CN115197194A - Zeste增强子同源物2抑制剂及其用途 - Google Patents

Zeste增强子同源物2抑制剂及其用途 Download PDF

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陈雷
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Abstract

本发明公开一种式(I)的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物和共晶，或含它们的药物组合物，及其作为EZH2抑制剂在制备治疗相关疾病的药物中的用途，式(I)中各基团如说明书之定义。

Description

ZESTE增强子同源物2抑制剂及其用途
技术领域
本发明属于药物领域，尤其涉及一种具有EZH2抑制活性的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，及其在制备治疗相关疾病的药物中的用途。
背景技术
癌症的治疗方法目前主要包括放射疗法、手术疗法、药物疗法，靶向病灶的药物治疗已经成为当今临床肿瘤治疗的主要手段，但是由于肿瘤细胞耐药性产生快，现阶段人们对于肿瘤的转移与复发基本仍是束手无策。
赖氨酸甲基转移酶能够对组蛋白和非组蛋白进行甲基化修饰，其异常表达与多种肿瘤的发生密切相关，十几年来一度成为表观遗传领域的一个热点。靶向赖氨酸甲基转移酶，逆转异常的组蛋白或非组蛋白甲基化水平被视为肿瘤治疗的又一新方法。PRC2(polycomb repressive complex 2)是一种多亚基蛋白的复合物，由EZH1(Enhancer ofzeste homologue 1,KMT6B)或EZH2(Enhancer of zeste homologue 2,KMT6A)、SUZ12(Suppressor of zeste 12)、EED(Embyronic ectoderm development)组成，用于催化H3K27三甲基化。PCR2复合物通过EZH2的SET结构域对核小体蛋白H3K9、27位赖氨酸进行甲基化修饰，然后触发PCR1复合物在特定基因位点聚集从而沉默靶基因(CDKN1C、CDH1、RUNX3等)，促进细胞增殖。研究表明无论EZH2过表达或者发生SET区域突变(Y641F、Y641N、A687V、A677G点突变)都导致H3K27me3的异常升高，促进多种类型肿瘤的生长发展，如乳腺癌、前列腺癌、白血病等。
与通常抑制蛋白酶活性的小分子抑制剂相比，蛋白降解的作用机制提供众多利于药物开发的优点。首先，蛋白降解剂不需要与靶点蛋白的活性位点相结合，因此可以用于靶向传统小分子抑制剂不能靶向的蛋白。其次，传统的小分子抑制剂需要依靠与靶点蛋白的结合才能发挥作用，因此需要药物保持足够的浓度才能维持抑制效果。而蛋白降解剂是靠完成蛋白降解的催化反应来达到抑制效果，在完成一个蛋白靶点的降解后可以与下一个蛋白结合。而且对蛋白功能的抑制效果在新的蛋白合成出来之前不会消失。蛋白降解剂的另一个优势是它可以用于靶向一些作为结构蛋白导致疾病的靶点。通常结构蛋白的功能由于不涉及到酶的活性，难于用小分子抑制剂靶向，而蛋白降解剂可以通过对靶点蛋白的降解来破坏它们的结构功能。
在2019年发表在Nature Chemical Biology的一项研究中，纽约西奈山伊坎医学院(Icahn School of Medicine at Mount Sinai)的金坚教授课题组与Ramon Parsons教授课题组合作，开发出一种靶向EZH2的高效、高选择性蛋白降解剂MS1943。它将靶向EZH2的小分子与一个亲脂性基团结合起来，这个分子与EZH2蛋白结合之后让蛋白的空间折叠构象发生改变，被细胞内检测机制认为是折叠错误的蛋白，从而引发蛋白降解。它在治疗三阴性乳腺癌的体外和动物实验中都表现出良好的活性。
发明内容
本发明涉及一种式(I)所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其具有抑制EZH2酶活性功能，能显著地更有效地治疗EZH2介导的疾病，具有较好的药代动力学特征，对血液系统副作用小，安全性好，具有较好的体外细胞增殖抑制活性，具有EZH1/2双靶点抑制作用。
Figure BDA0003576903750000021
本发明方案一，提供了一种式(I)所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，
Figure BDA0003576903750000022
M选自
Figure BDA0003576903750000023
Figure BDA0003576903750000031
Figure BDA0003576903750000032
表示为单键或者双键；
y选自1或者2；
a选自1、2、3、4或者5；
X、X'各自独立选择CR0、N；
X”选自NRj、-O-、CR0；
R0选自H、氨基、-NHC1-4烷基；
Y1、Y2、Y3各自独立选自O、N、NRj、S或CRk；
Rj选自H、C1-4烷基；
Rk选自H、卤素、C1-4烷基、卤代C1-4烷基；
R11选自H、C1-4烷基、卤代C1-4烷基和卤素；
R12选自卤素、-S-C1-4烷基、-S-C3-7环烷基或者-S-卤代C1-4烷基；
R13选自H、卤素、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷氧基或者氰基；
R14、R15独立地选自H、卤素、C1-4烷基或卤代C1-4烷基；
A为C1-4烷基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、C1-4烷基-OH、C1-4烷基-O-C1-4烷基、C3-10环烷基、4-10元杂环烷基、苯基或者5-6元杂芳基，所述环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳基任选地被1-3个以下基团取代：C1-4烷基、羰基、C1-4烷氧基、氨基、C1-4烷基氨基、卤代C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基、氰基、羟基、卤素、卤代C1-4烷氧基、-C(O)-C1-4烷基、-S(O)2-C1-4烷基、-C1-4烷基-O-卤代C1-4烷基、-C1-4烷基-OC(O)-C1-4烷基、C2-4烯基和C2-4炔基；
L2为键、-NRd1-、-O-、-S-、-S(O)、-S(O)2；
Rd1选自H、C1-4烷基；
R16选自H、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、C3-6环烷基、4-10元杂环烷基、苯基或5-10元杂芳基，所述烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基任选地被1-3个以下基团取代：卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氰基、羰基、卤代C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基、羟基取代的C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、氨基、C1-4烷基氨基、-C(O)-C1-4烷基、-S(O)2-C1-4烷基、-C1-4烷基-O-卤代C1-4烷基、-C1-4烷基-OC(O)-C1-4烷基、C2-4烯基或C2-4炔基；
R21选自卤素、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷氧基、-S-C1-4烷基、-S-C3-7环烷基或者-S-卤代C1-4烷基；
R22、R23各自独立地选自H、卤素、C1-4烷基或卤代C1-4烷基；
R24、R31各自独立选自H、-NR24aR24b、-OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷基、4-10元杂环烷基、苯基、5-10元杂芳基，所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、苯基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：-OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-NR24aR24b；
R24a、R24b各自独立选自H、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C3-6环烷基、4-10元杂环烷基，所述的烷基、环烷基、杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：-OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氨基、-NHC1-4烷基；
或者R24a、R24b一起与氮原子形成4-7元杂环烷基，所形成的杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：卤素、-OH、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O-卤代C1-4烷基、-O-C3-6环烷基；
R41选自R41a或者-C(O)R41a；
R41a选自H、-OH、氨基、-NR24aR24b、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基、C2-8烯基、卤代C2-8烯基、C2-8炔基、卤代C2-8炔基、C3-10环烷基、4-10元杂环烷基，所述的环烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：-OH、氨基、-NR24aR24b、-C(O)-C1-8烷基、-C(O)-卤代C1-8烷基、-C(O)-OC1-8烷基、-C(O)-O-卤代C1-8烷基、-C(O)NH2、-C(O)NHC1-8烷基-C(O)N(C1-8烷基)2、-S(O)-C1-8烷基、-S(O)2-C1-8烷基；
R51选自C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基；
R55选自C3-7环烷基、4-10元杂环烷基、5-12元杂芳基、
Figure BDA0003576903750000051
所述的环烷基、杂环烷基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基、C1-8烷基-OH、卤代C1-8烷基-OH、C1-8烷基-NH2、C1-8烷基-NHRa；
R52选自H、F、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C3-7环烷基、4-10元杂环烷基、5-12元杂芳基；R53选自H、F、C1-8烷基；
L3选自键或者C1-8亚烷基；
R54选自H、F、OH、CN、-NR24aR24b、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C3-7环烷基、4-10元杂环烷基、5-12元杂芳基、-C(O)C1-8烷基、-C(O)OC1-8烷基、-O-C3-7环烷基、-O-(4-10元杂环烷基)、-O-(5-12元杂芳基)，所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：OH、F、CN、氨基、-NR24aR24b、C1-8烷基、C1-8烷氧基、羰基、甲醛基、-C(O)C1-8烷基、3-6元杂环烷基；
R61选自H、卤素、OH、CN、C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷基、卤代C1-8烷氧基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基、C6-10芳基、-C(O)C1-8烷基、-C(O)OC1-8烷基、-NR24aR24b、-C(O)NR24aR24b；
R62、R63、R64各自独立选自H、卤素、OH、CN、C1-8烷基、卤代C1-8烷基；或者R62与R63一起形成4-10元杂环烷基、5-10元杂芳基、C4-10环烷基、C5-10芳基，所述的杂环烷基、杂芳基、环烷基、芳基任选被1-3个以下基团取代：卤素、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基、4-10元杂环烷基；或者
R63与R64一起形成4-10元杂环烷基、5-10元杂芳基、C4-10环烷基、C5-10芳基，所述的杂环烷基、杂芳基、环烷基、芳基任选被1-3个以下基团取代：卤素、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基、4-10元杂环烷基；
R65选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基；
R66选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、-C(O)C1-8烷基、-C(O)OC1-8烷基、C(O)NRdRe、C3-8环烷基、-S(O)2C1-8烷基、-C(O)CH2CN、-C(O)CH2OH、4-10元杂环烷基、4-10元杂芳基，所述的烷基、环烷基、杂环烷基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：卤素、OH、CN、氨基、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基；
R67选自H、CN、卤素、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基、C3-8环烷基或C3-8环烷氧基；
R77选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基；
R76选自Q'-T'-R75；
Q'选自C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、4-8杂环烷基、C3-8环烷基、5-8元芳基、5-8元杂芳基，所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选被1-3个以下取代基取代：卤素、OH、CN、C1-8烷基、卤代C1-8烷基；
T'选自键、-O-、-NHRa、C1-8烷基、-S-，所述的烷基任选被1-3个选自以下基团取代：卤素、OH、CN、C1-8烷基、氨基；
R75选自H、OH、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、NR73R74、C1-8烷氧基、4-8杂环烷基，所述的烷基、烷氧基、杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：卤素、CN、C1-8烷基、NRgRh、4-8杂环烷基、C3-8环烷基；
R72选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、-C(O)C2-8烯基；
R71选自Q-T；
Q选自键或者C1-8烷基；
T选自C1-8烷基、C3-8环烷基、4-8杂环烷基、NRgRh，所述的烷基、环烷基、杂环烷基任选被1-3个以下取代基取代：卤素、OH、CN、C3-8环烷基、-C(O)C1-8烷基、-C(O)C3-8环烷基、-C(O)C2-8烯基、-NRgRh、C1-8烷氧基；
R73、R74各自独立选自H、C1-8烷基、C3-8环烷基、3-10元杂环烷基，所述的烷基、环烷基、杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：C3-8环烷基、OH、氨基、卤素；或者R73、R74与氮原子一起形成3-10元杂环烷基，所述的杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：卤素、OH、羰基、C1-8烷基、-(CH2)n-C3-8环烷基、3-10元杂环烷基、NRgRh；
Rg、Rh各自独立选自H、C1-8烷基、C1-8烷基-OH、-C(O)C1-8烷基；
n选自0、1、2、3、4、5；
R81选自H、C1-8烷基、C1-8烷氧基、-(CH2)n-C3-8环烷基、-(CH2)n-(4-10元杂环烷基)、-(CH2)n-(5-10元芳基)、-(CH2)n-(5-10元杂芳基)、ORw、NRaRb，所述的烷基、-CH2-、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：OH、C1-8烷氧基、NRaRb、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基、NRaRb取代的C3-8环烷基；
Rw选自C1-8烷基、C3-8环烷基、4-10元杂环烷基，所述的烷基、环烷基、杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：C1-8烷基、卤代C1-8烷基、NRaRb；
Ra、Rb各自独立选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、-C(O)C1-8烷基、-C(O)OC1-8烷基、C3-8环烷基、4-10元杂环烷基；
R91选自H、CN、卤素、C1-8烷基、NRaRb、卤代C1-8烷基；
R92选自H、CN、卤素、C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3-8环烷基；
R93选自H、卤素、C1-8烷基、卤代C1-8烷基；
R94选自H或卤素；
C环选自C4-8环烷基、4-10元杂环烷基、5-8元杂芳基、5-8元芳基；
R101各自独立选自H、C1-8烷基、NRaRb、卤代C1-8烷基；
k选自1、2或者3；
R102选自H、C1-8烷基、NRaRb、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基、4-10元杂环烷基，所述的烷基、环烷基、杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：C1-8烷基、卤代C1-8烷基、NRaRb；
N选自键、-O-、-NH-；
L选自Linker链；
CLM选自金刚烷及金刚烷类E3链接酶，在某些实施方案中，CLM选自金刚烷、
Figure BDA0003576903750000071
所述金刚烷任选被1-3个以下基团取代：C1-8烷基、卤代C1-8烷基。
本发明提供一种式(I)所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，在某些实施方案中，M选自
Figure BDA0003576903750000081
进一步，M选自
Figure BDA0003576903750000082
进一步，M选自
Figure BDA0003576903750000091
本发明提供一种式(I)所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，在某些实施方案中，L选自
Figure BDA0003576903750000092
进一步，L选自乙基、丙基、
Figure BDA0003576903750000093
本发明提供一种式(I)所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，在某些实施方案中，CLM选自金刚烷；进一步，CLM选自
Figure BDA0003576903750000094
进一步，CLM选自
Figure BDA0003576903750000095
本发明提供一种式(I)所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，在某些实施方案中，N选自键、-NH-；进一步，N选自键。
方案二，提供了一种式(I)所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，
Figure BDA0003576903750000096
M选自
Figure BDA0003576903750000101
Figure BDA0003576903750000111
Figure BDA0003576903750000112
表示为单键或者双键；
y选自1或者2；
a选自1、2、3、4或者5；
X、X'各自独立选择CR0、N；
X”选自NRj、-O-、CR0；
R0选自H；
Y1、Y2、Y3各自独立选自O、N、NRj或CRk；
Rj选自H、C1-4烷基；
Rk选自H、C1-4烷基；
R11选自H、C1-4烷基；
R12选自-S-C1-4烷基；
R13选自H、卤素、C1-4烷基、卤代C1-4烷基；
R14、R15独立地选自H、C1-4烷基或卤代C1-4烷基；
A为C1-4烷基C3-10环烷基、4-10元杂环烷基，所述环烷基、杂环烷基任选地被1-3个以下基团取代：C1-4烷基、羰基、C1-4烷氧基、氨基、C1-4烷基氨基、卤代C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基、氰基、羟基、卤素、卤代C1-4烷氧基、-C(O)-C1-4烷基、-S(O)2-C1-4烷基、-C1-4烷基-O-卤代C1-4烷基、-C1-4烷基-OC(O)-C1-4烷基、C2-4烯基和C2-4炔基；
L2为键、-NRd1-、-O-、-S-、-S(O)、-S(O)2；
Rd1选自H、C1-4烷基；
R16选自H、C1-4烷基、C3-6环烷基、4-10元杂环烷基、苯基或5-10元杂芳基，所述烷基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基任选地被1-3个以下基团取代：卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氰基、羰基、卤代C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基、羟基取代的C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、氨基、C1-4烷基氨基、-C(O)-C1-4烷基、-S(O)2-C1-4烷基、-C1-4烷基-O-卤代C1-4烷基、-C1-4烷基-OC(O)-C1-4烷基、C2-4烯基或C2-4炔基；
R21选自C1-4烷基、-S-C1-4烷基；
R22、R23各自独立地选自H、卤素、C1-4烷基或卤代C1-4烷基；
R24、R31各自独立选自H、-NR24aR24b、-OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷基、4-10元杂环烷基、苯基、5-10元杂芳基，所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、苯基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：-OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-NR24aR24b；
R24a、R24b各自独立选自H、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C3-6环烷基、4-10元杂环烷基，所述的烷基、环烷基、杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：-OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氨基、-NHC1-4烷基；
R51选自C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基；
R55选自C3-7环烷基、4-10元杂环烷基、5-12元杂芳基、
Figure BDA0003576903750000121
所述的环烷基、杂环烷基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基、C1-8烷基-OH、卤代C1-8烷基-OH、C1-8烷基-NH2、C1-8烷基-NHRa；
R52选自H、F、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C3-7环烷基、4-10元杂环烷基、5-12元杂芳基；R53选自H、F、C1-8烷基；
L3选自键或者C1-8亚烷基；
R54选自H、F、OH、CN、-NR24aR24b、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C3-7环烷基、4-10元杂环烷基、5-12元杂芳基、-C(O)C1-8烷基、-C(O)OC1-8烷基、-O-C3-7环烷基、-O-(4-10元杂环烷基)、-O-(5-12元杂芳基)，所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：OH、F、CN、氨基、-NR24aR24b、C1-8烷基、C1-8烷氧基、羰基、甲醛基、-C(O)C1-8烷基、3-6元杂环烷基；
R61选自C1-8烷基、C1-8烷氧基；
R62、R63、R64各自独立选自H、卤素、C1-8烷基、卤代C1-8烷基；或者
R62与R63一起形成4-10元杂环烷基、5-10元杂芳基，所述的杂环烷基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：卤素、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基、4-10元杂环烷基；或者
R63与R64一起形成4-10元杂环烷基、5-10元杂芳基、C4-10环烷基、C5-10芳基，所述的杂环烷基、杂芳基、环烷基、芳基任选被1-3个以下基团取代：卤素、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基、4-10元杂环烷基；
R65选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基；
R66选自H、4-10元杂环烷基、4-10元杂芳基，所述的杂环烷基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：卤素、OH、CN、氨基、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基；
R67选自H、C1-8烷基；
R77选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基；
R76选自Q'-T'-R75；
Q'选自C2-8炔基、5-8元芳基、5-8元杂芳基，所述的炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选被1-3个以下取代基取代：卤素、OH、CN、C1-8烷基、卤代C1-8烷基；
T'选自键、-O-、-NHRa、C1-8烷基，所述的烷基任选被1-3个选自以下基团取代：卤素、OH、CN、C1-8烷基、氨基；
R75选自H、OH、C1-8烷基、NR73R74、4-8杂环烷基，所述的烷基、杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：卤素、CN、C1-8烷基、NRgRh、4-8杂环烷基、C3-8环烷基；
R72选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、-C(O)C2-8烯基；
R71选自Q-T；
Q选自键；
T选自C3-8环烷基、4-8杂环烷基、NRgRh，所述的环烷基、杂环烷基任选被1-3个以下取代基取代：卤素、OH、CN、C3-8环烷基、-C(O)C1-8烷基、-C(O)C3-8环烷基、-C(O)C2-8烯基、-NRgRh、C1-8烷氧基；
R73、R74各自独立选自H、C1-8烷基，所述的烷基任选被1-3个以下基团取代：C3-8环烷基、OH、氨基、卤素；
Rg、Rh各自独立选自H、C1-8烷基；
n选自0、1、2、3、4、5；
R81选自-(CH2)n-C3-8环烷基、-(CH2)n-(4-10元杂环烷基)、-(CH2)n-(5-10元芳基)、-
(CH2)n-(5-10元杂芳基)，所述的-CH2-、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：OH、C1-8烷氧基、NRaRb、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基、NRaRb取代的C3-8环烷基；
Ra、Rb各自独立选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、-C(O)C1-8烷基、-C(O)OC1-8烷基、C3-8环烷基、4-10元杂环烷基；
R91选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基；
R92选自H、CN、卤素、C1-8烷基；
R93选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基；
R94选自H或卤素；
C环选自C4-8环烷基、4-10元杂环烷基、5-8元杂芳基、5-8元芳基；
R101各自独立选自H、C1-8烷基；
k选自1、2或者3；
R102选自4-10元杂环烷基，所述的杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：C1-8烷基、卤代C1-8烷基、NRaRb；
N选自键、-O-、-NH-；
L选自Linker链；
CLM选自金刚烷、
Figure BDA0003576903750000141
所述金刚烷任选被1-3个以下基团取代：C1-8烷基、卤代C1-8烷基。
发明方案三，涉及所述的式(I)化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，
L选自
Figure BDA0003576903750000151
m、m'、n'、n”、o各自独立为0-15的整数；
V各自独立选自O、NR1；
R1选自H、C1-4烷基；
R2选自C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、NR1、-C(O)NR1-、C3-8环烷基、
4-8元杂环烷基、5-6元杂芳基；
其他基团定义与发明方案一一致。
在某些实施方案中，其他基团定义与发明方案二一致。
方案四，涉及式(I)化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
L选自键、乙基、丙基、
Figure BDA0003576903750000161
其他基团定义与发明方案一、二或者三一致。
在某些实施方案中，其他基团定义与发明方案二一致。
在某些实施方案中，其他基团定义与发明方案三一致。
方案五，涉及(I)化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
CLM选自
Figure BDA0003576903750000162
金刚烷、C1-6烷基取代的金刚烷；
其他基团定义与方案一一致。
在某些实施方案中，其他基团定义与发明方案二一致。
在某些实施方案中，其他基团定义与发明方案三一致。
在某些实施方案中，其他基团定义与发明方案四一致。
方案六，涉及式(I)化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
CLM选自
Figure BDA0003576903750000163
或者
Figure BDA0003576903750000164
其他基团定义与方案一、二、三、四或者五一致。
在某些实施方案中，其他基团定义与发明方案二一致。
在某些实施方案中，其他基团定义与发明方案三一致。
在某些实施方案中，其他基团定义与发明方案四一致。
在某些实施方案中，其他基团定义与发明方案五一致。
方案七，涉及式(I)化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，M选自
Figure BDA0003576903750000171
Figure BDA0003576903750000181
Figure BDA0003576903750000182
或者
M选自
Figure BDA0003576903750000191
Figure BDA0003576903750000201
其他基团定义与方案一一致。
在某些实施方案中，其他基团定义与发明方案二一致。
在某些实施方案中，其他基团定义与发明方案三一致。
在某些实施方案中，其他基团定义与发明方案四一致。
在某些实施方案中，其他基团定义与发明方案五一致。
在某些实施方案中，其他基团定义与发明方案六一致。
方案八，公开式(I)化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，所述化合物选自以下结构之一，
Figure BDA0003576903750000211
Figure BDA0003576903750000221
Figure BDA0003576903750000231
Figure BDA0003576903750000241
Figure BDA0003576903750000251
Figure BDA0003576903750000261
Figure BDA0003576903750000271
作为又一方面，本发明提供了一种药物组合物，其含有本文所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，以及药学上可接受的辅料和/或载体。
此外，本发明还提供了本文所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，或者前述组合物在制备治疗EZH2介导的疾病的药物中的用途；以及
前述任一技术方案所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，或者前述组合物在治疗EZH2介导的疾病中的用途。
前述用途中，所述EZH2介导的疾病为肿瘤或自身免疫疾病。
合成路线
专利文献CN110167924A中介绍了一类EZH2抑制剂的制备方法，本领域技术人员可以结合该文献以及已知的有机合成技术制备本发明的化合物，其起始原料为市售化学品和(或)化学文献中所述的化合物。“市售化学品”是从正规商业来源获得的，供应商包括：泰坦科技、安耐吉化学、上海德默、成都科龙化工、韶远化学科技、南京药石、药明康德和百灵威科技等公司。
本领域的参考书和专著，详细介绍了可用于制备本文所述化合物的反应物的合成，或提供了描述该制备方法的文章以供参考。这些参考书和专著包括：“SyntheticOrganic Chemistry”,John Wiley&Sons,Inc.,New York；S.R.Sandler et al.,“OrganicFunctional Group Preparations,”2nd Ed.,Academic Press,New York,1983；H.O.House,“Modern Synthetic Reactions”,2nd Ed.,W.A.Benjamin,Inc.Menlo Park,Calif.1972；T.L.Gilchrist,“Heterocyclic Chemistry”,2nd Ed.,John Wiley&Sons,NewYork,1992；J.March,“Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms andStructure”,4th Ed.,Wiley-Interscience,New York,1992；Fuhrhop,J.and Penzlin G.“Organic Synthesis:Concepts,Methods,Starting Materials”,Second,Revised andEnlarged Edition(1994)John Wiley&Sons ISBN:3-527-29074-5；Hoffman,R.V.“OrganicChemistry,An Intermediate Text”(1996)Oxford University Press,ISBN 0-19-509618-5；Larock,R.C.“Comprehensive Organic Transformations:A Guide toFunctional Group Preparations”2nd Edition(1999)Wiley-VCH,ISBN:0-471-19031-4；March,J.“Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure”4thEdition(1992)John Wiley&Sons,ISBN:0-471-60180-2；Otera,J.(editor)“ModernCarbonyl Chemistry”(2000)Wiley-VCH,ISBN:3-527-29871-1；Patai,S.“Patai’s1992Guide to the Chemistry of Functional Groups”(1992)Interscience ISBN:0-471-93022-9；Solomons,T.W.G.“Organic Chemistry”7th Edition(2000)John Wiley&Sons,ISBN:0-471-19095-0；Stowell,J.C.,“Intermediate Organic Chemistry”2ndEdition(1993)Wiley-Interscience,ISBN:0-471-57456-2；“Industrial OrganicChemicals:Starting Materials and Intermediates:An Ullmann’s Encyclopedia”(1999)John Wiley&Sons,ISBN:3-527-29645-X,in 8volumes；“Organic Reactions”(1942-2000)John Wiley&Sons,in over 55volumes；and“Chemistry of FunctionalGroups”John Wiley&Sons,in 73volumes.
通过美国化学会化学文摘社制备的已知化学物质的索引，可以选择性地识别特定和类似的反应物，这些索引可在大多数公共图书馆和大学图书馆以及在线获得。已知但在目录中不可商购的化学品可选地由定制化学合成工厂制备，其中许多标准化学供应工厂(例如，上面列出的那些)提供定制合成服务。制备和选择本文所述化合物的药用盐的参考文献是P.H.Stahl&C.G.Wermuth“Handbook of Pharmaceutical Salts”,VerlagHelvetica Chimica Acta,Zurich,2002.
术语
在本发明未特殊说明的情况下，本发明的术语具有以下含义：
“卤素”在本文中是指F、Cl、Br、I、或者它们的同位素。
“卤代”或“卤素取代”是指被一个以上选自F、Cl、Br、I、或者它们的同位素取代，卤素取代基数量的上限等于被取代基团可被取代的氢数之和，在未作特殊限定下，卤素取代基数量为1至该上限之间的任意整数，当卤素取代基数量大于1时，可以是相同或不同的卤素进行取代。
“烷基”是指一价的直链或支链饱和脂肪族烃基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、新丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基及其各种支链异构体；所述的烷基可以进一步被任意取代基取代。
“氘代”是指烷基、环烷基、亚烷基、芳基、杂芳基、烯基、炔基等基团上的氢原子被至少一个同位素氘取代的情形，氘代的数量上限等于被取代基团可被取代的氢数之和，在未作特殊限定下，氘代数量为1至该上限之间的任意整数，优选1-20个氘原子取代，更优选为1-10个氘原子取代，更优选为1-6个氘原子取代，进一步优选为1-3个氘原子取代。
“环烷基”是指一价饱和的、不饱和的非芳香环的碳环烃基，可以是单环、双环、螺环、桥环、并环，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、
Figure BDA0003576903750000291
Figure BDA0003576903750000292
等。所述的环烷基可以任选进一步被任意取代基所取代。
“杂环烷基”是指取代或未取代、饱和或不饱和的非芳香环，未特殊限定时，包含1至3个选自N、O、P或S的杂原子，可以是单环、双环、桥环、并环、螺环，未特殊限定时，为3至12元杂环，更优选为4-12元杂环，更优选为4-10元杂环。杂环基的环中选择性取代的N、S、P可被氧化成各种氧化态。非限制性实施例包括杂环丙基、氧杂环丙基、硫杂环丙基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶、氧杂环丁基、氧杂环戊基、氧杂环己基、硫杂环丁基、吡咯烷基、吡唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、氮杂金刚烷基和氧杂螺[3.3]庚烷基、
Figure BDA0003576903750000293
Figure BDA0003576903750000294
等。所述的杂环烷基可以任选进一步被任意取代基所取代。
“芳基”是指取代的或未取代的5至15元具有芳香性的碳环，包括单环芳香基和稠环芳香基。优选5至10元芳香环，进一步优选5至8元芳香环，其非限制性实例包括苯基、萘基、蒽基和菲基等。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环烷基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实施例包含：
Figure BDA0003576903750000295
所述的芳基可以任选进一步被任意取代基所取代。
“杂芳基”是指取代或未取代的5至15元的具有芳香性的环，且含有1至5个选自N、O或S杂原子及其杂原子各种氧化形式，优选5至10元杂芳香环，进一步优选5至8元。杂芳基的非限制性实施例包括但不限于吡咯基、呋喃基、恶唑基、噻唑基、吡唑基、异恶唑基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、哌啶基、吗啉、硫代吗啉、1,3-二噻烷、苯并咪唑、哌叮基、苯并咪唑、苯并吡啶、吡咯并吡啶等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环烷基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包含
Figure BDA0003576903750000301
所述的杂芳基可以任选进一步被任意取代基所取代。
“炔基”是指直链或支链的、含有一个以上碳碳三键的一价不饱和烃基，除非特殊说明，炔基含有2-6个碳原子，优选含有2-4个碳原子，非限制性地的实施例为乙炔基、丙炔基、炔丙基等。
“烯基”是指直链或支链的、含有一个以上碳碳双键的一价不饱和烃基，除非特殊说明，炔基含有2-6个碳原子，优选含有2-4个碳原子，非限制性地的实施例为乙烯基、丙烯基、烯丙基、2-丁烯基、1-丁烯基等。
“烷氧基”或“烷基氧基”是指-O-烷基。非限制性实施例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基、环丙氧基和环丁氧基等。
“卤代烷氧基”是指-O-卤代烷基。非限制性实施例包括一氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、二氟乙基氧基等。
“烷基氨基”或“烷氨基”是指被单个或两个烷基取代的氨基，也写作-N-(烷基)2或-NH-烷基，后者也写作单烷基氨基。非限制实施例包括二甲氨基、单甲基氨基、二乙氨基、单乙氨基等。
“任选”或“任选地”是指随后所描述的事件或环境可以但不必须发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。如：“任选被F取代的烷基”指烷基可以但不必须被F取代，说明包括烷基被F取代的情形和烷基不被F取代的情形。
“药学上可接受的盐”是指本发明化合物保持游离酸或者游离碱的生物有效性和特性，且所述的游离酸通过与无毒的无机碱或者有机碱，所述的游离碱通过与无毒的无机酸或者有机酸反应获得的盐。
“药物组合物”表示一种或多种本文所述化合物或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，与其他组成成分的混合物，其中其他组分包含生理学/药学上可接受的载体和/赋形剂。
“载体”指的是：不会对生物体产生明显刺激且不会消除所给予化合物的生物活性和特性，并能改变药物进入人体的方式和在体内的分布、控制药物的释放速度并将药物输送到靶向器官的体系，非限制性的实例包括微囊与微球、纳米粒、脂质体等。
“赋形剂”指的是：其本身并非治疗剂，用作稀释剂、辅料、粘合剂和/或媒介物，用于添加至药物组合物中以改善其处置或储存性质或允许或促进化合物或药物组合物形成用于给药的单位剂型。如本领域技术人员所已知的，药用赋形剂可提供各种功能且可描述为润湿剂、缓冲剂、助悬剂、润滑剂、乳化剂、崩解剂、吸收剂、防腐剂、表面活性剂、着色剂、矫味剂及甜味剂。药用赋形剂的实例包括但不限于：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉及马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、乙酸纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、微晶纤维素及交联羧甲基纤维素(例如交联羧甲基纤维素钠)；(4)黄蓍胶粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂及栓剂蜡；(9)油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油及大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇及聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁及氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格溶液(Ringer’s solution)；(19)乙醇；(20)pH缓冲溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯和/或聚酐；及(22)其他用于药物制剂中的无毒相容物质。
“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。
“溶剂化物”指本发明化合物或其盐与分子间非共价力结合的化学计量或非化学计量的溶剂形成的物质。当溶剂为水时，则为水合物。
“共晶”是指活性药物成分(API)和共晶形成物(CCF)在氢键或其他非共价键的作用下结合而成的晶体，其中API和CCF的纯态在室温下均为固体，并且各组分间存在固定的化学计量比。共晶是一种多组分晶体，既包含两种中性固体之间形成的二元共晶，也包含中性固体与盐或溶剂化物形成的多元共晶。
具体实施方式
以下将通过实施例对本发明的内容进行详细描述。实施例中未注明具体条件的，按照常规条件的实验方法进行。所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不能理解为本发明的内容仅限于所举实例。本领域常规技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
测试方法
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或(和)质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用(Bruker Avance III 400和Bruker Avance 300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)；
MS的测定用(Agilent 6120B(ESI)和Agilent 6120B(APCI))；
HPLC的测定使用Agilent 1260DAD高压液相色谱仪(Zorbax SB-C18 100×4.6mm,3.5μM)；
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm-0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm-0.5mm；
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200-300目硅胶为载体。
中间体1
甲基(R)-2-甲基-1-(1-(4-氧环己基)乙基)-1H-吲哚-3-羧酸酯
methyl(R)-2-methyl-1-(1-(4-oxocyclohexyl)ethyl)-1H-indole-3-carboxylate
Figure BDA0003576903750000321
第一步：(1R)-N-(1-(1,4-二氧杂螺[4.5]葵烷-8-基)乙基)-1-苄基乙基-1-胺(1R)-N-(1-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-yl)ethyl)-1-phenylethan-1-amine
在250mL的单口瓶中加入底物1a(8.0g,43.4mmol),二氯甲烷(100mL)溶解，加入R-甲基苯乙胺(5.3g,43.4mmol)、乙酸(1.3g,21.7mmol)，室温搅拌0.5h，加入NaBH(OAc)3(11.5g,54.3mmol)，室温搅拌过夜。加水淬灭，饱和碳酸氢钠调节pH到8-9，DCM(2×100mL)萃取，合并后的有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后，柱层析(DCM：MeOH＝10：1)得无色油状物1b(11.0g，收率87.5％)。
LC-MS(ESI):m/z＝290.3[M+H]+.
第二步：1-(1,4-二氧杂螺[4.5]葵烷-8-基)乙基-1-胺
1-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-yl)ethan-1-amine
在250mL的单口瓶中加入底物1b(8.0g,27.6mmol),甲醇(80mL)溶解，加入钯碳(8.0g,10％)，氢气置换三次，保持20atm室温搅拌过夜，经硅藻土抽滤，将滤液浓缩得白色固体1c(3.7g，收率72％)。
LC-MS(ESI):m/z＝186.3[M+H]+.
第三步：甲基(Z)-3-((1-(1,4-二氧杂螺[4.5]葵烷-8-基)乙基)亚氨基)-2-(2-溴苯基)丁酸甲酯methyl(Z)-3-((1-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-yl)ethyl)imino)-2-(2-bromophenyl)butanoate
在100mL的单口瓶中加入底物1c(2.5g,13.5mmol),叔丁醇(50mL)溶解，加入甲基2-(2-溴苯基)-3-氧代丁酸甲酯(4.0g,14.8mmol)、乙酸(1.1g,17.5mmol)，85℃搅拌过夜。反应液浓缩后加入二氯甲烷(50mL)溶解，饱和碳酸氢钠溶液洗涤至碱性，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析分离(PE：EA＝5：1)得无色油状物1e(2.7g，收率46％)。
LC-MS(ESI):m/z＝438.2[M+H]+.
第四步：甲基(R)-1-(1-(1,4-二氧杂螺[4.5]葵烷-8-)乙基l)-2-甲基1H-吲哚-3-羧酸酯
methyl(R)-1-(1-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-yl)ethyl)-2-methyl-1H-indole-3-carboxylate
在100mL的单口瓶中加入底物1e(2.5g,5.7mmol),二氧六环(25mL)溶解，加入甲醇钠(0.46g,8.6mmol)、Ruphos(0.53g,1.1mmol)、Ruphos-G2*(0.89g,1.1mmol)，氮气保护中，100℃搅拌5h。反应液经硅藻土过滤，滤液用水(30mL)稀释，EA(30mL×2)萃取，合并后的有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析分离(PE：EA＝4：1)得2.4g黄色固体，经手性制备(手性制备条件：仪器:MGⅡpreparative SFC(SFC-14)，色谱柱:ChiralPak AY,250×30mm I.D.,5μm，流动相:A for CO2 and B for Ethanol，流动相:B30％，流速:60mL/min，背压:100bar，柱温:38℃，波长:254nm,周期:11min)得R构型产物1f-1(峰2，保留时间：4.25min，1.6g，黄色固体)和1f-2(峰1，保留时间：3.01min，0.4g)。
LC-MS(ESI):m/z＝358.2[M+H]+.
第五步：甲基(R)-2-甲基-1-(1-(4-氧环己基)乙基)-1H-吲哚-3-羧酸酯
methyl(R)-2-methyl-1-(1-(4-oxocyclohexyl)ethyl)-1H-indole-3-carboxylate
在100mL的单口瓶中加入底物1f-1(1.6g,4.5mmol),THF(16mL)溶解，加入HCl(6M,16mL)，室温搅拌48h，反应液用饱和碳酸氢钠调节pH到8-9，DCM(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色固体中间体1(1.2g，收率86％)。
LC-MS(ESI):m/z＝314.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.22–8.15(d,1H),7.55(d,1H),7.30–7.16(m,2H),4.23(m,1H),3.94(s,3H),2.78(s,3H),2.56–2.35(m,3H),2.26–2.11(m,2H),1.74(s,3H),1.67–1.54(m,1H),1.42–1.22(m,3H).
中间体2
3-(甲胺基)-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-2(1H)-酮
3-(aminomethyl)-6-methyl-4-(methylthio)pyridin-2(1H)-one
Figure BDA0003576903750000341
中间体2参考专利WO2019094552方法制备。
中间体3
(R)-2-甲基-1-(1-(4-氧环己基)乙基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-羧酸乙酯
Ethyl(R)-2-methyl-1-(1-(4-oxocyclohexyl)ethyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxylate
Figure BDA0003576903750000342
第一步：
在250mL的单口瓶中加入底物3a(8.0g,43.4mmol),二氯甲烷(100mL)溶解，加入R-甲基苯乙胺(5.3g,43.4mmol)、乙酸(1.3g,21.7mmol)，室温搅拌0.5h，加入NaBH(OAc)3(11.5g,54.3mmol)，室温搅拌过夜。加水淬灭，饱和碳酸氢钠调节pH到8-9，DCM(2×100mL)萃取，合并后的有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后，柱层析(DCM：MeOH＝10：1)得无色油状物3b(11.0g，收率87.5％)。
LC-MS(ESI):m/z＝290.3[M+H]+.
第二步：
在250mL的单口瓶中加入底物3b(8.0g,27.6mmol),甲醇(80mL)溶解，加入钯碳(8.0g,10％)，氢气置换三次，保持20atm室温搅拌过夜，经硅藻土抽滤，将滤液浓缩得白色固体3c(3.7g，收率72％)。
LC-MS(ESI):m/z＝186.3[M+H]+.
第三步：
将原料3c(105g,0.57mol)溶解于1L的DMSO溶液中，然后加入3-溴-2-氟吡啶(100g,0.57mol)以及碳酸钾(157.3g,1.14mol)，升温至100℃下搅拌6小时，TLC监测反应完全。待反应冷至室温，加入1L水，混合液用乙酸乙酯萃取(1LⅩ3)，合并后的有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析(PE：EA＝5：2)分离得到黄色油状物3e(58g)收率31.5％.
LC-MS(ESI):m/z＝342.2[M+H]+.
第四步：
将原料3e(58g,0.17mol)溶解于250mL的DMF溶液中，然后加入乙酰乙酸乙酯
(114.6g,0.88mol),2-吡啶酸(10.43g,0.08mol)，以及碳酸铯(110.6g,0.34mol)碘化亚铜(16.1g,0.08mol),碘化钾(42.2g,0.25mol),氮气保护，100℃的条件下搅拌过夜，TLC监测原料反应完全。待反应冷至室温，反应液经硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，向滤液中加入500mL水，所得混合液用乙酸乙酯(500mLⅩ3)萃取，合并后的有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后，柱层析分离得到消旋体，经手性制备分离得到黄色胶状物3g-1(24g),收率38.1％。
手性制备条件：仪器:MGⅡpreparative SFC(SFC-14)，色谱柱:ChiralCel OD,250×30mm I.D.,5μm，流动相:流动相体系：二氧化碳/甲醇＝75/25(v)(0.1％NH3.H2O),流量60mL/min，得到化合物3g-1(出峰时间约为2.873min),化合物3g-2(出峰时间约为3.345min)
LC-MS(ESI):m/z＝373.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.53-8.61(m,1H),8.24-8.27(m,1H),7.30-7.46(m,1H),4.22-4.27(m,2H),3.93-4.08(m,5H),2.47(s,3H),1.57-1.65(m,3H),1.42-1.47(m,8H),1.24-1.28(m,4H).
第五步：
在100mL的单口瓶中加入底物3g-1(1.6g,4.5mmol),THF(16mL)溶解，加入HCl(6M,16mL)，室温搅拌48h，反应液用饱和碳酸氢钠调节PH到8-9，DCM(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色固体中间体3(1.2g，收率86％)。
LC-MS(ESI):m/z＝329.2[M+H]+.
中间体4和中间体5
7-氯-2,4-二甲基-2-(4-羰基环己烷)苯并[d][1,3]二噁烷-5-羧酸甲酯
methyl 7-chloro-2,4-dimethyl-2-(4-oxocyclohexyl)benzo[d][1,3]dioxole-5-carboxylate
Figure BDA0003576903750000361
第一步：
将3,4-二羟基-2-甲基苯甲酸甲酯(5.11g,27.9mmol)溶于四氢呋喃(200mL)。-20℃下，缓慢滴加磺酰氯(2.45mL，30.6mmol)，滴加完毕后，继续在-20℃下搅拌3h。TLC监测反应完成后，用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭反应，残余物用乙酸乙酯萃取(25mLⅩ3)。有机相用饱和食盐水反洗(25mL)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析(PE：EA＝5：1)分离得到化合物4b(4.12g,68％)。
LC-MS(ESI):m/z＝217.1[M+H]+.
第二步：
依次将5-氯-3,4-二羟基-2-甲基苯甲酸甲酯(1.2g，5.53mmol)，十二羰基三钌(176mg,0.28mmol)，三苯基磷(145mg,0.55mmol)溶于甲苯(8.1mL)。氮气保护下加热回流半小时。将4-乙炔基环己基-1-酮(1.34g,11mmol)溶于甲苯(17mL)加入到反应体系中，回流搅拌23h。反应完成后，待反应体系冷却至室温，减压浓缩后柱层析(PE：EA＝5：2)分离得到化合物4d(1.33g,70％)。
LC-MS(ESI):m/z＝361.1[M+H]+.
第三步：
将化合物4d经手性制备HPLC分离得到中间体4和中间体5。手性制备分离条件：制备仪器Waters UPCC with PDA Detector，制备柱Chiralpak AY-3 150×4.6mm I.D.,3um，流动相体系：A:CO2；B:isopropanol(0.05％DEA)，出峰位置：中间体4：2.871min，中间体5：2.904min。
LC-MS(ESI):m/z＝361.1[M+H]+.
实施例1
1-(1-(1-(2-((3r,5r,7r)-金刚烷-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-羧酰胺(化合物1)
1-(1-(1-(2-((3r,5r,7r)-adamantan-1-yl)acetyl)piperidin-4-yl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-indole-3-carboxamide
Figure BDA0003576903750000371
第一步:
将化合物1A(15.0g，66.08mmol)溶于无水乙醇中(150mL)，加入醋酸铵(25.0g,330.4mmol),冰醇酸(1mL),醋酸硼氢化钠(28.0g,132.16mmol),室温搅拌过夜。加水淬灭，减压浓缩去掉有机溶剂，用乙酸乙酯：石油醚＝1:1萃取一次，水相用饱和碳酸钠水溶液调节pH＝7-8，然后用二氯甲烷萃取5次，合并后的有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩有机相得到1B(5.6g,38％)。
LC-MS(ESI):m/z＝229[M+H]+.
第二步：
将化合物1B(5.6g，24.56mmol)溶于叔丁醇(100mL)中，加入2-(2-溴苯基)-3-氧代丁酸甲酯(6.6g，24.56mmol)，冰醋酸(4.4g,73.68mmol)。100℃搅拌48h，减压浓缩后用硅胶柱层析(PE：EA＝5：3)分离提纯后，得到1C(3.6g，40％)。
LC-MS(ESI):m/z＝481[M+H]+.
第三步：
将化合物1C(3.5g，7.3mmol)溶解于二氧六环(50mL)，加入氯(2-二环己基膦基-2',6'-二-异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(RUPHOS PD G2)(567mg,0.73mmol),甲醇钠(591mg，10.95mmol),氮气保护，100℃下反应6h。加水淬灭后用乙酸乙酯萃取3次，合并后的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品化合物，用硅胶柱层析(PE：EA＝5：4)分离提纯后，得到化合物1D(2.2g,75％)
LC-MS(ESI):m/z＝401[M+H]+.
第四步：
将化合物1D(2.2g，5.5mmol)溶解于甲醇(20mL)中并加入氢氧化钠溶液水(氢氧化钠1.1g，27.5mmol；20mL水)，70℃反应过夜。减压浓缩除去有机溶剂，用稀盐酸(2N)调节pH＝4～5,然后用乙酸乙酯萃取3次,合并后的有机相用无水硫酸钠干燥,减压浓缩后得到化合物1E(1.8g,84％)
LC-MS(ESI):m/z＝387[M+H]+.
第五步：
将化合物1E(1.8g，4.7mmol)溶于二甲基甲酰胺(30mL)，依次加入HOBT(770mg，5.7mmol)，EDCI(1.1g,5.7mmol),中间体2(1.03g,4.7mmol)和三乙胺(1.42g,14.1mmol)，室温下搅拌4h。加水淬灭，用乙酸乙酯萃取3次，合并后的有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后，得到粗品化合物，用硅胶柱层析(PE：EA＝1：1)分离提纯，得到化合物1F(1.6g,61％)
LC-MS(ESI):m/z＝553[M+H]+.
第六步：
向化合物1F(1.6g，2.9mmol)中加入HCl的二氧六环溶液(4N)，室温下搅拌2h。浓缩得到得到到化合物1G(1.4g,100％)
LC-MS(ESI):m/z＝453[M+H]+.
第七步：
向2-((3r，5r，7r)-金刚烷-1-基)乙酸(84mg，0.43mmol)中依次加入DMF(10mL)，HOBT(68mg,0.5mmol),EDCI(100mg，0.5mmol),化合物1G(160mg,0.33mmol)和三乙胺(152mg，1.5mmol)，室温下搅拌4h。加水淬灭，用乙酸乙酯萃取3次，合并后的有机相用水洗一次，饱和食盐水洗1次，干燥，浓缩，得到粗品化合物，用硅胶柱层析(PE：EA＝1：1)分离提纯后，进一步通过手性制备HPLC分离得到化合物1，异构体1(20mg,10％)和化合物1，异构体2(20mg，10％)。
手性HPLC分离制备条件：仪器:MGⅡpreparative SFC(SFC-14)；柱型:ChiralPakAS,250×30mm I.D.,10μm；流动相:A为CO2，B为乙醇；梯度:B 50％；流速:80mL/min；背压:100bar；柱温:38℃；柱长:220nm；时间周期:～9min；样品制备:120mg化合物溶于15mL二氯和甲醇的混合溶剂中；进样:3.6mL/次.
化合物1，异构体1：
LC-MS(ESI):m/z＝629[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.64(s,1H),7.79-7.69(m,1H),7.66-7.51(m,2H),7.17-6.96(m,2H),6.12(s,1H),4.61-4.44(m,1H),4.45-4.36(m,2H),4.31-4.01(m,2H),3.87-3.59(m,1H),3.10-2.86(m,1H),2.75-2.65(m,1H),2.65-2.52(m,3H),2.48(s,3H),2.23-2.14(m,4H),2.10-1.82(m,6H),1.68-1.45(m,15H),1.29-1.16(m,1H),0.93-0.67(m,2H).
化合物1，异构体2：
LC-MS(ESI):m/z＝629[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.64(s,1H),7.77-7.71(m,1H),7.65-7.56(m,2H),7.13-6.95(m,2H),6.12(s,1H),4.61-4.48(m,1H),4.45-4.35(m,2H),4.31-4.00(m,2H),3.97-3.62(m,1H),3.11-2.94(m,1H),2.74-2.63(m,1H),2.61-2.51(m,3H),2.48(s,3H),2.23-2.13(m,4H),2.09-1.84(m,6H),1.67-1.49(m,15H),1.27-1.12(m,1H),0.95-0.68(m,2H).
实施例2
5-(2-((3R,5R,7R)-金刚烷-1-基)乙酰氨基)-1-((1R)-1-(4-((3,3-二氟环丁基)氨基)环己基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-羧酰胺(化合物2)
(5-(2-((3R,5R,7R)-adamantan-1-yl)acetamido)-1-((1R)-1-(4-((3,3-difluorocyclobutyl)amino)cyclohexyl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-indole-3-carboxamide
Figure BDA0003576903750000391
第一步：
零下20摄氏度下，将化合物2A(1g,4.37mmol)溶于浓硫酸(5mL)，向其中再加入浓硝酸(1mL)，在该温度下反应半小时。将反应体系倾倒于大量冰中，乙酸乙酯(50mL×2)萃取有机相，合并有机相并用碳酸氢钠中和有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后得到化合物2B(1.1g,92％)。
LC-MS(ESI):m/z＝275.08[M+H]+.
第二步：
氮气保护下，化合物2B(1.1g,4.01mmol)溶于无水四氢呋喃(10mL)，降温-78℃后加入LHMDS(6mL，1M)，半个小时后，再加入1-乙酰基咪唑(573.4mg,5.21mmol)，升温至室温反应两个小时后加入冰水(10mL)淬灭反应，乙酸乙酯(50mL×2)萃取两次，合并后的有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析(PE：EA＝3：1)分离得到化合物2C(180mg,82％)。
LC-MS(ESI):m/z＝316.1[M+H]+.
第三步：
将化合物2C(1g,3.16mmol)溶于叔丁醇(10mL)，依次向其中加入中间体1c(570mg,3.08mmol)和醋酸(1mL)，90℃反应过夜。旋干溶剂所得粗产物经柱层析(PE：EA＝3：2)分离得到2D(890mg,58％)。
LC-MS(ESI):m/z＝484.4[M+H]+.
第四步：
化合物2D(15.0g,37.31mmol)溶于二氧六环(150mL)，依次向其中加入Ru-Phos(3.5g,7.46mmol)，甲醇钠(2.5g,74.62mmol)以及G2钯(2.9g,3.73mmol)，氮气保护下，升温至80℃反应过夜。待反应冷至室温，向其中加入水(40mL),乙酸乙酯(50mL×2)萃取两次，合并后的有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析(PE：EA＝3：2)分离得到化合物2E(11.0mg,88％)。
LC-MS(ESI):m/z＝403.2[M+H]+.
第五步：
化合物2E(1.0g,2.49mmol)溶于四氢呋喃(10mL)，向其中加入盐酸溶液(10mL，6M)，室温反应过夜。将反应液倒入水(40mL)中，乙酸乙酯(50mL×2)萃取两次，合并后的有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析(PE：EA＝3：2)分离得到化合物2F(700mg,80％)。
LC-MS(ESI):m/z＝359.4[M+H]+.
第六步：
化合物2F(700mg,1.96mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，向其中加入醋酸(1mL)，3,3-二氟环丁胺盐酸盐(1.0g,2.94mmol)，室温反应过夜。向其中加入醋酸硼氢化钠(963mg,2.94mmol)，搅拌1小时。加水淬灭反应，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析(PE：EA＝2：1)分离得到化合物2G(810mg,90％)。LC-MS(ESI):m/z＝450.5[M+H]+.
第七步：
化合物2G(810mg,1.81mmol)溶于四氢呋喃(5mL)、水(5mL)和甲醇(5mL)，向其中加入氢氧化钾(244mg，18.1mmol)，升温回流反应过夜。加水淬灭反应，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后得到化合物2H粗品(1g)。
LC-MS(ESI):m/z＝436.5[M+H]+.
第八步:
化合物2H粗品(1g)溶于二氯甲烷(5mL)，向其中加入DIPEA(294mg，3.62mmol)和HATU(264mg，2.43mmol)，反应十分钟后，再向其中加入中间体2(420mg,2.43mmol)，室温反应一个小时。向其中加入水(50mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析(PE：EA＝1：1)分离得到化合物2I(780mg,72％for two steps)。
LC-MS(ESI):m/z＝611.8[M+H]+.
第九步：
化合物2I(780mg,1.52mmol)溶于甲醇(5mL)，向其中加入钯碳(80mg，10％)，室温下使用气球加氢反应两个小时。过滤除去催化剂，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后得到化合物2J(616mg,83％)。
LC-MS(ESI):m/z＝572.7[M+H]+.
第十步：
化合物2J(616mg,1.41mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，向其中加入DIPEA(354mg，2.82mmol)和HATU(365mg，1.65mmol)，反应十分钟后，再向其中加入2-((3r，5r，7r)-金刚烷-1-基)乙酸(424mg,1.65mmol)，室温反应一个小时。向其中加入水(50mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后HPLC制备分离得到化合物2，异构体1(42mg,17％)和化合物2，异构体2(19mg,6％)。
制备HPLC分离方法：仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)，样品用DMF溶解，用0.45μm滤头过滤，制成样品液。制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈，流动相B：水，b.梯度洗脱，流动相A含量从25％-70％，c.流量12mL/min。d洗脱时间15min。
异构体1，保留时间：12.3min；异构体2，保留时间：13.1min。
化合物2，异构体1:LC-MS(ESI):m/z＝748.5[M+H]+
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ13.51(s,1H),8.02(s,1H),7.82(s,1H),7.33(d,3H),6.03(s,2H),4.97(s,2H),4.50(s,1H),4.21(s,1H),3.24(s,1H),2.76(s,6H),2.50(s,5H),2.22(s,2H),2.16(s,6H),2.00(s,1H),1.72(s,5H),1.30–1.23(m,9H),1.15(s,4H),0.79(s,1H),0.07(s,2H).
化合物2，异构体2:LC-MS(ESI):m/z＝748.5[M+H]+
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ13.56(s,1H),8.05(s,1H),7.93(s,1H),7.45(d,3H),6.15(s,2H),5.03(s,2H),4.64(s,1H),4.21(s,1H),3.33(s,1H),2.89(s,6H),2.42(s,5H),2.15(s,2H),2.12(s,6H),1.96(s,1H),1.70(s,5H),1.30–1.21(m,9H),1.19(s,4H),0.81(s,1H),0.07(s,2H).
实施例3
1-((1R)-1-(4-(2-((3R,5R)-金刚烷-1-基)乙酰胺)环己基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-甲酰胺(化合物3)
1-((1R)-1-(4-(2-((3R,5R)-adamantan-1-yl)acetamido)cyclohexyl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-indole-3-carboxamide
Figure BDA0003576903750000421
第一步：
将中间体1f-1(3.0g,8.4mmol)溶于EtOH/THF＝1/1(60mL)，加入KOH(4.7g,84mmol)的水溶液(10mL)，加毕，升温至80℃搅拌过夜。待反应冷至室温，减压浓缩除去大部分反应溶剂，向剩余物中加水50mL，用2N稀盐酸调pH＝4，EA萃取3次，合并后的有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后得化合物3A(2.8g，97.2％)。
第二步：
将化合物3A(1.9g,5.5mmol)溶于DMF(20mL)，加入HATU(3.2g,8.3mmol)室温搅拌10分钟后加入DIPEA(2.8g,22mmol)和中间体2(1.2g,5.5mmol)，加毕，室温搅拌过夜。向反应液中加水50mL，EA萃取4次，合并后的有机相用饱和食盐水洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后柱层析(PE：EA＝1：1)分离得到3B(0.4g,14.3％)。
LC-MS(ESI):m/z＝510.3[M+H]+.
第三步：
将3B(0.4g,0.8mmol)置于100mL单口瓶，加入THF(5mL)，和6NHCl(5mL)，室温搅拌过夜。减压蒸去THF，加水10mL，EA萃取4次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后得到3C(360mg,96.8％)。
LC-MS(ESI):m/z＝466.2[M+H]+.
第四步：
将化合物3C(360mg,0.8mmol)溶于DCM/MeOH＝1/1(30mL)，依次加入醋酸铵(0.9g,12mmol)和三乙酰基硼氢化钠(0.8g,4mmol)，加毕，室温搅拌过夜。将反应液减压浓缩后，残余物经制备HPLC纯化得化合物3D(150mg，41.6％)。
制备HPLC分离方法：仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)，样品用DMF溶解，用0.45μm滤头过滤，制成样品液。制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈，流动相B：水，b.梯度洗脱，流动相A含量从25％-70％，c.流量12mL/min。d洗脱时间15min。保留时间：12.5min。
第五步：
将化合物3D(50mg,0.1mmol)溶于DMF(5mL)，加入HATU(45mg,0.12mmol)，室温搅拌10分钟后依次加入DIPEA(25mg,0.2mmol)和2-((3r，5r，7r)-金刚烷-1-基)乙酸(19mg,0.1mmol)，加毕，室温搅拌4小时后，将反应液过滤并浓缩，所得粗产品经制备HPLC分离纯化得化合物3，异构体1(15mg,23.4％)和化合物3，异构体2(18mg,28.1％)。
制备HPLC分离方法：仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)，样品用DMF溶解，用0.45μm滤头过滤，制成样品液。制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈，流动相B：水，b.梯度洗脱，流动相A含量从25％-70％，c.流量12mL/min。d洗脱时间15min。
异构体1，保留时间：12.1min；异构体2，保留时间：12.6min。
化合物3，异构体1：LC-MS(ESI):m/z＝643.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.60(brs,1H),7.74(d,1H),7.65(t,1H),7.58(d,1H),7.45(d,1H),7.09-7.02(m,2H),6.12(s,1H),4.40(d,2H),4.23-4.14(m,1H),3.81(s,1H),2.65(s,3H),2.48(s,3H),2.33-323(m,1H),2.19(s,3H),1.91(s,3H),1.86(s,2H),1.79-1.73(m,1H),1.67(s,1H),1.64(s,3H),1.56-1.45(m,14H),1.40-1.33(m,1H),1.24-1.14(m,1H),1.10-1.02(m,1H),0.67-0.63(m,1H).
化合物3，异构体2：LC-MS(ESI):m/z＝643.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.59(brs,1H),7.74(d,1H),7.64-7.61(m,2H),7.43(d,1H),7.09-7.02(m,2H),6.12(s,1H),4.40(d,2H),4.15-4.07(m,1H),3.44(brs,1H),2.70-2.65(m,1H),2.59(s,2H),2.48(s,3H),2.18(s,3H),2.16-2.10(m,1H),2.02-1.98(m,1H),1.90(s,1H),1.88(s,3H),1.75(s,3H),1.64(s,1H),1.61(s,2H),1.55-1.52(m,13H),1.24-1.11(m,2H),0.91-0.76(m,3H).
实施例4
1-(1-(1-(2-((3r,5r,7r)-金刚烷-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4–(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(化合物4)
1-(1-(1-(2-((3r,5r,7r)-adamantan-1-yl)acetyl)piperidin-4-yl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxamide
Figure BDA0003576903750000441
第一步:
将化合物4A(15.0g，66.08mmol)溶于无水乙醇中(150mL)，加入醋酸铵(25.0g,330.4mmol),冰醇酸(1mL),醋酸硼氢化钠(28.0g,132.16mmol),室温搅拌过夜。加水淬灭，减压浓缩去掉有机溶剂，用乙酸乙酯：石油醚＝1:1萃取一次，水相用饱和碳酸钠水溶液调节pH＝7-8，然后用二氯甲烷萃取5次，合并后的有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩有机相得到4B(5.6g,38％)。
LC-MS(ESI):m/z＝229[M+H]+.
第二步：
将化合物4B(9.7g,42.54mmol)溶于100mL DMSO中，加入化合物3-溴-2-氟吡啶(3.72g,21.27mmol)，碳酸钾(5.87g,42.54mmol)，加热至100℃搅拌过夜。反应完全后，加入水、乙酸乙酯萃取，有机相用水洗一次，干燥浓缩后柱层析(PE：EA＝2：1)分离得到化合物4C(5.2g,32％)。
LC-MS(ESI):m/z＝384.2[M+H]+
第三步：
将化合物4C(5.2g,13.58mmol)溶于100mL DMF中，加入CuI(260mg,1.36mmol)，KI(227mg,1.36mmol)，碳酸铯(8.85g,27.16mmol),2-吡啶甲酸(2.5g,20.3mmol)，加热至120℃搅拌3小时。反应完全后，冷却至室温，加入水、乙酸乙酯萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析(PE：EA＝2：1)分离得到化合物4D(3.7g,68％)。
LC-MS(ESI):m/z＝402.2[M+H]+.
第四步
将化合物4D(3.7g,9.22mmol)溶于50mL无水甲醇中，加入氢氧化钠(1.8g,46.1mmol)水溶液，加热至60℃搅拌过夜。反应完全后，加水，调pH至6，加入乙酸乙酯、水萃取2次，合并后的有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后化合物4E(3.2g,90％)。
LC-MS(ESI):m/z＝388.2[M+H]+.
第五步：
将化合物4E(1.5g,3.87mmol)溶于50mL DMF中，加入HATU(1.76g,4.64mmol)，DIEA(1.5g,11.61mmol)，中间体2(1.28g,5.8mmol)，室温搅拌，反应3小时。TLC监测反应完全后，加水,乙酸乙酯萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析(PE：EA＝2：1)得到化合物4F(2.1g,98％)。
LC-MS(ESI):m/z＝554.2[M+H]+.
第六步：
将化合物4F(2.1g,3.8mmol)溶于100mL二氯甲烷中，加入盐酸二氧六环溶液(4mol/L,10mL)，室温反应2小时。TLC监测反应完全后，浓缩反应液，得到化合物4G(1.95g,98％)。
LC-MS(ESI):m/z＝454.2[M+H]+.
第七步：
将化合物4G(300mg,0.66mmol)溶于10mL DMF中，依次向其中加入EDCI(190mg,0.99mmol)，HOBT(134mg,0.99mmol)，DIEA(255mg,1.98mmol)，金刚烷乙酸(192mg,0.99mmol)，室温反应3小时。TLC监测反应完全后，加水、乙酸乙酯萃取，合并后的有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩有机相，柱层析得到消旋体化合物4(210mg,59％)。进一步经手性制备HPLC分离得到化合物4，异构体1(76mg)和化合物4，异构体2(69mg)。
手性制备方法：Instrument:MGⅡpreparative SFC(SFC-14)；Column:ChiralPakAS,250×30mm I.D.,10μm；Mobile phase:A for CO2 and B for Ethanol(0.1％NH3.H2O)；Gradient:B 45％；Flow rate:70mL/min；Back pressure:100bar；Column temperature:38℃；
Wavelength:220nm；Cycle time:～7.5min
化合物4，异构体1：LC-MS(ESI):m/z＝630.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.64(s,1H),8.19(s,1H),8.07-8.09(d,1H),7.8(s,1H),7.09-7.12(m,1H),6.13(s,1H),4.27-4.55(m,1H),4.38-4.39(d,2H),3.76-4.06(m,2H),2.97-3.03(m,1H),2.79-2.84(m,1H),2.64(s,3H),2.47(s,3H),2.19(s,3H),2.00-2.13(m,2H),1.86-1.96(m,4H),1.52-1.66(m,15H),1.07-1.23(m,2H),0.75-0.91(m,2H).
化合物4，异构体2：LC-MS(ESI):m/z＝630.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.64(s,1H),8.19(s,1H),8.07-8.09(d,1H),7.8(s,1H),7.09-7.12(m,1H),6.13(s,1H),4.27-4.55(m,1H),4.38-4.39(d,2H),3.76-4.06(m,2H),2.97-3.03(m,1H),2.79-2.84(m,1H),2.64(s,3H),2.47(s,3H),2.19(s,3H),2.00-2.13(m,2H),1.86-1.96(m,4H),1.52-1.66(m,15H),1.07-1.23(m,2H),0.75-0.91(m,2H).
实施例5
2-(4-(2-((3r,5r,7r)-金刚烷-1-基)乙酰胺基)环己基)-7-氯-2,4-二甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)苯并[d][1,3]二恶唑-5-羧酰胺(化合物5)
2-(4-(2-((3r,5r,7r)-adamantan-1-yl)acetamido)cyclohexyl)-7-chloro-2,4-dimethyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)benzo[d][1,3]dioxole-5-carboxamide
Figure BDA0003576903750000471
第一步：
室温下，向中间体5(1.0g,2.96mmol)中依次加入无水乙醇(30mL)、醋酸铵(1g)、三乙酰氧基硼氢化钠(1.9g,8.88mmol)，室温搅拌反应2小时。将反应液倒入水(50mL)中，碳酸钾调节pH值至7-8，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并后的有机相用水洗(30mL×2)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后，柱层析纯化(PE：EA＝3：1)，得化合物5A(0.6g,y＝60％)。
LC-MS(ESI):m/z＝340[M+H]+.
第二步：
室温下，向化合物5A(250mg,0.74mmol)中依次加入DMF(10mL)、2-((3r,5r,7r)-金刚烷-1-基)乙酸(215mg,1.11mmol)、HATU(421mg,1.11mmol)、DIPEA(286mg,2.22mmol)，室温搅拌1小时。加入30mL水淬灭，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并后的有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后，柱层析纯化(PE：EA＝2：1)，得化合物5B(240mg,y＝62％)。
LC-MS(ESI):m/z＝516[M+H]+.
第三步：
室温下，向化合物5B(240mg,0.46mmol)中依次加入甲醇(10mL)、水(10mL)、氢氧化钠(240mg)，加热回流反应4小时。待反应冷至室温，向反应液中加入水(30mL)，减压浓缩除去大部分甲醇，用乙酸乙酯(50mL×1)萃取，有机相舍去，水相用3N盐酸调节pH值至5-6，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并后的有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后得化合物5C(210mg,y＝91％)。
LC-MS(ESI):m/z＝502[M+H]+.
第四步：
室温下，向化合物5C(210mg,0.42mmol)中依次加入THF(20mL),HOBt(85mg,0.63mmol)，EDCI(120mg,0.63mmol)，中间体2(180mg,0.82mmol)，三乙胺(212mg,2.1mmol)，室温搅拌4小时。将反应液倒入(30mL)水中，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并后的有机相用饱和食盐水洗(30mL×1)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后得到的粗产品经制备HPLC进一步分离纯化得到化合物5，异构体1(出峰时间约为16min，40mg，y＝14％)和化合物5，异构体2(出峰时间约为16min，30mg，y＝10％)。制备色谱分离条件：仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)；样品用DMF溶解，用0.45μm滤头过滤，制成样品液；制备色谱条件：流动相A：乙腈；流动相B：水(含1％TFA)；梯度洗脱，流动相A含量从50％-75％；流量15ml/min；洗脱时间20min。化合物5，异构体1：
LC-MS(ESI):m/z＝668[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.51(s,1H),8.29-7.88(m,1H),7.46(d,J＝6.1Hz,1H),6.86(s,1H),6.08(s,1H),4.27(d,J＝4.4Hz,2H),3.79(s,1H),2.45(s,3H),2.17(s,3H),2.15(s,3H),1.92-1.82(m,6H),1.81-1.69(m,2H),1.66-1.52(m,17H),1.51-1.33(m,4H).
化合物5，异构体2：
LC-MS(ESI):m/z＝668[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.51(s,1H),8.10-7.90(m,1H),7.53(d,J＝7.8Hz,1H),6.86(s,1H),6.08(s,1H),4.27(d,J＝4.4Hz,2H),3.46(s,1H),2.45(s,3H),2.17(s,3H),2.14(s,3H),1.91-1.76(m,10H),1.67-1.52(m,15H),1.28-1.08(m,4H).
实施例6
1-((1R)-1-(4-(2-((3R,5R)-金刚烷-1-基)乙酰胺)环己基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H吡咯[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(化合物6)
1-((1R)-1-(4-(2-((3R,5R)-adamantan-1-yl)acetamido)cyclohexyl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxamide
Figure BDA0003576903750000481
第一步：
将化合物3g-1(2.0g,5.6mmol)溶于EtOH/THF＝1/1(50mL)，加入KOH(3.1g,56mmol)的水溶液(8mL)，加毕，升温至80℃搅拌过夜。待反应冷至室温，减压浓缩除去大部分反应溶剂，向剩余物中加水50mL，用2N稀盐酸调pH＝4，EA萃取3次，合并后的有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得化合物6A(1.9g，100％)。
第二步：
将化合物6A(1.9g,5.5mmol)溶于DMF(20mL)，加入HATU(3.1g,8.3mmol)，室温搅拌10分钟后加入DIPEA(2.8g,22mmol)和中间体2(1.6g,7.2mmol)，加毕，室温搅拌过夜。向反应液中加水50mL，EA萃取4次，合并后的有机相用饱和食盐水洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后柱层析(PE：EA＝1：1)分离得到化合物6B(2.5g,89.3％)。
LC-MS(ESI):m/z＝511.3[M+H]+.
第三步：
向6B(2.5g,4.9mmol)中依次加入THF(20mL)，和6NHCl(20mL)，室温搅拌过夜。减压浓缩除去大部分THF后，加水20mL，EA萃取4次，合并后的有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得化合物6C(2.1g,91.3％)。
LC-MS(ESI):m/z＝467.2[M+H]+.
第四步：
将化合物6C(2.1g,4.5mmol)溶于DCM/MeOH＝1/1(60mL)，加入醋酸铵(3.5g,45mmol)，搅拌20分钟后加入三乙酰基硼氢化钠(2.9g,13.5mmol)，加毕，室温搅拌过夜。反应液减压蒸干，剩余物制备HPLC纯化得化合物6D(2.0g，95.2％)。
制备HPLC分离方法：仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)，样品用DMF溶解，用0.45μm滤头过滤，制成样品液。制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈，流动相B：水，b.梯度洗脱，流动相A含量从25％-70％，c.流量12mL/min。d洗脱时间15min。保留时间：11.9min。
LC-MS(ESI):m/z＝468.2[M+H]+.
第五步：
将金刚烷乙酸(39mg,0.21mmol)溶于DMF(8mL)，加入HATU(95mg,0.25mmol)，室温搅拌10分钟后依次加入DIPEA(54mg,0.42mmol)和6D(100mg,0.21mmol)，加毕，室温搅拌4小时。将反应液过滤，减压浓缩后得到的粗产品经制备HPLC分离纯化得化合物6,异构体1(28mg,20.7％)和化合物6,异构体2(10mg,7.4％)。
制备HPLC分离方法：仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)，样品用DMF溶解，用0.45μm滤头过滤，制成样品液。制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈，流动相B：水，b.梯度洗脱，流动相A含量从25％-70％，c.流量12mL/min。d洗脱时间15min。
异构体1，保留时间：11.8min；异构体2，保留时间：12.5min。
化合物6,异构体1：LC-MS(ESI):m/z＝644.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.63(s,1H),8.18(dd,1H),8.07(dd,1H),7.81(t,1H),7.46(brs,1H),7.11-7.08(m,1H),6.13(s,1H),4.39(d,2H),4.16(brs,1H),3.80(s,1H),2.70(s,2H),2.64-2.68(m,1H),2.48(s,3H),2.18(s,3H),1.90(s,3H),1.85(s,2H),1.77-1.72(m,1H),1.66-1.49(m,16H),1.43-1.38(m,1H),1.21-1.13(m,2H),1.10-0.97(m,2H),0.73-0.65(m,2H).
化合物6,异构体2：LC-MS(ESI):m/z＝644.4[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.64(s,1H),8.18(dd,1H),8.07(dd,1H),7.80(t,1H),7.42(d,1H),7.12-7.08(m,1H),6.13(s,1H),4.39(d,2H),4.01(brs,1H),3.45(s,1H),2.65(s,3H),2.48(s,3H),2.18(s,3H),2.02-1.99(m,1H),1.88(s,3H),1.83(s,1H),1.74(s,2H),1.64-1.52(m,15H),1.21-1.11(m,3H),0.90-0.78(m,4H).
实施例7
1-(1-(1-(2-((3r,5r,7r)-金刚烷-1-基)乙基)哌啶-4-基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-羧酰胺(化合物7)
1-(1-(1-(2-((3r,5r,7r)-adamantan-1-yl)ethyl)piperidin-4-yl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-indole-3-carboxamide
Figure BDA0003576903750000501
第一步:
将金刚烷-1-乙酸(1.94g，10.00mmol)溶于四氢呋喃(50mL)，冰浴下分批加入四氢铝锂(380mg,10.00mmol)，升至室温反应30min。依次向反应中滴加水(380mg)，滴加15％的氢氧化钠水溶液(380mg)，滴加水(1.14g)，残余物过滤后，将滤液浓缩后得到7B(1.5g,83％)。
第二步：
将化合物7B(1.5g，8.33mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入Dess-Martin试剂(5.3g，12.5mmol)，室温下反应1h。将反应液过滤，滤液减压浓缩后硅胶柱层析(PE：EA＝5：1)分离提纯后，得到7C(1g，67％)。
第三步：
将化合1G溶于乙醇(5mL)，向其中依次加入三乙胺(101mg，1mmol)，7C(109mg，0.614mmol)的乙醇(10mL)溶液，冰乙酸(0.5mL)，搅拌30min后，加入三乙酰基硼氢化钠(173.0mg，0.818mmol)，室温下反应2h。加水淬灭，用乙酸乙酯萃取3次，合并后的有机相用水洗一次，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析分离得到的异构体经手性制备HPLC分离，得到化合物7，异构体1(30mg,24％)和化合物7，异构体2(30mg，24％)。手性制备HPLC分离拆分条件如下：
仪器:MGⅡpreparative SFC(SFC-14)；柱型:ChiralPak AS,250×30mm I.D.,10μm；流动相:A为CO2，B为异丙醇(0.1％氨水)；梯度:B 55％；流速:80mL/min；背压:100bar；柱温:38℃；柱长:220nm；时间周期:～9min；样品制备:90mg化合物溶于20mL二氯和甲醇的混合溶剂中；进样:3.5mL/次.
化合物7，异构体1：LC-MS(ESI):m/z＝615[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.64(s,1H),7.92-7.65(m,1H),7.67-7.46(m,2H),7.16-6.89(m,2H),6.12(s,1H),4.50-4.27(m,2H),4.22-3.99(m,1H),2.97-2.89(m,1H),2.71-2.64(m,1H),2.63-2.56(m,3H),2.48(s,3H),2.45-2.39(m,2H),2.21-2.10(m,6H),1.90-1.80(m,5H),1.65-1.52(m,8H),1.45-1.41(m,6H),1.17-1.11(m,2H),1.02-0.89(m,3H).
化合物7，异构体2：LC-MS(ESI):m/z＝615[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.64(s,1H),7.85-7.67(m,1H),7.67-7.44(m,2H),7.23-6.80(m,2H),6.12(s,1H),4.52-4.32(m,2H),4.25-4.04(m,1H),3.07-2.93(m,1H),2.71-2.64(m,1H),2.64-2.54(m,3H),2.48(s,3H),2.47-2.27(m,2H),2.27-1.97(m,6H),1.97-1.79(m,5H),1.65-1.53(m,8H),1.45-1.41(m,6H),1.22-1.14(m,2H),1.09-0.98(m,3H).
实施例8
1-((R)-1-(4-((1-(2-((3R，5R)-金刚烷-1-基)乙酰基)吖啶-3-基)氨基)环己基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-甲酰胺(化合物8)
1-((R)-1-(4-((1-(2-((3R,5R)-adamantan-1-yl)acetyl)azetidin-3-yl)amino)cyclohexyl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-indole-3-carboxamide
Figure BDA0003576903750000521
第一步：
将金刚烷乙酸(1.0g,5.15mmol)溶于5mL DCM中,加入CDI(1.0g,6.18mmol)，室温搅拌30分钟，再将3-N-叔丁氧羰基胺基环丁胺(887mg,5.15mmol)溶于4mL DCM，加入到反应液中继续反应1h。将反应液减压浓缩后柱层析(PE：EA＝2：1)分离得到白色固体8B(800mg，67％)。
LC-MS(ESI):m/z＝293.2[M-55]+.
第二步：
室温下，向化合物8B(100mg,0.29mmol)中加入4N的盐酸1,4-二氧六环溶液(3mL)。搅拌反应1小时。将反应完减压浓缩后得到8C(80mg粗品)直接用于下一步。
LC-MS(ESI):m/z＝249.2[M+H]+.
第三步：
将化合物8C(80mg粗品)溶于3mL甲醇中,加入中间体1(91mg,0.29mmol)，加入催化量的醋酸，室温搅拌过夜。加入醋酸硼氢化钠(123mg,0.58mmol)，反应1h。加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后柱层析(DCM：MeOH＝10：1)分离得白色固体8D(62mg，39％两步收率)。
LC-MS(ESI):m/z＝546.2[M+H]+.
第四步：
在100mL的茄形瓶中加入化合物8D(62mg,0.11mmol)，乙醇(3mL)和水(1mL)溶解，加入氢氧化钾(63mg,1.1mmol)，回流搅拌反应24h。待反应冷至室温，减压浓缩大部分乙醇，加入10毫升水，用HCl(1M)调节pH到4-5，有白色固体析出，过滤得白色固体化合物8E(40mg,68％yield)。
LC-MS(ESI):m/z＝532.2[M+H]+.
第五步：
在100mL的茄形瓶中加入化合物8E(40mg,0.075mmol)，DMF(2mL)溶解，加入DIPEA(29mg,0.23mmol)、HATU(43mg,0.11mmol)，室温搅拌10分钟，加入中间体2(20mg,0.09mmol)，室温继续搅拌反应过夜。将反应液减压浓缩后柱层析分离得到化合物8(8mg,15％)。
LC-MS(ESI):m/z＝698.4[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(s,1H),8.73-8.75(m,1H),8.12(d,J＝8Hz,1H),7.86-7.84(m,1H),7.67-7.64(m,1H),7.33-7.30(m,2H),4.45-4.43(m,1H),4.20-4.16(m,1H),3.94-3.92(m,1H),3.76-3.75(m,1H),3.52-3.50(m,2H),3.29(s,2H),2.85(s,3H),2.67(s,1H),2.49-2.33(m,4H),1.90(s,3H),1.77-1.08(m,29H).
实施例9
1-((1R)-1-(4-((2-((3R,5R)-金刚烷-1-基)乙基)氨基)环己基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸盐(化合物9)
1-((1R)-1-(4-((2-((3R,5R)-adamantan-1-yl)ethyl)amino)cyclohexyl)ethyl)-2-methyl-N-((6-met hyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxami de
Figure BDA0003576903750000531
将化合物6D(150mg,0.3mmol)和2-((1R，3R，5S)-金刚烷-1-基)乙醛(7C)(267mg,1.5mmol)溶于DCM/MeOH＝5/1(15mL)，室温搅拌2小时后加入NaBH3CN(56mg,0.9mmol)，加毕，室温搅拌过夜。减压浓缩除去大部分反应液，向剩余物中加水(20mL)，DCM萃取5次,合并后的有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，剩余物经制备HPLC纯化后得标题化合物(化合物9，异构体1)(28mg，产率11.8％)，(化合物9，异构体2)(41mg，产率17.2％)。
制备HPLC分离方法：仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)，样品用DMF溶解，用0.45μm滤头过滤，制成样品液。制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含1％TFA)，b.梯度洗脱，流动相A含量从25％-70％，c.流量12mL/min。d洗脱时间15min。
化合物9，异构体1,保留时间:13.12min；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.64(s,1H),8.19(dd,1H),8.16(brs,2H),8.09(dd,1H),7.82(t,1H),7.13-7.10(m,1H),6.13(s,1H),4.39(d,2H),3.95-2.85(m,3H),2.66(s,3H),2.48(s,3H),2.19(s,2H),2.17-2.07(m,2H),1.91(s,1H),1.92(s,3H),1.85-1.82(m,1H),1.68-1.57(m,11H),1.48-1.43(m,5H),1.35-1.29(m,3H),1.20-1.11(m,1H),1.02-0.89(m,3H).
LCMS m/z＝630.4[M+1]+
化合物9，异构体1,保留时间:13.67min；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.64(s,1H),8.19(d,1H),8.12(brs,2H),8.09(dd,1H),7.83(t,1H),7.14-7.10(m,1H),6.13(s,1H),4.40(d,2H),3.17(brs,1H),2.89(s,3H),2.72(s,3H),2.48(s,3H),2.19(s,3H),1.93(s,3H),1.82-1.74(m,3H),1.69-1.59(m,11H),1.50-1.46(m,7H),1.40-1.35(m,2H),1.05-0.83(m,2H).
LCMS m/z＝630.4[M+1]+.
实施例10
2-((3R,5R)-金刚烷-1-基)乙基(4-((R)-1-(2-甲基-3-(((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨甲酰基)-1H吡咯[2,3-b]吡啶-1-基)乙基)环己基)氨基甲酸酯(化合物10)
2-((3R,5R)-adamantan-1-yl)ethyl(4-((R)-1-(2-methyl-3-(((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)carbamoyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-1-yl)ethyl)cyclohexyl)carbamate
Figure BDA0003576903750000541
将化合物6D(300mg,0.6mmol)溶于DCM(15mL)，依次加入DIPEA(232mg,1.8mmol)，DMAP(37mg,0.3mmol)和三光气(356mg,1.2mmol)，室温搅拌2小时后加入化合物7B(216mg,1.2mmol)的DCM溶于2mL，加毕，室温搅拌3小时。向反应液中加水(20mL)，DCM萃取5次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，剩余物经制备HPLC纯化得标题化合物(化合物10，异构体1)(15mg，产率3.5％)和(化合物10，异构体2)(21mg，产率4.9％)。
制备HPLC分离方法：仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)，样品用DMF溶解，用0.45μm滤头过滤，制成样品液。制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含5mM乙酸铵)；b.梯度洗脱，流动相A含量从40％-70％；c.流量15mL/min；d洗脱时间15min。
化合物10，异构体1,保留时间:12.05min；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.51(brs,1H),8.19(d,1H),8.07(d,1H),7.80(t,1H),7.11-7.08(m,1H),6.84(d,1H),6.12(s,1H),4.04(brs,1H),3.91(t,2H),3.17(brs,1H),2.64(s,3H),2.48(s,3H),2.18(s,3H),2.04-1.96(m,1H),1.89(s,3H),1.85(s,1H),1.67-1.52(m,10H),1.47(s,6H),1.35-1.23(m,4H),1.18-1.07(m,2H),0.92-0.76(m,4H).
LCMS m/z＝674.3[M+1]+
化合物10，异构体1,保留时间:13.81min；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.57(s,1H),8.18(d,1H),8.07(dd,1H),7.80(t,1H),7.11-7.08(m,1H),7.01(brs,1H),6.13(s,1H),4.39(d,2H),3.98(t,2H),3.55(brs,1H),2.69(s,3H),2.67(brs,1H),2.48(s,3H),2.18(s,3H),1.90(s,3H),1.67-1.58(m,11H),1.52-1.46(m,8H),1.37-1.32(m,4H),1.24(s,1H),1.21-1.05(m,2H).
LCMS m/z＝674.3[M+1]+.
实施例11
1-(1-(1-(2-((3r,5r,7r)-金刚烷-1-基)乙基)哌啶-4-基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(化合物11)
1-(1-(1-(2-((3r,5r,7r)-adamantan-1-yl)ethyl)piperidin-4-yl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxamide
Figure BDA0003576903750000551
将化合物4G(300mg,0.66mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入金刚烷乙醛(176mg,0.99mmol)、无水乙酸(0.1mL)，室温搅拌15分钟，再加入三乙酰氧基硼氢化钠(210mg,0.99mmol)，室温反应3小时。TLC监测反应完全后，加水、二氯甲烷萃取，干燥浓缩有机相，柱层析(DCM:MeOH＝6:1)分离得到化合物11(425mg,59％)。化合物11经手性制备HPLC分离得到两个异构体,化合物11,异构体1(116mg)，化合物11,异构体2(92mg)。
手性制备HPLC分离条件：制备仪器Waters UPCC with PDA Detector，制备柱Chiralpak AY-3 150×4.6mm I.D.,3um，流动相体系：A:CO2 B:isopropanol(0.05％DEA)，出峰位置：异构体1：2.308min，异构体2：3.854min。
化合物11,异构体1：
LC-MS(ESI):m/z＝616.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.64(s,1H),8.18(d,1H),8.06-8.08(d,1H),7.79-7.81(m,1H),7.08-7.11(m,1H),6.13(s,1H),4.38-4.39(d,2H),4.07(s,1H),2.90-2.93(d,1H),2.64(s,4H),2.48(s,3H),2.15-2.18(m,5H),1.79-1.87(m,5H),1.55-1.65(m,10H),1.42(s,6H),1.23-1.32(m,2H),1.11-1.16(m,2H),0.99(s,1H),0.68-0.78(m,1H).
化合物11,异构体2：
LC-MS(ESI):m/z＝616.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.64(s,1H),8.18(d,1H),8.06-8.08(d,1H),7.79-7.81(m,1H),7.08-7.11(m,1H),6.13(s,1H),4.38-4.39(d,2H),4.07(s,1H),2.90-2.93(d,1H),2.64(s,4H),2.49(s,3H),2.15-2.18(m,5H),1.79-1.87(m,5H),1.55-1.65(m,10H),1.42(s,6H),1.23-1.32(m,2H),1.11-1.16(m,2H),0.98(s,1H),0.68-0.78(m,1H).
实施例12
1-(1-(1-(2-((3r,5r,7r)-金刚烷-1-基)乙酰胺基)乙基)哌啶-4-基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(化合物12)
1-(1-(1-(2-(2-((3r,5r,7r)-adamantan-1-yl)acetamido)ethyl)piperidin-4-yl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxamide
Figure BDA0003576903750000561
第一步：叔丁基(2-(4-(1-(2-甲基-3-(((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)乙基)哌啶-1-基)乙基)碳酸酯(12A)
tert-butyl(2-(4-(1-(2-methyl-3-(((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)c arbamoyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-1-yl)ethyl)piperidin-1-yl)ethyl)carbamate
Figure BDA0003576903750000562
将化合物4G(0.45g,1.0mmol)溶于无水乙醇(20mL)中，依次向反应中加入(2-氧乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.477g,3.0mmol)，氰基硼氢化钠(189mg,3.0mmol)，室温反应4小时。浓缩后加入水(30mL)，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用饱和碳酸钠水溶液洗涤(50mL×1)，饱和食盐水洗涤(50mL×1)，无水硫酸钠干燥，用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷：甲醇(v/v)＝0.01:1～0.05:1)，得到标题化合物叔丁基(2-(4-(1-(2-甲基-3-(((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)乙基)哌啶-1-基)乙基)碳酸酯(12A)，淡黄色固体(300m g，产率50％)。
LCMS m/z＝597.3[M+1]+
第二步：1-(1-(1-(2-氨基乙基)哌啶-4-基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酰胺盐酸盐(12B)
1-(1-(1-(2-aminoethyl)piperidin-4-yl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxamide hydrochloride
Figure BDA0003576903750000571
向叔丁基(2-(4-(1-(2-甲基-3-(((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)乙基)哌啶-1-基)乙基)碳酸酯(12A)(300mg,0.50mmol)中加入氯化氢-二氧六环溶液中(4N，10mL)，室温搅拌1小时，浓缩，用二氯甲烷洗涤(50mL×1)，浓缩得到标题化合物1-(1-(1-(2-氨基乙基)哌啶-4-基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酰胺盐酸盐(12B)，粗品，黄色固体(270mg，产率100％)。
LCMS m/z＝497.3[M+1]+
第三步：
1-(1-(1-(2-((3r,5r,7r)-金刚烷-1-基)乙酰胺基)乙基)哌啶-4-基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(化合物12,异构体1和异构体2)1-(1-(1-(2-(2-((3r,5r,7r)-adamantan-1-yl)acetamido)ethyl)piperidin-4-yl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxamide
Figure BDA0003576903750000572
将1-(1-(1-(2-氨基乙基)哌啶-4-基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酰胺盐酸盐(12B)(270mg,0.50mmol)溶于DMF中(20mL)，依次加入HATU(285mg,0.75mmol)，DIEA(258mg,2.0mmol)，2-((3r，5r，7r)-金刚烷-1-基)乙酸(145mg,0.75mmol)，室温反应3小时，加入水(30mL)，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(30mL×2)，再用饱和食盐水洗涤(30mL×1)，无水硫酸钠干燥，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷：甲醇(v/v)＝0.01:1～0.1:1)得到的粗品化合物经手性制备HPLC分离，得到标题化合物1-(1-(1-(2-((3r,5r,7r)-金刚烷-1-基)乙酰胺基)乙基)哌啶-4-基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(化合物12)，异构体1(25mg,7％)和异构体2(25mg,7％)。
化合物12的拆分：
取1-(1-(1-(2-((3r,5r,7r)-金刚烷-1-基)乙酰胺基)乙基)哌啶-4-基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(化合物12)(90mg)用于拆分，分离后得到两个光学异构体，异构体1(保留时间：4.031s，25mg,ee％＝99％)，异构体2(保留时间：5.909s，25mg,ee％＝99％)。
拆分条件：
仪器:MGⅡpreparative SFC(SFC-14)；柱:ChiralPak AD,250×30mm I.D.；
流动相:A：CO2，B：乙醇(0.1％NH3H2O)；梯度:B 40％；流量:80mL/min；背压:100bar；柱温:38℃；波长:220nm；周期:13min；样品制备:化合物12溶解于甲醇中制得10mg/ml；注射:3.0ml/针。
化合物12，异构体1：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.64(s,1H),8.23-8.12(m,1H),8.12-8.01(m,1H),7.89-7.67(m,1H),7.58-7.38(m,1H),7.26-6.99(m,1H),6.13(s,1H),4.38(d,2H),3.11-3.02(m,2H),2.92(d,1H),2.68-2.60(m,4H),2.48(s,3H),2.33-2.22(m,2H),2.18(s,3H),1.93-1.85(m,5H),1.78(s,2H),1.68-1.47(m,17H),1.32-1.21(m,2H),1.06-0.90(m,1H),0.76-0.64(m,1H).
LCMS m/z＝673.4[M+1]+
化合物12，异构体2：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.64(s,1H),8.24-8.14(m,1H),8.10-8.00(m,1H),7.92-7.74(m,1H),7.45(s,1H),7.21-7.00(m,1H),6.13(s,1H),4.38(d,2H),3.14-3.03(m,2H),2.98-2.86(m,1H),2.69-2.58(m,4H),2.48(s,3H),2.29-2.22(m,2H),2.18(s,3H),1.93-1.86(m,5H),1.78(s,2H),1.70-1.40(m,17H),1.34-1.20(m,2H),1.05-0.89(m,1H),0.83-0.61(m,1H).
LCMS m/z＝673.4[M+1]+
实施例13
1-((R)-1-(4-((4-((3R,5R)-金刚烷-1-基)丁基)氨基)环己基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(化合物13)
1-((R)-1-(4-((4-((3R,5R)-adamantan-1-yl)butyl)amino)cyclohexyl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxamide
Figure BDA0003576903750000581
第一步：叔丁基(E)-4-((1R,3R,5S)-金刚烷-1-基)丁-2-烯酸盐(13A)
tert-butyl(E)-4-((1R,3R,5S)-adamantan-1-yl)but-2-enoate
将2-(二乙氧基磷酰)乙酸叔丁酯(2.55g，10.1mmol)溶于THF(20mL)，冰浴冷却至0℃，分次加入NaH(538mg,13.46mmol,60％)，加毕，搅拌30分钟后加入7C(1.2g，6.73mmol)的THF溶液(10mL)，加毕，缓慢恢复至室温搅拌2小时，TLC(PE/EA＝5/1)监测反应完毕。向反应液中加水50mL，EA萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后硅胶柱层析纯化(PE/EA＝10/1)得标题化合物13A(1.0g，无色油状物，收率：53.8％)。
第二步：4-((1S,3R,5S)-金刚烷-1-基)丁酸叔丁酯(13B)
tert-butyl 4-((1S,3R,5S)-adamantan-1-yl)butanoate
将13A(1.0g，3.62mmol)溶于甲醇(30mL)，加入Pd/C(0.3g)，氢气置换3次后通入氢气室温搅拌4小时后过滤，将滤液减压浓缩得标题化合物13B(0.9g，无色油状物，收率：89.4％)。
第三步：4-((1S,3R,5S)-金刚烷-1-基)丁烷-1-醇(13C)
4-((1S,3R,5S)-adamantan-1-yl)butan-1-ol
将13B(0.9g，3.23mmol)溶于无水THF(20mL)，冰浴冷却至0℃，分次加入LiAlH4(184mg,4.85mmol)，加毕，保持0℃搅拌2小时，TLC(PE/EA＝7/1)监测反应完毕。向反应液中缓慢滴加3mL水淬灭反应，室温搅拌10分钟后加入THF(50mL)和无水硫酸镁(10g)，搅拌30分钟后过滤，滤液减压浓缩后得标题化合物13C(0.6g，无色油状物，收率：67.3％)。
第四步：4-((1S,3R,5S)-金刚烷-1-基)丁醛(13D)
4-((1S,3R,5S)-adamantan-1-yl)butanal
将13C(0.6g，2.88mmol)溶于DCM(30mL)，加入PCC(931mg,4.32mmol)，加毕，室温搅拌过夜，TLC(PE/EA＝5/1)监测反应完毕。向反应液中加入无水硫酸镁(10g)，搅拌30分钟后垫硅胶过滤，滤液减压浓缩后得标题化合物13D(0.5g，无色油状物，收率：84.2％)。
第五步：1-((R)-1-(4-((4-((3R,5R)-金刚烷-1-基)丁基)氨基)环己基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(化合物13)
1-((R)-1-(4-((4-((3R,5R)-adamantan-1-yl)butyl)amino)cyclohexyl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxamide
将化合物6D(164mg,0.35mmol)和2-((1R，3R，5S)-金刚烷-1-基)丁醛(13D)(199mg,0.96mmol)溶于DCM/MeOH＝5/1(15mL)，室温搅拌2小时后加入NaBH3CN(66mg,1.05mmol)，加毕，室温搅拌过夜。减压浓缩除去大部分反应液，向剩余物中加水(20mL)，DCM萃取5次,合并后的有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，剩余物经制备HPLC纯化后得标题化合物的三氟乙酸盐(化合物13，异构体1)(45mg，产率19.5％)，(化合物13，异构体2)(52mg，产率22.5％)。
制备HPLC分离方法：仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)，样品用DMF溶解，用0.45μm滤头过滤，制成样品液。制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含1％TFA)，b.梯度洗脱，流动相A含量从25％-70％，c.流量12mL/min。d洗脱时间15min。
化合物13，异构体1,保留时间:13.13min:
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.66(s,1H),8.27(s,2H),8.19(dd,1H),8.09(dd,1H),7.82(t,1H),7.13-7.10(m,1H),6.14(s,1H),4.39(d,2H),2.95-2.82(m,3H),2.65(s,3H),2.48(s,3H),2.19(s,2H),2.13-2.09(m,2H),1.91(s,3H),1.92(s,3H),1.84-1.82(m,1H),1.68-1.56(m,9H),1.52-1.46(m,2H),1.43(m,6H),1.36-1.31(m,1H),1.28-1.15(m,4H).
LCMS m/z＝658.5[M+1]+
化合物13，异构体2,保留时间:13.69min:
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.64(s,1H),8.19(d,1H),8.12(brs,2H),8.09(dd,1H),7.83(t,1H),7.14-7.10(m,1H),6.13(s,1H),4.40(d,2H),3.17(brs,1H),2.89(s,3H),2.72(s,3H),2.48(s,3H),2.19(s,3H),1.93(s,3H),1.82-1.74(m,3H),1.69-1.59(m,11H),1.50-1.46(m,7H),1.40-1.35(m,2H),1.05-0.83(m,2H).
LCMS m/z＝658.5[M+1]+
实施例14
1-((R)-1-(4-((2-((3R,5R,7R)-金刚烷-1-基)乙酰胺基)甲基)环己基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶基-3-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(化合物14)
1-((R)-1-(4-((2-((3R,5R,7R)-adamantan-1-yl)acetamido)methyl)cyclohexyl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxamide
Figure BDA0003576903750000611
第一步：1-((1R)-1-(4-(甲氧基亚甲基)环己基)乙基)-2-甲基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-甲酸乙酯(化合物14A)
ethyl 1-((1R)-1-(4-(methoxymethylene)cyclohexyl)ethyl)-2-methyl-1H-pyrrolo
[2,3-b]-pyridine-3-carboxylate
室温下将(甲氧基甲基)三苯基氯化磷加入到干燥的四氢呋喃(100mL)中，0℃，氮气保护下分批加入叔丁醇钾，加完后0℃下继续搅拌30分钟；滴加中间体3(10.00g，28.1mmol)的四氢呋喃溶液(20mL)，滴完后自然升至室温反应5小时。向反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，水洗(50mL×2)，饱和氯化钠洗(50mL×1)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝,10:1～5:1)得到标题化合物1-((1R)-1-(4-(甲氧基亚甲基)环己基)乙基)-2-甲基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-甲酸乙酯(14A)，无色粘稠液体(7.00g，产率70％)。
LC-MS m/z＝357.2[M+1]+。
第二步：(R)1-(1-(4-甲酰基环己基)乙基)-2-甲基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-甲酸乙酯(化合物14B)
(R)-ethyl 1-(1-(4-formylcyclohexyl)ethyl)-2-methyl-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxylate
室温下将化合物14A(1.00g)加入到甲酸(3.0mL)中，反应过夜。向反应液中慢慢滴加到饱和碳酸氢钠中调节至pH＝8，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，水洗(50mL×2)，饱和氯化钠洗(50mL×1)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝20:1～5:1)分别得到标题化合物14B(0.57g,产率60％)。
LC-MS m/z＝343.2[M+1]+
第三步：
将化合物14B(300mg,0.88mmol)溶于甲醇中(50mL)，加入乙酸铵(1.5g,20mmol)，室温搅拌两小时，加入三乙酰氧基硼氢化钠，继续搅拌反应四小时，减压浓缩除去大部分反应溶剂，向剩余物中加水50mL，用碳酸钾调pH＝9左右，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得化合物14C(160mg，53％)。
LC-MS(ESI):m/z＝344.2[M+H]+
第四步：
将化合物14C(150mg,0.43mmol)和金刚烷乙酸(100mg,0.5mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，依次加入DIPEA(120mg,1.0mmol),HATU(220mg,0.60mmol)，加毕，室温搅拌过夜。向反应液中加水50mL，EA萃取4次，合并后的有机相用饱和食盐水洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后柱层析分离得到化合物14D(120mg,53.8％)。
LC-MS(ESI):m/z＝520.2[M+H]+.
第五步：
将14D(120mg,0.23mmol)加入乙醇(1mL)和氢氧化钠水溶液(6mol/L,1mL)的混合体系中，升温至80℃搅拌反应6小时。自然凉至室温后，用稀盐酸调PH＝7-8,EA萃取3次，合并后的有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得化合物14E(60mg,52％)。
LC-MS(ESI):m/z＝492.2[M+H]+.
第六步：
将14E(60mg，0.12mmol)和3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶-2(1H)-酮(33mg,0.18mmol)加入二氯甲烷(2mL)中，滴入DIPEA(130mg,1.00mmol)，加入HATU(114mg，0.30mmol)，室温搅拌反应两小时。将反应液用二氯甲烷(20mL)稀释，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用制备板分离(DCM:MeOH＝20:1)得目标化合物14(20mg,产率25.3％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.33-8.29(m,1H),7.58-7.55(m,1H),7.05-7.00(m,1H),6.30(s,1H),4.72-4.67(m,2H),3.43-3.41(m,1H)，3.25-3.23(m,2H),2.60(s,3H),2.50(s,3H),2.25(s,3H),1.94-1.90(m,6H),1.67-1.60(m,15H),1.46(s,10H),1.18-1.02(m,2H).
MS M/Z(ESI):m/z＝658.3[M+H]+.
实施例15
1-((R)-1-(4-(2-((2-((3R,5R,7R)-金刚烷-1-基)乙基)氨基)-2-氧代乙氧基)环己基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酰胺(化合物15)
1-((R)-1-(4-(2-((2-((3R,5R,7R)-adamantan-1-yl)ethyl)amino)-2-oxoethoxy)cyclohexyl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxamide
Figure BDA0003576903750000631
第一步：(R)-1-(1-(4-羟基环己基)乙基)-2-甲基-1H-吡咯[2,3-b]并吡啶-3-甲酸乙酯(15A&15B)
ethyl-(R)-1-(1-(4-hydroxycyclohexyl)ethyl)-2-methyl-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxylate
将中间体3(1.7g,5.18mmol)溶于甲醇(30mL)中，硼氢化钠(0.23g,6.21mmol)，室温下搅拌反应2小时，LCMS监测反应完全后停止反应。向反应液中加入水(30mL)，水相用二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，经过柱层析分离(洗脱体系EA/PE＝0-50％(体积比))得到异构体15A,白色固体(展开体系为PE:EA＝3:1，Rf＝0.6，1.1g，产率64.3％)，异构体15B,白色固体(展开体系为PE:EA＝3:1，Rf＝0.4，0.35g，产率20.5％)。
LCMS m/z＝331.3[M+1]+.
第二步：(R)-1-(1-(4-羟基环己基)乙基)-2-甲基-1H-吡咯[2,3-b]并吡啶-3-甲酸(15C&15D)(R)-1-(1-(4-hydroxycyclohexyl)ethyl)-2-methyl-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxylate
将15A(0.35mg,1mmol)溶于乙醇(5mL)中，加入6N NaOH溶液(5mL)，80℃下搅拌反应17小时，LCMS监测反应完全后停止反应，冷却至室温。反应液用稀盐酸调节pH至7左右，水相用二氯甲烷萃取(20mL×2)，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到异构体15C，黄色固体(0.3g，产率93.67％)，粗品不需要进一步纯化直接用于下一步。
LCMS m/z＝303.2[M+1]+.
以15B为原料按照上述相同的方法得到异构体15D，黄色固体(0.28g,产率87.42％)。
LCMS m/z＝303.2[M+1]+.
第三步：(R)-1-(1-(4-羟基环己基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯[2,3-b]并吡啶-3-甲酰胺(15E&15F)
(R)-1-(1-(4-hydroxycyclohexyl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxamide
依次将15C(0.3g,1mmol),HATU(0.45g,1.2mmol),DIPEA(0.32g,2.5mmol)加入到二氯甲烷(5mL)中，搅拌15min，然后加入中间体2(0.26g,1.2mmol),继续搅拌反应2小时，LCMS监测反应完全后停止反应。反应液倒入水(10mL)中，水相用二氯甲烷萃取(20mL×2)，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗品，粗品经过柱层析分离(洗脱剂：DCM/MeOH＝30/1)得到异构体15E，白色固体(0.3g，产率64.5％)。
LCMS m/z＝469.1[M+1]+.
以15D(0.28g)为原料按照上述相同的方法得到异构体15F，黄色固体(0.29g,产率66.83％)。
LCMS m/z＝469.1[M+1]+.
第四步：
将化合物15E(80mg,0.18mmol)加入干燥的THF中，冰水浴冷却，分批加入NaH(20mg，0.5mmol),搅拌1小时后，滴入溴乙酸乙酯(33mg,0.2mmol),滴毕，自然升至室温搅拌反应。16小时后，将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品，制备板分离得(PE：EA＝1:1)化合物15G(50mg,46.3％)。
LC-MS(ESI):m/z＝555.2[M+H]+.
以15F(140mg,0.3mmol)为原料按照上述相同的方法得到异构体15H(90mg，60.0％)。
LC-MS(ESI):m/z＝555.2[M+H]+.
第五步：
将化合物15G(50mg,0.09mmol)加入THF(3mL)和水(1mL)的混合体系中，加入LiOH(10mg,0.5mmol)。室温搅拌反应16小时，将反应液用稀盐酸调PH＝5-6，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得化合物15I(30mg,62.2％)。
LC-MS(ESI):m/z＝527.2[M+H]+.
以15H(90mg,0.18mmol)为原料按照上述相同的方法得到异构体15J(50mg，52.8％)。
LC-MS(ESI):m/z＝527.2[M+H]+.
第六步：
将化合物15I(30mg,0.055mmol)和金刚烷乙胺(20mg,0.1mmol)加入二氯甲烷(2mL)中，滴入DIPEA(26mg,0.2mmol)，加入HATU(38mg，0.1mmol),室温搅拌反应两小时。将反应液用二氯甲烷(20mL)稀释，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用制备板分离(DCM:MeOH＝10:1)得目标化合物15,异构体1(15mg,41.3％)。
LC-MS(ESI):m/z＝688.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.18-8.17(m,1H),8.02-8.00(m,1H),7.70-7.64(m,1H),7.09-7.05(m,1H),6.29(s,1H),4.89(s,2H),4.42(d,3H),3.25-3.20(m,2H),2.62(s,3H),2.26(s,3H),2.0-1.85(m,8H),1.7-1.52(m,20H),1.48-1.45(m,4H),1.24(s,3H).
以15J(50mg,0.09mmol)为原料按照上述相同的方法得到化合物15,异构体2(17mg，25.5％)。
LC-MS(ESI):m/z＝688.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.10-8.07(m,1H),8.02-8.00(m,1H),7.70-7.64(m,1H),7.09-7.05(m,1H),6.22(s,1H),4.63(s,2H),4.42(d,3H),3.25-3.20(m,2H),2.62(s,3H),2.28(s,3H),2.1-1.95(m,8H),1.68-1.52(m,20H),1.50-1.44(m,4H),1.24(s,3H).
实施例16
1-((1R)-1-(4-((3-((1R,3R,5R)-金刚烷-1-基)丙基)氨基)环己基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸盐(化合物16)
1-((1R)-1-(4-((3-((3R,5R,7R)-adamantan-1-yl)propyl)amino)cyclohexyl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxamide
Figure BDA0003576903750000651
第一步：3-((1S,3R,5S)-金刚烷-1-基)丙烷-1-醇(16B)
3-((1S,3R,5S)-adamantan-1-yl)propan-1-ol
将金刚烷丙酸(16A)(0.5g,2.40mmol)溶于无水THF(20mL)，冰浴冷却至0℃，分次加入LiAlH4(182mg,4.8mmol)，加毕，缓慢恢复至室温搅拌过夜；反应液用冰浴冷却，用水淬灭后加入Mg2SO4(10g)，搅拌10分钟后过滤，滤饼用THF洗两次，滤液减压蒸干得到标题化合物(16B)，白色固体(0.32g，产率94.1％)。
第二步：3-((1S,3R,5S)-金刚烷-1-基)丙醛(16C)
3-((1S,3R,5S)-adamantan-1-yl)propanal
将3-((1S,3R,5S)-金刚烷-1-基)丙烷-1-醇(16B)(0.32g,1.65mmol)溶于DCM(30mL)，加入PCC(711mg,3.30mmol)，室温搅拌3小时后加入硅胶(5.0g)，搅拌5分钟后过滤，滤饼用DCM洗两次，滤液减压蒸干得到标题化合物16C无色油状物(0.28g，产率88.4％)。
第三步：1-((1R)-1-(4-((3-((1R,3R,5R)-金刚烷-1-基)丙基)氨基)环己基)乙基)-2-甲基-N-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸盐(化合物16，异构体1和异构体2)
1-((1R)-1-(4-((3-((3R,5R,7R)-adamantan-1-yl)propyl)amino)cyclohexyl)ethyl)-2-methyl-N-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxamide
将化合物6D(159mg,0.34mmol)和2-((1R，3R，5S)-金刚烷-1-基)丙醛(16C)(168mg,0.85mmol)溶于DCM/MeOH＝5/1(15mL)，室温搅拌2小时后加入NaBH3CN(64mg,1.02mmol)，加毕，室温搅拌过夜。减压浓缩除去大部分反应液，向剩余物中加水(20mL)，DCM萃取5次,合并后的有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，剩余物经制备HPLC纯化后得标题化合物(化合物16，异构体1)(31mg，产率12.0％)，(化合物16，异构体2)(38mg，产率14.7％)。
制备HPLC分离方法：仪器：waters 2767制备液相；色谱柱:SunFire@Prep C18(19mm×250mm)，样品用DMF溶解，用0.45μm滤头过滤，制成样品液。制备色谱条件：a.流动相A,B组成：流动相A：乙腈，流动相B：水(含1％TFA)，b.梯度洗脱，流动相A含量从25％-70％，c.流量12mL/min。d洗脱时间15min。
化合物16，异构体1,保留时间:13.11min:
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.65(s,1H),8.23(s,2H),8.19(dd,1H),8.09(dd,1H),7.82(t,1H),7.13-7.10(m,1H),6.13(s,1H),2.98-2.77(m,3H),2.65(s,3H),2.48(s,3H),2.19(s,3H),2.15-2.06(m,2H),1.92(s,3H),1.84-1.81(m,1H),1.68-1.57(m,10H),1.53-1.46(m,2H),1.42(m,7H),1.39-1.30(m,1H),1.20-1.12(m,1H),1.05-1.00(m,3H),0.88(s,2H).
LCMS m/z＝644.5[M+1]+
化合物16，异构体2,保留时间:13.62min:
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.64(s,1H),8.22(s,2H),8.19(dd,1H),8.09(dd,1H),7.82(t,1H),7.13-7.10(m,1H),6.13(s,1H),4.40(d,2H),3.20-3.11(m,1H),2.88-2.79(m,2H),2.71(s,3H),2.48(s,3H),2.19(s,3H),1.97-1.88(m,4H),1.85-1.72(m,3H),1.70-1.53(m,13H),1.45-1.42(m,7H),1.07-1.00(m,3H),0.87(s,1H).
LCMS m/z＝644.5[M+1]+
生物测试例
EZH2酶活测试方法
将化合物溶于DMSO中，配制成10mM溶液，并用DMSO梯度稀释至终浓度的100倍。用Echo550转移200nL化合物溶液至384孔板(Perkin Elmer,Cat.No.6007299)中。用1X检测缓冲液(50mM Tris-HCl 9.0,0.01％Tween-20,1mM DTT)稀释EZH2(BPS,Cat.No.
51004)至终浓度的2倍(EZH2:3nM)，并配制H3K27(21-44)与[3H]-SAM(PerkinElmer,Lot.No.2146246)的混合液(H3K27(21-44):200nM,[3H]-SAM:100nM)。取10μL/孔EZH2稀释液加入384孔板(对照组加入10μL 1X检测缓冲液)，封板后于室温孵育15分钟。每孔加入10μL H3K27(21-44)与[3H]-SAM的混合液，封板后于室温孵育60分钟。低温配制50μM SAM(Sigma,Cat.No.A7007)，并以10μL/孔加入384孔板中，取25μL/孔转移至flashplate中，于室温下孵育1小时以上。用洗板液(dH2O+0.1％Tween-20)清洗flashplate3次，使用Microbeta读板。在Excel中计算抑制率：抑制率(％)＝(最大值阳性对照-检测信号值)/(最大值阳性对照-最小值阴性对照)*100，使用XL-Fit拟合IC50值。
测试结果：本发明化合物对EZH2受体显示有抑制活性，实施例化合物对EZH2酶活的IC50值在0.01-10nM范围内。其中，部分实施例的测试结果见表1所示。
表1 EZH2酶活性
Figure BDA0003576903750000671
Figure BDA0003576903750000681
结论：本发明的化合物对EZH2酶活性高。
2、SU-DHL-6细胞增殖检测
SU-DHL-6细胞是人B细胞淋巴瘤细胞株，购自于ATCC，培养条件：RPMI-1640+10％FBS+1％双抗，培养于37℃，5％CO2孵箱中。细胞铺板12孔板，细胞浓度：1×105个/mL。铺板后，加入不同浓度化合物，于37℃，5％CO2孵箱中培养，每隔3-4天进行细胞计数(Countstar自动细胞计数仪)，离心去除上清，将细胞重新稀释为1×105个/mL并铺板后，再次加入不同浓度化合物，直到孵育14天进行细胞计数后结束实验，使用Origen9.2软件计算IC50值。
测试结果：本发明化合物对EZH2受体显示有抑制活性，实施例化合物对SU-DHL-6细胞的IC50值在0.1-100nM范围内。其中，部分实施例的测试结果见表2所示。
表2细胞增殖抑制作用
化合物编号 IC50(nM) 化合物编号 IC50(nM)
化合物3,异构体1 37.26 化合物3,异构体2 37.56
结论：受试化合物对SU-DHL-6细胞株显示出了较强的增殖抑制活性。
3.LNCap细胞增殖检测
前列腺癌细胞LNCap购自于ATCC，培养基为：RPMI-1640+10％FBS+1％双抗，培养于37℃，5％CO2孵箱中。第一天收集处于指数生长期的细胞铺板96孔板，每孔2000个细胞。加入不同浓度的化合物，于37℃,5％CO2孵箱中培养7天后，吸去原培养基，加入50μL TrypLE(Gibco，12605010)消化细胞。待细胞消化完全后，加入150μL完全培养基终止消化并混匀细胞，取20μL细胞至新96孔培养板中，加入完全培养基与不同浓度的化合物，继续于37℃，5％CO2孵箱中培养7天。培养结束后，按照CellTiter-Glo试剂盒(Promega，G7572)操作说明，每孔加入50μL预先融化并平衡到室温的CTG溶液，用微孔板震荡器混匀2分钟，于室温放置10分钟后用酶标仪(PHERAstar FSX)测定荧光信号值。
细胞存活率用公式(1)计算。其中Vsample为药物处理组的读数，Vvehiclecontrol为溶剂对照组的平均值。应用origen9.2软件,使用非线性回归模型绘制S型剂量-存活率曲线并计算IC50值。
测试结果：本发明化合物对EZH2受体显示有抑制活性，实施例化合物对LNCap细胞的IC50值在0.1-100nM范围内。其中，部分实施例的测试结果见表3所示。
公式(1):Growth％＝Vsample/Vvehicle control x100％。
表3 LNCap细胞增殖抑制作用
化合物编号 IC50(μM) 化合物编号 IC50(μM)
化合物3,异构体1 46 化合物3,异构体2 11.77
化合物5,异构体1 23 化合物6,异构体1 49
结论：受试化合物对LNCap细胞株显示出了较强的增殖抑制活性。
4.LNCaP细胞中EZH2降解实验
LNCaP是人前列腺癌细胞株，购自于ATCC(Cat.CRL-1740)，其培养条件如下：RPMI-1640+10％FBS+1％双抗，培养于37℃，5％CO2孵箱中。对数生长期的细胞以5×105个/孔铺板于6孔板中。铺板后，置于37℃、5％CO2孵箱培养。24小时后加入不同浓度化合物，于37℃、5％CO2孵箱中继续培养96小时。培养结束后，收集细胞，加入RIPA裂解液(beyotime,Cat.P0013B)于冰上裂解15分钟后，12000rpm，4℃离心10分钟，收集上清蛋白样品，用BCA试剂盒(Beyotime,Cat.P0009)进行蛋白定量后，将蛋白稀释为0.25mg/mL，使用全自动蛋白质印迹定量分析仪(ProteinSimple)检测EZH2(CST,Cat.5246S)和内参β-actin(CST,Cat.3700S)的表达。使用Compass软件计算EZH2相对于内参的表达量。按式(1)计算EZH2降解率。其中EZH2化合物为不同浓度化合物组EZH2表达量，EZH2对照为对照组EZH2表达量。
EZH2降解率％＝(1-EZH2化合物/EZH2对照)×100
表4 LNCap EZH2降解结果
化合物编号 LNCap EZH2降解(％,10μM)
化合物2,异构体2 31
结论：受试化合物对EZH2有降解效果。

Claims (11)

1.一种式(I)所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，
Figure FDA0003576903740000011
M选自
Figure FDA0003576903740000012
Figure FDA0003576903740000021
Figure FDA0003576903740000022
表示为单键或者双键；
y选自1或者2；
a选自1、2、3、4或者5；
X、X'各自独立选择CR0、N；
X”选自NRj、-O-、CR0；
R0选自H、氨基、-NHC1-4烷基；
Y1、Y2、Y3各自独立选自O、N、NRj、S或CRk；
Rj选自H、C1-4烷基；
Rk选自H、卤素、C1-4烷基、卤代C1-4烷基；
R11选自H、C1-4烷基、卤代C1-4烷基和卤素；
R12选自卤素、-S-C1-4烷基、-S-C3-7环烷基或者-S-卤代C1-4烷基；
R13选自H、卤素、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷氧基或者氰基；
R14、R15独立地选自H、卤素、C1-4烷基或卤代C1-4烷基；
A为C1-4烷基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、C1-4烷基-OH、C1-4烷基-O-C1-4烷基、C3-10环烷基、4-10元杂环烷基、苯基或者5-6元杂芳基，所述环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳基任选地被1-3个以下基团取代：C1-4烷基、羰基、C1-4烷氧基、氨基、C1-4烷基氨基、卤代C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基、氰基、羟基、卤素、卤代C1-4烷氧基、-C(O)-C1-4烷基、-S(O)2-C1-4烷基、-C1-4烷基-O-卤代C1-4烷基、-C1-4烷基-OC(O)-C1-4烷基、C2-4烯基和C2-4炔基；
L2为键、-NRd1-、-O-、-S-、-S(O)、-S(O)2；
Rd1选自H、C1-4烷基；
R16选自H、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、C3-6环烷基、4-10元杂环烷基、苯基或5-10元杂芳基，所述烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基任选地被1-3个以下基团取代：卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氰基、羰基、卤代C1-4烷基、氰基取代的C1-4烷基、羟基取代的C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、氨基、C1-4烷基氨基、-C(O)-C1-4烷基、-S(O)2-C1-4烷基、-C1-4烷基-O-卤代C1-4烷基、-C1-4烷基-OC(O)-C1-4烷基、C2-4烯基或C2-4炔基；
R21选自卤素、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷氧基、-S-C1-4烷基、-S-C3-7环烷基或者-S-卤代C1-4烷基；
R22、R23各自独立地选自H、卤素、C1-4烷基或卤代C1-4烷基；
R24、R31各自独立选自H、-NR24aR24b、-OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷基、4-10元杂环烷基、苯基、5-10元杂芳基，所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、苯基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：-OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-NR24aR24b；
R24a、R24b各自独立选自H、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C3-6环烷基、4-10元杂环烷基，所述的烷基、环烷基、杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：-OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氨基、-NHC1-4烷基；
或者R24a、R24b一起与氮原子形成4-7元杂环烷基，所形成的杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：卤素、-OH、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O-卤代C1-4烷基、-O-C3-6环烷基；
R41选自R41a或者-C(O)R41a；
R41a选自H、-OH、氨基、-NR24aR24b、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基、C2-8烯基、卤代C2-8烯基、C2-8炔基、卤代C2-8炔基、C3-10环烷基、4-10元杂环烷基，所述的环烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：-OH、氨基、-NR24aR24b、-C(O)-C1-8烷基、-C(O)-卤代C1-8烷基、-C(O)-OC1-8烷基、-C(O)-O-卤代C1-8烷基、-C(O)NH2、-C(O)NHC1-8烷基-C(O)N(C1-8烷基)2、-S(O)-C1-8烷基、-S(O)2-C1-8烷基；
R51选自C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基；
R55选自C3-7环烷基、4-10元杂环烷基、5-12元杂芳基、
Figure FDA0003576903740000041
所述的环烷基、杂环烷基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基、C1-8烷基-OH、卤代C1-8烷基-OH、C1-8烷基-NH2、C1-8烷基-NHRa；
R52选自H、F、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C3-7环烷基、4-10元杂环烷基、5-12元杂芳基；
R53选自H、F、C1-8烷基；
L3选自键或者C1-8亚烷基；
R54选自H、F、OH、CN、-NR24aR24b、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C3-7环烷基、4-10元杂环烷基、5-12元杂芳基、-C(O)C1-8烷基、-C(O)OC1-8烷基、-O-C3-7环烷基、-O-(4-10元杂环烷基)、-O-(5-12元杂芳基)，所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：OH、F、CN、氨基、-NR24aR24b、C1-8烷基、C1-8烷氧基、羰基、甲醛基、-C(O)C1-8烷基、3-6元杂环烷基；
R61选自H、卤素、OH、CN、C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷基、卤代C1-8烷氧基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基、C6-10芳基、-C(O)C1-8烷基、-C(O)OC1-8烷基、-NR24aR24b、-C(O)NR24aR24b；
R62、R63、R64各自独立选自H、卤素、OH、CN、C1-8烷基、卤代C1-8烷基；或者
R62与R63一起形成4-10元杂环烷基、5-10元杂芳基、C4-10环烷基、C5-10芳基，所述的杂环烷基、杂芳基、环烷基、芳基任选被1-3个以下基团取代：卤素、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基、4-10元杂环烷基；或者
R63与R64一起形成4-10元杂环烷基、5-10元杂芳基、C4-10环烷基、C5-10芳基，所述的杂环烷基、杂芳基、环烷基、芳基任选被1-3个以下基团取代：卤素、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基、4-10元杂环烷基；
R65选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基；
R66选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、-C(O)C1-8烷基、-C(O)OC1-8烷基、C(O)NRdRe、C3-8环烷基、-S(O)2C1-8烷基、-C(O)CH2CN、-C(O)CH2OH、4-10元杂环烷基、4-10元杂芳基，所述的烷基、环烷基、杂环烷基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：卤素、OH、CN、氨基、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基；
R67选自H、CN、卤素、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基、C3-8环烷基或C3-8环烷氧基；
R77选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基；
R76选自Q'-T'-R75；
Q'选自C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、4-8杂环烷基、C3-8环烷基、5-8元芳基、5-8元杂芳基，所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选被1-3个以下取代基取代：卤素、OH、CN、C1-8烷基、卤代C1-8烷基；
T'选自键、-O-、-NHRa、C1-8烷基、-S-，所述的烷基任选被1-3个选自以下基团取代：卤素、OH、CN、C1-8烷基、氨基；
R75选自H、OH、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、NR73R74、C1-8烷氧基、4-8杂环烷基，所述的烷基、烷氧基、杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：卤素、CN、C1-8烷基、NRgRh、4-8杂环烷基、C3-8环烷基；
R72选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、-C(O)C2-8烯基；
R71选自Q-T；
Q选自键或者C1-8烷基；
T选自C1-8烷基、C3-8环烷基、4-8杂环烷基、NRgRh，所述的烷基、环烷基、杂环烷基任选被1-3个以下取代基取代：卤素、OH、CN、C3-8环烷基、-C(O)C1-8烷基、-C(O)C3-8环烷基、-C(O)C2-8烯基、-NRgRh、C1-8烷氧基；
R73、R74各自独立选自H、C1-8烷基、C3-8环烷基、3-10元杂环烷基，所述的烷基、环烷基、杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：C3-8环烷基、OH、氨基、卤素；或者
R73、R74与氮原子一起形成3-10元杂环烷基，所述的杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：卤素、OH、羰基、C1-8烷基、-(CH2)n-C3-8环烷基、3-10元杂环烷基、NRgRh；
Rg、Rh各自独立选自H、C1-8烷基、C1-8烷基-OH、-C(O)C1-8烷基；
n选自0、1、2、3、4、5；
R81选自H、C1-8烷基、C1-8烷氧基、-(CH2)n-C3-8环烷基、-(CH2)n-(4-10元杂环烷基)、-(CH2)n-(5-10元芳基)、-(CH2)n-(5-10元杂芳基)、ORw、NRaRb，所述的烷基、-CH2-、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基任选被1-3个以下基团取代：OH、C1-8烷氧基、NRaRb、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基、NRaRb取代的C3-8环烷基；
Rw选自C1-8烷基、C3-8环烷基、4-10元杂环烷基，所述的烷基、环烷基、杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：C1-8烷基、卤代C1-8烷基、NRaRb；
Ra、Rb各自独立选自H、C1-8烷基、卤代C1-8烷基、-C(O)C1-8烷基、-C(O)OC1-8烷基、C3-8环烷基、4-10元杂环烷基；
R91选自H、CN、卤素、C1-8烷基、NRaRb、卤代C1-8烷基；
R92选自H、CN、卤素、C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3-8环烷基；
R93选自H、卤素、C1-8烷基、卤代C1-8烷基；
R94选自H或卤素；
C环选自C4-8环烷基、4-10元杂环烷基、5-8元杂芳基、5-8元芳基；
R101各自独立选自H、C1-8烷基、NRaRb、卤代C1-8烷基；
k选自1、2或者3；
R102选自H、C1-8烷基、NRaRb、卤代C1-8烷基、C3-8环烷基、4-10元杂环烷基，所述的烷基、环烷基、杂环烷基任选被1-3个以下基团取代：C1-8烷基、卤代C1-8烷基、NRaRb；
N选自键、-O-、-NH-；
L选自Linker链；
CLM选自金刚烷、
Figure FDA0003576903740000061
所述金刚烷任选被1-3个以下基团取代：C1-8烷基、卤代
C1-8烷基。
2.根据权利要求1所述的式(I)化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，
L选自
Figure FDA0003576903740000071
m、m'、n'、n”、o各自独立为0-15的整数；
V各自独立选自O、NR1；
R1选自H、C1-4烷基；
R2选自C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、NR1、-C(O)NR1-、C3-8环烷基、4-8元杂环烷基、5-6元杂芳基。
3.根据权利要求2所述的式(I)化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
L选自键、乙基、丙基、
Figure FDA0003576903740000081
4.根据权利要求1所述的式(I)化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
CLM选自
Figure FDA0003576903740000082
金刚烷、C1-6烷基取代的金刚烷。
5.根据权利要求1所述的式(I)化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中
CLM选自
Figure FDA0003576903740000083
或者
Figure FDA0003576903740000084
6.根据权利要求1所述的式(I)化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，其中，
M选自
Figure FDA0003576903740000091
Figure FDA0003576903740000101
7.如权利要求1所述的式(I)化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，所述化合物选自以下结构之一，
Figure FDA0003576903740000111
Figure FDA0003576903740000121
Figure FDA0003576903740000131
Figure FDA0003576903740000141
Figure FDA0003576903740000151
Figure FDA0003576903740000161
Figure FDA0003576903740000171
8.一种药物组合物，其特征在于，含有权利要求1-7任意一项所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，以及药学上可接受的辅料和/或载体。
9.权利要求1-7任意一项所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，或者权利要求8所述的组合物在制备治疗EZH2介导的疾病的药物中的用途。
10.权利要求1-7任意一项所述的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、共晶或氘代物，或者权利要求8所述的组合物在治疗EZH2介导的疾病中的用途。
11.根据权利要求9或10所述的用途，其中，所述EZH2介导的疾病为肿瘤或自身免疫疾病。
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