CN115606734B - 一种羊奶果抗氧化提取物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种羊奶果抗氧化提取物及其制备方法与应用，属于食品安全技术领域。该方法首先取新鲜羊奶果，清洗后晾干，去果核、切块，烘干水分后粉碎，过筛，得羊奶果果粉，密封阴凉干燥处保存备用；将羊奶果果粉置于是羊奶果果粉质量5~40倍体积的乙醇溶液中，进行超声辅助提取，提取温度40~80℃，提取20~60min，得到提取液；所述的乙醇溶液中乙醇的体积浓度10~50%；将提取液离心后，取上清液减压浓缩至无醇味后冷冻干燥，即得。本发明制得的提取物中羊奶果多酚含量高，为9.317±0.180 mg/g，使用超声辅助提取法，设备方便、成本低、乙醇可回收循环利用、不存在溶剂残留问题，满足工业化大规模生产的需求。
Description
技术领域
本发明属于食品安全技术领域，具体涉及一种羊奶果抗氧化提取物及其制备方法与应用，特别涉及从羊奶果中提取一种抗氧化剂的制备方法。
背景技术
抗氧化剂广泛用于食品、化妆品和制药行业，特别是食品在贮藏和运输中很容易氧化，不仅影响食品食用风味和口感，还会产生醛、酮、酸等有害物质，造成食品营养物质流失，甚至带来健康隐患，危害消费者健康。为了防止食品氧化腐败变质、延长保质期，通常在食品中添加抗氧化剂。然而我国食品中常用抗氧化剂主要包括丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）和特丁基对苯二酚（TBHQ）等化学合成抗氧化剂，但这些化学合成抗氧化剂都存在一定的毒性和致癌性，消费者对于此类化学合成抗氧化剂也存在着一些排斥心理，使其应用受限。此外，许多国家对化学合成添加剂的使用量已加以严格限制，美国、欧共体等国已禁止使用二丁基羟基甲苯（BHT）、丁基羟基茴香醚（BHA）等化学合成抗氧化剂。因此，用高安全性、强抗氧化能力和无毒副作用的天然抗氧化剂替代化学合成抗氧化剂用于食品贮藏保鲜中是必然的趋势，具有很大的应用潜力。
文献报道植物多酚具有抗氧化、清除自由基等作用，可作为抗氧化剂用于果蔬、坚果、食用油脂、肉及肉制品、奶制品、烘焙制品等食品中。提取植物多酚的方法有：溶剂萃取，此法需注意除溶剂极性大小外，还易受到溶剂pH值、提取温度、提取次数、溶剂体积和样品颗粒大小等多种因素的影响；生物酶解法，此法提取条件温和、耗能低、绿色安全，但酶制剂价格昂贵、无法重复利用、增加分离纯化的难度；超临界流体萃取，此法在超临界状态下，流体对被萃取物的萃取能力和选择性较之常温常压条件下大大的提高，但设备成本高，能耗大。目前国内外未见从羊奶果中制备具有抗氧化活性的多酚提取物的相关文献报道。因此如何克服现有技术的不足是目前食品安全技术领域亟需解决的问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种羊奶果抗氧化提取物及其制备方法与应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种羊奶果抗氧化提取物的制备方法，包括如下步骤：
步骤（1），取新鲜羊奶果，清洗后晾干，去果核、切块，烘干水分后粉碎，过筛，得羊奶果果粉，密封阴凉干燥处保存备用；
步骤（2），将羊奶果果粉置于是羊奶果果粉质量5~40倍体积的乙醇溶液中，进行超声辅助提取，提取温度40~80℃，提取20~60min，得到提取液；
所述的乙醇溶液中乙醇的体积浓度10~50%；
步骤（3），将提取液离心后，取上清液减压浓缩至无醇味后冷冻干燥，得到羊奶果抗氧化提取物
进一步，优选的是，步骤（1）中，过筛是过60目筛；烘干温度为60℃；切块的尺寸是长30~40mm、宽3~6 mm、厚2~4 mm。
进一步，优选的是，步骤（2）中，所述的超声辅助提取中，超声功率150W。
进一步，优选的是，步骤（3）中，将羊奶果果粉置于25倍体积的乙醇溶液中，进行超声辅助提取，提取温度70℃，提取40min，得到提取液；所述的乙醇溶液中乙醇的体积浓度30%。
进一步，优选的是，步骤（3）中，所述的离心具体为6000 r/min 离心10 min。
进一步，优选的是，步骤（3）中，冷冻干燥具体步骤为：于-40℃预冻48h，然后保持冷阱温度-58℃、真空度48 Pa条件下，冷冻干燥28~35h。实验过程中，可以采用FD5-3P实验室型冷冻干燥机
本发明同时提供上述羊奶果抗氧化提取物的制备方法制得的羊奶果抗氧化提取物。
本发明还提供上述羊奶果抗氧化提取物在制备抗氧化剂中的应用。
本发明采用超声辅助提取，利用超声波的机械破碎和空化作用，使细胞破碎，增加有效成分的溶出速度和数量，加速多酚等浸提物从原料向溶剂的扩散速度，从而提高了有效成分的浸提率，缩短浸提时间。具有浸提所需的时间短的优势，因此避免了长时间处于高温下植物多酚的氧化，收率和产品质量都较传统方法高。
本发明的减压浓缩优选采用旋转蒸发浓缩。
本发明中液料体积质量比单位为mL/g。
本发明与现有技术相比，其有益效果为：
（1）本发明制得的羊奶果提取物的羊奶果多酚含量高，为9.317±0.180 mg/g，使用超声辅助提取法，设备方便、成本低、乙醇可回收循环利用、不存在溶剂残留问题，满足工业化大规模生产的需求；
（2）本发明制得的羊奶果提取物在相同质量浓度下，羊奶果多酚提取物对DPPH自由基的清除率能力（34.81±4.137%）优于抗坏血酸（0.88±0.578%），对羟自由基的清除率（98.43±1.087%）与抗坏血酸（99.33±0.176%）相当，还原能力（2.622±0.017）与抗坏血酸（2.609±0.011）相当，羊奶果多酚提取物具有较好抗氧化能力，可应用于制备抗氧化产品中，有较好的应用前景。
（3）使用本发明制备得到的具有抗氧化活性的羊奶果多酚提取物未见文献报道。
附图说明
图1为羊奶果鲜果图；
图2为烘干后羊奶果果肉图；
图3为本发明制得的羊奶果果粉图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用材料或设备未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
实施例1
一种羊奶果抗氧化提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤（1），取新鲜羊奶果，清洗后晾干，去果核、切块，烘干水分后粉碎，过筛，得羊奶果果粉，密封阴凉干燥处保存备用；
步骤（2），将羊奶果果粉置于是羊奶果果粉质量30倍体积的乙醇溶液中，进行超声辅助提取，提取温度65℃，提取45min，得到提取液；
所述的乙醇溶液中乙醇的体积浓度35%；
步骤（3），将提取液离心后，取上清液减压浓缩至无醇味后冷冻干燥，得到羊奶果抗氧化提取物
实施例2
一种羊奶果抗氧化提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤（1），取新鲜羊奶果，清洗后晾干，去果核、切块，烘干水分后粉碎，过筛，得羊奶果果粉，密封阴凉干燥处保存备用；
步骤（2），将羊奶果果粉置于是羊奶果果粉质量5倍体积的乙醇溶液中，进行超声辅助提取，提取温度40℃，提取20min，得到提取液；
所述的乙醇溶液中乙醇的体积浓度10%；
步骤（3），将提取液离心后，取上清液减压浓缩至无醇味后冷冻干燥，得到羊奶果抗氧化提取物
步骤（1）中，过筛是过60目筛；烘干温度为60℃；切块的尺寸是长30~40mm、宽3~6mm、厚2~4 mm。
步骤（2）中，所述的超声辅助提取中，超声功率150W。
步骤（3）中，所述的离心具体为6000 r/min 离心10 min。
冷冻干燥具体步骤为：于-40℃预冻48h，然后保持冷阱温度-58℃、真空度48 Pa条件下，冷冻干燥35h。
实施例3
一种羊奶果抗氧化提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤（1），取新鲜羊奶果，清洗后晾干，去果核、切块，烘干水分后粉碎，过筛，得羊奶果果粉，密封阴凉干燥处保存备用；
步骤（2），将羊奶果果粉置于是羊奶果果粉质量40倍体积的乙醇溶液中，进行超声辅助提取，提取温度80℃，提取60min，得到提取液；
所述的乙醇溶液中乙醇的体积浓度50%；
步骤（3），将提取液离心后，取上清液减压浓缩至无醇味后冷冻干燥，得到羊奶果抗氧化提取物
步骤（1）中，过筛是过60目筛；烘干温度为60℃；切块的尺寸是长30~40mm、宽3~6mm、厚2~4 mm。
步骤（2）中，所述的超声辅助提取中，超声功率150W。
步骤（3）中，所述的离心具体为6000 r/min 离心10 min。
冷冻干燥具体步骤为：于-40℃预冻48h，然后保持冷阱温度-58℃、真空度48 Pa条件下，冷冻干燥28h。
实施例4
一种羊奶果抗氧化提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤（1），取新鲜羊奶果，清洗后晾干，去果核、切块，烘干水分后粉碎，过筛，得羊奶果果粉，密封阴凉干燥处保存备用；
步骤（2），将羊奶果果粉置于是羊奶果果粉质量25倍体积的乙醇溶液中，进行超声辅助提取，提取温度70℃，提取40min，得到提取液；
所述的乙醇溶液中乙醇的体积浓度30%；
步骤（3），将提取液离心后，取上清液减压浓缩至无醇味后冷冻干燥，得到羊奶果抗氧化提取物
步骤（1）中，过筛是过60目筛；烘干温度为60℃；切块的尺寸是长30~40mm、宽3~6mm、厚2~4 mm。
步骤（2）中，所述的超声辅助提取中，超声功率150W。
步骤（3）中，所述的离心具体为6000 r/min 离心10 min。
冷冻干燥具体步骤为：于-40℃预冻48h，然后保持冷阱温度-58℃、真空度48 Pa条件下，冷冻干燥30h。
应用实例
步骤（1），取新鲜羊奶果，清洗后晾干，去果核、切块，烘干水分后粉碎，过筛，得羊奶果果粉，密封阴凉干燥处保存备用；部分实验过程示意图如图1~图3所示，具体为：
1、挑选。将羊奶果中的变质果、不熟果挑出丢弃，筛选出成熟、外皮完好的羊奶果。
2、清洗。流水清洗羊奶果表面灰尘、污物后，蒸馏水漂洗。
3、晾干。室内自然晾干羊奶果表面水分。
4、去核、切块。将表面晾干的羊奶果用刀去核、切块。切块的尺寸是长30~40mm、宽3~6 mm、厚2~4 mm。
5、烘干。将切块后的羊奶果平铺一层于托盘中，50~60℃烘箱中烘干水分。
6、粉碎。将烘干水分的羊奶果于粉碎机中粉碎。
7、过筛。将粉碎后羊奶果粉过60目筛，得到羊奶果果粉。
羊奶果鲜果经过去核、切块、烘干、粉碎后各部分质量如表1所示。
表1：羊奶果各部分质量表
| 羊奶果鲜果/kg | 羊奶果肉/kg | 羊奶果果核/kg | 羊奶果果粉/kg |
| 4.5 | 3.58 | 0.78 | 0.48 |
步骤（2），取1 g羊奶果果粉置于25 mL的30%乙醇溶液中，进行超声辅助提取，超声功率150 W，提取温度70℃，超声时间40 min得到提取液，6000 r/min离心10 min，取上清液测定羊奶果多酚含量为9.317±0.180 mg/g，对DPPH自由基的清除率能力（34.81±4.137%）优于抗坏血酸（0.88±0.578%），对羟自由基的清除率（98.43±1.087%）与抗坏血酸（99.33±0.176%）相当，还原能力（2.622±0.017）与抗坏血酸（2.609±0.011）相当。
步骤（3），上清液减压浓缩至无醇味后冷冻干燥，得到羊奶果抗氧化提取物；所述的离心具体为6000 r/min 离心10 min。
试验测定：
本发明以没食子酸为标准物，采用Folin-Ciocalteu法进行多酚的含量进行测定，如表2所示，以没食子酸浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，得到标准曲线回归方程：y=11.89x+0.0844，R 2=0.9994。
表2：Folin-Ciocalteu法测定多酚含量标准曲线数据表
| 没食子酸浓度 mg/mL | 0.020 | 0.040 | 0.060 | 0.080 | 0.100 |
| 吸光值平行1 | 0.315 | 0.553 | 0.823 | 1.033 | 1.224 |
| 吸光值平行2 | 0.331 | 0.525 | 0.821 | 1.047 | 1.286 |
| 吸光值平行3 | 0.338 | 0.559 | 0.778 | 1.029 | 1.305 |
| 吸光值平均值 | 0.328 | 0.546 | 0.807 | 1.036 | 1.272 |
提取方法为：将羊奶果果粉置于乙醇溶液中，进行超声辅助提取，得到提取液；
对提取液进行羊奶果提取液多酚含量测定时，将其离心后，取上清液进行测定。
本发明所有试验中，样品重复三次，测定结果数据值以平均值±标准差表示，SPSS22.0软件进行方差分析，以p<0.05进行显著性分析。
、超声时间
称取羊奶果果粉1.000g，预设超声功率150 W，液料体积质量比20:1，乙醇体积浓度为30％，提取温度50℃。设定超声时间：20、40、60、80、100 min。
表3：超声时间对羊奶果多酚提取量的影响数据
| 超声时间 | 20 min | 40 min | 60 min | 80 min | 100 min |
| 吸光值平行1 | 0.834 | 1.189 | 1.023 | 1.105 | 1.105 |
| 吸光值平行2 | 0.938 | 1.048 | 1.013 | 1.120 | 1.070 |
| 吸光值平行3 | 0.955 | 1.112 | 1.076 | 1.049 | 1.114 |
| 标准曲线计算多酚浓度（mg/mL）平行1 | 0.063 | 0.093 | 0.079 | 0.086 | 0.086 |
| 标准曲线计算多酚浓度（mg/mL）平行2 | 0.072 | 0.081 | 0.078 | 0.087 | 0.083 |
| 标准曲线计算多酚浓度（mg/mL）平行3 | 0.073 | 0.086 | 0.083 | 0.081 | 0.087 |
| 多酚提取量（mg/g） 平行1 | 6.304 | 9.290 | 7.894 | 8.584 | 8.584 |
| 多酚提取量（mg/g） 平行2 | 7.179 | 8.104 | 7.810 | 8.710 | 8.289 |
| 多酚提取量（mg/g） 平行3 | 7.322 | 8.643 | 8.340 | 8.113 | 8.659 |
| 平均值-多酚提取量（mg/g） | 6.935 | 8.679 | 8.015 | 8.469 | 8.511 |
| 标准差 | 0.551 | 0.594 | 0.285 | 0.315 | 0.196 |
超声时间对羊奶果多酚提取量影响数据见表3所示，从超声时间20 min时，羊奶果多酚提取量随时间延长逐渐升高，在超声时间40 min时，多酚提取量最大，达到8.679±0.594 mg/g，超声时间为40 min、60 min、80 min、100 min时，显著性水平p<0.05下，羊奶果多酚提取量没有显著性差异，酚的提取率反而降低。这可能是由于浸提40 min时，多酚溶出已达到平衡，随提取时间增加，溶液中溶出的羊奶果多酚基本保持不变。此外长时间的提取考虑节约时间成本，故选取超声时间30~50min进行条件优化试验
2、提取温度
称取羊奶果果粉1.000 g，超声功率150 W，液料体积质量比20:1，乙醇体积浓度30％，超声时间40 min。设定提取温度30℃、40℃、50℃、60℃、70℃。
表4：提取温度对羊奶果多酚提取量的影响数据
| 提取温度 | 30℃ | 40℃ | 50℃ | 60℃ | 70℃ |
| 吸光值平行1 | 0.655 | 0.964 | 0.907 | 0.938 | 1.096 |
| 吸光值平行2 | 0.865 | 0.841 | 0.927 | 1.089 | 1.139 |
| 吸光值平行3 | 0.738 | 0.775 | 0.821 | 0.948 | 1.058 |
| 标准曲线计算多酚浓度（mg/mL）平行1 | 0.048 | 0.074 | 0.069 | 0.072 | 0.085 |
| 标准曲线计算多酚浓度（mg/mL）平行2 | 0.066 | 0.064 | 0.071 | 0.084 | 0.089 |
| 标准曲线计算多酚浓度（mg/mL）平行3 | 0.055 | 0.058 | 0.062 | 0.073 | 0.082 |
| 多酚提取量（mg/g） 平行1 | 4.799 | 7.398 | 6.918 | 7.179 | 8.508 |
| 多酚提取量（mg/g） 平行2 | 6.565 | 6.363 | 7.087 | 8.449 | 8.870 |
| 多酚提取量（mg/g） 平行3 | 5.497 | 5.808 | 6.195 | 7.263 | 8.188 |
| 平均值-多酚提取量（mg/g） | 5.620 | 6.523 | 6.733 | 7.631 | 8.522 |
| 标准差 | 0.890 | 0.807 | 0.474 | 0.710 | 0.341 |
提取温度对羊奶果多酚提取量影响数据见表4所示，提取温度从30℃开始，羊奶果多酚提取量随时间延长逐渐升高，这可能是由于温度的升高加快了分子运动，增加酚类物质溶出，从而提高了羊奶果多酚的提取量。在显著性水平p<0.05下，提取温度为60℃和70℃时，羊奶果多酚提取量有显著差异，提取温度70℃时，多酚提取量最大，达到8.522±0.341mg/g，但随着温度过高可能会使多酚的分子结构发生变化，故选取提取温度60~80℃进行条件优化试验。
、液料体积质量比：
称取羊奶果果粉1.000 g，超声功率150 W，乙醇体积浓度30％，超声时间40 min，提取温度70℃。设定液料体积质量比5:1、10:1、20:1、30:1、40:1mL/g。
表5：液料体积质量比对羊奶果多酚提取量的影响数据
| 液料体积质量比 | 5:1 | 10:1 | 20:1 | 30:1 | 40:1 |
| 吸光值平行1 | 0.736 | 0.453 | 0.294 | 0.139 | 0.117 |
| 吸光值平行2 | 0.764 | 0.468 | 0.287 | 0.148 | 0.121 |
| 吸光值平行3 | 0.704 | 0.472 | 0.284 | 0.154 | 0.129 |
| 标准曲线计算多酚浓度（mg/mL）平行1 | 0.055 | 0.031 | 0.018 | 0.005 | 0.003 |
| 标准曲线计算多酚浓度（mg/mL）平行2 | 0.057 | 0.032 | 0.017 | 0.005 | 0.003 |
| 标准曲线计算多酚浓度（mg/mL）平行3 | 0.052 | 0.033 | 0.017 | 0.006 | 0.004 |
| 多酚提取量（mg/g） 平行1 | 6.850 | 7.750 | 8.814 | 3.444 | 2.742 |
| 多酚提取量（mg/g） 平行2 | 7.145 | 8.066 | 8.520 | 4.012 | 3.078 |
| 多酚提取量（mg/g） 平行3 | 6.514 | 8.150 | 8.394 | 4.390 | 3.751 |
| 平均值-多酚提取量（mg/g） | 6.836 | 7.989 | 8.576 | 3.949 | 3.190 |
| 标准差 | 0.316 | 0.211 | 0.216 | 0.476 | 0.514 |
液料体积质量比对羊奶果多酚提取量影响数据见表5所示，液料体积质量比从5:1到20:1羊奶果多酚提取量呈上升趋势，可能由于在低液料体积质量比条件下，溶液过于黏稠，提取不充分，随着料液比的增加，溶液黏度下降，使细胞内外多酚有较高的浓度差，促进使羊奶果中酚类物质向提取液中扩散。显著性水平p<0.05，各液料体积质量比条件下，羊奶果多酚提取量均有显著差异，液料体积质量比20:1时，多酚提取量最大，达到8.576±0.216mg/g，但继续提高液料体积质量比，多酚的提取量随之下降，可能是因为当提取剂达到一定量时，多酚已基本浸出，而此时有多糖、色素等其他物质溶出，出现反渗透现象，导致多酚提取量下降。
、乙醇体积浓度：
称取羊奶果果粉1.000 g，超声功率150 W，超声时间40 min，提取温度70℃，液料体积质量比20:1。设定乙醇体积浓度20%、30%、40%、50%、60%。
表6：乙醇体积浓度对羊奶果多酚提取量的影响数据
| 乙醇体积浓度 | 20% | 30% | 40% | 50% | 60% |
| 吸光值平行1 | 0.625 | 1.141 | 0.997 | 0.801 | 0.448 |
| 吸光值平行2 | 0.776 | 1.136 | 0.887 | 0.871 | 0.374 |
| 吸光值平行3 | 0.681 | 1.118 | 0.812 | 0.852 | 0.432 |
| 标准曲线计算多酚浓度（mg/mL）平行1 | 0.045 | 0.089 | 0.077 | 0.060 | 0.031 |
| 标准曲线计算多酚浓度（mg/mL）平行2 | 0.058 | 0.088 | 0.068 | 0.066 | 0.024 |
| 标准曲线计算多酚浓度（mg/mL）平行3 | 0.050 | 0.087 | 0.061 | 0.065 | 0.029 |
| 多酚提取量（mg/g） 平行1 | 4.547 | 8.886 | 7.675 | 6.027 | 3.058 |
| 多酚提取量（mg/g） 平行2 | 5.817 | 8.844 | 6.750 | 6.616 | 2.436 |
| 多酚提取量（mg/g） 平行3 | 5.018 | 8.693 | 6.119 | 6.456 | 2.923 |
| 平均值-多酚提取量（mg/g） | 5.127 | 8.808 | 6.848 | 6.366 | 2.806 |
| 标准差 | 0.642 | 0.102 | 0.783 | 0.304 | 0.327 |
乙醇体积浓度对羊奶果多酚提取量影响数据见表6所示，乙醇体积浓度在20%~30%时，羊奶果多酚提取量随浓度上升，且在乙醇体积浓度为30%处达到最大提取量8.808±0.102 mg/g，显著性水平p<0.05，乙醇体积浓度在30%~50%没有显著差异，随着乙醇体积浓度继续升高，多酚提取量呈下降趋势。可能是由于乙醇体积浓度过高，多酚与溶剂极性相差较大，蛋白质变性，导致多酚溶解度降低，同时醇溶性杂质、色素成分的溶出也会影响提取效果。故选取乙醇体积浓度30%~50%进行条件优化试验。
、优选条件
经过发明人多次研究，发现了本发明提取的最优条件，即超声时间40min，提取温度70℃，液料体积质量比25:1。乙醇体积浓度30%。采用最优条件进行提取，具体如下：
称取羊奶果果粉1.000 g，超声功率150 W，超声时间40min，提取温度70℃，液料体积质量比25:1。乙醇体积浓度30%。由数据结果表7可知，羊奶果多酚提取量为9.317±0.180mg/g。
表7：验证试验数据结果
| 试验号 | 验证实验 |
| 吸光值平行1 | 0.989 |
| 吸光值平行2 | 0.968 |
| 吸光值平行3 | 0.955 |
| 多酚浓度（mg/mL）平行1 | 0.076 |
| 多酚浓度（mg/mL）平行2 | 0.074 |
| 多酚浓度（mg/mL）平行3 | 0.073 |
| 多酚提取量（mg/g）平行1 | 9.510 |
| 多酚提取量（mg/g）平行2 | 9.289 |
| 多酚提取量（mg/g）平行3 | 9.153 |
| 平均值-多酚提取量（mg/g） | 9.317 |
| 标准差 | 0.180 |
6、羊奶果多酚抗氧化活性研究
6.1 羊奶果多酚制备
称取羊奶果果粉1.000 g进行，提取温度70℃、超声时间40 min、液料体积质量比25：1、乙醇体积浓度30%条件下制备羊奶果多酚，6000 r/min 离心10 min，收集上清液，即羊奶果多酚提取液。
自由基清除能力测定
取三个试管，依次加入以下试剂：0.4 mL提取液和2.0 mL 0.1 mmol/L的DPPH甲醇溶液；0.4 mL提取液和2.0 mL甲醇；0.4 mL蒸馏水和2.0 mL 0.1 mmol/L的DPPH甲醇溶液，混合均匀，避光静置30 min，用0.4 mL蒸馏水和2.0 mL甲醇对分光光度计进行调零，取上清液在517 nm波长处测定吸光值。三个反应液的吸光值分别为A1、A2和A0。相同浓度抗坏血酸做阳性对照（用抗坏血酸替换提取液采用相同步骤方法测定DPPH自由基清除能力），每个样品做三个平行，按照下式计算待测样品对DPPH 自由基的清除率：
DPPH清除率（%）=[1−( A1−A2)/A0]×100%
6.3 羟自由基清除能力测定
取三支离心管，第一支试管依次加入以下试剂：1.0mL提取液、0.3mL 9.0mmol/LFeSO4溶液、0.25mL 6mmol/L H2O2溶液，混匀，室温放置10min，加入1.0mL 9.0mmol/L 水杨酸乙醇溶液，混合均匀；
第二支试管依次加入以下试剂：1.0mL提取液、0.3mL 9.0mmol/L FeSO4溶液、0.25mL 6mmol/L H2O2溶液，混匀，室温放置10min，加入1.0mL蒸馏水，混合均匀；
第三支试管依次加入以下试剂：1.0mL蒸馏水、0.3mL 9.0mmol/L FeSO4溶液、0.25mL 6mmol/L H2O2溶液，混匀，室温放置10min，加入1.0mL 9.0mmol/L 水杨酸乙醇溶液，混合均匀。
将三支试管分别置于37℃水浴30min，取出流水冷却，分别加入0.45mL蒸馏水，使终体积为3.0mL，6000r/min 离心10min，以蒸馏水对分光光度计进行调零，在510 nm 波长处测定吸光值，三支试管反应液的吸光值分别为A1、A2 和A0 。相同浓度抗坏血酸做阳性对照（用抗坏血酸替换提取液采用相同步骤方法测定羟自由基清除能力），每个样品做三个平行，按照下式计算样品对羟自由基的清除率：
羟基自由基清除率%=[1−(A1−A2)]/A0×100%
6.4 还原力测定
在两个离心管中分别加入1.0 mL提取液和1.0 mL蒸馏水，之后依次加入1.0 mL0.2 mol/L PBS磷酸缓冲液（pH6.6）、1.0 mL质量百分浓度为1%的铁氰化钾溶液，迅速混匀，50℃水浴中反应20 min，冰水冷却后，加入1.0 mL质量百分浓度为10%的三氯乙酸（TCA）溶液，混匀后以10000 r/min离心5 min。取1.0 mL上清液，加1.0 mL超纯水和0.2 mL质量百分浓度为0.1%的三氯化铁溶液，混匀，反应10 min。蒸馏水代替提取液如上操作用于调零，测定各样品在700 nm波长处的吸光值。相同浓度抗坏血酸做阳性对照，每个样品做三个平行。
实验结果
在最优工艺条件下，羊奶果多酚提取液中羊奶果多酚提取量为9.317±0.180 mg/g，羊奶果多酚浓度为0.3 mg/mL。对羊奶果多酚提取液进行抗氧化活性测定，以相同质量浓度抗坏血酸做阳性对照。
DPPH醇溶液呈紫色，在 517 nm 处有最大吸收，羊奶果多酚可捕捉 DPPH 自由基的单电子，使其颜色变浅，从而降低吸收值，因而根据吸收值的变化，判断多酚抗氧化效果。DPPH自由基清除率是用以评价天然抗氧化剂抗氧化活性的一种快速、简便、灵敏可行的方法并具有良好的重现性。由表8和表9可知，相同质量浓度下的羊奶果多酚对DPPH自由基的清除率能力（34.81±4.137%）优于抗坏血酸（0.88±0.578%）。
羟自由基可由超氧阴离子和过氧化氢与铜、铁等金属离子反应生成，它是活性氧中对生物体毒性最强的一种自由基，几乎能与所有的生物大分子发生各种不同的反应。研究发现羟自由基能诱导DNA链断裂和碱基改性从而引发肿瘤等疾病。植物多酚可通过清除羟自由基来减少羟自由基的产生，此时在510 nm下吸光值会降低。由表8和表10可知，相同质量浓度下，羊奶果多酚对羟自由基的清除率（98.43±1.087%）与抗坏血酸（99.33±0.176%）相当。
还原能力以测定普鲁士蓝生产量为指标，即通过将铁氰化钾还原成亚铁氰化钾后，再与Fe3+作用生产普鲁士蓝，在最大吸收波长710 nm下的吸光度越高，表示还原能力越强。还原力大的样品具有良好的提供电子使自由基变为稳定物质的能力，从而能够终止自由基的链式反应；同时，也作用于过氧化物的前体物质，阻止过氧化物的产生，从而起到抗氧化的作用。由表8和表11可知，相同质量浓度下，羊奶果多酚还原能力（2.622±0.017）与抗坏血酸（2.609±0.011）相当，说明羊奶果多酚是有效的供电子体。
表8：羊奶果多酚抗氧化活性
| DPPH自由基清除率（%） | 羟自由基清除率（%） | 还原能力 | |
| 羊奶果多酚 | 34.81±4.137a | 98.43±1.087a | 2.622±0.017a |
| 抗坏血酸 | 0.88±0.578b | 99.33±0.176a | 2.609±0.011a |
注：相同列中带不同上标字母的数值间的差异显著（以p<0.05）。
表9：羊奶果多酚DPPH自由基清除能力数据
表10：羊奶果多酚羟自由基清除能力数据
表11：羊奶果多酚还原能力数据
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以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (5)
1.一种羊奶果抗氧化提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤（1），取新鲜羊奶果，清洗后晾干，去果核、切块，烘干水分后粉碎，过筛，得羊奶果果粉，密封阴凉干燥处保存备用；
步骤（2），将羊奶果果粉置于25倍体积的乙醇溶液中，进行超声辅助提取，提取温度70℃，提取40min，得到提取液；所述的乙醇溶液中乙醇的体积浓度30%；
步骤（3），将提取液离心后，取上清液减压浓缩至无醇味后冷冻干燥，得到羊奶果抗氧化提取物；
所述的羊奶果抗氧化提取物为羊奶果多酚提取物；
步骤（1）中，过筛是过60目筛；烘干温度为60℃；切块的尺寸是长30~40mm、宽3~6 mm、厚2~4 mm；
步骤（2）中，所述的超声辅助提取中，超声功率150W。
2.根据权利要求1所述的羊奶果抗氧化提取物的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述的离心具体为6000 r/min 离心10 min。
3.根据权利要求1所述的羊奶果抗氧化提取物的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，冷冻干燥具体步骤为：于-40℃预冻48h，然后保持冷阱温度-58℃、真空度48 Pa条件下，冷冻干燥28~35h。
4.权利要求1~3任意一项所述的羊奶果抗氧化提取物的制备方法制得的羊奶果抗氧化提取物。
5.权利要求4所述的羊奶果抗氧化提取物在制备抗氧化剂中的应用。
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