CN115215879B - 3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种3‑芳基‑4，5‑吡喃香豆素衍生物，该衍生物具有式Ⅰ所示的结构，本发明公开了一种3‑芳基‑4，5‑吡喃香豆素衍生物的制备方法，包括：将2，4，6‑三羟基苯甲酸甲酯、3，3‑二甲基丙烯酸、多聚磷酸混合反应，经提纯得到中间产物A；将中间产物A、苯乙酸取代物、醋酸酐、三乙胺混合反应，经提纯得到角型3‑芳基‑4，5‑吡喃香豆素；将角型3‑芳基‑4，5‑吡喃香豆素和硼氢化钠混合反应，经提纯得到目标化合物I，该制备方法具有提供结构新颖的3‑芳基‑4，5‑吡喃香豆素衍生物的有益效果。本发明公开了3‑芳基‑4，5‑吡喃香豆素衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

Description

3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及有机合成技术领域。更具体地说，本发明涉及一种3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
香豆素是由顺式邻羟基桂皮酸脱水所形成的内酯，其主要广泛存在于伞形科植物中，自上世纪中期开始就出现关于香豆素衍生物的抗癌研究，香豆素衍生物表现出良好的抗癌、抗菌、抗氧化、抗病毒、抑制酪氨酸等药理活性。研究发现，香豆素母核及其母核上的取代基对于细胞毒性是关键基团，香豆素母核经过结构修饰后具有良好的抗癌活性。
吡喃香豆素是指其母核(苯骈-α-吡喃酮)7位碳上的羟基与6位或8位碳上取代的异戊烯基缩合形成的吡喃环的化合物，而极少有碳5、碳6环合的吡喃香豆素，因此，碳5、碳6环合的吡喃香豆素衍生物可能具有潜在的抗肿瘤活性。目前，吡喃香豆素的研究取得一定的进展，但由于合成方法的限制，其结构的多样性、药理机制以及构效关系的研究受到一定的阻碍。因此，如何设计吡喃香豆素衍生物的制备方法，以获得结构新颖的吡喃香豆素衍生物及其应用是值得深思的。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物，具有式I所示结构：
当R3为氢时，R1、R2、R4均为氟；或，
当R2、R3均为氢时，R1、R4均为亚甲二氧基；或，
当R1、R2均为氢时，R3、R4均为三氟甲基；或，
当R3、R4均为氢时，R1、R2均为氯；或，
当R2、R3、R4均为氢时，R1为甲氧基、甲基、羟基、氟、氯、溴、三氟甲基的任意一种。
提供一种3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将2，4，6-三羟基苯甲酸甲酯、3，3-二甲基丙烯酸、多聚磷酸混合，然后加入无水二噁烷，进行回流搅拌反应，反应结束后分离纯化得到中间产物A；
步骤二、将中间产物A、苯乙酸取代物、醋酸酐混合，加热至80～100℃，再加入三乙胺升温至120～160℃，在氮气保护下进行回流搅拌反应，反应结束后加水猝灭反应，分离纯化得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素；
步骤三、将角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素、硼氢化钠和甲醇混合，控制温度为0～5℃进行搅拌反应，反应结束后加入盐酸溶液淬灭反应，分离纯化得到目标化合物I。
优选的是，步骤二中的所述苯乙酸取代物为2，4，5-三氟苯乙酸、3，4-亚甲基二氧苯乙酸、3，5-双(三氟甲基)苯乙酸、2，4-二氯苯乙酸、4-甲氧基苯乙酸、对甲基苯乙酸、 4-乙酰氧基苯乙酸、4-氟苯乙酸、4-氯苯乙酸、4-溴苯乙酸、4-(三氟甲基)苯乙酸中的任意一种。
优选的是，步骤三中的有机溶剂为乙酸乙酯、四氯化碳、氯仿、石油醚中的一种。
优选的是，步骤一中的2，4，6-三羟基苯甲酸甲酯、3，3-二甲基丙烯酸、多聚磷酸的摩尔比为1:2～3:0.5～3，回流搅拌反应的反应温度为60～100℃，反应时间为3～10h，所述分离纯化具体操作为：反应结束后加入饱和碳酸钾溶液调节溶液pH至中性，过滤，取固体，在丙酮中重结晶得到中间产物A。
优选的是，步骤二中的中间产物A、苯乙酸取代物、醋酸酐、三乙胺的摩尔比为 1:1～2:30～40:1～2，回流搅拌反应的反应时间为5～12h，所述分离纯化具体操作为：用有机溶剂萃取，取有机相层，将有机相层干燥，过滤，滤液浓缩得到混合物，将混合物经柱层析分离纯化得角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素。
优选的是，步骤三中的角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素、硼氢化钠的摩尔比为1:5～8，搅拌反应的反应时间为2～8h，所述分离纯化具体操作为：用有机溶剂萃取，取有机相层，有机相层依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，取有机相层，干燥、过滤、滤液浓缩，在甲醇中重结晶得到目标化合物I。
提供一种抗肿瘤药物，包括所述3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物。
提供一种3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
提供一种3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物在制备抗白血病药物中的应用。
本发明至少包括以下有益效果：
第一、本发明提供了一种结构新颖的3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物，3-芳基-4，5- 吡喃香豆素衍生物的制备方法选择性高且收率高、底物适用性广、操作简便、副产物少、便于分离提纯、可适用于较大规模的制备，具有可观的应用前景。
第二、本发明提供的3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物具有优异的抗肿瘤活性，其中对白血病细胞株HL-60具有较好的体外抑制增殖作用，IC50值达到18.81±0.75μΜ。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
图1为本发明的所述3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物制备方法的合成路线图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
<实施例1>
步骤一、将10mmol 2，4，6-三羟基苯甲酸甲酯、22mmol 3，3-二甲基丙烯酸、10mmol多聚磷酸混合，然后加入40mL无水二噁烷，在95℃搅拌回流反应10h，反应结束后加入饱和碳酸钾溶液调节溶液pH至中性，过滤，取固体，在丙酮中重结晶得到中间产物A，即2，2-二甲基-5，7-二羟基-4-氧代-2，3-二氢苯并吡喃-6-甲酸甲酯：
产率：90％，中间产物A为淡黄色晶体，中间产物A通过熔点测定实验得到熔点为：140.6-144.1℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C13H14O6：267.08，实测值：267.32；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(600MHz,CDCl3) δ14.02(s,1H,7-OH),12.67(s,1H,5-OH),5.99(s,1H,H-8),3.99(s,3H,-OCH3),2.74(s,2H,H-3),1.48(s,6H,2-2×CH3)；
步骤二、将1mmol步骤一中的中间产物A、1mmol4-甲氧基苯乙酸和40mmol醋酸酐、40mmol醋酸酐混合，加热至100℃，再加入1.5mmol三乙胺升温至150℃，在氮气保护下150℃回流搅拌反应12h，反应结束后加30mL水猝灭反应，然后用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩得到混合物，将混合物采用石油醚与乙酸乙酯体积比为4:1的硅胶柱层析分离纯化得到角型3-芳基-4，5- 吡喃香豆素a，即2”，2”-二甲基-3-(4'-甲氧基苯基)-7-乙酰氧基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：40％，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素a为黄色固体，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素a通过熔点测定实验得到熔点为：193.5-194.2℃；通过高分辨电喷雾电离质谱 (HRMS-ESI:m/z[M+Na]+)得到计算值C23H21O8：461.1315，实测值：461.1193；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.23(d,J＝8.0Hz,2H,H-2′,6′), 6.99(d,J＝7.7Hz,2H,H-3′,5′),6.55(s,1H,H-6),3.96(s,3H,13-OCH3),3.86(s,3H, 4′-OCH3),2.77(s,2H,H-3″),2.32(s,3H,12-CH3),1.36(s,6H,2″-2×CH3)；
步骤三、将8mmol步骤二中的角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素a、40mmol硼氢化钠、40mL甲醇混合，于0℃环境下搅拌反应8h，反应后加入20mL 5％盐酸溶液猝灭反应，用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，取上层有机相层，经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩，在甲醇中重结晶得到化合物1a，即2”，2”-二甲基-3-(4'-甲氧苯基)-7-羟基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：75％，化合物1a为白色针晶，化合物1a通过熔点测定实验得到熔点为：235.5-237.2℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C22H20O7：397.1209，实测值：397.1277；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.21(s,1H,7-OH),7.25(d,J＝8.6Hz,2H,H-2′,6′),7.00(d,J＝8.6Hz,2H,H-3′,5′), 6.37(s,1H,H-6),4.06(s,3H,11-OCH3),3.87(s,3H,4′-OCH3),2.77(s,2H,H-3″),1.36(s,6H, 2″-2×CH3)。
<实施例2>
步骤一、将10mmol 2，4，6-三羟基苯甲酸甲酯、22mmol 3，3-二甲基丙烯酸、10mmol多聚磷酸混合，然后加入40mL无水二噁烷，在95℃搅拌回流反应10h，反应结束后加入饱和碳酸钾溶液调节溶液pH至中性，过滤，取固体，在丙酮中重结晶得到中间产物A，即2，2-二甲基-5，7-二羟基-4-氧代-2，3-二氢苯并吡喃-6-甲酸甲酯：
产率：90％，中间产物A为淡黄色晶体，中间产物A通过熔点测定实验得到熔点为：140.6-144.1℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C13H14O6：267.08，实测值：267.32；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(600MHz,CDCl3) δ14.02(s,1H,7-OH),12.67(s,1H,5-OH),5.99(s,1H,H-8),3.99(s,3H,-OCH3),2.74(s,2H,H-3),1.48(s,6H,2-2×CH3)；
步骤二、将1mmol步骤一中的中间产物A、1mmol 4-甲基苯乙酸、40mmol醋酸酐混合，加热至100℃，再加入1.5mmol三乙胺升温至150℃，在氮气保护下150℃回流搅拌反应12h，反应结束后加30mL水猝灭反应，然后用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩得到混合物、将混合物采用石油醚与乙酸乙酯体积比为4:1的硅胶柱层析分离纯化得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素b，即2”，2”-二甲基-3-(4'-甲基苯基)-7-乙酰氧基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：42％，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素b为白色固体，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素b通过熔点测定实验得到熔点为：223.2-224.5℃；通过高分辨电喷雾电离质谱 (HRMS-ESI:m/z[M+Na]+)得到计算值C24H22O7：445.1366，实测值：445.12476；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.27(d,J＝7.0Hz,2H,H-2′, 6′),7.18(d,J＝7.5Hz,2H,H-3′,5′),6.54(s,1H,H-6),3.96(s,3H,13-OCH3),2.76(s,2H, H-3″),2.41(s,3H,4′-CH3),2.32(s,3H,12-CH3),1.35(s,6H,2″-2×CH3)；
步骤三、将8mmol步骤二中的角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素b、40mmol硼氢化钠、40mL甲醇混合，于0℃环境下搅拌反应8h，反应后加入20mL 5％盐酸溶液猝灭反应，用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，取上层有机相层，经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩，在甲醇中重结晶得到化合物1b，即2”，2”-二甲基-3-(4'-甲基苯基)-7-羟基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：65％，化合物1b为白色单晶，化合物1b通过熔点测定实验得到熔点为：226.3-227.1℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C22H20O6：381.1260，实测值：381.1332；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.23(s,1H,7-OH),7.28(d,J＝4.0Hz,2H,H-2′,6′),7.21(d,J＝8.1Hz,2H,H-3′,5′),6.38(s,1H,H-6),4.07(s,3H,11-OCH3),2.76(s,2H,H-3″),2.43(s,3H,4′-CH3),1.37(s, 6H,2″-2×CH3)。
<实施例3>
步骤一、将10mmol 2，4，6-三羟基苯甲酸甲酯、22mmol 3，3-二甲基丙烯酸、10mmol多聚磷酸混合，然后加入40mL无水二噁烷，在95℃搅拌回流反应10h，反应结束后加入饱和碳酸钾溶液调节溶液pH至中性，过滤，取固体，在丙酮中重结晶得到中间产物A，即2，2-二甲基-5，7-二羟基-4-氧代-2，3-二氢苯并吡喃-6-甲酸甲酯：
产率：90％，中间产物A为淡黄色晶体，中间产物A通过熔点测定实验得到熔点为：140.6-144.1℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C13H14O6：267.08，实测值：267.32；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(600MHz,CDCl3) δ14.02(s,1H,7-OH),12.67(s,1H,5-OH),5.99(s,1H,H-8),3.99(s,3H,-OCH3),2.74(s,2H,H-3),1.48(s,6H,2-2×CH3)；
步骤二、将1mmol步骤一中的中间产物A、1mmol 4-氟苯乙酸、40mmol醋酸酐混合，加热至100℃，再加入1.5mmol三乙胺升温至150℃，在氮气保护下150℃回流搅拌反应12h，反应结束后加30mL水猝灭反应，然后用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩得到混合物，将混合物采用石油醚与乙酸乙酯体积比为4:1的硅胶柱层析分离纯化得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素c，即2”， 2”-二甲基-3-(4'-氟苯基)-7-乙酰氧基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：40％，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素c为白色针晶，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素c通过熔点测定实验得到熔点为：207.7-208.5℃；通过高分辨电喷雾电离质谱 (HRMS-ESI:m/z[M+Na]+)得到计算值C23H19FO7：449.1115，实测值：449.0996；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.27(d,J＝8.0Hz,2H,H-2′, 6′),7.15(t,J＝8.2Hz,2H,H-3′,5′),6.56(s,1H,H-6),3.96(s,3H,13-OCH3),2.74(s,2H, H-3″),2.32(s,3H,12-CH3),1.37(s,6H,2″-2×CH3)；
步骤三、将8mmol步骤二中的角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素c、40mmol硼氢化钠、40mL甲醇混合，于0℃环境下搅拌反应8h，反应后加入20mL 5％盐酸溶液猝灭反应，用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，取上层有机相层，经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩，在甲醇中重结晶得到化合物1c，即2”，2”-二甲基-3-(4'-氟苯基)-7-羟基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：68％，化合物1c为白色固体，化合物1c通过熔点测定实验得到熔点为：295.1-295.6℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值 C21H17FO6：385.1009，实测值：385.1100；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR (400MHz,CDCl3)δ12.28(s,1H,7-OH),7.60(d,J＝8.3Hz,2H,H-2′,6′),7.25(d,J＝8.3Hz, 2H,H-3′,5′),6.38(s,1H,H-6),4.07(s,3H,11-OCH3),2.75(s,2H,H-3″),1.38(s,6H, 2″-2×CH3)。
<实施例4>
步骤一、将10mmol 2，4，6-三羟基苯甲酸甲酯、22mmol 3，3-二甲基丙烯酸、10mmol多聚磷酸混合，然后加入40mL无水二噁烷，在95℃搅拌回流反应10h，反应结束后加入饱和碳酸钾溶液调节溶液pH至中性，过滤，取固体，在丙酮中重结晶得到中间产物A，即2，2-二甲基-5，7-二羟基-4-氧代-2，3-二氢苯并吡喃-6-甲酸甲酯：
产率：90％，中间产物A为淡黄色晶体，中间产物A通过熔点测定实验得到熔点为：140.6-144.1℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C13H14O6：267.08，实测值：267.32；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(600MHz,CDCl3) δ14.02(s,1H,7-OH),12.67(s,1H,5-OH),5.99(s,1H,H-8),3.99(s,3H,-OCH3),2.74(s,2H,H-3),1.48(s,6H,2-2×CH3)；
步骤二、将1mmol骤一中的中间产物A、1mmol4-溴苯乙酸和40mmol醋酸酐、40 mmol醋酸酐混合，加热至100℃，再加入1.5mmol三乙胺升温至150℃，在氮气保护下 150℃回流搅拌反应12h，反应结束后加30mL水猝灭反应，然后用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩得到混合物，将混合物采用石油醚与乙酸乙酯体积比为4:1的硅胶柱层析分离纯化得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素d，即2”，2”-二甲基-3-(4'-溴苯基)-7-乙酰氧基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：40％，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素d为白色针晶，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素d通过熔点测定实验得到熔点为：221.6-222.8℃；通过高分辨电喷雾电离质谱 (HRMS-ESI:m/z[M+Na]+)得到计算值C23H19BrO7：509.0314，实测值：509.0204；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.59(d,J＝7.7Hz,2H,H-2′, 6′),7.17(d,J＝7.6Hz,2H,H-3′,5′),6.56(s,1H,H-6),3.96(s,3H,13-OCH3),2.74(s,2H, H-3″),2.32(s,3H,12-CH3),1.36(s,6H,2″-2×CH3)；
步骤三、将8mmol步骤二中的角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素d、40mmol硼氢化钠、40mL甲醇混合，于0℃环境下搅拌反应8h，反应后加入20mL 5％盐酸溶液猝灭反应，用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，取上层有机相层，经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩，在甲醇中重结晶得到化合物1d，即2”，2”-二甲基-3-(4'-溴苯基)-7-羟基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：68％，化合物1d为白色固体，化合物1d通过熔点测定实验得到熔点为：233.2-235.0℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C21H17BrO6：445.0209，实测值：445.0277；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.25(s,1H,7-OH),7.59(d,J＝8.2Hz,2H,H-2′,6′),7.20(d,J＝8.2Hz,2H,H-3′,5′),6.37(s,1H,H-6),4.05(s,3H,11-OCH3),2.73(s,2H,H-3″),1.36(s,6H, 2″-2×CH3)。
<实施例5>
步骤一、将10mmol 2，4，6-三羟基苯甲酸甲酯、22mmol 3，3-二甲基丙烯酸、10mmol多聚磷酸混合，然后加入40mL无水二噁烷，在95℃搅拌回流反应10h，反应结束后加入饱和碳酸钾溶液调节溶液pH至中性，过滤，取固体，在丙酮中重结晶得到中间产物A，即2，2-二甲基-5，7-二羟基-4-氧代-2，3-二氢苯并吡喃-6-甲酸甲酯：
产率：90％，中间产物A为淡黄色晶体，中间产物A通过熔点测定实验得到熔点为：140.6-144.1℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C13H14O6：267.08，实测值：267.32；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(600MHz,CDCl3) δ14.02(s,1H,7-OH),12.67(s,1H,5-OH),5.99(s,1H,H-8),3.99(s,3H,-OCH3),2.74(s,2H,H-3),1.48(s,6H,2-2×CH3)；
步骤二、将1mmol步骤一中的中间产物A、1mmol3，4-亚甲二氧基苯乙酸和40mmol醋酸酐、40mmol醋酸酐混合，加热至100℃，再加入1.5mmol三乙胺升温至150℃，在氮气保护下150℃回流搅拌反应12h，反应结束后加30mL水猝灭反应，然后用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩得到混合物，将混合物采用石油醚与乙酸乙酯体积比为4:1的硅胶柱层析分离纯化得到角型3-芳基 -4，5-吡喃香豆素e，即2”，2”-二甲基-3-(3'，4'-亚甲二氧基苯基)-7-乙酰氧基-2”H，3”H-4， 5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：40％，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素e为浅黄色固体，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素e通过熔点测定实验得到熔点为：210.8-211.7℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C24H20O9：453.1180，实测值：453.1178；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.28(s,1H,H-6′),6.90(d,J＝8.0 Hz,1H,H-2′),6.80(d,J＝1.6Hz,1H,H-3′),6.56(s,1H,H-6),6.04(s,2H,H-7′),3.97(s,3H, 13-OCH3),2.33(s,3H,12-CH3),2.19(s,2H,H-3″),1.38(s,6H,2″-2×CH3)；
步骤三、将8mmol步骤二中的角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素e、40mmol硼氢化钠、40mL甲醇混合，于0℃环境下搅拌反应8h，反应后加入20mL 5％盐酸溶液猝灭反应，用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，取上层有机相层，经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩，在甲醇中重结晶得到化合物1e，即2”，2”-二甲基-3-(3'，4'-亚甲二氧基苯基)-7-羟基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：71％，化合物1e为橙色晶体，化合物1e通过熔点测定实验得到熔点为：236.7-237.2℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C22H18O8：411.1074，实测值：411.1069；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.23(s,1H,7-OH),6.90(d,J＝8.0Hz,1H,H-6′),6.81(d,J＝1.6Hz,1H,H-2′),6.73 (d,J＝1.7Hz,1H,H-3′),6.38(s,1H,H-6),6.04(s,2H,H-7′),4.07(s,3H,11-OCH3),2.76(s,2H, H-3″),1.38(s,6H,2″-2×CH3)。
<实施例6>
步骤一、将10mmol 2，4，6-三羟基苯甲酸甲酯、22mmol 3，3-二甲基丙烯酸、10mmol多聚磷酸混合，然后加入40mL无水二噁烷，在95℃搅拌回流反应10h，反应结束后加入饱和碳酸钾溶液调节溶液pH至中性，过滤，取固体，在丙酮中重结晶得到中间产物A，即2，2-二甲基-5，7-二羟基-4-氧代-2，3-二氢苯并吡喃-6-甲酸甲酯：
产率：90％，中间产物A为淡黄色晶体，中间产物A通过熔点测定实验得到熔点为：140.6-144.1℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C13H14O6：267.08，实测值：267.32；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(600MHz,CDCl3) δ14.02(s,1H,7-OH),12.67(s,1H,5-OH),5.99(s,1H,H-8),3.99(s,3H,-OCH3),2.74(s,2H,H-3),1.48(s,6H,2-2×CH3)；
步骤二、将1mmol步骤一中的中间产物A、1mmol4-乙酰氧基苯乙酸和40mmol醋酸酐、40mmol醋酸酐混合，加热至100℃，再加入1.5mmol三乙胺升温至150℃，在氮气保护下150℃回流搅拌反应12h，反应结束后加30mL水猝灭反应，然后用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩得到混合物，将混合物采用石油醚与乙酸乙酯体积比为4:1的硅胶柱层析分离纯化得到角型3-芳基-4， 5-吡喃香豆素f，即2”，2”-二甲基-3-(4'-乙酰氧基苯基)-7-乙酰氧基-2″H，3″-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：41％，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素f为白色固体，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素f通过熔点测定实验得到熔点为：176.8-178.9℃；通过高分辨电喷雾电离质谱 (HRMS-ESI:m/z[M+Na]+)得到计算值C25H22O9：489.1264，实测值：489.1143；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.32(d,J＝8.3Hz,2H,H-2′, 6″),7.19(d,J＝6.7Hz,2H,H-3′,5′),6.56(s,1H,H-6),3.96(s,3H,13-OCH3),2.78(s,2H, H-3″),2.34(s,3H,12-CH3),2.32(s,3H,8′-CH3),1.37(s,6H,2″-2×CH3)；
步骤三、将8mmol步骤二中的角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素f、40mmol硼氢化钠、40mL甲醇混合，于0℃环境下搅拌反应8h，反应后加入20mL 5％盐酸溶液猝灭反应，用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，取上层有机相层，经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩，在甲醇中重结晶得到化合物1f，即2”，2”-二甲基-3-(4'-羟基苯基)-7-羟基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：65％，化合物1f为白色固体，化合物1f通过熔点测定实验得到熔点为：162.2-163.6℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C21H18O7：383.1125，实测值：383.1119；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ12.21(s,1H,7-OH),7.16(d,J＝7.7Hz,2H,H-2′,6′),6.89(d,J＝8.0Hz,2H,H-3′,5′),6.37(s,1H,H-6),5.21(s,1H,4′-OH),4.05(s,3H,11-OCH3),2.74(s,2H,H-3″),1.35(s, 6H,2″-2×CH3)。
<实施例7>
步骤一、将10mmol 2，4，6-三羟基苯甲酸甲酯、22mmol 3，3-二甲基丙烯酸、10mmol多聚磷酸混合，然后加入40mL无水二噁烷，在95℃搅拌回流反应10h，反应结束后加入饱和碳酸钾溶液调节溶液pH至中性，过滤，取固体，在丙酮中重结晶得到中间产物A，即2，2-二甲基-5，7-二羟基-4-氧代-2，3-二氢苯并吡喃-6-甲酸甲酯：
产率：90％，中间产物A为淡黄色晶体，中间产物A通过熔点测定实验得到熔点为：140.6-144.1℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C13H14O6：267.08，实测值：267.32；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(600MHz,CDCl3) δ14.02(s,1H,7-OH),12.67(s,1H,5-OH),5.99(s,1H,H-8),3.99(s,3H,-OCH3),2.74(s,2H,H-3),1.48(s,6H,2-2×CH3)；
步骤二、将1mmol步骤一中的中间产物A、1mmol 4-氯苯乙酸和40mmol醋酸酐、40mmol醋酸酐混合，加热至100℃，再加入1.5mmol三乙胺升温至150℃，在氮气保护下150℃回流搅拌反应12h，反应结束后加30mL水猝灭反应，然后用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩得到混合物，将混合物采用石油醚与乙酸乙酯体积比为4:1的硅胶柱层析分离纯化得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素g，即2”，2”-二甲基-3-(4'-氯苯基)-7-乙酰氧基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8- 甲酸甲酯：
产率：45％，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素g为白色固体，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素g通过熔点测定实验得到熔点为：193.5-194.2℃；通过高分辨电喷雾电离质谱 (HRMS-ESI:m/z[M+Na]+)得到计算值C23H19ClO7：465.0819，实测值：465.0707；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.44(d,J＝7.5Hz,2H,H-2′, 6′),7.24(d,J＝7.5Hz,2H,H-3′,5′),6.56(s,1H,H-6),3.96(s,3H,13-OCH3),2.74(s,2H, H-3″),2.32(s,3H,12-CH3),1.37(s,6H,2″-2×CH3)；
步骤三、将8mmol步骤二中的角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素g、40mmol硼氢化钠、40mL甲醇混合，于0℃环境下搅拌反应8h，反应后加入20mL 5％盐酸溶液猝灭反应，用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，取上层有机相层，经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩，在甲醇中重结晶得到化合物1g，即2”，2”-二甲基-3-(4'-氯苯基)-7-羟基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：68％，化合物1g为白色单晶，化合物1g通过熔点测定实验得到熔点为：216.3-217.6℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C21H17ClO6：401.0714，实测值：401.0784；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.25(s,1H,7-OH),7.45(d,J＝8.4Hz,2H,H-2′,6′),7.26(d,J＝8.4Hz,2H,H-3′,5′),6.38(s,1H,H-6),4.06(s,3H,11-OCH3),2.73(s,2H,H-3″),1.37(s,6H, 2″-2×CH3)。
<实施例8>
步骤一、将10mmol 2，4，6-三羟基苯甲酸甲酯、22mmol 3，3-二甲基丙烯酸、10mmol多聚磷酸混合，然后加入40mL无水二噁烷，在95℃搅拌回流反应10h，反应结束后加入饱和碳酸钾溶液调节溶液pH至中性，过滤，取固体，在丙酮中重结晶得到中间产物A，即2，2-二甲基-5，7-二羟基-4-氧代-2，3-二氢苯并吡喃-6-甲酸甲酯：
产率：90％，中间产物A为淡黄色晶体，中间产物A通过熔点测定实验得到熔点为：140.6-144.1℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C13H14O6：267.08，实测值：267.32；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(600MHz,CDCl3) δ14.02(s,1H,7-OH),12.67(s,1H,5-OH),5.99(s,1H,H-8),3.99(s,3H,-OCH3),2.74(s,2H,H-3),1.48(s,6H,2-2×CH3)；
步骤二、将1mmol步骤一中的中间产物A、1mmol4-三氟甲基苯乙酸和40mmol 醋酸酐、40mmol醋酸酐混合，加热至100℃，再加入1.5mmol三乙胺升温至150℃，在氮气保护下150℃回流搅拌反应12h，反应结束后加30mL水猝灭反应，然后用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩得到混合物，将混合物采用石油醚与乙酸乙酯体积比为4:1的硅胶柱层析分离纯化得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素h，即2”，2”-二甲基-3-(4'-三氟甲基苯基)-7-乙酰氧基-2”H，3”H-4， 5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：40％，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素h为白色固体，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素h通过熔点测定实验得到熔点为：192.3-193.5℃；通过高分辨电喷雾电离质谱 (HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C24H19F3O7：477.1156，实测值：477.1163；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.73(d,J＝7.5Hz,2H,H-3′, 5′),7.43(d,J＝7.5Hz,2H,H-2′,6′),6.58(d,J＝0.8Hz,1H,H-6),3.96(s,3H,13-OCH3),2.73 (s,2H,H-3″),2.32(s,3H,12-CH3),1.38(s,6H,2″-2×CH3)；
步骤三、将8mmol步骤二中的角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素h、40mmol硼氢化钠、40mL甲醇混合，于0℃环境下搅拌反应8h，反应后加入20mL 5％盐酸溶液猝灭反应，用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，取上层有机相层，经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩，在甲醇中重结晶得到化合物1h，即2”，2”-二甲基-3-(4'-三氟甲基苯基)-7-羟基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8- 甲酸甲酯：
产率：69％，化合物1h为白色固体，化合物1h通过熔点测定实验得到熔点为：244.6-246.5℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+Na]+)得到计算值C22H17F3O6：457.0869，实测值：457.0862；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为1H NMR(500MHz,CDCl3)δ12.27(s,1H,7-OH),7.72(d,J＝7.9Hz,2H,H-3′,5′),7.44(d,J＝7.8Hz,2H,H-2′,6′),6.39(s,1H,H-6),4.06(s,3H,11-OCH3),2.72(s,2H,H-3″),1.36(s,6H, 2″-2×CH3)。
<实施例9>
步骤一、将10mmol 2，4，6-三羟基苯甲酸甲酯、22mmol 3，3-二甲基丙烯酸、10mmol多聚磷酸混合，然后加入40mL无水二噁烷，在95℃搅拌回流反应10h，反应结束后加入饱和碳酸钾溶液调节溶液pH至中性，过滤，取固体，在丙酮中重结晶得到中间产物A，即2，2-二甲基-5，7-二羟基-4-氧代-2，3-二氢苯并吡喃-6-甲酸甲酯：
产率：90％，中间产物A为淡黄色晶体，中间产物A通过熔点测定实验得到熔点为：140.6-144.1℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C13H14O6：267.08，实测值：267.32；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(600MHz,CDCl3) δ14.02(s,1H,7-OH),12.67(s,1H,5-OH),5.99(s,1H,H-8),3.99(s,3H,-OCH3),2.74(s,2H,H-3),1.48(s,6H,2-2×CH3)；
步骤二、将1mmol步骤一中的中间产物A、1mmol2,4-二氯苯乙酸和40mmol醋酸酐、40mmol醋酸酐混合，加热至100℃，再加入1.5mmol三乙胺升温至150℃，在氮气保护下150℃回流搅拌反应12h，反应结束后加30mL水猝灭反应，然后用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩得到混合物，将混合物采用石油醚与乙酸乙酯体积比为4:1的硅胶柱层析分离纯化得到角型3-芳基-4，5- 吡喃香豆素i，即2'，2”-二甲基-3-(2'-4'-二氯苯基)-7-乙酰氧基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：41％，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素i为白色固体，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素i通过熔点测定实验得到熔点为：140.4-142.8℃；通过高分辨电喷雾电离质谱 (HRMS-ESI:m/z[M+Na]+)得到计算值C23H18Cl2O7：499.0320，实测值：499.0321；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.54(s,1H,H-3′),7.36(d,J ＝8.2Hz,1H,H-5′),7.15(d,J＝8.2Hz,1H,H-6′),6.57(s,1H,H-6),3.96(s,3H,13-OCH3), 2.59(s,2H,H-3″),2.32(s,3H,12-CH3),1.39(s,6H,2″-2×CH3)；
步骤三、将8mmol步骤二中的角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素i、40mmol硼氢化钠、40mL甲醇混合，于0℃环境下搅拌反应8h，反应后加入20mL 5％盐酸溶液猝灭反应，用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，取上层有机相层，经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩，在甲醇中重结晶得到化合物1i，即2”，2”-二甲基-3-(2'，4'-二氯苯基)-7-羟基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：67％，化合物1i为白色固体，化合物1i通过熔点测定实验得到熔点为：263.2-264.5℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C21H16Cl2O6：435.0394，实测值：435.0395；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ12.24(s,1H,7-OH),7.47(s,1H,H-3′),7.28(d,J＝8.1Hz,1H,H-5′),7.09(d,J＝7.9Hz,1H,H-6′),6.31(s,1H,H-6),3.98(s,3H,11-OCH3),2.49(s,2H,H-3″),1.30 (d,J＝6.1Hz,6H,2″-2×CH3)。
<实施例10>
步骤一、将10mmol 2，4，6-三羟基苯甲酸甲酯、22mmol 3，3-二甲基丙烯酸、10mmol多聚磷酸混合，然后加入40mL无水二噁烷，在95℃搅拌回流反应10h，反应结束后加入饱和碳酸钾溶液调节溶液pH至中性，过滤，取固体，在丙酮中重结晶得到中间产物A，即2，2-二甲基-5，7-二羟基-4-氧代-2，3-二氢苯并吡喃-6-甲酸甲酯：
产率：90％，中间产物A为淡黄色晶体，中间产物A通过熔点测定实验得到熔点为：140.6-144.1℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C13H14O6：267.08，实测值：267.32；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(600MHz,CDCl3) δ14.02(s,1H,7-OH),12.67(s,1H,5-OH),5.99(s,1H,H-8),3.99(s,3H,-OCH3),2.74(s,2H,H-3),1.48(s,6H,2-2×CH3)；
步骤二、将1mmol骤一中的中间产物A、1mmol2，4，5-三氟苯乙酸和40mmol醋酸酐、40mmol醋酸酐混合，加热至100℃，再加入1.5mmol三乙胺升温至150℃，在氮气保护下150℃回流搅拌反应12h，反应结束后加30mL水猝灭反应，然后用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩得到混合物，将混合物采用石油醚与乙酸乙酯体积比为4:1的硅胶柱层析分离纯化得到角型3-芳基-4， 5-吡喃香豆素j，即2”，2”二甲基-3-(2'，4'，5'-三氟苯基)-7-乙酰氧基-2”H，3”H-4，5- 吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：40％，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素j为白色固体，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素j通过熔点测定实验得到熔点为：151.6-153.5℃；通过高分辨电喷雾电离质谱 (HRMS-ESI:m/z[M+Na]+)得到计算值C23H17F3O7：485.08160，实测值：485.08173；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.16(dd,J＝16.3,8.5Hz,1H, H-6′),7.06(dd,J＝16.2,8.8Hz,1H,H-3′),6.58(s,1H,H-6),3.96(s,3H,13-OCH3),2.68(s,2H, H-3″),2.32(s,3H,12-CH3),1.39(s,6H,2″-2×CH3)；
步骤三、将8mmol步骤二中的角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素i、40mmol硼氢化钠、40mL甲醇混合，于0℃环境下搅拌反应8h，反应后加入20mL 5％盐酸溶液猝灭反应，用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，取上层有机相层，经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩，在甲醇中重结晶得到化合物1g，即2”，2”-二甲基-3-(2'，4'，5'-三氟基苯基)-7-羟基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：68％，化合物1j为白色针晶，化合物1j通过熔点测定实验得到熔点为：200.0-201.3℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+Na]+)得到计算值C21H15F3O6：443.0712，实测值：443.0712；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ12.29(s,1H,7-OH),7.17(dd,J＝16.1,8.9Hz,1H,H-6′),7.05(dd,J＝16.1,9.1Hz,1H,H-3′),6.39(s,1H,H-6),4.06(s,3H,11-OCH3),2.66(s,2H,H-3″),1.38(d,J ＝15.1Hz,6H,2″-2×CH3)。
<实施例11>
步骤一、将10mmol 2，4，6-三羟基苯甲酸甲酯、22mmol 3，3-二甲基丙烯酸、10mmol多聚磷酸混合，然后加入40mL无水二噁烷，在95℃搅拌回流反应10h，反应结束后加入饱和碳酸钾溶液调节溶液pH至中性，过滤，取固体，在丙酮中重结晶得到中间产物A，即2，2-二甲基-5，7-二羟基-4-氧代-2，3-二氢苯并吡喃-6-甲酸甲酯：
产率：90％，中间产物A为淡黄色晶体，中间产物A通过熔点测定实验得到熔点为：140.6-144.1℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+H]+)得到计算值C13H14O6：267.08，实测值：267.32；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(600MHz,CDCl3) δ14.02(s,1H,7-OH),12.67(s,1H,5-OH),5.99(s,1H,H-8),3.99(s,3H,-OCH3),2.74(s,2H,H-3),1.48(s,6H,2-2×CH3)；
步骤二、将1mmol步骤一中的中间产物A、1mmol3，5-双(三氟甲基)苯乙酸和40mmol醋酸酐、40mmol醋酸酐混合，加热至100℃，再加入1.5mmol三乙胺升温至1 50℃，在氮气保护下150℃回流搅拌反应12h，反应结束后加30mL水猝灭反应，然后用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩得到混合物，将混合物采用石油醚与乙酸乙酯体积比为4:1的硅胶柱层析分离纯化得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素k，即2”，2”-二甲基-3-(3'，5'-双(三氟甲基)苯基)-7-乙酰氧基-2”H，3”H-4，5-吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：40％，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素k为白色固体，角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素k通过熔点测定实验得到熔点为：193.5-194.4℃；通过高分辨电喷雾电离质谱 (HRMS-ESI:m/z[M+Na]+)得到计算值C25H18F6O7：567.0845，实测值：567.0847；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.94(s,1H,H-4′),7.76(s,2H, H-2′,6′),6.60(s,1H,H-6),3.97(s,3H,13-OCH3),2.73(s,2H,H-3″),2.33(s,3H,12-CH3), 1.40(s,6H,2″-2×CH3)；
步骤三、将8mmol步骤二中的角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素i、40mmol硼氢化钠、40mL甲醇混合，于0℃环境下搅拌反应8h，反应后加入20mL 5％盐酸溶液猝灭反应，用乙酸乙酯萃取，取上层有机相层，有机相层依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，取上层有机相层，经无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压蒸馏浓缩，在甲醇中重结晶得到化合物1k，即2”，2”-二甲基-3-(3'，5'-双(三氟甲基)苯基)-7-乙酰氧基-2”H,3”H-4，5- 吡喃香豆素-8-甲酸甲酯：
产率：40％，化合物1k为白色固体，化合物1k通过熔点测定实验得到熔点为：193.5-194.4℃；通过高分辨电喷雾电离质谱(HRMS-ESI:m/z[M+Na]+)得到计算值C25H18F6O7：567.0845，实测值：567.0847；通过核磁共振测得氢谱的表征数据为：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.94(s,1H,H-4′),7.76(s,2H,H-2′,6′),6.60(s,1H,H-6),3.97(s,3H,13-OCH3),2.73(s,2H,H-3″),2.33(s,3H,12-CH3),1.40(s,6H,2″-2×CH3)。
<体外抗肿瘤活性实验>
采用MTS法研究化合物1a～1k的抗肿瘤活性：
接种细胞：用含10wt％胎牛血清的培养液(DMEM或RMP11640)配成单个细胞悬液，以每孔15000个细胞接种到96孔板，每孔体积100μL，细胞提前24h接种培养。
加入待测化合物1a～1k溶液：用DMSO分别溶解化合物1a～1k，得到待测化合物1a～1k 溶液，取用40μM的待测化合物1a～1k溶液，分别对白血病细胞HL-60、肝癌细胞HepG2、宫颈癌细胞HeLa、乳腺癌细胞MCF-7以及人正常肝细胞LO2进行初筛，每孔终体积为 200μL，每种处理均设3个复孔。
显色：37℃培养48h后，贴壁细胞倾倒孔内培养液，再每孔加MTS溶液20μL和培养液100μL；悬浮细胞去除100μL培养上清液，再每孔加20μL的MTS溶液；设置3个空白复孔，即每孔加入MTS溶液20μL和培养液100μL，孵育4h。
比色：充分显色后，选择492nm波长，在多功能酶标仪读取各孔光吸收值，记录结果，经计算后，获得IC50值结果如表1所述：
表1 3-芳基-4，5-吡喃香豆素及其衍生物对不同肿瘤细胞株的IC50值
本发明提供的3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物经体外抗肿瘤实验得出表1数据，可以看出，3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物对白血病细胞株HL-60、乳腺癌细胞株MCF-7具一定的抗肿瘤活性，其中化合物1f对白血病肿瘤细胞株HL-60具有较好的体外抑制增殖的 IC50值达到18.81±0.75μΜ。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。

Claims (7)

1.3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物，其特征在于，具有式I所示结构：
式I；
当R3为氢时，R1、R2、R4均为氟；或，
当R2、R3均为氢时，R1、R4均为亚甲二氧基；或，
当R3、R4均为氢时，R1、R2均为氯；或，
当R2、R3、R4均为氢时，R1为甲氧基、甲基、羟基、氟、氯、溴、三氟甲基的任意一种。
2.如权利要求1所述的3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、将2，4，6-三羟基苯甲酸甲酯、3，3-二甲基丙烯酸、多聚磷酸混合，然后加入无水二噁烷，进行回流搅拌反应，反应结束后分离纯化得到中间产物A，中间产物A为2，2-二甲基-5，7-二羟基-4-氧代-2，3-二氢苯并吡喃-6-甲酸甲酯，其具有式A所示结构：
式A；
步骤二、将中间产物A、苯乙酸取代物、醋酸酐混合，加热至80~100℃，再加入三乙胺升温至120~160℃，在氮气保护下进行回流搅拌反应，反应结束后加水猝灭反应，分离纯化得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素，其中，所述苯乙酸取代物为2，4，5-三氟苯乙酸、3，4-亚甲基二氧苯乙酸、2，4-二氯苯乙酸、4-甲氧基苯乙酸、对甲基苯乙酸、4-乙酰氧基苯乙酸、4-氟苯乙酸、4-氯苯乙酸、4-溴苯乙酸、4-(三氟甲基)苯乙酸中的任意一种；
步骤三、将角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素、硼氢化钠和甲醇混合，控制温度为0~5℃进行搅拌反应，反应结束后加入盐酸溶液淬灭反应，分离纯化得到目标化合物I；
其中，当步骤二中的所述苯乙酸取代物为4-甲氧基苯乙酸时，得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素a，其具有式a所示结构：
式a，步骤三得到化合物1a；
当步骤二中的所述苯乙酸取代物为4-甲基苯乙酸时，得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素b，其具有式b所示结构：
式b，步骤三得到化合物1b；
当步骤二中的所述苯乙酸取代物为4-氟苯乙酸时，得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素c，其具有式c所示结构：
式c，步骤三得到化合物1c；
当步骤二中的所述苯乙酸取代物为4-溴苯乙酸时，得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素d，其具有式d所示结构：
式d，步骤三得到化合物1d；
当步骤二中的所述苯乙酸取代物为3，4-亚甲二氧基苯乙酸时，得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素e，其具有式e所示结构：
式e，步骤三得到化合物1e；
当步骤二中的所述苯乙酸取代物为4-乙酰氧基苯乙酸时，得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素f，其具有式f所示结构：
式f，步骤三得到化合物1f；
当步骤二中的所述苯乙酸取代物为4-氯苯乙酸时，得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素g，其具有式g所示结构：
式g，步骤三得到化合物1g；
当步骤二中的所述苯乙酸取代物为4-三氟甲基苯乙酸时，得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素h，其具有式h所示结构：
式h，步骤三得到化合物1h；
当步骤二中的所述苯乙酸取代物为2，4-二氯苯乙酸时，得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素i，其具有式i所示结构：
式i，步骤三得到化合物1i；
当步骤二中的所述苯乙酸取代物为2，4，5-三氟苯乙酸时，得到角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素j，其具有式j所示结构：
式j，步骤三得到化合物1j。
3.如权利要求2所述的3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物的制备方法，其特征在于，步骤一中的2，4，6-三羟基苯甲酸甲酯、3，3-二甲基丙烯酸、多聚磷酸的摩尔比为1:2~3:0.5~3，回流搅拌反应的反应温度为60~100℃，反应时间为3~10 h，所述分离纯化具体操作为：反应结束后加入饱和碳酸钾溶液调节溶液pH至中性，过滤，取固体，在丙酮中重结晶得到中间产物A。
4.如权利要求2所述的3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物的制备方法，其特征在于，步骤二中的中间产物A、苯乙酸取代物、醋酸酐、三乙胺的摩尔比为1:1~2:30~40:1~2，回流搅拌反应的反应时间为5~12 h，所述分离纯化具体操作为：用有机溶剂萃取，取有机相层，将有机相层干燥，过滤，滤液浓缩得到混合物，将混合物经柱层析分离纯化得角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素。
5.如权利要求2所述的3-芳基-4，5-吡喃香豆素衍生物的制备方法，其特征在于，步骤三中的角型3-芳基-4，5-吡喃香豆素、硼氢化钠的摩尔比为1:5~8，搅拌反应的反应时间为2~8 h，所述分离纯化具体操作为：用有机溶剂萃取，取有机相层，有机相层依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，取有机相层，干燥、过滤、滤液浓缩，在甲醇中重结晶得到目标化合物I。
6.化合物1a在制备抗肝癌HepG2药物中的应用，化合物1d、化合物1f、化合物1h在制备抗宫颈癌HeLa药物中的应用，化合物1a、化合物1b、化合物1d、化合物1e、化合物1f、化合物1g、化合物1h、化合物1j在制备抗乳腺癌MCF-7药物中的应用；
其中，化合物1a具有式1a所示结构：式1a，
化合物1b具有式1b所示结构：式1b，
化合物1d具有式1d所示结构：式1d，
化合物1e具有式1e所示结构：式1e，
化合物1f具有式1f所示结构：式1f，
化合物1g具有式1g所示结构：式1g，
化合物1h具有式1h所示结构：式1h，
化合物1j具有式1j所示结构：式1j。
7.化合物1c、化合物1d、化合物1e、化合物1f、化合物1g、化合物1i、化合物1j在制备抗白血病药物中的应用；
其中，化合物1c具有式1c所示结构：式1c，
化合物1d具有式1d所示结构：式1d，
化合物1e具有式1e所示结构：式1e，
化合物1f具有式1f所示结构：式1f，
化合物1g具有式1g所示结构：式1g，
化合物1i具有式1i所示结构：式1i，
化合物1j具有式1j所示结构：式1j。
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CN101613354A (zh) * 2009-07-30 2009-12-30 浙江大学 一种制备吡喃并香豆素衍生物的方法

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