CN115087454A - 富含多酚化合物的提取物以及相关方法 - Google Patents

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Abstract

在多个方面，本文提供富含多酚化合物的大麻提取物。本文还提供一种用于使组合物富含多酚化合物的方法以及由该方法制备的组合物。本文提供各种化妆品和药物产品、方法和用途以及天然保健产品。

Description

富含多酚化合物的提取物以及相关方法
技术领域
本发明涉及提取物。更具体地，在实施方案中，本发明涉及富含多酚化合物的提取物以及相关产品、方法和用途。
背景技术
植物富含生物活性天然化合物，该生物活性天然化合物能够调节一种或多种细胞过程，从而对人类健康产生影响。这些化合物(通常被称为植物化学物质)在药物发现中具有特殊的地位，用于治疗大量的医学病况，包括癌症、免疫病症、传染病、慢性疾病和代谢疾病。
一大类植物化学物质由酚类化合物组成。这些是所有植物用于最佳生长和发育以及应对不断变化的环境条件而进行生物合成的次生代谢物。它们提供对捕食者的防御，作为针对相同或其他物种的挥发性引诱剂，或作为吸引或警告其他物种的着色剂。酚类和多酚类(也包括类黄酮类组群)也作为抗氧化剂，用于保护植物免受氧化应激，并使其在UV光富集的环境中生存。大量科学数据支持该假设，即食品中发现的这些天然抗氧化植物化学物质及其纯净形式有利于消费者，因此它们已成为营养食品行业的重要参与者。
经常使用多种从复杂混合物和植物组织中提取、分离和纯化酚类化合物的技术。液-液萃取和柱色谱法过程是植物化学物质提取和分离的主要常规技术。它们中的一些，例如半制备性高效液相色谱法、超临界流体萃取、高速逆流液相色谱法、沉淀-吸附和固相萃取(Watson,2014)，具有耗时的缺点并可能得到少量样品。此外，一些方法需要高投资成本并且可能使多酚产率低。
需要替选疗法来克服或缓解现有技术的至少一些缺陷，和/或提供有用的替选方案。
发明内容
根据一个方面，提供一种富含多酚化合物的大麻提取物。
在一个方面，所述提取物基本上不含THC。
在一个方面，所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的THC。
在一个方面，所述提取物基本上不含大麻素，或者其中所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的大麻素。
在一个方面，所述提取物基本上不含大麻二酚，或其中所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的大麻二酚。
在一个方面，所述提取物基本上不含萜烯，或者其中所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的萜烯。
在一个方面，所述提取物包含THC。
在一个方面，所述提取物包含大麻素。
在一个方面，所述提取物包含大麻二酚。
在一个方面，所述提取物包含萜烯。
在一个方面，所述提取物来自大麻(Cannabis sativa L.marijuana)或麻类植物(hemp)。
在一个方面，所述提取物来自植物材料，所述植物材料包括叶、根、茎、枝、花、花序、果实、种子、细胞、组织培养物或其组合。
在一个方面，所述多酚化合物包括类黄酮类、茋类和/或联苄类。
在一个方面，所述类黄酮类包括大麻黄素A、大麻黄素B或其组合。
在一个方面，所述联苄类包括大麻烯。
根据一个方面，提供一种制备富含多酚化合物的组合物的方法，所述方法包括将所述组合物施加于吸附树脂并洗脱所述吸附树脂以产生富含多酚化合物的洗脱液。
在一个方面，所述吸附树脂包括大孔吸附树脂和/或PVPP。
在一个方面，所述方法包括：
将所述组合物施加于第一吸附树脂并洗脱所述第一吸附树脂以产生富含多酚化合物的第一洗脱液；和
将所述第一洗脱液施加于第二吸附树脂并洗脱所述第二吸附树脂以产生富含多酚化合物的第二洗脱液。
在一个方面，所述第一吸附树脂包括大孔吸附树脂并且所述第二吸附树脂包括PVPP。
在一个方面，所述第一吸附树脂包括PVPP并且所述第二吸附树脂包括大孔吸附树脂。
在一个方面，所述大孔吸附树脂包括聚合的非离子聚苯乙烯-二乙烯基苯树脂，例如SP825、SP207、XAD-16或其组合。
在一个方面，洗脱大孔吸附树脂包括添加约3体积至约4体积的约60％至约100％乙醇。
在一个方面，洗脱PVPP吸附树脂包括添加约3体积至约4体积的约70％至约100％乙醇。
在一个方面，乙醇具有约9.0的pH。
在一个方面，所述组合物包含植物提取物。
在一个方面，所述植物提取物是大麻提取物。
在一个方面，所述提取物基本上不含THC。
在一个方面，所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的THC。
在一个方面，所述提取物基本上不含大麻素，或者其中所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的大麻素。
在一个方面，所述提取物基本上不含大麻二酚，或者其中所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的大麻二酚。
在一个方面，所述提取物基本上不含萜烯，或者其中所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的萜烯。
在一个方面，所述提取物包含THC。
在一个方面，所述提取物包含大麻素。
在一个方面，所述提取物包含大麻二酚。
在一个方面，所述提取物包含萜烯。
在一个方面，所述提取物来自大麻或麻类植物。
在一个方面，所述提取物来自植物材料，所述植物材料包括叶、根、茎、枝、花、花序、果实、种子、细胞、组织培养物或其组合。
在一个方面，所述提取物中的多酚化合物包括类黄酮类、茋类和/或联苄类。
在一个方面，所述提取物中的类黄酮类包括大麻黄素A、大麻黄素B或其组合。
在一个方面，所述提取物中的联苄类包括大麻烯。
在一个方面，所述方法还包括在将所述提取物施加于吸附树脂之前用极性溶剂提取所述植物材料。
在一个方面，所述极性溶剂包括乙醇、甲醇、异丙醇、丙酮、乙腈或其组合。
在一个方面，在提取之前将所述植物材料干燥并任选地研磨成粉末，例如粗粉。
在一个方面，所述提取包括将所述植物材料与所述极性溶剂混合并将混合物温育一段时间。
在一个方面，所述时间为约12小时至约24小时。
在一个方面，所述温育在约4℃至约20℃的温度下进行。
在一个方面，将所述提取重复至少一次，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次。
在一个方面，所述方法还包括对洗脱液进行脱醇和浓缩。
在一个方面，在约40℃至约80℃在减压下对所述洗脱液进行脱醇和浓缩。
根据一个方面，提供一种本文所述的用于至少部分纯化大麻黄素A、大麻黄素B和/或大麻烯的方法。
根据一个方面，提供一种通过本文所述的方法制备的富含多酚化合物的组合物。
根据一个方面，提供包含本文所述的大麻提取物或组合物的化妆品、药物产品和/或天然保健产品。
在一个方面，本文所述的大麻提取物或组合物用作化妆品、药物产品和/或天然保健产品。
根据一个方面，提供一种化妆方法，所述化妆方法包括将本文所述的大麻提取物或组合物施用于受试者。
根据一个方面，提供一种治疗和/或预防炎症的方法，所述方法包括将本文所述的大麻提取物或组合物施用于有需要的受试者。
根据一个方面，提供一种治疗和/或预防癌症的方法，所述方法包括将本文所述的大麻提取物或组合物施用于有需要的受试者。
根据一个方面，提供一种治疗和/或预防动脉粥样硬化的方法，所述方法包括将本文所述的大麻提取物或组合物施用于有需要的受试者。
根据一个方面，提供一种保肝方法，所述方法包括将本文所述的大麻提取物或组合物施用于有需要的受试者。
根据一个方面，提供本文所述的大麻提取物或组合物用于化妆目的的用途。
根据一个方面，提供本文所述的大麻提取物或组合物用于治疗和/或预防炎症的用途。
根据一个方面，提供本文所述的大麻提取物或组合物用于治疗和/或预防癌症的用途。
根据一个方面，提供本文所述的大麻提取物或组合物用于治疗和/或预防动脉粥样硬化的用途。
根据一个方面，提供本文所述的大麻提取物或组合物用于保肝的用途。
根据以下详细描述，本发明的其他特征和优点将变得显而易见。然而，应当理解，详细描述和具体示例在指示本发明的实施方案时仅以说明的方式给出，因为根据详细描述，在本发明的精神和范围内的各种变化和修改对于本领域技术人员来说将是显而易见的。
附图说明
根据以下参考附图的描述将会进一步理解本发明，其中：
图1.使用提取方案获得的来自麻类植物茎材料的提取物中存在的大麻黄素A的LC-MS分析的色谱图，该提取方案由以下组成：用85％EtOH进行初始提取以获得粗提取物样品(A、B、C)和用100％乙醇在45℃从PVPP树脂中洗脱获得部分纯化的样品(D、E、F)。箭头表示与大麻黄素A的保留时间相对应的峰。
图2.使用提取方案获得的来自麻类植物茎材料的提取物中存在的大麻黄素B的LC-MS分析的色谱图，该提取方案由以下组成：用85％EtOH进行初始提取以获得粗提取物样品(A、B、C)和用100％乙醇在45℃从PVPP树脂中洗脱以获得部分纯化的样品(D、E、F)。箭头表示与大麻黄素B的保留时间相对应的峰。
图3.使用本文所述的提取方案获得的来自麻类植物材料(花、叶和幼茎)的混合物的提取物中存在的大麻黄素A的LC-MS分析的色谱图。彩色峰对应于(A)大麻黄素A标准品、(B)粗提取物中存在的大麻黄素A和(C)从PVPP树脂中洗脱的部分纯化样品中的存在大麻黄素A的保留时间。
图4.使用本文所述的提取方案获得的来自麻类植物材料(花、叶和幼茎)的混合物的提取物中存在的大麻黄素B的LC-MS分析的色谱图。彩色峰对应于(A)大麻黄素B标准品、(B)粗提取物中存在的大麻黄素B和(C)从PVPP树脂中洗脱的部分纯化样品中的保留时间。
图5.使用本文所述提取方案获得的大麻植物材料(花、叶和幼茎)的混合物的提取物中存在的大麻烯的LC-MS分析的色谱图。彩色峰对应于(A)大麻烯标准品、(B)粗提取物中存在的大麻烯和(C)从PVPP树脂洗脱的部分纯化样品中的保留时间。
具体实施方式
本文描述了用于从大麻中制备富含多酚的提取物的低成本且安全的方法，其中所制备的产品具有痕量或不可检测量的大麻素。
定义
除非另有定义，否则本文使用的技术和科学术语与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。参见，例如Singleton等人,Dictionary of Microbiology andMolecular Biology第二版,J.Wiley&Sons(New York,N.Y.1994)；Sambrook等人,Molecular Cloning.A Laboratory Manual,Cold Springs Harbor Press(Cold SpringsHarbor,NY 1989)，其各自通过引用并入本文。为了本发明的目的，以下术语定义如下。
如本文所用，术语“内源性”是指在特定物种或其细胞内存在和/或天然表达的任何多核苷酸或多肽。
“分离的”是指已从其来源纯化或已通过重组或合成方法制备并纯化的分子。纯化的多肽基本上不含污染成分，例如THC、大麻素和/或萜烯。
“基本上不含”在本文中是指少于约5％、通常少于约2％、更通常少于约1％、甚至更通常少于约0.5％、最通常少于约0.1％的污染物，例如THC，大麻素和/或萜烯。
如本文所用，“治疗”或“疗法”是用于获得有益或期望的临床结果的方法。对于本文所述的目的，有益的或期望的临床结果包括但不限于症状的缓解、疾病程度的降低、疾病状态的稳定(即，不恶化)、疾病进展的延迟或减慢、疾病状态改善或减轻以及缓解(无论是部分还是全部)，无论是可检测的还是不可检测的。“治疗”和“疗法”还可以意指与未接受治疗或疗法的预期存活期相比延长了存活期。因此，“治疗”或“疗法”是为了改变病症的病理学而进行的干预。具体而言，治疗或疗法可以直接预防、减缓或以其他方式减少疾病或病症例如炎症的病理学，或者可以使炎症更容易进行通过其他治疗剂的治疗或疗法。
术语“治疗有效量”、“有效量”或“足够量”是指当施用于受试者(包括哺乳动物，例如人时)，足以达到所需结果的量，例如有效治疗炎症的量。本文所述的多酚化合物的有效量可以根据诸如受试者的疾病状态、年龄、性别和体重的因素而变化。如技术人员所理解的，可以调整剂量或治疗方案以提供最佳治疗反应。
同样，本文所述的多酚化合物的“有效量”是指足以根据需要发挥作用，例如治疗炎症的量。
“与”一种或多种另外的治疗剂“组合”施用包括以任何顺序同时(并行)和连续施用。
术语“药学上可接受的”意指化合物或化合物的组合与药用制剂的其余成分相容，并且根据制定的政府标准对于向人类施用通常是安全的，包括美国食品和药物管理局公布的那些化合物。
如本文所用的“载体”包括化妆品上或药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂，它们在所采用的剂量和浓度下对暴露于其中的细胞或受试者是无毒的。通常药学上可接受的载体是pH缓冲水溶液。药理学上可接受的载体的示例包括缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(少于约10个残基)的多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖和糊精；螯合剂，例如EDTA；糖醇，例如甘露醇和山梨醇；成盐的抗衡离子，例如钠；和/或非离子表面活性剂，例如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。
在理解本申请的范围时，冠词“一”、“一种”、“该”和“所述”旨在意指存在元素中的一个或多个。此外，如本文所用，术语“包括”及其派生词旨在为指定存在所述特征、元素、组分、组、整体和/或步骤的开放式术语，但不排除存在其他未明确说明的特征、元素、组分、组、整体和/或步骤。上述内容也适用于具有类似含义的词语，例如术语“包含”、“具有”及其派生词。
应当理解，描述为“包含”某些组分的任何实施方案也可以“由……组成”或“基本上由……组成”，其中“由……组成”具有封闭式或限制性含义，并且“基本上由……组成”意指包含指定组分但不包括除了以下的其他组分：作为杂质存在的物质、由于用于提供这些组分的工艺而存在的不可避免的物质以及为了不同于实现本发明的技术效果的目的而添加的组分。例如，使用短语“基本上由...组成”限定的组合物包括任何已知的药学上可接受的添加剂、赋形剂、稀释剂、载体等。通常，基本上由一组组分组成的组合物将包含按重量计少于5重量％、通常少于3重量％、更通常少于1重量％的未指定组分。
应当理解，本文限定为包括在内的任何组分可以通过附带条件或否定限制的方式被明确地从要求保护的发明中排除。例如，在实施方案中，THC、大麻素和/或萜烯被明确排除在本文所述的组合物和方法之外。
此外，本文给出的所有范围包括范围的端点以及任何中间范围点，无论是否明确说明。
最后，诸如本文所用的诸如“基本上”、“约”和“大约”的程度术语意指所修饰术语的合理偏差量，使得最终结果不会显著改变。如果这种偏差不会否定其修饰的词语的含义，则这些程度术语应解释为包括修饰术语的至少±5％的偏差。
组合物
本文描述的是富含多酚化合物的大麻提取物。
通常，提取物包含至少约50％的多酚化合物，例如至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99.5％或至少约99.9％的多酚化合物。本文所述的提取物通常基本上不含THC、大麻素(例如大麻二酚)和/或萜烯。此类不含THC、大麻素、大麻二酚和/或萜烯的组合物包含例如按重量计少于约5％、约4％、约3％、约2％、约1％、约0.5％、约0.1％或约0.01％的THC、大麻素、大麻二酚和/或萜烯。在其他方面，本文所述的提取物包含或与THC、大麻素(例如大麻二酚)和/或萜烯组合。
本文所述的提取物源自于任何大麻物种，包括大麻和麻类植物。例如，寻常大麻(Cannabis sativa)、印度大麻(Cannabis indica)、莠草大麻(Cannabis ruderalis)及其任何组合都可以作为提取物的来源。通常，提取物源自于大麻。还考虑了在任何物种或物种组合中使用任何单个菌株或菌株组合。类似地，应当理解，提取物可以源自于任何植物来源，包括叶、根、茎、枝、花、花序、果实、种子、细胞、组织培养物或其组合。
植物中有超过5000种天然存在的类黄酮类。它们的化学性质取决于它们的结构类别(黄烷醇、黄酮、黄酮醇、黄烷酮、异黄酮、花青素；表1)、羟基化程度和缀合程度，这进而又决定了它们的抗氧化活性和药理活性。类黄酮类具有广泛的生物学特性，可促进人类健康并帮助降低疾病风险(Kikuchi等人,2019；Kumar&Pandey,2013；Rasouli等人,2017；Shama等人,2016)。不同的植物来源可能会在提取物中提供不同的多酚化合物谱。
表1.类黄酮类的化学结构
Figure BDA0003795454750000111
在大麻中，类黄酮类和酚类化合物的分布因品系而异，并且从一种植物组织到另一种植物组织不同(Flores-Sanchez&Verpoorte,2008)。与叶子相比，一些类黄酮类在籽苗和果实中的含量更高，而另一些则在叶子和籽苗中更丰富。例如，槲皮素和木犀草素在雄花中的含量高于其在叶子中的含量，而堪非醇在雌花中的浓度高于其在果实中的浓度。此外，芹黄素含量在花性别之间也存在显著差异。因此，可以在成熟植物的多个部分中分离和检测到大麻酚类物质。大麻中存在的一组被忽视的酚类化合物是茋类化合物(表2)，共有超过25种不同的分子(Pollastro等人,2018)。这些包括以1,2-二苯基乙烯(茋类)骨架以及相关结构为特征的一小组化合物，所述相关结构例如联苄类、二氢茋类、菲、9,10-二氢菲(dihydriphenanthrene)和相关的异戊二烯基化、香叶基化和糖基化衍生物。在大麻中报告的八种二氢茋类中，一半是异戊二烯基化形式：3,4'-二羟基-5,3'-二甲氧基-5'异戊二烯基联苄类，以及大麻烯、大麻茋类(cannabistilbene)I、大麻茋类IIa、IIb。此外，在大麻中还鉴定了20多种不同的类黄酮类。这些包括芹黄素、木犀草素、槲皮素、堪非醇、大麻黄素A、大麻黄素B、β-谷甾醇、牡荆素、异牡荆素、堪非醇和荭草素(Andre等人,2016；Flores-Sanchez&Verpoorte,2008)，它们表现为甲基化和异戊二烯基化的糖苷配基(aglicone)或作为缀合的O-糖苷或C-糖苷。其中，异戊二烯基化的糖苷配基黄酮大麻黄素是大麻独有的。它们在20世纪80年代首次被鉴定，并被证明具有有效的抗炎活性(Barrett等人1985)。在鉴定大麻中的生物合成途径之前(Rea等人,2019)，大麻黄素以及其他大麻多酚主要通过从植物材料中提取而获得。
表2.茋类和联苄类的化学结构
Figure BDA0003795454750000121
因此，通常，本文所述的提取物包含类黄酮类、茋类和/或联苄类。在某些方面，类黄酮类包括大麻黄素A和/或大麻黄素B。在某些方面，联苄类包括大麻烯。在多个方面，提取物富含大麻黄素A、大麻黄素B和/或大麻烯。
组合物可以被配制用于受试者，例如哺乳动物，包括人。包含本文所述的多酚化合物的组合物可包含按重量计约0.00001％至约99％和其间的任何范围的活性物质，所述其间的任何范围例如约0.00001％、约0.0001％、约0.001％、约0.01％、约0.1％、约0.5％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.5％、约99.7％、或约99.9％、至约0.0001％、约0.001％、约0.01％、约0.1％、约0.5％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.5％、约99.7％、约99.9％、约99.99％。例如，典型剂量可包含每300mg剂量约0.1μg至约100μg的本文所述的分子，例如每300mg剂量约0.5μg、约1μg、约2μg、约3g、约4μg、约5μg、约6μg、约7μg、约8μg、约9μg、约10μg、约25μg、约50μg或约75μg的本文所述的分子，例如每300mg剂量约0.1μg至约10μg、或约1μg至约5μg、或约1μg至约2μg的本文所述的分子(以及所有相关的增量和重量百分比)。
本文所述的组合物可以以任何合适的量使用，但通常以包含约1ng/kg至约10000ng/kg，例如约1ng/kg至约1000、约1ng/kg至约500、约10ng/kg至约250、或约50ng/kg至约100ng/kg，例如约1ng/kg、约10ng/kg、约25ng/kg、约50ng/kg、约75ng/kg、约100ng/kg、约150ng/kg、约200ng/kg、约250ng/kg、约300ng/kg或约500ng/kg的剂量提供。在其他方面，本文所述的组合物以每剂量约1mg至约10000mg，例如约1mg至约1000mg、约1mg至约500mg、约10mg至约250mg、或约50mg至约100mg，例如约1mg、约10mg、约25mg、约50mg、约75mg、约100mg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg或约1000mg的剂量提供。例如，在一些方面，大麻烯以每剂量约100mg提供，大麻黄素A以每剂量约500mg提供，并且大麻黄素B以每剂量约400mg提供。在多个方面，大麻烯、大麻黄素A和大麻黄素B以一定比例，例如约1:5:4的比例一起提供。
在其他方面，对本文所述的组合物进行给药从而在人的血液中获得约0.01μM至约100μM，例如约0.01μM、约0.05μM、约0.1μM、约0.2μM、约0.3μM、约0.4μM、约0.5μM、约0.6μM、约0.7μM、约0.8μM、约0.9μM、约1μM、约2μM、约3μM、约4μM、约5μM、约6μM、约7μM、约8μM、约9μM、约10μM、约20μM、约30μM、约40μM、约50μM、约60μM、约70μM、约80μM或约90μM，至约0.05μM、约0.1μM、约0.2μM、约0.3μM、约0.4μM、约0.5μM、约0.6μM、约0.7μM、约0.8μM、约0.9μM、约1μM、约2μM、约3μM、约4μM、约5μM、约6μM、约7μM、约8μM、约9μM、约10μM、约20μM、约30μM、约40μM、约50μM、约60μM、约70μM、约80μM、约90μM或约100μM的目标浓度。例如，通常将大麻烯进行给药从而获得约0.4μM的目标浓度，将大麻黄素A进行给药从而获得约2μM的目标浓度，并且将大麻黄素B进行给药从而获得约2μM的目标浓度。
组合物可以在数小时、数天、数周或数月的时段内施用(这取决于多个因素，包括炎症或正在治疗的其他病况的严重性和类型、是否认为可能复发)，或用于预防炎症或其他病况等。施用可以是持续不断的，例如，在数小时、数天、数周、数月等时段内进行持续输注。或者，施用可以是间歇性的，例如，可以将分子在数天的时段内每天一次、在数小时的时段内每小时一次或任何其他认为合适的时间表进行施用。
本文所述的组合物可以通过本身已知的用于制备药学或化妆上可接受的组合物的方法制备，所述组合物可以施用于受试者，使得有效量的活性物质与药学上可接受的媒介物组合成混合物。例如，在“Handbook of Pharmaceutical Additives”(由Michael和Irene Ash编辑,Gower Publishing Limited,Aldershot,England(1995))中描述了合适的媒介物。在此基础上，组合物包括(但不排他地)与一种或多种药学上可接受的媒介物或稀释剂联合的物质的溶液，并且可以包含在具有合适pH的缓冲溶液中和/或与生理流体等渗。在这方面，可以参考美国专利第5,843,456号(其全部内容通过引用并入本文)。
药学上可接受的载体是本领域技术人员熟知的并且包括例如无菌盐水、乳糖、蔗糖、磷酸钙、明胶、糊精、琼脂、果胶、花生油、橄榄油、芝麻油、大麻油和水。此外，所述组合物可以包含一种或多种稳定剂，例如碳水化合物(包括山梨醇、甘露醇、淀粉、蔗糖、糊精和葡萄糖)、蛋白质(例如白蛋白或酪蛋白)以及缓冲剂(例如碱性磷酸盐)。
在实施方案中，本文所述的组合物可以例如通过肠胃外、静脉内、皮下、皮内、肌肉内、颅内、眶内、眼睛、心室内、囊内、脊柱内、脑池内、腹膜内、鼻内、直肠内、阴道内、气雾剂、口服、局部或透皮施用来进行施用。通常，将本发明的组合物口服或局部直接施用至炎症部位或以化妆油、洗剂、霜剂或凝胶剂施用至所需的身体部位，例如面部。
本领域技术人员应当理解，本文所述的组合物可以与用于预防和/或治疗受试者炎症的已知疗法和/或与用于预防衰老迹象的组合物或其他化妆品组合物结合使用。类似地，本文所述的组合物可以与一种或多种其他大麻衍生产品，例如大麻素、萜烯或THC组合。在实施方案中，例如，本文所述的组合物可以与针对炎症或其他病况的常规治疗(包括非甾体抗炎药)组合、同时或依次施用。在适当时，本文所述的组合物可与此类常规治疗一起配制。
因为本文所述的组合物富含多酚化合物，所以预计它们会表现出与这些化合物相关的活性。因此，本文所述的组合物可以表现出许多不同的活性，包括，例如：
抗氧化活性。这是几乎所有类黄酮类、茋类和联苄类组群的最佳描述性质，这取决于环结构周围官能团的排列。类黄酮类中的官能性羟基通过清除自由基和/或螯合金属来调节其抗氧化作用，这对于防止破坏目标生物分子的自由基生成至关重要。
抗动脉粥样硬化作用。由于类黄酮类的抗氧化特性，类黄酮类可能通过清除氧自由基(所述氧自由基会氧化LDL，已知会损害内皮壁)来影响血管系统，从而防止动脉粥样硬化的改变。
抗炎活性。炎症是响应于组织损伤、化学刺激或病原体感染的正常生物过程。这个过程是由免疫细胞从血管中迁移并在损伤部位释放介质分子来启动的，然后释放活性氧和活性氮种类(ROS和RNS)以及促炎细胞因子来修复损伤的组织。一般而言，正常炎症迅猛且具有自限性，但异常消退和持续很久的炎症会导致各种慢性病症。一些类黄酮类对免疫系统和炎症细胞的功能有显著影响。据报道，其中一些如橙皮素、芹黄素、木犀草素和槲皮素具有抗炎和镇痛作用。类黄酮类在此过程中的作用方式不同：它们可抑制与炎症过程的产生密切相关的酶系统(特别是酪氨酸和丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶)的功能；它们能够抑制一氧化氮合酶、环氧合酶和脂氧合酶(其负责产生大量一氧化氮、前列腺素类、白三烯)和炎症过程的其他介质(例如细胞因子、趋化因子或粘附分子)的表达。它们的很大程度上的抗炎作用在于蛋白质细胞因子的生物合成，所述蛋白质细胞因子介导循环白细胞粘附到损伤部位。某些类黄酮类、茋类和联苄类也是前列腺素产生的有效抑制剂，前列腺素是一组强大的促炎信号分子。
抗癌活性。据报道，水果和蔬菜中的类黄酮类可作为癌症化学预防剂。黄酮醇槲皮素的消耗与前列腺癌、肺癌、胃癌和乳腺癌的发病率呈负相关。摄入白藜芦醇似乎还会降低发展肺癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌和结肠癌的风险。不同的细胞抑制活性是类黄酮类对致癌性的起始和促进阶段产生影响的提议机制之一。
抗菌活性。据报道，纯类黄酮类(芹黄素、高良姜黄素、黄酮和黄酮醇苷、异黄酮、黄烷酮、儿茶素和查尔酮)和来自不同物种的富含类黄酮类的植物提取物是体外抗多种微生物的有效抗菌物质。它们的作用方式可能与它们使微生物粘附素、酶或细胞包膜转运蛋白失活的能力有关。
抗病毒活性。多年来，人们已经认识到具有抗病毒活性的天然存在的类黄酮类，并且大多数研究已集中在它们抑制与病毒生命周期相关的各种酶的活性上。例如，黄烷-3-醇和黄酮-葡糖苷黄芩苷被表明在选择性抑制HIV-1、HIV-2和类似免疫缺陷病毒感染的感染和复制方面是有效的。其他化合物例如槲皮素、芦丁、芹黄素、柚皮素、木犀草素和高良姜黄素被表明呈现抗狂犬病、疱疹、脊髓灰质炎或副流感病毒的活性。
保肝活性。据报道，多种类黄酮类，例如儿茶素、芹黄素、槲皮素、柚皮素、芦丁和维脑路通(venoruton)具有保肝活性。
生产方法
本文还描述了用于生产富含多酚化合物例如类黄酮类(例如大麻黄素A和/或大麻黄素B)的组合物的方法。通常，所述方法包括将组合物施加到吸附树脂上(任选地在色谱柱中)，并洗脱吸附树脂。所得洗脱液富含多酚化合物。
通常，吸附树脂包括大孔吸附树脂和/或PVPP。应当理解，可以所述组合物施加到单一此类吸附树脂上、施加到不同吸附树脂的混合物上、或施加到一种吸附树脂上，然后施加到一种或多种附加的吸附树脂上或进行另外的色谱步骤或其他纯化步骤。
例如，在特定方面，所述方法包括将组合物施加到第一吸附树脂上并洗脱第一吸附树脂以产生富含多酚化合物的第一洗脱液，并随后将第一洗脱液施加到第二吸附树脂上并洗脱第二吸附树脂产生富含多酚化合物的第二洗脱液。第一吸附树脂和第二吸附树脂可以相同或不同，并且可以根据需要将该过程重复多次，直到将组合物充分富集。
在典型的方面，所述方法包括将组合物施加到大孔吸附树脂上并洗脱大孔吸附树脂以产生富含多酚化合物的第一洗脱液，并随后将第一洗脱液施加到PVPP吸附树脂上并洗脱PVPP吸附树脂以产生富含多酚化合物的第二洗脱液。或者，所述方法包括将组合物施加到PVPP吸附树脂上并洗脱PVPP吸附树脂以产生富含多酚化合物的第一洗脱液，并随后将第一洗脱液施加到大孔吸附树脂上并洗脱大孔吸附树脂以产生富含多酚化合物的第二洗脱液。
大孔吸附树脂的示例包括聚合的非离子聚苯乙烯-二乙烯基苯树脂，例如SP825、SP207和XAD-16。还考虑了树脂的组合。
施加到吸附树脂上的组合物通常是水性组合物，并且洗脱通常用低级醇例如甲醇、乙醇、丙醇等进行。通常使用乙醇。醇可以是100％的浓度，或者可以被稀释到50％或更高，例如约50％-100％、或约60％至100％、或约70％至100％。可以将醇进行pH调节至所需值，例如酸性、中性或碱性值，通常为碱性值，例如约8、9或10，例如约9.0。
通常，洗脱步骤包括将一定量的低级醇施加到吸附树脂上并收集洗脱液。相对于最初施加的吸附树脂或组合物的体积，施加的低级醇的量通常为至少约1、2、3、4、5或6体积。
在更具体的方面，典型的捕获步骤使用具有大表面积的树脂珠粒来增加吸附容量，然而，在亲水性较低的多酚的情况下，由于所需多酚的浓度低，一些树脂可能不会达到饱和。一种策略是加入一个步骤，该步骤涉及使用对多酚具有增加的亲和力并且在低得多的浓度下更容易达到饱和的树脂。
本文所述的大孔吸附树脂和PVPP树脂都是工业生产中常用的分离和纯化技术。由于它们的分离原理不同，它们的分离效果相辅相成。结合这两种树脂使得更有效地提取所需的多酚级分。
在本文所述的富集步骤之后，通常将所得洗脱液醇化并例如在减压下在旋转蒸发仪中在40-80℃浓缩，以获得粘稠物质。
施加到吸附树脂上的组合物可以源自于任何所需的来源。通常，所述组合物包含植物提取物，该植物提取物任选地来自任何物种或品系的大麻植物，例如寻常大麻，并且它可以被描述为大麻或麻类植物。提取的植物材料，无论是大麻还是其他植物，可以包括例如叶、根、茎、枝、花、花序、果实、种子、细胞、组织培养物或其组合。
如上所述，提取物可以包含THC，或更典型地，它基本上不含THC。在多个方面，提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的THC。在另外或替选的方面，提取物可以包含大麻素，例如大麻二酚，或者它可以基本上不含大麻素或大麻二酚，例如包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的大麻素或大麻二酚。在另外或替选的方面，萜烯可存在于提取物中或提取物可基本上不含萜烯或可包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的萜烯。
在将提取物施加到吸附树脂之前，在多个方面的方法还包括用极性溶剂提取植物材料。极性溶剂，其中许多可以食品级质量获得，为人们可以使用和食用的天然化合物提供改善的提取。极性溶剂是低分子量溶剂，包括但不限于乙醇、甲醇、异丙醇、丙酮或乙腈。通常，极性溶剂本身可溶于水。通常，极性溶剂是乙醇。在相对较高的温度(40℃至80℃)和大气压下结合极性、与水混溶的溶剂，允许高效且经济地提取多酚。
在示例性提取步骤中，将植物材料干燥并研磨成粗粉并用约50％至约85％乙醇作为极性溶剂提取一次或两次(每次约10mL至约15mL溶剂/克干燥的组织)。将混合物充分摇动并在约4℃至约20℃的温度温育一段时间，例如约12h至约24h。每次溶剂用量约为粉末用量的10倍。将提取物合并并使用带有Whatman过滤器的布氏漏斗过滤，然后将溶液置于室温。溶液的pH值可根据需要调节，一般为约≤7.5。
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上述公开内容总体上描述了本发明。参考以下具体实施例可以得到更完整的理解。这些实施例仅出于说明的目的而描述，并不旨在限制本发明的范围。当情况可能建议或变得有利时，会考虑形式的改变和等同方案的替代。尽管已在本文中使用了特定的术语，但是这些术语旨在描述性意义而不是为了限制的目的。
实施例
实施例1
本实施例描述了用于使用PVPP树脂的一般方法以及部分纯化大麻黄素A的结果。
将10g植物材料(麻类植物茎)在65℃的烘箱中干燥，然后使用搅拌机进行粉末化。在玻璃瓶中将经研磨的样品与125mL 85％EtOH混合，摇匀并在4℃温育18h。之后，使用带有Whatman过滤器(No.1)的布氏过滤器对提取混合物进行真空过滤。将所得粗提取物溶液置于12”杂交瓶中，向每50ml提取液中加入7g PVPP，并在25℃在持续振荡下温育15min。接下来，将样品进行真空过滤，并将PVPP转移到35mL的100％EtOH中进行洗脱，并在45℃温育，同时在杂交烘箱中旋转20min。通过真空过滤回收最终洗脱的样品。对样品进行液相色谱-质谱(LC-MS)分析(图1)。如所示，在三种不同的初始粗提取物(样品A、B和C)中以及将其从PVPP树脂中洗脱后(样品D、E和F)，检测到了大麻黄素A(平均保留时间为10.45min)。在本实施例中，大麻黄素A的平均产率为0.25ug/ml提取物。
实施例2
本实施例描述了用于使用PVPP树脂的一般方法以及部分纯化大麻黄素B的结果。
使用与上述实施例1中所述类似的方法，对样品进行液相色谱-质谱(LC-MS)分析以检测大麻黄素B(图2)。如所示，在一种粗提取物(样品B)中和将样品A、B和C从树脂中洗脱后(样品D、E和F)中检测到了大麻黄素B(平均保留时间为9.07min)。
实施例3
本实施例描述了用于使用PVPP树脂的一般方法以及从麻类植物材料的混合物中部分纯化大麻素和大麻烯的结果。
将10g植物材料(麻类植物花、叶和嫩茎)在65℃在烘箱中干燥，并使用搅拌机进行粉末化。然后，使用如上述实施例1中描述的提取方法提取经研磨的样品。接下来，对提取物进行液相色谱-质谱(LC-MS)分析以检测大麻黄素A(图3)、大麻黄素B(图4)和大麻烯(图5)。如所示，如由相似的保留时间和使用标准品(分别为图3A、图4A、图5A)和预期质量(表3)获得的光谱质/荷比(m/z)所确定的，在粗提取物中(分别为图3B、图4B和图5B)和从树脂中洗脱后(分别为图3C、图4C、图5C)检测到大麻黄素A、大麻黄素B和大麻烯。
表3.针对在图3、图4和图5(示例3)中所述的大麻黄素A、大麻黄素B和大麻烯标准品、粗提取物和从所述样品中部分纯化后的洗脱提取物的LC/MS数据以及计算和观察到的峰的m/z值、保留时间(RT)和峰面积。
Figure BDA0003795454750000231
上述公开内容总体上描述了本发明。尽管在本文中使用了特定的术语，但是这些术语旨在为了描述性意义而不是旨在为了限制目的。
以上引用的所有出版物、专利和专利申请都通过引用以其整体并入本文，其程度如同每个单独的出版物、专利或专利申请被具体地和单独地指示通过引用而以其整体并入。
尽管本文已经详细描述了本发明的优选实施方案，但是本领域技术人员将理解，在不背离本发明的精神或所附权利要求的范围的情况下可以对其进行改变。

Claims (63)

1.一种富含多酚化合物的大麻提取物。
2.根据权利要求1所述的大麻提取物，其中所述提取物基本上不含THC。
3.根据权利要求1所述的大麻提取物，其中所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的THC。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的大麻提取物，其中所述提取物基本上不含大麻素，或其中所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的大麻素。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的大麻提取物，其中所述提取物基本上不含大麻二酚，或其中所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的大麻二酚。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的大麻提取物，其中所述提取物基本上不含萜烯，或其中所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的萜烯。
7.根据权利要求1和3至6中任一项所述的大麻提取物，其包含THC。
8.根据权利要求1至3、5和6中任一项所述的大麻提取物，其包含大麻素。
9.根据权利要求1至3和6至8中任一项所述的大麻提取物，其包含大麻二酚。
10.根据权利要求1至5和7至8中任一项所述的大麻提取物，其包含萜烯。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的大麻提取物，其中所述提取物来自大麻(Cannabis sativa L.marijuana)或麻类植物。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的大麻提取物，其中所述提取物来自植物材料，所述植物材料包括叶、根、茎、枝、花、花序、果实、种子、细胞、组织培养物或其组合。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的大麻提取物，其中所述多酚化合物包括类黄酮类、茋类和/或联苄类。
14.根据权利要求13所述的大麻提取物，其中所述类黄酮类包括大麻黄素A、大麻黄素B或其组合。
15.根据权利要求13或14所述的方法，其中所述联苄类包括大麻烯。
16.一种用于制备富含多酚化合物的组合物的方法，所述方法包括将所述组合物施加于吸附树脂并洗脱所述吸附树脂以产生富含多酚化合物的洗脱液。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述吸附树脂包括大孔吸附树脂和/或PVPP。
18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述方法包括：
将所述组合物施加于第一吸附树脂并洗脱所述第一吸附树脂以产生富含多酚化合物的第一洗脱液；和
将所述第一洗脱液施加于第二吸附树脂并洗脱所述第二吸附树脂以产生富含多酚化合物的第二洗脱液。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述第一吸附树脂包括大孔吸附树脂并且所述第二吸附树脂包括PVPP。
20.根据权利要求18所述的方法，其中所述第一吸附树脂包括PVPP并且所述第二吸附树脂包括大孔吸附树脂。
21.根据权利要求17至20中任一项所述的方法，其中所述大孔吸附树脂包括聚合的非离子聚苯乙烯-二乙烯基苯树脂，例如SP825、SP207、XAD-16或其组合。
22.根据权利要求16至21中任一项所述的方法，其中洗脱所述大孔吸附树脂包括添加约3体积至约4体积的约60％至约100％乙醇。
23.根据权利要求16至22中任一项所述的方法，其中洗脱所述PVPP吸附树脂包括添加约3体积至约4体积的约70％至约100％乙醇。
24.根据权利要求22或23所述的方法，其中所述乙醇具有约9.0的pH。
25.根据权利要求16至24中任一项所述的方法，其中所述组合物包含植物提取物。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述植物提取物是大麻提取物。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述提取物基本上不含THC。
28.根据权利要求26所述的方法，其中所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的THC。
29.根据权利要求25至28中任一项所述的方法，其中所述提取物基本上不含大麻素，或其中所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的大麻素。
30.根据权利要求25至29中任一项所述的方法，其中所述提取物基本上不含大麻二酚，或其中所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的大麻二酚。
31.根据权利要求16至30中任一项所述的方法，其中所述提取物基本上不含萜烯，或其中所述提取物包含少于约5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的萜烯。
32.根据权利要求26和28至31中任一项所述的方法，其中所述提取物包含THC。
33.根据权利要求26至28、31和32中任一项所述的方法，其中所述提取物包含大麻素。
34.根据权利要求26至28和31至33中任一项所述的方法，其中所述提取物包含大麻二酚。
35.根据权利要求26至28和31至34中任一项所述的方法，其中所述提取物包含萜烯。
36.根据权利要求26至35中任一项所述的方法，其中所述提取物来自大麻或麻类植物。
37.根据权利要求25至36中任一项所述的方法，其中所述提取物来自植物材料，所述植物材料包括叶、根、茎、枝、花、花序、果实、种子、细胞、组织培养物或其组合。
38.根据权利要求16至37中任一项所述的方法，其中所述多酚化合物包括类黄酮类、茋类和/或联苄类。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述类黄酮类包括大麻黄素A、大麻黄素B或其组合。
40.根据权利要求38或39所述的方法，其中所述联苄类包括大麻烯。
41.根据权利要求25至40中任一项所述的方法，其中所述方法还包括在将所述提取物施加于所述吸附树脂之前用极性溶剂提取所述植物材料。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述极性溶剂包括乙醇、甲醇、异丙醇、丙酮、乙腈或其组合。
43.根据权利要求40至42中任一项所述的方法，其中在提取之前将所述植物材料干燥并任选地研磨成粉末，例如粗粉。
44.根据权利要求40至43中任一项所述的方法，其中所述提取包括将所述植物材料与所述极性溶剂混合并将混合物温育一段时间。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述时间为约12小时至约24小时。
46.根据权利要求44或45所述的方法，其中所述温育在约4℃至约20℃的温度下进行。
47.根据权利要求44至46中任一项所述的方法，其中将所述提取重复至少一次，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次。
48.根据权利要求44至47中任一项所述的方法，还包括将所述洗脱液进行脱醇和浓缩。
49.根据权利要求48所述的方法，其中对所述洗脱液进行脱醇和浓缩在减压下在约40℃至约80℃下进行。
50.根据权利要求16至49中任一项所述的方法，用于至少部分地纯化大麻黄素A、大麻黄素B和/或大麻烯。
51.一种通过根据权利要求16至50中任一项所述的方法制备的富含多酚化合物的组合物。
52.一种化妆品、药物产品和/或天然保健产品，包含根据权利要求1至15中任一项所述的大麻提取物或根据权利要求51所述的组合物。
53.根据权利要求1至15中任一项所述的大麻提取物或根据权利要求49所述的组合物，其用作化妆品、药物产品和/或天然保健产品。
54.一种化妆方法，包括将根据权利要求1至15中任一项所述的大麻提取物或根据权利要求51所述的组合物施用于受试者。
55.一种治疗和/或预防炎症的方法，所述方法包括将根据权利要求1至15中任一项所述的大麻提取物或根据权利要求51所述的组合物施用于有需要的受试者。
56.一种治疗和/或预防癌症的方法，所述方法包括将根据权利要求1至15中任一项所述的大麻提取物或根据权利要求51所述的组合物施用于有需要的受试者。
57.一种治疗和/或预防动脉粥样硬化的方法，所述方法包括将根据权利要求1至15中任一项所述的大麻提取物或根据权利要求51所述的组合物施用于有需要的受试者。
58.一种保肝方法，所述方法包括将根据权利要求1至15中任一项所述的大麻提取物或根据权利要求51所述的组合物施用于有需要的受试者。
59.根据权利要求1至15中任一项所述的大麻提取物或根据权利要求51所述的组合物用于化妆目的的用途。
60.根据权利要求1至15中任一项所述的大麻提取物或根据权利要求51所述的组合物用于治疗和/或预防炎症的用途。
61.根据权利要求1至15中任一项所述的大麻提取物或根据权利要求51所述的组合物用于治疗和/或预防癌症的用途。
62.根据权利要求1至15中任一项所述的大麻提取物或根据权利要求51所述的组合物用于治疗和/或预防动脉粥样硬化的用途。
63.根据权利要求1至15中任一项所述的大麻提取物或根据权利要求51所述的组合物用于保肝的用途。
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