是鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEFs)和GTPase激活蛋白(GAPs)。GEFs可以促进KRAS与GDP解离，从而加快KRAS与GTP结合引起KRAS蛋白激活。人体内存在多种与KRAS相关的GEFs,SOS(son of sevenless)就是其中一种重要的鸟嘌呤核苷酸交换因子，SOS蛋白是由SOS基因编码的一类功能蛋白，Bonfini等研究者在研究果蝇眼睛发育的过程中最早发现了这类蛋白，在人体内有两类结构类似的SOS蛋白：SOS1和SOS2。目前SOS1的结构和功能被广泛研究，被认为具有更主要的作用，SOS1的基因突变和过表达与肿瘤以及一些其他疾病的发生存在着重要的联系。例如有研究表明SOS1在乳腺癌干细胞的迁移和侵袭中起着重要的作用(Lin,C.H.等人，Oncotargets Ther 2018,11,5419-5428)；在HCT15结肠癌细胞中，通过降低SOS1蛋白的表达量可减少KRAS的激活以及皮下异种移植时肿瘤的产生(Depeille,P.等人，NatCell Biol 2015,17(6),804-815)；另外在胰腺癌细胞中沉默SOS基因也可减少肿瘤细胞的增殖(Jeng,H.H.等人，Nat Commun 3:1168doi:10.1038/ncomms2173(2012))。另有动物研究表明，敲除携带KRAS^G12D突变的小鼠体内的SOS1基因可显著改善其急性增殖性骨髓瘤的症状并延长小鼠的生存期(You,X.N.等人，Blood 2018,132(24),2575-2579)。

除了癌症之外，SOS基因突变导致的SOS蛋白氨基酸序列突变是导致诸多人类其他疾病的重要因素。典型的有Noonan综合征和Cardio-facio-cutaneous综合征，Noonan综合征患者会有骨骼和外貌异常等症状以及心脏缺陷和智力障碍，Cardio-facio-cutaneous综合征的患者也与前者的症状相似，对临床患者进行基因突变筛查之后发现，这两类疾病的患者均出现KRAS,BRAF,MEK1,MEK2,SOS1中多个基因的点突变以及相应编码蛋白的氨基酸突变，从而导致了RAS/RAF/MEK/ERK通路的过度激活。同样地，1型遗传性牙龈纤维瘤也是由于RAS/RAF/MEK/ERK通路过度激活而导致的疾病，该疾病是由于SOS蛋白的PR结构域突变导致的，该突变会促使SOS蛋白与细胞内膜接合从而自发地激活RAS/RAF/MEK/ERK通路进而促进的细胞的增殖(Hart,T.C.等人，Am J Hum Genet 2002,70(4),943-54)。

SOS1同时也是RAC的核苷酸交换因子，参与RAC的激活(Lu,T.Y.等人，P Natl AcadSci USA 2014,111(34),12544-12549)。

综上所述，开发作用于SOS1蛋白的调节剂有望得到一类全新的治疗药物。近些年来有一些直接作用于SOS1的小分子被报道。Yi Zhang等人通过虚拟筛选的方式得到了一类SOS1抑制剂，其中一个化合物NSC-658497与SOS1的结合活性K_d＝7.0μM,高浓度时可以抑制细胞中ERK激酶的磷酸化，并可以抑制细胞增殖(Evelyn,C.R.等人，Chem Biol 2014,21(12),1618-1628)。该课题组的另一研究中发现了两个SOS1抑制剂UC-773587以及UC-857993，这两个化合物与SOS1的结合活性也在微摩尔水平，并可以抑制胰腺癌细胞MIA-PaCa-2的增殖，但活性依然较弱(Evelyn,C.R.等人，J Biol Chem 2015,290(20),12879-12898)。

2019年Bayer公司报道了一类具有4-取代氨基苯并嘧啶类结构的化合物，该类分子可以有效抑制SOS1与KRAS之间的相互作用，代表性化合物BAY-293与SOS1的结合活性K_d＝36nM，但是进一步研究表明该化合物并不能完全抑制携带KRAS^G12C突变型的Calu-1细胞中下游信号通路ERK的磷酸化，仅能达到50％的抑制水平，但在与KRAS^G12C不可逆抑制剂联合使用时则能起到协同抑制细胞增殖的效果(Hillig,R.C.等人，P Natl Acad Sci USA2019,116(7),2551-2560)。BI公司最近也报道了一类SOS1抑制剂，其中一个代表性化合物BI-3406与SOS1的结合常数K_d＝9.7nM,并可以有效抑制KRAS突变型肿瘤细胞的增殖(Hofmann,M.H.等人,Cancer Discov.2021,11(1),142-157)。除了以上报道的SOS1抑制剂之外，Stephen W.Fesik课题组还报道了一些SOS1激动剂(如化合物34，64)，(Abbott,J.R.等人，Acs Med Chem Lett 2018,9(9),941-946.；Abbott,J.R.等人，J Med Chem 2018,61(14),6002-6017.；Abbott,J.R.等人，J Med Chem 2018,61(14),6002-6017)，这些化合物可以促进RAS蛋白与GTP的结合，在细胞中低浓度的时候可以增强ERK激酶的磷酸化水平，但在化合物浓度较高时则可以抑制ERK激酶的磷酸化。可见目前该领域依然缺乏有效的临床药物，尚处于早期研究阶段，急需开发新的化合物来证实该策略的有效性。

诱导蛋白质降解技术近些年来受到工业界以及学术界的广泛关注，认为其可以带来一类全新的小分子药物来打破传统小分子药物的作用模式。该类小分子降解剂可以看作为一个双功能分子，一端可以与靶蛋白结合，另一端可以作用于E3连接酶，该功能分子可以将目标蛋白招募到E3连接酶复合物附近，引起目标蛋白泛素化，并最终利用细胞内蛋白酶体选择性诱导目标蛋白降解(Chamberlain,P.P.等人，Nat Chem Biol 2019,15(10),937-944)。目前尚无靶向诱导SOS1降解的小分子报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种引起SOS1降解的小分子。

本发明的第一方面，提供一种结构通式如I的蛋白降解靶向嵌合体，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物或氘代化合物：

SOS1蛋白配体─连接基团L─E3连接酶配体(I)。

在另一优选例中，SOS1配体─选自下组：

式中，“*”表示R构型或S构型。

在另一优选例中，所述E3连接酶配体选自：cereblonE3连接酶配体、VHLE3连接酶配体、MDM2连接酶配体、TRIM24连接酶配体、TRIM21连接酶配体、KEAP1连接酶配体和IAP连接酶配体。

在另一优选例中，─E3连接酶配体选自下组：

式中，X为氢原子或卤素。

在另一优选例中，L表示为：-Z¹-[W¹-L’-W²]_s-Z²-

其中，Z¹与SOS1配体连接，选自-C(＝O)-、-O-或不存在；

Z²与E3连接酶配体连接，选自-(CH₂)_mC(＝O)-、-(CH₂)_mNH-、-O-或不存在；

s选自1-6之间的整数；

L’选自：

-NHCO-或不存在；

W¹和W²各自独立地选自-(CH₂)_m-，-Y-(CH₂)_m-，-(CH₂)_n-Y-，-O-(CH₂)_m-O-(CH₂)_n-，-(CH₂)_m-O-(CH₂CH₂O)_n-；

各m独立地选自0-11之间的整数；

各n独立地选自0-6之间的整数；

各Y独立地选自-O-，-S-。

在另一优选例中，所述的连接基团L选自：

式中，“*”表示R构型或S构型。

在另一优选例中，所述蛋白降解靶向嵌合体选自下组：

式中，“*”表示R构型或S构型，X为氢原子或卤素。在另一优选例中，SOS1配体─选自上述通式化合物中对应的各个结构。在另一优选例中，─E3连接酶配体选自上述通式化合物中对应的各个结构。

在另一优选例中，所述蛋白降解靶向嵌合体选自下组：

另一优选例中，SOS1配体─选自上述具体化合物中对应的各个结构。在另一优选例中，─E3连接酶配体选自上述具体化合物中对应的各个结构。

本发明的第二方面，提供一种药物组合物，所述药物组合物包含第一方面所述的通式I的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物或氘代化合物，和药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述药物组合物还包括药剂学上可接受的辅料。在另一优选例中，所述辅料选自：填充剂、粘合剂、润滑剂。优选的，所述药物组合物包含治疗有效量的通式I的化合物。

在某些实施方案中，所述药物组合物可单独使用，或与其他种类的药物联合使用。

所述其他种类药物选自：

(1).EGFR和/或其突变体的抑制剂

a.例如，阿法替尼、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、帕尼单抗、西妥昔单抗、尼莫替尼、奥西替尼、EGF-816；

b.优选的是阿法替尼、西妥昔单抗和奥西替尼；

c.最优选的是阿法替尼

(2).Her2和/或其突变体的抑制剂

a.例如，阿法替尼、曲妥珠单抗、拉帕替尼、帕妥珠单抗；

b.优选的是阿法替尼和曲妥珠单抗；

c.最优选的是曲妥珠单抗；

(3).ALK和/或其突变体的抑制剂

a.例如，阿来替尼、恩曲替尼、克唑替尼、布加替尼；

b.优选的是阿来替尼和克唑替尼

c.最优选的是克唑替尼；

(4).MEK和/或其突变体的抑制剂

a.例如，考比替尼、比美替尼、曲美替尼、舍美替尼、瑞美替尼；

b.优选的是考比替尼和曲美替尼

c.最优选的曲美替尼；

(5).KRAS G12C的抑制剂

a.例如sotorasib、adagrasib、ARS-3248、GDC-6036、AZD-4785；

(6).BCR-ABL和/或其突变体抑制剂

a.例如，尼洛替尼、伊马替尼和达沙替尼；

b.优选的是尼洛替尼和伊马替尼；

c.最优选的是伊马替尼；

(7).c-MET和/或其突变体的抑制剂

(8).紫杉烷

a.例如，紫杉醇、多西他赛；

b.优选的是紫杉醇；

(9).含铂化合物

a.例如，顺铂、奥沙利铂和卡铂；

(10).抗代谢药

a.例如，5-氟尿嘧啶、氟尿苷、吉西他滨、卡培他滨；

b.优选的吉西他滨；

(11).有丝分裂激酶抑制剂

a.例如CDK4/6抑制剂，包括阿贝西利、帕博西尼、瑞博西尼；

b.优选的是阿贝西利和帕博西尼；

c.最优选的是阿贝西利；

(12).免疫治疗剂

a.例如，免疫检查点抑制剂

ⅰ.例如，抗CTLA-4单抗、抗PD1单抗、抗PD-L1单抗、抗PD-L2单抗、抗LAG3单抗、抗TIM3单抗；

ⅱ.优选的是抗PD1单抗；

ⅲ.例如，易普利姆玛、纳武单抗、阿维鲁单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、匹地利珠单、抗派姆单抗；

ⅳ.优选的是纳武单抗和派姆单抗

ⅴ.最优选的是派姆单抗；

(13).抗血管生成药

a.例如，贝伐珠单抗、尼达尼布；

b.最优选的是贝伐珠单抗；

(14).拓扑异构酶抑制剂

a.例如，拓扑替康、伊利替康；

b.最优选的是伊利替康；

(15).A-Raf和/或B-Raf和/或其突变体抑制剂

a.例如RAF-709、LY-3009120

(16).ERK和/或其突变体抑制剂

a.例如，乌利替尼；

(17).细胞凋亡调节剂

a.例如，对p53和MDM2之间的相互作用的抑制剂；

ⅰ.例如，RG-7388、HDM-201、RG-7112、MK-8242、SAR405838、AMG-232、DS-3032；

ⅱ.优选的是RG-7388、HDM-201和AMG-232

b.例如，PARP抑制剂；

c.例如，MCL-1抑制剂；

(18).mTOR抑制剂

a.例如，雷帕霉素、依维莫司、替西罗莫司、地磷莫司；

(19).表观遗传调节剂

a.例如，BET抑制剂

ⅰ.例如，JQ-1、OTX 015、GSK 525762、TEN-010；

b.例如，CDK9抑制剂；

(20).IGF1/2和/或IGF1-R的抑制剂

a.例如，珍妥珠单抗、MEDI-573。

本发明的第三方面，提供第一方面所述的通式I的化合物及其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物或氘代化合物在制备与SOS1相关的疾病的药物中的应用。

在另一优选例中，所述的与SOS1相关的疾病选自：遗传性疾病、癌症。

所述遗传性疾病选自：心面皮肤综合征、1型遗传性齿龈纤维瘤病、努南综合征。

所述癌症选自：结肠癌、淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤、胃癌、恶性横纹肌样瘤、肝细胞癌、前列腺癌、乳腺癌、胆管及胆囊癌、膀胱癌；脑瘤、包括神经母细胞瘤、神经鞘瘤、神经胶质瘤、神经胶质母细胞瘤及星细胞瘤；子宫颈癌、黑色素瘤、子宫内膜癌、食道癌、头颈癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、肾细胞癌、直肠癌、甲状腺癌、副甲状腺肿瘤、子宫肿瘤及软组织肉瘤。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。说明书中所揭示的各个特征，可以被任何提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1示出实施例1中化合物ZZ02151可剂量依赖性诱导NCI-H358细胞中SOS1蛋白质的降解。

图2示出实施例45中化合物ZC79070可剂量依赖性诱导NCI-H358细胞中SOS1蛋白质的降解。

图3示出实施例45中化合物ZC79070对NCI-H358细胞中SOS1蛋白的的半数降解浓度DC₅₀及最大降解程度。

图4为实施例1中化合物ZZ02151对H358细胞的抗增殖活性研究结果图。

图5为实施例45中化合物ZC79070对H358细胞的抗增殖活性研究结果图。

具体实施方式

本申请的发明人经过广泛而深入地研究，通过在SOS1调节剂分子中指向溶剂区域部分引入E3连接酶配体，设计并合成了一类可引起SOS1降解的小分子，并对其进行细胞活性测试以及降解机制研究，为开发用于治疗与SOS1、RAS或RAC蛋白功能失调相关疾病的药物奠定基础。

术语

在本发明中，除非特别指出，所用术语具有本领域技术人员公知的一般含义。

在本发明中，所述卤素为F、Cl、Br或I。

本发明所述药学上可接受的盐可以是阴离子与式I化合物上带正电荷的基团形成的盐。合适的阴离子为氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、柠檬酸根、甲基磺酸根、三氟乙酸根、乙酸根、苹果酸根、甲苯磺酸根、酒石酸根、富马酸根、谷氨酸根、葡糖醛酸根、乳酸根、戊二酸根或马来酸根。类似地，可以由阳离子与式I化合物上的带负电荷的基团形成盐。合适的阳离子包括钠离子、钾离子、镁离子、钙离子和铵离子，例如四甲基铵离子。

在另一优选例中，“药学上可接受的盐”是指式I化合物同选自下组的酸形成的盐类：氢氟酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、乙酸、草酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、胺基磺酸、水杨酸、三氟甲磺酸、萘磺酸、马来酸、柠檬酸、醋酸、乳酸、酒石酸、琥珀酸、酢浆草酸、丙酮酸、苹果酸、谷氨酸、对甲苯磺酸、萘磺酸、乙磺酸、萘二磺酸、丙二酸、富马酸、丙酸、草酸、三氟乙酸、硬酯酸、扑酸、羟基马来酸、苯乙酸、苯甲酸、谷氨酸、抗坏血酸、对胺基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸和羟乙磺酸等；或者式I化合物与无机碱形成的钠盐、钾盐、钙盐、铝盐或铵盐；或者通式I化合物与有机碱形成的甲胺盐、乙胺盐或乙醇胺盐。

药物组合物

本发明还提供了一种药物组合物，它包含安全有效量范围内的活性成分，以及药学上可接受的载体。

本发明所述的“活性成分”是指本发明所述的式I化合物。

本发明所述的“活性成分”和药物组合物可用作SOS1降解剂，诱导SOS1蛋白质降解，用于预防和/或治疗癌症，选自：结肠癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、其他淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤、胃癌、恶性横纹肌样瘤、肝细胞癌、前列腺癌、乳腺癌、胆管及胆囊癌、膀胱癌；脑瘤、包括神经母细胞瘤、神经鞘瘤、神经胶质瘤、神经胶质母细胞瘤及星细胞瘤；子宫颈癌、黑色素瘤、子宫内膜癌、食道癌、头颈癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、肾细胞癌、直肠癌、甲状腺癌、副甲状腺肿瘤、子宫肿瘤及软组织肉瘤。用于治疗遗传性疾病，选自：心面皮肤综合征、1型遗传性齿龈纤维瘤病、努南综合征。

“安全有效量”指的是：活性成分的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg活性成分/剂，更佳地，含有10-200mg活性成分/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个药片。

“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如

)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

本发明的活性成分或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)等。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性成分外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性成分外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

本发明化合物可以单独给药，或者与其他治疗药物(如抗肿瘤药)联合给药。

使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件(如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中所述的条件)或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1

(2S,4R)-1-((S)-2-(7-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-7-氧庚酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑)-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

第一步：7-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷酮-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁丁-2-基)氨基)-7-氧庚酸

将(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐(100mg，0.21mmol)，庚二酸(83.2mg，0.52mmol)，EDCI(47.8mg，0.25mmol)，HOAT(5.66mg，0.04mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4.5mL)与二氯甲烷(0.3mL)的混合溶液中，在冰浴条件下加入N-甲基吗啉(114μL，1.04mmol)并保温搅拌12小时。向反应中加入水，用二氯甲烷萃取，分离有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过制备型HPLC进行纯化，冷冻干燥后得到7-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷酮-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁丁-2-基)氨基)-7-氧庚酸(63mg，收率：52％)。

第二步：(2S,4R)-1-((S)-2-(7-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-7-氧庚酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑)-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

将(R)-N-(1-(3-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-甲氧基-2-甲基-6-(哌啶-4-基)喹唑啉-4-胺(50mg，0.11mmol)，7-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷酮-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁丁-2-基)氨基)-7-氧庚酸(64mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，在冰浴条件下加入N,N-二异丙基乙胺(90μL，0.55mmol)并保温搅拌4小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep--HPLC进行纯化，冷冻干燥后得到(2S,4R)-1-((S)-2-(7-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-7-氧庚酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑)-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(30mg，收率27％)。

¹H NMR(500MHz,Methanol-d₄)δ8.97(s,1H),8.30(s,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,2H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H),7.11(s,1H),7.07(s,1H),7.04(s,1H),6.97(s,1H),5.79(dt,J＝8.7,6.2Hz,1H),5.03–4.95(m,1H),4.78–4.69(m,1H),4.62(s,1H),4.61–4.53(m,1H),4.43(s,1H),4.17–4.08(m,1H),4.04(s,3H),3.87(d,J＝11.0Hz,1H),3.74(dd,J＝11.0,3.2Hz,1H),3.39(t,J＝12.1Hz,1H),3.30–3.22(m,1H),2.76(t,J＝12.7Hz,1H),2.63(s,3H),2.48(s,3H),2.47–2.43(m,2H),2.42–2.40(m,1H),2.36–2.31(m,1H),2.30–2.24(m,1H),2.19(t,J＝7.6Hz,1H),2.07–1.89(m,4H),1.71(d,J＝7.1Hz,3H),1.68–1.59(m,4H),1.50(d,J＝6.9,1.2Hz,3H),1.45–1.37(m,2H),1.04(s,9H).MS-ESI m/z＝1028.4[M+1]⁺.

实施例2

(2R,4R)-1-((R)-2-(7-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-7-氧代庚酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((R)-1-(4-(4-甲基噻唑)-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例1，由相同方法可得到ZZ77061。

¹H NMR(500MHz,Methanol-d₄)δ8.95(d,J＝11.9Hz,1H),8.30(s,1H),7.47–7.40(m,4H),7.14–6.99(m,3H),6.98–6.88(m,1H),5.78(d,J＝7.2Hz,1H),5.38–5.30(m,1H),5.04–4.99(m,1H),4.74(d,J＝12.9Hz,1H),4.50(s,1H),4.46(dd,J＝9.3,4.6Hz,1H),4.36(t,J＝4.6Hz,1H),4.14(s,1H),4.07–3.95(m,4H),3.65(d,J＝10.4Hz,1H),3.43–3.35(m,1H),3.25(d,J＝13.1Hz,1H),2.75(t,J＝12.8Hz,1H),2.63(d,J＝1.5Hz,3H),2.51–2.36(m,5H),2.35–2.24(m,1H),2.19(t,J＝7.6Hz,1H),2.03(d,J＝6.4Hz,1H),1.95–1.85(m,1H),1.70(d,J＝7.1Hz,3H),1.64(d,J＝7.5Hz,3H),1.49(d,J＝7.0Hz,3H),1.40(d,J＝7.6Hz,1H),1.35–1.26(m,5H),1.04(d,J＝2.1Hz,9H).MS-ESI m/z＝1028.4[M+1]⁺.

实施例3

(2S,4R)-1-((S)-2-(8-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-8-氧辛基氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑)-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例1，由相同方法可得到ZZ77076。

¹H NMR(500MHz,Methanol-d₄)δ9.00(d,J＝8.9Hz,1H),8.89(d,J＝5.7Hz,2H),8.67(ddt,J＝7.9,6.5,1.5Hz,1H),8.30(s,1H),8.12(t,J＝6.9Hz,2H),7.45(d,J＝8.4Hz,2H),7.42(d,J＝8.5Hz,2H),7.18(d,J＝23.3Hz,2H),7.06(q,J＝6.0,4.2Hz,2H),5.79(q,J＝7.1Hz,1H),4.74(d,J＝13.4Hz,1H),4.62(s,1H),4.57(t,J＝8.1Hz,1H),4.42(tt,J＝4.2,2.0Hz,1H),4.13(d,J＝13.9Hz,1H),4.04(s,3H),3.87(d,J＝11.1Hz,1H),3.74(dd,J＝11.0,3.9Hz,1H),3.43–3.35(m,1H),3.25(d,J＝13.0Hz,1H),2.80–2.71(m,1H),2.63(s,3H),2.53–2.41(m,4H),2.30(tq,J＝14.0,7.1,6.7Hz,2H),2.20(dd,J＝12.9,7.8Hz,1H),2.05–1.87(m,2H),1.73–1.70(m,4H),1.68–1.59(m,6H),1.50(d,J＝7.0Hz,3H),1.07–1.03(m,10H).MS-ESI m/z＝1042.5[M+1]⁺.

实施例4

(2S,4R)-1-((S)-2-(10-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-10-氧代十二烷基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑)-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例1，由相同方法可得到ZZ77077。MS-ESI m/z＝1070.5[M+1]⁺.

实施例5

(2S,4R)-1-((S)-2-(11-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-11-氧杂十二烷)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑)-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例1，由相同方法可得到ZZ77078。MS-ESI m/z＝1084.5[M+1]⁺.

实施例6

(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-2-(10-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基哌啶-1-基)-10-氧代十二烷酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例1，由相同方法可得到ZZ49071。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.54(s,1H),8.99(s,1H),8.52(s,2H),8.31(d,J＝7.8Hz,1H),7.83(d,J＝8.9Hz,1H),7.44(d,J＝8.3Hz,2H),7.39(d,J＝8.3Hz,2H),6.87(d,J＝1.7Hz,1H),6.81(d,J＝6.8Hz,2H),6.56(d,J＝1.8Hz,1H),5.11(s,2H),4.92(t,J＝7.1Hz,1H),4.45(d,J＝8.8Hz,1H),4.41(d,J＝13.2Hz,2H),4.31(dd,J＝8.6,6.3Hz,1H),4.24(s,3H),4.19(t,J＝5.7Hz,1H),4.13(t,J＝6.3Hz,2H),3.60(d,J＝11.7Hz,3H),3.38(dd,J＝10.2,5.4Hz,1H),3.24–3.12(m,4H),3.07(t,J＝12.5Hz,2H),2.45(s,3H),2.27(ddd,J＝29.7,13.0,7.1Hz,2H),2.16(d,J＝2.0Hz,6H),2.10(dt,J＝12.2,6.2Hz,1H),1.72–1.63(m,4H),1.48(dt,J＝15.2,7.4Hz,1H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.26(d,J＝31.2Hz,7H),0.95(s,9H).MS-ESI m/z＝1055.5[M+1]⁺.

实施例7

(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-2-(12-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基哌啶-1-基)-12-氧十二烷酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-yl)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例1，由相同方法可得到ZZ02030。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.88(d,J＝7.5Hz,1H),8.98(s,1H),8.36(d,J＝7.8Hz,1H),8.32(s,1H),7.82(d,J＝2.1Hz,1H),7.78(s,1H),7.76(d,J＝2.8Hz,1H),7.66(d,J＝7.7Hz,1H),7.62(t,J＝7.7Hz,1H),7.44–7.41(m,2H),7.39–7.36(m,2H),7.07(s,1H),5.85(p,J＝7.3Hz,1H),5.32(t,J＝5.0Hz,1H),5.09(s,1H),4.91(p,J＝7.2Hz,1H),4.64(d,J＝13.2Hz,1H),4.51(d,J＝9.3Hz,1H),4.41(t,J＝8.0Hz,1H),4.27(q,J＝3.5,3.0Hz,1H),4.02(d,J＝14.6Hz,1H),3.99(s,3H),3.66–3.54(m,2H),3.24(t,J＝11.8Hz,2H),3.14(t,J＝12.9Hz,2H),2.67–2.60(m,1H),2.56(s,3H),2.45(s,3H),2.36(p,J＝1.8Hz,1H),2.33–2.29(m,1H),2.29–2.24(m,1H),2.24–2.20(m,1H),2.08(dt,J＝13.7,6.9Hz,1H),1.82–1.75(m,2H),1.69(d,J＝7.1Hz,3H),1.48(dt,J＝25.2,8.9Hz,8H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.29–1.18(m,8H),0.92(s,9H).MS-ESI m/z＝1083.5[M+1]⁺.

实施例8

(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-2-(7-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基哌啶-1-基)-7-氧代庚酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-yl)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例1，由相同方法可得到ZZ02080。MS-ESI m/z＝1013.5[M+1]⁺.

实施例9

(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-2-(8-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基哌啶-1-基)-8-氧辛基氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例1，由相同方法可得到ZZ02083。MS-ESI m/z＝1027.5[M+1]⁺.

实施例10

(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-2-(9-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基哌啶-1-基)-9-氧代萘酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-yl)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例1，由相同方法可得到ZZ49107。MS-ESI m/z＝1041.5[M+1]⁺.

实施例11

(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-2-(11-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基哌啶-1-基)-11-氧杂十二烷)-3,3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-yl)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例1，由相同方法可得到ZZ02038。MS-ESI m/z＝1069.5[M+1]⁺.

实施例12

(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-2-(2-(3-(2-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R]-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-2-氧乙氧基)丙氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例1，由相同方法可得到ZZ02103。MS-ESIm/z＝1045.5[M+1]⁺.

实施例13

(2S,4R)-1-((S)-2-(9-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-9-氧代萘酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑)-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例1，由相同方法可得到ZZ02102。

¹H NMR(500MHz,Methanol-d₄)δ8.97(s,1H),8.29(s,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,2H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H),7.09–7.03(m,2H),7.03(s,1H),6.94–6.91(m,1H),5.79(dd,J＝7.0,3.5Hz,1H),5.00(q,J＝7.1Hz,1H),4.74(d,J＝13.3Hz,1H),4.62(s,1H),4.57(td,J＝7.8,7.0,3.9Hz,1H),4.43(s,1H),4.13(d,J＝14.1Hz,1H),4.04(d,J＝2.4Hz,3H),3.88(d,J＝11.1Hz,1H),3.74(dd,J＝11.0,3.9Hz,1H),3.69–3.66(m,1H),3.57–3.55(m,1H),3.43–3.35(m,1H),3.29–3.22(m,1H),2.75(t,J＝12.4Hz,1H),2.63(d,J＝1.2Hz,3H),2.48(d,J＝1.5Hz,3H),2.34–2.24(m,2H),1.98–1.88(m,2H),1.71(d,J＝7.0Hz,3H),1.67–1.60(m,8H),1.51(d,J＝7.0Hz,3H),1.37(s,6H),1.04(s,9H).MS-ESI m/z＝1056.5[M+1]⁺.

实施例14

(2S,4R)-1-((S)-2-(5-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7)-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-5-氧代戊酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑)-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例1，由相同方法可得到ZZ02150。

¹H NMR(500MHz,Methanol-d₄)δ9.00(s,1H),8.31(d,J＝2.4Hz,1H),7.47–7.39(m,4H),7.20–7.09(m,2H),7.05(s,1H),7.03–6.93(m,1H),5.79(q,J＝6.9Hz,1H),5.03–4.98(m,1H),4.74(d,J＝13.6Hz,1H),4.62(d,J＝2.6Hz,1H),4.56(dt,J＝8.3,4.3Hz,1H),4.44–4.41(m,1H),4.13(d,J＝13.6Hz,1H),4.04(s,3H),3.99(d,J＝9.8Hz,1H),3.87(s,1H),3.75(s,1H),3.39(td,J＝12.1,3.3Hz,1H),3.26(t,J＝13.1Hz,1H),2.83–2.71(m,1H),2.63(s,3H),2.62(d,J＝3.1Hz,1H),2.50–2.46(m,5H),2.19(t,J＝7.5Hz,2H),1.95–1.89(m,2H),1.72(d,J＝7.0Hz,3H),1.70–1.64(m,2H),1.63–1.56(m,2H),1.49(dd,J＝14.3,7.0Hz,3H),1.05(s,9H).MS-ESI m/z＝1000.5[M+1]⁺.

实施例15

(2S,4R)-1-((S)-2-(6-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7)-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-6-氧六酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑)-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例1，由相同方法可得到ZZ02152。

¹H NMR(500MHz,Methanol-d₄)δ9.02(d,J＝3.8Hz,1H),8.31(d,J＝2.0Hz,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,2H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H),7.17(s,2H),7.05(d,J＝1.4Hz,1H),7.02(s,1H),5.80(q,J＝7.1Hz,1H),4.99(d,J＝7.1Hz,1H),4.74(d,J＝13.3Hz,1H),4.62(d,J＝3.1Hz,1H),4.57(ddd,J＝9.2,7.8,2.0Hz,1H),4.42(dt,J＝4.5,2.3Hz,1H),4.14(d,J＝13.6Hz,1H),4.04(s,4H),3.85(t,J＝12.0Hz,1H),3.74(dt,J＝10.9,3.7Hz,1H),3.44–3.35(m,1H),3.27(t,J＝14.0Hz,1H),2.76(t,J＝12.7Hz,1H),2.63(s,3H),2.49(s,3H),2.19(t,J＝7.6Hz,2H),1.93(td,J＝8.8,4.3Hz,2H),1.74–1.69(m,3H),1.69–1.64(m,8H),1.50(dd,J＝7.0,2.3Hz,4H),1.04(s,9H).MS-ESI m/z＝1014.5[M+1]⁺.

实施例16

(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-2-(9-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基哌啶-1-基)壬酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

第一步：(2S,4R)-1-((S)-2-(9-溴代氨基苯并)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

将(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐(100mg，0.21mmol)，9-溴壬酸(54mg，0.23mmol)，HATU(87mg，0.23mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，在冰浴条件下加入N,N-二异丙基乙胺(137μL，0.83mmol)并保温搅拌1小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep--HPLC进行纯化，冷冻干燥后得到(2S,4R)-1-((S)-2-(9-溴代氨基苯并)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(86mg，收率62％)。

第二步：(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-2-(9-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基哌啶-1-基)壬酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

将(2S,4R)-1-((S)-2-(9-溴代氨基苯并)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(75mg，0.11mmol)，(R)-7-甲氧基-2-甲基-6-(哌啶-4-基)-N-(1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)喹唑啉-4-胺(50mg，0.11mmol)，溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(93μL，0.56mmol)，60℃搅拌16小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep--HPLC进行纯化，冷冻干燥后得到(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-2-(9-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基哌啶-1-基)壬酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(43mg，收率37％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.28(s,1H),8.99(s,1H),8.37(d,J＝7.8Hz,1H),8.27(s,1H),7.82(s,1H),7.81–7.76(m,2H),7.67(d,J＝7.7Hz,1H),7.62(t,J＝7.7Hz,1H),7.43(d,J＝8.1Hz,2H),7.38(d,J＝8.1Hz,2H),7.11(s,1H),5.88(p,J＝7.0Hz,1H),5.11(s,1H),4.91(p,J＝7.0Hz,1H),4.52(d,J＝9.4Hz,1H),4.41(t,J＝8.1Hz,1H),4.28(s,1H),3.99(s,3H),3.61(td,J＝10.4,9.9,3.1Hz,4H),3.52–3.46(m,3H),3.23–3.16(m,2H),3.15–3.05(m,4H),2.58(s,3H),2.45(s,3H),2.27(dt,J＝14.8,7.6Hz,1H),2.15–2.05(m,4H),2.03–1.91(m,4H),1.79(ddd,J＝12.9,8.5,4.6Hz,1H),1.70(d,J＝7.0Hz,3H),1.68(s,2H),1.57–1.43(m,4H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),0.94(s,9H).MS-ESI m/z＝1027.5[M+1]⁺.

实施例17

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(2-(3-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)氨基二氢吲哚-1,3-二酮

第一步：3-(2-(2-(((2-(2,6-二氧杂哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯

将3-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(100mg，0.43mmol)，2-(2,6-二氧杂哌啶-3-基)-4-氟异吲哚-1,3-二酮(130mg，0.47mmol)溶于二甲亚砜(10mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(354μL，2.14mmol)，80℃搅拌12小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep--TLC进行纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到3-(2-(2-(((2-(2,6-二氧杂哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(156mg，收率74％)。

第二步：3-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚-4-基-氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸

将3-(2-(2-(((2-(2,6-二氧杂哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(100mg，0.20mmol)溶于二氯甲烷(4mL)，在冰浴条件下滴加氯化氢二氧六环溶液(4mL，16mmol)，室温搅拌12小时，减压浓缩后得到3-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚-4-基-氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸粗品，直接用于下一步反应。

第三步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(2-(3-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)氨基二氢吲哚-1,3-二酮

将(R)-7-甲氧基-2-甲基-6-(哌啶-4-基)-N-(1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)喹唑啉-4-胺(25mg，0.06mmol)，3-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚-4-基-氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸(24mg，0.06mmol)，HATU(26mg，0.07mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，冰浴条件下加入N,N-二异丙基乙胺(47μL，0.28mmol)，保温搅拌12小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep--HPLC进行纯化，冷冻干燥后得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(2-(3-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)氨基二氢吲哚-1,3-二酮(23mg，收率47％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ11.10(s,1H),9.88(d,J＝7.6Hz,1H),8.30(s,1H),7.82(s,1H),7.77(d,J＝7.7Hz,1H),7.66(d,J＝7.7Hz,1H),7.62(t,J＝7.7Hz,1H),7.54(q,J＝8.0Hz,1H),7.09–7.00(m,3H),6.59–6.53(m,1H),5.84(q,J＝6.7Hz,1H),5.04(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.63(d,J＝12.7Hz,1H),4.03(d,J＝13.3Hz,1H),3.98(s,3H),3.64(t,J＝6.6Hz,2H),3.60–3.51(m,8H),3.40(s,3H),3.24(s,2H),3.12(t,J＝13.2Hz,1H),2.87(t,J＝17.1Hz,1H),2.65–2.54(m,7H),1.85–1.74(m,2H),1.72–1.62(m,3H).MS-ESI m/z＝860.5[M+1]⁺.

实施例18

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((15-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基乙基)氨基)喹唑啉-6-基)-3,6-二氢吡啶-1-1(2H)-基)-15-氧代-3,6,9,12-四氧戊十五烷基)氨基二氢吲哚-1,3-二酮

参照实施例17，由相同方法可得到RX70060。

¹H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ9.08–8.75(m,2H),8.04(s,1H),7.72(s,1H),7.66(s,1H),7.50(d,J＝7.3Hz,1H),7.48–7.32(m,4H),7.01(dt,J＝7.7,3.9Hz,1H),6.87(d,J＝8.3Hz,1H),5.79(d,J＝56.5Hz,2H),4.89(dd,J＝12.0,6.0Hz,1H),4.34–4.02(m,2H),3.87(s,3H),3.82–3.52(m,18H),3.43(s,2H),2.91–2.79(m,1H),2.68(d,J＝51.2Hz,7H),2.44(d,J＝45.9Hz,1H),2.15–2.05(m,1H),1.81–1.65(m,3H).MS-ESI m/z＝946.4[M+1]⁺.

实施例19

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((15-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基乙基)氨基)喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-15-氧代-3,6,9,12-四氧五十五烷基)氨基)二氢吲哚-1,3-二酮

参照实施例17，由相同方法可得到ZZ02036。MS-ESI m/z＝948.4[M+1]⁺.

实施例20

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(2-(3-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)氨基二氢吲哚-1,3-二酮

参照实施例17，由相同方法可得到RX70052。MS-ESI m/z＝858.3[M+1]⁺.

实施例21

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-羰基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

第一步：1-(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)哌啶-4-羧酸甲酯

将哌啶-4-羧酸甲酯(100mg，0.70mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，依次加入三乙胺(291μL，2.10mmol)和溴乙酸叔丁酯(163mg，0.84mmol)，室温搅拌12小时。向反应中加入水，用二氯甲烷萃取，用饱和氯化钠水溶液洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝20/1)进行纯化后得到1-(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)哌啶-4-羧酸甲酯(150mg，收率83％)。

第二步：2-(4-(甲氧基羰基)哌啶-1-基)乙酸

将1-(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)哌啶-4-羧酸甲酯(100mg，0.39mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，冰浴条件下滴加氯化氢二氧六环溶液(16mmol，4mL)，室温搅拌4小时。减压浓缩，所得2-(4-(甲氧基羰基)哌啶-1-基)乙酸粗品直接用于下一步反应。

第三步：1-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基))氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙基)哌啶-4-羧酸甲酯

将1-(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)哌啶-4-羧酸甲酯(20mg，0.10mmol)，(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐(48mg，0.10mmol)，HATU(45mg，0.12mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，冰浴条件下加入N,N-二异丙基乙胺(82μL，0.50mmol)并保温搅拌1小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep-p-TLC(二氯甲烷/甲醇＝20/1)进行纯化得到1-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基))氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙基)哌啶-4-羧酸甲酯(46mg，收率74％)。

第四步：1-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基))氨基甲酰基)吡咯烷基-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙基)哌啶-4-羧酸

将1-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基))氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙基)哌啶-4-羧酸甲酯(46mg，0.07mmol)溶于四氢呋喃(1mL)、甲醇(1mL)和水(1mL)的混合溶液中，加入氢氧化锂(18mg，0.73mmol)，40℃搅拌12小时。用饱和柠檬酸水溶液调节pH至4～5，用乙酸乙酯和水进行萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。用Prep--HPLC进行纯化，冷冻干燥后得到1-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基))氨基甲酰基)吡咯烷基-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙基)哌啶-4-羧酸(31mg，收率69％)。

第五步：(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-羰基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

将(R)-N-(1-(3-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-甲氧基-2-甲基-6-(哌啶-4-基)喹唑啉-4-胺(20mg，0.04mmol)，1-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基))氨基甲酰基)吡咯烷基-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙基)哌啶-4-羧酸(27mg，0.04mmol)，HATU(20mg，0.05mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，冰浴条件下加入N,N-二异丙基乙胺(39μL，0.22mmol)并保温搅拌1小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep--HPLC进行纯化得到(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-羰基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(23mg，收率50％)。

1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.95(s,1H),8.31(s,1H),7.45(d,J＝8.2Hz,2H),7.42(d,J＝8.3Hz,2H),7.13–7.00(m,3H),6.97–6.86(m,1H),5.78(p,J＝6.6Hz,1H),5.04–4.97(m,1H),4.78–4.72(m,1H),4.64(s,1H),4.60–4.54(m,1H),4.45(s,1H),4.27–4.17(m,1H),4.08–4.01(m,4H),3.94–3.85(m,1H),3.75(dd,J＝11.0,3.8Hz,1H),3.71–3.59(m,2H),3.54–3.36(m,3H),3.21–3.04(m,3H),2.79(t,J＝12.7Hz,1H),2.63(s,3H),2.49(s,3H),2.26–2.18(m,1H),2.16–1.89(m,9H),1.70(d,J＝7.0Hz,3H),1.51(d,J＝7.0Hz,3H),1.07(s,9H).MS-ESI m/z＝1055.5[M+1]⁺.

实施例22

(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(4-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-羰基)哌啶-1-基)丙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例21，由相同方法可得到ZZ77122。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.85(s,1H),9.20(s,1H),8.99(s,1H),8.39(d,J＝7.9Hz,1H),8.32(d,J＝3.3Hz,1H),8.27(d,J＝9.2Hz,1H),7.45–7.41(m,2H),7.38(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(s,1H),6.86(s,1H),6.84(s,1H),6.75(d,J＝2.1Hz,1H),5.79–5.66(m,1H),4.92(p,J＝7.0Hz,1H),4.63(d,J＝13.2Hz,1H),4.54(d,J＝9.3Hz,1H),4.40(t,J＝8.2Hz,1H),4.29(s,1H),4.12(d,J＝13.6Hz,1H),4.00(s,4H),3.30–3.25(m,4H),3.18(d,J＝17.8Hz,2H),2.96(s,4H),2.79–2.62(m,2H),2.59(d,J＝2.6Hz,3H),2.45(s,2H),2.41–2.31(m,1H),2.02(t,J＝10.2Hz,1H),1.89(d,J＝16.9Hz,3H),1.84–1.72(m,4H),1.62(dd,J＝7.1,2.7Hz,3H),1.49(d,J＝7.1Hz,1H),1.37(d,J＝6.9Hz,3H),0.95(s,9H).MS-ESI m/z＝1069.5[M+1]⁺.

实施例23

(2S,4R)-1-((S)-2-((1R，4S)-4-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基]乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-羰基)环己烷-1-甲酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例21，由相同方法可得到ZZ77112。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.88(d,J＝7.8Hz,1H),9.00(s,1H),8.41(d,J＝7.5Hz,1H),8.34(s,1H),7.72(s,1H),7.45(d,J＝8.3Hz,2H),7.39(d,J＝8.3Hz,2H),7.08(s,1H),6.88(s,1H),6.86(s,1H),6.77(d,J＝2.1Hz,1H),5.78–5.69(m,1H),4.93(t,J＝7.3Hz,1H),4.66(d,J＝12.7Hz,1H),4.51(d,J＝9.4Hz,1H),4.42(t,J＝8.1Hz,1H),4.29(s,1H),4.21–4.11(m,1H),4.01(s,3H),3.67–3.55(m,4H),3.17(d,J＝6.6Hz,4H),2.60(s,3H),2.47(s,3H),2.01(q,J＝9.0,8.1Hz,1H),1.89(s,1H),1.80(q,J＝8.2Hz,2H),1.68(s,4H),1.64(d,J＝7.1Hz,3H),1.58–1.41(m,2H),1.39(d,J＝7.0Hz,3H),1.25(s,4H),0.94(s,9H).MS-ESI m/z＝1040.5[M+1]⁺.

实施例24

(2S,4R)-1-((S)-2-(4-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

第一步：(R)-4-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-氧基)丁酸甲酯

将(R)-1-(4-(4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-羟基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)乙-1-酮(50mg，0.10mmol)，碳酸钾(28mg，0.20mmol)溶于乙腈(4mL)中，加入4-溴丁酸甲酯(28mg，0.15mmol)，加热至70℃搅拌12小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep-p-TLC(二氯甲烷/甲醇＝20/1)进行纯化得到(R)-4-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-氧基)丁酸甲酯(47mg，收率78％)。

第二步：(R)-4-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)丁酸

将(R)-4-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-氧基)丁酸甲酯(40mg，0.07mmol)溶于四氢呋喃(1mL)、甲醇(1mL)和水(1mL)的混合溶液中，加入氢氧化锂(16mg，0.68mmol)，40℃搅拌12小时。用饱和柠檬酸水溶液调节pH至4～5，用乙酸乙酯和水进行萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。得到(R)-4-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)丁酸粗品直接用于下一步反应。

第三步：(2S,4R)-1-((S)-2-(4-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

将(R)-4-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)丁酸(30mg，0.05mmol)，(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐(25mg，0.05mmol)，HATU(24mg，0.06mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，冰浴条件下加入N,N-二异丙基乙胺(43μL，0.26mmol)并保温搅拌1小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep--HPLC进行纯化，冷冻干燥后得到(2S,4R)-1-((S)-2-(4-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(30mg，收率57％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.84(d,J＝8.0Hz,1H),8.99(s,1H),8.38(d,J＝7.8Hz,1H),8.32(d,J＝3.9Hz,1H),7.87(d,J＝9.2Hz,1H),7.43(d,J＝8.2Hz,2H),7.37(d,J＝8.1Hz,2H),7.03(s,1H),6.86(s,1H),6.85(s,1H),6.75(s,1H),5.72(p,J＝7.7,7.1Hz,1H),4.91(p,J＝6.8Hz,1H),4.63(d,J＝12.8Hz,1H),4.52(d,J＝9.3Hz,1H),4.40(t,J＝8.2Hz,1H),4.28(s,1H),4.17(t,J＝6.4Hz,2H),3.99(d,J＝13.4Hz,1H),3.61–3.57(m,3H),3.27–3.17(m,4H),2.68–2.61(m,2H),2.58(s,3H),2.45(s,3H),2.34–2.28(m,1H),2.20–2.12(m,1H),2.04(d,J＝3.4Hz,3H),2.00(d,J＝8.2Hz,1H),1.89–1.82(m,3H),1.81–1.74(m,2H),1.62(dd,J＝7.0,2.0Hz,3H),1.50–1.43(m,2H),1.37(d,J＝6.9Hz,3H),0.93(s,9H).MS-ESI m/z＝1000.5[M+1]⁺.

实施例25

(2S,4R)-1-((S)-2-(6-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)六氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例24，由相同方法可得到ZZ24064。

1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.84(d,J＝8.1Hz,1H),8.99(s,1H),8.38(d,J＝7.8Hz,1H),8.32(d,J＝3.9Hz,1H),7.87(d,J＝9.2Hz,1H),7.43(d,J＝8.2Hz,2H),7.37(d,J＝8.1Hz,2H),7.03(s,1H),6.86(s,1H),6.85(s,1H),6.75(s,1H),5.72(t,J＝7.3Hz,1H),4.91(p,J＝7.1Hz,1H),4.63(d,J＝12.7Hz,1H),4.52(d,J＝9.3Hz,1H),4.40(t,J＝8.2Hz,1H),4.28(s,1H),4.17(t,J＝6.4Hz,2H),3.99(d,J＝13.4Hz,1H),3.66–3.55(m,2H),3.22(t,J＝14.2Hz,2H),2.69–2.60(m,1H),2.58(s,3H),2.45(s,3H),2.34–2.29(m,1H),2.21–2.12(m,1H),2.04(d,J＝3.4Hz,3H),1.85(d,J＝6.5Hz,2H),1.78(dt,J＝13.0,5.5Hz,1H),1.62(dd,J＝7.0,2.0Hz,5H),1.45(t,J＝8.3Hz,2H),1.37(d,J＝6.9Hz,3H),1.23(d,J＝3.8Hz,2H),0.93(s,9H).MS-ESI m/z＝1028.5[M+1]⁺.

实施例26

(2S,4R)-1-((S)-2-(8-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)十八胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例24，由相同方法可得到ZZ24065。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.84(d,J＝7.9Hz,1H),8.99(s,1H),8.39(d,J＝7.8Hz,1H),8.32(d,J＝3.4Hz,1H),7.82(d,J＝9.3Hz,1H),7.43(d,J＝8.3Hz,2H),7.37(d,J＝8.3Hz,2H),7.05(d,J＝4.8Hz,1H),6.86(s,1H),6.85(s,1H),6.76(s,1H),5.78–5.68(m,1H),4.91(p,J＝7.0Hz,1H),4.62(d,J＝12.8Hz,1H),4.52(d,J＝9.3Hz,1H),4.41(t,J＝8.1Hz,1H),4.27(s,1H),4.17(t,J＝6.4Hz,2H),3.98(t,J＝11.2Hz,1H),3.18(q,J＝14.1Hz,2H),2.66–2.61(m,1H),2.58(s,3H),2.45(s,3H),2.33–2.24(m,1H),2.15–2.06(m,1H),2.06–1.97(m,4H),1.88–1.75(m,4H),1.62(dd,J＝7.2,1.8Hz,3H),1.45(d,J＝7.7Hz,3H),1.37(d,J＝7.0Hz,4H),1.32–1.22(m,2H),0.92(s,9H).MS-ESI m/z＝1056.5[M+1]⁺.

实施例27

(2S,4R)-1-((S)-2-(10-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)十酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例24，由相同方法可得到ZZ24066。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.88–9.81(m,1H),8.99(s,1H),8.39(d,J＝7.8Hz,1H),8.32(d,J＝3.5Hz,1H),7.81(d,J＝9.4Hz,1H),7.43(d,J＝8.3Hz,2H),7.37(d,J＝8.2Hz,2H),7.04(s,1H),6.86(s,1H),6.85(s,1H),6.76(d,J＝2.2Hz,1H),5.72(t,J＝7.3Hz,1H),4.91(p,J＝7.2Hz,1H),4.62(d,J＝12.7Hz,1H),4.51(d,J＝9.4Hz,1H),4.40(t,J＝8.1Hz,1H),4.27(s,1H),4.17(t,J＝6.3Hz,2H),3.98(d,J＝13.5Hz,1H),3.26–3.11(m,2H),2.65–2.60(m,1H),2.58(d,J＝1.1Hz,3H),2.45(s,3H),2.36(p,J＝1.9Hz,1H),2.26(dt,J＝14.9,7.6Hz,1H),2.13–2.06(m,1H),2.05–1.98(m,4H),1.88–1.75(m,4H),1.62(dd,J＝7.0,1.8Hz,3H),1.52–1.43(m,4H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.26(d,J＝23.3Hz,9H),0.92(s,9H).MS-ESI m/z＝1084.5[M+1]⁺.

实施例28

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例24，由相同方法可得到ZZ24101。MS-ESI m/z＝972.4[M+1]⁺.

实施例29

(2S,4R)-1-((S)-2-(5-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)戊酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例24，由相同方法可得到ZZ24102。MS-ESI m/z＝1014.5[M+1]⁺.

实施例30

4-((5-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮

第一步：5-((叔丁氧基羰基)氨基)4-甲基苯磺酸戊酯

将(5-羟基戊基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.49mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，冰浴条件下依次加入三乙胺(205μL，1.48mmol)和对甲基磺酰氯(103mg，0.54mmol)，保温搅拌12小时。加入水和二氯甲烷进行萃取，分离有机相并用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥。减压浓缩，通过硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝6/1)纯化后得到5-((叔丁氧基羰基)氨基)4-甲基苯磺酸戊酯(150mg，收率85％)。

第二步：(R)-(5-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)戊基)氨基甲酸叔丁酯

将(R)-1-(4-(4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-羟基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)乙-1-酮(30mg，0.06mmol)，5-((叔丁氧基羰基)氨基)4-甲基苯磺酸戊酯(33mg，0.09mmol)，碳酸钾(26mg，0.18mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，70℃下搅拌16小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep-p-TLC(二氯甲烷/甲醇＝20/1)进行纯化得到(R)-(5-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)戊基)氨基甲酸叔丁酯(25mg，收率60％)。

第三步：(R)-1-(4-(4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-(5-氨基丙氧基)-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)乙-1-酮

将(R)-(5-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)戊基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.07mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，冰浴条件下向其中滴加三氟乙酸(1mL)，保温搅拌2小时。减压浓度，所得(R)-1-(4-(4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-(5-氨基丙氧基)-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)乙-1-酮粗品直接用于下一步反应。

第四步：4-((5-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮

将(R)-1-(4-(4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-(5-氨基丙氧基)-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)乙-1-酮(30mg，0.05mmol)，2-(2,6-二氧杂哌啶-3-基)-4-氟异吲哚-1,3-二酮(22mg，0.08mmol)溶于二甲亚砜，加入N,N-二异丙基乙胺(47μL，0.26mmol)，80℃下搅拌12小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep--HPLC进行纯化得到4-((5-((6-(1-乙酰基哌啶-4-基)-4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉-7-基)氧基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(31mg，收率71％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.10(s,1H),8.30(s,1H),7.58(t,J＝7.8Hz,1H),7.22(s,1H),7.12(d,J＝8.5Hz,1H),7.03(s,1H),6.85(d,J＝6.5Hz,2H),6.75(s,1H),6.68(s,1H),6.59(t,J＝5.6Hz,1H),5.78–5.59(m,2H),5.32(t,J＝4.7Hz,2H),5.04(dd,J＝12.5,5.4Hz,1H),4.59(d,J＝12.2Hz,1H),4.23–4.15(m,2H),3.91(d,J＝13.6Hz,1H),3.24–3.15(m,1H),3.13–3.02(m,1H),2.93–2.79(m,1H),2.62–2.53(m,6H),2.03–1.96(m,4H),1.93–1.85(m,2H),1.73–1.65(m,2H),1.65–1.52(m,7H),1.45(t,J＝7.1Hz,3H).MS-ESI m/z＝829.4[M+1]⁺.

实施例31

(2R,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(3-((6-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-6-氧己基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺

第一步：甲基6-(5-((((2R,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-2-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)己酸酯

将(2R,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(3-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺(51mg，0.10mmol)，碳酸钾(40mg，0.29mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)，加入6-溴己酸甲酯(30mg，0.14mmol)，70℃下搅拌12小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep-p-TLC(二氯甲烷/甲醇＝20/1)进行纯化得到甲基6-(5-((((2R,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-2-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)己酸酯(40mg，收率63％)。

第二步：6-(5-((((2R,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-羧酰胺基))-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酰胺基)甲基)-2-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)己酸

将甲基6-(5-((((2R,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-2-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)己酸酯(40mg，0.06mmol)溶于四氢呋喃(2mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)的混合溶液中，加入氢氧化锂(14mg，0.60mmol)，40℃搅拌12小时。用饱和柠檬酸水溶液调节pH至4～5，用乙酸乙酯和水进行萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。所得6-(5-((((2R,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-羧酰胺基))-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酰胺基)甲基)-2-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)己酸粗品直接用于下一步反应。

第三步：(2R,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(3-((6-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-6-氧己基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺

将(R)-7-甲氧基-2-甲基-6-(哌啶-4-基)-N-(1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)喹唑啉-4-胺(30mg，0.07mmol)、6-(5-((((2R,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-羧酰胺基))-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酰胺基)甲基)-2-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)己酸(44mg，0.07mmol)和HATU(31mg，0.08mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，冰浴条件下加入N,N-二异丙基乙胺(56μL，0.34mmol)，保温搅拌4小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep-HPLC纯化，冷冻干燥后得到(2R,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(3-((6-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-6-氧己基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺(30mg，收率41％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.90(d,J＝7.7Hz,1H),8.96(d,J＝4.2Hz,1H),8.50(t,J＝6.1Hz,1H),8.31(s,1H),7.81(s,1H),7.77(d,J＝7.6Hz,1H),7.65(d,J＝7.8Hz,1H),7.60(t,J＝7.8Hz,1H),7.39(d,J＝7.7Hz,1H),7.32–7.23(m,1H),7.11(s,1H),6.98(s,1H),6.94(d,J＝7.8Hz,1H),5.84(t,J＝7.5Hz,1H),4.64(d,J＝13.3Hz,1H),4.58(d,J＝9.2Hz,1H),4.51(t,J＝8.2Hz,1H),4.34(s,1H),4.32–4.25(m,1H),4.20(dd,J＝16.6,5.7Hz,1H),4.04(q,J＝8.0,7.1Hz,3H),3.98(s,3H),3.67–3.58(m,4H),3.23(d,J＝12.1Hz,1H),3.14(t,J＝13.3Hz,1H),2.63(t,J＝12.8Hz,1H),2.56(s,3H),2.44(s,3H),2.43–2.31(m,2H),2.08(dd,J＝12.9,7.8Hz,1H),1.97–1.72(m,5H),1.71–1.65(m,3H),1.59(q,J＝7.7Hz,2H),1.49(p,J＝6.7Hz,2H),1.34(dt,J＝19.3,11.4Hz,2H),1.27–1.17(m,3H),0.94(s,9H).MS-ESI m/z＝1073.5[M+1]⁺.

实施例32

(2R,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-羧酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(3-(((7-(4-(7-甲氧基-2-甲基-4-(((R)-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-7-氧庚基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例31，由相同方法可得到RX10041。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.85(s,1H),8.97(s,1H),8.49(d,J＝5.9Hz,1H),8.31(s,1H),7.81(s,1H),7.77(d,J＝7.7Hz,1H),7.63(d,J＝16.8Hz,2H),7.40(d,J＝7.7Hz,1H),7.28(d,J＝9.2Hz,1H),7.08(s,1H),6.99(d,J＝6.0Hz,1H),6.94(d,J＝7.9Hz,1H),5.92–5.77(m,1H),5.17(s,1H),4.64(d,J＝13.7Hz,1H),4.59(d,J＝9.1Hz,1H),4.51(t,J＝8.4Hz,1H),4.34(s,1H),4.32–4.15(m,2H),4.04(s,4H),3.99(s,3H),3.59(d,J＝19.3Hz,3H),3.26(d,J＝12.8Hz,1H),3.14(t,J＝13.2Hz,1H),2.61(d,J＝15.1Hz,2H),2.56(s,3H),2.45(d,J＝3.9Hz,3H),2.42–2.26(m,1H),2.07(s,1H),1.96–1.80(m,1H),1.75(d,J＝9.1Hz,2H),1.68(d,J＝7.1Hz,3H),1.59–1.43(m,4H),1.43–1.32(m,4H),1.22(d,J＝12.6Hz,4H),1.01–0.89(m,9H).MS-ESI m/z＝1087.5[M+1]⁺.

实施例33

(2S,4R)-1-((S)-2-(10-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺][3.3]庚基-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)癸酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

第一步：叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-(10-甲氧基-10-氧十二烷基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯

将叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯(50mg，0.09mmol)、10-溴代癸酸甲酯(35mg，0.13mmol)和碳酸钾(36mg，0.26mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，70℃下搅拌12小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep-p-TLC(二氯甲烷/甲醇＝20/1)进行纯化得到叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-(10-甲氧基-10-氧十二烷基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯(36mg，收率54％)。

第二步：10-(4-(2-(6-(6-(叔丁氧羰基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-基)-6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)癸酸

将叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-(10-甲氧基-10-氧十二烷基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯(36mg，0.05mmol)溶于四氢呋喃(2mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)的混合溶液中，加入氢氧化锂(12mg，0.48mmol)，40℃搅拌12小时。用饱和柠檬酸水溶液调节pH至4～5，用乙酸乙酯和水进行萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。所得10-(4-(2-(6-(6-(叔丁氧羰基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-基)-6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)癸酸粗品直接用于下一步反应。

第三步：叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-(10-((((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁-2-基)氨基)-10-氧十二烷基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-羧酸酯

将(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐(25mg，0.05mmol)、10-(4-(2-(6-(6-(叔丁氧羰基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-基)-6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)癸酸(38mg，0.05mmol)和HATU(24mg，0.06mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，冰浴条件下加入N,N-二异丙基乙胺(43μL，0.26mmol)。保温搅拌4小时，向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep-p-TLC(二氯甲烷/甲醇＝20/1)进行纯化得到叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-(10-((((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁-2-基)氨基)-10-氧十二烷基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-羧酸酯(40mg，收率66％)。

第四步：(2S,4R)-1-((S)-2-(10-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺][3.3]庚基-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)癸酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

将叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-(10-((((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁-2-基)氨基)-10-氧十二烷基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-羧酸酯(40mg，0.03mmol)溶于二氯甲烷(3mL)，冰浴条件下滴加三氟乙酸(1mL)，保温搅拌2小时，减压浓缩。通过Prep-HPLC纯化，冷冻干燥后得到(2S,4R)-1-((S)-2-(10-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺][3.3]庚基-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)癸酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(24mg，收率50％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.61(s,1H),8.99(s,1H),8.57(s,2H),8.39(d,J＝7.8Hz,1H),7.81(d,J＝9.3Hz,1H),7.46–7.40(m,2H),7.40–7.35(m,2H),6.87(d,J＝1.8Hz,1H),6.81(d,J＝6.8Hz,2H),6.56(d,J＝1.8Hz,1H),5.11(s,2H),4.90(h,J＝7.1Hz,1H),4.52(d,J＝9.3Hz,1H),4.41(dd,J＝10.2,6.0Hz,3H),4.28(s,1H),4.24(s,4H),4.13(t,J＝6.2Hz,4H),3.63–3.54(m,4H),3.16(s,2H),3.08(t,J＝12.4Hz,2H),2.45(s,3H),2.25(dq,J＝15.4,7.7Hz,1H),2.16(d,J＝2.0Hz,6H),2.10(ddd,J＝14.5,8.3,6.3Hz,1H),2.01(dd,J＝12.7,7.7Hz,1H),1.78(ddt,J＝13.0,9.1,4.6Hz,1H),1.68(s,2H),1.50(dq,J＝26.8,6.7,6.0Hz,2H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.29(d,J＝17.3Hz,12H),0.93(s,9H).MS-ESI m/z＝1065.5[M+1]⁺.

实施例34

(2S,4R)-1-((S)-2-(6-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺][3.3]庚基-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基六氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例33，由相同方法可得到ZZ24010。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.99(s,1H),8.60(s,2H),8.39(d,J＝7.8Hz,1H),7.86(d,J＝9.3Hz,1H),7.43(d,J＝7.9Hz,2H),7.37(d,J＝8.2Hz,2H),6.88(d,J＝1.8Hz,1H),6.81(d,J＝6.8Hz,2H),6.56(d,J＝1.9Hz,1H),5.11(s,2H),4.91(p,J＝7.2Hz,1H),4.53(d,J＝9.4Hz,1H),4.45–4.38(m,3H),4.29(s,1H),4.25(s,4H),4.13(t,J＝6.2Hz,6H),3.65–3.56(m,4H),3.25–3.16(m,2H),3.11–3.01(m,4H),2.45(s,3H),2.34–2.27(m,1H),2.16(d,J＝2.0Hz,6H),2.01(q,J＝9.4,7.6Hz,1H),1.79(ddd,J＝13.0,8.7,4.6Hz,1H),1.74–1.64(m,2H),1.55(tq,J＝14.0,7.0Hz,2H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.30(q,J＝7.4Hz,2H),0.94(s,9H).MS-ESI m/z＝1009.5[M+1]⁺.

实施例35

(2S,4R)-1-((S)-2-(11-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺][3.3]庚二-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)十一烷酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例33，由相同方法可得到ZZ24048。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.99(s,1H),8.56(s,2H),8.38(d,J＝7.8Hz,1H),7.80(d,J＝9.3Hz,1H),7.47–7.41(m,2H),7.37(d,J＝8.3Hz,2H),6.87(d,J＝1.8Hz,1H),6.81(d,J＝6.8Hz,2H),6.56(d,J＝1.8Hz,1H),5.10(s,2H),4.91(p,J＝7.1Hz,1H),4.52(d,J＝9.4Hz,1H),4.45–4.38(m,3H),4.28(s,1H),4.24(s,4H),4.13(t,J＝6.1Hz,4H),3.23–3.12(m,4H),3.07(t,J＝12.4Hz,2H),2.45(s,3H),2.26(dt,J＝14.9,7.7Hz,1H),2.16(d,J＝2.0Hz,6H),2.13–2.06(m,1H),2.01(t,J＝10.4Hz,1H),1.79(ddd,J＝13.0,8.7,4.7Hz,1H),1.73–1.63(m,2H),1.55–1.42(m,2H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.33–1.20(m,12H),0.93(s,9H).MS-ESI m/z＝1079.5[M+1]⁺.

实施例36

(2S,4R)-1-((S)-2-(12-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺][3.3]庚基-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)十二烷酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例33，由相同方法可得到ZZ24049。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.99(s,1H),8.62(s,2H),8.38(d,J＝7.7Hz,1H),7.80(d,J＝9.3Hz,1H),7.46–7.40(m,2H),7.40–7.36(m,2H),6.87(d,J＝1.8Hz,1H),6.81(d,J＝6.7Hz,2H),6.56(d,J＝1.9Hz,1H),5.10(s,2H),4.91(p,J＝7.3Hz,1H),4.52(d,J＝9.2Hz,1H),4.44–4.38(m,3H),4.27(s,1H),4.25(s,4H),4.13(d,J＝6.2Hz,4H),3.61(dd,J＝10.7,4.3Hz,4H),3.23–3.12(m,4H),3.08(t,J＝12.5Hz,2H),2.45(s,3H),2.25(dt,J＝14.9,7.5Hz,1H),2.16(d,J＝2.1Hz,6H),2.14–2.05(m,1H),2.01(t,J＝10.1Hz,1H),1.82–1.74(m,1H),1.68(s,2H),1.47(dt,J＝16.6,8.3Hz,2H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.34–1.17(m,14H),0.93(s,9H).MS-ESI m/z＝1093.6[M+1]⁺.

实施例37

(2S,4R)-1-((S)-2-(8-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺]]庚二-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基十八胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例33，由相同方法可得到ZZ77153。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.70(s,1H),9.00(s,1H),8.63(s,2H),8.42(d,J＝7.8Hz,1H),7.85(d,J＝9.3Hz,1H),7.43(d,J＝8.1Hz,2H),7.37(d,J＝8.2Hz,2H),6.88(s,1H),6.81(d,J＝6.8Hz,2H),6.57(s,1H),5.11(s,2H),4.90(p,J＝6.9Hz,1H),4.52(d,J＝9.3Hz,1H),4.43–4.34(m,3H),4.25(s,5H),4.13(t,J＝6.2Hz,4H),3.23–3.11(m,4H),3.07(t,J＝12.2Hz,2H),2.45(s,3H),2.27(dt,J＝14.8,7.7Hz,1H),2.20–2.07(m,7H),2.00(ddd,J＝16.9,12.5,6.7Hz,1H),1.78(ddd,J＝13.3,8.9,4.8Hz,1H),1.68(q,J＝7.9Hz,2H),1.49(dq,J＝22.5,7.0Hz,2H),1.37(d,J＝6.9Hz,3H),1.32–1.19(m,8H),0.93(s,9H).MS-ESI m/z＝1037.5[M+1]⁺.

实施例38

(2S,4R)-1-((S)-2-(7-(4-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)庚酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例33，由相同方法可得到ZC79018。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):8.99(s,1H),8.37(d,J＝7.8Hz,1H),7.81(d,J＝9.4Hz,1H),7.48–7.31(m,6H),7.06–7.01(m,1H),6.98(d,J＝1.6Hz,1H),6.57(d,J＝1.5Hz,1H),5.21(s,2H),4.92(dd,J＝14.3,7.1Hz),4.53(d,J＝9.4Hz,1H),4.46–4.37(m,3H),4.32–4.27(m,1H),4.25(s,4H),4.13(t,J＝6.0Hz,4H),3.97–3.31(m,6H,covered by the peakof water),3.25–3.02(m,6H),2.46(s,3H),2.32–2.08(m,2H),2.06–1.98(m,1H),1.84–1.76(m,1H),1.73–1.61(m,2H),1.60–1.44(m,2H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.35–1.26(m,4H),0.95(s,9H).MS-ESI m/z＝1029.4[M+1]⁺.

实施例39

(2S,4R)-1-((S)-2-(9-(4-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)壬酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例33，由相同方法可得到ZC79022。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):8.99(s,1H),8.35(t,J＝9.0Hz,1H),7.78(t,J＝8.8Hz,1H),7.50–7.31(m,6H),7.02(d,J＝11.9Hz,1H),6.97(d,J＝6.2Hz,1H),6.56(d,J＝17.2Hz,1H),5.20(s,2H),4.95–4.87(m,1H),4.53(d,J＝9.4Hz,1H),4.45–4.38(m,3H),4.31–4.26(m,1H),4.24(s,4H),4.13(t,J＝6.0Hz,4H),3.65–3.55(m,6H),3.24–3.03(m,6H),2.45(s,3H),2.32–2.07(m,2H),2.05–1.97(m,1H),1.85–1.76(m,1H),1.72–1.62(m,2H),1.60–1.41(m,2H),1.38(d,J＝6.9Hz,3H),1.25(d,J＝47.3Hz,8H),0.94(s,9H).MS-ESI m/z＝1057.5[M+1]⁺.

实施例40

(2S,4R)-1-((S)-2-(8-(4-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)十八胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例33，由相同方法可得到ZC79024。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ8.99(s,1H),8.37(d,J＝7.8Hz,1H),7.80(d,J＝9.3Hz,1H),7.52–7.30(m,6H),7.07–7.01(m,1H),6.98(d,J＝1.5Hz,1H),6.58(t,J＝3.5Hz,1H),5.22(s,2H),4.96–4.85(m,1H),4.53(d,J＝9.4Hz,1H),4.42(t,J＝8.1Hz,3H),4.32–4.21(m,5H),4.13(t,J＝6.1Hz,4H),3.66–3.54(m,4H),3.00–3.25(m,8H),2.46(s,3H),2.33–2.08(m,2H),2.07–1.98(m,1H),1.84–1.76(m,1H),1.74–1.62(m,2H),1.59–1.43(m,2H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.35–1.22(m,6H),0.94(s,9H).MS-ESI m/z＝1043.5[M+1]⁺.

实施例41

(2S,4R)-1-((S)-2-(5-(4-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)戊酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例33，由相同方法可得到ZC79054。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ9.00(s,1H),8.39(d,J＝7.8Hz,1H),7.93(d,J＝9.2Hz,1H),7.48–7.32(m,6H),7.03(ddd,J＝8.4,4.5,2.2Hz,1H),6.99(d,J＝1.6Hz,1H),6.58(d,J＝1.5Hz,1H),5.22(s,2H),4.90(td,J＝14.2,7.0Hz,1H),4.53(d,J＝9.3Hz,1H),4.45–4.37(m,3H),4.32–4.22(m,5H),4.13(t,J＝6.0Hz,4H),3.66–3.53(m,4H),3.28–3.00(m,6H),2.55–2.47(m,2H),2.45(s,3H),2.40–2.17(m,2H),2.08–1.98(m,1H),1.79(ddd,J＝12.9,8.7,4.6Hz,1H),1.73–1.62(m,2H),1.61–1.51(m,2H),1.36(d,J＝7.0Hz,3H),0.95(s,9H).MS-ESI m/z＝1001.4[M+1]⁺.

实施例42

(2S,4R)-1-((S)-2-(6-(4-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)六氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例33，由相同方法可得到ZC79055。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ9.00(s,1H),8.40(d,J＝7.8Hz,1H),7.87(d,J＝9.3Hz,1H),7.48–7.32(m,6H,),7.03(ddd,J＝8.5,4.5,2.1Hz,1H),6.99(d,J＝1.6Hz,1H),6.58(d,J＝1.5Hz,1H),5.22(s,2H),4.98–4.86(m,1H),4.53(d,J＝9.4Hz,1H),4.46–4.37(m,3H),4.32–4.18(m,5H),4.13(t,J＝6.0Hz,4H),3.66–3.54(m,4H),3.26–3.02(m,6H),2.55–2.47(m,2H),2.45(s,3H),2.35–2.12(m,2H),2.08–1.98(m,1H),1.79(ddd,J＝12.9,8.7,4.6Hz,1H),1.75–1.63(m,2H),1.62–1.45(m,2H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.30(dd,J＝14.7,7.3Hz,2H),0.94(s,9H).MS-ESI m/z＝1015.4[M+1]⁺.

实施例43

(2S,4R)-1-((S)-2-(10-(4-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)癸酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例33，由相同方法可得到ZC79058。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):8.99(s,1H),8.40(d,J＝7.8Hz,1H),7.82(d,J＝9.3Hz,1H),7.48–7.31(m,6H),7.03(ddd,J＝8.4,4.5,2.1Hz,1H),6.99(d,J＝1.6Hz,1H),6.58(d,J＝1.5Hz,1H),5.22(s,2H),4.90(ddd,J＝21.5,14.3,7.1Hz,1H),4.52(d,J＝9.4Hz,1H),4.45–4.35(m,3H),4.31–4.19(m,5H),4.13(t,J＝6.0Hz,4H),3.69–3.53(m,4H),3.24–3.00(m,6H),2.54–2.47(m,2H),2.45(s,3H),2.31–2.06(m,2H),2.05–1.97(m,1H),1.83–1.74(m,1H),1.73–1.61(m,2H),1.57–1.40(m,2H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.28(d,J＝16.7Hz,10H),0.93(s,9H).MS-ESI m/z＝1071.5[M+1]⁺.

实施例44

(2S,4R)-1-((S)-2-(7-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺]]庚基-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)庚酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例33，由相同方法可得到ZC79069。

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ9.00(s,1H),8.40(d,J＝7.8Hz,1H),7.85(d,J＝9.3Hz,1H),7.47–7.35(m,4H,-ArH),6.89(d,J＝1.5Hz,1H),6.81(d,J＝6.8Hz,2H),6.57(d,J＝1.2Hz,1H),5.11(s,2H),4.96–4.85(m,1H),4.53(d,J＝9.4Hz,1H),4.44–4.34(m,3H),4.31–4.22(m,5H),4.13(t,J＝5.9Hz,4H),3.68–3.53(m,4H),3.25–3.00(m,6H),2.53–2.48(2H,partly covered by the peak of solvent),2.45(s,3H),2.33–2.23(m,1H),2.19–2.09(m,7H),2.06–1.98(m,1H),1.83–1.74(m,1H),1.67(s,2H),1.59–1.43(m,2H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.34–1.22(m,4H),0.94(s,9H).MS-ESI m/z＝1023.5[M+1]⁺.

实施例45

(2S,4R)-1-((S)-2-(9-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺]]庚二-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)壬酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例33，由相同方法可得到ZC79070。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):8.99(s,1H),8.41(d,J＝7.8Hz,1H),7.83(d,J＝9.3Hz,1H),7.47–7.35(m,4H),6.89(d,J＝1.4Hz,1H),6.81(d,J＝6.8Hz,2H),6.57(s,1H),5.11(s,2H),4.96–4.86(m,1H),4.52(d,J＝9.4Hz,1H),4.45–4.33(m,3H),4.31–4.23(m,5H),4.13(t,J＝6.0Hz),3.66–3.54(m,4H),3.26–3.02(m,6H),2.53–2.48(2H,partly coveredby the peak of solvent),2.45(s,3H),2.31–2.22(m,1H),2.19–2.07(m,7H),2.06–1.97(m,1H),1.83–1.74(m,1H),1.68(s,2H),1.59–1.41(m,2H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.30(s,8H),0.93(s,9H).MS-ESI m/z＝1051.5[M+1]⁺.

实施例46

(2S,4R)-1-((S)-2-(8-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺]]庚烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)辛酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

第一步：6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(1-(8-甲氧基-8-氧辛基)-3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯

将6-(6-氯-4-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(50mg，0.09mmol)，碳酸钾(36mg，0.26mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺中，加入8-溴辛酸甲酯(31mg，0.13mmol)，70℃下搅拌12小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep--TLC(二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化得到6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(1-(8-甲氧基-8-氧辛基)-3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(48mg，收率76％)。

第二步：8-(4-(2-(6-(叔丁氧羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)辛酸

将叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(1-(8-甲氧基-8-氧辛基)-3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯溶于四氢呋喃(2mL)、甲醇(2mL)、水(2mL)的混合溶液中，加入氢氧化锂，40℃搅拌12小时。用饱和柠檬酸水溶液调节pH至4～5，用乙酸乙酯和水进行萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。所得8-(4-(2-(6-(叔丁氧羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)辛酸粗品直接用于下一步反应。

第三步：6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(1-(8-((((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁-2-基)氨基)-8-氧辛基)-3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯

将8-(4-(2-(6-(叔丁氧羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)辛酸(50mg，0.07mmol)，(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐(33mg，0.07mmol)，HATU(32mg，0.08mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺中，冰浴条件下加入N,N-二异丙基乙胺(58μL，0.35mmol)，保温搅拌1小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过Prep--TLC(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得到6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(1-(8-((((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁-2-基)氨基)-8-氧辛基)-3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(40mg，收率50％)。

第四步：(2S,4R)-1-((S)-2-(8-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺]]庚烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)辛酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

将6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(1-(8-((((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁-2-基)氨基)-8-氧辛基)-3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(40mg，0.03mmol)溶于二氯甲烷(2mL)，冰浴条件下向其中滴加三氟乙酸(0.5mL)，保温搅拌2小时。减压浓缩后通过Prep--HPLC纯化，冷冻干燥后得到(2S,4R)-1-((S)-2-(8-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺]]庚烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)辛酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(26mg，收率65％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.99(s,1H),8.57(s,2H),8.38(d,J＝7.8Hz,1H),7.80(d,J＝9.3Hz,1H),7.43(d,J＝8.0Hz,2H),7.37(d,J＝8.1Hz,2H),7.31–7.25(m,1H),6.98(s,1H),6.94(d,J＝6.8Hz,2H),5.20(s,2H),4.91(p,J＝7.2Hz,1H),4.52(d,J＝9.3Hz,1H),4.41(t,J＝8.1Hz,2H),4.36(s,4H),4.28(s,2H),4.13(t,J＝6.2Hz,6H),2.45(s,3H),2.27(dt,J＝14.6,7.6Hz,1H),2.19(d,J＝2.0Hz,6H),2.16(s,3H),2.15–2.11(m,1H),2.09(s,3H),2.04–1.98(m,1H),1.83–1.70(m,3H),1.56–1.43(m,3H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.31(s,6H),0.93(s,9H).MS-ESI m/z＝1047.4[M+1]⁺.

实施例47

(2S,4R)-1-((S)-2-(9-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺]]庚烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)壬酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例46，由相同方法可得到ZZ77116。MS-ESI m/z＝1061.5[M+1]⁺.

实施例48

(2S,4R)-1-((S)-2-(10-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺][3.3]庚烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)癸酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例46，由相同方法可得到ZZ77117。MS-ESI m/z＝1074.5[M+1]⁺.

实施例49

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-((4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

第一步：2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)乙酸甲酯

将哌啶-4-基甲醇(300mg，2.60mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，冰浴条件下依次加入三乙胺(1.1mL，7.81mmol)和溴乙酸乙酯(358mg，2.34mmol)，保温搅拌12小时。向反应中加入水，用二氯甲烷萃取，用饱和氯化钠水溶液洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝20/1)进行纯化后得到2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)乙酸甲酯(450mg，收率92％)。

第二步：2-(4-甲酰基哌啶-1-基)乙酸甲酯

将二甲亚砜(250mg，3.20mmol)溶于干燥二氯甲烷(20mL)并冷却至-78℃，缓慢滴加草酰氯(135μL，1.60mmol)，保温搅拌30min，缓慢滴加2-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)乙酸甲酯(150mg，0.08mmol)的二氯甲烷溶液，保温搅拌30min，加入三乙胺(1.11mL，8.01mmol)，保温搅拌30min后移至室温搅拌30min。加入水，分离有机相并用饱和氯化钠水溶液洗涤，，有机相用无水硫酸钠干燥。减压浓缩后得到2-(4-甲酰基哌啶-1-基)乙酸甲酯直接用于下一步反应。

第三步：6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-(((1-(2-甲氧基-2-氧乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯

将2-(4-甲酰基哌啶-1-基)乙酸甲酯(33mg，0.18mmol)，6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(50mg，0.09mool)溶于二氯甲烷，冰浴条件下加入三乙酰基硼氢化钠(56mg，0.26mmol)，室温搅拌12小时。加入水，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过Prep--TLC纯化得到6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-(((1-(2-甲氧基-2-氧乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(45mg，收率69％)。

第四步：2-(4-((4-(2-(6-(6-(叔丁氧羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)乙酸

将6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-(((1-(2-甲氧基-2-氧乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(45mg，0.06mmol)溶于四氢呋喃(2mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)的混合溶液中，加入氢氧化锂(15mg，0.61mmol)，40℃搅拌12小时。用饱和柠檬酸水溶液调节pH至4～5，用乙酸乙酯和水进行萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得2-(4-((4-(2-(6-(6-(叔丁氧羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)乙酸粗品直接用于下一步反应。

第五步：6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-((1-(2-((((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁丁-2-基)氨基)-2-氧乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯

将2-(4-((4-(2-(6-(6-(叔丁氧羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)乙酸(40mg，0.06mmol)，(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐(27mg，0.06mmol)，HATU(25mg，0.07mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，冰浴条件下加入N,N-二异丙基乙胺(46μL，0.28mmol)，保温搅拌4小时。向反应中加入水，用乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗涤三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过制备型TLC(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得到6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-((1-(2-((((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁丁-2-基)氨基)-2-氧乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(52mg，收率82％)。

第六步：(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-((4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

将6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-((1-(2-((((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁丁-2-基)氨基)-2-氧乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(52mg，0.05mmol)溶于二氯甲烷(4mL)中，冰浴条件下向其中滴加三氟乙酸，保温搅拌2小时后减压浓缩，通过Prep--HPLC纯化得到(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-((4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺三氟乙酸盐(30mg，收率63％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.00(s,1H),8.74(d,J＝8.7Hz,1H),8.66(s,2H),8.42(d,J＝7.8Hz,1H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),7.38(d,J＝8.3Hz,2H),6.88(d,J＝1.8Hz,1H),6.81(d,J＝6.8Hz,2H),6.56(d,J＝1.9Hz,1H),5.11(s,2H),4.92(p,J＝7.1Hz,1H),4.57(d,J＝9.1Hz,1H),4.45–4.41(m,2H),4.31(s,1H),4.26–4.22(m,4H),4.16–4.11(m,4H),4.01(t,J＝16.5Hz,2H),3.58–3.42(m,8H),3.34–3.26(m,1H),3.25–3.10(m,6H),3.09–2.95(m,2H),2.46(s,3H),2.16(d,J＝2.0Hz,6H),2.07–2.01(m,1H),1.96(s,2H),1.86–1.77(m,1H),1.55(s,2H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),0.98(s,9H).MS-ESI m/z＝1050.5[M+1]⁺.

实施例50

(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(4-((4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例49，由相同方法可得到ZZ24038。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.99(s,1H),8.65(s,2H),8.39(d,J＝7.8Hz,1H),8.07(d,J＝9.3Hz,1H),7.44(d,J＝8.3Hz,2H),7.38(d,J＝8.3Hz,2H),6.87(d,J＝1.8Hz,1H),6.81(d,J＝6.8Hz,2H),6.56(d,J＝1.9Hz,1H),5.11(s,2H),4.92(p,J＝6.9Hz,1H),4.53(d,J＝9.3Hz,1H),4.42(t,J＝8.1Hz,4H),4.30(s,1H),4.24(s,4H),4.14(t,J＝6.0Hz,4H),3.25–3.11(m,8H),3.04(s,2H),2.94–2.84(m,2H),2.45(s,3H),2.30–2.24(m,1H),2.16(d,J＝2.0Hz,6H),2.06–1.94(m,4H),1.92–1.84(m,2H),1.80(ddd,J＝13.0,8.8,4.7Hz,1H),1.51–1.41(m,2H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),0.95(s,9H).MS-ESI m/z＝1078.5[M+1]⁺.

实施例51

(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(4-((4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)丙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例49，由相同方法可得到ZZ24041。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.99(s,1H),8.68(s,2H),8.40(d,J＝7.8Hz,1H),8.27(d,J＝9.2Hz,1H),7.44(d,J＝8.2Hz,2H),7.38(d,J＝8.3Hz,2H),6.87(d,J＝1.8Hz,1H),6.81(d,J＝6.8Hz,2H),6.56(d,J＝1.9Hz,1H),5.11(s,2H),4.92(p,J＝7.3Hz,1H),4.54(d,J＝9.3Hz,1H),4.41(t,J＝8.2Hz,4H),4.30(s,1H),4.25(s,4H),4.14(t,J＝6.1Hz,4H),3.56(d,J＝11.5Hz,4H),3.34–3.28(m,2H),3.25–3.15(m,4H),3.13(s,2H),2.92(s,2H),2.74(dp,J＝30.9,7.3Hz,4H),2.45(s,3H),2.16(d,J＝2.0Hz,6H),2.06–1.95(m,4H),1.80(ddd,J＝13.1,8.8,4.7Hz,1H),1.49(d,J＝6.8Hz,1H),1.45(d,J＝13.4Hz,1H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),0.96(s,9H).MS-ESI m/z＝1064.5[M+1]⁺.

实施例52

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺并[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

第一步：2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙酸甲酯

将二乙二醇(2.5g，16.34mmol)溶于无水四氢呋喃(100mL)，冰浴条件下加入氢化钠(620mg，15.52mmol)，保温搅拌10分钟，加入溴乙酸甲酯(2.6g，24.51mmol)，移至室温搅拌过夜，冰浴条件下加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，加入水，用乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，分离有机相并减压浓缩，通过硅胶柱层析纯化得到2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙酸甲酯(862mg，收率30％)。

第二步：2-(2-(2-(甲苯磺酰氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸甲酯

将2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙酸甲酯(725mg，4.07mmol)溶于二氯甲烷(40mL)中，依次加入对甲基苯磺酰氯(1.16g，6.11mmol)、三乙胺(1.7mL，12.21mmol)和4-二甲氨基吡啶(24mg，0.20mmol)，室温下反应过夜，减压浓缩后硅胶经硅胶柱层析，纯化后得到2-(2-(2-(甲苯磺酰氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸甲酯(822mg，收率61％)。

第三步：叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-(2-(2-(2-甲氧基-2-氧乙氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯

将2-(2-(2-(甲苯磺酰氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸甲酯(47mg，0.14mmol)、叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯(80mg，0.14mmol)、碳酸钾(58mg，0.42mmol)和碘化钾(5mg，0.03mmol)溶于的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，80℃下搅拌12小时，加入水，用乙酸乙酯萃取三次，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后通过硅胶柱层析纯化得到叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-(2-(2-(2-甲氧基-2-氧乙氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯(68mg，收率66％)。

第四步：2-(2-(2-(4-(2-(6-(6-(叔丁氧基羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸

将叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-(2-(2-(2-甲氧基-2-氧乙氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯(55mg，0.08mmol)：溶于四氢呋喃(2mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)的混合溶液中，加入氢氧化锂(9mg，0.23mmol)，40℃搅拌12小时，用饱和柠檬酸水溶液调节pH至3-4，加入乙酸乙酯进行萃取，分离有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后得到2-(2-(2-(4-(2-(6-(6-(叔丁氧基羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸粗品直接用于下一步反应。

第五步：叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-(2-(2-(2-((((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)乙氧基)乙基哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-羧酸酯

将2-(2-(2-(4-(2-(6-(6-(叔丁氧基羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸(54mg，0.08mmol)、HATU(40mg，0.11mmol)和4-二甲氨基吡啶(29mg，0.23mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中，室温下搅拌20分钟，加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(33mg，0.08mmol)，室温下继续搅拌2小时，加入水，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后通过Prep-HPLC纯化得到叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-(2-(2-(2-((((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)乙氧基)乙基哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-羧酸酯(46mg，收率59％)。

第六步：(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺并[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

将叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(4-(2-(2-(2-((((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)乙氧基)乙基哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-羧酸酯(32mg，0.03mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL，13.4mmol)，室温下搅拌2小时，减压浓缩，通过Prep-HPLC纯化，冷冻干燥后得到(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺并[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(21mg，收率72％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ8.99(s,1H),8.43(d,J＝7.6Hz,1H),7.47(d,J＝9.5Hz,1H),7.43(dd,J＝8.2,4.6Hz,2H),7.33(d,J＝8.2Hz,2H),6.89(s,1H),6.81(d,J＝6.7Hz,2H),6.56(s,1H),5.11(s,2H),4.87(dt,J＝14.4,7.1Hz,1H),4.57(d,J＝9.6Hz,1H),4.48–4.33(m,3H),4.31–4.22(m,5H),4.13(t,J＝5.9Hz,4H),4.02(d,J＝4.9Hz,2H),3.89–3.79(m,4H),3.75–3.54(m,8H),3.49–3.41(m,2H),3.36–3.10(m,4H),2.45(s,3H),2.14(d,J＝1.1Hz,6H),2.07(dd,J＝13.3,7.2Hz,1H),1.81–1.71(m,1H),1.33(d,J＝7.0Hz,3H),0.94(s,9H).MS-ESI m/z＝1041.5[M+1]⁺.

实施例53

(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(2-(2-(4-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例52，由相同方法可得到ZC79039。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):8.99(s,1H),8.37(d,J＝7.8Hz,1H),7.89(d,J＝9.4Hz,1H),7.47–7.30(m,6H),7.03(s,1H),6.98(d,J＝1.4Hz,1H),6.58(d,J＝1.5Hz,1H),5.21(s,2H),4.90(dd,J＝14.5,7.1Hz,1H),4.54(d,J＝9.4Hz,1H),4.46–4.36(m,3H),4.26(d,J＝18.1Hz,5H),4.13(t,J＝6.0Hz,4H),4.01–3.04(m,18H,partly covered by the peakof water),2.66–2.34(m,7H),2.06–1.98(m,1H),1.83–1.75(m,1H),1.37(d,J＝6.9Hz,3H),0.93(s,9H).MS-ESI m/z＝1061.4[M+1]⁺.

实施例54

(2S,4R)-1-((S)-14-(叔丁基)-1-(4-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)-12-氧代-3,6,9-三氧杂-13-氮杂戊烷-15-羟基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例52，由相同方法可得到ZC79043。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):8.99(s,1H),8.39(d,J＝7.8Hz,1H),7.88(d,J＝9.4Hz,1H),7.47–7.30(m,6H),7.05–6.96(m,2H),6.57(d,J＝1.7Hz,1H),5.21(s,2H),4.96–4.86(m,1H),4.53(d,J＝9.4Hz,1H),4.45–4.36(m,3H),4.30–4.20(m,5H),4.19–3.70(m,8H,covered by the peak of water),3.66–3.45(m,12H),3.44–3.36(m,2H),3.26(d,J＝11.1Hz,2H),3.15(t,J＝12.1Hz,2H),2.60–2.29(m,7H,partly covered by the peak ofsolvent),2.06–1.97(m,1H),1.83–1.74(m,1H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),0.92(s,9H).MS-ESI m/z＝1105.5[M+1]⁺.

实施例55

(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(2-(2-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例52，由相同方法可得到ZC79122。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ9.00(s,1H),8.40(d,J＝7.8Hz,1H),7.92(d,J＝9.4Hz,1H),7.44(d,J＝8.2Hz,2H),7.37(d,J＝8.3Hz,2H),6.88(d,J＝1.4Hz,1H),6.81(d,J＝6.7Hz,2H),6.57(d,J＝1.3Hz,1H),5.11(s,2H),4.95–4.87(m,1H),4.54(d,J＝9.4Hz,1H),4.45–4.36(t,J＝8.1Hz,3H),4.30–4.22(m,5H),4.21–3.70(m,6H,partly covered bythe peak of water),3.69–3.52(m,10H),3.45–3.35(m,2H),3.33–3.21(m,2H),3.16(t,J＝12.0Hz,2H),2.61–2.34(m,7H,partly covered by the peak of solvent),2.16(d,J＝1.2Hz,6H),2.08–1.99(m,1H),1.83–1.74(m,1H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),0.93(s,9H).MS-ESI m/z＝1055.5[M+1]⁺.

实施例56

(2S,4R)-1-((S)-14-(叔丁基)-1-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2，6-二氮杂螺并[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)-12-氧代-3,6,9-三氧杂-13-氮杂戊烷-15-oyl)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例52，由相同方法可得到ZC79128。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ9.00(s,1H),8.40(d,J＝7.8Hz,1H),7.90(d,J＝9.4Hz,1H),7.44(d,J＝8.2Hz,2H),7.38(d,J＝8.3Hz,2H),6.88(s,1H),6.81(d,J＝6.7Hz,2H),6.57(s,1H),5.11(s,2H),4.97–4.86(m,1H),4.53(d,J＝9.4Hz,1H),4.45–4.35(m,3H),4.31–4.21(m,5H),4.14(t,J＝6.0Hz,4H),3.85–3.77(m,2H),3.70–3.46(m,14H),3.45–3.36(m,2H),3.34–3.21(m,2H),3.15(t,J＝12.2Hz,2H),2.61–2.30(m,7H,partlycovered by the peak of solvent),2.16(d,J＝1.1Hz,6H),2.07–1.98(m,1H),1.83–1.73(m,1H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),0.93(s,9H).MS-ESI m/z＝1099.5[M+1]⁺.

实施例57

4-((6-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)己基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮

第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((6-羟基己基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮

将2-(2,6-二氧杂哌啶-3-基)-4-氟异吲哚-1,3-二酮(1.18g，4.27mmol)、6-氨基-1-己醇(500mg，4.27mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.12ml，12.81mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺中，90℃搅拌12小时，冷却至室温后加入水，用乙酸乙酯萃取三次，用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，通过硅胶柱层析纯化得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((6-羟基己基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(632mg，收率40％)。

第二步：6-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚-4-基)氨基)己醛

将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((6-羟基己基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(120mg，0.32mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入戴斯-马丁氧化剂(204mg，0.48mmol)，室温下搅拌2小时，减压浓缩后通过硅胶柱层析纯化，得到6-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚-4-基)氨基)己醛(58mg，收率49％)。

第三步：叔丁基6-(6-氯-4-(4-(6-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氨基)己基)哌嗪-1-基)-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-羧酸酯

将6-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚-4-基)氨基)己醛(34mg，0.09mmol)、叔丁基6-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-4-(哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯(53mg，0.09mmol)和冰醋酸(17mg，0.28mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，室温搅拌30分钟，加入氰基硼氢化钠(35mg，0.55mmol)，室温下继续搅拌3小时，向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后通过Prep-HPLC纯化后得到叔丁基6-(6-氯-4-(4-(6-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氨基)己基)哌嗪-1-基)-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-羧酸酯(36mg，收率42％)。

第四步：4-((6-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)己基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮

将叔丁基6-(6-氯-4-(4-(6-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氨基)己基)哌嗪-1-基)-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-羧酸酯(24mg，0.03mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL，13.4mmol)，室温下搅拌2小时，减压浓缩后通过Prep-HPLC纯化，冷冻干燥后得到4-((6-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)己基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(15mg，收率71％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ11.12(s,1H),7.64–7.56(m,1H),7.11(d,J＝8.6Hz,1H),7.04(d,J＝7.0Hz,1H),6.87(s,1H),6.81(d,J＝6.7Hz,2H),6.60–6.51(m,2H),5.11(s,2H),5.06(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),4.41(d,J＝12.3Hz,2H),4.24(s,4H),4.13(t,J＝6.0Hz,4H),3.61(d,J＝11.1Hz,2H),3.32(dd,J＝12.3,6.3Hz,2H),3.25–3.02(m,6H),2.94–2.83(m,1H),2.66–2.42(m,2H),2.16(d,J＝0.8Hz,6H),2.02(dd,J＝8.9,3.7Hz,1H),1.78–1.56(m,4H),1.46–1.30(m,4H).MS-ESI m/z＝824.4[M+1]⁺.

实施例58

4-((5-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮

参照实施例57，由相同方法可得到ZC79147。

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ11.12(s,1H),7.60(dd,J＝8.3,7.4Hz,1H),7.13(d,J＝8.6Hz,1H),7.05(d,J＝7.0Hz,1H),6.88(s,1H),6.81(d,J＝6.7Hz,2H),6.63–6.54(m,2H),5.11(s,2H),5.06(dd,J＝12.8,5.4Hz),4.41(d,J＝12.0Hz,2H),4.25(s,4H),4.13(t,J＝5.9Hz,4H),3.61(d,J＝11.1Hz,2H),3.35(q,J＝5.8Hz,2H),3.26–3.02(m,6H),2.94–2.83(m,1H),2.69–2.45(m,2H,partly covered by the peak of solvent),2.16(s,6H),2.03(dd,J＝9.1,3.7Hz,1H),1.80–1.69(m,2H),1.68–1.59(m,2H),1.45–1.35(m,2H).MS-ESIm/z＝810.4[M+1]⁺.

实施例59

4-((8-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)辛基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮

参照实施例57，由相同方法可得到ZC57008。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ11.11(s,1H),7.63–7.55(m,1H),7.10(d,J＝8.6Hz,1H),7.03(d,J＝7.0Hz,1H),6.88(s,1H),6.81(d,J＝6.7Hz,2H),6.55(d,J＝12.1Hz,2H),5.11(s,2H),5.05(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),4.40(d,J＝10.8Hz,2H),4.25(s,4H),4.14(t,J＝5.9Hz,4H),3.60(d,J＝11.1Hz,2H),3.31(d,J＝4.7Hz,2H),3.24–3.02(m,6H),2.95–2.83(m,1H),2.66–2.42(m,2H,partly covered by the peak of solvent),2.16(s,6H),2.06–1.99(m,1H),1.75–1.63(m,2H),1.62–1.53(m,2H),1.42–1.24(m,8H).MS-ESI m/z＝852.4[M+1]⁺.

实施例60

4-((10-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)癸基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮

参照实施例57，由相同方法可得到ZC57009。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ11.11(s,1H),7.62–7.54(m,1H),7.09(d,J＝8.6Hz,1H),7.03(d,J＝7.0Hz,1H),6.87(s,1H),6.81(d,J＝6.7Hz,2H),6.54(d,J＝14.1Hz,2H),5.11(s,2H),5.05(dd,J＝12.8,5.5Hz,1H),4.40(d,J＝13.5Hz,2H),4.25(s,4H),4.13(t,J＝5.9Hz,4H),3.60(d,J＝11.3Hz,2H),3.30(d,J＝5.2Hz,2H),3.24–3.00(m,6H),2.94–2.82(m,1H),3.66–3.42(m,2H,partly covered by the peak of solvent),2.16(s,6H),2.06–1.99(m,1H),1.73–1.63(m,2H),1.62–1.53(m,2H),1.30(s,12H).MS-ESI m/z＝880.4[M+1]⁺.

实施例61

4-((9-(4-(6-氯-1-(4-氟-3,5-二甲基苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)壬基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮

参照实施例57，由相同方法可得到ZC57010。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ11.10(s,1H),7.58(t,J＝7.8Hz,1H),7.09(d,J＝8.6Hz,1H),7.03(d,J＝7.1Hz,1H),6.87(s,1H),6.81(d,J＝6.8Hz,2H),6.54(d,J＝13.4Hz,2H),5.11(s,2H),5.05(dd,J＝12.5,5.3Hz,1H),4.40(s,2H),4.24(s,4H),4.13(t,J＝6.0Hz,4H),3.60(d,J＝10.8Hz,2H),3.35–3.25(m,2H),3.24–3.02(m,6H),2.95–2.83(m,1H),2.65–2.40(m,2H,partly covered by the peak of solvent),2.16(s,6H),2.06–1.98(m,1H),1.73–1.63(m,2H),1.62–1.53(m,2H),1.31(s,10H).MS-ESI m/z＝866.4[M+1]⁺.

实施例62

第一步：10-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷酮-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-10-氧代癸酸

将(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(100mg，0.23mmol)、癸二酸(46mg，0.23mmol)、EDCI(52mg，0.27mmol)、HOAT(37mg，0.27mmol)和N-甲基吗啉(46mg，0.45mmol)加入至二氯甲烷(4mL)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)的混合溶剂中，室温下搅拌过夜，加入水，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过Prep-HPLC纯化，冷冻干燥后得到10-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷酮-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-10-氧代癸酸(46mg，收率33％)。

第二步：叔丁基6-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-4-(4-(9-((((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁-2-基)氨基)-9-氧代壬酰基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-羧酸酯

将10-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷酮-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-10-氧代癸酸(40mg，0.06mmol)、HATU(29mg，0.08mmol)和N,N-二异丙基乙胺(25mg，0.19mmol)加入至N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，室温下搅拌30分钟，加入叔丁基6-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-4-(哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸盐(37mg，0.06mmol)，室温下继续搅拌2小时，加入水，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过Prep-HPLC纯化后得到叔丁基6-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-4-(4-(9-((((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁-2-基)氨基)-9-氧代壬酰基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-羧酸酯(40mg，收率53％)。

第三步：(2S,4R)-1-((S)-2-(9-(4-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)-9-氧代氨基酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

将叔丁基6-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-4-(4-(9-((((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁-2-基)氨基)-9-氧代壬酰基)哌嗪-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-羧酸酯(30mg，0.03mmol)加入至二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(0.5mL，6.73mmol)，室温下搅拌2小时，减压浓缩，通过Prep-HPLC纯化，冷冻干燥后得到(2S,4R)-1-((S)-2-(9-(4-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)-9-氧代氨基酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(17mg，收率61％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ8.98(s,1H),8.37(d,J＝7.8Hz,1H),7.78(d,J＝9.4Hz,1H),7.50–7.31(m,6H),7.06–6.99(m,1H),6.90(s,1H),6.48(s,1H),5.20(s,2H),4.95–4.88(m,1H),4.52(d,J＝9.3Hz,1H),4.42(t,J＝8.0Hz,1H),4.30–4.24(d,J＝12.0Hz,5H),4.13(t,J＝6.1Hz,4H),3.95–3.05(m,10H),2.65–2.62(m,1H),2.45(s,3H),2.35(dd,J＝12.9,4.7Hz,3H),2.30–2.06(m,2H),2.05–1.96(m,1H),1.84–1.75(m,1H),1.57–1.42(m,4H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.25(d,J＝15.9Hz,8H),0.98–0.89(m,9H).MS-ESI m/z＝1071.5[M+1]⁺.

实施例63

(2S,4R)-1-((S)-2-(10-(4-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)-10-氧代十二烷酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

参照实施例62，由相同方法可得到ZC03140。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ8.98(s,1H),8.37(d,J＝7.8Hz,1H),7.78(d,J＝9.4Hz,1H),7.50–7.31(m,6H),7.06–6.99(m,1H),6.90(s,1H),6.48(s,1H),5.20(s,2H),4.95–4.88(m,1H),4.52(d,J＝9.3Hz,1H),4.42(t,J＝8.0Hz,1H),4.30–4.24(d,J＝12.0Hz,5H),4.13(t,J＝6.1Hz,4H),3.95–3.05(m,10H),2.65–2.62(m,1H),2.45(s,3H),2.35(dd,J＝12.9,4.7Hz,3H),2.30–2.06(m,2H),2.05–1.96(m,1H),1.84–1.75(m,1H),1.57–1.42(m,4H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.25(d,J＝15.9Hz,8H),0.98–0.89(m,9H).MS-ESI m/z＝1085.5[M+1]⁺.

实施例64

N¹-(4-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)苄基)-N⁶-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)己二酰胺

参照实施例62，由相同方法可得到ZZ49053。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.99(s,1H),8.47(s,2H),8.39–8.33(m,2H),7.97(d,J＝7.9Hz,1H),7.80(d,J＝9.3Hz,1H),7.46(dd,J＝7.1,2.1Hz,1H),7.44–7.41(m,2H),7.40–7.32(m,7H),7.30(d,J＝2.0Hz,1H),7.11(d,J＝7.5Hz,1H),5.29(s,2H),4.91(p,J＝7.3Hz,1H),4.52(d,J＝9.3Hz,1H),4.42(t,J＝8.1Hz,1H),4.37–4.26(m,7H),4.16–4.10(m,2H),2.45(s,3H),2.29(dd,J＝14.1,7.5Hz,1H),2.21–2.09(m,4H),2.05–1.96(m,2H),1.79(ddd,J＝12.9,8.5,4.7Hz,1H),1.49(dd,J＝25.8,7.2Hz,6H),1.37(d,J＝7.0Hz,4H),0.93(s,9H).MS-ESI m/z＝1055.4[M+1]⁺.

实施例65

N¹-(4-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)苄基)-N⁹-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)壬二酰胺

参照实施例62，由相同方法可得到ZZ49111。

MS-ESI m/z＝1092.4[M+1]⁺.

实施例66

N¹-(4-(6-氯-1-(3-氯-4-氟苄基)-2-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)苄基)-N¹⁰-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)癸二酰胺

参照实施例62，由相同方法可得到ZZ49057。MS-ESI m/z＝1106.5[M+1]⁺.

实施例67

4-((8-((6-(1-乙酰哌啶-4-基)-4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉)-7-基)氧基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮

参照实施例30，由相同方法得到ZZ24160。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ13.99(s,1H),11.10(s,1H),9.91–9.73(m,1H),8.31(d,J＝3.3Hz,1H),7.57(dd,J＝8.5,7.1Hz,1H),7.09(d,J＝8.6Hz,1H),7.04(s,1H),7.01(d,J＝7.1Hz,1H),6.85(d,J＝7.4Hz,2H),6.75(s,1H),6.53(t,J＝5.3Hz,2H),5.77–5.61(m,1H),5.04(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),4.61(d,J＝12.7Hz,1H),4.17(t,J＝6.3Hz,2H),3.97(d,J＝13.3Hz,1H),3.30(q,J＝6.6Hz,2H),3.26–3.11(m,2H),2.87(ddd,J＝17.1,13.8,5.4Hz,1H),2.67–2.53(m,7H),2.05–1.95(m,4H),1.89–1.80(m,3H),1.80–1.73(m,1H),1.70–1.53(m,7H),1.53–1.44(m,2H),1.37(s,6H).MS-ESI m/z＝871.4[M+1]⁺.

实施例68

4-((11-((6-(1-乙酰哌啶-4-基)-4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-2-甲基喹唑啉)-7-基)氧基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮

参照实施例30，由相同方法得到ZZ23001。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ14.05(s,1H),11.10(s,1H),9.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.32(d,J＝3.3Hz,1H),7.63–7.53(m,1H),7.08(d,J＝8.7Hz,1H),7.06(s,1H),7.01(d,J＝7.1Hz,1H),6.86(s,1H),6.85(s,1H),6.75(s,1H),6.52(t,J＝5.8Hz,2H),5.71(p,J＝7.2Hz,1H),5.04(dd,J＝12.7,5.4Hz,1H),4.66–4.57(m,1H),4.16(t,J＝6.2Hz,2H),3.98(d,J＝13.6Hz,1H),3.28(q,J＝6.6Hz,2H),3.24–3.11(m,2H),2.88(ddd,J＝17.7,13.8,5.4Hz,1H),2.66–2.55(m,7H),2.05–1.95(m,4H),1.89–1.74(m,3H),1.62(d,J＝7.0Hz,3H),1.60–1.51(m,2H),1.51–1.43(m,2H),1.39–1.25(m,14H).MS-ESI m/z＝913.5[M+1]⁺

实施例69

4-((11-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-11-氧十一烷基)氨基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮

第一步：叔丁基(R)-(11-(4-(4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-11-氧十一烷基)氨基甲酸酯

将(R)-N-(1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-甲氧基-2-甲基-6-(哌啶-4-基)喹唑啉-4-胺(50mg,0.11mmol)，11-((叔丁氧羰基)氨基)十一酸(33mg,0.11mmol)，HATU(45.5mg,0.12mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)，冰浴条件下加入N,N-二异丙基乙胺(90μL)，保温搅拌4小时。加入水淬灭反应，加入乙酸乙酯萃取，分离有机相并用水洗三遍，用饱和食盐水洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过制备型TLC(二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化后得到叔丁基(R)-(11-(4-(4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-11-氧十一烷基)氨基甲酸酯(50mg,收率:62％)

第二步：(R)-11-氨基-1-(4-(4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)十一烷-1-酮

将叔丁基(R)-(11-(4-(4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-11-氧十一烷基)氨基甲酸酯(50mg，67.3mmol)，溶于二氯甲烷(4mL)，室温下加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌30分钟，减压浓缩后得到(R)-11-氨基-1-(4-(4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)十一烷-1-酮粗品(70mg)，直接用于下一步反应。

第三步：4-((11-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-11-氧十一烷基)氨基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮

将(R)-11-氨基-1-(4-(4-((1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)十一烷-1-酮粗品(70mg,0.07mmol)和2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-4-氟异二氢吲哚-1,3-二酮(32mg,0.12mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(129μL,0.78mmol)，100摄氏度搅拌12小时，加入水和乙酸乙酯萃取，分离有机相，用水洗涤三次，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后通过制备型HPLC进行纯化得到4-((11-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-11-氧十一烷基)氨基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(30mg,收率:43％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ14.09(s,1H),11.11(s,1H),9.85(d,J＝8.0Hz,1H),8.32(s,1H),7.57(dd,J＝8.6,7.1Hz,1H),7.10–7.04(m,2H),7.01(d,J＝7.0Hz,1H),6.85(d,J＝7.0Hz,2H),6.75(s,1H),6.52(t,J＝5.0Hz,1H),5.73(q,J＝8.6,7.2Hz,1H),5.05(dd,J＝12.7,5.4Hz,1H),4.63(d,J＝12.8Hz,1H),3.99(s,4H),3.31–3.19(m,2H),3.13(t,J＝12.1Hz,1H),2.88(td,J＝16.4,15.2,5.2Hz,1H),2.70–2.61(m,1H),2.58(s,4H),2.41–2.23(m,1H),2.00(t,J＝7.5Hz,1H),1.91–1.72(m,1H),1.56(dd,J＝40.4,16.3Hz,7H),1.24(d,J＝10.5Hz,19H).MS-ESI m/z＝899.4[M+1]⁺

实施例70

4-((5-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-基)-5-5-氧代戊基)氨基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮

参照实施例69，由相同方法得到ZZ23020。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ14.06(s,1H),11.11(s,1H),9.84(d,J＝7.8Hz,1H),8.32(d,J＝2.8Hz,1H),7.57(td,J＝7.9,3.6Hz,1H),7.11(dd,J＝8.7,2.6Hz,1H),7.07(s,1H),7.01(d,J＝7.0Hz,1H),6.88–6.82(m,2H),6.75(s,1H),6.58(s,1H),5.77–5.66(m,1H),5.04(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),4.63(d,J＝12.8Hz,1H),4.03(d,J＝14.1Hz,1H),3.99(s,3H),3.33(s,2H),3.24(s,1H),3.18–3.09(m,1H),2.94–2.80(m,1H),2.68–2.62(m,1H),2.58(s,3H),2.43–2.35(m,1H),1.99(q,J＝6.9,6.4Hz,2H),1.80(dd,J＝25.0,12.4Hz,2H),1.71–1.41(m,6H),1.32–1.17(m,6H).MS-ESI m/z＝815.3[M+1]⁺.

实施例71

5-((5-(4-(4-(((R)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-7-甲氧基-2-甲基喹唑啉-6-基)哌啶-1-yl)-5-氧代戊基)氨基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮

参照实施例69，由相同方法得到ZZ23021-B。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ14.03(s,1H),11.08(s,1H),9.84(s,1H),8.32(d,J＝2.6Hz,1H),7.56(d,J＝8.4Hz,1H),7.14(s,1H),7.06(s,1H),6.95(s,1H),6.85(s,2H),6.84(d,J＝2.7Hz,2H),6.75(s,1H),5.83–5.57(m,1H),5.02(dd,J＝12.7,5.4Hz,1H),4.64(d,J＝11.7Hz,1H),4.04(d,J＝14.2Hz,2H),3.99(s,3H),3.17(d,J＝6.0Hz,4H),2.85(d,J＝12.3Hz,1H),2.73–2.55(m,6H),2.04–1.92(m,2H),1.89–1.73(m,1H),1.61(d,J＝6.6Hz,6H),1.23(s,4H).MS-ESI m/z＝815.3[M+1]⁺.

实施例72：Western-blot测定SOS1蛋白降解率

将药物干预过的NCI-H358(人非小细胞肺癌细胞)细胞培养液上清弃去，用预冷的PBS洗涤两次，加入适量的RIPA裂解液(中)(添加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂)裂解细胞，用细胞刮子收集细胞裂解液至EP管中，超声3-5次(150W，开5s，关10s)后在4℃(12000r/min，15min)离心，取上清液，即细胞总蛋白。用BCA法定量检测蛋白浓度，用5×蛋白上样缓冲液稀释蛋白后100℃变性5min。细胞总蛋白在8％SDS-PAGE中电泳分离(上层胶70V，30min；下层胶120V，60min)，转膜(250mA，60min)，5％牛奶封闭1h，一抗(SOS1(CST，12409S)、β-tubulin(CST，15115S))4℃孵育过夜，TBST洗膜三次，二抗(Anti-Rabbit(Promega，W4018))室温孵育1.5h，TBST洗膜三次，ECL发光液孵育后显影，在GeneSys软件中，通过Quick Quant定量出各条带的相对灰度值(以DMSO组作为100％)，得到不同浓度化合物对SOS1的降解率。在Graphpad Prism中对化合物浓度取对数，并通过非线性回归中四参数拟合算法进行分析，拟合得到化合物降解率关于浓度对数的DC₅₀曲线并得出DC₅₀值。

用GeneSys软件分析每个条带的灰度值，计算SOS1蛋白降解50％时蛋白降解靶向嵌合体PROTACs的浓度DC₅₀。

注释：A(10～100nM)、B(100～1000nM)、C(>1000nM)

图1示出实施例45中化合物ZC79070可剂量依赖性诱导NCI-H358细胞中SOS1蛋白质的降解，且当化合物浓度达到156nM时，产生显著的降解效果。

图2示出实施例1中化合物ZZ02151可剂量依赖性诱导NCI-H358细胞中SOS1蛋白质的降解，且当化合物浓度达到78nM时，产生显著的降解效果。

图3示出实施例45中化合物ZC79070的半数降解浓度DC50及最大降解程度，化合物ZC79070可诱导NCI-H358细胞中SOS1蛋白质的降解，其半数降解浓度为73.07nM，最大降解程度为99％。

实施例73:CellTiter-Glo法测定PROTACs对肿瘤细胞3D增殖抑制活性

将处于细胞对数生长期的要进行实验的肿瘤细胞NCI-H358(人非小细胞肺癌细胞)按每孔100μl(1000个细胞)接种于超低吸附96孔培养板内(ThermoFisher，174925)，加入不同浓度化合物，细胞在37℃、5％CO₂条件下培养7天，然后每孔加入100μl CellTiter-Glo试剂(Promega，G9682)，混匀后取100μl转移至OptiPltae-96白板中，在Spark多功能酶标仪上采用Luminescence模式读板，通过计算抑制率＝(1-(化合物孔值-空白值)/(DMSO孔值-空白值))*100，得到不同浓度化合物的抑制率。在Graphpad Prism中对化合物浓度取对数，并通过非线性回归中四参数拟合算法进行分析，拟合得到化合物抑制率关于浓度对数的IC₅₀曲线并得出IC₅₀值。

实施例	化合物编号	NCI-H358 IC<sub>50</sub>(nM)
			1	ZZ02151	A
8	ZZ02080	C
			13	ZZ02102	C
21	ZZ77119	B
			33	ZZ24011	C
37	ZZ77153	B
			44	ZC79069	C
45	ZC79070	C
			46	ZZ77115	C
47	ZZ77116	C
			48	ZZ77117	C

注释：A(10～100nM)、B(100～200nM)、C(200～400nM)

图4为实施例45中化合物ZC79070对H358细胞的抗增殖活性研究结果，表明化合物ZC79070对H358细胞具有抗增殖活性，其IC₅₀值为337.65nM。

图5为实施例1中化合物ZZ02151对H358细胞的抗增殖活性研究结果，表明化合物ZZ02151对H358细胞具有抗增殖活性，其IC₅₀值为7.61nM。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种结构通式如I的蛋白降解靶向嵌合体，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物或氘代化合物：

SOS1蛋白配体─连接基团L─E3连接酶配体 (I)。

2.如权利要求1所述的蛋白降解靶向嵌合体，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物或氘代化合物，其特征在于，SOS1配体─选自下组：

式中，“*”表示R构型或S构型。

3.如权利要求1所述的蛋白降解靶向嵌合体，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物或氘代化合物，其特征在于，所述E3连接酶配体选自：cereblonE3连接酶配体、VHLE3连接酶配体、MDM2连接酶配体、TRIM24连接酶配体、TRIM21连接酶配体、KEAP1连接酶配体和IAP连接酶配体。

4.如权利要求1或3所述的蛋白降解靶向嵌合体，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物或氘代化合物，其特征在于，─E3连接酶配体选自下组：