CN115089590A - 环戊基三唑嘧啶类药物作为药物成分在肝炎药物中的应用 - Google Patents

环戊基三唑嘧啶类药物作为药物成分在肝炎药物中的应用 Download PDF

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Abstract

环戊基三唑嘧啶类药物作为药物成分在肝炎药物中的应用。替格瑞洛片中的(1S,2S,3R,5S)‑3‑[7‑{[(1R，2S)‑2‑(3,4‑二氟苯)环丙基]氨基}‑5‑(丙基硫氧嘧啶)‑3H‑[1,2,3]‑三唑磷[4,5‑d]嘧啶‑3‑基]‑5‑(2‑羟乙基)环戊烷‑1,2‑二醇通过结合P2Y12受体，降低其活性，减少炎症因子的产生，最终缓解自身免疫性肝炎。总而言之，本发明实验数据表明(1S,2S,3R,5S)‑3‑[7‑{[(1R，2S)‑2‑(3,4‑二氟苯)环丙基]氨基}‑5‑(丙基硫氧嘧啶)‑3H‑[1,2,3]‑三唑磷[4,5‑d]嘧啶‑3‑基]‑5‑(2‑羟乙基)环戊烷‑1,2‑二醇在调控自身免疫性肝炎病理中具有关键作用，可为自身免疫性肝炎治疗提供可供选择的药物。

Description

环戊基三唑嘧啶类药物作为药物成分在肝炎药物中的应用
技术领域
本发明涉及新药物应用，具体的，为一种环戊基三唑嘧啶类药物(CAS：274693-27-5)在自身免疫性肝炎中的应用，更具体的，为(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇作为药物成分在肝炎药物中的应用。
背景技术
肝脏作为重要的前线免疫器官，含有大量的先天性和适应性免疫细胞参与协同免疫反应。在自身免疫性疾病中，当肝细胞受到身体免疫系统的攻击以及病毒性肝炎中T细胞破坏受感染的肝细胞时，就会发生免疫介导的肝炎。急性肝损伤的潜在机制仍不清楚，限制了临床治疗的疗效。越来越多的证据表明，T细胞的激活在促进自身免疫性肝炎(AIH)中起着重要作用。
Figure BDA0003691800230000011
上述药物结构式是替格瑞洛片(英语简称：Ticagrelor)，为一种环戊基三唑嘧啶类(CPTP)口服抗血小板药物，临床上主要用于预防和治疗心血管疾病的血栓事件。
目前尚无研究或者公开替格瑞洛片在其他疾病中的新应用。
发明内容
本发明目的在于首次发现替格瑞洛片中的主要活性成分(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇作为功能成分在自身免疫性肝炎药物中的应用。
在此研究中，本发明发现(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇作为药物成分可降低自身免疫性肝炎中肝细胞的病理损伤，有效缓解自身免疫性肝炎。进一步分析替格瑞洛片中的(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇的作用机制发现：(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇与受体P2Y12结合，抑制了P2Y12受体的生物活性，进一步降低了肝脏中炎症因子-IFN-γ的生成。
自身免疫性肝炎(Autoimmune hepatitis，AIH)是一种自身免疫反应介导的慢性进行性肝脏炎症性疾病，以高球蛋白血症、自身抗体阳性和组织学上有界面肝炎及汇管区浆细胞浸润为特征。在自身免疫性疾病中，当肝细胞受到身体免疫系统的攻击就会发生免疫介导的肝炎性疾病。刀豆球蛋白A(ConA)是一种植物血凝素，其本质是蛋白质。ConA具有强力的促有丝分裂，促淋巴细胞转化反应作用。因ConA可引起肝细胞损伤，因此被广泛用于在动物体内模拟临床免疫性肝损伤的模式。利用ConA诱导的自身免疫性肝炎为动物模型，本发明研究(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇预防自身免疫性肝炎药物中的应用。
在ConA诱导的自身免疫性肝炎动物模型中，本发明发现与对照组相比，(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇(实验中通过添加替格瑞洛片)明显缓解小鼠自身免疫性肝炎的肝病理症状，自身免疫性肝炎的肝功能检查的相关指标谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)的表达量下降。并且，作为自身免疫性肝炎主要致病的IFN-γ+的肝淋巴细胞比例均明显的降低。此外，外周血中促炎因子IFN-γ的分泌量也显著下降。综合结果表明(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇可有效治疗自身免疫性肝炎。其作用机制可能是通过减少自身免疫性肝炎中致病性IFN-γ+的肝淋巴细胞比例。进一步研究(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇(通过添加替格瑞洛片)的作用机制发现：P2Y12受体是(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇的用药靶点。P2Y12受体是一类G蛋白偶联受体，在淋巴细胞中可促进炎症因子的表达导致自身免疫疾病的发生。因此，在自身免疫性肝炎中，减少淋巴细胞所产生的炎症因子有利于缓解疾病进程。替格瑞洛片中的(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇通过结合P2Y12受体，降低其活性，减少炎症因子的产生，最终缓解自身免疫性肝炎。总而言之，本发明实验数据表明(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇在调控自身免疫性肝炎病理中具有关键作用，可为自身免疫性肝炎治疗提供可供选择的药物。
附图说明
图1：临床用药替格瑞洛片可有效缓解ConA诱导的自身免疫性肝炎
(A)：替格瑞洛的分子结构图。
(B)：取五组不同实验鼠的外周血，检测AST和ALT表达量。
(C)：四组不同实验鼠的肝脏组织切片进行HE染色，(D)：坏死部分百分比的统计分析。
(E)：ELISA检测外周血中IFN-γ的表达量。
(F)：QPCR检测肝组织中的IFN-γ的mRNA表达；
*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001(Student's t test)。
图2：临床用药-替格瑞洛可预防性缓解ConA诱导的自身免疫性肝炎
(A)：流式检测分析肝淋巴细胞内NK+IFN-γ+、NKT+IFN-γ+、CD4+IFN-γ+、CD8+IFN-γ+细胞比例
(B)：百分比柱状分析图。
*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001(Student's t test)。
图3.替格瑞洛治疗性给药缓解自身免疫性肝炎(12h实验)
(A)：实验安排模式图。
(B)：取四组不同实验鼠的外周血，检测ALT和AST表达量。分组如下：
1.阴性对照；
2.阳性对照(+12.5mg/kg ConA)，12h后取样；
3.治疗组2(+12.5mg/kg ConA)，30min后灌胃抑制剂替格瑞洛(Tica)，12h后取样；
4.治疗组4(+12.5mg/kg ConA)，1h后灌胃抑制剂替格瑞洛(Tica)，12h后取样；
*p<0.05，(Student's t test)。
图4.替格瑞洛治疗性给药缓解自身免疫性肝炎(24h实验)
(A)：实验安排模式图。
(B)：取三组不同实验鼠的外周血，检测ALT和AST表达量。其中
1.阴性对照；
2.WT+ConA.阳性对照(+12.5mg/kg ConA)，24h后取样；
3.治疗组(+12.5mg/kg ConA)，12h后灌胃替格瑞洛片(Tica)，24h后取样；
*p<0.05(Student's t test)。
图5：敲除P2Y12受体抑制ConA诱导的自身免疫性肝炎
(A)：ConA构建自身免疫性肝炎指示图
(B)：取四组不同实验鼠的外周血，检测AST和ALT表达量
(C)：四组不同实验鼠的肝脏组织切片进行HE染色
(D)：ELISA检测外周血中IFN-γ的表达量；
*p<0.05，**p<0.01(Student's t test)。
具体实施方式
(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇是临床用药-替格瑞洛片的主要成分。以下各个实施例中的实验是以添加替格瑞洛片代表(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇的来源。
本领域刀豆球蛋白A(ConA)知识介绍：
注射ConA已被广泛用于模拟体内暴发性免疫性肝损伤的模式。在该模型中，ConA的给药会迅速激活T细胞，例如CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、自然杀伤T(NKT)细胞和自然杀伤(NK)细胞，然后产生多种促炎细胞因子(例如，肿瘤坏死)因子(TNF-α、IFN-γ、IL-6)通过激活下游信号引起肝细胞损伤。因此，本发明利用ConA诱导的自身免疫性肝炎为研究(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇在预防和治疗自身免疫性肝炎中的应用以及分子机制提供了宝贵的机会。
在这项研究中，本发明探讨了临床用药(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇在ConA诱导的自身免疫性肝炎中的作用。本发明发现替格瑞洛片中的(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇可通过治疗性给药和预防性给药两方面有效治疗自身免疫性肝炎。本发明发现替格瑞洛片中的(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇可降低T细胞增殖、分化和炎症细胞因子的产生。进一步的作用机制研究发现(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇的作用靶点与P2Y12受体有关。
材料与方法
动物
C57BL/6小鼠购自南京模式动物中心(南京，中国)。所用C57BL/6小鼠为8-10周龄，饲养于同济大学实验动物中心SPF级实验室，自由食用水和饲料。P2Y12-KO小鼠购自Jackson Laboratory。所有实验均获得批准，并按照同济大学的动物保护委员会的指导进行。
AIH诱导及治疗
C57BL/6小鼠(8-10周)尾静脉注射12.5mg/kg Con A(C 2010,Sigma)。尾静脉注射12h或24h后，取外周血血清进行AST和ALT检测。药物治疗：①预防治疗组：替格瑞洛片(瑞典AstraZeneca AB制药有限公司)溶于0.9％NaCl中并按照(替格瑞洛：15mg/kg,30mg/kg,60mg/kg)剂量在尾静脉注射ConA前7天每天灌胃一次给药直至实验结束，相同体积的100μL0.9％NaCl溶液作为对照。②给药治疗组：小鼠在尾静脉ConA注射后30min、1h分别给予(替格瑞洛：15mg/kg)灌胃一次，并在建模后12h取样；小鼠在尾静脉ConA注射后12h给予(替格瑞洛：15mg/kg)灌胃一次，并在建模后24h取样。
组织病理和免疫组织化学分析
每只小鼠用200μL 10％水合氯醛进行深度麻醉，然后0.9％NaCl心脏灌流去除各器官中的外周血，4％(w/v)多聚甲醛灌流进行固定。取肝脏组织样品4％多聚甲醛4℃固定过夜。石蜡包埋后H&E染色分析炎症浸润，Image-Pro软件进行统计分析。
细胞染色和流式分析
肝脏淋巴细胞用预冷的组织匀浆器进行匀浆，70μm细胞滤网过滤收集至15ml离心管中，500g 4℃离心10min获得细胞，然后将细胞重悬在8ml 33％Percoll中，2400g 20℃密度梯度离心25min，收集位于33％Percoll底部的细胞，CD4(Invitrogen,2210365)、CD3(eBioscience,17-0031-82)、CD8(eBioscience,11-0081-85)、NK(BioLegend,108706)、IFN-γ(BioLegend,505810,1:100)染色。流式分析为BD FACS Verse系统，并用Flow JoV10软件进行分析。
ELISA检测外周血中炎症因子表达
WT、替格瑞洛处理组和P2Y12-KO小鼠分别进行尾静脉ConA注射，注射后12h或24h，从眼眶静脉血中收集血清约150μl。眼眶静脉血在室温静置30分钟。30分钟后，通过在4℃下以4000rpm离心10分钟，仔细收集上清，获得血清。替格瑞洛片溶于0.9％NaCl中并按照(替格瑞洛：15mg/kg,30mg/kg,60mg/kg)或溶媒(0.9％NaCl)处理小鼠构建AIH模型。在建模12h或24h时，从眼眶静脉血中收集血清约150μl。眼眶静脉血在室温静置30分钟。30分钟后，通过在4℃下以4000rpm离心10分钟，仔细收集上清，尽可能不要吸到下方的沉淀，获得血清。根据制造商的说明，使用特定的ELISA试剂盒(eBioscience)测量各组血清中IFN-γ的浓度。
统计分析
数据统计用Student’s t-test分析，数据表示为mean±SEM，P＜0.05被认为有统计学意义。
结果
3.1.1临床用药-替格瑞洛预防性给药缓解自身免疫性肝炎
本发明评估替格瑞洛是否对自身免疫性肝炎具有一定的治疗作用。首先，本发明从医院购买了临床用药替格瑞洛片。给8-10周C57BL/6雄鼠口服用不同剂量(替格瑞洛片：15mg/kg,30mg/kg,60mg/kg)灌胃给药7天，对照组给予相同体积100μL 0.9％NaCl溶液作为对照。在第7天时，用12.5mg/kg的Con A进行尾静脉注射，构建实验性自身免疫性肝炎模型。12h后取外周血和肝脏组织进行进一步实验。
图1A为替格瑞洛片的分子结构式。
结果如图1B所示，结果表明15mg/kg的替格瑞洛能显著缓解疾病的严重程度、降低AST和ALT的数值。取降低AST和ALT效果最好的15mg/kg的替格瑞洛进行肝HE染色。
如图1C所示，HE染色结果表明替格瑞洛治疗组与对照组相比肝脏内白细胞浸润明显降低，坏死面积变小。
Image-Pro软件进行统计分析，治疗组和对照组之间具有统计学意义(图1D)。
15mg/kg的替格瑞洛同时降低了外周血中IFN-γ的表达量(图1E)，肝组织的IFN-γmRNA也降低(图1F)。
总之，研究数据表明临床用药-替格瑞洛片预防性给药缓解自身免疫性肝炎。
为充分证明替格瑞洛的治疗效果，本发明进一步检测了自身免疫性肝炎主要致病的IFN-γ+的肝淋巴细胞比例。
3.1.2临床用药-替格瑞洛预防性给药缓解自身免疫性肝炎中IFN-γ的阳性比例
构建AIH模型前7天，每天灌胃给药不同剂量的替格瑞洛片。再构建AIH模型，12h后取小鼠肝脏中的淋巴细胞，通过胞内染色和流式分析检测浸润至肝脏中与疾病活性有关的IFN-γ+细胞比例。经流式分析发现，替格瑞洛片治疗组与对照组相比CD4+T、CD8+T、NK细胞中IFN-γ+阳性数量整体下降，如图2A、图2B所示。以上数据表明替格瑞洛预防性给药缓解自身免疫性肝炎中IFN-γ的阳性比例。
以上结果表明：预防性给予替格瑞洛药物中的有效成分(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇可有效缓解自身免疫性肝炎。为了进一步研究(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇对实验性自身免疫性肝炎的治疗效果，进行了治疗性给药的研究。
3.1.3临床用药-替格瑞洛片治疗性给药缓解自身免疫性肝炎
首先构建自身免疫性肝炎小鼠模型，在尾静脉注射ConA(12.5mg/kg)后不同时间点(30min和1h)给予口服灌胃给药替格瑞洛片，12h后再取小鼠外周血血清检测其中的ALT和AST表达情况。
图3A为实验安排模式图，在不同时间点给予替格瑞洛片。
图3B为不同时间点ALT和AST的表达情况。
结果表明：不同时间点的替格瑞洛片均能有效降低ALT和AST的表达情况。这进一步说明临床用药-替格瑞洛片治疗性给药能缓解自身免疫性肝炎。
在治疗性给药的基础上本发明进一步延长自身免疫性肝炎的模型时间，研究替格瑞洛片中的有效成分(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇对24h的实验构建性自身免疫性肝炎的治疗效果。
3.1.4临床用药-替格瑞洛片治疗性给药缓解自身免疫性肝炎
自身免疫性肝炎小鼠模型，在尾静脉注射ConA(12.5mg/kg)后12h给予口服灌胃给药替格瑞洛片，24h后再取小鼠外周血血清检测其中的ALT和AST表达情况。
图4A为实验安排模式图，在尾静脉ConA(12.5mg/kg)注射后12h给予替格瑞洛片。
图4B为ALT和AST的表达情况
结果如图4所示，建模12h后的替格瑞洛片仍能能有效降低ALT和AST的表达情况。这进一步说明临床用药-替格瑞洛片治疗性给药能缓解自身免疫性肝炎。
综上结果所述，替格瑞洛片中的有效成分(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇可治疗性抑制自身免疫性肝炎，下一步本发明寻找替格瑞洛片治疗自身免疫性肝炎的作用机制。
3.1.5临床用药-替格瑞洛片治疗性给药缓解自身免疫性肝炎的作用机制
本发明首先用了P2Y12-KO小鼠进行在体实验。本发明取6-8周的P2Y12-KO小鼠通过尾静脉注射ConA方式构建自身免疫性肝炎(如图5A)。12h后对外周血中的AST和ALT进行检测。经检测结果发现，P2Y12-KO+ConA小鼠的AST和ALT的数值明显低于WT+ConA小鼠。进一步对肝脏组织进行HE染色，分析结果发现：P2Y12-KO+ConA小鼠肝脏内炎症细胞浸润较WT+ConA组的炎症细胞浸润减轻，如图5B和图5C所示。近期研究表明分泌IFN-γ的Th1细胞是ConA诱导的实验性自身免疫性肝炎的主要病理性效应T细胞。本发明对两组小鼠外周血中的IFN-γ含量进行了检测，结果如图5D所示，P2Y12-KO+ConA组中的IFN-γ表达量明显低于WT+ConA组。综上结果：替格瑞洛片中(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇可能是通过P2Y12受体治疗自身免疫性肝炎。
讨论
目前为止，自身免疫性肝炎的病因还不是很清楚，所以很难把病因完全去除，治愈比较难，尚没有一种药可以完全治愈自身免疫性肝炎疾病。而临床上多数使用激素和免疫抑制剂来控制病情，控制免疫反应，让病情稳定住，保持转氨酶的正常，让病情缓解或者稳定，而一旦停药，很多病人会复发。
自身免疫性肝炎主要是IFN-γ+细胞介导的可影响肝脏内淋巴系统的自身免疫性疾病，本发明的研究结果表明预防性给药(替格瑞洛片)可影响各细胞亚群的IFN-γ+分化。更有趣的现象是替格瑞洛片具有剂量依赖性。其中15mg/kg的替格瑞洛能够有效抑制AST和ALT表达水平。而治疗性给药替格瑞洛片同样能够降低AIH小鼠转氨酶水平和各细胞亚群的IFN-γ+分化，以及肝组织的病理情况。这进一步表明替格瑞洛可有效抑制ConA诱导的自身免疫性肝炎。进一步分析替格瑞洛的作用机制：本发明的研究数据表明P2Y12受体可能是替格瑞洛中(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇治疗ConA诱导的实验性自身免疫性肝炎的作用靶点。这些实验结果为将来进一步研究提供了扎实的前期结果。
总而言之，本发明证明了临床用药-替格瑞洛片可以通过抑制体内肝脏淋巴系统中IFN-γ的分泌来缓解自身免疫性肝炎临床和组织病理状况，其可能的作用机制为通过其受体P2Y12实现的。这为替格瑞洛中(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇能够有效干预自身免疫性肝炎的临床指标提供了理论依据。

Claims (4)

1.一种(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇作为药物成分在肝炎药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，通过替格瑞洛片提供药物成分。
3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，数据表明P2Y12受体可是(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇自身免疫性肝炎的作用靶点。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，P2Y12受体可是(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R，2S)-2-(3,4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3H-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇治疗ConA诱导的自身免疫性肝炎的作用靶点。
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