CN115613218A - 一种多功能医用纤维膜及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种多功能医用纤维膜及其制备方法和应用,所述多功能医用纤维膜是以包括聚高分子材料、带阴离子基团的材料、胶原蛋白和ε‑聚赖氨酸在内的物质为原料,采用共轭静电纺丝技术制备得到的静电纺丝纤维膜。该医用纤维膜同时具备静电纺丝膜与自组装膜的优点,与细胞外基质结构接近,能提供大量的细胞接触点,为细胞黏附、增殖、生理功能提供更好的微环境;组成中含有胶原蛋白和ε‑聚赖氨酸,可使其具有良好的亲水性和抗菌性,带阴离子基团的材料的添加使得胶原蛋白和ε‑聚赖氨酸更稳定地结合于纤维膜上,使其缓慢地释放,同时其自身良好的特性使产品在临床使用中可直接贴附使用,更能有效地诱导细胞生长和组织再生,进而有效促进创面的修复。

Description

一种多功能医用纤维膜及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医用材料技术领域,具体涉及一种抑菌、预防粘连、促修复性能的多功能医用纤维膜及其制备方法和应用。
背景技术
外科手术中通常会遇到的问题就是术后防止感染、预防粘连、促进创面修复,因此一些生物材料应运而生,如临床上使用的有高分子材料制备的防粘连膜,以及近年出现的动物组织脱细胞生物材料,这些产品都为术后创面提供了很好的防粘连或促进修复的作用。
近些年,随着增材制造技术的发展,静电纺丝技术作为一种操作简单、经济有效的制备超细纤维的方法,能制备微纳米级的纤维,纳米纤维结构能够很好地模拟组织工程支架,与细胞外基质结构接近,比表面积大,导致其表面能和活性增加,从而产生小尺寸效应,表面与界面效应,能提供大量的细胞接触点,为细胞黏附、增殖、生理功能提供更好的微环境,并改善蛋白质吸附,更能有效地诱导细胞生长和组织再生,也更有利于药物和生物因子的释放。因此临床使用上逐步出现了通过静电纺丝技术制备的补片,但这些补片由于受纺丝材料的影响,主要还是为高分子材料组成,因此补片的亲水性和生物相容性缺乏,尽管有产品通过在高分子材料中添加生物大分子材料如纤维蛋白原加以改善,但受材料的可纺性影响,添加量有限,并且生物大分子材料不可避免会被包裹在纤维丝内部影响性能的发挥。
另外由外科手术、创伤等引起的创口,容易受到微生物的感染,如不进行有效治疗,伤口感染后会延迟愈合,对外部伤口常常可以局部使用抗感染药物,而对手术后体内创面的感染风险,往往需要通过注射抗生素预防等治疗方式。而由于抗生素滥用造成的耐药性已经成为普遍存在且引起人们重视的问题,并且由于手术后预防粘连和促修复需要植入人体内的医用材料会有存在包囊的情况,此时的感染由于不存在毛细血管即使注射抗生素也无法解决问题。前些年人们曾经通过在医用材料中添加纳米银以抗菌,但银的重金属毒性及细胞毒性,还有使皮肤变黑等问题,国家药监局对银离子材料持高度谨慎态度。人们也一直在寻找能植入体内抗菌性能好的材料,特别是同时具有防止感染、预防粘连和促进创面修复功能的材料就更缺乏。
胶原蛋白广泛存在人体和动物组织中,比如结缔组织除了含60-70%的水分外,胶原蛋白占了约20-30%,胶原蛋白是组织细胞外基质的主要组成成分之一,由于其具有良好的生物相容性、可降解性,且能构建细胞外基质微环境,有利于细胞粘附和增殖,可诱导骨髓间充质干细胞的分化,表现出一定的生物活性与功能性,因此胶原蛋白作为一种重要的生物材料,被广泛应用于多个临床领域,具有较高的实际应用价值。临床上使用的动物脱细胞基质修复材料其主要成分就是胶原蛋白。
ε-聚赖氨酸是一种聚阳离子多肽,能够抑制革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性菌、真菌等,抑菌谱广泛,甚至对一些病毒也有杀灭效果,该物质是一种微生物产生的赖氨酸同聚物,是一种对人体较安全的抗菌剂,很多国家已经将其作为食品防腐剂广泛应用,进一步人们正在逐步尝试将其开发为一种安全有效用于人体的抗菌材料。
CN110507842A公开了一种细菌纤维素/透明质酸/ε-聚赖氨酸功能型敷料及其制备方法,所述ε-聚赖氨酸和透明质酸通过静电力结合,固定在细菌纤维素网络结构中。该发明的功能型敷料安全性高,生物相容性好并具有广谱抗菌性;制备方法简单高效,绿色环保并且不会破坏细菌纤维素的三维网络结构;不足之处是在静电吸附过程增加了污染的几率,和生产成本增加。
CN111441101A公开了一种PLGA/ε-聚赖氨酸抗菌纳米纤维的制备方法,包括:将聚乳酸-羟基乙酸共聚物与2,2,2-三氟乙醇混合,搅拌得到聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液;将ε-聚赖氨酸加入到去离子水中,搅拌得到ε-聚赖氨酸溶液;将聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液与ε-聚赖氨酸溶液混合,得到PLGA/ε-聚赖氨酸混合溶液;对PLGA/ε-聚赖氨酸混合溶液进行静电纺丝,得到PLGA/ε-聚赖氨酸抗菌纳米纤维。该发明制备的抗菌纳米纤维具有良好的抗菌性和热稳定性,但这样制备方法的纤维表面要达到抑菌效果需要增加ε-聚赖氨酸含量,而ε-聚赖氨酸含量增加又会产生细胞毒性,另外包裹在纤维丝中的ε-聚赖氨酸难以全部释放出来,会随材料较长时间存于体内,且随时间会扩散到其它组织部位,带来持续的细胞毒性。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种抑菌、预防粘连、促修复性能的多功能医用纤维膜及其制备方法和应用。
为达到此发明目的,本发明采用以下技术方案:
第一方面,本发明提供一种多功能医用纤维膜,其特征在于,所述多功能医用纤维膜是以包括聚高分子材料、带阴离子基团的材料、胶原蛋白和ε-聚赖氨酸在内的物质为原料,采用共轭静电纺丝技术制备得到的静电纺丝纤维膜。
优选地,所述多功能医用纤维膜由纳米纤维A和纳米纤维B交织而成;所述纳米纤维A中包括聚高分子材料、胶原蛋白和ε-聚赖氨酸;所述纳米纤维B中包括聚高分子材料和带阴离子基团的材料。
在上述共轭静电纺丝技术中,两个相对喷丝头相互对喷,且这两个喷丝头是带相反电荷来进行对喷的。将两个相对放置的喷丝头带上相反极性的高电压,同时进行静电纺丝,从两个喷丝头射出的溶液经电纺得到带相反电荷的纳米纤维,本发明将其分别命名为纳米纤维A(带正电荷)和纳米纤维B(带负电荷),它们相互吸引,抱合形成中性纳米纤维材料。因此,在所述纳米纤维A中,除了包括聚高分子材料、胶原蛋白和ε-聚赖氨酸,还可以包括少量的带阴离子基团的材料或其他活性成分,只要保证纳米纤维A整体为带正电荷状态即可;同理,在所述纳米纤维B中,除了包括聚高分子材料和带阴离子基团的材料,还可以包括少量的胶原蛋白、ε-聚赖氨酸或其他活性成分,只要保证纳米纤维B整体为带负电荷状态即可。
本发明涉及的医用纤维膜采用共轭静电纺丝技术制备,因此所制备的纤维膜结构能够很好地模拟组织工程支架,有利细胞粘附生长。纳米纤维A和B中主要以聚高分子材料为主,使纤维膜的力学性能和生物功能满足需要,其作为三维网络结构骨架,可提供良好的力学强度,不仅使得该纳米纤维膜能承受一定的缝合力,不撕裂、不脱边,可发生形变但不至于破损;而且三维网络结构骨架有利于细胞的粘附生长,同时能更好起到隔离防粘连效果。
为了改善聚高分子材料的亲水性和生物相容性,本发明在纳米纤维A中还添加一定量的胶原蛋白,胶原蛋白具有生物相容性和促进组织再生修复功能,将随材料的降解持续释放增强其修复功能。
为了改善聚高分子材料的抗菌性能,本发明在纳米纤维A中还添加一定量的ε-聚赖氨酸,其能使纤维膜材料具有抑制细菌、消除感染风险的功效。
进一步地,由于ε-聚赖氨酸和胶原蛋白携带阳离子,为了让其更好固定在三维网络结构上,本发明特定在纳米纤维B中添加带阴离子基团的材料,当材料遇到水溶液或者体内的体液时,由于静电作用,将有利于ε-聚赖氨酸和胶原蛋白相对稳定地固定于三维网络结构上,使产品在使用时减少ε-聚赖氨酸或胶原蛋白突释现象的发生,使产品的在创面组织部位更好地发挥抗菌性能和修复性能。同时带阴离子基团的材料与ε-聚赖氨酸和/或胶原蛋白的静电作用,能更好地固定三维网络结构,可替代交联剂的交联固定作用,从而避免交联剂使用的毒副作用。另外,带阴离子基团的材料添加后,还能增强材料整体的抑菌性能。
优选地,所述聚高分子材料、胶原蛋白和ε-聚赖氨酸在所述纳米纤维A中的质量百分含量分别为50-95%、1-10%、1-10%。
所述纳米纤维A中聚高分子材料的质量百分含量特定选择为50-95%是因为若其含量进一步减少会降低纳米纤维膜的力学性能及三维结构,若其含量进一步增加会延长纳米纤维膜的降解时间。所述纳米纤维A中胶原蛋白的质量百分含量特定选择为1-10%是因为若其含量进一步减少会影响纳米纤维膜修复性能,若其含量进一步增加会影响纳米纤维膜的力学性能。所述纳米纤维A中ε-聚赖氨酸的质量百分含量特定选择为1-10%是因为若其含量进一步减少会影响纳米纤维膜的抗菌性能,若其含量进一步增加会影响纳米纤维膜的力学性能。
所述聚高分子材料在所述纳米纤维A中的质量百分含量可以选择50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%等,该数值范围内的其他具体点值均可选择,在此便不再一一赘述。
所述胶原蛋白在所述纳米纤维A中的质量百分含量可以选择1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%等,该数值范围内的其他具体点值均可选择,在此便不再一一赘述。
所述ε-聚赖氨酸在所述纳米纤维A中的质量百分含量可以选择1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%等,该数值范围内的其他具体点值均可选择,在此便不再一一赘述。
优选地,所述聚高分子材料和带阴离子基团的材料在所述纳米纤维B中的质量百分含量分别为50-95%、1-10%。
所述纳米纤维B中聚高分子材料的质量百分含量特定选择为50-95%是因为若其含量进一步减少会降低纳米纤维膜的力学性能及三维结构,若其含量进一步增加会延长纳米纤维膜的降解时间。所述纳米纤维B中带阴离子基团的材料的质量百分含量特定选择为1-10%是因为若其含量进一步减少会影响纳米纤维膜与ε-聚赖氨酸和胶原的结合,若其含量进一步增加会影响纳米纤维膜的力学性能。
所述聚高分子材料在所述纳米纤维B中的质量百分含量可以选择50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%等,该数值范围内的其他具体点值均可选择,在此便不再一一赘述。
所述带阴离子基团的材料在所述纳米纤维B中的质量百分含量可以选择1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%等,该数值范围内的其他具体点值均可选择,在此便不再一一赘述。
优选地,所述纳米纤维A与纳米纤维B的质量比为1:5-5:1,例如1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1等,该数值范围内的其他具体点值均可选择,在此便不再一一赘述。
优选地,所述聚高分子材料包括聚乳酸、聚乙交酯、聚己内酯、聚乙烯醇、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乙二醇、聚四氟乙烯、聚酯酰胺或聚氨酯中的任意一种或至少两种的组合;优选聚乳酸和聚乳酸-羟基乙酸共聚物的组合。
所述至少两种的组合例如聚乳酸和聚乙交酯的组合、聚己内酯和聚乙烯醇的组合、聚乳酸-羟基乙酸共聚物和聚乙二醇的组合等,其他任意的组合方式均可选择,在此便不再一一赘述。
优选地,所述带阴离子基团的材料包括透明质酸钠、羧甲基纤维素、海藻酸钠、硫酸软骨素或纤维蛋白中的任意一种或至少两种的组合;优选海藻酸钠和透明质酸钠的组合。
所述至少两种的组合例如透明质酸钠和羧甲基纤维素的组合、海藻酸钠和硫酸软骨素的组合、硫酸软骨素和纤维蛋白的组合等,其他任意的组合方式均可选择,在此便不再一一赘述。
优选地,所述胶原蛋白包括I型胶原蛋白或其活性域、II型胶原蛋白或其活性域、III型胶原蛋白或其活性域中的任意一种或至少两种的组合,更优选I型胶原蛋白或III型胶原蛋白。
优选地,所述ε-聚赖氨酸的分子量为3000-5000,例如3000、3200、3400、3600、3800、4000、4200、4300、4600、4800或5000等,优选3600-4600,进一步优选3600-4300,上述数值范围内的其他任意具体点值均可选择,在此便不再一一赘述。
本发明所涉及的ε-聚赖氨酸的分子量特定选择为3000-5000,优选3000-4600,进一步优选3600-4300,是因为ε-聚赖氨酸在3600-4300的抑菌活性最高,其分子量小于1300时,失去活性。
第二方面,本发明提供一种如第一方面所述的多功能医用纤维膜的制备方法,所述制备方法包括如下步骤:
(1)将聚高分子材料、胶原蛋白和ε-聚赖氨酸与溶剂混合溶解,得到纺丝溶液A;将聚高分子材料、带阴离子基团的材料与溶剂混合溶解,得到纺丝溶液B;
(2)将所述纺丝溶液A和纺丝溶液B进行共轭纺丝,干燥,得到所述多功能医用纤维膜。
本发明所涉及的多功能医用纤维膜的制备方法工艺简单,产品质量易于控制,能实现高效率、低污染和低成本的产业化生产。
优选地,所述溶剂选自三氯甲烷、二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、六氟异丙醇、三氟乙腈、三氟乙酸、甲酸、乙酸或丙酮中的任意一种或至少两种的组合。
所述至少两种的组合例如三氯甲烷和二氯甲烷的组合、N,N-二甲基甲酰胺和甲醇的组合、六氟异丙醇和三氟乙腈的组合等,其他任意的组合方式均可选择,在此便不再一一赘述。
优选地,所述共轭纺丝的温度为15-60℃,例如15℃、20℃、22℃、25℃、27℃、30℃、32℃、35℃、40℃、50℃、60℃等,上述数值范围内的其他任意具体点值均可选择,在此便不再一一赘述。
优选地,所述共轭纺丝的湿度为25-80%,例如25%、30%、40%、50%、60%、70%或80%等,上述数值范围内的其他任意具体点值均可选择,在此便不再一一赘述。
优选地,所述共轭纺丝的纺丝电压为5-28kV,例如5kV、8kV、10kV、12kV、15kV、18kV、20kV、22kV、25kV或28kV等,上述数值范围内的其他任意具体点值均可选择,在此便不再一一赘述。
优选地,所述共轭纺丝的针头与收集器的距离为5-25cm,例如5cm、8cm、10cm、15cm、20cm或25cm等,上述数值范围内的其他任意具体点值均可选择,在此便不再一一赘述。
优选地,所述共轭纺丝中纺丝溶液A的流速为0.01-1.5mL/h,例如0.01mL/h、0.02mL/h、0.05mL/h、0.1mL/h、0.2mL/h、0.5mL/h、0.6mL/h、0.7mL/h、1.0mL/h或1.2mL/h等,上述数值范围内的其他任意具体点值均可选择,在此便不再一一赘述。
优选地,所述共轭纺丝中纺丝溶液B的流速为0.01-1.5mL/h,例如0.01mL/h、0.02mL/h、0.05mL/h、0.1mL/h、0.2mL/h、0.5mL/h、0.6mL/h、0.7mL/h、1.0mL/h或1.2mL/h等,上述数值范围内的其他任意具体点值均可选择,在此便不再一一赘述。
优选地,所述干燥为自然干燥、烘干、真空烘干或冷冻干燥,优选为真自然干燥;干燥时间为2-48h,例如2h、3h、4h、10h、15h、20h或48h等,上述数值范围内的其他任意具体点值均可选择,在此便不再一一赘述。
优选地,制备得到所述多功能医用纤维膜后还对其进行表面改性处理,增强或增加其功能。
优选地,所述表面改性处理可以包括但不限于交联、等离子体、层层自组装方法进行处理。
第三方面,本发明提供一种药物递送系统,所述药物递送系统包括药物和作为药物载体的如第一方面所述的多功能医用纤维膜。
第四方面,本发明提供一种如第三方面所述的药物递送系统的制备方法,所述制备方法包括:在纺丝溶液A和/或纺丝溶液B中加入药物。当纺丝溶液A和纺丝溶液B中同时含有药物时,药物类型可以相同也可以不相同。
本发明所涉及的医用纤维膜还可以作为很好的药物载体材料,可通过在不同纺丝液组分中添加不同含量和类型的药物,来达到治疗效果的优化。
相对于现有技术,本发明具有以下有益效果:
本发明将ε-聚赖氨酸与胶原蛋白、带阴离子基团的材料、聚高分子材料通过共轭静电纺丝技术,制备了多功能医用纤维膜,使该医用纤维膜同时具备了静电纺丝膜与自组装膜的优点,而生产工艺大大简化。该多功能医用材料与细胞外基质结构接近,比表面积大,导致其表面能和活性增加,从而产生小尺寸效应,表面与界面效应,能提供大量的细胞接触点,为细胞黏附、增殖、生理功能提供更好的微环境,并改善蛋白质吸附,且组成中含有胶原蛋白和ε-聚赖氨酸,可使得该多功能医用纤维膜具有良好的亲水性和抗菌性,带阴离子基团的材料的添加使得胶原蛋白和ε-聚赖氨酸更稳定地结合于纤维膜上,使其缓慢地释放,同时其自身良好的特性使产品在临床使用中可直接贴附使用,更能有效地诱导细胞生长和组织再生,进而有效促进创面的修复,显著扩大了其应用范围。本发明所涉及的多功能医用纤维膜的制备方法工艺简单,产品质量易于控制,能实现高效率、低污染和低成本的产业化生产。
附图说明
图1是本发明所涉及的多功能医用纤维膜的外观图;
图2是对比例1制得的材料的抑菌圈试验结果图(其中a代表大肠埃希菌结果,b代表金黄色葡萄球菌结果)。
图3是实施例1制得的材料的抑菌圈试验结果图(其中a代表大肠埃希菌结果,b代表金黄色葡萄球菌结果)。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了,所述实施例仅仅是帮助理解本发明,不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
本实施例提供一种多功能医用纤维膜,其制备方法如下:
(1)取I型胶原用六氟异丙醇溶解,再将重均分子量11.2万的聚乳酸(PLA)缓慢溶解于该胶原溶液,取ε-聚赖氨酸(分子量4000)溶解于丙酮中,将其与上述胶原溶液混合,其中PLA的质量百分含量为8%,I型胶原的质量百分含量为0.6%,ε-聚赖氨酸的浓度为1%,在25℃下搅拌后形成均一稳定的溶液,得到纺丝溶液A;
(2)取海藻酸钠溶解于丙酮中,再将PLA加入到该溶液中,其中,PLA的质量百分含量为1%,海藻酸钠的浓度为1%,得到纺丝溶液B;
(3)将所述纺丝溶液A、纺丝溶液B进行共轭纺丝,制备纳米纤维材料;电纺设备在25℃,湿度40%下进行静电纺丝,纺丝推进速度为0.8mL/h,喷丝电压为13kV,纺丝距离为10cm,接受装置为直径为10cm的金属转筒,转速为100rpm,针头型号为22G;
(4)将得到的共轭纳米纤维材料浸自然晾干4h,得到所述多功能医用纤维膜,该产品外观图如图1所示。
实施例2
本实施例提供一种多功能医用纤维膜,其制备方法如下:
(1)取I型胶原用六氟异丙醇溶解,再将重均分子量12万的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)缓慢溶解于该胶原溶液,取ε-聚赖氨酸(分子量4000)溶解于丙酮中,将其与上述胶原溶液混合,其中,PLGA的质量百分含量为10%,I型胶原的质量百分含量为2%,ε-聚赖氨酸的浓度为0.2%,在25℃下搅拌后形成均一稳定的溶液,得到纺丝溶液A;
(2)取透明质酸钠溶解于甲酸中,再将重均分子量12万的PLGA加入到该溶液中,其中,PLGA的质量百分含量为5%,透明质酸钠的质量百分含量为0.2%,得到纺丝溶液B;
(3)将所述纺丝溶液A、纺丝溶液B进行共轭纺丝,制备纳米纤维材料;电纺设备在25℃,湿度40%下进行静电纺丝,纺丝推进速度为2mL/h,喷丝电压为15kV,纺丝距离为10cm,接受装置为直径为10cm的金属转筒,转速为100rpm,针头型号为22G;
(4)将得到的共轭纳米纤维材料自然晾干4h,得到所述多功能医用纤维膜。
实施例3
本实施例提供一种多功能医用纤维膜,其制备方法与实施例1的区别仅在于将海藻酸钠替换为与其质量相同的质量比3:1的海藻酸钠和透明质酸钠,即纺丝溶液B中海藻酸钠的浓度为0.75%,透明质酸钠的浓度为0.25%。其他条件均保持不变。
实施例4
本实施例提供一种多功能医用纤维膜,其制备方法与实施例1的区别仅在于将纺丝溶液A中的PLA替换为与其质量相同的质量比1:1的PLA和PLGA,即PLA的质量百分含量为4%,PLGA的质量百分含量为4%;将纺丝溶液B中的PLA替换为与其质量相同的质量比1:1的PLA和PLGA,即PLA的质量百分含量为0.5%,PLGA的质量百分含量为0.5%。其他条件均保持不变。
实施例5
本实施例提供一种多功能医用纤维膜,其制备方法是在实施例2制备的纳米纤维膜上进行表面改性处理,即对纳米纤维膜进行层层自组装:
(1)先将纳米纤维膜浸泡于0.6%的ε-聚赖氨酸水溶液中10min,然后于纯水中漂洗3次,水分沥干;
(2)再将该纤维纳米膜浸泡于0.2%透明质酸钠水溶液中10min,然后于纯水中漂洗3次,水分沥干;
(3)重复步骤(1)~(2)三次,然后于真空冷冻干燥机干燥4h,得到所述多功能医用纤维膜。
实施例6
本实施例提供一种多功能医用纤维膜,其制备方法与实施例2的区别仅在于纺丝溶液B中加入了多西他赛,纺丝溶液A中加入了紫杉醇,纺丝溶液B中多西他赛浓度为1%,纺丝溶液A中紫杉醇的浓度为1%,纺丝完成后进行冷冻干燥,其他条件保持不变。
对比例1
本对比例提供一种纳米纤维材料,其制备方法与实施例1的区别仅在于纺丝溶液A中不含有ε-聚赖氨酸这一成分,其他成分及含量均保持不变,其他条件也均保持不变。
对比例2
本对比例提供一种纳米纤维材料,其制备方法与实施例1的区别仅在于纺丝溶液A中无I型胶原。其他条件均保持不变。
对比例3
本对比例提供一种纳米纤维材料,其制备方法与实施例1的区别仅在于纺丝溶液B中不含有海藻酸钠这一成分,其他成分及含量均保持不变,其他条件也均保持不变。
对比例4
本对比例提供一种纳米纤维材料,其制备方法如下:
(1)取重均分子量11.2万的聚乳酸(PLA)溶解于丙酮中,浓度为8%,在25℃下搅拌后形成均一稳定的溶液(A、B纺丝液均为8%PLA),进行共轭静电纺丝,电纺设备在25℃,湿度40%下进行静电纺丝,溶液推进速度为0.8mL/h,喷丝电压为13kV,纺丝距离为10cm,接受装置为直径为10cm的金属转筒,转速为100rpm,针头型号为22G,制备PLA纳米纤维膜;
(2)将上述制备得到的纳米纤维自然晾干4h,即得。
评价试验:
(1)将实施例1-6制得的多功能医用纤维膜进行扫描电镜观察,可知:纳米纤维膜呈现出纺丝编织结构,纺丝形态均一,交织致密,孔隙均匀,与细胞外基质结构非常相似。
(2)抗菌性评价
将实施例1-6和对比例1-4获得的纳米纤维材料剪成直径17mm大小的样品。放置于涂有大肠埃希菌(E.coli)和金黄色葡萄球菌(S.aureus)的胰酪大豆胨琼脂培养皿中,在35℃条件下倒置培养24h。观察并计算抑菌圈大小(每组平行进行3次试验),如表1所示(数据以平均值呈现)。其中实施例1的抑菌结果如图3所示(a代表大肠埃希菌结果,b代表金黄色葡萄球菌结果);对比例1的抑菌结果如图2所示(a代表大肠埃希菌结果,b代表金黄色葡萄球菌结果)。
表1
Figure BDA0003158177480000141
Figure BDA0003158177480000151
由表1数据可知:纳米纤维膜中无ε-聚赖氨酸时没有产生抑菌圈,含有ε-聚赖氨酸的纳米纤维膜均出现了抑菌圈。表明纳米纤维膜产生的抑菌作用是通过ε-聚赖氨酸释放产生的,天然高分子材料及胶原和海藻酸钠本身不会对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌产生抑制作用。
(3)体外细胞毒试验
将实施例1-6和对比例1-4获得的纳米纤维材料辐照灭菌后浸泡于DMEM完全培养基中制备材料浸提液,具体操作为:剪取2cm*3cm的纳米纤维膜,按照6cm2/mL浸提比例在37℃下浸提24。采用体外细胞毒性实验(MTT)评价纳米纤维材料的细胞毒性。将小鼠成纤维细胞系(L929)以1×105cells/mL密度接种于96孔组织培养板中,常规培养24h后弃去培养基,加入100μL纳米纤维材料浸提液,继续培养24h。空白组加入未处理的完全培养基,细胞孵育24h后进行MTT试验,然后采用酶标仪检测其在570nm处的吸光度值,经统计分析得到L929细胞的存活率。结果如表2所示。
表2
组别 细胞存活率(%)
实施例1 84.6
实施例2 97.5
实施例3 91.8
实施例4 88.9
实施例5 90.3
实施例6 93.6
对比例1 107.4
对比例2 81.7
对比例3 83.8
对比例4 103.9
由表2数据可知:每组的纳米纤维膜的细胞活性均>70%,表明纳米纤维膜具有良好的生物相容性,无细胞毒性。ε-聚赖氨酸具有抑菌性对细胞有一定的毒性,可通过胶原和聚阴天然高分子材料来减缓其细胞毒性,从而促使纳米纤维膜最后呈现良好的生物相容性。
(4)力学性能
操作方法为:截取实施例1-6和对比例1-4的长6cm,宽1cm的纤维膜;用测厚仪测量其厚度(测量三次,取平均值),将测得的数据填入拉力试验机软件中;调节拉力试验机夹具间距为4cm,将纳米纤维膜安装于拉力试验机的夹具上,使上下两个夹具分别夹持纳米纤维膜的一端,保持纤维膜垂直平整,然后将夹具拧紧;以10mm/min的速率拉伸至纤维膜断裂,得到测试结果,如表3所示。
表3
组别 最大力(N) 拉伸强度(KPa) 断裂伸长率(%)
实施例1 2.318 2773.229 52.907
实施例2 4.256 6509.092 88.581
实施例3 2.338 2900.648 53.059
实施例4 3.400 4829.577 67.340
实施例5 3.987 5399.127 47.121
实施例6 4.174 5968.754 78.168
对比例1 2.581 3021.802 60.340
对比例2 2.810 3283.096 63.318
对比例3 2.510 2843.819 54.571
对比例4 3.192 3773.229 82.571
由表3数据可知:材料的断裂伸长率、最大拉伸力、拉伸强度等直接影响着材料的应用,断裂伸长率指材料在拉断时的位移值与原长的比值,是对材料韧性的表征;最大拉伸力表征了材料最大应力天然高分子材料作为生物支架,拉伸强度达到1500KPa即可起到支撑作用,因此制备的纳米纤维膜的力学性能都可满足所需要的力学强度。
申请人声明,本发明通过上述实施例来说明本发明的一种多功能医用纤维膜及其制备方法和应用,但本发明并不局限于上述实施例,即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了,对本发明的任何改进,对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等,均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式,但是,本发明并不限于上述实施方式中的具体细节,在本发明的技术构思范围内,可以对本发明的技术方案进行多种简单变型,这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是,在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征,在不矛盾的情况下,可以通过任何合适的方式进行组合,为了避免不必要的重复,本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims (10)

1.一种多功能医用纤维膜,其特征在于,所述多功能医用纤维膜是以包括聚高分子材料、带阴离子基团的材料、胶原蛋白和ε-聚赖氨酸在内的物质为原料,采用共轭静电纺丝技术制备得到的静电纺丝纤维膜。
2.如权利要求1所述的多功能医用纤维膜,其特征在于,所述多功能医用纤维膜由纳米纤维A和纳米纤维B交织而成;所述纳米纤维A中包括聚高分子材料、胶原蛋白和ε-聚赖氨酸;所述纳米纤维B中包括聚高分子材料和带阴离子基团的材料。
3.如权利要求2所述的多功能医用纤维膜,其特征在于,所述聚高分子材料、胶原蛋白和ε-聚赖氨酸在所述纳米纤维A中的质量百分含量分别为50-95%、1-10%、1-10%;
优选地,所述聚高分子材料和带阴离子基团的材料在所述纳米纤维B中的质量百分含量分别为50-95%、1-10%;
优选地,所述纳米纤维A与纳米纤维B的质量比为1:5-5:1。
4.如权利要求1-3中任一项所述的多功能医用纤维膜,其特征在于,所述聚高分子材料包括聚乳酸、聚乙交酯、聚己内酯、聚乙烯醇、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乙二醇、聚四氟乙烯、聚酯酰胺或聚氨酯中的任意一种或至少两种的组合;优选聚乳酸和聚乳酸-羟基乙酸共聚物的组合;
优选地,所述带阴离子基团的材料包括透明质酸钠、羧甲基纤维素、海藻酸钠、硫酸软骨素或纤维蛋白中的任意一种或至少两种的组合;优选海藻酸钠和透明质酸钠的组合。
5.如权利要求1-4中任一项所述的多功能医用纤维膜,其特征在于,所述胶原蛋白包括I型胶原蛋白或其活性域、II型胶原蛋白或其活性域、III型胶原蛋白或其活性域中的任意一种或至少两种的组合,更优选I型胶原蛋白或III型胶原蛋白;
优选地,所述ε-聚赖氨酸的分子量为3000-5000,优选3600-4600,进一步优选3600-4300。
6.如权利要求1-5中任一项所述的多功能医用纤维膜的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括如下步骤:
(1)将聚高分子材料、胶原蛋白和ε-聚赖氨酸与溶剂混合溶解,得到纺丝溶液A;将聚高分子材料、带阴离子基团的材料与溶剂混合溶解,得到纺丝溶液B;
(2)将所述纺丝溶液A和纺丝溶液B进行共轭纺丝,干燥,得到所述多功能医用纤维膜。
7.如权利要求6所述的多功能医用纤维膜的制备方法,其特征在于,所述溶剂选自三氯甲烷、二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、六氟异丙醇、三氟乙腈、三氟乙酸、甲酸、乙酸或丙酮中的任意一种或至少两种的组合;
优选地,所述共轭纺丝的温度为15-60℃;
优选地,所述共轭纺丝的湿度为25-80%;
优选地,所述共轭纺丝的纺丝电压为5-28kV;
优选地,所述共轭纺丝的针头与收集器的距离为5-25cm;
优选地,所述共轭纺丝中纺丝溶液A的流速为0.01-1.5mL/h;
优选地,所述共轭纺丝中纺丝溶液B的流速为0.01-1.5mL/h;
优选地,所述干燥为自然干燥、烘干、真空烘干或冷冻干燥,优选为自然干燥;干燥时间为2-48h。
8.如权利要求6或7所述的多功能医用纤维膜的制备方法,其特征在于,制备得到所述多功能医用纤维膜后还对其进行表面改性处理,增强或增加其功能;
优选地,所述表面改性处理可以包括但不限于交联、等离子体、层层自组装方法进行处理。
9.一种药物递送系统,其特征在于,所述药物递送系统包括药物和作为药物载体的如权利要求1-5中任一项所述的多功能医用纤维膜。
10.如权利要求9所述的药物递送系统的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括:在纺丝溶液A和/或纺丝溶液B中加入药物。
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