CN115290877A - 一种全血样本多项联检的微流控芯片及全血检、测方法、系统 - Google Patents

Abstract

本发明涉及体外诊断技术领域，尤其涉及一种全血样本多项联检的微流控芯片、方法、系统。该微流控芯片包括：芯片基体，芯片基体上设置有进样槽、多个试剂槽、与试剂槽对应设置的试剂阀门，以及通过微流道与试剂阀门连通的多个包被槽；进样槽通过管路连通其中一试剂阀门，进样的待测全血样本通过该试剂阀门流经包被槽；试剂槽与试剂阀门对应连通，流入试剂阀门的试剂通过微流道依次流入包被槽，试剂槽至少用于容置酶标抗体或发光底物。该微流控芯片可直接进行全血样本的检测，无需分离血细胞，避免了分离血细胞带来的结果偏差；微流控芯片结构简单，可控性高，保证检测结果的准确；实现全血样本中多项待检测抗原或抗体的联检，降低了检测成本。

Description

一种全血样本多项联检的微流控芯片及全血检、测方法、系统

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，尤其涉及一种全血样本多项联检的微流控芯片及、方法、系统。

背景技术

在体外诊断领域，如何实现全血样本中的待检测物进行有效的检测是亟待解决的问题。目前，对全血细胞的检测主要通过以下两种方法进行。

第一种方法是：通过将血细胞从全血中分离后，进行血清或血浆的检测分析。然而现有技术分离血细胞的方法，存在容易受温湿度或者施加外力的影响，导致血细胞破裂或分离不完全、可控性较差、耗时都长和检测结果的准确性差等问题。

第二种方法是：通过在全血中添加溶血剂，将血细胞溶解后，再根据血细胞计数得出红细胞比容(HCT)值，最后，对全血测试的结果进行HCT校准，实现全血的检测。这种检测方法既要准确测量出溶血稀释后的待检测抗体的浓度，又要准确进行血细胞计数，需要复杂的测量系统才能实现，并且在全血样本稀释过程中，全血样本与稀释液的加样误差都会对测量结果产生偏差，且HCT的测量误差会累积到测量结果中，导致测量结果的不准确。

发明内容

针对以上技术问题，本发明提供一种全血样本多项联检的微流控芯片，以解决现有技术中，不能直接检测全血样本的技术问题。本发明实施例提供的全血样本多项联检的微流控芯片无需分离或溶解血细胞，可直接进行全血样本的检测，即可测得全血样本中待测物的浓度。避免了分离血细胞和稀释全血样本带来的结果偏差，检测结果准确可靠，操作简单；还可实现全血样本中多项待检测物的联测，降低检测成本。

为解决上述技术问题，本发明实施例采用了如下技术方案：

第一方面，本发明实施例提供一种全血样本多项联检的微流控控芯片，包括：芯片基体，所述芯片基体上设置有进样槽、多个试剂槽、与所述试剂槽对应设置的试剂阀门以及通过微流道与所述试剂阀门连通的多个包被槽；其中，

所述进样槽通过管路连通其中一试剂阀门，进样的待测全血样本通过该试剂阀门流经所述包被槽；

所述试剂槽与所述试剂阀门对应连通，流入所述试剂阀门的试剂通过微流道依次流入所述包被槽，其中，所述试剂阀门根据所需试剂加入的顺序能够开启或关闭，所述试剂槽至少用于容置酶标抗体/抗原或发光底物；

多个所述包被槽用于包被不同抗原或捕获抗体，待测的全血样本与包被抗原或抗体、以及酶标抗原或抗体特异结合形成免疫复合物，免疫复合物中的酶催化发光底物产生光信号，实现全血样本的抗原或抗体多项联检。

本发明实施例提供全血样本多项联检的微流控芯片可直接进样全血样本，即可测得全血样本中待检测抗体的浓度，无需分离血细胞，避免了分离血细胞和稀释全血样本带来的结果偏差；加样量少，可实现少量全血样本的检测；微流控芯片的结构简单，可控性高，保证检测结果准确可靠；还可实现全血样本中多项待检测抗原或抗体的联测，降低检测成本。

本发明实施例中，全血样本中待检测物可以为全血中的血清蛋白或血浆蛋白。例如，清蛋白、球蛋白、纤维蛋白原、血清球蛋白、免疫血清球蛋白，白蛋白等。

可选地，多个所述试剂槽在所述芯片基体并排设置，形成试剂区；

多个所述试剂阀门并排设置，形成阀门区；

多个所述包被槽并排设置，形成反应区；

其中，所述试剂槽、所述试剂阀门以及所述包被槽的排布方向相同。

可选地，所述试剂区、所述试剂阀门与所述反应区在所述芯片基体上依次并列排布。

可选地，所述试剂槽至少设置3个，分别用于容置酶标抗原或抗体、清洗液及发光底物。

本发明实施例中，多个所述试剂槽包括第一试剂槽、第二试剂槽、第三试剂槽和第四试剂槽。所述第一试剂槽容置有酶标抗原或抗体，其中，酶标抗原/抗体包括但不限于三种酶标抗原/抗体；所述第二试剂槽容置有清洗液，所述第三试剂槽容置有备用清洗液，所述第四试剂槽容置有发光底物。

可选地，所述试剂阀门至少设置3个，分别与所述试剂槽一一对应连通。

本发明实施例中，所述试剂阀门包括第一阀门、第二阀门、第三阀门和第四阀门。上述试剂阀门可防止微流道中的液体倒流。

可选地，所述微流道包括主流道和多个分流道，其中，主流道连接各所述包被槽；多个分流道连接在多个所述试剂阀门与所述主流道之间。

本发明实施例中，所述第一阀门、第二阀门、第三阀门和第四阀门通过分流道与主流道连通，所述主流道连通所述反应区的包被槽。

本发明实施例中，所述第一阀门分别通过管路连接有所述进样槽和所述第一试剂槽；所述第二阀门通过管路连接有所述第二试剂槽、所述第三阀门通过管路连接有所述第三试剂槽，所述第四阀门通过管路连接有所述第四试剂槽。

将全血样本加入进样槽，通过第一阀门进入反应区的包被槽，与包被槽包被的抗原或抗体，进行特异结合，形成抗原/抗体-待检测物的复合物；然后，第一试剂槽的酶标抗原或抗体通过第一阀门进入反应区的包被槽，与包被槽的抗原/抗体-待检测物的复合物反应，形成包被抗原/抗体-待检物-酶标抗原/抗体的复合物。

可选地，所述包被槽设置3个以上；相邻所述包被槽之间的流道设置有弯道。

本发明实施例中，所述反应区包括但不限于第一包被槽、第二包被槽和第三包被槽，其中，所述包被槽的数量，可根据全血样本中待检测抗体的数量而增加。所述第一包被槽与所述第二包被槽之间、所述第二包被槽与所述第三包被槽之间均设置有弯道；弯道可以隔离各包被区，防止光串扰，保证检测结果的准确性。

所述第一包被槽包被有第一抗原或抗体，所述第二包被槽包被有第二抗原或抗体，所述第三包被槽包被有第三抗原或抗体，所述第一抗原或抗体、所述第二抗原或抗体和所述第三抗原或抗体均不相同。

本发明实施例中，所述第一试剂槽包括三种酶标抗原或抗体，其中，所述三种酶标抗原或抗体分别与所述全血样本中三种待检测物相对应。

本发明实施例中提供的三种酶标抗原或抗体为混合物，分别与全血样本中三种待检测物特异反应，形成抗原/抗体-待检测物-酶标抗原/抗体的复合物。

本发明实施例中提供的酶标抗原/抗体包括但不限于三种酶标抗原的混合物，例如，四种酶标抗原/抗体的混合物，五种酶标抗原/抗体的混合物。

本发明实施例中，可根据全血样本中待检测物的数量，在反应区设置不同数量的包被槽，在包被槽中包被相应数量的特异抗原或抗体，再根据全血样本中待检测物的数量，设置相应数量的酶标抗原/抗体混合物。

本发明实施例中，酶标抗原/抗体还可将未反应的全血样本推离反应区，酶标抗原/抗体的用量为覆盖反应区即可。

本发明实施例中，所述第二试剂槽包括清洗液；用于清洗管路，以及将反应区中未反应的全血样本和酶标抗原/抗体推离至废液区。

可选地，所述第三试槽中容置有备用清洗液；所述清洗液用于再次清洗管路，以及再次推离反应区未反应的全血样本和酶标抗原/抗体。

可选地，所述第四试剂槽中容置有发光底物，所述发光底物为化学发光分子，可释放光信号。

可选地，微流控芯片还包括废液槽、通过微流道设置在多个包被槽之后，废液槽用于收集未反应的全血样本以及各试槽内流入微流道内的废液。

第二方面，本发明实施例提供一种全血样本多项联检的方法，包括以下步骤：构建一微流控芯片，所述微流控芯片包括多个包被槽，所述包被槽分别包被不同抗原或捕获抗体，并设置分别容纳有酶标抗原/抗体、清洗液或发光底物的试剂包；

待测全血样本由所述微流控芯片上的进样槽通过微流道流经多个包被槽，所述试剂包内的酶标抗原/抗体、清洗液和发光底物分别依次流经包被槽；

全血样本中的待检测物与包被抗原/抗体特异结合、与流经的酶标抗原/抗体反应形成免疫复合物，免疫复合物中的酶再催化发光底物反应，释放光信号；

用化学发光测试仪检测光信号，得到全血样本中待检测物的多项待测数据。

本发明实施中的检测样本适用于全血样本，但不局限于全血样本，同样适用于血清、血浆样本，可以实现对全血、血清和血浆的三种不同样本类型的无差别检测。

第三方面，本发明实施例提供一种全血样本多项联检的微流控系统，包括上述微流控芯片。

本发明实施例提供的全血样本多项联检的方法，不仅可以进样全血样本，而且还可进样血清或血浆样本，其中，血清或血浆样本不需要稀释。上述全血、血清或血浆样本的加样量为15-50ul，使得样本完全覆盖反应区即可，加样量的偏差不会影响检测结果，避免了加样误差对检测结果的影响，可实现对全血、血清或血浆样本的无差别加样。

本发明实施例提供的全血样本多项联检的方法，上述进样槽添加有抗凝剂，可实现末梢血的检测。全血样本中不需要添加其他溶剂，避免了其他溶剂对全血中待检测抗体浓度的干扰，保证了检测结果的准确性。

本发明实施例提供的全血样本多项联检的方法，直接进样全血样本，不需要分离全血样本中的红细胞，红细胞与全血中的待检测抗体共存，通过精确控制液体的流动，使得红细胞保持细胞的原始状态，保证红细胞不破裂，可直接测得全血中待检测抗体浓度。

附图说明

图1是本发明的全血样本多项联检的微流控芯片示意图；

图2是本发明的全血样本多项联检的方法流程图；

图3为Corestar-100检测全血样本和罗氏E-411检测血清样本中PCT比对测试结果；

图4为Corestar-100检测同源全血-血清样本中PCT比对测试结果；

图5为Corestar-100检测全血样本和雅培i-1000SR检测血浆样本中cTnI比对测试结果；

图6为Corestar-100检测全血样本和罗氏E-411检测血浆样本中NT-proBNP比对测试结果；

图7为Corestar-100检测全血样本和诺尔曼NRM411-S7检测血浆样本中D-Dimer比对测试结果；

图8为Corestar-100检测同源全血-血浆样本中cTnI比对测试结果；

图9为Corestar-100检测同源全血-血浆样本中NT-proBNP比对测试结果；

图10为Corestar-100检测同源全血-血浆样本中D-Dimer比对测试结果。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。

图1是本发明的全血样本多项联检的微流控芯片示意图。

如图1所示，包括：芯片基体，芯片所述基体上设置有进样加样槽1、多个试剂槽、与试剂槽对应设置的试剂阀门，以及通过微流道与试剂阀门连通的多个包被槽；其中，进样槽1通过且不限于管路与其中一试剂阀门连通，进样的待测全血样本通过该试剂阀门流经包被槽；试剂槽通过且不限于管路与试剂阀门对应连通，流入试剂阀门的试剂通过微流道依次流入包被槽，其中，试剂阀门根据所需试剂加入的顺序开启或关闭，试剂槽至少用于容置酶标抗体/抗原或发光底物；多个包被槽用于包被不同抗原或捕获抗体，待测的全血样本与包被抗原或抗体、以及酶标抗体/抗原特异结合形成免疫复合物，并催化发光底物发光，实现全血样本的抗原或抗体多项联检。

多个试剂阀门并排设置，形成阀门区3，多个包被槽并排设置，形成反应区2；试剂槽、试剂阀门以及包被槽的排布方向相同。

微流道包括主流道和多个分流道，主流道连接各包被槽；多个分流道连接在多个试剂阀门与主流道之间。

多个包被槽至少包括第一包被槽21、第二包被槽22和第三包被槽23。

多个试剂阀门至少设置3个，分别与多个试剂槽一一对应连通。例如，多个试剂阀门包括第一阀门31、第二阀门32、第三阀门33和第四阀门34。多个试剂槽至少包括第一试剂槽4、第二试剂槽5、第三试剂槽6和第四试剂槽7，分别用于容置酶标抗体/抗原、清洗液、备用清洗液和发光底物。

第一阀门31分别通过管路连接有进样槽1和第一试剂槽4；第二阀门32通过管路连接有第二试剂槽5，第三阀门33通过管路连接有第三试剂槽6，第四阀门34通过管路连接有第四试剂槽7。

第一阀门31，第二阀门32、第三阀门33和第四阀门34还通过分流道连接有主流道，主流道连接有反应区2的第一包被槽21、第二包被槽22和第三包被槽23，反应区2通过主流道连接有废液槽8。

本发明实施例中，阀门区3的阀门可防止微流道中的液体倒流。

本发明实施例中，将全血样本加入进样槽1后，全血样本通过第一阀门31进入反应区2的包被槽，与包被槽的抗体或抗原特异结合，形成抗体/抗原-待检测物的复合物；然后，第一试剂槽4的酶标抗体或抗原通过第一阀门31进入反应区2，与抗体/抗原-待检测物的复合物反应，形成抗体/抗原-待检物-酶标抗体/抗原的复合物。

反应区2包括但不限于第一包被槽21、第二包被槽22和第三包被槽23，其中，包被槽的数量，可根据全血样本中待测物的数量而增加。

第一包被槽21与第二包被槽22之间，第二包被槽22与第三包被槽23之间均设置有弯道；上述弯道可以隔离各包被槽，防止光串扰，保证检测结果的准确性。

第一包被槽21包被有第一抗体或抗原，第二包被槽22包被有第二抗体或抗原，第三包被槽23包被有第三抗体或抗原，上述第一抗体或抗原、第二抗体或抗原和第三抗体或抗原均不相同。

上述第一抗体或抗原、第二抗体或抗原与第三抗体或抗原与全血样本中待检测物特异结合，形成三种抗体/抗原-待检测物复合物。例如，第一抗体/抗原-第一待检测物复合物、第二抗体/抗原-第二待检测物复合物、第三抗体/抗原-第三待检测物复合物。

第一试剂槽4包括三种酶标抗体/抗原的混合物，分别与全血样本中三种待检测物特异反应，形成免疫复合物，免疫复合物为抗体/抗原-待检测物-酶标抗体/抗原的复合物。例如，第一抗体/抗原-第一待检测物-第一酶标抗体/抗原的复合物、第二抗体/抗原-第二待检测物-第二酶标抗体/抗原的复合物和第三抗体/抗原-第三待检测物-第三酶标抗体/抗原的复合物。酶标抗体/抗原还可将未反应的全血样本推离反应区2，酶标抗体/抗原的用量为覆盖反应区2即可。

第二试剂槽5包括清洗液；用于清洗管路，以及将反应区2中未反应的全血样本和酶标抗体/抗原推离至废液槽8。

第三试剂槽6包括备用清洗液；备用清洗液用于再次清洗管路，以及再次推离反应区2中未反应的全血样本和酶标抗体/抗原。

第四试剂槽7包括发光底物，发光底物为化学发光分子，可释放光信号。通过推挤第四试剂槽7的发光底物进入反应区2的包被槽后，与上述免疫复合物，即抗体/抗原-待检测物-酶标抗体/抗原的复合物中的酶进行催化反应，释放光信号，通过化学发光测试仪中的光电倍增管检测到光信号，由于光信号与全血样本中的待测物的浓度成正比，从而得到全血样本中待测物的浓度。

废液槽8设置在多个包被槽之后，用于收集未反应的全血样本、以及各试剂槽内流入微流道内的废液。

上述微流控芯片包括基体1、以及与基体1配合设置的上盖，上盖和基体1可拆卸。

将上述微流控芯片插入化学发光测试仪中，进行全血样本多项联检的操作示意如下：

将全血样本加入进样槽1后，盖上进样槽1上方的弹性样本盖，通过化学发光测试仪中的驱动系统，例如，步进电机精确控制全血样本从分流道进入第一阀门31后，再进入反应区2的第一包被槽21、第二包被槽22和第三包被槽23，并与第一包被槽21包被的第一抗体或抗原、第二包被槽22包被的第二抗体或抗原和第三包被槽23包被的第三抗体或抗原特异结合，形成第一抗体/抗原-第一待检测物的复合物、第二抗体/抗原和第二待检测物的复合物；第三抗体/抗原-第三待检测物的复合物。全血样本的加样量为15-50μl，使得全血样本完全覆盖反应区即可。

通过上述驱动系统推挤第一试剂槽4的三种酶标抗体/抗原的混合物从第一阀门31进入反应区2的第一包被槽21、第二包被槽22和第三包被槽23，三种酶标抗体/抗原分别与第一包被槽21中的第一抗体/抗原-第一待检测物的复合物反应，第二包被槽22中的第二抗体/抗原和第二待检测物的复合物反应；第三包被槽23中的第三抗体/抗原-第三待检测物的复合物反应，形成第一抗体/抗原-第一待检测物-第一酶标抗体/抗原的复合物、第二抗体/抗原-第二待检测物-第二酶标抗体/抗原的复合物、第三抗体/抗原-第三待检测物-第三酶标抗体/抗原的复合物。同时，三种酶标抗体/抗原的混合物将未反应的全血样本从反应区2推至废液槽8。反应完后，化学发光测试仪自动关闭第一阀门31，防止液体倒流。

通过上述驱动系统自动推挤第二试剂槽5中的清洗液从第二阀门32进入反应区2，清洗管路中的酶标记抗体/抗原和反应区2中未反应的酶标记抗体/抗原和全血样本至废液槽8中，清洗完毕，关闭第二阀门32，防止液体倒流。

通过上述驱动系统自动推挤第三试剂槽6中的清洗液从第三阀门33进入反应区2，再次清洗微流道和反应区残留的酶标抗体/抗原至废液槽8，确保清洗过程可靠，清洗完毕后，关闭第三阀门33，防止液体倒流。

通过上述驱动系统自动推挤第四试剂槽7中的发光底物从第四阀门34进入反应区2中，与上述抗体/抗原-待检测物-酶标抗体/抗原的复合物中的酶进行催化反应，释放光信号，发光底物填满反应区2后，关闭第四阀门34，防止液体倒流。例如，发光底物与第一抗体/抗原-第一待检测物-第一酶标抗体/抗原的复合物中的酶进行催化反应，释放第一光信号；发光底物与第二抗体/抗原-第二待检测物-第二酶标抗体/抗原的复合物中的酶进行催化反应，释放第二光信号；第三抗体/抗原-第三待检测物-第三酶标抗体/抗原的复合物中的酶进行催化反应，释放第三光信号；上述三个光信号之间通过反应区2中各包被区之间的弯道隔离，避免了光串扰，通过化学发光测试仪检测第一光信号、第二光信号和第三光信号，得到全血样本中待检测第一待测物的浓度、待检测第二待测物的浓度、待检测第三待测物的浓度，实现全血样本的多项联检。

将所述微流控芯片插入化学发光测试仪中进行。

本发明实施例中，将上述化学发光测试仪的型号为corestar-100是申请人自行研制，已实现市售。

图2是本发明的全血样本多项联检的方法的流程图。

为了更好的说明本发明，下面通过具体实施例作进一步的解释说明。

实施例1

检测全血样本中的降钙素原(PCT)

在微流控芯片的反应区2中的任意一个包被槽包被有PCT抗体，在第一试剂槽4中装配有PCT酶标抗体试剂包，在第二试剂槽5和第三试剂槽6中装配有清洗液试剂包，在第四试剂槽7中装配有发光底物试剂包。将全血样本加入进样槽1后，将上述微流控芯片插入化学发光测试仪corestar-100中进行测试，得到全血样本中的PCT的浓度。

对比例1

将实施例1中的全血样本制备成血清样本后，将血清样本用罗氏电化学发光仪E411测试血清样本中的PCT浓度，得到血清样本中的PCT的浓度。

验证例1

将实施例1得到的全血样本中的PCT的浓度与对比例1得到的血清样本中的PCT的浓度进行比对，结果如图3所示。

图3为Corestar-100检测全血样本和罗氏E-411检测血清样本中PCT比对测试结果；

从图3可知，实施例1和对比例1测得的PCT浓度具有很好的临床一致性，线性相关系数r²＞0.99。

实施例2

微流控芯片的反应区2、第一试剂槽4、第二试剂槽5、第三试剂槽6第四试剂槽7的设置与实施例1相同。将实施例1中的全血样本制备成血清样本后，将血清样本加入进样槽1后，将上述微流控芯片插入化学发光测试仪corestar-100中进行测试，得到血清样本中的PCT的浓度。

验证例2

将实施例1得到的全血样本中的PCT的浓度与实施例2得到的血清样本中的PCT的浓度进行同源比对，结果如图4所示。

图4为Corestar-100检测同源全血-血清样本中PCT比对测试结果；

从图4可知，实施例1和实施例2测得的PCT浓度具有很好的临床一致性，线性相关系数r²＞0.99。

上述结果表明，全血样本与血清样本在本发明的微流控芯片中，通过化学发光测试仪corestar-100测得的PCT的浓度，无统计学差异。即本发明的微流控芯片即可用于全血样本的检测，也可用于血清样本的检测。

实施例3

心肌肌钙蛋白I(cTnI)/N末端脑钠肽(NT-proBNP)/D-二聚体(D-Dimer)的三项联检。

在微流控芯片的反应区2中的3个包被槽，分别包被有心肌肌钙蛋白I(cTnI)抗体、N末端脑钠肽(NT-proBNP)抗体和D-二聚体(D-Dimer)抗体，在第一试剂槽4中装配有cTnI酶标抗体、NT-proBNP酶标抗体、D-Dimer酶标抗体的三者混合的试剂包，在第二试剂槽5和第三试剂槽6中装配有清洗液试剂包，在第四试剂槽7中装配有发光底物试剂包。将全血样本加入进样槽1后，将上述微流控芯片插入化学发光测试仪corestar-100中进行测试，得到全血样本中的心肌肌钙蛋白I、N末端脑钠肽和D-二聚体的浓度。

对比例2

将实施例3中的全血样本制备成血浆样本后，将血浆样本用雅培化学发光仪i-1000SR测试心肌肌钙蛋白I(cTnI)的浓度，得到血浆样本中心肌肌钙蛋白I(cTnI)的浓度。

将上述血浆样本用罗氏电化学发光仪E411测试血浆样本中N末端脑钠肽(NT-proBNP)的浓度，得到血浆样本中N末端脑钠肽(NT-proBNP)的浓度。

将上述血浆样本用诺尔曼化学发光仪NRM411-S7测试血浆样本中D-二聚体(D-Dimer)的浓度，得到血浆样本中D-二聚体(D-Dimer)的浓度。

验证例3

将实施例3得到的全血样本中心肌肌钙蛋白I、N末端脑钠肽和D-二聚体的浓度与对比例2得到的血浆样本中心肌肌钙蛋白I、N末端脑钠肽和D-二聚体的浓度进行比对，结果如图5、图6和图7所示。

图5为Corestar-100检测全血样本和雅培i-1000SR检测血浆样本中cTnI比对测试结果；

图6为Corestar-100检测全血样本和罗氏E-411检测血浆样本中NT-proBNP比对测试结果；

图7为Corestar-100检测全血样本和诺尔曼NRM411-S7检测血浆样本中D-Dimer比对测试结果；

从图5可知，实施例3和对比例2测得的cTnI浓度具有很好的临床一致性，线性相关系数r²＞0.99；

从图6可知，实施例3和对比例2测得的NT-proBNP浓度具有很好的临床一致性，线性相关系数r²＞0.99；

从图7可知，实施例3和对比例2测得的D-Dimer浓度具有很好的临床一致性，线性相关系数r²＞0.99。

上述结果表明，将全血样本在本发明的微流控芯片中，通过化学发光测试仪corestar-100测得心肌肌钙蛋白I、N末端脑钠肽和D-二聚体的浓度，与雅培化学发光仪i-1000SR、罗氏电化学发光仪E411、诺尔曼化学发光仪NRM411-S7测得的肌肌钙蛋白I、N末端脑钠肽和D-二聚体的浓度，无统计学差异。

并且，本发明的微流控芯片在化学发光测试仪corestar-100上可实现心肌肌钙蛋白I、N末端脑钠肽和D-二聚体的三项联合测定，工作效率优于对比例2中的雅培化学发光仪i-1000SR、罗氏电化学发光仪E411、诺尔曼化学发光仪NRM411-S7，降低了检测成本，提高了工作效率。

实施例4

微流控芯片的反应区2、第一试剂槽4、第二试剂槽5、第三试剂槽6第四试剂槽7的设置与实施例3相同。将实施例3中的全血样本制备成血浆样本后，将血浆样本加入进样槽1后，将上述微流控芯片插入化学发光测试仪corestar-100中进行测试，得到血清样本中心肌肌钙蛋白I(cTnI)/N末端脑钠肽(NT-proBNP)/D-二聚体(D-Dimer)的浓度。

验证例4

将实施例3得到的全血样本中心肌肌钙蛋白I(cTnI)/N末端脑钠肽(NT-proBNP)/D-二聚体(D-Dimer)的浓度与实施例4得到的血浆样本中的心肌肌钙蛋白I(cTnI)/N末端脑钠肽(NT-proBNP)/D-二聚体(D-Dimer)的浓度进行同源比对，结果如图8、图9和图10所示。

图8为Corestar-100检测同源全血-血浆样本中cTnI比对测试结果；

图9为Corestar-100检测同源全血-血浆样本中NT-proBNP比对测试结果；

图10为Corestar-100检测同源全血-血浆样本中D-Dimer比对测试结果；

从图8可知，实施例3和实施例4测得的cTnI浓度具有很好的临床一致性，线性相关系数r²＞0.99；

从图9可知，实施例3和实施例4测得的NT-proBNP具有很好的临床一致性，线性相关系数r²＞0.99；

从图10可知，实施例3和实施例4测得的D-Dimer具有很好的临床一致性，线性相关系数r2＞0.99。

上述结果表明，将全血样本与血浆样本在本发明的微流控芯片中，通过化学发光测试仪corestar-100测得的心肌肌钙蛋白I(cTnI)/N末端脑钠肽(NT-proBNP)/D-二聚体(D-Dimer)的浓度，无统计学差异。即本发明的微流控芯片可用于全血样本的测试，也可用于血浆样本的测试，同时还能实现全血中多项待检测抗原或抗体的联检。

小结：本发明实施例提供的全血样本多项联检的微流控芯片可直接进样全血样本，即可测得全血样本中待检测抗体的浓度，无需分离血细胞，避免了现有技术中分离血细胞和稀释样本带来的结果偏差；加样量少，可实现少量全血样本的检测；微流控芯片结构简单，可控性高，保证检测结果准确可靠；还可实现全血样本中多项待检测抗原或抗体的联检，降低检测成本。

本发明提供的微流控芯片可用于全血样本、血清样本和血浆样本中的检测，检测结果无统计学差异。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种全血样本多项联检的微流控芯片，其特征在于，包括：芯片基体，所述芯片基体上设置有进样槽、多个试剂槽、与所述试剂槽对应设置的试剂阀门，以及通过微流道与所述试剂阀门连通的多个包被槽；其中，

所述进样槽通过管路连通其中一所述试剂阀门，进样的待测全血样本通过该试剂阀门流经所述包被槽；

所述试剂槽与所述试剂阀门对应连通，流入所述试剂阀门的试剂通过微流道依次流入所述包被槽，其中，所述试剂阀门根据所需试剂加入的顺序开启或关闭，所述试剂槽至少用于容置酶标抗体或发光底物；

多个所述包被槽用于包被不同抗原或捕获抗体，待测的全血样本与包被抗原或抗体、以及酶标抗原或抗体特异结合形成免疫复合物，免疫复合物中的酶可以催化发光底物产生光信号，实现全血样本的抗原或抗体多项联检。

2.根据权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，多个所述试剂槽在所述芯片基体并排设置，形成试剂区；

多个所述试剂阀门并排设置，形成阀门区；

多个所述包被槽并排设置，形成反应区；

其中，所述试剂槽、所述试剂阀门以及所述包被槽的排布方向相同。

3.根据权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述试剂区、所述试剂阀门与所述反应区在所述芯片基体上依次并列排布。

4.根据权利要求1或2所述的微流控芯片，其特征在于，所述试剂槽至少设置3个，分别用于容置酶标抗体或抗原、清洗液或发光底物；

所述试剂阀门至少设置3个，分别与所述试剂槽一一对应连通。

5.根据权利要求4所述的微流控芯片，其特征在于，用于容置清洗液的试剂槽设置两个，其中一个所述试剂槽用于容置备用清洗液。

6.根据权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述微流道包括主流道和多个分流道，其中，

主流道连接各所述包被槽；

多个所述分流道连接在多个所述试剂阀门与所述主流道之间。

7.根据权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述包被槽设置3个以上；相邻所述包被槽之间的微流道设置有弯道。

8.根据权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片还包括废液槽、通过微流道设置在多个所述包被槽之后，所述废液槽用于收集未反应的全血样本以及各试剂槽内流入所述微流道内的废液。

9.一种全血样本多项联检的方法，其特征在于，包括以下步骤：

构建一微流控芯片，所述微流控芯片包括多个包被槽，所述包被槽分别包被不同抗原或捕获抗体，并设置分别容纳有酶标抗体或抗原、清洗液及发光底物的试剂包；

待测全血样本由所述微流控芯片上的进样槽通过微流道流经多个包被槽，所述试剂包内的酶标抗体或抗原、清洗液和发光底物分别依次流经包被槽；

全血样本中的待检测物与包被抗体或抗原特异结合、再与流经的酶标抗体或抗原反应形成免疫复合物，免疫复合物中的酶再催化发光底物，释放光信号；

用化学发光测试仪检测光信号，得到全血样本中待检测物的多项待测数据。

10.一种全血样本多项联检的微流控系统，其特征在于，包括权利要求1-8任意一项所述微流控芯片。

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