CN115637243B - 一种高产纤维素酶的菌株、筛选方法及其应用 - Google Patents
一种高产纤维素酶的菌株、筛选方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115637243B CN115637243B CN202211343572.0A CN202211343572A CN115637243B CN 115637243 B CN115637243 B CN 115637243B CN 202211343572 A CN202211343572 A CN 202211343572A CN 115637243 B CN115637243 B CN 115637243B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- strain
- cellulase
- enzyme
- yield
- cellulose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 title claims abstract description 37
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 title claims abstract description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 18
- 238000012216 screening Methods 0.000 title abstract description 16
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 6
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 10
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 claims description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 26
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 26
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 abstract description 26
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract description 7
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 abstract description 6
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 abstract description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract description 4
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 abstract description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 15
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 description 12
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 9
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 9
- 210000004767 rumen Anatomy 0.000 description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 4
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 4
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 4
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 4
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 238000010256 biochemical assay Methods 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 1
- 241000194103 Bacillus pumilus Species 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 1
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229920003123 carboxymethyl cellulose sodium Polymers 0.000 description 1
- 229940063834 carboxymethylcellulose sodium Drugs 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940050189 cow milk fat Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000003028 enzyme activity measurement method Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000021243 milk fat Nutrition 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种高产纤维素酶的菌株，其为副干酪乳酪杆菌，已于2022年4月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，其保藏编号为GDMCC No:62441。该菌株的筛选方法，包括以下步骤：(1)菌株分离；(2)菌株产酶能力的测定。本发明可选育获得高产纤维素酶菌株，对于低成本开发和使用微生物饲料添加剂具有重要意义。
Description
技术领域
本发明属于产纤维素酶菌株筛选技术领域，具体涉及一种高产纤维素酶的菌株、筛选方法及其应用。
背景技术
纤维素酶是一类多组分酶系的总称，具有水解纤维素，使之降解成为葡萄糖的功能。在饲料中添加纤维素酶能提高饲料中纤维素利用率，能促进草食家畜生长发育，在日粮中加入0.3％纤维素复合饲料酶，能提高育肥肉牛43％平均日增重Ρ；在日粮中添加纤维素酶(30g/d)，可使绵羊日增重提高5.41％，羊毛产量提高5.04％B，但由于纤维素酶制剂成本高，大大限制了纤维素酶制剂的应用。
利用产纤维素酶微生物制备单一或复合型微生物添加剂用于草食家畜生产，能取得同样效果，但成本大大下降。真菌和细菌等多种微生物都具有产纤维素酶的能力，鉴于菌体具有发酵周期短、产酶和繁殖速度快，有利于工业化生产等，所以产纤维素酶微生物被广泛用做饲料添加剂。芽孢杆菌因具对环境的耐受力强，且对营养要求不高等优势而倍受欢迎，其中以枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌及地衣多糖芽孢杆菌最为常用。李杰梅等在奶牛日粮中添加枯草芽孢杆菌微生物添加剂(10g/头/天)显著增加了奶牛乳脂产量和乳脂率。王振华等在奶牛日粮中添加产纤维素酶枯草芽孢杆菌制剂(5×109CFU/头/天)使奶牛的产奶量提高了26.34％。可见选育高产纤维素酶菌株，对于开发和使用微生物饲料添加剂具有重要意义。
发明内容
本发明提供了一种高产纤维素酶的菌株、筛选方法及其应用，以解决现有技术生产的纤维素酶制剂成本高，如何开发一种高产纤维素酶的菌株，以降低微生物饲料添加剂生产成本的问题。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种高产纤维素酶的菌株，所述菌株为副干酪乳酪杆菌，已于2022年4月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，其保藏编号为GDMCC No:62441。
进一步地，所述菌株采集自奶牛瘤胃内容物。
本发明还提供一种高产纤维素酶的菌株的筛选方法，包括以下步骤：
(1)菌株分离；
(2)菌株产酶能力的测定。
进一步地，步骤(1)的菌株分离方法，包括以下步骤：
采集奶牛瘤胃内容物用接种环划线接种于MRS固体培养基中，置于37℃培养24h，挑取单个菌落进行革兰氏染色，镜检。
进一步地，步骤(2)的菌株产酶能力的测定包括：纤维素降解能力测定初筛、CMC酶活测定复筛、高产酶菌株的鉴定。
进一步地，纤维素降解能力测定初筛的方法，包括以下步骤：
用接种环从平板上无菌挑取单个菌落至于羧甲基纤维素钠液体培养培养基1mL中，置于37℃摇床过夜培养，然后在转速为8000r/min的条件下离心10min，取上清；采样打孔法将100μL上清液置于刚果红培养基平板上37℃培养3-4d，观察透明圈直径，根据透明圈直径和菌体直径初步筛选出高产纤维素酶菌株。
进一步地，CMC酶活测定复筛的方法，包括以下步骤：
将乳酸菌菌液在转速为8000r/min的条件下离心10min，取0.5mL上清液，加入0.5mL 0.2％羧甲基纤维素钠底物溶液，在50℃恒温水浴锅中温育1h，然后加入2mL.DNS试剂，再100℃沸水浴10min终止反应，室温冷却后在600nm下测定光吸收值，酶液沸水浴处理10min后作为阴性对照，每个样品做3个平行。
进一步地，高产酶菌株的鉴定包括：生化鉴定、16SrDNA分子水平鉴定。
进一步地，生化鉴定是参照《伯杰式细菌鉴定手册》进行的。
进一步地，16SrDNA分子水平鉴定的方法，包括以下步骤：
取纯培养物1mL，按照细菌基因组DNA提取试剂盒说明书提取DNA，置-20℃保存，备用；合成细菌16S rDNA引物27F：AGAGTTTGATCMTGGCTCAG和1492R：GGTTACCTTGTTACGACTT，扩增长度为1500bp；再以上述DNA为模板，F/R为引物进行PCR扩增，扩增程序为：95℃预变性5min；然后进行30个循环95℃变性30s、52℃退火40s、72℃延伸1min；最后再进行72℃延伸10min；扩增结束后，取7μL的PCR产物在1.5％的凝胶琼脂糖上进行电泳，克隆、测序分析。
与现有技术相比，本发明具有如下的优点：
本发明的方法能够高效、准确地筛选出高产纤维素酶的乳酸菌，应用到饲料中后可节约饲料成本，因其自身的物理化学特性，应用于农业副产物以及部分城市废物的处理中，使之实现生态化处理效果；作为微生态制剂，具有天然、无毒、安全可靠、无污染、可以用于疾病防治等优势，使其得以更加广泛的应用；高纤维素酶菌改善了农业副产物与有效应用物间的良性循环关系，发展了绿色畜牧业、促进了农业生态安全和绿色食品的生产，对于微生物饲料添加剂的低成本开发和使用具有较好的参考和指导意义。
附图说明
图1为处理后的乳酸菌菌液图；
图2为16SrDNA琼脂糖凝胶电泳图图；
图3为部分刚果红初筛结果图；
图4为葡萄糖标准曲线图；
图5为纤维素分解菌糖化水平图；
图6为纤维素酶活测定结果图。
具体实施方式
为便于更好地理解本发明，通过以下实例加以说明，这些实例属于本发明的保护范围，但不限于本发明的保护范围。
1.材料与方法
1.1样品来源
采集自广西南宁某健康奶牛场的奶牛瘤胃内容物。
1.2主要试剂
细菌DNA提取试剂盒、2×ES Taq MasterMix、100bp laddermarker等均购自北京康为世纪生物科技有限公司；MRS购自北京陆桥技术股份有限公司；纤维素刚果红培养基，羧甲基纤维素钠液体培养基购自山东拓普生物工程有限公司；细菌微量生化反应管购自杭州天和微生物试剂有限公司；PCR仪、凝胶成像仪购自Biorad公司。
1.3菌株分离
采集奶牛瘤胃内容物用接种环划线接种于MRS固体培养基中，置于37℃培养24h，挑取单个菌落进行革兰氏染色，镜检。
1.4菌株产酶能力的测定
1.4.1纤维素降解能力测定初筛(刚果红染色法)
原理：刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但不能与分解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应，当我们在纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红就会与纤维素形成红素复合物，当培养基中的纤维素被分解后，刚果红纤维素复合物就无法形成，这样培养基中会出现以纤维素降解菌为中心的透明圈。刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红--纤维素的复合物便没法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
用接种环从平板上无菌挑取单个菌落至于羧甲基纤维素钠液体培养培养基1mL中，置于37℃摇床过夜培养，然后在转速为8000r/min的条件下离心10min，取上清。采样打孔法将100μL上清液置于刚果红培养基平板上37℃培养3d，观察透明圈直径，根据透明圈直径和菌体直径初步筛选出高产纤维素酶菌株。
1.4.2CMC酶活测定复筛
将乳酸菌菌液在转速为8000r/min的条件下离心10min，取0.5mL上清液(粗酶液)，加入0.5mL 0.2％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)底物溶液，50℃恒温水浴锅中温育1h，然后加入2mL.DNS试剂，再100℃沸水浴10min终止反应，室温冷却后在600nm下测定光吸收值，酶液沸水浴处理10min后作为阴性对照，见图1，每个样品做3个平行。
1.4.3高产酶菌株的鉴定
1.4.3.1生化鉴定
参照《伯杰式细菌鉴定手册》进行生化鉴定，选择接触酶、糖/醇利用、V-P反应、淀粉水解、吲哚形成、明胶液化、纤维素水解、蛋白水解、硝酸盐、柠檬酸盐和硫化氢利用试验作为初步判断。
1.4.3.216SrDNA分子水平鉴定
取纯培养物1mL，按照细菌基因组DNA提取试剂盒说明书提取DNA，置-20℃保存，备用；合成细菌16S rDNA引物27F：AGAGTTT GATCMTGGCTCAG和1492R：GGTTACCTTGTTACGACTT，扩增长度为1500bp；再以上述DNA为模板，F/R为引物进行PCR扩增，扩增程序为：95℃预变性5min；然后进行30个循环95℃变性30s、52℃退火40s、72℃延伸1min；最后再进行72℃延伸10min；扩增结束后，取7μL的PCR产物在1.5％的凝胶琼脂糖上进行电泳(如图2所示)，克隆、测序分析。
2.结果
2.116SrDNA分子生物学鉴定结果
16SrDNA分子生物学鉴定结果见图2，在1500bp左右的位置出现一条亮带，说明成功扩增出目的条带。
2.2刚果红染色初筛结果
从MRS固体培养基的乳酸菌培养物中共筛选出13株乳酸菌菌株，分别对其进行产纤维素酶能力测试共筛选出11株菌株，如表1所示，部分刚果红初筛结果见图3，并经生化鉴定及16SrDNA测序结果判定菌株名称。
表1刚果红染色初筛结果
2.3糖化水平和纤维素酶活的测定
2.3.1葡萄糖标准曲线的绘制
葡萄糖标准曲线绘制方法：配制浓度梯度为0.02，0.5，0.7，1，1.25，1.5，1.65mg/ml的葡萄糖标准溶液，在分光光度计上(540nm)进行比色测定，用空白管溶液调零后，测定各管光密度值，绘制葡萄糖标准曲线，见图4。
2.3.2糖化水平的测定
采用DNS显色法。产酶培养液离心后取粗酶液。粗酶液和缓冲液充分反应后，加入DNS溶液，煮沸灭活，测OD540值。如图5所示，4-副干酪乳酪杆菌比12-嗜酸片球菌高56.7％，有较突出的糖化水平。
2.3.3纤维素酶活测定
将40℃、PH＝5.0条件下，1min内将底物转化为1umol葡萄糖所需的酶量定义为1个酶活力单位(U/mL)。采用公式X＝[(Aa-Ab)×K+c]/(M×t)×1000进行计算，记录数据。其中：X为纤维素酶活力，Aa为酶液OD540值，Ab为空白对照OD540值，K为斜率，c为截距，M为葡萄糖分子量；t为反应时间(min)。纤维素酶活测定结果见图6。由图6可知，副干酪乳酪杆菌的酶活为0.57U/mL，第二高的枯草芽孢杆菌的酶活为0.18U/mL，副干酪乳酪杆菌的酶活水平比其高出216.67％，说明该乳酸菌有很强的产纤维素酶的能力。
3.结论
本试验从牛瘤胃内容物中分离出13株乳酸菌，经生化鉴定及16SrDNA测序结果判定菌株名称。通过刚果红初筛、糖化水平及纤维素酶活性测定分别对13株乳酸菌进行产纤维素酶能力测试。结果显示副干酪乳酪杆菌的产纤维素酶能力最强。所述副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillusparacasei)GX20200417-5已于2022年4月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，其保藏编号为GDMCC No:62441，分类命名：Lacticaseibacillusparacasei。本发明试验的方法能够高效、准确地筛选出高产纤维素酶的乳酸菌，对于微生物饲料添加剂的开发和使用具有较好的参考和指导意义。
Claims (1)
1.一种高产纤维素酶的菌株，其特征在于：所述菌株为副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillusparacasei)GX20200417-5，已于2022年4月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，其保藏编号为GDMCCNo:62441。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211343572.0A CN115637243B (zh) | 2022-10-31 | 2022-10-31 | 一种高产纤维素酶的菌株、筛选方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211343572.0A CN115637243B (zh) | 2022-10-31 | 2022-10-31 | 一种高产纤维素酶的菌株、筛选方法及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115637243A CN115637243A (zh) | 2023-01-24 |
| CN115637243B true CN115637243B (zh) | 2024-02-09 |
Family
ID=84946043
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211343572.0A Active CN115637243B (zh) | 2022-10-31 | 2022-10-31 | 一种高产纤维素酶的菌株、筛选方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115637243B (zh) |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101555461A (zh) * | 2009-04-07 | 2009-10-14 | 福州大学 | 一株产碱性纤维素酶菌株lt3及其选育方法和产酶条件初步优化 |
| CN105969689A (zh) * | 2016-05-31 | 2016-09-28 | 中国科学院烟台海岸带研究所 | 产纤维素酶细菌及应用 |
| CN106434417A (zh) * | 2016-08-01 | 2017-02-22 | 奥为（天津）环保科技有限公司 | 一株耐高温产纤维素酶菌及其应用 |
| KR20170033642A (ko) * | 2015-09-17 | 2017-03-27 | 대한민국(농촌진흥청장) | 셀룰라아제 생산능이 있는 페니바실러스 자밀레 ｂｒｃ１５１ 균주 및 이의 이용 |
| CN112940977A (zh) * | 2021-03-05 | 2021-06-11 | 中国海洋大学 | 副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei及其应用 |
| CN113736716A (zh) * | 2021-10-27 | 2021-12-03 | 黑龙江省科学院微生物研究所 | 一株副干酪乳杆菌及黄贮复合生物发酵剂和黄贮方法 |
| CN114921375A (zh) * | 2022-05-30 | 2022-08-19 | 华南农业大学 | 一株高产纤维素酶的芽孢杆菌及其应用 |
-
2022
- 2022-10-31 CN CN202211343572.0A patent/CN115637243B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101555461A (zh) * | 2009-04-07 | 2009-10-14 | 福州大学 | 一株产碱性纤维素酶菌株lt3及其选育方法和产酶条件初步优化 |
| KR20170033642A (ko) * | 2015-09-17 | 2017-03-27 | 대한민국(농촌진흥청장) | 셀룰라아제 생산능이 있는 페니바실러스 자밀레 ｂｒｃ１５１ 균주 및 이의 이용 |
| CN105969689A (zh) * | 2016-05-31 | 2016-09-28 | 中国科学院烟台海岸带研究所 | 产纤维素酶细菌及应用 |
| CN106434417A (zh) * | 2016-08-01 | 2017-02-22 | 奥为（天津）环保科技有限公司 | 一株耐高温产纤维素酶菌及其应用 |
| CN112940977A (zh) * | 2021-03-05 | 2021-06-11 | 中国海洋大学 | 副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei及其应用 |
| CN113736716A (zh) * | 2021-10-27 | 2021-12-03 | 黑龙江省科学院微生物研究所 | 一株副干酪乳杆菌及黄贮复合生物发酵剂和黄贮方法 |
| CN114921375A (zh) * | 2022-05-30 | 2022-08-19 | 华南农业大学 | 一株高产纤维素酶的芽孢杆菌及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Assessing of Morphological, Cultural, Biochemical Profile and Enzymatic Activity of a Lactobacillus paracasei CCM 1837 Strain;Mihaela DUMITRU等;Annals Series on Biological Sciences;第6卷(第2期);第22-31页，参见全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115637243A (zh) | 2023-01-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103232944B (zh) | 一种秸秆与粪便混合堆肥微生物菌剂 | |
| CN110066746B (zh) | 一株加速堆肥腐熟的耐高温芽孢杆菌属细菌njau-nd8及其应用 | |
| CN107325974B (zh) | 高植物细胞壁降解活性瘤胃真菌及其在饲料青贮中的应用 | |
| CN113604404B (zh) | 一种凝结芽孢杆菌ysf17及其用途 | |
| CN109517761A (zh) | 产纤维素酶的地衣芽孢杆菌、其微生物发酵制剂及其应用 | |
| CN113444664B (zh) | 一株产γ-氨基丁酸短乳杆菌及其应用 | |
| CN113736716B (zh) | 一株副干酪乳杆菌及黄贮复合生物发酵剂和黄贮方法 | |
| WO2022207015A2 (zh) | 一种香肠乳杆菌sr2及其应用 | |
| CN111690539A (zh) | 高效秸秆纤维素分解菌的筛选及应用 | |
| CN108977367B (zh) | 一株黑曲霉菌株及其在降解油茶饼粕中茶皂素的应用 | |
| CN108865927B (zh) | 低温酵解玉米秸秆的细菌菌株及其发酵培养方法和应用 | |
| CN116463238B (zh) | 一株可降解纤维素的枯草芽孢杆菌及应用 | |
| CN115637243B (zh) | 一种高产纤维素酶的菌株、筛选方法及其应用 | |
| CN114231464B (zh) | 凝结芽孢杆菌及其用途 | |
| CN113897312B (zh) | 一种动物饲喂菌剂制备及其应用 | |
| CN114410514B (zh) | 斯密氏芽孢杆菌及其用途 | |
| CN102640886B (zh) | 一株植物乳杆菌在花菜外包叶青贮中的应用 | |
| CN114561328A (zh) | 一种高活力乳酸菌菌剂的制备方法 | |
| CN111040969A (zh) | 一种复合乳杆菌剂及其在水牛青贮饲料中的应用 | |
| CN115216431B (zh) | 一株来源玉米芯的多功能枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN117229938B (zh) | 一种适用于贵州贞丰的发酵床菌剂及制备方法 | |
| CN117603889B (zh) | 饲用产酸性蛋白酶的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN117106676B (zh) | 一株枯草芽孢杆菌及其在饲料生产中的应用 | |
| CN115094010B (zh) | 一种高产甲酸丁酸梭菌 | |
| CN117210365B (zh) | 一种贝莱斯芽孢杆菌及在提高消化和抗氧化能力中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |