CN115197827B - 一种细胞外泌体过滤提取装置及提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种细胞外泌体过滤提取装置及提取方法,涉及细胞外泌体提取技术领域,本发明包括底板,底板上设有离心装置以及滤取装置,离心装置主要用于离心操作,滤取装置主要用于过滤提取;离心装置包括位于底板上方的方形护板以及离心电机,离心电机位于方形护板内部中心位置处,离心电机上部输出轴设有十字座,十字座上端连接有试管座,试管座内部设有夹持组件;方形护板上设有冷却组件,冷却组件,冷却组件包括帕尔贴制冷片,方形护板上端设有出风管,出风管整体呈环形方管,且出风管下端开设有出风口,出风口与方形护板相互垂直,控制模块控制帕尔贴制冷片工。本发明为一种细胞外泌体过滤提取装置及提取方法,细胞外泌体提取效果好。
Description
技术领域
本发明涉及细胞外泌体提取技术领域,特别涉及一种细胞外泌体过滤提取装置及提取方法。
背景技术
外泌体是由多囊体经胞吐作用释放出来的直径30~150 nm小泡体。外泌体由人体各种细胞分泌,其内含有来自细胞的蛋白质、核酸和脂质等成分,参与人类疾病的发生发展过程。尤其是参与或介导肿瘤细胞生长、侵袭和迁移、耐药、免疫逃逸、细胞凋亡。外泌体有望作为疾病诊断、预后分析、监测追踪的生物标记物,治疗靶点或药物载体,并为疾病的诊断、治疗、预后分析、监测追踪提供新思路及方法,在生物科学研究过程中往往需要对细胞外泌体进行提取,因此就需要用到细胞外泌体提取装置,在细胞外泌体提取中常用的方法是进行离心,离心完成后进行滤取,最终得到对应的细胞外泌体。
实验室离心机在生物、化学和医药实验室中用于在液体中离解不同的组成成分,或用于将固体从液体中分离。对此需要利用不同物质中所产生的不同的离心力。目前所使用的实验室离心机,其惯用的转速可以达到 16000 转每分钟,由此使作用力可以达到大约21×9.81m/s2。然而,当离心机在高速选装过程中,由于离心机存在周围存在空气阻力,使得离心机在高速旋转过程中产生大量热,该热量通过离心机中的试样的热绝缘而大幅度受阻。由此导致的试样升温不能顺利地避免, 在没有相应的应对措施的情况下,上述所产生的热量对离心分离的试样进行强烈地加热,这样在没有其它因素的情况下就能够造成干扰或失效。通常情况下,使试样必须保持在确定的温度条件下,例如根据实际应用保持在 4°C.22°C或 37°C的温度条件下,最终由于现有的离心机在离心过程中会产生大量热量,使得试样在温度的干扰下发生改变,最终影响细胞外泌体的离心结果质量,现有的细胞外泌体过滤装置,过滤内芯往往固定安装在过滤装置内部,在多次使用后,过滤内芯附着一定残留,且清洗不便利,使得影响对细胞外泌体的滤取,因此有必要提出一种新的解决方案。
现有的细胞外泌体提取装置存在:离心机离心过程中产生一定热量,使得离心机温度升高,高温对细胞外泌体试样产生影响,进而对细胞外泌体产生影响,降低细胞外泌体提取质量,现有的细胞外泌体提取装置还存在过滤内芯拆卸维修不便,细胞外泌体滤取效果差的缺点,为此,我们提出一种细胞外泌体过滤提取装置及提取方法。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种细胞外泌体过滤提取装置及提取方法,可以有效解决背景技术中离心机产热影响细胞外泌体质量以及细胞外泌体滤取效果差的问题。
为实现上述目的,本发明采取的技术方案为:一种细胞外泌体过滤提取装置,包括底板,所述底板上设有离心装置以及滤取装置,所述离心装置主要用于离心操作,所述滤取装置主要用于过滤提取;
所述离心装置包括位于所述底板上方的方形护板以及离心电机,所述离心电机位于所述方形护板内部中心位置处,所述离心电机上部输出轴设有十字座,所述十字座上端连接有试管座,所述试管座内部设有夹持组件,通过十字座连接试管座,使得试管座连接更加紧密;
所述方形护板上设有冷却组件,所述冷却组件包括设置在所述方形护板内部侧壁的若干帕尔贴制冷片,若干所述帕尔贴制冷片制冷端靠向所述试管座,所述方形护板上端设有出风管,所述出风管整体呈环形方管,且所述出风管下端开设有出风口,所述出风口与所述方形护板相互垂直,所述控制模块控制所述帕尔贴制冷片工作,所述帕尔贴制冷片端部制冷,实现对高速旋转的试管座以及离心试管进行降温,帕尔贴制冷片紧贴方形护板一端为导热端,使得方形护板温度升高,所述风机开始工作,实现吹风,最终从出风管处出风,带动所述方形护板表面热空气流动,实现对所述方形护板降温,通过设置冷却组件对离心电机以及离心试管进行冷却,降低离心电机以及离心试管产热对离心试管内壁样液的影响,保证样液的质量;
所述夹持组件包括设置在所述试管座内壁的两组弹簧,一组所述弹簧位于另一组所述弹簧正下方,每组所述弹簧包含若干所述弹簧,若干所述弹簧围绕所述试管座等间距阵列分布,每个所述弹簧端部设有弧形块,所述弧形块远离所述弹簧一侧壁设有凸块,所述弧形块之间设有离心试管,所述离心试管下部侧壁卡设有若干滑槽,所述凸块与所述滑槽相互适配,在离心过程中,凸块与滑槽相互卡和,卡和后首先在试管座高速旋转过程中,试管座与离心试管不会出现打滑,且在离心过程中发生一定振动,由于在试管座与离心试管之间设置弹簧,通过弹簧自身弹力,且弹簧分为上下两组,每组等间距阵列分布,使得完全包裹离心试管,使得对离心试管离心过程中能够起到一定的保护缓冲作用,使得确保离心效果;
所述滤取装置包括位于所述底板上部的滤取管、活动设置在所述滤取管内部的滤取内芯,所述滤取管位于所述方形护板侧部,所述滤取管整体呈漏斗状,所述滤取内芯整体呈圆台状结构,且所述滤取内芯外壁与所述滤取管内壁贴合,所述滤取内芯上部端部设有凸圈,所述凸圈上端侧壁贴合所述滤取管侧壁,所述凸圈上端内壁倾斜设置,所述滤取内芯中部开设有若干滤取通孔,若干所述滤取通孔整理呈波浪状结构,若干所述滤取通孔等间距阵列分布,每个所述滤取通孔侧壁设有若干毛细凸起,若干所述毛细凸起等间距阵列分布,所述滤取管侧壁开设有螺纹通孔,所述滤取内芯侧壁开设有梯度通孔,所述梯度通孔内壁设有密封圈,所述梯度通孔与所述螺纹通孔位置相互适配,所述螺纹通孔内部螺纹连接有连接管,所述连接管外壁设有螺纹线,且与所述螺纹通孔螺纹适配,所述连接管一端位于所述梯度通孔中,且端部与所述密封圈贴合,所述连接管另一端部设有辅助螺母,所述连接管高度位于所述凸圈下端,所述连接管一端连接有出料弯管,所述出料弯管端部设有阀门,通过在滤取管内部设置活动的滤取内芯,且滤取内芯与滤取管内部通过连接管进行螺纹限定,实现固定滤取内芯的位置,在滤取内芯上设置整理呈波浪状弯曲的过滤通孔,实现增加液体在过滤通孔内部增加流淌时间,且在过滤通孔内被毛细凸起,进行二次过滤,进一步提高细胞外泌体滤取效果。
优选地,所述底板上方开设有两个圆形槽,两个所述圆形槽位于所述方形护板一侧,两个所述圆形槽内分布设有第一烧杯以及第二烧杯,所述第一烧杯位于所述滤取管下方,所述第二烧杯位于所述出料弯管下端,第一烧杯以及第二烧杯主要用于收取对应液体。
优选地,所述底板上方设有支架,所述方形护板下部顶角位置处与所述支架上端连接,所述方形护板采用不锈钢钢板材质,帕尔贴制冷片包括制冷端以及散热端两端,制冷端实现制冷,导热端实现散热,不锈钢材质的方形护板有着很好的导热性,能够对帕尔贴制冷片靠近方形护板侧壁的导热端,产生的热量快速导出,提高散热效果,降低离心电机以及离心试管高速旋转产生的温度对样液的影响,提高离心效果。
优选地,所述底板上方设有风机以及控制模块,所述风机出风口处设有出风弯管,所述出风弯管上端与所述出风管贯通连接,所述风机开始工作,实现吹风,最终从出风管处出风,带动所述方形护板表面热空气流动,实现对所述方形护板降温。
优选地,所述方形护板侧壁设有滑轨,所述滑轨内部活动设有滑块,所述滑块一端与所述滤取管侧壁连接,通过设置滑轨以及滑块使得滤取管能够拆卸,通过所述滑块在滑轨上滑动,取下滤取管,转动连接管,使得连接管端部不在位于梯度通孔中,再取出滤取内芯,同时对滤取内芯、滤取管以及离心试管进行清洗,实现滤取管以及滤取内芯拆卸清洗更加方便,减少滤取管以及滤取内芯上残留液对滤取结果的影响。
优选地,所述底板底部顶角位置处设有支腿,所述支腿底部设有橡胶块,通过设置橡胶块使得设备在桌面上摆放更加稳定,进一步提高细胞外泌体提取效果。
一种细胞外泌体过滤提取装置的提取方法,所述提取方法包括以下步骤:
S1:选取细胞溶液的液体,然后对所述液体进行生物学培养,得到样本溶液,选取一定量样本溶液,将溶液添加入所述离心试管中,然后将离心试管放置在三个所述弧形块之间,并将离心试管侧壁滑槽与凸块对齐,将所述凸块滑入所述滑槽内部,实现与所述离心试管内部滑槽相互卡和,再通过控制模块设定转速以及离心时间,设定离心时间为10分钟,离心电机带动十字座旋转,十字座带动试管座旋转,试管座带动再带动离心试管进行第一次离心操作,控制模块内部设有控制芯片以及单片机,实现对离心电机的控制,以及对帕尔贴制冷片的控制,此处为公知常识,再次不做赘述;
S2:第一次离心完成后,将离心试管内部离心完成的液体从滤取管上端倒入滤取管中,液体从滤取内芯的滤取通孔中流出,在弯曲的滤取通孔内经过毛细凸起的过滤,得到下清液,下清液从滤取管下端进入到第一烧杯中,实现去除沉渣收集上清液,以去除活细胞及较大的杂质;
S3:通过所述滑块在滑轨上滑动,取下滤取管,转动连接管,使得连接管端部不在位于梯度通孔中,再取出滤取内芯,同时对滤取内芯、滤取管以及离心试管进行清洗,清洗完成后,并将滤取内芯、滤取管重新安装回原位置;
S4:将步骤S2中第一烧杯内部的上清液再次加入到离心试管中,重新通过控制模块设定离心时间,此次设定离心时间为30分钟,进行二次离心操作,重复步骤S2,再次得到上清液,此次实现清除死细胞和细胞碎片,再次重复步骤S3;
S5:将步骤S4中得到的上清液,再次加入到离心试管中,重新通过控制模块设定离心时间,此次设定离心时间为70分钟,进行强力离心,再将离心试管中的液体倒入至滤取管中,此次去除上清液,得到沉淀,将沉淀以100μLPBS重悬纯化提取,得到细胞外泌体。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
本发明中,通过在方形护板上设置冷却组件,冷却组件,冷却组件包括设置在方形护板内部侧壁的若干帕尔贴制冷片,若干帕尔贴制冷片制冷端靠向试管座,方形护板上端设有出风管,出风管整体呈环形方管,且出风管下端开设有出风口,出风口与方形护板相互垂直,控制模块控制帕尔贴制冷片工作,帕尔贴制冷片端部制冷,实现对高速旋转的试管座以及离心试管进行降温,帕尔贴制冷片紧贴方形护板一端为导热端,使得方形护板温度升高,风机开始工作,实现吹风,最终从出风管处出风,带动方形护板表面热空气流动,实现对方形护板降温,通过设置冷却组件对离心电机以及离心试管进行冷却,降低离心电机以及离心试管产热对离心试管内壁样液的影响,保证样液的质量。
本发明中,通过设置滤取装置,滤取装置包括位于底板上部的滤取管、活动设置在滤取管内部的滤取内芯,滤取管位于方形护板侧部,滤取管整体呈漏斗状,滤取内芯整体呈圆台状结构,且滤取内芯外壁与滤取管内壁贴合,滤取内芯上部端部设有凸圈,凸圈上端侧壁贴合滤取管侧壁,凸圈上端内壁倾斜设置,滤取内芯中部开设有若干滤取通孔,若干滤取通孔整理呈波浪状结构,若干滤取通孔等间距阵列分布,每个滤取通孔侧壁设有若干毛细凸起,若干毛细凸起等间距阵列分布,滤取管侧壁开设有螺纹通孔,滤取内芯侧壁开设有梯度通孔,梯度通孔内壁设有密封圈,梯度通孔与螺纹通孔位置相互适配,螺纹通孔内部螺纹连接有连接管,连接管外壁设有螺纹线,且与螺纹通孔螺纹适配,连接管一端位于梯度通孔中,且端部与密封圈贴合,连接管另一端部设有辅助螺母,连接管高度位于凸圈下端,连接管一端连接有出料弯管,出料弯管端部设有阀门,通过在滤取管内部设置活动的滤取内芯,且滤取内芯与滤取管内部通过连接管进行螺纹限定,实现固定滤取内芯的位置,在滤取内芯上设置整理呈波浪状弯曲的过滤通孔,实现增加液体在过滤通孔内部增加流淌时间,且在过滤通孔内被毛细凸起,进行二次过滤,进一步提高细胞外泌体滤取效果。
本发明之提取方法,通过使用提取装置对细胞外泌体进行三次不同转速的离心操作,在三次离心过程中滤取装置便于拆卸清洗,减少滤取内芯残留物上对细胞外泌体上的影响,进一步提高细胞外泌体滤取效果,且本设备机构简单,生产成本低适合广泛推广。
附图说明
图1为本发明一种细胞外泌体过滤提取装置的整体结构示意图;
图2为本发明一种细胞外泌体过滤提取装置的俯视结构示意图;
图3为本发明图2中A-A处的剖视结构示意图;
图4为本发明图2中B-B处的剖视结构示意图;
图5为本发明图3中C处的局部放大结构示意图;
图6为本发明图4中D处的局部放大结构示意图;
图7为本发明图5中E处的局部放大结构示意图;
图8为本发明一种细胞外泌体过滤提取装置中离心装置的整体结构示意图;
图9为本发明一种细胞外泌体过滤提取装置中离心试管的整体结构示意图;
图10为本发明一种细胞外泌体过滤提取装置的提取方法的流程图。
图中:1、底板;2、方形护板;3、离心电机;4、十字座;5、试管座;6、帕尔贴制冷片;7、出风管;8、弹簧;9、弧形块;10、凸块;11、离心试管;12、滤取管;13、滤取内芯;14、凸圈;15、毛细凸起;16、密封圈;17、连接管;18、出料弯管;19、第一烧杯;20、第二烧杯;21、支架;22、风机;23、出风弯管;24、滑轨;25、滑块;26、支腿;27、橡胶块;28、控制模块;29、阀门。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解,下面结合具体实施方式,进一步阐述本发明。
在本发明的描述中,需要说明的是,术语“上”、“下”、“内”、“外”“前端”、“后端”、“两端”、“一端”、“另一端”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系,仅是为了便于描述本发明和简化描述,而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作,因此不能理解为对本发明的限制。此外,术语“第一”、“第二”仅用于描述目的,而不能理解为指示或暗示相对重要性。
在本发明的描述中,需要说明的是,除非另有明确的规定和限定,术语“安装”、“设置有”、“连接”等,应做广义理解,例如“连接”,可以是固定连接,也可以是可拆卸连接,或一体地连接;可以是机械连接,也可以是电连接;可以是直接相连,也可以通过中间媒介间接相连,可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言,可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
请参照图1-10所示,本发明为一种细胞外泌体过滤提取装置,包括底板1,底板1上设有离心装置以及滤取装置,离心装置主要用于离心操作,滤取装置主要用于过滤提取;
离心装置包括位于底板1上方的方形护板2以及离心电机3,离心电机3位于方形护板2内部中心位置处,离心电机3上部输出轴设有十字座4,十字座4上端连接有试管座5,试管座5内部设有夹持组件,通过十字座4连接试管座5,使得试管座5连接更加紧密;
方形护板2上设有冷却组件,冷却组件包括设置在方形护板2内部侧壁的若干帕尔贴制冷片6,若干帕尔贴制冷片6制冷端靠向试管座5,方形护板2上端设有出风管7,出风管7整体呈环形方管,且出风管7下端开设有出风口,出风口与方形护板2相互垂直,控制模块28控制帕尔贴制冷片6工作,帕尔贴制冷片6端部制冷,实现对高速旋转的试管座5以及离心试管11进行降温,帕尔贴制冷片6紧贴方形护板2一端为导热端,使得方形护板2温度升高,风机22开始工作,实现吹风,最终从出风管7处出风,带动方形护板2表面热空气流动,实现对方形护板2降温,通过设置冷却组件对离心电机3以及离心试管11进行冷却,降低离心电机3以及离心试管11产热对离心试管11内壁样液的影响,保证样液的质量;
夹持组件包括设置在试管座5内壁的两组弹簧8,一组弹簧8位于另一组弹簧8正下方,每组弹簧8包含若干弹簧8,若干弹簧8围绕试管座5等间距阵列分布,每个弹簧8端部设有弧形块9,弧形块9远离弹簧8一侧壁设有凸块10,弧形块9之间设有离心试管11,离心试管11下部侧壁卡设有若干滑槽,凸块10与滑槽相互适配,在离心过程中,凸块10与滑槽相互卡和,卡和后首先在试管座5高速旋转过程中,试管座5与离心试管11不会出现打滑,且在离心过程中发生一定振动,由于在试管座5与离心试管11之间设置弹簧8,通过弹簧8自身弹力,且弹簧8分为上下两组,每组等间距阵列分布,使得完全包裹离心试管11,使得对离心试管11离心过程中能够起到一定的保护缓冲作用,使得确保离心效果;
滤取装置包括位于底板1上部的滤取管12、活动设置在滤取管12内部的滤取内芯13,滤取管12位于方形护板2侧部,滤取管12整体呈漏斗状,滤取内芯13整体呈圆台状结构,且滤取内芯13外壁与滤取管12内壁贴合,滤取内芯13上部端部设有凸圈14,凸圈14上端侧壁贴合滤取管12侧壁,凸圈14上端内壁倾斜设置,滤取内芯13中部开设有若干滤取通孔,若干滤取通孔整理呈波浪状结构,若干滤取通孔等间距阵列分布,每个滤取通孔侧壁设有若干毛细凸起15,若干毛细凸起15等间距阵列分布,滤取管12侧壁开设有螺纹通孔,滤取内芯13侧壁开设有梯度通孔,梯度通孔内壁设有密封圈16,梯度通孔与螺纹通孔位置相互适配,螺纹通孔内部螺纹连接有连接管17,连接管17外壁设有螺纹线,且与螺纹通孔螺纹适配,连接管17一端位于梯度通孔中,且端部与密封圈16贴合,连接管17另一端部设有辅助螺母,连接管17高度位于凸圈14下端,连接管17一端连接有出料弯管18,出料弯管18端部设有阀门29,通过在滤取管12内部设置活动的滤取内芯13,且滤取内芯13与滤取管12内部通过连接管17进行螺纹限定,实现固定滤取内芯13的位置,在滤取内芯上13上设置整理呈波浪状弯曲的过滤通孔,实现增加液体在过滤通孔内部增加流淌时间,且在过滤通孔内被毛细凸起15,进行二次过滤,进一步提高细胞外泌体滤取效果。
其中,底板1上方开设有两个圆形槽,两个圆形槽位于方形护板2一侧,两个圆形槽内分布设有第一烧杯19以及第二烧杯20,第一烧杯19位于滤取管12下方,第二烧杯20位于出料弯管18下端,第一烧杯19以及第二烧杯20主要用于收取对应液体。
其中,底板1上方设有支架21,方形护板2下部顶角位置处与支架21上端连接,方形护板2采用不锈钢钢板材质,帕尔贴制冷片6包括制冷端以及散热端两端,制冷端实现制冷,导热端实现散热,不锈钢材质的方形护板2有着很好的导热性,能够对帕尔贴制冷片6靠近方形护板2侧壁的导热端,产生的热量快速导出,提高散热效果,降低离心电机3以及离心试管11高速旋转产生的温度对样液的影响,提高离心效果。
其中,底板1上方设有风机22以及控制模块28,风机22出风口处设有出风弯管23,出风弯管23上端与出风管7贯通连接,风机22开始工作,实现吹风,最终从出风管7处出风,带动方形护板2表面热空气流动,实现对方形护板2降温。
其中,方形护板2侧壁设有滑轨24,滑轨24内部活动设有滑块25,滑块25一端与滤取管12侧壁连接,通过设置滑轨24以及滑块25使得滤取管12能够拆卸,通过滑块25在滑轨24上滑动,取下滤取管12,转动连接管17,使得连接管17端部不在位于梯度通孔中,再取出滤取内芯13,同时对滤取内芯13、滤取管12以及离心试管11进行清洗,实现滤取管12以及滤取内芯13拆卸清洗更加方便,减少滤取管12以及滤取内芯13上残留液对滤取结果的影响。
其中,底板1底部顶角位置处设有支腿26,支腿26底部设有橡胶块27,通过设置橡胶块27使得设备在桌面上摆放更加稳定,进一步提高细胞外泌体提取效果。
一种细胞外泌体过滤提取装置的提取方法,提取方法包括以下步骤:
S1:选取细胞溶液的液体,然后对液体进行生物学培养,得到样本溶液,选取一定量样本溶液,将溶液添加入离心试管11中,然后将离心试管11放置在三个弧形块9之间,并将离心试管11侧壁滑槽与凸块10对齐,将凸块10滑入滑槽内部,实现与离心试管11内部滑槽相互卡和,再通过控制模块28设定转速以及离心时间,设定离心时间为10分钟,离心电机3带动十字座4旋转,十字座4带动试管座5旋转,试管座5带动再带动离心试管11进行第一次离心操作,控制模块28内部设有控制芯片以及单片机,实现对离心电机3的控制,以及对帕尔贴制冷片6的控制,此处为公知常识,再次不做赘述;
S2:第一次离心完成后,将离心试管11内部离心完成的液体从滤取管12上端倒入滤取管12中,液体从滤取内芯13的滤取通孔中流出,在弯曲的滤取通孔内经过毛细凸起15的过滤,得到下清液,下清液从滤取管12下端进入到第一烧杯19中,实现去除沉渣收集上清液,以去除活细胞及较大的杂质;
S3:通过滑块25在滑轨24上滑动,取下滤取管12,转动连接管17,使得连接管17端部不在位于梯度通孔中,再取出滤取内芯13,同时对滤取内芯13、滤取管12以及离心试管11进行清洗,清洗完成后,并将滤取内芯13、滤取管12重新安装回原位置;
S4:将步骤S2中第一烧杯19内部的上清液再次加入到离心试管11中,重新通过控制模块28设定离心时间,此次设定离心时间为30分钟,进行二次离心操作,重复步骤S2,再次得到上清液,此次实现清除死细胞和细胞碎片,再次重复步骤S3;
S5:将步骤S4中得到的上清液,再次加入到离心试管11中,重新通过控制模块28设定离心时间,此次设定离心时间为70分钟,进行强力离心,再将离心试管11中的液体倒入至滤取管12中,此次去除上清液,得到沉淀,将沉淀以100μL PBS重悬纯化提取,得到细胞外泌体。
其中,在离心电机3工作时,冷却组件同步工作,控制模块28控制帕尔贴制冷片6工作,帕尔贴制冷片6端部制冷,实现对高速旋转的试管座5以及离心试管11进行降温,帕尔贴制冷片6紧贴方形护板2一端为导热端,使得方形护板2温度升高,风机22开始工作,实现吹风,最终从出风管7处出风,带动方形护板2表面热空气流动,实现对方形护板2降温。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (8)
1.一种细胞外泌体过滤提取装置,其特征在于:包括底板(1),所述底板(1)上设有离心装置以及滤取装置;
所述离心装置包括位于所述底板(1)上方的方形护板(2)以及离心电机(3),所述离心电机(3)位于所述方形护板(2)内部中心位置处,所述离心电机(3)上部输出轴设有十字座(4),所述十字座(4)上端连接有试管座(5),所述试管座(5)内部设有夹持组件;
所述方形护板(2)上设有冷却组件,所述冷却组件包括设置在所述方形护板(2)内部侧壁的若干帕尔贴制冷片(6),若干所述帕尔贴制冷片(6)制冷端靠向所述试管座(5),所述方形护板(2)上端设有出风管(7),所述出风管(7)整体呈环形方管,且所述出风管(7)下端开设有出风口,所述出风口与所述方形护板(2)相互垂直;
所述夹持组件包括设置在所述试管座(5)内壁的两组弹簧(8),一组所述弹簧(8)位于另一组所述弹簧(8)正下方,每组所述弹簧(8)包含若干所述弹簧(8),若干所述弹簧(8)围绕所述试管座(5)等间距阵列分布,每个所述弹簧(8)端部设有弧形块(9),所述弧形块(9)远离所述弹簧(8)一侧壁设有凸块(10),所述弧形块(9)之间设有离心试管(11),所述离心试管(11)下部侧壁卡设有若干滑槽,所述凸块(10)与所述滑槽相互适配;
所述滤取装置包括位于所述底板(1)上部的滤取管(12)、活动设置在所述滤取管(12)内部的滤取内芯(13),所述滤取管(12)位于所述方形护板(2)侧部,所述滤取管(12)整体呈漏斗状,所述滤取内芯(13)整体呈圆台状结构,且所述滤取内芯(13)外壁与所述滤取管(12)内壁贴合,所述滤取内芯(13)上部端部设有凸圈(14),所述凸圈(14)上端侧壁贴合所述滤取管(12)侧壁,所述凸圈(14)上端内壁倾斜设置,所述滤取内芯(13)中部开设有若干滤取通孔,若干所述滤取通孔整理呈波浪状结构,若干所述滤取通孔等间距阵列分布,每个所述滤取通孔侧壁设有若干毛细凸起(15),若干所述毛细凸起(15)等间距阵列分布,所述滤取管(12)侧壁开设有螺纹通孔,所述滤取内芯(13)侧壁开设有梯度通孔,所述梯度通孔内壁设有密封圈(16),所述梯度通孔与所述螺纹通孔位置相互适配,所述螺纹通孔内部螺纹连接有连接管(17),所述连接管(17)外壁设有螺纹线,且与所述螺纹通孔螺纹适配,所述连接管(17)一端位于所述梯度通孔中,且端部与所述密封圈(16)贴合,所述连接管(17)另一端部设有辅助螺母,所述连接管(17)高度位于所述凸圈(14)下端,所述连接管(17)一端连接有出料弯管(18),所述出料弯管(18)端部设有阀门(29)。
2.根据权利要求1所述的一种细胞外泌体过滤提取装置,其特征在于:所述底板(1)上方开设有两个圆形槽,两个所述圆形槽位于所述方形护板(2)一侧,两个所述圆形槽内分布设有第一烧杯(19)以及第二烧杯(20),所述第一烧杯(19)位于所述滤取管(12)下方,所述第二烧杯(20)位于所述出料弯管(18)下端。
3.根据权利要求2所述的一种细胞外泌体过滤提取装置,其特征在于:所述底板(1)上方设有支架(21),所述方形护板(2)下部顶角位置处与所述支架(21)上端连接,所述方形护板(2)采用不锈钢钢板材质。
4.根据权利要求3所述的一种细胞外泌体过滤提取装置,其特征在于:所述底板(1)上方设有风机(22)以及控制模块(28),所述风机(22)出风口处设有出风弯管(23),所述出风弯管(23)上端与所述出风管(7)贯通连接。
5.根据权利要求4所述的一种细胞外泌体过滤提取装置,其特征在于:所述方形护板(2)侧壁设有滑轨(24),所述滑轨(24)内部活动设有滑块(25),所述滑块(25)一端与所述滤取管(12)侧壁连接。
6.根据权利要求5所述的一种细胞外泌体过滤提取装置,其特征在于:所述底板(1)底部顶角位置处设有支腿(26),所述支腿(26)底部设有橡胶块(27)。
7.一种细胞外泌体过滤提取装置的提取方法,其特征在于:所述一种细胞外泌体过滤提取装置为权利要求6所述的一种细胞外泌体过滤提取装置,所述提取方法包括以下步骤:
S1:选取细胞溶液的液体,然后对所述液体进行生物学培养,得到样本溶液,选取一定量样本溶液,将溶液添加入所述离心试管(11)中,然后将离心试管(11)放置在三个所述弧形块9之间,并将离心试管(11)侧壁滑槽与凸块10对齐,将所述凸块10滑入所述滑槽内部,实现与所述离心试管(11)内部滑槽相互卡和,再通过控制模块(28)设定转速以及离心时间,离心电机(3)带动十字座(4)旋转,十字座(4)带动试管座(5)旋转,试管座(5)带动再带动离心试管(11)进行第一次离心操作;
S2:第一次离心完成后,将离心试管(11)内部离心完成的液体从滤取管(12)上端倒入滤取管(12)中,液体从滤取内芯(13)的滤取通孔中流出,在弯曲的滤取通孔内经过毛细凸起(15)的过滤,得到下清液,下清液从滤取管(12)下端进入到第一烧杯(19)中,实现去除沉渣收集上清液,以去除活细胞及大的杂质;
S3:通过所述滑块(25)在滑轨(24)上滑动,取下滤取管(12),转动连接管(17),使得连接管(17)端部不在位于梯度通孔中,再取出滤取内芯(13),同时对滤取内芯(13)、滤取管(12)以及离心试管(11)进行清洗,清洗完成后,并将滤取内芯(13)、滤取管(12)重新安装回原位置;
S4:将步骤S2中第一烧杯(19)内部的上清液再次加入到离心试管(11)中,重新通过控制模块(28)设定离心时间,进行二次离心操作,重复步骤S2,再次得到上清液,此次实现清除死细胞和细胞碎片,再次重复步骤S3;
S5:将步骤S4中得到的上清液,再次加入到离心试管(11)中,重新通过控制模块(28)设定离心时间,进行强力离心,再将离心试管(11)中的液体倒入至滤取管(12)中,此次去除上清液,得到沉淀,将沉淀以100 μL PBS重悬纯化提取,得到细胞外泌体。
8.根据权利要求7所述的一种细胞外泌体过滤提取装置的提取方法,其特征在于:在离心电机(3)工作时,所述冷却组件同步工作,所述控制模块(28)控制所述帕尔贴制冷片(6)工作,所述帕尔贴制冷片(6)端部制冷,实现对高速旋转的试管座(5)以及离心试管(11)进行降温,帕尔贴制冷片(6)紧贴方形护板(2)一端为导热端,使得方形护板(2)温度升高,所述风机(22)开始工作,实现吹风,最终从出风管(7)处出风,带动所述方形护板(2)表面热空气流动,实现对所述方形护板(2)降温。
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