CN115379823A

CN115379823A - 药妆组合物

Info

Publication number: CN115379823A
Application number: CN202180024282.7A
Authority: CN
Inventors: 麻建杰; 管建军; 李海昌; 牛红; 关亚; 谭涛
Original assignee: Ohio State Innovation Foundation
Current assignee: Ohio State Innovation Foundation
Priority date: 2020-01-23
Filing date: 2021-01-08
Publication date: 2022-11-22
Also published as: WO2021150383A1; US20220370325A1

Abstract

提供了用于改善皮肤外观和促进毛发生长的药妆组合物和方法。所述组合物包含至少一种ROS清除聚合物凝胶、至少MG53或其组合。提供了一种新型的硼酸酯基共聚物，其形成水性水凝胶，所述水性水凝胶在较冷的温度下表现出较低的粘度，而在较高的温度下表现出较高的粘度。

Description

药妆组合物

关于联邦资助研究的声明

该发明是在美国国立卫生研究院授予的R01 AG056919和美国国立卫生研究院授予的R44 GM123887的政府支持下进行的。政府对发明有一定的权利。

发明领域

本发明涉及用于向有需要的对象局部给药的药妆组合物。这些组合物在重复局部给药后改善皮肤外观并促进细胞健康生长。所述组合物包含硼酸酯聚合物或MG53或其组合。

发明背景

药妆组合物已被宣传为表现出非凡的临床益处，例如减少皱纹、去除老年斑等；然而，许多这样的组合物不能提供这样的益处。此外，许多这样的组合物需要活性化合物和赋形剂的复杂混合物。例如，此类组合物通常需要与一种或多种抗氧化剂化合物混合的聚合物基质，或与所述基质共价结合的抗氧化剂化合物的聚合物基质。

制备和/或分离MG53的方法是已知的：US7981866，WO2008/054561， WO2009/073808，US2011/0202033，US2011/0287004，US2011/0287015， US2013/0123340，WO2011/142744，WO2012/061793，US8420338，US9139630， US9458465，US9494602，US2014/0024594，WO2012/134478，WO2012/135868， US2015/0110778，WO2013/036610，US2012/0213737，WO2016/109638。

含硼酸酯的聚合物已知：US200802800856，US20060276435， US20130302529，Ryu等人(“苯硼酸-生物医学应用聚合物”，见Curr.医学.化学.(2018)，doi:10.2174/0929867325666181008144436)，以及

等人(纳米级 (2016)8(13)，6958-6963)中的“用于药物递送的具有活性氧(ROS)触发载物释放的荧光硼酸酯基聚合物纳米颗粒”。

提供一种不需要成分的复杂混合物并且仍然提供改进的临床益处的药妆组合物是本领域的进步。

发明内容

本发明的目的是提供一种组合物，其用于在重复局部给药后改善皮肤外观并促进组织和毛囊的健康生长。

本发明的一个方面提供了一种药妆组合物，其包含至少一种ROS清除聚合物，在本文中又称为抗氧化剂聚合物，ROS意思是“活性氧”。因此，本发明的 ROS清除聚合物能够清除这些氧中间体，使得它们不会损伤组织。在一些实施方案中，所述ROS清除聚合物包含硼酸酯基共聚物。共聚物与ROS反应以隔离，中和或消除ROS。

与在较低温度下表现出增加的粘度和较高温度下表现出降低的粘度的其他聚合物材料不同，ROS清除聚合物的水性水凝胶在约4℃下表现出较低的粘度且在约37℃表现出较高的粘度(固体，半固体，糊状，胶，凝胶，或可变形的(柔韧的)固体)。在一些实施方案中，所述含有ROS清除聚合物的水凝胶在约4℃下是可流动的，并且在局部施用于皮肤后固化。在一些实施方案中，含ROS清除聚合物的水凝胶在约18±2℃或更高、约18℃或更高、约20℃或更高，约22℃或更高,约25℃或更高,约30℃或更高，约37℃或更高的条件下变成高粘度块，例如固体或半固体块。

在一些实施方案中，硼酸酯基共聚物是三元共聚物，其包含一种或多种丙烯酰胺单体、一种或多种甲基丙烯酸酯单体和一种或多种硼酸酯丙烯酸酯单体。在一些实施方案中，丙烯酰胺(AM)单体是指(N-烷基)丙烯酰胺(NAAM)及其同系物或类似物，例如N-异丙基丙烯酰胺、N-异丁基丙烯酰胺、N-正丙基丙烯酰胺、N-异丙基甲基丙烯酰胺和其他改性的N-异丙基丙烯酰胺。在一些实施方案中，甲基丙烯酸酯(MAc)单体是指(羟烷基)甲基丙烯酸酯(HAMc)及其同系物或类似物，例如甲基丙烯酸4-羟丙基酯、丙烯酸2-羟乙基酯、羟基聚乙氧基烯丙基醚、甲基丙烯酸羟丙基酯、甲基丙烯酸3-苯氧基2羟丙基酯、丙烯酸2- 羟乙基酯，甘油单甲基丙烯酸酯和N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺以及由(甲基)丙烯酸和二醇形成的其他酯。在一些实施方案中，硼酸酯丙烯酸酯(BEAc)单体是指 4-(羟烷基)-苯基硼酸、频哪醇酯)丙烯酸酯(HPPE-Ac)及其同系物或类似物，例如4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊烷-2-基)苯甲酸乙酯，2-乙氧基羰基苯基硼酸频哪醇酯，3-乙氧基羰基苯基硼酸频哪醇酯，4-(乙酰氧基甲基)苯硼酸频哪醇酯，3-(4,4,5,5-四甲基-1,3.2-二氧杂环戊烷-2-基)丙基苯甲酸酯。合适的烷基链长约为C3-C8。

AM单体及其同系物和类似物由以下化学结构定义：

其中R是丙基、异丙基、丁基、异丁基或其它长度为5个或更少碳原子的烷基。

MAc单体及其同系物和类似物由以下化学结构定义:

其中R是(CH₂)_n；并且n＝2、3或4。

BEAc单体及其同系物和类似物由以下化学结构定义:

在一些实施方案中，所述(硼酸酯)丙烯酸酯是(苯基硼酸酯)丙烯酸酯同系物或类似物。应当理解，除了频哪醇酯之外，其他硼酸酯将适合使用。优选的硼酸酯选自下组：频哪醇酯、硼酸环单酯、1,3-丙二醇酯、2,4-戊二醇酯或新戊二醇酯。

硼酸酯基共聚物在本文中也称为聚((AM)_m-co-(MAc)_n-co-(BEAc)_x)，其中:m 在约75至约85的范围内，n在约5至约20的范围内，而x在约5至约20的范围内。硼酸酯基共聚物在本文中也可以称为聚 ((NAAM)_m-co-(HAMAc)_n-co-(HPPE-Ac)_x)，其中:m、n和x如本文所定义。

在一些实施方案中，所述硼酸酯基共聚物不包括含炔基的单体，从而不包括炔基。

在一些实施方案中，烷基在每次出现时独立地选自下组：(C₁-C₂)-烷基或 (C₃-C₈)-烷基，所述烷基可以是直链的、支链的或环状的。例如，烷基可以是 C₁-C₆直链和支链烷基。其他基团可以添加到系统中作为主要官能团。

在一些实施方案中，所述ROS清除聚合物(AAHPPE)包含NIPAA、HEMA 和AHPPE的共聚物，其中NIPAAM是N-异丙基丙烯酰胺，HEMA是甲基丙烯酸羟乙酯，AHPPE是(4-(羟甲基)-苯基硼酸，频哪醇酯)丙烯酸酯(2-丙酸或 [4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼-2-基)苯基]甲酯)，AAHPPE是聚(N-异丙基丙烯酰胺-co-甲基丙烯酸羟乙酯-co-2-丙酸)。AAHPPE凝胶在本文中也称为聚 ((NIPAA)_m-co-(HEMA)_n-co-(AHPPE)_x)，其中:m、n和x如本文所定义。

本发明还提供了制备硼酸酯丙烯酸酯单体(BEAc)的方法，所述方法包括：在胺催化剂存在下，使AM(或其同系物或类似物)与丙烯酰氯(或其同系物或类似物)反应以形成所述BEAc(或其同系物或类似物)。所述反应可以在冷却和/或约室温下进行。胺催化剂可以是叔胺，如三乙醇胺(TEA)、二甲基乙胺(DEMA)、 N-甲基吗啉(NMM)、二叔胺三亚乙基二胺(DABCO)、三甲基丙二胺(TMP(an)DA) 和三甲基丙烯二胺(TMP(en)DA)，或芳香胺，例如吡啶、4-二甲基氨基吡啶 (DMAP)、吗啉、n-C₄H₉NH₂和DBU(1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯)。本发明还提供了中间体BEAc(或其类似物)。

以下是制备所述单体的示例性反应方案。

本发明还提供了制备硼酸酯共聚物的方法，所述方法包括：a)提供一种或多种AM单体、一种或多种MAc单体和一种或多种BEAc单体；和b)使所述单体在过氧化物催化剂的存在下反应以形成所述凝胶。在一些实施例中，AM： MAc:BEAc的摩尔比为约75-85(AM):约5-20(MAc):约5-20(BEAc)，或约 75-82(AM):约10-18(MAc):约6-18(BEAc)，或约75-80(AM):约12-15(MAc):约 6-16(BEAc)。在一些实施方案中，AM:MAc:BEAc的摩尔比为约75:约15:约10，或约77:约15:约8，或约79:约15:约6。

所述反应可以在高于室温或加热的情况下进行，例如约50℃-80℃或约65℃ 下进行。所述过氧化物催化剂(引发剂)可以是过氧化苯甲酰(BPO)，或偶氮二异丁腈(AIBN)。引发剂(催化剂)的量会影响最终聚合物的分子量。反应环境中引发剂的含量通常小于约5％、小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或约0.15％至约0.35％，其中，所述百分比是相对于单体的总摩尔含量。引发剂的最小含量为至少约0.01％、至少约0.05％、至少约0.1％或至少约 0.15％，其中所述百分比是相对于单体的总摩尔含量。

下面是制备所述硼酸酯基共聚物的示例性反应方案。

制备了不同级别的硼酸酯基共聚物，它们单体的摩尔含量不同。由这些共聚物制备水性水凝胶，然后根据可注射性、水含量、凝胶化温度(LCST)和对氧化应激的反应性对其进行表征。

根据相应单体的以下摩尔含量(m、n、x)描述了一些级别。

	米(NIPAAm)	n(HEMA)	x(AHPPE)
				AHPPE-6	79	15	6
AHPPE-8	77	15	8
				AHPPE-10	75	15	10

由硼酸酯基共聚物级别制成的水性水凝胶的物理化学表征提供了以下信息。

水凝胶	可注射性	含水量(％)	LCST(℃)
				AHPPE-6	+	82.4±4.7	27.6±1.9
AHPPE-8	+	75.6±5.3	22.6±3.8
				AHPPE-10	+	73.2±5.1	18.5±3.1

因此，降低NIPAAm单体的摩尔含量和增加AHPPE单体的摩尔含量导致水凝胶具有较低的水含量和较低的凝胶化温度。

根据实施例7评估对氧化应激的反应性(使用H₂O₂)。在不使用和使用50mM 过氧化氢(H₂O₂)的情况下，AHPPE凝胶(在DPBS中)在37℃下4周的降解表明，由不同AHPPE组合物组成的凝胶表现出对氧化应激的高反应性。数据 (图.12A-12C)表明降低NIPAAm单体的摩尔含量和增加AHPPE单体的摩尔含量会导致凝胶表现出对氧化应激更大的反应性。

药妆组合物中硼酸酯基的共聚物的含量可以根据所需的临床(美容)效果在很大程度上变化。在一些实施方案中，硼酸酯基共聚物以至多约10％重量或约 4％至约10％重量范围内的浓度存在于药妆组合物中。药妆的剩余含量包括液体载体(其量足以提供可注射(低粘度)水凝胶)和任选的一种或多种药妆赋形剂。水凝胶中液体载体的含量可为至少约30％重量、约至少40％重量、约至少50％重量、约至少60％重量、约至少70％重量、约至少80％重量或约至少90％重量。

包含硼酸酯基共聚物和化妆品载体(化妆品赋形剂)的即用化妆品组合物可以通过将共聚物溶解在DPBS(其他代用品，如DI水、盐水和细胞培养基)中以形成水凝胶溶液来制备。即使在存在液体化妆品载体的情况下，凝胶溶液也表现出热敏性。通常，DPBS(或水、盐水和介质)中的凝胶溶液浓度为约4wt％至约 10wt％(0.04g～0.1g共聚物在1毫升载体中)。

本发明的组合物可包含与一种或多种赋形剂混合的ROS清除聚合物。

本发明的组合物可包含与一种或多种抗氧化剂和一种或多种赋形剂混合的ROS清除聚合物。

本发明的组合物可包含与一种或多种赋形剂混合的MG53。

本发明的组合物可包含与MG53和一种或多种赋形剂混合的ROS清除聚合物。

本发明的组合物可包含与一种或多种抗氧化剂MG53和一种或多种赋形剂混合的ROS清除聚合物。

本发明的组合物可包含与一种或多种抗氧化剂、MG53、一种或多种锌盐和一种或多种赋形剂混合的ROS清除聚合物。

本发明的组合物可包含一种或多种抗氧化剂、MG53、一种或多种锌盐和一种或多种赋形剂。

本发明的组合物可包含MG53、一种或多种锌盐和一种或多种赋形剂。

本发明的组合物可以以凝胶、乳膏或软膏的方式存在。所述组合物可适用于局部给药、皮肤给药、透皮给药、皮下给药。

与包含相同量的MG53的盐基水性组合物相比，本发明的含MG53的组合物表现出改善的稳定性和/或改善的功效。

包含MG53、本发明的ROS清除共聚物和一种或多种赋形剂的组合组合物提供协同的临床益处。在一些实施方案中，如与仅施用MG53或仅施用ROS清除共聚物相比，所述组合组合物提供了改善的伤口愈合，这通过更快的伤口尺寸减小得到证明。在一些实施方案中，与通过仅施用MG53或仅施用ROS清除共聚物所提供的相比，所述组合组合物在愈合伤口的部位提供了减少的胶原形成(聚集)。在一些实施方案中，与仅施用MG53或仅施用ROS清除共聚物所提供的相比，所述组合组合物在愈合伤口的部位提供改善的增加的毛囊密度。

可以将一种或多种药妆赋形剂和/或一种或多种药用赋形剂和/或一种或多种GRAS赋形剂添加到本发明的任何组合物中。

本发明的一个方面还提供了一种通过向皮肤施用美容有效量的本发明组合物来改善皮肤外观的方法。在一些实施方案中，所述改善选自下组：减少皱纹、减少刺激、减少炎症、减少发红、减少疤痕、减少胶原形成、减少干细胞向成纤维细胞的分化、减少用于改善表皮状况的真皮的时间。

本发明的一个方面还提供了一种防止ROS相关的对皮肤的氧化损伤的方法，该方法通过在皮肤暴露于ROS之前预防性地给予皮肤美容有效量的本发明的组合物。

本发明的一个方面还提供了一种隔绝、中和或消除皮肤中ROS的方法，所述方法包括在所述皮肤暴露于ROS之后向皮肤施用美容有效量的本发明的组合物。

本发明的一个方面还提供了一种通过向有需要的受试者的皮肤施用美容有效量的本发明的组合物来改善毛发生长的方法。所述改善的毛发生长可以以示例性和非限制性的方式包括增加的发束厚度、改善的毛囊健康、增加的每单位皮肤面积的毛囊数量、增加的毛发生长速率、改善的毛发健康。本发明的组合物可用于减少秃发。

本发明的一个方面还提供了一种通过向有需要的受试者的皮肤施用美容有效量的本发明的组合物来去除或改善皮肤瑕疵的外观的方法。在一些实施方案中，所述瑕疵选自下组：皱纹、斑点(blotch(es))、发红的斑(patch(es)) 和湿疹。

与含有相同量的MG53的盐基水性组合物相比，本发明的含有MG53的组合物提供了改善的糖尿病溃疡和糖尿病相关皮肤病的愈合。

本发明还提供了一种药妆凝胶，其包含至少一种化妆品上可接受的ROS清除聚合物和至少一种液体载体，其中所述凝胶在约4℃下表现出低粘度，并且在与皮肤接触后，或在与至少约18℃、至少约20℃或至少约25℃的表面接触后固化或半固化(基本上变稠成高粘度物质)。药妆凝胶可包含本发明的组合物中的任何一种或多种。

本发明还提供了一种缓释药妆组合物，其包含至少一种ROS清除聚合物和至少一种活性成分，其中所述至少一种活性成分从所述组合物中释放，释放时间至少约3小时、至少约6小时、至少约9小时、至少约12小时，至少约15小时，至少约18小时或至少约21小时。在一些实施方案中，所述至少一种活性成分从所述组合物中释放，释放时间至少约1天、至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约1周、至少约8天、至少约9天、至少约10天、至少约11天、至少约12天、至少约13天、至少约2周、至少约3周、或者至少约 4周。

本发明的另一个方面提供了一种愈合受伤组织的方法，所述方法包括向所述受伤组织施用有效量的ROS清除聚合物。在一些实施方案中，所述ROS清除聚合物存在于水凝胶中，所述水凝胶还包含液体载体。

本发明的另一方面提供了一种药妆凝胶，其包含至少一种化妆品可接受的抗氧化剂聚合物、有效量的MG53和至少一种液体载体，其中所述凝胶在小于约15℃时表现出低粘度，并且所述凝胶在与皮肤接触后，或在与至少约18℃、至少约20℃或至少约25℃的表面接触后，固化或半固化(基本上增稠成高粘度物质)。

本发明的另一方面提供了一种药妆乳膏，其包含乳膏基料和有效量的 MG53。所述乳膏可进一步包含一种或多种活性成分。所述乳膏基料可包含一种或多种化妆品可接受的(和/或药学上可接受的)赋形剂。示例性的活性成分和赋形剂以示例性的方式、非限制性地包括巴西莓油(Acai oil)、α-硫辛酸、绿茶提取物、视黄醇、辅酶Q10(CoQ10)、咖啡因、α-羟基酸(AHAs)、透明质酸、甘油、山梨糖醇、单甘油酯和二甘油酯、白色矿物油(石油烃油)、硬脂酸甘油酯、丙二醇、维生素E、柠檬酸、没食子酸丙酯、其它已知化合物及其组合。

本发明的另一方面提供一种药妆软膏，其包含软膏基质和有效量的MG53。

在一些实施方案中，所述皮肤不患有疾病。在一些实施例中，皮肤没有受到物理伤害，例如受到冲击力、灼伤、辐照或切割。在一些实施方案中，该组织除了表现出美容上不希望的特征之外，其他方面是健康的。

应当理解，包括MG53的本发明的一些实施方案主要依赖于外源MG53的施用，任选地连同一种或多种抗氧化剂、硼酸酯基共聚物凝胶或其组合一起施用。

所述组合物可以在至少一周的治疗期内施用一次或多次。该组合物可以急性或慢性给药。在一些实施方案中，所述慢性给药是每周至少一次、每天至少一次、每天两次或更多次、每周两次或更多次，或根据需要以约0.01mg MG53/kg 体重至约10mg MG53/kg体重的剂量给药。该组合物可以在一天内多次施用，并且可以施用多天。

可以用本发明的组合物治疗的示例性受试者包括人和动物。

在一些实施方案中，本发明的方法还包括与至少一种抗氧化剂一起辅助施用，其中所述至少一种抗氧化剂在施用MG53之前、与之一起或之后施用。因此，本发明的方法可进一步包括向受试者施用至少一种抗氧化剂的步骤。MG53 与抗氧化剂的摩尔比可以在0.01:1至10:1的范围内。

当预防性给药时，MG53可以防止皮肤在美容上不希望的特征的出现。

本发明的组合物可以每天施用一次、两次、三次或更多次。它可以根据需要每天、每周、每月、每两个月、每季度、每半年、每年甚至更长时间进行施用。它可以根据需要每隔一天、每周五次、每周四次、每周三次、每周两次、每天一次、每天两次、每天一到四次，连续地，或频繁或不频繁地给药。每次给药的单位剂量在每次发生时，独立地从本说明书中描述的剂量或确定为治疗有效的剂量中选择。所描述的给药方案的所有组合都在本发明的范围内。

在一些实施方案中，本发明的组合物包含每盎司组合物约1.5mg或更多的 MG53。组合物可包含约1.5至约50毫克/盎司，或约1.5至约40毫克/盎司，或约 1.5至约30毫克/盎司，或约1.5至约20毫克/盎司，或约1.5至约5毫克/盎司，或约 1.5至约3mg/盎司组合物。

含MG53组合物可以局部或局部与全身组合施用。

本发明的另一个方面提供了一种改善组织性能的共治疗或辅助方法，所述方法包括向需要其的受试者(指具有一种或多种美容不希望的特征的受试者)施用有效量的MG53和有效量的一种或多种适合改善皮肤外观的其他活性成分。示例性的其他活性成分包括巴西莓油、α-硫辛酸、绿茶提取物、视黄醇、辅酶 Q10(CoQ10)、咖啡因、α-羟基酸(AHAs)、透明质酸、其他已知化合物和/或其组合。MG53和所述一种或多种其他活性成分可以同时、依次或以重叠方式施用。

在一些实施方案中，所述组合物进一步包含一种或多种锌盐，其以足以稳定所述组合物中存在的MG53的量存在。

在本发明的组合物中，当考虑每个MG53分子上存在的两个锌离子结合位点时，存在的Zn离子与存在的MG53分子的摩尔比为至少2:1。在一些实施方案中，所述组合物包含Zn的摩尔数与MG53的摩尔数的摩尔比>2:1。

在一些实施方案中，受试者长期施用MG53、至少一种抗氧化剂和至少一种锌盐。本发明还提供了一种组合物，其包含MG53、至少一种抗氧化剂和至少一种锌盐。

MG53与抗氧化剂的摩尔比可以在0.01:1至10:1的范围内。

本发明的实施方案不包括包含单一未改变的天然产物的组合物；然而，所述组合物可以包含所述未改变的天然产物与其它组分的混合物，从而产生自然界中不存在的人造组合物。本发明的实施方案排除了仅采用未改变的自然过程的过程；然而，所述过程可包括所述未改变的自然过程与一个或多个其它非自然步骤的组合，从而产生在自然界中不存在的过程。本发明的实施方案还可包括天然产物的新用途(新的处理方法)、包含所述天然产物的新组合物以及采用所述天然产物的新方法。

本发明包括本文公开的方面、实施方案和子实施例的所有组合。本发明的其他特征、优点和实施方案，通过以下描述、所附的实施例和所附的权利要求，对本领域技术人员来说变得显而易见。

附图简要说明

下面的附图是本说明书的一部分，并且将其包括在内以进一步说明本发明的某些方面。通过参考这些附图中的一个或多个并结合本文所呈现的具体实施例的详细描述，可以更好地理解本发明。

图1描绘了野生型和MG53基因敲除(mg53-/-)小鼠的每单位面积皮肤的毛囊数量的图表。根据实施例15进行毛囊的定量。

图2描绘了图1的小鼠在剃毛并之后给予生理盐水或含MG53的生理盐水(剂量为1mg/kg)后12天的照片，实施例16。

图3描绘了大鼠在剃毛并之后施用在盐水中的牛血清白蛋白(BSA，剂量为 1mg/kg)或在盐水中的MG53(剂量为1mg/kg)的照片(实施例17)。

图4描绘了在施用生理盐水或含有MG53的生理盐水(lmg MG53/kg的剂量；实施例17)后四天，大鼠每单位面积皮肤的毛囊数量的图表。

图5描绘了与对照相比，用过氧化氢(100微摩尔)、MG53(1微克/毫升)或 MG53和过氧化氢处理后24小时的凋亡人毛囊干细胞(HFSC)数量的图表(实施例18)。

图6描绘了糖尿病小鼠在用乳膏基料或含有MG53的乳膏(10mg MG53/oz乳膏基料)处理16天后的每单位面积的毛囊数量的图表(实施例19)。

图7A-7C描绘了暴露于H₂O₂(50mM)之后的各种级别的共聚物的降解的时间顺序图。

图8描绘了基于伤口尺寸随时间减小来证明组合的MG53和硼酸酯基共聚物的协同功效的图表。

图9描绘了基于伤口愈合后胶原蛋白形成来证明组合的MG53和硼酸酯基共聚物的协同功效的图表。

图10描绘了基于伤口愈合后的毛囊密度来证明组合的MG53和硼酸酯基共聚物的协同功效的图表。

图11A描绘了根据实施例26的用含MG53的面膜对受试者的面部皮肤进行局部处理后黑色素沉积的相对变化的图表。

图11B描绘了根据实施例26的用含MG53的面膜对受试者的面部皮肤进行局部处理后的皱纹的相对变化的图表。

具体实施方式

如本文所用，术语ROS清除聚合物还指活性氧清除聚合物，从而此类聚合物可以更一般地称为例如抗氧化剂聚合物。ROS(活性氧)包括自由基和非自由基氧中间体，例如过氧化氢(H₂O₂)、超氧化物(O₂ ^·-)、单氧基(¹O₂)和羟基。因此，本发明的ROS清除聚合物能够清除这些氧中间体，使得它们不会损伤组织。

MG53蛋白(也称为mitsugumin 53或TRIM72)是本领域已知的。除非另有说明，本发明包括或采用“MG53”的所有实施方案包括所有已知形式的MG53。其也指重组人MG53(rhMG53)。如本文所用，除非另有说明，术语MG53(或MG53 蛋白)是指作为天然形式、其优化形式、其突变体、其衍生物或所述形式中的任何两种或更多种的组合形式存在的MG53蛋白。天然MG53含有在不同动物物种中保守良好的477个氨基酸。制备和/或分离MG53的方法是已知的：US7981866、 WO2008/054561、WO2009/073808、US2011/0202033、US2011/0287004、 US2011/0287015、US2013/0123340、WO2011/142744、WO2012/061793、US8420338、US9139630、US9458465、US9494602、US2014/0024594、 WO2012/134478、WO2012/135868、US2015/0110778、WO2013/036610、 US2012/0213737、WO2016/109638，其全部公开内容(包括其中的序列信息)通过引用并入本文。

在US7981866和US9139630中公开了用于天然MG53及其变体或各种形式的序列表信息，其全部公开内容，包括其中的序列信息，通过引用并入本文。在US9139630中公开了编码优化的天然人MG53或其片段的cDNA的序列表信息，其整个公开内容，包括其中的序列信息，通过引用并入本文。

如本文提到MG53所用，术语“突变体”是指在天然MG53的氨基酸序列中具有一个、两个、三个或更多个氨基酸的氨基酸变化(替换)的MG53的重组形式。 MG53的突变形式及其制备方法是已知的：US2015/0361146、EP3118317、 WO2015/131728、US9139630，其全部公开内容，包括其中的序列信息，通过引用并入本文。

如本文所用，术语“内源性MG53”是指在用根据本发明的组合物、药妆或方法治疗之前存在于受试者中的MG53。如本文所用，外源MG53是非内源MG53。

本发明人意外地发现，施用于皮肤的抗氧化剂聚合物可用于改善皮肤的外观和健康。硼酸酯基抗氧化剂聚合物可以与皮肤中的ROS反应，从而防止和/ 或降低由所述ROS引起的对皮肤的氧化损伤程度。此外，在所述抗氧化聚合物中添加美容有效量(浓度)的MG53进一步改善皮肤的外观和毛发的生长。

本发明的ROS清除聚合物是硼酸酯基共聚物凝胶。通过使丙烯酰胺(或其同系物或类似物)、甲基丙烯酸酯(或其同系物或类似物)和(硼酸酯)丙烯酸酯(或其同系物或类似物)反应制备。反应环境中单体的摩尔比近似于所得硼酸酯基共聚物中单体的摩尔比：聚((AM)_m-co-(MAc)_n-co-(BEAc)_x)，其中：m，n和x如本文所定义。每次出现时，每种单体的身份都是独立选择的。因此，所述共聚物可包含一种或多种丙烯酰胺单体、一种或多种甲基丙烯酸酯单体和一种或多种(硼酸酯)丙烯酸酯单体。

根据实施例1制备示例性硼酸酯单体。将HPPE溶解在与水不混溶的有机溶剂中，并向其中加入稍微摩尔过量的胺。在一段时间内将与胺摩尔量大致相同的丙烯酰卤滴加到先前的混合物中。反应完成后，将反应环境用水洗涤，然后用盐水洗涤。然后将有机层用干燥剂干燥，从中分离，并在真空下除去溶剂。以高收率获得硼酸酯单体。

根据实施例2制备本发明的示例性抗氧化剂共聚物。将根据实施例1制备的硼酸酯单体用作制备共聚物的起始材料。通常，将单体混合在有机溶剂中，并用氮气反复吹扫。然后将引发剂加入到混合物中，并在连续搅拌下将整个反应环境在65℃下加热20小时。通过使用溶剂混合物的重复沉淀-溶解循环分离共聚物，并在每次溶解之前和每次沉淀之后通过过滤回收固体。然后共聚物在真空下加热干燥。以高收率获得该共聚物。

包含抗氧化剂(ROS清除)共聚物和水性载体的液体凝胶是通过将共聚物溶解在水性载体中，同时在约4℃下搅拌过夜而获得的(实施例3)。凝胶中共聚物的含量为约6wt％，水性载体的含量为约94％。

在固化之前，共聚物(在水性载体中约6重量％)的水凝胶溶液具有小于约 0.1Pa秒的粘度。根据实施例3进行水凝胶溶液的固化。将一部分水凝胶溶液置于管中，然后将其置于37℃的热水浴中。凝胶在几秒钟内固化。固化后，固化物粘度高。

新型抗氧化聚合物可减少ROS对皮肤(组织)造成的氧化损伤。包含抗氧化剂聚合物和一种或多种抗氧化剂的组合物提供甚至更高的功效。包含抗氧化剂聚合物MG53和一种或多种抗氧化剂的组合物提供了依旧更高的功效。

作为通往目标抗氧化剂共聚物的合成途径的一部分，我们还发明了新型中间体(或单体)(4-(羟甲基)-苯基硼酸，频哪醇酯)丙烯酸酯。应当理解，其结构上的同系物和类似物被考虑在本发明的范围内。因此，本文定义的单体组是可考虑的。

共聚物中三种单体的摩尔比可能会影响性能。凝胶的亲水性随着MAc的摩尔比增加或AM/BEAc的摩尔比降低而增加。随着亲水性的变化，包括柔韧性、弹性模量、复数模量、拉伸强度和杨氏模量的机械性能将相应地变化。例如，共聚物中更亲水的结构将导致拉伸强度和模量降低因为凝胶变软。

在约4℃时，抗氧化剂聚合物表现出足够低的粘度，可以在没有机械辅助的情况下通过18-30规格的针头进行手工注射。当抗氧化剂聚合物温热至至少 35℃时，其形成粘度高得多的固体或半固体凝胶块。例如，当将冷却的凝胶作为层局部施加到人体皮肤上时，该层处于约35-38℃，该凝胶形成固体或半固体层。

本发明的组合物适合用作伤口敷料。ROS清除共聚物(任选地与MG53混合) 可以以干燥形式施用于伤口，由此它将吸收体液并成为水凝胶，然后在伤口部位固化。可以将所述ROS清除共聚物(任选地与MG53混合)以水凝胶形式施用于伤口，从而其随后在伤口部位固化。与未处理的伤口相比，该共聚物减少了胶原形成(图8)，增加了毛囊密度(图9)，并更快地减少伤口大小(图7)。与未处理的伤口相比，与MG53组合的共聚物可进一步减少的胶原形成，进一步增加的毛囊密度，甚至更快的伤口尺寸减小。

ROS清除水凝胶可促进伤口愈合，因为其在抑制慢性伤口上ROS的过量产生中的功能。施用于小鼠5毫米伤口的浓度为6wt％的水凝胶的适合量为约150 微升至约250微升。

剂型中MG53的合适浓度包括至少1ng的MG53/ml、至少5ng的MG53/ml、至少10ng的MG53/ml、至少25ng的MG53/ml、至少50ng的MG53/ml、至少 75ngMG53/ml、至少100ng的MG53/ml、至少250ng的MG53/ml、至少500ng的 MG53/ml、至少750ng的MG53/ml、至少1μg的MG53/ml、至少5μg的MG53/ml、至少10μg的MG53/ml、至少15μg的MG53/ml、至少20μg的MG53/ml、至少25μg 的MG53/ml、至少30μg的MG53/ml、至少50μg的MG53/ml，或至少100μg的 MG53/ml。更高的浓度也是可以接受的，特别是考虑到观察到的MG53的疗效剂量反应趋势。这些剂量可以按照本文所述的频率施用，或者被确定为最有效的频率施用。

可以以一种或多种剂型施用于受试者的MG53的合适剂量包括至少1ng的 MG53、至少5ng的MG53、至少10ng的MG53、至少25ng的MG53、至少50ng的 MG53、至少75ng的MG53、至少100ng的MG53、至少250ng的MG53、至少500ng 的MG53、MG53的至少750ng、至少1μg的MG53、至少5μg的MG53、至少10μg 的MG53、至少15μg的MG53、至少20gμg的MG53、至少25μg的MG53、至少30μg 的MG53、至少50μg的MG53，或至少100μg的MG53。这样的剂量可以是基于总体重或每公斤体重。

外源MG53的剂量可以低至每千克体重约1至约1000微克。

该药用化妆品组合物的功效是在体内建立的。与作为目前市售的常规保湿剂的护理标准相比，随后根据实施例20仅在面部的一侧用含MG53的乳膏(根据实施例13)对已经历激光消融的人的面部进行处理。每天使用乳膏，持续7天。每天使用四天后，与传统的保湿霜相比，用MG53处理的受试者面部侧面肿胀较少，发红较少。

用含MG53的乳膏(根据实施例13)处理具有未知病因的红色水泡的老年人。在每日施用三天后(实施例21)，与常规保湿霜相比，受试者的面部显示出减少的水泡。MG53乳膏的应用显著减少了至少1周的愈合时间。每天使用绷带并用绷带覆盖时，这种愈合速度更快。因此，用MG53保持伤口湿润并覆盖伤口，可以更快地使伤口上皮化。此外，经常使用它的区域(即手腕)不易撕裂和起泡。

用含MG53的乳膏(根据实施例13)处理沿着脸颊和颈部有皱纹的皮肤的老年人。乳膏使用了28天。在每日施用三周后(实施例22)，与常规保湿霜相比，受试者的脸颊和颈部显示出显著减少的皱纹(减少的深度和减少的皱纹外观)。

用含MG53的乳膏(根据实施例13)处理沿嘴唇和眼睛有皱纹的皮肤的老年人。乳膏使用了28天。在每日施用三周后(实施例22)，与常规保湿乳膏相比，受试者的嘴唇和眼睛显示出显著减少的皱纹(减少的深度和减少的皱纹外观)。

用含MG53的乳膏(根据实施例13)处理在皮肤上具有长期慢性不愈合伤口的老年人。在每日施用三周后(实施例23)，皮肤完全愈合并且没有疤痕。传统的保湿乳膏无效。

一名60岁的男性接受了冷冻手术，以从左太阳穴清除大痣。冷冻部位每日用含MG53的乳膏(根据实施例13)处理2-3次。治疗1周后，皮肤完全愈合，没有疤痕。

本发明还提供一种含MG53的乳膏，其包含水(约65-75％w/w)、至少一种防腐剂(约0.1-1％w/w)、至少一种保湿剂(约3-5％w/w)，至少一种约1-5％w/w的去角质剂，至少一种渗透增强剂(约5-15％w/w)，至少一种润肤剂(约1-7％w/w)，至少一种保护剂(皮肤调理剂；约0.1-5％w/w)，至少一种抗微生物剂(约 0.1-5％w/w)，至少一种锌盐(约0.1-1％w/w)。

还根据实施例26评估MG53用于减少黑色素形成和减少皱纹。每周用浸透了含rhMG53的生理盐水溶液(20微克/毫升)的面膜对受试者进行2至3次治疗，持续2至3周。在短短两周内，每个受试者的黑色素沉积(图11A)和皱纹(图11B) 明显减少。

因此，本发明提供了一种通过局部施用rhMG53减少皮肤皱纹的方法。本发明还提供了一种通过局部施用rhMG53减少黑色素沉积的方法。

每种剂型中掺入的治疗性化合物(MG53)的量将是至少一个或多个单位剂量，并且可以根据已知的药学原理进行选择。具体地考虑了有效量的治疗化合物。应理解，术语“有效量”就例如药物而言，可考虑药学上(治疗上)有效量。药学有效量是足以引起所需或期望的治疗反应的药物或药学活性物质的数量或量，或者换句话说，当给予患者时足以引起可评估的生物学反应的量。

如本文所用，术语“单位剂型”意指含有一定量的药物的剂型，所述量使得一个或多个预定单位可以提供作为单次治疗给药。

所述剂型在每次出现时独立地选自下组：液体溶液、悬浮液、凝胶、乳膏、软膏、药板(slab)、凝胶、插入物(植入物)、注射器和水凝胶。

本发明的组合物和剂型可以进一步包含一种或多种药学上可接受的和/或化妆品上可接受的赋形剂。剂型可包含一种或多种赋形剂，所述赋形剂在每次出现时独立地选自下组：酸性试剂、碱性试剂、缓冲剂、张力改性剂、渗透剂、水溶性聚合物、水溶胀性聚合物、增稠剂、络合剂、螯合剂、渗透增强剂。合适的赋形剂包括U.S.F.D.A.批准用于肠胃外或口服制剂(剂型)的非活性成分，如美国食品和药物管理局“非活性成分数据库”中列出的那些(可在以下网站上获得:https://www.fda.gov/Drugs/InformationOnDrugs/ucm113978.htm；2018年10 月)，其全部公开内容通过引用并入本文。

如本文所用，酸性试剂是包含酸性部分的化合物或化合物的组合。示例性的酸性试剂包括有机酸、无机酸、矿物酸及其组合。示例性酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磺酸、氨基磺酸、磷酸或硝酸或普通技术人员已知的其他酸；以及由诸如以下的有机酸制成的盐：氨基酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、帕莫酸(pamoic acid)、马来酸、羟马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙基磺酸，本领域普通技术人员已知的其它酸，或其组合。

如本文所用，碱性试剂是包含碱性部分的化合物或化合物的组合。示例性的碱性试剂包括伯胺、仲胺、叔胺、季胺、氢氧化物、醇盐及其组合。示例性碱性试剂包括氨溶液、碳酸铵、二乙醇胺、单乙醇胺、氢氧化钾、硼酸钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、三乙醇胺、二乙醇胺、磷酸二氢盐、磷酸氢二盐、有机胺碱、碱性氨基酸和三乙醇胺，本领域普通技术人员已知的其他碱性试剂或其组合。

可以包括在本发明的剂型中的示例性赋形剂(由美国食品和药物协会定义的非活性成分)以示例性和非限制性的方式包括水、苯扎氯铵、甘油、氢氧化钠、盐酸、硼酸、羟烷基膦酸盐、海藻酸钠、硼酸钠、依地酸二钠、丙二醇、聚山梨酯80、柠檬酸盐、氯化钠、聚乙烯醇、聚维酮、共聚维酮、羧甲基纤维素钠、右旋糖、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钾、碳酸氢钠、柠檬酸钠、氯化钙、氯化镁、稳定氧氯络合物、氯化钙二水合物、赤藓糖醇、左卡尼汀(Levocamitine)、氯化镁六水合物、硼酸钠十水合物、柠檬酸钠二水合物、乳酸钠、磷酸钠(一元和二元)、聚乙二醇400、羟丙基瓜尔胶、聚季铵盐-1、氯化锌、白凡士林、矿物油、透明质酸、人工泪液、或其组合。

一种或多种抗氧化剂可以包括在本发明的剂型组合物中。示例性的抗氧化剂包括SS-31、NAC、谷胱甘肽、硒、维生素A、维生素C、维生素E、辅酶Q10、白藜芦醇、其他GRAS抗氧化剂或其两种或更多种的组合。

一种或多种锌盐可以包括在本发明的组合物或剂型中。这种锌盐也可以施用于接受外源性MG53或表达的MG53的受试者。药学上可接受的锌盐包括葡萄糖酸锌、乙酸锌、硫酸锌、吡啶甲酸锌、乳清酸锌、柠檬酸锌和包含锌阳离子和有机或无机阴离子的其他此类盐。

应当理解，在药物制剂领域中使用的化合物通常具有多种功能或用途。因此，如果本文中命名的化合物仅提及一次或用于定义本文中的一个以上术语，则其目的或功能不应被解释为仅限于该命名的目的或功能。

如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开的化合物的衍生物，其中所述化合物通过制备其酸或盐碱盐而被修饰。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基如胺的无机盐或有机酸盐；酸性残基如羧酸的碱盐或有机盐；以及普通技术人员已知的其它盐。药学上可接受的盐可以通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体治疗化合物合成。合适的盐的列表见于雷明顿制药科学(Remington'sPharmaceuticalSciences)，第17版，麦克出版公司，宾夕法尼亚州伊斯顿，1985，第1418页，其公开内容通过引用并入本文。

本文使用的短语“药学上可接受的”是指那些化合物、材料、组合物和/或剂型，其在合理的医学判断范围内适合与人和动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应，或其他问题或并发症，与合理的收益/风险比相称。

MG53可用于与一种或多种其他活性成分的联合治疗或辅助治疗。示例性合适的活性成分尤其包括，美国药典批准的用于肠胃外或口服剂型的药物。可用于与MG53联合治疗或辅助治疗的其他活性成分以示例性的方式、非限制性地包括过氧化苯甲酰、β-羟基酸(BHA)、二羟基丙酮(DHA)、弹性蛋白、透明质酸钠、氧化锌、氧化钛、维生素E、或其组合。

每种所述活性成分的治疗可接受剂量、最大耐受剂量(MTD)和最小有效剂量(MED)是众所周知的，并在相应的美国食品药品监督管理局批准的每种所述活性成分的产品包装说明书中阐述。

本发明的组合物、剂型或制剂可以包括一种、两种或更多种与MG53组合的活性成分。在本发明的所述组合物、剂型或制剂中的每种所述活性成分的剂量将是治疗有效剂量，所述治疗有效剂量包括和高于MED并且包括和低于 MTD。

在一些实施方案中，MG53与另一种活性成分的组合治疗至少提供附加的治疗功效。在一些实施方案中，所述组合提供协同治疗功效。在一些实施方案中，MG53减少了由其他活性成分引起的不良事件的发生、降低其水平或消除不良事件。

所述赋形剂的可接受浓度在本领域中是公知的，并且其特定浓度(量)在包含所述赋形剂的已知商业产品的包装插页或包装标签中列出。

应当理解，在药剂学领域中使用的化合物可以起到多种功能或目的。因此，如果本文中被指定的化合物仅提及一次或用于定义本文中的一个以上术语，则其目的或功能不应被解释为仅限于该指定的目的或功能。

在下面的实施例中，规定了每种成分的量的范围。包括“0”作为最低值的范围表示可选成分。下限“>0”表示存在相应的材料。

如本文所用，术语“约”或“大约”被认为是指指定值的±10％、±5％或±1％的变化或标准偏差。例如，取约20mg表示20mg±10％，相当于18-22mg。

如本文所用，术语“前药”意指在给药后在受试者体内转化的化合物，例如通过代谢、水解或生物降解，转化为具有药理活性的药物。前药可能具有药理活性或无活性。例如，MG53(天然或突变体)的前药将分别转化为MG53的天然形式或突变体形式。也可以使用术语“前体”代替术语“前药”。

如本文所用，术语“衍生物”意指：a)在结构上与第一化学物质相关并且理论上可以从第一化学物质衍生的化学物质；b)由类似的第一化合物形成的化合物或可以想象由另一第一化合物产生的化合物，如果所述第一化合物的一个原子被另一原子或原子团取代；c)衍生自母体化合物或从母体化合物获得并包含母体化合物的必需元素的化合物；或d)可以通过一个或多个步骤从具有相似结构的第一化合物制备的化合物。例如，衍生物可以包括氘代形式、氧化形式、脱水、不饱和、聚合物共轭或糖基化形式，或者可以包括其酯、酰胺、内酯、同系物、醚、硫醚、氰基、氨基、烷基氨基、巯基、杂环、杂环稠合、聚合、聚乙二醇化、苄基、三唑基、哌嗪基或氘代形式。

在下面的实施例中，规定了每种成分的量的范围。包括“0”作为最低值的范围表示可选成分。制备成分的量落入本文规定的组成范围内的组合物。包含在本文规定的组成范围内的一定量的成分的本发明的组合物按预期的和要求的方式操作。

鉴于上述描述和下面的实施例，本领域普通技术人员将能够在没有过度实验的情况下实施本发明。参考以下实施例，将更好地理解上述内容，这些实施例详细描述了制备和使用根据本发明的组合物的某些步骤。对这些实施例的所有引用均用于说明目的。下面的实施例不应被认为是穷尽的，而仅仅是说明本发明所设想的许多实施方案中的几个。可以按照本文所述的方法制备和使用本发明的组合物以及实施本发明的方法。

MG53由美国三医公司(TRIM-edicine,Inc.)(1275Kinnear路,俄亥俄州哥伦布市43212-1155)友情提供。

实施例1

AHPPE中间体的制备

在烧瓶中将4-(羟甲基)-苯基硼酸频哪醇酯(HPPE)(11.7g，50mmol)溶解在脱水二氯甲烷(DCM，60毫升)中，然后加入TEA(6.1g，60mmol)。然后将烧瓶置于冰上预冷，冷却至0℃后，滴加丙烯酰氯(5.4g，60mmol)的5.4mL无水DCM溶液1小时。然后除去烧瓶下的冰，在连续搅拌下将反应混合物温热回室温。反应10h后，过滤产物，分别用DI水和盐水洗涤3次。然后使用旋转蒸发器浓缩产物，并用MgSO₄干燥。然后得到单体AHPPE，为淡黄色粉末，产率为～90％。

实施例2

AAHPPE凝胶的制备

从实施例1的AHPPE开始，如下制备凝胶。

聚(NIPAAm-co-HEMA-co-AAcPB)通过将脱水的NIPAAM、HEMA和 AHPPE溶解在二恶烷中，并用N₂吹扫20分钟进行聚合。加入BPO作为引发剂，然后再用N₂吹扫20分钟。然后将混合物在65℃的预热油浴中连续搅拌20小时。通过使用四氢呋喃(THF)/己烷和THF/乙醚的三次沉淀-再溶解循环获得并纯化产物。最终产品通过真空烘箱和冻干机进一步干燥。分别合成了三种不同组成的共聚物AHPPE-10、AHPPE-8和AHPPE-6，它们NIPAAm/HEMA/AHPPE的比例分别为75/15/10、77/15/8和79/15/6。

实施例3

AAHPPE凝胶固化

从实施例2的AAHPPE凝胶开始，如下制备凝胶(水凝胶溶液)。将纯化的共聚物溶解在DPBS中，在4℃下连续搅拌过夜。将200微升水凝胶溶液转移到1.5 毫升微量离心管中。然后将管子放在37℃的水浴中，凝胶溶液在几秒钟内固化。

实施例4

仅含AAHPPE凝胶的皮肤敷料

将实施例2的AAHPPE凝胶直接施用于皮肤。在施用之前，凝胶是粘度小于约0.1Pa·sec的流体。将流体凝胶装载入涂药器中并放置在受试者的皮肤上，由此凝胶在约1分钟内固化以形成敷料。

实施例5

包含AAHPPE凝胶和MG53的皮肤敷料

将实施例2的AAHPPE凝胶(2毫升，8重量％在水性载体中，160mg)与 MG53(2mg，浓度为l mg/mL)混合。将rhMG53肽溶解在灭菌的DPBS中，并经由通过0.22μm注射器过滤器过滤而进一步灭菌两次。水凝胶溶液的浓度为8wt.％，将DPBS中的rhMG53溶液与水凝胶溶液在4℃下彻底混合过夜。rhMG53的终浓度为1mg/mL。然后将混合物直接施加到皮肤上，从而使凝胶在约1分钟内固化以形成敷料。该凝胶提供了MG53的连续释放。在21天内释放大于MG53总量的约60％wt。

实施例6

AAHPPE凝胶与另一种活性成分

将实施例2的AAHPPE凝胶与另一种活性成分混合。然后将混合物直接施加到皮肤上，从而使凝胶在不到5分钟的时间内固化以形成敷料。该凝胶提供了活性成分的连续释放。

实施例7

AAHPPE凝胶抗氧化活性的评价

在过氧化氢(50mM)存在下，在杜氏(Dulbecco)磷酸盐缓冲盐水(DPBS) 中评估了实施例2的AAHPPE凝胶(DPBS中为8重量％)隔离或捕获活性氧的能力。评价了凝胶的三个不同实施方案(AAHPPE-10、AAHPPE-8、AAHPPE-6)。凝胶的重量损失对应于过氧化氢被隔离的程度。

将AAHPPE-10、AAHPPE-8和AAHPPE-6(每个中共聚物含量为8重量％)水凝胶溶液(200微升)转移到1.5毫升微量离心管(使用前称试管，作为w4)中，在 37℃水浴中放置1小时以完成凝胶化过程。凝胶化后，从每根管中除去上清液，并将200μL不含H₂O₂和含50mMH₂O₂的DPBS添加到试管中。在第0周、第1周、第2周、第3周、第4周的每个时间点取出样品管。在每个时间点，在去除上清液后称重试管，并记录为w5。最后，样品用DI H2O洗涤，溶液用冻干机蒸发至干，试管重量为w6。在降解过程中，每隔一天更换培养基(含/不含H₂O₂的DPBS)，以保证使用新鲜的H₂O₂。每种条件使用四个重复的样品(n＝4)。此外，获得为期一周的降解产物，冷冻干燥并使用DMSO作为溶剂的¹HNMR表征。降解前的共聚物AAHPPE6/8/10也同时溶解在DMSO中进行NMR测试。

实施例8

含和不含MG53的AAHPPE凝胶的伤口愈合活性的评估

如下评估实施例2和5的AAHPPE凝胶(DPBS中8重量％，每个伤口200μL)加速穿刺伤口愈合的能力。

在切开伤口之前，使用电动推子将背部的老鼠毛发剃光。使用Betadine溶液和酒精准备垫擦拭背部的裸露区域以避免感染。使用灭菌的5毫米直径活检穿孔器(IntegraMiltex，新泽西州普兰博罗)在每只小鼠上创造左右两个伤口，以便可以暴露下面的背外侧骨骼肌。将db/+小鼠(C57BL/6小鼠)和db/db小鼠的伤口开放而没有敷料的伤口视为对照组。将db/+小鼠(C57BL/6小鼠)和db/db 小鼠的伤口在未敷料的情况下保持开放视为对照组。在伤口皮下注射200微升水凝胶溶液。

实施例9

评价MG53从AAHPPE凝胶中的释放

根据实施例1制备含有不同单体比例(NIPAAm/HEMA/AHPPE为75/15/10、 77/15/8和79/15/6)的AAHPPE共聚物级别。通过将共聚物置于杜氏的磷酸盐缓冲盐水(DPBS)中(共聚物浓度：8重量％，200μL，16mg)制备相应的凝胶 (AAHPPE-10，单体比75/15/10；AAHPPE-8，单体比77/15/8)。用微热使共聚物固化，并通过绘制等分试样和分析上清液监测MG53在21天内的释放。通过酶标仪(MolecularDevice)测量释放的rhMG53的浓度。在吸收读取模式下使用 280nm波长。标准曲线是通过使用读板器测量DPBS中不同浓度的rhMG53(0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5、1.75mg/mL)的吸光度获得的。观察到的标准曲线通过线性回归模型拟合良好。因此，通过将释放的rhMG53除以封装在水凝胶中的总rhMG53来计算累积释放的rhMG53浓度。

实施例10

AAHPPE凝胶和APLA凝胶的抗氧化活性比较

APLA(聚(NIPAAm-co-HEMA-co-APLA))是非反应性凝胶，这意味着它对活性氧(ROS)无反应。

芬顿(Fenton)反应法。将200μL APLA或AHPPE水凝胶溶液与200μL FeSO₄溶液(2mM)、200μL番红素O(360μg/mL)和320μLH₂O₂(6wt.％)溶液混合，孵育 10分钟，然后在55℃的水浴中加热30分钟。200μL的DI H₂O用作空白组。对于对照组，使用DI H₂O代替AHPPE凝胶样品和H₂O₂溶液。然后将混合物冷却至室温并使用读板器(分子装置(Molecular Device))在492nm处读取吸光度。羟基自由基的清除能力由公式(1)确定:

邻苯三酚测定方法。将500微升Tris-HCl(50mM，pH＝8.1)加入到200微升凝胶溶液中，然后在黑暗中逐滴加入80微升邻苯三酚(3mM)。最后，将20μL的HCl (8M)溶液添加到混合物中以停止反应。对于对照组，使用DI H₂O代替凝胶溶液。使用读板器测量吸光度。然后根据公式(2)计算清除超氧化物的能力:

实施例11

含或不含MG53的AAHPPE凝胶促进头发生长活性的评估

实施例2和5的AAHPPE凝胶(DPBS中的8重量％，200μL，16mg共聚物)促进毛发生长伤口的能力按如下进行评估。在每个时间点(术后第0、2、4、6、8、 10、12、14、16、18、20和22天)使用数码相机(松下，大阪，日本)、公制尺子和数字卡尺(CD-6”CSX，日本)进行术后伤口测量。相机被用来和视野内的尺子一起拍摄伤口。然后使用Image-J准确精确地计算伤口大小。记录每个伤口的面积。

实施例12

评估含或不含MG53的AAHPPE凝胶对氧化应激的保护作用

实施例2和5的AAHPPE凝胶保护组织免受氧化应激的能力按如下评估。监测在有和没有H₂O₂的2D水凝胶中FSC存活情况5天。MTT测定和活细胞图像表明，与ROS非反应性APLA凝胶相比，ROS反应性AHPPE凝胶在氧化应激下提高了FSCs的存活率。

方法A：(不含MG53的AHPPE凝胶和APLA凝胶)：用于体外实验的FSCs为第4-7代。所使用的培养基是具有血清和1％青霉素的完全培养基。使用来自T-75 培养板的胰蛋白酶-EDTA(0.25％)消化FSCs，并将其重新悬浮在没有血清的预热培养基中。用200微升水凝胶溶液(8重量％AHPPE凝胶和8重量％APLA凝胶用作对照)预涂96孔板，并在37℃、5％CO₂和21％O₂培养箱中平衡。将200μL的FSCs 悬浮液以10,000细胞/mL的密度接种到孔中。将板在37℃下孵育24小时，然后将培养基替换为新鲜培养基(500μM的H₂O₂或没有H₂O₂)。每隔一天更换一次培养基，以保证新鲜的H₂O₂。为第1、3和5天的不同时间点使用三个板。在每个时间点，将20μL的MTT溶液(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑， 5mg/mL)添加到孔中，并在添加200μL的DMSO之前再孵育4小时。读取560nm 处的荧光强度，并减去670nm处的背景。这些组包括没有H₂O₂的AHPPE凝胶、没有H₂O₂的APLA凝胶、具有500μM H₂O₂的AHPPE凝胶和具有500μM H₂O₂的 APLA凝胶。此外，在水凝胶上接种之前，用CMDil(一种用作活细胞跟踪剂的荧光染料，赛默飞世尔(Thermofisher))对FSCs进行染色。在每个时间点，取出样品并去除培养基。活细胞图像通过共聚焦显微镜使用Z-stack模式获得。

方法B：(含或不含MG53的FSCs)：在96孔板中，以2,000细胞/孔的接种密度培养FSCs。接种后24小时，用500μMH₂O₂处理FSCs，包括不含MG53、 1μg/mLMG53和10μg/mLMG53的组。治疗5天后进行MTT分析，以评估有无不同浓度MG53的细胞活力。还使用TUNEL分析试剂盒-HRP(abcam)进行TUNEL 分析，以验证MG53对减少细胞凋亡的作用。FSCs在插入6孔板的载玻片上培养，用或不用MG53/500μMH₂O₂处理24小时。然后将FSCs用冷DPBS洗涤两次，并以1×10⁶/mL的密度重悬于4％甲醛的DPBS中，并在室温下孵育10分钟。然后将细胞在TBS中再水化，使用在dH₂O中1/100稀释的蛋白酶K透化样品。通过加入在甲醇中稀释的H₂O₂(1/10)使内源性过氧化物酶的失活，然后使用TdT标记反应混合物进行标记反应，并使用由试剂盒提供的甲基绿复染溶液进行显影来实现。

实施例13

含MG53的乳膏

将冻干的MG53与乳膏基料(每盎司乳膏基料1.5至10mgMG53)混合，直至达到均质。乳膏基料包括水(约65-75％w/w)、至少一种防腐剂(约0.1-1％w/w)、至少一种保湿剂(约3-5％w/w)、至少一种去角质剂(约1-5％w/w)、至少一种渗透增强剂(约5-15％w/w)、至少一种润肤剂(约1-7％w/w)、至少一种保护剂(皮肤调理剂；约0.1-5％w/w)、至少一种抗微生物剂(约0.1-5％w/w)、至少一种锌盐(约 0.1-1％w/w)。

实施例14

rhMG53和EUDRAGITS-100的口服剂型

rhMG53由美国三医股份有限公司(TRIM-edicine，Inc.)提供。(俄亥俄州哥伦布)。EUDRAGITS-100(聚(甲基丙烯酸-共-甲基丙烯酸甲酯)1:2)由 EVONIK(https://healthcare.evonik.com/product/health-care/en/)提供。以下步骤用于制备珠子。

在100毫升烧杯中，加入35毫升水，并搅拌。在搅拌的同时加入Eudragit S-100粉末(1.4g)，然后加入12N NH₄OH(0.82mL)。

将2-羟丙基)-β-环糊精(0.24g)添加到10mL水中(CD：24mg/mL)。

在pH值为8时制备MG53溶液(70毫克在～15.5mLPBS中)。向该溶液中加入10ml的CD溶液和10ml水，总体积为35.55mL。

搅拌下将MG53/CD溶液与Eudragit溶液混合。

喷雾干燥得到的悬浮液以形成含有MG53(70mg)、EUDRAGIT(1.4g)、盐 (130mg)和CD(0.24g)的粉末状剂型，总固体含量为1.77g或MG53负载量为40mg/g固体(4％装载量)。使用的喷雾干燥条件：喷嘴尺寸-0.6毫米：空气速度-0.3m³/min；空气出口温度：38℃；室温：24C；房间湿度:53％

该粉末可以包含在胶囊、囊片、片剂或其他口服剂型中。

实施例15

毛囊的定量研究

将从实验动物背部解剖的皮肤样品用10％福尔马林固定，处理后包埋在 4μm厚的石蜡切片中。皮肤切片用苏木精-伊红(H&E)染色。通过计数每1000μ μM皮肤切片中的毛囊数量来定量毛囊数量。

实施例16

MG53对小鼠毛发生长的评价

使用电动推剪剃掉背部毛发，并用NairTM(脱毛乳液)清洁。然后立即给小鼠皮下注射200μl生理盐水(作为对照)或rhMG53(2mg/kg)，连续7天每天治疗。通过数码相机(日本松下DMC-ZS3)在指示的时间点捕获图像。

实施例17

MG53对大鼠毛发生长的评价

用电推剪剃掉背部毛发。然后立即对大鼠进行皮下注射BSA(1mg/kg)或 rhMG53(1mg/kg)，连续7天每天治疗。通过数码相机(日本松下DMC-ZS3)在指示的时间点捕获图像。

使用电推剪剃掉背部毛发并进行消毒。使用无菌的

毫米活检穿孔器

创建两个全层皮肤伤口。大鼠立即接受皮下注射200μl生理盐水(作为对照)或rhMG53(1mg/kg)，连续7天每天治疗。皮肤样品用苏木精 -伊红(H&E)染色。毛囊数量的定量显示，在伤口后第14天，与生理盐水对照相比，接受rhMG53处理的大鼠的毛囊生长得到改善。

实施例18

评估MG53对用过氧化氢处理后人毛囊干细胞的存活率的改善

以2,000细胞/孔的接种密度，将FSCs在96孔板中培养。接种24小时后用 500μMH₂O₂处理FSCs，包括不含MG53、含1μg/mLMG53和10μg/mLMG53的组。然后用冷DPBS洗涤FSCs两次，并以1×10⁶/mL的密度重悬于4％甲醛的DPBS中，并在室温下孵育10分钟。然后将样品在TBS中重新水化，并使用1/100稀释在 dH2O中的蛋白酶K进行透化。通过加入在甲醇(1/10)中稀释的H2O2实现使内源性过氧化物酶的失活，然后使用TdT标记反应混合物进行标记反应，并使用由试剂盒提供的甲基绿复染进行显影来实现。所有染色均使用KEYENCE显微镜成像。从获得的图像中定量凋亡细胞。

实施例19

含MG53乳膏改善糖尿病小鼠毛发生长的评价

将慢性切除性皮肤伤口(4毫米x4毫米活检穿孔器)的小鼠模型应用于db/db 小鼠。每隔一天使用含有10mg/oz的rhMG53或对照(不含rhMG53)的外用乳膏。在第12天，将伤口组织切除、固定、包埋。进行H/E染色以评估伤口区域的毛囊数量。

实施例20

含MG53乳膏治疗激光消融后皮肤的评价

在激光消融手术当天，患者拍照以作为比较数据。治疗后，立即将市售的常规保湿剂产品涂在患者面部的右侧，并将MG53乳膏涂在患者面部的左侧。术后7天每天使用乳膏。每天拍摄照片。附图所示为第4天。

实施例21

含MG53乳霜治疗皮肤红色瑕疵的评价

一名老年白人男性被诊断患有大疱性类天疱疮样皮肤病。类似于蝴蝶皮肤综合症。皮肤很脆弱，在轻微的机械应力下很容易破裂。皮肤在破裂前也很容易起泡，暴露出由于皮肤状况而缓慢愈合的开放性伤口。个人经常在睡梦中撕裂皮肤，醒来时会有新的裂口/伤口和带血的床单/衣服。每天将MG53乳膏用于新的和结痂的伤口。MG53乳膏的应用显著减少了至少1周的愈合时间。每天使用绷带并用绷带覆盖时，这种愈合速度更快。因此，用MG53保持伤口湿润并覆盖伤口，可以更快地使伤口上皮化。此外，经常使用它的区域(即手腕)不易撕裂和起泡。

实施例22

含MG53乳膏减少皮肤皱纹的评价

在CO₂手术当天，患者拍照以获取比较数据。治疗后，立即将常规商业乳膏产品涂在患者面部的左侧，并将MG53乳膏涂在患者面部的右侧。术后28天每天使用乳膏。每天拍摄照片是。该附图显示了术后第3周。

实施例23

含MG53乳膏治疗老年人慢性开放性伤口的评价

一名被诊断出患有大疱性类天疱疮样皮肤病症的老年男性在其他方面健康状况良好。皮肤很脆弱，在轻微的机械应力下很容易破裂。每天用含MG53 乳膏治疗手部伤口3周。皮肤变得更能抵抗轻微的机械应力引起的撕裂。

实施例24

含MG53乳膏治疗经低温处理组织的评价

一位年长的男性通过冷冻从脸上除去了痣。皮肤科医生表示，至少需要1 周才能缓解疼痛，2周才能观察到皮肤愈合的明显改善。每天使用含MG53乳膏可在1-2天后减轻疼痛，并在1周内迅速愈合。未使用绷带。每天涂2-3次乳膏。

实施例25

rhMG53蛋白生产与质量控制

以下过程用于生产天然MG53蛋白。

如Zhu等人所述(“聚合酶转录酶释放因子(PTRF)将MG53蛋白锚定到细胞损伤部位以启动膜修复”，《生物化学杂志(The Journal of biological chemistry)》 (2011),286,12820-12824)，和韦斯莱德(Weisleder)等人所述(重组MG53蛋白调节治疗性细胞膜修复治疗肌营养不良症。《科学转化医学(Science translational medicine)》(2012)，4,139ra185)，大肠杆菌发酵用于获得高质量(>97％纯度)rhMG53(重组人MG53)蛋白，其全部公开内容通过引用并入本文。每种制剂的rhMG53的膜保护活性是用如前所述的已建立的微玻璃珠损伤测定法确定的(同上)。

实施例26

用含rhMG53的面膜治疗皱纹和黑色素生成

通过用含有rhMG53(20微克/mL)的生理盐水浸透市售一次性干面膜布，制备含rhMG53的面膜。

每周大约两到三次，在皮肤清洁后，将含有MG53的面膜放在受试者的脸上。在晚上使用面膜每次治疗约10-30分钟。受试者使用面膜约两到三周或更长时间。在两周的治疗期之前和之后，用皮肤弹性测试仪(Cutometer)定量黑色素含量和皱纹数量。结果如图11A-11B所示。

所有数据均表示为平均值±S.D。通过学生t检验和重复测量方差分析对各组进行比较。p<0.05的值被认为是显著的。

对于本文中的任何范围，其上限和下限被认为是范围的一部分。此外，在所述范围内的所有整数和分数值也被认为是在所述范围内。因此，在每个指定范围内的所有整数和分数值通过引用并入本文。

本文公开的所有值可具有±10％的标准技术测量误差(标准偏差)。术语“约” 或“大约”意指相对于指定值的±10％、±5％、±2.5％或±1％，即“约”20％意指 20±2％、20±1％、20±0.5％或20±0.25％。术语“多数”或“主要部分”意指当在两个部分的上下文中使用时超过一半，或当在三个部分的上下文中使用时意指超过 3分之1。术语“少数”或“次要部分”意指当在两个部分的上下文中使用时小于一半，或当在三个部分的上下文中使用时意指小于3分之1。应当注意，除非另有说明，本文中关于药代动力学或溶解参数的值通常代表所获得的平均值或中值。

以上是本发明的具体实施例的详细描述。应当理解的是，尽管为了说明的目的已经在这里描述了本发明的具体实施例，但是在不脱离本发明的精神和范围的情况下可以做出各种修改。因此，除了所附的权利要求之外，本发明不受限制。根据本公开内容，无需过度实验即可制作和执行本文公开和要求保护的所有实施例。

Claims

1.一种包含液体载体和硼酸酯基共聚物的水凝胶，所述水凝胶在大约较低的温度下表现出较低的粘度，在较高的温度下表现出较高的粘度。

2.根据权利要求1所述的水凝胶，其中所述水凝胶在局部施用于皮肤之前是液体，并且在局部施用于皮肤之后变成凝胶、半固体或固体。

3.根据权利要求1或2所述的水凝胶，其中所述水凝胶a)在约4℃下表现出较低的粘度，在约37℃下表现出较高的粘度；b)在约4℃下为液体，在约37℃下为凝胶、半固体或固体；和/或c)在约4℃下可用手使其通过与注射器接合的18-30号针头流动，而在约37℃下不能用手使其通过与注射器接合的18-30号针头流动。

4.根据前述权利要求中任一项所述的水凝胶，其中所述共聚物是三元共聚物，所述三元共聚物包含一种或多种丙烯酰胺单体、一种或多种甲基丙烯酸酯单体和一种或多种硼酸酯丙烯酸酯单体。

5.根据权利要求5所述的水凝胶，其中a)所述一种或多种丙烯酰胺(AM)单体是指(N-烷基)丙烯酰胺(NAAM)或其同系物或类似物；b)所述一种或多种甲基丙烯酸酯(MAc)单体是指(羟烷基)甲基丙烯酸酯(HAMc)或其同系物或类似物；c)所述一种或多种硼酸酯丙烯酸酯(BEAc)单体是指4-(羟烷基)-苯基硼酸,频哪醇酯)丙烯酸酯(HPPE-Ac)或其同系物或类似物；或d)其组合。

6.根据权利要求4或5所述的水凝胶，其中所述一种或多种丙烯酰胺(AM)单体或同系物或类似物由以下化学结构定义

7.根据权利要求4、5或6所述的水凝胶，其中所述一种或多种甲基丙烯酸酯(MAc)单体或同系物或类似物由以下化学结构定义

其中R是(CH₂)_n；并且n＝2、3或4。

8.根据权利要求4、5、6或7所述的水凝胶，其中所述一种或多种硼酸酯丙烯酸酯(BEAc)单体或同系物或类似物由以下化学结构定义

9.根据前述权利要求中任一项所述的水凝胶，其中烷基在每次出现时独立地选自下组：(C₁-C₂)-烷基或(C₃-C₈)-烷基，所述烷基可以是直链的、支链的或环状的。

10.根据前述权利要求中任一项所述的水凝胶，其由下式定义

聚((AM)_m-co-(MAc)_n-co-(BEAc)_x)，

其中：m在约75至约85的范围内，n在约5至约20的范围内，以及x在约5至约20的范围内。

11.如权利要求10所述的水凝胶，其由下式定义

聚((NAAM)_m-co-(HAMAc)_n-co-(HPPE-Ac)_x)，

其中：m在约75至约85的范围内，n在约5至约20的范围内，x在约5至约20的范围内。

12.如权利要求10所述的水凝胶，其由式定义

聚((NIPAA)_m-co-(HEMA)_n-co-(AHPPE)_x)，

其中NIPAAM为N-异丙基丙烯酰胺，HEMA为甲基丙烯酸羟乙酯，AHPPE为(4-(羟甲基)-苯基硼酸，频哪醇酯)丙烯酸酯(或4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼环戊烷-2-基)苯基]甲酯)。

13.如上述权利要求中任一项所述的水凝胶，其中，所述共聚物不包括含炔基的单体。

14.一种制备硼酸酯丙烯酸酯单体(BEAc)的方法，所述方法包括：

将AM(或其同系物或类似物)与丙烯酰氯(或其同系物或类似物)在胺催化剂存在下反应，以形成所述BEAc(或其同系物或类似物)。

15.根据权利要求14所述的方法，其中a)所述反应在冷却下和/或在约室温下进行；b)所述胺催化剂是叔胺或芳族胺。

16.具有下式的硼酸酯丙烯酸酯(BEAc)

17.一种制备硼酸酯基共聚物的方法，所述方法包括

a)提供一种或多种AM单体、一种或多种MAc单体，和一种或多种BEAc单体；和

b)使所述单体在过氧化物催化剂的存在下反应，以形成所述三元共聚物。

18.根据权利要求17所述的方法，其中AM：MAc：BEAc的摩尔比为约75-80：约12-15：约6-15。

19.一种药妆组合物，其包含上述权利要求中任一项所述的共聚物和一种或多种化妆品可接受的赋形剂。

20.一种药妆组合物，其包含上述权利要求中任一项所述的共聚物、一种或多种活性成分和一种或多种化妆品可接受的赋形剂。

21.根据权利要求20所述的药妆组合物，其中所述组合物提供所述一种或多种活性成分的缓释释放。

22.一种药妆组合物，其包含上述权利要求中任一项所述的共聚物MG53和一种或多种化妆品可接受的赋形剂。

23.一种药妆组合物，其包含上述权利要求中任一项所述的共聚物、一种或多种抗氧化剂和一种或多种化妆品可接受的赋形剂。

24.一种药妆组合物，其包含上述权利要求中任一项所述的共聚物、MG53、一种或多种抗氧化剂和一种或多种化妆品可接受的赋形剂。

25.一种药妆组合物，其包含MG53和一种或多种化妆品可接受的赋形剂。

26.一种药妆组合物，其包含MG53、一种或多种抗氧化剂和一种或多种化妆品可接受的赋形剂。

27.如权利要求19-26中任一项所述的药妆组合物，其进一步包含一种或多种锌盐。

28.根据权利要求19-27中任一项所述的药妆组合物，其中所述组合物是凝胶、乳膏或软膏。

29.根据权利要求19-28中任一项所述的药妆组合物，其中所述组合物适于局部给药、皮肤给药、透皮给药或皮下给药。

30.一种改善皮肤外观的方法，通过向皮肤施用美容有效量的上述权利要求中任一项所述的水凝胶或药妆组合物。

31.根据权利要求30所述的方法，其中所述改善选自下组：减少皱纹、减少黑色素沉积、减少刺激、减少炎症、减少发红、减少疤痕、减少胶原形成、减少干细胞向成纤维细胞的分化、减少改善真皮或表皮状况的时间。

32.一种防止活性氧(ROS)相关的对皮肤的氧化损伤的方法，所述方法包括在所述皮肤暴露于ROS之前，预防性地给予皮肤美容有效量的上述权利要求中任一项所述的水凝胶或药妆组合物。

33.一种隔离、中和或消除皮肤中的活性氧(ROS)的方法，其包括在所述皮肤暴露于所述ROS后，向所述皮肤施用美容有效量的上述权利要求中任一项所述的水凝胶或药妆组合物。

34.一种改善毛发生长的方法，所述方法包括向有需要的受试者的皮肤施用美容有效量的根据上述权利要求中任一项所述的水凝胶或药妆组合物。

35.根据权利要求34所述的方法，其中所述改善毛发生长包括增加发丝厚度、改善毛囊健康、增加每单位面积皮肤的毛囊数量或增加毛发生长速率中的至少一种。

36.一种去除或改善皮肤瑕疵的外观的方法，所述方法包括向有需要的受试者的皮肤施用美容有效量的上述权利要求中任一项所述的水凝胶或药妆组合物。

37.根据权利要求36所述的方法，其中所述去除或改善皮肤瑕疵的外观包括减少皱纹的出现或数量，减少斑点的出现或数量，减少黑色素沉积，和/或减少发红的斑的出现或数量。

38.一种使受伤组织愈合的方法，所述方法包括向所述受伤组织施用有效量的ROS清除聚合物。

39.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述MG53局部地、透皮地或皮下施用。

40.一种药妆凝胶，其包含至少一种化妆品可接受的抗氧化剂聚合物、有效量的MG53和至少一种液体载体，其中所述凝胶在小于约15℃时表现出低粘度，并且所述凝胶在与皮肤接触后或在与至少约18℃、至少约20℃或至少约25℃的表面接触后固化或半固化(基本上变稠成高粘度物质)。

41.一种药妆乳膏，其包含乳膏基料和有效量的MG53。

42.如权利要求41所述的乳膏，其进一步包含一种或多种活性成分。

43.根据权利要求41或42所述的乳膏，所述乳膏基料包含一种或多种化妆品上可接受的(和/或药学上可接受的)赋形剂。

44.一种药妆软膏，其包含软膏基料和有效量的MG53。

45.如上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述皮肤没有受到诸如冲击力、灼伤、照射或切割的物理伤害，和/或所述皮肤除了表现出美容上不希望的特征之外是健康的。

46.一种使受伤组织愈合的方法，所述方法包括向受伤组织施用有效量的如上述权利要求中任一项所述的组合物。

47.如上述权利要求中任一项的方法，其中所述受试者是人或动物。

48.如上述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括向所述受试者施用至少一种抗氧化剂的步骤。

49.根据权利要求48所述的方法，其中MG53与抗氧化剂的摩尔比为0.01：1至10：1。

50.如上述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括向所述受试者施用至少一种锌盐的步骤。

51.根据权利要求50所述的方法，其中MG53与锌盐的摩尔比为约1:2或更大。

52.一种组合组合物，其包含MG53、本发明的ROS清除共聚物和一种或多种赋形剂。

53.根据权利要求52所述的组合组合物用于治疗伤口、用于减少愈合伤口部位处的胶原形成和/或用于增加愈合伤口部位处的毛囊密度的用途。

54.根据上述权利要求中任一项所述的发明，其中所述水凝胶、组合物或药妆组合物还包含至少一种抗氧化剂。

55.根据权利要求54所述的发明，其中MG53与抗氧化剂的摩尔比在0.01：1至10：1的范围内。

56.根据上述权利要求中任一项所述的发明，其中所述水凝胶、组合物或药妆组合物还包含至少一种锌盐。

57.如权利要求56所述的发明，其特征在于，所述MG53与锌盐的摩尔比为1：2或更大。

58.根据上述权利要求中任一项所述的发明，其中所述水凝胶、组合物或药妆组合物进一步包含至少水性液体载体。

59.根据权利要求58所述的发明，其中所述水性液体载体的含量为至少30％重量％。