CN115097618A - 荧光显微成像光路、光学成像系统及细胞分析仪 - Google Patents
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Abstract
本申请适用于显微成像技术领域,提出一种荧光显微成像光路,包括合色棱镜以及设于合色棱镜周侧的红光源、绿光源、蓝光源;还包括第一二向色镜以及设于第一二向色镜一侧的紫光源;合色棱镜用于接收红光源、绿光源、蓝光源从不同方向入射的入射光,并从同一端出射三色光;第一二向色镜用于折射自紫光源入射的紫光并透射三色光,以使紫光与三色光从同一方向出射并形成激发光;本申请还提出一种光学成像系统,用于照射样品,包括:荧光显微成像光路,及微分干涉显微光路;本申请还提出一种细胞分析仪,包括光学成像系统;本申请结构简洁,能够保证多色光源同时工作并形成激发光,且还能实现对辐射的控制,使用性强。
Description
技术领域
本申请涉及显微成像技术领域,特别涉及一种荧光显微成像光路、光学成像系统及细胞分析仪。
背景技术
目前,细胞分析所用的光学显微系统中荧光显微镜通常采用汞灯作为光源,但汞灯作为光源具有体积笨重、发热严重、辐射严重、需要预热、灯泡工作时间短等缺点。
在先技术中也存在采用卤素灯作为光源的荧光显微镜,但卤素灯整体亮度不足,发热严重,且红外区输出过高;而若采用LED灯作为光源,虽然能提高使用寿命且体积较小,但常规的LED光源无法实现多色同时工作。
发明内容
针对上述技术问题,本申请提供了一种荧光显微成像光路、光学成像系统及细胞分析仪,至少解决了在先技术中荧光显微镜的采用LED光源无法实现多色同时工作的问题。
本申请实施例提出一种荧光显微成像光路,包括合色棱镜以及设于所述合色棱镜周侧的红光源、绿光源、蓝光源;
所述荧光显微成像光路还包括第一二向色镜以及设于所述第一二向色镜一侧的紫光源;
所述合色棱镜用于接收所述红光源、所述绿光源、所述蓝光源从不同方向入射的入射光,并从同一端出射三色光;
所述第一二向色镜用于折射自所述紫光源入射的紫光并透射所述三色光,以使所述紫光与所述三色光从同一方向出射并形成激发光。
在一实施例中,所述绿光源与所述合色棱镜之间设有第一平凸镜;所述蓝光源与所述合色棱镜之间设有第二平凸镜;所述红光源与所述合色棱镜之间设有第三平凸镜;所述合色棱镜与所述第一二向色镜之间设有第四平凸镜;
所述第一二向色镜背离所述合色棱镜的一侧设置有第五平凸镜;
所述第一二向色镜与所述紫光源之间设有第六平凸镜与第七平凸镜,所述第六平凸镜位于所述第七平凸镜与所述第一二向色镜之间。
在一实施例中,所述第一平凸镜、所述第二平凸镜、所述第三平凸镜的焦距为30mm;所述第四平凸镜的焦距为100mm;所述第五平凸镜的焦距为125mm;所述第六平凸镜的焦距为100mm;所述第七平凸镜的焦距为30mm;
所述第一二向色镜为长通透镜且截止波长为410nm。
在一实施例中,所述红光源、所述绿光源、所述蓝光源、所述紫光源均为LED光源。
本申请实施例还提供光学成像系统,用于照射样品,包括:所述的荧光显微成像光路,及
微分干涉显微光路,所述微分干涉显微光路包括依次设置的白光源、第一偏振片、第一微分干涉棱镜、孔径光阑、显微物镜、第二微分干涉棱镜、第二偏振片、管透镜、图像采集组件,所述第一偏振片与所述第二偏振片的偏振方向正交;所述孔径光阑与所述显微物镜之间的空间用于放置样品;
安装模块,所述安装位于所述第二微分干涉棱镜与所述第二偏振片之间;
所述白光源发射的光依次经所述第一偏振片、所述第一微分干涉棱镜、所述孔径光阑、所述显微物镜射入所述安装模块,并经所述第二偏振片、所述管透镜形成DIC影像,所述DIC影像被所述图像采集组件采集;
所述荧光显微成像光路输出的所述激发光经所述安装模块、所述第二微分干涉棱镜、所述显微物镜照射所述样品,使所述样品产生发射光;所述发射光经所述第二微分干涉棱镜、所述第二偏振片、所述管透镜形成发射光的图像,并被所述图像采集组件采集。
在一实施例中,所述安装模块包括:
第一滤光片,位于所述第一二向色镜背离所述合色棱镜的一侧;
第二滤光片,位于所述第二微分干涉棱镜与所述第二偏振片之间;
第二二向色镜;位于所述第二微分干涉棱镜与所述第二滤光片之间,所述第二二向色镜用于将所述激发光设置折射至所述第二微分干涉棱镜并透射所述发射光。
在一实施例中,所述微分干涉显微光路还包括视场光阑,所述视场光阑位于所述白光源与所述第一偏振片之间。
在一实施例中,所述微分干涉显微光路还包括第一聚光镜与第二聚光镜,所述第一聚光镜位于所述白光源与所述视场光阑之间,所述第二聚光镜位于所述孔径光阑与所述样品之间。
在一实施例中,所述显微物镜的放大倍数为10倍或20倍;
所述第二微分干涉棱镜的倍数与所述显微物镜的放大倍数相同。
在一实施例中,所述图像采集组件包括适配器与相机,所述适配器位于所述管透镜与所述相机之间。
本申请实施例还提供一种细胞分析仪,包括所述的光学成像系统。
本申请针对在先技术中荧光显微镜的采用LED光源无法实现多色同时工作的问题做出设计,具有以下有益效果:
1、利用合色棱镜使红、绿、蓝三色光源从不同方向入射并从同一方向出射,实现多色光源同时工作;
2、将紫光源单独设置于一侧,并通过二向色镜使紫光与红、绿、蓝三色光同向出射,进一步保证多色同时工作的前提下,还能独立开关紫光源,以此控制辐射,从而实现了辐射的可控,降低了辐射的危害;
本申请结构简洁,能够保证多色光源同时工作并形成激发光,且还能实现对辐射的控制,实用性强。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动性的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本申请实施例提供的荧光显微成像光路的示意图。
图2为图1所示的荧光显微成像光路中合色棱镜的内部结构示意图。
图3为本申请实施例提供的光学成像系统的光路示意图。
图4为图2所示的光学成像系统中微分干涉显微光路的示意图。
图5为图2所示的光学成像系统中安装模块的示意图。
图中标记的含义为:
10、微分干涉显微光路;
101、白光源;102、第一偏振片;103、第一微分干涉棱镜;104、孔径光阑;105、显微物镜;106、第二微分干涉棱镜;107、第二偏振片;108、管透镜;
109、图像采集组件;1091、适配器;1092、相机;1093、反射镜;
110、视场光阑;111、第一聚光镜;112、第二聚光镜;
20、荧光显微成像光路;
201、红光源;202、绿光源;203、蓝光源;204、紫光源;205、第一平凸镜;206、第二平凸镜;207、第三平凸镜;208、第四平凸镜;209、第五平凸镜;210、第六平凸镜;211、第七平凸镜;212、合色棱镜;213、第一二向色镜;
30、安装模块;
301、第一滤光片;302、第二滤光片;303、第二二向色镜。
具体实施方式
为了使本申请的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图即实施例,对本申请进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅用以解释本申请,并不用于限定本申请。
需说明的是,当部件被称为“固定于”或“设置于”另一个部件,它可以是直接或者间接在该另一个部件上。当一个部件被称为是“连接于”另一个部件,它可以是直接或者间接连接至该另一个部件上。术语“上”、“下”、“左”、“右”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系,仅是为了便于描述,而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作,因此不能理解为对专利的限制。术语“第一”、“第二”仅用于便于描述目的,而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明技术特征的数量。“多个”的含义是两个或两个以上,除非另有明确具体的限定。
还需说明的是,本申请实施例中以同一附图标记表示同一组成部分或同一零部件,对于本申请实施例中相同的零部件,图中可能仅以其中一个零件或部件为例标注了附图标记,应理解的是,对于其他相同的零件或部件,附图标记同样适用。
为了说明本申请所述的技术方案,下面结合具体附图及实施例来进行说明。
实施例一
请参考图1,本申请实施例一提出一种荧光显微成像光路20,包括合色棱镜212、二向色镜、红光源201、绿光源202、蓝光源203、紫光源204,荧光显微成像光路20还包括第一二向色镜213与紫光源204。
红光源201、绿光源202、蓝光源203设于合色棱镜212周侧。
请参考图1、图2,合色棱镜212的原理为:合色棱镜212由带有不同镀膜的棱镜经粘合后制成,图2中的合色棱镜212由镀有蓝光反射膜的棱镜与镀有红光反射膜的棱镜粘合后制成,其中蓝光反射膜能够反射蓝光并透过绿光、红光,而红光反射膜能够反射红光并通过蓝光、绿光。
在合色棱镜212的作用下,绿光源202发出的绿光直接透过合色棱镜212出射,蓝光源203发出的蓝光透过红光反射膜并经蓝光反射膜反射后与绿光同向出射;红光源201发出的红光通过蓝光反射膜并经红光反射膜反射后与绿光同向出射;即在合色棱镜212的作用下,位于合色棱镜212周侧的红光源201、绿光源202、蓝光源203从不同方向将红光、绿光与蓝光射入合色棱镜212,并于同一方向从合色棱镜212出射出包括蓝光、红光与绿光的三色光。
第一二向色镜213设于合色棱镜212的一侧,三色光射向第一二向色镜213并直接通过第一二向色镜213。
紫光源204设于第一二向色镜213的一侧,紫光源204发出的紫光射入第一二向色镜213,并经第一二向色镜213的反射汇入三色光,并最终形成四色光;当不需要紫光时,可将紫光源204直接关闭以降低辐射。
红光源201、绿光源202、蓝光源203、紫光源204可以是LED灯、汞灯、激光作为光源,也可以是其他各种荧光显微镜的光源。
本实施例的光路为:红光源201、绿光源202、蓝光源203发出的红光、绿光、蓝光于不同方向入射合色棱镜212,并于合色棱镜212的同一端沿同一方向出射,并形成三色光;三色光入射第一二向色镜213并直接透过第一二向色镜213;同时紫光源204发出的紫光射入第一二向色镜213,紫光经第一二向色镜213的反射汇入三色光并形成四色光出射。
本实施例的有益效果在于:提供了一种将不通过光源射出的不同颜色光合并且同相输出的光路,从而使得荧光显微成像光路20能够实现多色同时工作,以便于更加准确的反应细胞内表达的信息。
可选的,红光源201、绿光源202、蓝光源203、紫光源204均为LED光源,LED光源体积小、使用寿命长,且发热不明显,在利用荧光显微成像光路20实现多色光源同时工作后能够满足细胞分析的实际使用要求。
参考图1,在一实施例中,绿光源202与合色棱镜212之间设有第一平凸镜205,蓝光源203与合色棱镜212之间设有第二平凸镜206,红光源201与合色棱镜212之间设有第三平凸镜207;因LED光源出射的光为近似点光源出射的扩散光,故设置第一平凸镜205、第二平凸镜206、第三平凸镜207以用于聚拢光线,使红光、绿光、蓝光能够准直入射合色棱镜212,从而保证亮度。
合色棱镜212与第一二向色镜213之间设有第四平凸镜208,从合色棱镜212出射的三色光为平行准直光线,第一平凸透镜用于使出射的三色光聚拢并透射过第一二向色镜213,第四平凸镜208的设置还用于使红光、蓝光、绿光以相同的光程入射第五平凸镜209。
第一二向色镜213与安装模块30之间设置有第五平凸镜209,第五平凸镜209用于使透射过第一二向色镜213的光线准直平行输出。
第一二向色镜213与紫光源204之间设有第六平凸镜210与第七平凸镜211,第六平凸镜210位于第七平凸镜211与第一二向色镜213之间,即自紫光源204发出的紫光依次经过第七平凸镜211、第六平凸镜210后出射向第一二向色镜213;第七平凸镜211用于使LED点光源的紫光源204扩散射出的紫光准直射入第六平凸镜210,第六平凸镜210用于将紫光聚焦射出并射向第一二向色镜213,在第六平凸镜210与第七平凸镜211的作用下,调节了紫光的光程,使得紫光、红光、绿光、蓝光以相同的光程入射第五平凸镜209。
本实施例的光路为:绿光源202出射的光依次经第一平凸镜205、合色棱镜212、第四平凸镜208、第一二向色镜213入射第五平凸镜209;
蓝光源203出射的光依次经第二平凸镜206、合色棱镜212、第四平凸镜208、第一二向色镜213入射第五平凸镜209;
红光源201出射的光依次经第三平凸镜207、合色棱镜212、第四平凸镜208、第一二向色镜213入射第五平凸镜209;
紫光源204出射的光依次经第七平凸镜211、第六平凸镜210、第一二向色镜213入射第五平凸镜209。
本实施例的有益效果在于:通过设置在绿光源202、红光源201、蓝光源203、紫光源204与合色棱镜212、第一二向色镜213之间设置平凸镜,调节绿光、红光、蓝光与紫光的光程,使得绿光、红光、蓝光、紫光到第五平凸镜209的光程相同,以防止因光程不同影响细胞分析的准确性。
可选的,第一平凸镜205、第二平凸镜206、第三平凸镜207的焦距为30mm;第四平凸镜208的焦距为100mm;第五平凸镜209的焦距为125mm;第六平凸镜210的焦距为100mm;第七平凸镜211的焦距为30mm;
此时,第一二向色镜213为长通透镜且截止波长为410nm。
本申请实施例的有益效果为:
1、利用合色棱镜212使红、绿、蓝三色光源从不同方向入射并从同一方向出射,实现多色同时工作;
2、将紫光源204单独设置于一侧,并通过第一二向色镜213使紫光与红、绿、蓝三色光同向出射,进一步保证多色同时工作的前提下,还能独立开关紫光源204,以此控制辐射,从而实现了辐射的可控,降低了辐射的危害。
实施例二
请参考图3、图4,在实施例一的基础上,本申请实施例二提供一种光学成像系统,用于照射样品,例如细胞,使用者可根据样品发射的荧光获得样品的信息。
光学成像系统包括荧光显微成像光路20及微分干涉显微光路10。
荧光显微光路用于提供激发光,激发光照射于细胞后,细胞会发射荧光,并将该荧光称为发射光,使用者可通过发射光的成像和强度统计出细胞内表达的信息。
微分干涉显微光路10照射细胞能够使获得的图像呈现出三维立体感,以便于使用者获取未染色样品的准确图像。
微分干涉显微光路10包括依次设置的白光源101、第一偏振片102、第一微分干涉棱镜103、孔径光阑104、显微物镜105、第二微分干涉棱镜106、第二偏振片107、管透镜108、图像采集组件109。
白光源101可以是LED光源,例如LED白光灯,也可是其他各种白光灯。
第一偏振片102用于使白光源101发射的光线发生偏振并变成第一偏振光。
微分干涉棱镜也称为Nomarski棱镜、Wollaston棱镜或DIC棱镜,第一微分干涉棱镜103用于使第一偏振光分解成偏振方向不同的两束光(x和y),二者之间呈一小夹角;最初两束光(x和y)相位一致,当两束光(x和y)穿过样品区域后,由于样品的厚度和折射率不同,引起了两束光(x和y)发生了光程差。
孔径光阑104用于调整两束光的明亮程度、清晰度和像差,孔径光阑104的通光孔越小,球差越小,像越清晰,景深越大,但像的明亮程度越弱;通光孔越大,像的明亮程度越强,但球差越大,像的清晰程度越差,景深越小。
样品位于孔径光阑104与显微物镜105之间,两束光(x和y)穿过样品区域后,由于样品的厚度和折射率不同,引起了两束光(x和y)发生了光程差。
显微物镜105由若干个透镜组合而成的一个透镜组,用于放大样品的图像,本申请中的显微物镜105采用低倍显微物镜105,因显微物镜105作为显微镜最重要的光学部件广泛的应用于各种不同显微镜中,故不在此赘述其原理与结构。
第二微分干涉棱镜106用于将两束光(x和y)重新合并成一束。
在第二微分干涉棱镜106合并光束后,两束光(x和y)的偏振面仍然存在,两束光(x和y)穿过第二个偏振片,在光束形成DIC影像之前,第二偏振片107的偏振方向与第一偏振片102的偏振方向正交,第二偏振片107将两束光(x和y)的偏振面组合成具有相同偏振面的两束光,从而使二者发生干涉;两束光(x和y)的光程差决定着透光的多少,光程差值为0时,没有光穿过第二偏振片107,光程差值等于波长一半时,穿过第二偏振片107的光达到最大值,最终得到DIC影像,DIC影像中样品结构呈现出明暗差。
管透镜108用于成像,因显微物镜105是无穷远成像,故在图像采集组件109之间设置管透镜108,使得DIC影像能够被图像采集组件109采集。
图像采集组件109用于采集最终得到的DIC影像。
第二微分干涉棱镜106与第二偏振片107之间设置有安装模块30,荧光显微成像光路20输出的激发光经安装模块30、第二微分干涉棱镜106、显微物镜105照射样品,使样品受到高能量激发,产生发射光,以观察和分辨样品中产生荧光的物质的成分和位置;发射光的波长大于激发光的波长。
发射光经显微物镜105、第二微分干涉棱镜106、第二偏振片107、管透镜108后形成发射光图像,并被图像采集组件109采集。
可选的,白光源101为LED白光灯。
可选的,显微物镜105的放大倍数为10倍或20倍,第二分为干涉棱镜的放大倍数与显微物镜105的放大倍数一致。
本实施例的有益效果在于:提供了一种采用微分干涉显微光路10和荧光显微成像光路20的光学成像系统,使得使用者能够得到具有明暗差的DIC影像以及发射光图像,以便于使用者准确获得细胞内表达的信息。
参考图4、图5,在一实施例中,图像采集组件109包括适配器1091和相机1092,适配器1091用于使相机1092更好的采集图像信息;适配器1091根据相机1092的CMOS靶面大小确定,适配器1091的放大倍数可以是0.3倍、0.5倍、0.63倍、0.8倍、1倍、1.2倍,也可以是其他倍数。
可选的,图像采集组件109还包括反射镜1093,反射镜1093位于适配器1091与管透镜108之间,用于使DIC影像与发射光图像折射90°并入射适配器1091,从而减少空间占用。
请参考图3、图4,可选的,微分干涉显微光路10还包括视场光阑110,视场光阑110位于白光源101与第一偏振片102之间,视场光阑110用于限制射入第一偏振片102的光线的范围。
请参考图3、图4,在一实施例中,微分干涉显微光路10还包括第一聚光镜111与第二聚光镜112。
第一聚光镜111位于白光源101与视场光阑110之间,因白光源101为类点光源且发出的光为扩散式发散,设置第一聚光镜111用于使白光能够准直射入视场光阑110,或聚焦射入视场光阑110,以便于保证亮度。
第二聚光镜112位于孔径光阑104与样品之间,调整第二聚光镜112的位置,能够将孔径光阑104的出射的光呈现在像平面上,并照射至样品,以便于样品完整成像。
本实施例的有益效果在于:在微分干涉显微光路10中设置第一聚光镜111与第二聚光镜112,使得白光源101能够有更多的光线进入微分干涉显微光路10,从而保证成像的亮度,同时还能保证光线能够全面覆盖样品,从而保证成像的完整。
参考图3、图5,在一实施例中,安装模块30包括第一滤光片301、第二滤光片302和第二二向色镜303。
第一滤光片301位于第一二向色镜213背离合色棱镜212的一侧,具体的,第一滤光片301位于第五平凸镜209背离第一二向色镜213的一侧,用于使激发光通过并过滤外界光线。
第二滤光片302位于第二微分干涉棱镜106与第二偏振片107之间,用于使发射光通过通过并过滤其他光线。
第二二向色镜303位于第二微分干涉棱镜106与第二滤光片302之间,第二二向色镜303用于将激发光设置折射至第二微分干涉棱镜106并透射发射光。
本实施例的有益效果在于:提供了安装模块30的具体结构,通过设置第一滤光片301与第二滤光片302降低了杂光对成像效果的影响,从而更好的保证了成像准确。
本申请实施例二的有益效果在于:提供了一种包括微分干涉显微光路10与荧光显微成像光路20的光学成像系统,能够照射样品并形成具有明暗差的DIC影像和多色的发射光图像,以便于使用者获得准确的细胞信息。
实施例三
在实施例二的基础上,本实施例提供一种细胞分析仪,包括光学成像系统,细胞分析仪能够依靠荧光显微成像光路20以及微分干涉显微光路10得到样品的清晰的具有明暗差的DIC影像以及多色同时工作激发得到的发射光图像,利用1个明场DIC通道,4个荧光通道,可对细胞的大小,不同荧光通道下细胞的荧光成像和荧光强度进行检测,可以准确地统计细胞内表达的信息。
以上实施例仅用以说明本申请的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述实施例对本申请进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本申请各实施例技术方案的精神和范围,均应包含在本申请的保护范围之内。
Claims (11)
1.一种荧光显微成像光路,其特征在于,包括合色棱镜(212)以及设于所述合色棱镜(212)周侧的红光源(201)、绿光源(202)、蓝光源(203);
所述荧光显微成像光路(20)还包括第一二向色镜(213)以及设于所述第一二向色镜(213)一侧的紫光源(204);
所述合色棱镜(212)用于接收所述红光源(201)、所述绿光源(202)、所述蓝光源(203)从不同方向入射的入射光,并从同一端出射三色光;
所述第一二向色镜(213)用于折射自所述紫光源(204)入射的紫光并透射所述三色光,以使所述紫光与所述三色光从同一方向出射并形成激发光。
2.根据权利要求1所述的荧光显微成像光路,其特征在于,所述绿光源(202)与所述合色棱镜(212)之间设有第一平凸镜(205);所述蓝光源(203)与所述合色棱镜(212)之间设有第二平凸镜(206);所述红光源(201)与所述合色棱镜(212)之间设有第三平凸镜(207);所述合色棱镜(212)与所述第一二向色镜(213)之间设有第四平凸镜(208);
所述第一二向色镜(213)背离所述合色棱镜(212)的一侧设置有第五平凸镜(209);
所述第一二向色镜(213)与所述紫光源(204)之间设有第六平凸镜(210)与第七平凸镜(211),所述第六平凸镜(210)位于所述第七平凸镜(211)与所述第一二向色镜(213)之间。
3.根据权利要求2所述的荧光显微成像光路,其特征在于,所述第一平凸镜(205)、所述第二平凸镜(206)、所述第三平凸镜(207)的焦距为30mm;所述第四平凸镜(208)的焦距为100mm;所述第五平凸镜(209)的焦距为125mm;所述第六平凸镜(210)的焦距为100mm;所述第七平凸镜(211)的焦距为30mm;
所述第一二向色镜(213)为长通透镜且截止波长为410nm。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的荧光显微成像光路,其特征在于,所述红光源(201)、所述绿光源(202)、所述蓝光源(203)、所述紫光源(204)均为LED光源。
5.一种光学成像系统,用于照射样品,其特征在于,包括:如权利要求1-4中任一项所述的荧光显微成像光路(20),及
微分干涉显微光路(10),所述微分干涉显微光路(10)包括依次设置的白光源(101)、第一偏振片(102)、第一微分干涉棱镜(103)、孔径光阑(104)、显微物镜(105)、第二微分干涉棱镜(106)、第二偏振片(107)、管透镜(108)、图像采集组件(109),所述第一偏振片(102)与所述第二偏振片(107)的偏振方向正交;所述孔径光阑(104)与所述显微物镜(105)之间的空间用于放置所述样品;
安装模块(30),位于所述第二微分干涉棱镜(106)与所述第二偏振片(107)之间;
所述白光源(101)发射的光依次经所述第一偏振片(102)、所述第一微分干涉棱镜(103)、所述孔径光阑(104)、所述显微物镜(105)射入所述安装模块(30),并经所述第二偏振片(107)、所述管透镜(108)形成DIC影像,所述DIC影像被所述图像采集组件(109)采集;
所述荧光显微成像光路(20)输出的所述激发光经所述安装模块(30)、所述第二微分干涉棱镜(106)、所述显微物镜(105)照射所述样品,使所述样品产生发射光;所述发射光经所述第二微分干涉棱镜(106)、所述第二偏振片(107)、所述管透镜(108)形成发射光图像,并被所述图像采集组件(109)采集。
6.根据权利要求5所述的光学成像系统,其特征在于,所述安装模块(30)包括:
第一滤光片(301),位于所述第一二向色镜(213)背离所述合色棱镜(212)的一侧;
第二滤光片(302),位于所述第二微分干涉棱镜(106)与所述第二偏振片(107)之间;
第二二向色镜(303);位于所述第二微分干涉棱镜(106)与所述第二滤光片(302)之间,所述第二二向色镜(303)用于将所述激发光设置折射至所述第二微分干涉棱镜(106)并透射所述发射光。
7.根据权利要求5所述的光学成像系统,其特征在于,所述微分干涉显微光路(10)还包括视场光阑(110),所述视场光阑(110)位于所述白光源(101)与所述第一偏振片(102)之间。
8.根据权利要求7所述的光学成像系统,其特征在于,所述微分干涉显微光路(10)还包括第一聚光镜(111)与第二聚光镜(112),所述第一聚光镜(111)位于所述白光源(101)与所述视场光阑(110)之间,所述第二聚光镜(112)位于所述孔径光阑(104)与所述样品之间。
9.根据权利要求5所述的光学成像系统,其特征在于,所述显微物镜(105)的放大倍数为10倍或20倍;
所述第二微分干涉棱镜(106)的倍数与所述显微物镜(105)的放大倍数相同。
10.根据权利要求5所述的光学成像系统,其特征在于,所述图像采集组件(109)包括适配器(1091)与相机(1092),所述适配器(1091)位于所述管透镜(108)与所述相机(1092)之间。
11.一种细胞分析仪,其特征在于,包括如权利要求5-10中任一项所述的光学成像系统。
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Citations (4)
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JPH10115781A (ja) * | 1997-11-18 | 1998-05-06 | Olympus Optical Co Ltd | 光学顕微鏡 |
JP2005315574A (ja) * | 2004-04-26 | 2005-11-10 | Crie Inc | 電子カメラ |
CN112859315A (zh) * | 2021-01-11 | 2021-05-28 | 北京大学 | 一种多色双模式结构光照明显微成像系统及其成像方法 |
CN113945151A (zh) * | 2021-10-18 | 2022-01-18 | 锘海生物科学仪器(上海)有限公司 | 高分辨平铺光片显微镜 |
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH10115781A (ja) * | 1997-11-18 | 1998-05-06 | Olympus Optical Co Ltd | 光学顕微鏡 |
JP2005315574A (ja) * | 2004-04-26 | 2005-11-10 | Crie Inc | 電子カメラ |
CN112859315A (zh) * | 2021-01-11 | 2021-05-28 | 北京大学 | 一种多色双模式结构光照明显微成像系统及其成像方法 |
CN113945151A (zh) * | 2021-10-18 | 2022-01-18 | 锘海生物科学仪器(上海)有限公司 | 高分辨平铺光片显微镜 |
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