CN115260212A - 3,5-双(亚苄基)-4-哌啶酮衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

3,5-双(亚苄基)-4-哌啶酮衍生物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了两例3,5‑双(亚苄基)‑4‑哌啶酮衍生物及其制备方法和应用。本发明所述衍生物的制备方法主要包括以下步骤：取生物素‑四聚乙二醇‑NHS酯和3,5‑双(亚苄基)‑4‑氟‑哌啶酮或3,5‑双(亚苄基)‑4‑硝基‑哌啶酮置于有机溶剂中，于加热或不加热条件下进行缩合反应，即得相应的目标化合物粗品。申请人的试验结果表明，本发明目标化合物的体内抗肿瘤活性与母体的抗肿瘤活性相当，但与母体相比，它们的毒副作用显著降低，有望用于抗肿瘤药物的制备。

Description

3,5-双(亚苄基)-4-哌啶酮衍生物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及3,5-双(亚苄基)-4-哌啶酮衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
姜黄素，由于其抗增殖和抗血管生成的特性，以及最小的毒性(Curcumindecreases cholangiocarcinogenesis in hamsters by suppressing inflammation-mediated molecular events related to multistep carcinogenesis.Internationaljournal of cancer,J.Int.Cancer 129(2011)88-100.)，作为一种可能的新型抗癌剂，已经引起了极大的关注。然而，因为姜黄素的水溶性差(Stability of curcumin in buffersolutions and characterization of its degradation products,J.Pharm.Biomed.Anal.15(12)(1997)1867–1876.)和快速代谢(Bioavailability ofcurcumin:problems and promises,Mol.Pharm.4(6)(2007)807–818.)使得其生物利用度有限。此外，姜黄素吸收率低、易分解和干扰其他药物(The dark side of curcumin,Int.J.Cancer 126(7)(2010)1771–1775)也成为姜黄素临床应用的障碍。最近，通过在β-二酮结构上引入哌啶酮连接和苯基上的氟取代，开发了一类新的姜黄素类似物—二亚芳基哌啶酮(DAP)(Synthesis and biological evaluation of novel curcumin analogs asanti-cancer and anti-angiogenesis agents.Bioorg Med Chem 2004；12:3871–83.)。当使用乳腺癌(EF24,a novel synthetic curcumin analog,induces apoptosis in cancercells via a redox-dependent mechanism.Anticancer Drugs2005；16:263–75.)、结肠癌(Diphenyl difluoroketone:a curcumin derivative with potent in vivo anticanceractivity.Cancer Res 2008；68:1962–9.)和卵巢上皮癌(EF24 induces G2/M arrest andapoptosis in cisplatin-resistant human ovarian cancer cells by increasingPTEN expression.J Biol Chem 2007；282:28609–18.)细胞系进行测试时，EF24(一种具有邻氟苯基的DAP化合物)在体外表现出有效的抗癌功效。随后的研究表明H-4073(一种对位氟化的变体)，在诱导对卵巢癌细胞的细胞毒性方面比EF24更有效(Evaluation of anovel class of fluorinated curcumin analogs for safe and targeted anticancertherapy(STAT).Free Radic Biol Med 2008；45:S56–7.)。但由于H-4073仍然存在水溶性较差、生物利用度低，毒副作用大等不足而限制了其应用。
为了改善水溶性差，毒副作用大等不足，本发明在3,5-双(亚苄基)-4-哌啶酮的结构基础上引入了生物素和聚乙二醇等结构，期望获得一种毒副作用小，溶解性好的前药，能够选择性进入癌细胞，再释放出活性小分子发挥抗肿瘤作用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供两例结构新颖、在保持抗肿瘤活性的同时毒副作用更小的3,5-双(亚苄基)-4-哌啶酮衍生物及其制备方法和应用
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
本发明所述的3,5-双(亚苄基)-4-哌啶酮衍生物为具有下述式(S-F)或式(S-NO2)所示结构的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003775600040000021
本发明提供的上述化合物的制备方法，主要包括以下步骤：
取生物素-四聚乙二醇-NHS酯(Biotin-PEG4-NHS ester)和下述式(MT-F)所示化合物或式(MT-NO2)所示化合物置于有机溶剂中，于加热或不加热条件下进行缩合反应，制得相应的目标化合物粗品；
Figure BDA0003775600040000022
上述制备方法中，涉及的式(MT-F)所示化合物为3,5-双(4-氟-亚苄基)-4-哌啶酮，涉及的式(MT-NO2)所示化合物3,5-双(4-硝基-亚苄基)-4-哌啶酮，它们均可参考现有文献(Almansour A I,Kumar R S,Beevi F,et al.Facile,regio-anddiastereoselective synthesis of spiro-pyrrolidine and pyrrolizine derivativesand evaluation of their antiproliferative activities[J].Molecules(Basel,Switzerland),2014,19(7):10033-10055.)进行制备。所述的生物素-四聚乙二醇-NHS酯可从市场上直接购买得到，其结构如下述式(S)所示：
Figure BDA0003775600040000031
在本申请中，式(MT-F)所示化合物即3,5-双(亚苄基)-4-氟-哌啶酮，也简称为MT-F或化合物MT-F；式(MT-NO2)所示化合物即3,5-双(亚苄基)-4-硝基-哌啶酮，也简称为MT-NO2或化合物MT-NO2；目标化合物之一的式(S-F)所示化合物，也简称为S-F或化合物S-F；另一目标化合物式(S-NO2)所示化合物，也简称为S-NO2或化合物S-NO2。
上述制备方法中，生物素-四聚乙二醇-NHS酯与式(MT-F)所示化合物的摩尔比，以及式(S)所示化合物与式(MT-NO2)所示化合物的摩尔比均为化学计量比，在实际的操作中，式生物素-四聚乙二醇-NHS酯，或者是式(MT-F)所示化合物或(MT-NO2)所示化合物均可以相对过量。
上述制备方法中，所述的有机溶剂为选自甲醇、乙醇、叔丁醇、乙二醇甲醚、二氯甲烷和氯仿中的一种或两种以上的组合。所述有机溶剂的用量以能够溶解参加反应的原料为宜，通常情况下，以1mmol的式(MT-F)所示化合物或式(MT-NO2)所示化合物为基准，所有参加反应的原料通常用10～30mL的有机溶剂来溶解。
上述制备方法中，优选可以在反应之前加入缩合剂。通过在反应之前加入缩合剂可以有效提高整个反应的产率。所述的缩合剂为现有技术中的常规选择或常规组合，具体可以是选自HATU、Et3N、DIPEA、HOBT、EDCI和TBTU中的一种或两种以上的组合，更优选是选自HATU(2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯)+DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)、HATU(2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯)+Et3N(三乙胺)、HOBT(1-羟基苯并三唑)+EDCI(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)+Et3N(三乙胺)、或者是TBTU(O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸)+DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)的组合。所述缩合剂的加入量通常为式(S)所示化合物摩尔量的1.2～2倍，优选为1.5～2倍。所述缩合剂优选用有机溶剂溶解后再加入到反应体系中。
上述制备方法中，反应在加热条件进行较不加热条件下能够获得更高的产率。优选反应在≥40℃的条件下进行，更优选是在45℃条件下进行。反应过程中采用TLC跟踪监测反应是否完全。根据申请人的经验，当反应在45℃条件下进行时，反应时间控制在24～48h较为适宜。
上述制备方法制得的是目标化合物的粗品，可采用现有常规的纯化方法对其进行纯化以提高目标化合物的纯度。在本申请中，优选采用薄层色谱法进行分离纯化以获得纯化后的目标化合物，分离纯化时以二氯甲烷和甲醇组成的混合溶剂为展开剂，其中二氯甲烷和甲醇的体积比优选为30～40：4，更优选为32：4。
本发明还包括上述化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用，更具体的是在制备抗结肠癌药物中的应用。
本发明进一步包括一种药物组合物，含有治疗上有效剂量的上述化合物或其药学上可接受的盐。所述药物组合物的剂型可以是药学上可接受的任意常规剂型，如颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊或注射剂等。
与现有技术相比，本发明提供了两例结构新颖的3,5-双(亚苄基)-4-哌啶酮衍生物及其制备方法。申请人的试验表明，这两例化合物对某些肿瘤细胞株具有显著的体外抑制活性；SW480的体内抗肿瘤活性试验结果表明，本发明目标化合物的体内抗肿瘤活性与母体的抗肿瘤活性相当，但与母体相比，本发明所述目标化合物的毒副作用显著降低，有望用于抗肿瘤药物的制备。此外，本发明所述目标化合物的制备方法简单、反应条件温和，成本低廉。
附图说明
图1为本发明实施例3制备的产物的高效液相色谱图。
图2为本发明实施例6制备的产物的高效液相色谱图。
图3和图4分别为给药过程中的各组裸鼠的体重变化曲线及肿瘤体积变化曲线。
图5为给药结束后各组裸鼠死亡数量排列图。
图6和图7分别为给药结束后各组裸鼠处死后摘除的肿瘤排列图和平均瘤重柱状图。
图8为MT-F的高效液相色谱图。
图9为S-F的高效液相色谱图。
图10为S-F组裸鼠给药12h后取血的血清的高效液相色谱图，其中(a)为放大图，(b)为原图，“*”标记为相同色谱条件下MT-F和S-F的出峰时间。
图11为S-F组裸鼠给药24h后取血的血清的高效液相色谱图，其中(a)为放大图，(b)为原图，“*”标记为相同色谱条件下MT-F和S-F的出峰时间。
图12为S-F组裸鼠给药48h后取血的血清的高效液相色谱图，其中(a)为放大图，(b)为原图，“*”标记为相同色谱条件下MT-F和S-F的出峰时间。
图13为MT-NO2的高效液相色谱图。
图14为S-NO2的高效液相色谱图。
图15为S-NO2组裸鼠给药12h后取血的血清的高效液相色谱图，其中(a)为放大图，(b)为原图，“*”标记为相同色谱条件下MT-NO2和S-NO2的出峰时间。
图16为S-NO2组裸鼠给药24h后取血的血清的高效液相色谱图，其中(a)为放大图，(b)为原图，“*”标记为相同色谱条件下MT-NO2和S-NO2的出峰时间。
图17为S-NO2组裸鼠给药48h后取血的血清的高效液相色谱图，其中(a)为放大图，(b)为原图，“*”标记为相同色谱条件下MT-NO2和S-NO2的出峰时间。
具体实施方式
为了更好的解释本发明的技术方案，下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1：MT-F的制备
Figure BDA0003775600040000051
称量1.0mmol的4-哌啶酮一水合物盐酸盐，加入30mL的冰醋酸溶解，再加入2.4mmol的对氟苯甲醛，通入0.5h的干燥HCl气体，常温反应24h，析出黄色沉淀，抽滤得到黄色固体。在所得黄色固体中加入饱和碳酸钾溶液和丙酮的混合溶液(1：1，体积比)，搅拌0.5h，抽滤得到MT-F。HRMS(m/z)(ESI):(C19H15F2NO)[M+H]+calcd for:312.1200,found:312.1188.
实施例2：MT-NO2的制备
Figure BDA0003775600040000052
称量1.0mmol的4-哌啶酮一水合物盐酸盐，加入30mL的冰醋酸溶解，再加入2.4mmol的对硝基苯甲醛，通入0.5h的干燥HCl气体，常温反应24h，析出黄色沉淀，抽滤得到黄色固体。在所得黄色固体中加入饱和碳酸钾溶液和丙酮的混合溶液(1：1，体积比)，搅拌0.5h，抽滤得到MT-NO2。HRMS(m/z)(ESI):(C19H15N3O5)[M+H]+calcd for:366.1090,found:366.1074.
实施例3：S-F的制备
称量1.0mmol的Biotin-PEG4-NHS ester、1.5mmol的HATU和2.0mmol的DIPEA，加入150ml的超干CH2Cl2，常温搅拌0.5h，再向反应液中加入0.83mmol的MT-F，搅拌条件下，于45℃加热回流反应48h，停止反应，低温旋干。残余物经TLC分离纯化(展开剂：V二氯甲烷：V甲醇＝32：4)，低温旋干，油泵抽干残余有机溶剂，得到黄色粉末状产物。产率：49.6％。经HPLC检测，产物的高效液相色谱图如图1所示，保留时间及面积等参数如下述表1所示，结果显示纯度为97.8％。
表1：
峰号 保留时间 面积 高度 浓度 浓度单位 标记 化合物名
1 2.591 1886 478 0.000
2 27.849 10537365 61665 0.000 V
3 29.670 3303 218 0.000
4 30.711 1034 102 0.000
5 32.394 2411 146 0.000 V
总计 1062349 62609
所得产物的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.81(d，J＝10.8Hz，2H)，7.45(ddd，J＝27.0，7.5，5.6Hz，4H)，7.21-7.13(m，4H)，6.88(t，J＝5.2Hz，1H)，6.28(s，1H)，5.41(s，1H)，4.89(s，2H)，4.77(s，2H)，4.50-4.46(m，1H)，4.31-4.27(m，1H)，3.67(t，J＝6.0Hz，2H)，3.58(d，J＝14.2Hz，12H)，3.51(d，J＝3.8Hz，2H)，3.48(d，J＝2.3Hz，2H)，3.45(dd，J＝9.5，4.7Hz，2H)，3.38-3.32(m，2H)，3.12(dd，J＝11.8，7.2Hz，1H)，2.88(dd，J＝12.8，4.8Hz，1H)，2.71(d，J＝12.8Hz，1H)，2.51(t，J＝6.0 Hz，2H)，2.19(t，J＝7.3Hz，2H)，1.43-1.37(m，2H)，1.23-1.19(m，2H).
1３C NMR(126MHz，CDCl3)δ186.37(s)，173.96(s)，170.27(s)，163.90(s)，162.46(s)，137.26(s)，136.65(s)，133.75-132.54(m)，132.51(s)，131.29(d，J＝14.7Hz)，130.63(s)，116.50(s)，116.38-116.06(m)，116.06-115.09(m)，71.05(s)，71.02-69.32(m)，69.32-68.08(m)，66.66(s)，65.97(s)，61.87(s)，60.28(s)，55.63(s)，46.68(s)，43.37(s)，40.67(s)，39.13(s)，35.86(s)，33.14(s)，28.16(d，J＝7.1Hz)，25.66(s).
HRMS(m/z)(ESI)：(C40H50F2N4O8S)[M+Na]+ calcd for：807.3215，found：807.3179.
因此，可以确定本实施例所得黄色粉末状产物为目标产物S-F，其结构式如下所示：
Figure BDA0003775600040000061
实施例4：S-F的制备
称量1.0mmol的Biotin-PEG4-NHS ester、1.0mmol的HATU和1.2mmol的DIPEA，加入150ml的超干CH2Cl2，常温搅拌0.5h，再向反应液中加入1mmol的MT-F，冰浴条件下搅拌反应48h，停止反应，低温旋干。残余物经TLC分离纯化(展开剂：V二氯甲烷∶V甲醇＝32∶4)，低温旋干，油泵抽干残余有机溶剂，得到黄色粉末状产物。产率：29.3％。
对本实施例所得产物采用高分辨质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱等进行结构表征，确定本实施例所得产物为S-F。
实施例5：S-F的制备
称量1.0mmol的Biotin-PEG4-NHS ester、1.2mmol的HATU和1.5mmol的DIPEA，加入150ml的超干CH2Cl2，常温搅拌0.5h，再向反应液中加入1mmol的MT-F，常温条件下搅拌反应48h，停止反应，低温旋干。残余物经TLC分离纯化(展开剂：V二氯甲烷∶V甲醇＝32∶4)，低温旋干，油泵抽干残余有机溶剂，得到黄色粉末状产物。产率：35.6％
对本实施例所得产物采用高分辨质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱等进行结构表征，确定本实施例所得产物为S-F。
实施例6：S-NO2的制备
称量1.0mmol的Biotin-PEG4-NHS ester、1.5mmol的HATU和2.0mmol的DIPEA，加入150ml的超干CH2Cl2，常温搅拌0.5h，再向反应液中加入0.83mmol的MT-NO2，45℃加热回流，并不断搅拌48h，停止反应，低温旋干。通过TLC分离提纯(展开剂：V二氯甲烷∶V甲醇＝32∶4)，低温旋干，油泵抽干残余有机溶剂。产率：49.8％。经HPLC检测，产物的高效液相色谱图如图2所示，保留时间及面积等参数如下述表2所示，结果显示纯度为99.2％。
表2：
峰号 保留时间 面积 高度 浓度 浓度单位 标记 化合物名
1 2.591 1866 478 0.000
2 27.849 1053736 61665 0.000 V
3 29.670 3303 218 0.000
4 30.711 1034 102 0.000
5 32.394 2411 146 0.000 V
总计 1062349 62609
所得产物的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.33(d，J＝7.8Hz，4H)，7.85(s，4H)，7.78(d，J＝11.5Hz，2H)，6.40(d，J＝28.8Hz，3H)，4.90(s，2H)，4.85(s，2H)，4.31-4.27(m，1H)，4.11(s，1H)，3.51-3.42(m，12H)，3.16(d，J＝5.3Hz，2H)，3.08(s，2H)，2.80(dd，J＝12.1，4.7Hz，2H)，2.56(d，J＝12.5Hz，2H)，2.48-2.44(m，2H)，2.04(t，J＝6.9Hz，2H)，1.58(s，1H)，1.32-1.27(m，2H)，1.24(d，J＝11.6Hz，2H)，1.09(s，2H).
13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ172.09(s)，162.68(s)，147.36(s)，135.49-133.33(m)，123.76(d，J＝17.5Hz)，71.08-69.27(m)，69.14(s)，66.40(s)，61.02(s)，59.18(s)，55.41(s)，46.34(s)，38.60-30.91(m)，32.47(s)，32.47(s)，28.11(d，J＝19.8Hz)，25.25(s).
HRMS(m/z)(ESI)：(C40H50N6O12S)[M+Na]+ calcd for：861.3105，found：861.3089.
因此，可以确定本实施例所得黄色粉末状产物为目标配合物S-NO2，其结构如下式所示：
Figure BDA0003775600040000081
实施例7：S-NO2的制备
重复实施例6，不同的是，溶剂改为超干乙醇，缩合剂中的HATU用TBTU代替，反应改在冰浴条件下进行，反应时间为72h。产率为32.6％。
对本实施例所得产物采用高分辨质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱等进行结构表征，确定本实施例所得产物为目标化合物S-NO2。
实施例8：S-NO2的制备
重复实施例6，不同的是，溶剂改为超干乙二醇甲醚，缩合剂中的DIPEA用Et3N代替。产率为38.7％。
对本实施例所得产物采用高分辨质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱等进行结构表征，确定本实施例所得产物为目标化合物S-NO2。
实施例9：S-NO2的制备
重复实施例6，不同的是，溶剂改为超干甲醇，缩合剂仅使用HATU。产率为19.4％。
对本实施例所得产物采用高分辨质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱等进行结构表征，确定本实施例所得产物为目标化合物S-NO2。
实施例10：S-NO2的制备
重复实施例6，不同的是，溶剂改为超干氯仿，不添加缩合剂，反应改在40℃条件下进行。产率为6.8％。
对本实施例所得产物采用高分辨质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱等进行结构表征，确定本实施例所得产物为目标化合物S-NO2。
实验例1：脂水分配系数的测定
用摇瓶法测定了化合物MT-F、MT-NO2、S-F和S-NO2的正辛醇/水分配系数(logPo/w)。方法如下：取一定量的化合物，用正辛醇将其溶解，并处于一种饱和的状态，再向其中加入等量的去离子水，放置恒温摇床中，摇至24h，摇完毕后，静置12h，分别将油水两层小心分开，再将两层分别用紫外分光光度计测量其吸光度。实验结果如下述表3所示。
表3：化合物的logPo/w
Figure BDA0003775600040000091
由表1中数据可知，在MT-F或MT-NO2的结构基础上引入聚乙二醇，可以增加它们的亲水性。四种化合物的logPo/w顺序为S-F<S-NO2<MT-NO2<MT-F。
实验例2：体外抗肿瘤活性实验：
进行实验的化合物：MT-F、MT-NO2、S-F和S-NO2，以盐酸阿霉素(Dox)为参比。
使用的肿瘤细胞株：A549(人非小细胞肺癌细胞)、A549/DDP(人肺癌耐顺铂株)、SW480(人结肠癌细胞)、T24(人膀胱癌细胞)、MDA-MB-231(人乳腺癌细胞)、MIA-PACA-2(人胰腺癌细胞)、MGC-803(人胃腺癌细胞)和HUV-EC-C(人脐静脉血管内皮细胞)。
采用MTT法测试化合物的体外抗肿瘤活性。取处于对数生长期的细胞，每孔180μL(约6000-7000个细胞)含细胞的培养基接种于96孔培养板，于37℃、5％CO2充分湿化条件下培养24h。待细胞贴壁后，按每孔20μL的量加入样品,每个样品设5个复孔，同时设定相应的空白对照。继续培养48h后，每孔加入10μL MTT试剂(浓度为5mg/mL)，继续孵育4h后，吸弃上清液，每孔再加入150μL DMSO，轻微震荡反应5～8min，使结晶颗粒充分溶解。空白对照组调零，用酶标仪以490nm波长测定去除本底光吸收值后的吸光度值(
Figure BDA0003775600040000093
值)，计算细胞增殖抑制率，对初筛抗肿瘤效果好的受试化合物，继续用5个浓度梯度继续做相应细胞株的IC50值，所有实验均重复3次后取平均值。实验结果如下述表4所示。
表4：化合物对不同肿瘤细胞株的半抑制率浓度(IC50，μM)
Figure BDA0003775600040000092
由表2中数据可知，本发明所述化合物S-F和S-NO2对SW480的活性显著优于阳性药盐酸阿霉素，而S-NO2对A549/DDP的活性显著优于其母体和阳性药盐酸阿霉素。
实验例3：化合物对SW480的体内抗肿瘤活性实验
进行实验的化合物：MT-F、MT-NO2、S-F和S-NO2，以盐酸阿霉素(Dox)为参比。
实验方法：申请人先通过皮下注射在裸鼠腋下种植SW480，待肿瘤大小长至100～150mm3时，再进行分组，分八组(空白组(control，10％DMSO+40％Saline+50％PEG300，注射体积0.2mL。)、MT-F组(5mg/kg)、MT-NO2组(5mg/kg)、S-F低剂量组(13mg/kg)、S-F高剂量组(26mg/kg)、S-NO2低剂量组(12mg/kg)、S-NO2高剂量组(24mg/kg)、Dox组(2mg/kg))，每组八只裸鼠。采用腹腔注射的给药方式，隔天给药，给药体积0.2mL，给药21天，给药过程中隔天记录裸鼠的体重及肿瘤大小。给药结束后，采用脊柱脱臼法将裸鼠处死，刨出肿瘤、心、肝、脾、肾、肺。称量肿瘤的重量，计算出目标化合物的抑瘤率。组织用4％组织固定液固定，后续用来做病理实验。
给药过程中的各组裸鼠的体重变化曲线及肿瘤体积变化曲线分别如图3和图4所示，记录的各组肿瘤体积(用游标卡尺测量肿瘤的长轴与短轴，V＝1/2×ab2(a为长轴，b为短轴)mm3)，如下述表5所示：
表5：
Figure BDA0003775600040000101
给药21天后各组裸鼠死亡数量排列图如图5所示，其中给药24h后，MT-F组和MT-NO2组两个母体组的裸鼠各毒死三只，剩余五只裸鼠体重呈现下降的趋势，而S-F组和S-NO2组无死亡，体重平稳，显著降低了母体的毒副作用。
给药结束后，各组裸鼠处死后摘除的肿瘤排列图如图6所示，各组裸鼠的平均瘤重柱状图如图7所示。
实验结果表明，S-F和S-NO2均大大降低了母体MT-F和MT-NO2的毒性，给药24h后，MT-F组和MT-NO2组两个母体组的裸鼠各毒死三只，剩余五只裸鼠体重呈现下降的趋势，S-F组和S-NO2组无死亡，体重平稳。并且S-F组和S-NO2组保持了与母体相当的抗肿瘤活性。阳性药(盐酸阿霉素)组抗肿瘤活性优于S-F组和S-NO2组，但是毒性较大，给药21天后，仅剩三只裸鼠存活，且体重呈现下降趋势。
实验例4：本发明目标化合物药代动力学实验
S-F组和S-NO2组给药12h、24h、48h后，眼球取血，常温放置0.5～1h后，4000r/min，4℃离心15min，取上清液100μL，再加入300μL HPLC级的甲醇，涡旋2min，4000r/min，4℃离心10min，取上清液，氮气吹干，再加入30μL HPLC级的甲醇，吸取20μL，在30min内甲醇比例从30％到90％，30～60min保持90％甲醇、10％水的色谱条件下洗脱。实验结果表明S-F在给药12h后就分解出MT-F，S-NO2在给药24h后分解出MT-SO2，S-F相比于S-NO2，在动物体内更容易释放出活性分子。
图8和图9分别给出了MT-F和S-F的高效液相色谱图，图13和图14分别为MT-NO2和S-NO2的高效液相色谱图。
实验结果如图10～12以及图15～17所示，其中，S-F组裸鼠给药12h、24h、48h后取血的血清的高效液相色谱图分别如图10、图11和图12所示；S-NO2组裸鼠给药12h、24h、48h后取血的血清的高效液相色谱图分别如图15、图16和图17所示。
以上结果表明，本发明所述目标化合物作为一种前药进入动物体内后，缓慢释放出活性小分子发挥抗肿瘤活性，S-F进入老鼠体内12h后释放出MT-F，S-NO2进入老鼠体内24h后释放出MT-NO2，结合体内抗肿瘤活性实验结果来看，不仅降低了二亚芳基哌啶酮的毒副作用，同时保持了二亚芳基哌啶酮的抗肿瘤活性。

Claims (10)

1.下述式(S-F)或式(S-NO2)所示化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003775600030000011
2.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征是，主要包括以下步骤：
取生物素-四聚乙二醇-NHS酯和下述式(MT-F)所示化合物或式(MT-NO2)所示化合物置于有机溶剂中，于加热或不加热条件下进行缩合反应，制得相应的目标化合物粗品；
Figure FDA0003775600030000012
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，在反应之前加入缩合剂。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，所述的缩合剂为选自HATU、Et3N、DIPEA、HOBT、EDCI和TBTU中的一种或两种以上的组合。
5.根据权利要求2～4中任一项所述的制备方法，其特征是，所述的有机溶剂为选自甲醇、乙醇、叔丁醇、乙二醇甲醚、二氯甲烷和氯仿中的一种或两种以上的组合。
6.根据权利要求2～4中任一项所述的制备方法，其特征是，还包括对制得的目标化合物粗品进行纯化的步骤。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征是，采用薄层色谱法进行分离纯化。
8.权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征是，在制备抗结肠癌药物中的应用。
10.一种药物组合物，含有治疗上有效剂量的权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐。
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