CN115452981B - 一种基于gc-ms的野坝子不同药用部位的线性判别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明通过用GC‑MS分析含有野坝子药用部位的样品，检测样品中L‑芳樟醇的含量，若L‑芳樟醇的含量大于0.3μg/g，则该样品中野坝子药用部位为野坝子花；并建立了两个线性判别方程识别野坝子叶或野坝子茎，两者相比，若Y叶数值更大，则该样品中野坝子药用部位为野坝子叶，若Y茎的数值更大，则该样品中野坝子药用部位为野坝子茎。
Description
技术领域
本发明涉及一种野坝子不同药用部位的检测方法，具体涉及一种基于GC-MS的野坝子不同药用部位线性判别的方法。
背景技术
野坝子是一种具有特殊香味的药食同源植物。它主要分布在中国西南地区，特别是云南省。在云南当地，它被用凉茶、草药以及蜜源植物。当地的彝族白族等少数民族用它来治疗感冒、发烧、流感、腹泻。研究报道，从野坝子中分离出的许多化合物具有抗病毒、抗癌、抗炎活性，甚至可以缓解阿尔茨海默症症状。另外，野坝子作为地域性较强的特色天然植物，其提取物在卷烟中具有增香、提质和矫味等应用效果，深具优良天然烟用香料的特质，是中式卷烟添加的天然香料潜在资源。
野坝子不同部位其药效结果不同，其中野坝子花中生物活性物质相对含量最高，叶次之，茎的相对含量最少。同时其不同部位提取物产率以及在卷烟中添加效果也差异很大。由于商业利益的驱动，许多不法分子用野坝子茎叶产品冒充或掺杂野坝子花产品中，以获取不法收益。因此，有必要对野坝子花茎叶等不同部位进行鉴别区分。
为了解决以上问题，提出本发明。
发明内容
本发明目的通过以下技术方案实现。
本发明提供了一种基于GC-MS的野坝子不同药用部位的线性判别方法，其包括以下步骤：
步骤(1)：用GC-MS分析含有野坝子药用部位的样品；
步骤(2)：检测样品中L-芳樟醇的含量，若L-芳樟醇的含量大于0.3μg/g，则该样品中野坝子药用部位为野坝子花；
步骤(3)：基于以下判别方程识别野坝子叶或野坝子茎：Y叶＝4468.222X1-7344.958X2+37630.614X3-3334.293X4-5977.864X5-18662.183；
Y茎＝-586.723X1+1013.489X2-5180.547X3+461.234X4+818.693X5-366.799
其中：X1为氧化石竹烯含量μg/g，X2为香薷酮μg/g，X3为新植二烯含量μg/g，X4为三十碳六烯含量μg/g，X5为桉油烯醇含量μg/g。
野坝子茎和叶的判定方法：两者相比，若Y叶数值更大，则该样品中野坝子药用部位为野坝子叶，若Y茎的数值更大，则该样品中野坝子药用部位为野坝子茎。
优选地，步骤(1)中可具体包括如下步骤：
(11)样品收集
采集一定量需检测样品，均匀分成若干份，每份按一定重量取样，装袋待测；
(12)样品前处理
在10ml离心管中称量0.1g样品，添加1.5ml 1μg/ml氘代甲苯-乙酸乙酯溶液。将混合物超声处理10分钟，在4000rpm下离心8分钟，过滤，取500μL上清液，转移到色谱进样瓶中，准备进行GC-MS分析。
(13)GC-MS检测
将步骤(12)所得的样品溶液，通过直接进样的方式，进行GC-MS检测。
(14)数据处理
归一化：使用内标法进行量化。每个挥发性成分的含量计算如下：
其中：Ci表示测得的挥发性成分的含量；Ai是对应化合物的峰面积；A0表示内标物的峰面积；M0表示内标物的质量；M是所取样品的质量。然后将数据用于统计分析。
其挥发性成分含量值取其多次检测的算术平均值。
当然，步骤(1)也可以用其他取样条件、样品前处理条件或数据处理方法，只要能符合检测原理把各物质的含量检测出来就行。
优选地，步骤(1)中所取样品平均分成份数均不小于6份，每份不少于0.1克。
优选地，步骤(1)中，仪器分析参数如下：
色谱条件：
质谱条件：色谱柱为DB-35GC色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)(安捷伦，美国)。进样口温度为280℃。载气为氦气，流速为1ml/min。进样体积1.0μL，分流进样，分流比为10:1。初始温度为80℃，以60℃/min的速率加热至275℃，然后以1℃/min的速率升高至295℃，并保持1分钟。
传输线和离子源温度分别为300℃和280℃；扫描模式：全扫模式；电离模式为70ev电子碰撞；溶剂延迟时间为2min。当然，步骤(1)中也可以使用其他仪器分析参数，只要能把本发明关心的特征物质含量测出来就行。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
1、本发明首次通过GC-MS分析实现野坝子不同野坝子的药用部位及产品的准确鉴别，同时，可以对产品挥发性药用成分进行初步解析。
2、本发明首次通过建立判别方程对野坝子不同的药用部位进行鉴别，该方法简便，鉴别野坝子花只需要检测L-芳樟醇的含量；鉴别野坝子茎和叶，只需将氧化石竹烯、香薷酮、新植二烯、三十碳六烯和桉油烯醇的含量值依次代入步骤(3)的两个判别方程，分别得到Y叶和Y茎的数值，通过比较两者大小就能判别出茎和叶，且结果可靠，能够在实际生活中得到广大应用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行说明，但本发明的实施方式不限于此。实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件以及手册中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件所用的通用设备、材料、试剂等，如无特殊说明,均可从商业途径得到。
实施例1
按照上述步骤(1)，分别取野坝子叶1、野坝子茎1、野坝子花1和野坝子茎2等4个样品每个分为6份，进行分析及处理，得到相应的GC-MS数据如表1所示：
表1不同野坝子部位样品的GC-MS数据
ND表示该成分未检测到，计算时其含量按0μg/g计算。
野坝子花的判别：由于样品野坝子花1的L-芳樟醇含量大于0.3μg/g，可以直接判定为野坝子花，其他三个样品野坝子茎1、野坝子叶1、野坝子茎2的L-芳樟醇小于0.3μg/g，表明它们不是野坝子花，需要进行下一步的鉴别。
将它们对应成分含量值分别代入步骤(3)中的判别方程式，所得结果如表2所示：
表2样品判别方程值及判别结果
| ID | Y叶 | Y茎 | 判别结果 |
| 野坝子叶1 | 21429.96682 | -5843.62496 | 野坝子叶 |
| 野坝子茎1 | -23004.17166 | 264.67416 | 野坝子茎 |
| 野坝子茎2 | -23091.89922 | 277.84888 | 野坝子茎 |
实验结果表明，该判定方法判定结果与样品实际部位一致，表明本发明方法具有较好的可靠性。
为了进一步验证方法的可靠性，分别选择了4个野坝子茎，4个野坝子叶和4个野坝子花样品，样品本身在取样、制样后无法在直观视觉上没有区别，然后在未告知检测人员具体样品来源的情况下，请检测人员纯粹基于本发明的方法对各样品进行部位判别，判别结果如下表3所示：
表3方法的验证结果
基于本发明的方法做做出的识别结果与样品来源完全吻合，由表3可知，本发明方法的野坝子茎，野坝子叶和野坝子花的预测准确度都为100％，可以用于野坝子药用部位的准确预测。
Claims (2)
1.一种基于GC-MS的野坝子不同药用部位的线性判别方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：
样品前处理：
在10ml离心管中称量0.1g样品，添加1.5ml 1μg/ml氘代甲苯-乙酸乙酯溶液，将混合物超声处理10分钟，在4000rpm下离心8分钟，过滤，取500μL上清液，转移到色谱进样瓶中，准备进行GC-MS分析；
用GC-MS分析含有野坝子药用部位的样品：
色谱条件：
色谱柱为DB-35GC色谱柱，所述色谱柱的规格为30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度为280℃；载气为氦气，流速为1ml/min；进样体积1.0μL，分流进样，分流比为10:1；初始温度为80℃，以60℃/min的速率加热至275℃，然后以1℃/min的速率升高至295℃，并保持1分钟；
质谱条件：
传输线和离子源温度分别为300℃和280℃；扫描模式：全扫模式；电离模式为70ev电子碰撞；溶剂延迟时间为2min；
步骤2：检测样品中L-芳樟醇的含量，若L-芳樟醇的含量大于0.3μg/g，则该样品中野坝子药用部位为野坝子花；
步骤3：基于以下判别方程识别野坝子叶或野坝子茎：
Y叶＝4468.222X1-7344.958X2+37630.614X3-3334.293X4-5977.864X5-18662.183；
Y茎＝-586.723X1+1013.489X2-5180.547X3+461.234X4+818.693X5-366.799；
其中：X1为氧化石竹烯含量μg/g，X2为香薷酮μg/g，X3为新植二烯含量μg/g，X4为三十碳六烯含量μg/g，X5为桉油烯醇含量μg/g；
两者相比，若Y叶数值更大，则该样品中野坝子药用部位为野坝子叶，若Y茎的数值更大，则该样品中野坝子药用部位为野坝子茎。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中所取样品平均分成份数均不小于6份，每份不少于0.1克。
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Non-Patent Citations (3)
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|---|
| GC法测定芫荽茎叶中4种挥发性成分的含量;姜振元 等;《沈阳药科大学学报》;第29卷(第12期);938-940, 980 * |
| The complete chloroplast genome sequence of the medicinal plant Elsholtzia rugulosa Hemsl (Labiatae );Lansheng Zhang 等;《Mitochondrial DNA Part B》;第5卷(第2期);1548-1549 * |
| 白族药野坝子的挥发性化学成分研究;李文军 等;《云南中医学院学报》;第22卷(第3期);19-21 * |
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