CN115038969A

CN115038969A - 预测患者生存

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Publication number: CN115038969A
Application number: CN202180007735.5A
Authority: CN
Inventors: S·埃里克森; M·肖; T·塔梅拉; T·穆尔托拉
Original assignee: Arossel Co
Current assignee: Arossel Co
Priority date: 2020-01-30
Filing date: 2021-01-29
Publication date: 2022-09-09
Also published as: EP4097479A1; EP4097479A4; US20230070840A1; WO2021154146A1

Abstract

用于预测患者生存的方法包括使用与人TK1的血清形式特异性结合的抗体或其片段测定来自诊断为前列腺癌的患者的身体样品中STK1(血清胸苷激酶1)物质的水平。所述方法还包括基于身体样品中所测定的STK1物质水平来预测患者的生存。

Description

预测患者生存

技术领域

本发明总体上涉及胸苷激酶1(TK1)的测量，并且具体地涉及基于所测量的血清TK1水平预测患者的生存。

背景技术

胸苷激酶1(TK1)(EC 2.7.1.21)也称为2'-脱氧胸苷激酶或ATP-胸苷5'-磷酸转移酶，是一种参与DNA前体合成的酶。TK1使胸苷磷酸化以允许掺入DNA中。TK1的表达是细胞增殖活跃的标志物，其中在细胞周期的G0/G1期细胞内浓度低，而在S/G2期增加。

TK1的一种形式也以高水平存在于患有恶性肿瘤的人和动物的血清和血浆中。因此，血清TK1活性测量已被用于监测几种不同恶性疾病并用于预后目的，但主要用于白血病和淋巴瘤的情况。

此外，TK1是唯一可以在血液中测定的增殖标志物，且如果可作为常规实验室测试，它可能会提供很大的临床益处。

几十年来，一直使用放射性底物¹²⁵I-dUrd(the

TK-REA,DiaSorin Inc)测量血清TK1活性，但这种放射性酶测定的用途有限，并且优先在恶性血液系统恶性肿瘤的情况下。近年来，已经可以利用非辐射TK1活性测定(

测定，DiaSorin Inc.)。这是一种灵敏且可靠的测定，并且为人和狗提供了临床上有价值的信息，主要是血液系统恶性肿瘤，特别是用于监测疗法和预测复发。

在过去的15年中，针对人TK1的抗体已经可用，并且能够测定TK1蛋白水平，这与TK1活性相反，在血液学以及实体肿瘤疾病(诸如乳腺癌)和其他几种形式的实体和血液肿瘤中。

一种类型的TK1蛋白测定依赖于基于针对TK1的C端部分产生的抗TK1抗体的斑点印迹程序。选择这种抗体产生策略的主要原因是C端区域参与TK1的细胞周期调控。它含有一个识别序列，用于在有丝分裂期间起始TK1的降解，并且假设这是一个可能产生抗体的暴露区域。尽管斑点印迹测定已在许多研究中成功使用，但主要的限制在于它不是临床实验室实践中的常规方法。

AroCell TK 210 ELISA是一种定量免疫测定试剂盒，用于测定人体血液中的TK1。ELISA格式简单且可靠，无需特殊仪器即可执行，并且可轻松纳入标准实验室流程。AroCellTK 210 ELISA不仅是一种从血液样品中监测TK1的快速且简单的方式，而且使用临床化学中的标准设备提供可以信赖的可重复结果。

Jagarlamudi等人,Breast and prostate cancer patients differsignificantly in their serum Thymidine kinase 1(TK1)specific activitiescompared with those hematological malignancies and blood donors:implicationsof using serum TK1 as abiomarker,BMC Cancer(2015),15:66公开了与乳腺癌和前列腺癌患者相比，血液系统恶性肿瘤患者血清中TK1活性和非活性亚基的比活性和组成存在差异。

Li等人,Serum thymidine kinase 1is associated with Gleason score ofpatients with prostate carcinoma,Oncology Letters(2018),16(5):6171-6180公开了根据Gleason评分，在筛查良性前列腺增生(BPH)或前列腺恶性肿瘤时，血清TK1浓度是比总前列腺特异性抗原(PSA)更可靠的预后生物标志物。

Jagarlamudi等人,AroCell TK 210 ELISA for determination of TK1protein:age-related reference ranges and comparison with other TK1 assays,Biotechniques(2020)68(6):335-342公开了与健康血液供体的血清相比，前列腺癌和乳腺癌患者血清的TK 210 ELISA分析具有显著更高的TK1蛋白水平。

Jagarlamudi等人,The combination of AroCell TK 210 ELISA with ProstateHealth Index of prostate-specific antigen density can improve the ability todifferentiate prostate cancer from noncancerous conditions,The Prostate(2019),79(8):856-863公开了如通过AroCell TK 210 ELISA所测量的血清TK1在前列腺癌患者中显著高于良性泌尿系统病状患者。血清TK1与前列腺健康指数相关，但与Gleason评分无关。

发明内容

本发明的一般目的是预测诊断为前列腺癌的患者的患者生存。

通过本文所公开的实施方式满足这个目的和其他目的。

本发明在独立权利要求中限定。本发明另外的实施方式在从属权利要求中限定。

本发明的一个方面涉及一种预测患者生存的方法。所述方法包括使用与人TK1的血清形式特异性结合的抗体或其片段测定来自诊断为前列腺癌的患者的身体样品中血清TK1(STK1)物质的水平。所述方法还包括基于身体样品中所测定的STK1物质水平来预测患者的生存。

本发明能够鉴定在前列腺癌诊断时具有较差的预测生存率的前列腺癌患者。从而可以选择那些患者进行更积极的抗癌治疗或更频繁的患者监测。

附图说明

可以通过参考以下结合附图的描述来最佳地理解实施方式以及它的其他目的和优点，在附图中：

图1示出了诊断时通过STK1水平预测的前列腺癌特异性生存。研究群体分别是40名和43名在诊断时患有M0和M1前列腺癌的男性。使用Cox回归模型进行计算，在诊断、临床T期和M期针对年龄和PSA进行调整。

图2A至2D示出了43名患有新发转移性疾病的男性的前列腺癌特异性生存，按TK1四分位数进行分层，(A)年龄调整，(B)针对ISUP Gleason等级组的调整，(C)针对诊断时PSA的调整和(D)针对临床T期的调整。

图3示出了x轴上所有模型的平均预测误差和针对生存和PCa死亡的类别特异性预测误差的前列腺癌(PCa)死亡随机森林分类误差估计，以及经验估计的95％置信区间(CI)。每个模型中使用的分类因子都写在图像的右侧，y轴上。

具体实施方式

本发明一般涉及TK1的测量，具体而言，涉及基于所测量的血清TK1(STK1)水平来预测患者生存。

背景部分中提到的先前研究表明，血清TK1表达可用作前列腺癌存在的生物标志物。本文提供的实验数据显示，TK1表达可用作诊断后前列腺癌进展风险的生物标志物，且具体而言，在诊断为前列腺癌(特别是转移性前列腺癌)的受试者或患者的身体样品中测量的STK1水平可用作癌症诊断后生存的预测因子。

这意味着在为前列腺癌患者选择最佳治疗和监测计划时，在诊断为前列腺癌的患者的身体样品中测量的STK1水平可用于前列腺癌风险分层。因此，与具有相对较低STK1水平的前列腺癌患者相比，具有高STK1水平的前列腺癌患者具有相对较低的预测生存。因此，与预测具有高生存的那些前列腺癌患者相比，可以选择高风险患者进行更频繁的监测和/或更积极的癌症治疗。

本发明的一个方面涉及一种预测患者生存的方法。所述方法包括使用与人TK1的血清形式特异性结合的抗体或其片段测定来自诊断为前列腺癌的患者的身体样品中STK1物质的水平。所述方法还包括基于身体样品中所测定的STK1物质水平来预测患者的生存。

因此，本发明基于出人意料的发现，即从患有和诊断为前列腺癌的患者测量的STK1水平与前列腺癌患者的生存相关。换言之，STK1水平可用作在预测或估计剩余寿命方面对所诊断患者的生存的预测因子。一般来说，在前列腺癌患者的身体样品中测得的STK1水平越高，所预测的生存就越不良。因此，相对较高的STK1水平与较高的死亡率危险比率(HR)相关。

在一个实施方式中，所述方法还包括从患者获得身体样品。

身体样品优选地是包含STK1物质的体液样品。此类体液样品的非限制性但优选实例包括血清样品、血浆样品、血液样品、滑液样品、淋巴液样品、尿液样品和唾液样品，优选为血清样品或血浆样品。尽管体液样品是优选的身体样品，但实施方式不限于此并且还可以使用固体身体样品，诸如来自前列腺的活检。

根据本发明，测定TK1物质的水平包括使用特异性结合至血清形式的人TK1的抗体或其片段测定从患者获得的身体样品，优选血清或血浆样品中血清TK1(STK1)物质的水平。

人体中的TK1以各种形式存在，具体取决于某些分子的存在，例如三磷酸腺苷(ATP)的存在与否；取决于蛋白质的浓度，即高浓度或低浓度；取决于蛋白质的类型，即天然或重组TK1；并且取决于蛋白质的位置，即在血清或细胞质中。

通常，细胞溶质和重组人TK1在ATP存在下或高浓度时以四聚体形式出现，而在ATP不存在下或低浓度时以二聚体形式出现。细胞溶质和重组人TK1的四聚体形式具有高TK1活性，而二聚体形式具有较低的TK1活性。细胞溶质TK1也称为细胞TK1，是存在于细胞内的TK1，并且可以从这类细胞中分离出来。

与此形成鲜明对比的是，人STK1可以呈具有TK1活性的高分子量复合物形式，诸如低聚体或包含此类低聚体，以及具有极低或甚至缺乏TK1活性的二聚体和四聚体形式。低聚似乎与血液中发生的二硫交联形成有关。STK1见于患者的血液中，且因此可以在血液样品、血浆样品或血清样品等中测定。

如本文所用的STK1物质是指各种形式的STK1，诸如构成STK1的二聚体、四聚体、低聚体和复合物。STK1物质是血清TK1物质，即存在于患者的血液、血浆或血清中的STK1物质。STK1物质则可以包括上述形式的STK1，诸如构成STK1的二聚体、四聚体、低聚体和复合物。STK1物质还包括与至少一个TK1蛋白单元和其他分子和/或大分子的复合物。

在本领域中，已经提出了各种基因表达阵列来测定癌细胞样品和活检中的TK1mRNA转录物，包括前列腺细胞样品和前列腺活检。如上所述，TK1在受试者中以各种形式存在，包括细胞溶质TK1和血清TK1。测定来自此类细胞或活检样品的TK1 mRNA转录物的基因表达阵列主要是测定癌细胞中存在的细胞溶质TK1的TK1 mRNA转录物。因此，此类基因表达阵列不能用于测定受试者中STK1物质的水平。

在一个实施方式中，测定STK1物质的水平包括使身体样品与抗体或其片段接触。此实施方式还包括测量与STK1物质结合的抗体或其片段的量。

身体样品与抗体或其片段的接触可以通过将抗体或其片段添加到身体样品中并将身体样品与抗体或其片段一起孵育来实现。抗体或其片段由此与STK1物质结合，在抗体或其片段与STK1物质之间形成复合物。在这样的实施方式中，测量与STK1物质结合的抗体或片段的量可以包括测量或量化抗体或其片段与STK1物质之间的复合物，从而测量或量化与STK1物质结合的抗体或片段的量。

在一个实施方式中，所述方法还包括使所测量的与STK1物质结合的抗体或片段的量与STK1物质的水平相关联。这可以使用所测量的与参考TK1物质结合的抗体或片段的量与参考TK1物质的浓度之间的预定义相关性来执行。生成这种预定义相关性时可以使用的典型参考TK1物质是重组人TK1。

因此，可以通过将抗体或其片段添加到包含不同浓度的参考TK1物质(优选重组人TK1)的不同样品中来生成预定义相关性。然后，在不同样品中测量与参考TK1物质(优选重组人TK1)结合的抗体或片段的量，从而获得参考TK1物质(优选重组人TK1)的浓度与所测量的同参考TK1物质(优选重组人TK1)结合的抗体或片段的量之间的标准曲线、函数或关系。

然后，可以使用这种预定义相关性，诸如标准曲线、函数或关系，将与身体样品中STK1物质结合的抗体或片段所测量的量映射或转换为身体样品中STK1物质的浓度。

如果使用相同类型的抗体或其片段来生成预定义相关性以用于测定来自诊断为前列腺癌的患者的身体样品中STK1物质的水平，则通常为优选的。因此，在一个优选实施方式中，抗体或其片段不仅能够特异性结合至人TK1的血清形式，而且能够特异性结合至参考TK1物质，优选重组人TK1。

在一个实施方式中，在身体样品与抗体或其片段孵育之前或期间处理身体样品。这种样品处理可用于稳定身体样品中选定的STK1形式和/或将较大的STK1复合物或低聚体分解成较小的复合物或多聚体。

因此，在一个实施方式中，在将抗体或其片段添加到身体样品中之前或与此相关，优选在将抗体或其片段添加到身体样品之前，将样品稀释或预处理缓冲液添加到身体样品中。

在一个实施方式中，样品稀释缓冲液包含ATP，优选浓度在0.5mM至50mM的区间内选择，诸如0.5mM至20mM或1.5mM至50mM。如本文前面所述，ATP使具有高酶促TK1活性的四聚体形式的TK1稳定。

在另一实施方式中，样品稀释缓冲液包含还原剂。还原剂则可破坏较大的STK1复合物和低聚体中的二硫键交联，以获得较小的STK1形式，诸如四聚体。根据实施方式可以使用能够破坏二硫键的各种还原剂，包括但不限于二硫赤藓糖醇(DTE)、二硫苏糖醇(DTT)、二硫丁胺(DTBA)、三(2-羧乙基)膦(TCEP)及其组合。还原剂的量通常在0.1mM至10mM的区间内选择。

在一个实施方式中，样品稀释缓冲液可以包含ATP和还原剂两者。

在一个实施方式中，使用与诊断为前列腺癌的患者有关的取自患者的身体样品中的人TK1的血清形式特异性结合的抗体或其片段来测定STK1物质的水平。因此，在一个优选实施方式中，优选在诊断时或至少在患者被诊断为前列腺癌或至少疑似患有前列腺癌的时间点之后不久采集身体样品。

在一个具体实施方式中，使用与人TK1的血清形式特异性结合的抗体或其片段在诊断为转移性前列腺癌的患者的身体样品中测定STK1物质的水平。因此，在此具体实施方式中，患者被诊断为转移性前列腺癌。在一个具体实施方式中，患者被诊断为M1期前列腺癌。

通常，M0期意味着前列腺癌尚未扩散到身体的其他部位。M1期意味着癌症已经扩散到骨盆外身体的其他部位。有时，M1期分为M1a-骨盆外淋巴结中的癌细胞，M1b-骨骼中的癌细胞及M1c-身体其他部位的癌细胞，诸如肝脏、大脑和/或肺中的癌细胞。

在一个实施方式中，所述方法包括基于身体样品中所测定的STK1物质的水平来估计患者的危险比率(HR)。在这样的实施方式中，预测患者的生存包括基于所估计的HR预测患者的生存。本文提供的实验数据显示，在前列腺癌诊断后的预测生存期方面，在其身体样品中具有高水平的STK1物质的前列腺癌患者具有高HR和较差的预测生存，而在其身体样品中具有相对较低水平的STK1物质的前列腺癌患者具有相对较低的HR和更好的预测生存。

在一个实施方式中，所述方法包括将身体样品中所测定的STK1物质水平与阈值进行比较。在这样的实施方式中，预测患者的生存包括如果身体样品中所测定的STK1物质水平超过阈值，则预测患者的生存不良，否则预测患者的生存良好。

对于诊断为M0前列腺癌的患者，在诊断前列腺癌时测量的STK1水平具有0.15-0.41μg/L(0.152-0.412μg/L)的四分位距(IQR)，也称为中间差距、中间50％或H差距，中位值为0.23μg/L(0.228μg/L)。对于诊断为M1前列腺癌的患者，在诊断时的相应IQR为0.33-0.82μg/L(0.332-0.821μg/L)，中位值为0.61μg/L(0.611μg/L)。

在一个实施方式中，阈值在0.15μg/L至0.45μg/L的区间内选择，优选在0.175μg/L至0.40μg/L的区间内，诸如在0.20μg/L至0.30μg/L的区间内，且更优选在0.20μg/L至0.25μg/L的区间内，诸如0.23μg/L。此阈值特别适用于诊断为M0前列腺癌的前列腺癌患者。

在另一实施方式中，阈值在0.30μg/L至0.90μg/L的区间内选择，优选在0.40μg/L至0.80μg/L的区间内，诸如在0.50μg/L至0.70μg/L的区间内，且更优选在0.60μg/L至0.65μg/L的区间内，诸如0.61μg/L。此阈值特别适用于诊断为M1前列腺癌的前列腺癌患者。

在又一实施方式中，阈值在0.25μg/L至0.45μg/L的区间内选择，优选在0.275μg/L至0.425μg/L的区间内，诸如在0.30μg/L至0.40μg/L的区间内，且更优选在0.325μg/L至0.375μg/L的区间内，诸如0.348μg/L。此阈值可用于诊断为前列腺癌的前列腺癌患者，而与癌症阶段无关。

在又另一实施方式中，阈值在0.25至0.75μg/L的区间内选择，优选在0.30至0.65μg/L的区间内，且更优选在0.325至0.375μg/L的区间内。

也可能使用多个，即至少两个不同的阈值来预测前列腺癌患者的生存。例如，第一阈值和第二阈值可用于区分以下患者：具有良好生存率且在身体样品中所测定的STK1物质水平小于或小于等于第一阈值的患者、具有中等或中间生存率且在身体样品中所测定的STK1物质水平大于等于或大于第一阈值但小于或小于等于第二阈值的患者、以及具有较差生存率且在身体样品中所测定的STK1物质水平大于等于或大于第二阈值的患者。

在一个实施方式中，第一阈值在0.15μg/L至0.45μg/L的区间内选择，优选在0.175μg/L至0.40μg/L的区间内，诸如在0.20μg/L至0.30μg/L的区间内，且更优选在0.225μg/L至0.25μg/L的区间内，诸如0.24μg/L。在此实施方式中，第二阈值在0.30μg/L至0.90μg/L的区间内选择，优选在0.40μg/L至0.80μg/L的区间内，诸如在0.45μg/L至0.70μg/L的区间内，且更优选在0.50μg/L至0.60μg/L的区间内，诸如0.54μg/L或0.537μg/L，限制条件是第二阈值大于第一阈值。

在一个实施方式中，所述方法还包括测定来自患者的身体样品中的前列腺特异性抗原(PSA)。在此实施方式中，预测患者的生存包括基于身体样品中所测定的STK1物质水平和基于身体样品中所测定的PSA来预测患者的生存。

PSA也称为γ-精浆蛋白或激肽释放酶-3(KLK3)，是一种在人体中由KLK3基因编码的糖蛋白酶。PSA少量存在于前列腺健康的男性的血清中，但在存在前列腺癌或其他前列腺病症时通常会升高。PSA并不是前列腺癌的唯一指标，并且还可以检测前列腺炎或良性前列腺增生。

PSA可在与STK1物质相同的取自患者的身体样品中测定。或者，PSA可在取自患者的另一个身体样品中测定。上面讨论的身体样品实例也适用于PSA。例如，PSA可以在取自患者的体液样品(特别是血液样品、血浆样品或血清样品)中测定。

在一个实施方式中，所述方法还包括确定患者的国际泌尿病理学会(ISUP)的Gleason等级组。在此实施方式中，预测患者的生存包括基于身体样品中所测定的STK1物质水平和基于所确定的ISUP Gleason等级组来预测患者的生存。

Gleason评分是病理学家在显微镜下检查从活检获得的癌组织后给出的。根据细胞的异常情况，所鉴定的细胞以1至5的等级编号给出，1是最低，5是最高。将两种最常见模式的等级相加，得出2至10的分数。分数越高，癌症越具有侵袭性且越快速生长。总分不超过5分是不显著的，不予报告。ISUP Gleason等级组，又称为ISUP等级组，是国际泌尿病理学会发布的前列腺癌分级系统(Am J Surg Pathol(2020)44(8):e87-e99)。ISUP Gleason等级组与Gleason评分之间的映射如表1所示。

表1-ISUP Gleason等级组与Gleason评分之间的映射

如表1所示，在ISUP Gleason等级组与Gleason评分之间存在关系。因此，确定患者的ISUP Gleason等级组并基于身体样品中所测定的STK1物质水平和基于所确定的ISUPGleason等级组来预测患者的生存可替代地通过确定患者的Gleason评分并基于身体样品中测定的STK1物质水平和基于所确定的Gleason评分预测患者的生存来执行。

在一个具体实施方式中，所述方法包括测定来自患者的身体样品中的PSA。在此实施方式中，所述方法还包括确定患者的ISUP Gleason等级组。在此实施方式中，预测患者的生存包括基于身体样品中所测定的STK1物质水平、基于身体样品中所测定的PSA和基于所确定的ISUP Gleason等级组来预测患者的生存。

抗体或其片段特异性结合至STK1物质，且具体来说特异性结合至血清形式的TK1蛋白。

抗体或其片段的特异性可以基于亲和力和/或亲合力来确定。由抗原与抗体或其片段解离的平衡常数(K_d)表示的亲和力是抗原决定簇与抗体或其片段上的抗原结合位点之间的结合强度的量度。K_d值越小，抗原决定簇与抗体或其片段的结合强度越强。或者，亲和力也可以表示为亲和力常数(K_a)，即1/K_d。如本领域技术人员将清楚的，可以本身已知的方式确定亲和力，这取决于特定目标抗原。

亲合力是抗体或其片段与相关抗原之间结合强度的量度。亲合力与以下两者相关：抗原决定簇与其在抗体或其片段上的抗原结合位点之间的亲和力及抗体或其片段上存在的相关结合位点的数目。

通常，抗体将以10^-5至10^-12摩尔/升(M)或更小、优选10^-7至10^-12M或更小且更优选10^-8至10^-12M的解离常数(K_d),即以10⁵至10¹²M^-1或更大、优选10⁷至10¹²M^-1或更大且更优选10⁸至10¹²M^-1的缔合常数(K_a)结合至其抗原。

大于10^-4M的任何K_d值(或小于10⁴M^-1的任何K_a值)通常被认为指示非特异性结合。优选地，抗体或其片段将以小于500nM、优选小于200nM、更优选小于10nM、诸如小于5nM或甚至更低、诸如1nM或更低的亲和力结合至STK1物质。

抗体或其片段与抗原或抗原决定簇的特异性结合可以任何合适的本身已知的方式来确定，包括例如Scatchard分析和/或竞争性结合测定，诸如放射免疫测定(RIA)、酶免疫测定(EIA)和夹层竞争测定，以及本领域本身已知的其不同变型。

在一个实施方式中，抗体是单克隆抗体，即单克隆抗TK1抗体。在另一实施方式中，抗体是多克隆抗体，即多克隆抗TK1抗体。

在一个实施方式中，抗体或其片段对由来自TK1(优选人TK1)的C端区域的氨基酸序列组成的表位或肽具有特异性。

所述肽优选地选自人中的TK1从氨基酸位置200至TK1的末端(即氨基酸位置234)(SEQ ID NO：28)的一部分。在一个具体实施方式中，肽选自TK1蛋白从氨基酸位置205(优选210)至氨基酸位置230(优选225)的一部分。

肽优选是N聚体，其中N是在8至20范围内的整数，优选在10至15范围内的整数。肽优选由TK1蛋白C端区域中的N个连续氨基酸组成。

在一个实施方式中，肽由以下氨基酸序列GEAVAARKLF(SEQ ID NO:1)组成。在另一实施方式中，肽由以下氨基酸序列NCPVPGKPGE(SEQ ID NO:2)组成。在又一实施方式中，肽由以下氨基酸序列PVPGKPGEAV(SEQ ID NO:3)组成。在又另一实施方式中，肽由以下氨基酸序列NCPVPGKPGEAV(SEQ ID NO:4)组成。

对由GEAVAARKLF(SEQ ID NO:1)组成的表位具有特异性的单克隆抗体包含具有氨基酸序列DYEMH(SEQ ID NO:5)的可变重(VH)结构域互补决定区1(CDR1)、具有氨基酸序列AIHPGYGGTAYNQKFKG(SEQ ID NO:6)的VH结构域CDR2、具有氨基酸序列FITKFDY(SEQ ID NO:7)的VH结构域CDR3、具有氨基酸序列KSSQSLLDSDGKTFLN(SEQ ID NO:8)的可变轻(VL)结构域CDR1、具有氨基酸序列LVSKLDS(SEQ ID NO:9)的VL结构域CDR2和具有氨基酸序列WQGTHFPWT(SEQ ID NO:10)的VL结构域CDR3。

对表位NCPVPGKPGE(SEQ ID NO:2)、PVPGKPGEAV(SEQ ID NO:3)和NCPVPGKPGEAV(SEQ ID NO:4)具有特异性的单克隆抗体包含具有氨基酸序列DYEMH(SEQ ID NO:5)的VH结构域CDR1、具有氨基酸序列AILPGSGGTAYNQKFKG(SEQ ID NO:11)的VH结构域CDR2、具有氨基酸序列LITTFDY(SEQ ID NO:12)的VH结构域CDR3、具有氨基酸序列KSSQSLLDSDGKTYLN(SEQID NO:13)的VL结构域CDR1、具有氨基酸序列LVSKLDS(SEQ ID NO:9)的VL结构域CDR2和具有氨基酸序列WQGTHFPWT(SEQ ID NO:10)的VL结构域CDR3。

在另一实施方式中，抗体或其片段对人TK1的构象依赖性表位具有特异性。对此类构象依赖性表位有特异性的单克隆抗体包含具有氨基酸序列SGYSWH(SEQ ID NO:14)的VH结构域CDR1、具有氨基酸序列YIHYSGSTTYNPSLKG(SEQ ID NO:15)的VH结构域CDR2、具有氨基酸序列WGTGHWYFDV(SEQ ID NO:16)的VH结构域CDR3、具有氨基酸序列RSSTGAVTTTNYAN(SEQ ID NO:17)的VL结构域CDR1、具有氨基酸序列GTNNRVP(SEQ ID NO:18)的VL结构域CDR2和具有氨基酸序列ALWYSNHWV(SEQ ID NO:19)的VL结构域CDR3。

可根据实施方式使用的单克隆抗TK1抗体的上述三个实例进一步公开于WO 2015/094106中，其关于单克隆抗TK1抗体的教导通过引用并入本文。

因此，在一个实施方式中，单克隆抗体或其片段选自由以下组成的组：对人TK1的GEAVAARKLF(SEQ ID NO:1)具有特异性的单克隆抗体或其片段；对人TK1的NCPVPGKPGE(SEQID NO:2)、PVPGKPGEAV(SEQ ID NO:3)和NCPVPGKPGEAV(SEQ ID NO:4)中的至少一个具有特异性的单克隆抗体或其片段；以及对人TK1的构象依赖性表位具有特异性的单克隆抗体或其片段。

在另一实施方式中，抗体或其片段对由KPGEAVAARKLFAPQ(SEQ ID NO：20)组成的表位或肽具有特异性。至少一种额外的氨基酸(诸如半胱氨酸残基)可以添加到肽的N端或C端，优选N端，以用作与其他分子诸如载体蛋白的偶联。

对此表位具有特异性的抗体在WO 95/29192中进一步公开，其关于抗TK1抗体的教导通过引用并入本文。

在又一实施方式中，抗体或其片段对由来自TK1的活性位点的氨基酸序列组成的表位或肽具有特异性。所述肽优选地选自人TK1中从氨基酸位置150至氨基酸位置190的TK1的一部分。在一个具体实施方式中，肽选自TK1的一部分，范围从氨基酸位置155、优选160且更优选161，至氨基酸位置185、优选183。

肽优选是M聚体，其中M是在10至40范围内的整数，优选在20至30范围内，且更优选23或24。肽优选由TK1蛋白活性位点中的M个连续氨基酸组成。

至少一种额外的氨基酸(诸如半胱氨酸残基)可以添加到肽的N端或C端，优选N端，以用作与其他分子诸如载体蛋白的偶联。

在一个实施方式中，由来自TK1活性位点的氨基酸序列组成的肽具有对应于人TK1中氨基酸位置161至183的氨基酸序列，即具有氨基酸序列AYTKRLGTEKEVEVIGGADKYHS(SEQID NO:21)。

对此表位具有特异性的抗体在WO 2008/142664中进一步公开，其关于抗TK1抗体的教导通过引用并入本文。

在又一实施方式中，抗体或其片段是如WO 2019/201901中所公开的单克隆抗体或其片段，其关于单克隆抗TK1抗体的教导通过引用并入本文。

例如，单克隆抗体可以是mAb 6C6、mAb 4H4或mAb 23C11。

mAb 6C6 VH结构域(SEQ ID NO:22)：

mAb 6C6 VL结构域(SEQ ID NO:23)：

mAb 4H4 VH结构域(SEQ ID NO:24)：

mAb 4H4 VL结构域(SEQ ID NO:25)：

mAb 23C11 VH结构域(SEQ ID NO:26)：

mAv 23C11 VL结构域(SEQ ID NO:27)：

在一个实施方式中，使用试剂盒测定身体样品中STK1物质的水平。试剂盒优选包含第一抗体或其第一片段和第二抗体或其第二片段。第一和第二抗体可以选自单克隆和多克隆抗TK1抗体的上述说明性实例。

在一个具体实施方式中，试剂盒包含对选自由以下组成的组中的表位具有特异性的第一单克隆抗体或其第一片段：i)人TK1的GEAVAARKLF(SEQ ID NO:1)，ii)人TK1的NCPVPGKPGE(SEQ ID NO:2)、PVPGKPGEAV(SEQ ID NO:3)和NCPVPGKPGEAV(SEQ ID NO:4)中的至少一个，以及iii)人TK1的构象依赖性表位。试剂盒还包含对选自由以下组成的组中的表位具有特异性的第二单克隆抗体或其第二片段：i)人TK1的GEAVAARKLF(SEQ ID NO:1)，ii)人TK1的NCPVPGKPGE(SEQ ID NO:2)、PVPGKPGEAV(SEQ ID NO:3)和NCPVPGKPGEAV(SEQID NO:4)中的至少一个，以及iii)人TK1的构象依赖性表位。

在一个实施方式中，第一抗体或其第一片段是固定到支撑物或意图固定到支撑物上的所谓的捕获抗体，而第二抗体或其第二片段是所谓的检测抗体。在另一实施方式中，第二抗体或其第二片段是固定到支撑物或意图固定到支撑物上的捕获抗体，而第一抗体或其第一片段用作检测抗体。

在一个实施方式中，第一和第二抗体或第一和第二片段对STK1物质中的不同表位具有特异性。

在另一实施方式中，第一和第二抗体或第一和第二片段对STK1物质中的相同表位具有特异性。这是可能的，因为相同的表位可能存在于多个TK1蛋白单元的高分子量复合物中的多个拷贝中。因此，STK1物质可以是多个即至少两个TK1蛋白单元的多价复合物。事实上，相同类型的抗体或其片段可以用作第一和第二抗体或第一和第二片段。

在一个实施方式中，第一和第二抗体或第一和第二片段中的一个对由来自TK1活性位点的氨基酸序列组成的肽具有特异性，而第一和第二抗体或第一和第二片段中的另一个对由来自TK1的C端区域的氨基酸序列组成的肽具有特异性。

在另一实施方式中，第一和第二抗体或第一和第二片段中的一个对由来自TK1的C端区域的第一氨基酸序列组成的肽具有特异性，而第一和第二抗体或第一和第二片段中的另一个对由来自TK1的C端区域的第一氨基酸序列或来自TK1的C端区域的第二不同氨基酸序列组成的肽具有特异性。

在又一实施方式中，第一和第二抗体或第一和第二片段中的一个对由来自TK1的C端区域的第一氨基酸序列组成的肽具有特异性，而第一和第二抗体或第一和第二片段中的另一个对人TK1的构象依赖性表位具有特异性。

如本文所用的抗体片段可以选自由以下组成的组：单链抗体、Fv片段、scFv片段、Fab片段、F(ab’)₂片段、Fab'片段、Fd片段、单域抗体(sdAb)、scFv-Fc片段、二-scFv片段和CDR区。

在一个实施方式中，试剂盒是夹心测定试剂盒。在一个具体实施方式中，试剂盒是酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒，且优选是夹心ELISA。

在下面的讨论中，假设第一抗体或第一片段是捕获抗体，而第二抗体或第二片段充当检测抗体。然而，实施方式不限于此，而是可以切换捕获和检测抗体。

夹心ELISA可用于检测身体样品中的STK1物质，方法是准备支撑物诸如固体支撑物的表面，第一抗体或第一片段作为所谓的捕获抗体结合到该支撑物的表面上。在一个优选的实施方式中，已知量的第一抗体或第一片段结合到支撑物的表面上。表面上的任何非特异性结合位点任选但优选地被阻断。然后将身体样品施加到表面，以便其中存在的任何STK1物质将被固定的第一抗体或第一片段捕获。未结合的物质优选通过一个或多个洗涤步骤去除。然后添加通常称为检测抗体的第二抗体或第二片段，并使其与第一抗体或第一片段所捕获的任何STK1物质结合。

然后通过直接或间接检测方法测定结合的第二抗体或第二片段的量。例如，标记或酶可以直接附着到第二抗体或第二片段上，或经由接头诸如生物素-链霉亲和素或生物素-亲和素接头间接附着。或者，可能使用标记或连接到酶并特异性结合至第二抗体或第二片段的第二抗体或第二片段。

因此，在一个实施方式中，第二抗体或第二片段具有共价附着的生物素。或者，第二抗体或第二片段具有共价附着的链霉亲和素或亲和素。

试剂盒优选还包含辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素或HRP标记的亲和素。或者，试剂盒还包含HRP标记的生物素。试剂盒还包含HRP底物，诸如3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)底物、3,3'-二氨基联苯胺(DAB)底物或2,2'-次偶氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)底物。在这种情况下，样品中STK1物质的水平可以通过分光光度法测定，所述方法检测通过HRP将显色底物向可检测的有色产物的转化。

在一个实施方式中，试剂盒还包括微量滴定板(MCP)作为第一抗体或第一片段被固定或意图被固定的支撑物。

试剂盒不一定必须是ELISA试剂盒。在另一实施方式中，试剂盒使用亲和色谱，其中第一抗体与固定相结合，诸如与柱中的凝胶基质或珠结合。例如，凝胶基质或珠可以由琼脂糖诸如

制成。

在这种情况下，身体样品中存在的TK1物质将通过与固定的第一抗体或第一片段结合而被截留在柱中。洗涤后，结合的STK1物质可以用第二抗体或第二片段洗脱和检测。例如，洗脱的STK1物质的量可以使用蛋白质印迹和使用直接或间接检测方法检测STK1的第二抗体或第二片段来测定。

支撑物也可以是磁珠，诸如

磁珠。

在又一实施方式中，试剂盒是化学发光免疫测定(CLIA)试剂盒。CLIA是一种免疫测定技术，其中标记是发光分子。CLIA方法可以是直接的，使用发光体标志物，也可以是间接的，使用酶标志物。任一种方法都可能是竞争性的或非竞争性的。在直接CLIA方法中，使用的发光体标志物通常是吖啶和钌酯，而间接方法中使用的酶标志物通常是具有金刚烷基1,2-二氧杂环丁烷芳基磷酸酯(AMPPD)底物的碱性磷酸酶和具有鲁米诺或其衍生物作为底物的HRP。

试剂盒不一定必须包括两种抗体或片段，而是可以仅包括一种抗体或片段。

此外，试剂盒不一定必须包含所谓的捕获抗体或片段。与此形成鲜明对比的是，可以使用多种(即至少两种)不同的抗体或片段来测定STK1物质的水平，而无需固定至少一种抗体或片段。

在一个实施方式中，所述方法还包括基于所预测的患者生存为患者选择抗癌治疗。因此，基于身体样品中所测定的STK1物质水平并由此基于根据身体样品中所测定的STK1物质水平为患者估计的预测生存，为前列腺癌患者选择最佳或至少合适的抗癌治疗。这意味着与具有相对较低水平的STK1物质并因此具有更好的预测生存率的患者相比，可以为具有高测定水平的STK1物质并因此具有较差的预测生存率的患者选择更积极的抗癌治疗。可以选择的抗癌治疗的实例包括以下中的一种或多种：前列腺切除术，诸如根治性前列腺切除术、机器人前列腺切除术、腹腔镜前列腺切除术或双侧睾丸切除术；放射疗法，诸如外束放射疗法、近距离放射疗法、调强放射疗法(IMRT)或质子疗法；局部疗法，诸如冷冻手术或高强度聚焦超声(HIFU)疗法；雄激素剥夺疗法(ADT)，诸如双侧睾丸切除术、促黄体激素释放激素(LHRH)激动剂疗法、LHRH拮抗剂疗法或抗雄激素疗法。例如，可以选择所测定的STK1物质水平超过前述阈值的前列腺癌患者进行第一抗癌治疗，而选择所测定的STK1物质水平低于阈值的其他患者进行第二不同的抗癌治疗。

在一个实施方式中，所述方法包括基于所预测的患者生存为患者选择患者监测计划。因此，基于身体样品中所测定的STK1物质水平并由此基于根据身体样品中所测定的STK1物质水平为患者估计的预测生存，为前列腺癌患者选择最佳或至少合适的患者监测计划或方案。这意味着与STK1物质水平相对较低并因此具有更好的预测生存率的患者相比，可以选择具有高测定水平的STK1物质并因此具有较差的预测生存率的患者进行更频繁的监测和随访(第一监测计划)，而前者可以遵循较低频率的监测和随访(第二监测计划)。

实施例

本实施例评估血清TK1水平是否可以用作诊断之后前列腺癌进展风险的标志物。

材料和方法

研究群体包括40名诊断时患有T1或T2Nx/0M0前列腺癌的男性和43名诊断时患有新发转移癌(M1)的男性，如通过骨扫描成像所证实。2000-2010年间，所有男性都在TampereUniversity Hospital,Department of Urology接受了诊断和治疗。所有男性在诊断时都提供了血清样品。有关死亡和死因的信息获自芬兰统计局的国家死因登记处。

根据制造商说明书，使用AroCell TK210 ELISA(Uppsala,Sweden)测定血清样品中的TK1水平。简言之，将血清样品、校准品和对照与样品稀释缓冲液(SDB)在室温下预孵育1小时。预孵育后，将样品添加到预洗涤过的抗TK1抗体包被板中，并在摇动平台上再次孵育2小时。将板洗涤4次并添加生物素化的抗TK1抗体。在孵育和4次洗涤后，将酶标记的链霉亲和素HRP移液到孔中，并在孵育步骤和4次洗涤之后，添加底物。随后停止显色，并通过分光光度计在450nm处测量颜色强度。显现的颜色与样品中TK1蛋白的浓度成比例。通过使用校准曲线和4-PL曲线拟合程序计算样品中的血清TK1蛋白水平。每个样品一式两份分析，并且平均值表示为μg/L。

统计学分析

Cox比例危险回归方法用于估计前列腺癌特异性死亡与任何原因导致的死亡的危险比率。时间度量是前列腺癌诊断后的几个月。随访结束于死亡、从芬兰移民或截止日期为2019年8月31日，以先到者为准。诊断时针对活检ISUP Gleason等级组、TNM分期(T分期)和PSA来调整分析。

在以疾病复发为终点的单独Cox回归模型中评估无复发生存期。在这项分析中，随访在第一次前列腺癌复发之日、死亡或截止日期结束，以先到者为准。将相同的模型调整用于分析前列腺癌特异性死亡和由任何原因所致的死亡的风险。

研究参与者按TK1水平的中位数和四分位数分层。TK1水平等于或低于中位数的参与者被用作参考组。分析了生存趋势，包括Cox回归模型中的TK1水平作为连续变量。此外，Kaplan-Meier曲线用于视觉评估生存差异。

随机森林分类用于评估TK1相对于已确定的预后因素作为前列腺癌死亡预测因子的附加价值。已确定的预后因素ISUP Gleason等级组、诊断时的PSA和临床T分期的不同组合以及新型标志物TK1被用作前列腺癌死亡的分类因子。一组预后因素的预测值按每个模型的分类误差进行排序，其中较低的分类误差表示更好的模型预测。每个随机森林模型重复了1000次以用于经验置信区间估计，对于所获得的1000个误差估计值使用百分位数方法，并将这些中位值作为分类误差的点估计值。

结果

M1病例大于M0病例；中位年龄分别为72岁和62岁。M1病例也更常首先通过症状来检测(41.9％对12.5％)，而不是通过前列腺特异性抗原(PSA)测试。M1病例主要采用雄激素剥夺疗法，而M0病例最常采用根治性前列腺切除术治疗，参见表2。

表2-诊断时肿瘤M期的TK1水平和群体特征

*四分位距

**包括近距离放射治疗、监测

表3-活检时肿瘤ISUP Gleason等级组的TK1水平

与M0病例相比，M1病例的中位血清TK1水平显著较高(p差异<0.001)。在合并的研究群体中，STK1水平是在针对已确定的预后因素(包括肿瘤T期、诊断时的PSA、活检时的ISUP Gleason等级组和M期)进行调整后前列腺癌特异性死亡率(HR 8.33，95％CI 2.05-33.88，对于TK1高于中位数对比等于或低于中位数)和总死亡率(HR 5.53,95％CI 1.93-15.85)的重要预测因子，参见表4。

表4-通过TK1水平诊断前列腺癌后的总体和癌症特异性生存

使用Cox回归模型计算多变量调整估计值，其中针对诊断时的年龄和PSA、临床T期和M期进行调整。

在Kaplan-Meier分析中，Kaplan-Meier累积(cum)生存曲线在前列腺癌诊断后24个月内开始因其TK1水平而不同，参见图1。

群体特征

在患有新发转移性疾病的男性中，诊断时的中位年龄在TK1水平上没有明显差异(表5)。中位前列腺体积在最低TK1的四分位数(四分位数1)中最高，而诊断时PSA在最高TK1的四分位数中最高(四分位数4；中位数PSA 215.5ng/ml)。诊断时的临床T期和活检ISUPGleason等级组在除四分位数4之外的所有类别中分布相似，仅T3/T4且大部分在ISUPGleason等级组4或5中。几乎所有男性(91％)都主要接受雄激素剥夺疗法。

表5-TK1水平四分位数的群体特征和前列腺癌临床特征。43名被诊断为M1前列腺癌的男性的研究群体

诊断时的血清TK1水平作为前列腺癌特异性和总生存期的预后因素

死亡率因TK1水平而异；TK1在等于或低于中位数对比高于中位数时，未经调整的前列腺癌特异性死亡率分别是501/1,000和524/1,000。

与TK1水平等于或低于中位数的男性相比，在前列腺癌诊断时血清TK1水平高于中位数与更差的前列腺癌特异性(年龄调整的HR 2.47 95％CI 1.05-5.82)和总生存期(HR3.08,95％CI 1.49-6.36)相关(表6)。在针对肿瘤Gleason等级组、诊断时的PSA水平或临床T期进行调整后，风险关联保持不变。对于前列腺癌特异性和总体死亡风险，观察到TK1水平的统计学显著增加的风险趋势(表6)。

表6-前列腺癌(PCa)诊断后按诊断时的TK1中位数分层的总体和癌症特异性生存。43名在诊断时患有新发M1前列腺癌(即在转移期诊断的疾病，以前没有前列腺癌治疗)的男性的研究群体

HR1＝年龄调整的，HR 2＝针对ISUP Gleason等级组调整的，HR 3＝针对诊断时的PSA调整的，HR 4＝针对临床T期调整的

在Kaplan-Meier分析中，TK1四分位数的分层显示了不同疾病特异性生存的不同组，特别是在针对年龄(图2A)和诊断时的PSA(图2C)调整的分析中。针对ISUP Gleason等级组和诊断时的临床T期的调整减弱了前三个四分位数之间的生存差异，而与TK1较高的男性相比，具有最低TK1水平的四分位数仍然具有明显更好的生存率(图2B和2D)。在所有模型的调整下，生存曲线在前列腺癌诊断后大约24个月内在TK1水平上开始明显分化。

TK1相对于已确定的前列腺癌预后标志物的额外预后价值

与任何其他模型相比，将TK1、ISUP Gleason等级组和PSA作为分类因子纳入随机森林分类模型对前列腺癌死亡产生了最准确的预测(图3)。值得注意的是，与单独使用PSA和ISUP Gleason等级组的模型相比，这三个变量的组合显示出更高的平均预测准确性，证实了TK1的独立额外预后价值。与没有它的模型相比，所有具有临床T期作为分类因子的模型的平均预测误差都更差。因此，T期被排除在模型之外。总体而言，以组合形式使用TK1、ISUP Gleason等级组和PSA对前列腺癌死亡的平均预测误差非常好(图3)。

诊断时患有局限性前列腺癌的男性中的TK1

在诊断时患有临床局限性癌症的40名男性中，在诊断后120个月的中位随访期间，只有1名男性死于前列腺癌。与患有新发转移性疾病的男性相比，中位血清TK1水平显著降低(转移和局限性病例的中位值分别为0.61和0.28μg/l)。在此组中，TK1水平在活检ISUPGleason等级组中没有显著差异(3-5级和1-2级肿瘤的中位值分别为0.23和0.21μg/l)。

在这项对43名被诊断为新发转移性前列腺癌的男性进行的临床研究中，血清TK1水平显示出对疾病特异性和总体生存的独立预后价值，当与确定的临床因子ISUP Gleason等级组组合时，可提高预后准确性。因此，TK1可用作此高危患者组的风险分层标志物。

肿瘤临床因子的调整对风险关联的影响不同；通过所有模型调整，非常低的TK1水平仍然与良好的生存率相关，但对在诊断时ISUP Gleason等级组和PSA的调整减弱了TK1水平前三个四分位数之间的生存差异。

在所有分析中，诊断后24个月内TK1四分位数之间的生存曲线出现分歧。转移性前列腺癌治疗的基石是雄激素剥夺疗法(ADT)。在转移性前列腺癌中，从ADT开始到去势抵抗发展的中位时间为36-42个月。因此，研究结果表明，无论TK1水平如何，ADT最初都是有效的，但是具有高TK1的男性可能会更快地产生去势抵抗，因此与具有较低TK1的男性相比，其生存较差。

TK1还预测总体生存。可能的解释是，诊断时具有高TK1的男性患有高容量、侵袭性的疾病，必然进展迅速。这些男性死于癌症相关并发症(诸如血栓栓塞)的风险可能较高，这将反映在总体生存中。

血清中TK1水平取决于恶性细胞总数、S期(即处于活跃增殖的)恶性细胞的比例、导致渗漏、其他原因的渗漏和血液供应的细胞破坏数量。在这项研究中，用于TK1测量的血液样品是在诊断时抽取的，在任何细胞毒性治疗开始之前。因此，在我们的病例中，STK1水平主要反映处于活跃增殖和细胞更新的恶性细胞的数量。因此，在未经治疗的情况下，TK1可用作转移性前列腺癌的预后标志物，其可用于帮助风险分层和治疗选择。

与患有转移性疾病的男性相比，诊断时患有局限性前列腺癌的男性的中位TK1水平较低，这也支持TK1水平主要受处于活跃增殖和细胞更新的恶性细胞数量的影响。在此组中，只有一名男性死于前列腺癌，因此无法评估TK1的预后价值。TK1测量可能主要在晚期疾病病例中提供附加的临床价值。

与循环肿瘤DNA(ctDNA)(另一种被认为具有预后价值的血源性标志物)相比，TK1蛋白水平的测量在逻辑上更容易，因为它可以从储存的血液样品中完成，并使用简单的ELISA试剂盒测定。

总之，对43名新发转移性前列腺癌男性的前瞻性队列研究表明，TK1可用作晚期前列腺癌的新预后标志物，准确预测疾病特异性生存，其附加价值优于已确定的临床标志物ISUP Gleason等级组(或Gleason评分)、T期和PSA水平。

血清中的增殖标志物TK1有力地预测了前列腺癌诊断后的生存，证明了对确定的临床风险因子的额外价值。在为前列腺癌患者选择最佳治疗和监测计划时，应将TK1纳入前列腺癌风险分层中。

以上所述的实施方式应被理解为是本发明的几个说明性实例。本领域的技术人员应当理解，可对实施方式做出各种修改、组合和变化而不背离本发明的范围。具体地，在技术上可能的情况下，不同实施方式中的不同部分解决方案可组合为其他配置。

序列表

<110> 阿罗塞尔公司

<120> 预测患者生存

<130> HSJ104503P.WOP

<150> SE 2050091-4

<151> 2020-01-30

<160> 28

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 1

Gly Glu Ala Val Ala Ala Arg Lys Leu Phe

1 5 10

<210> 2

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 2

Asn Cys Pro Val Pro Gly Lys Pro Gly Glu

1 5 10

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 3

Pro Val Pro Gly Lys Pro Gly Glu Ala Val

1 5 10

<210> 4

<211> 12

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 4

Asn Cys Pro Val Pro Gly Lys Pro Gly Glu Ala Val

1 5 10

<210> 5

<211> 5

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 5

Asp Tyr Glu Met His

1 5

<210> 6

<211> 17

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 6

Ala Ile His Pro Gly Tyr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 7

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 7

Phe Ile Thr Lys Phe Asp Tyr

1 5

<210> 8

<211> 16

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 8

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Phe Leu Asn

1 5 10 15

<210> 9

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 9

Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser

1 5

<210> 10

<211> 9

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 10

Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Trp Thr

1 5

<210> 11

<211> 17

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 11

Ala Ile Leu Pro Gly Ser Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 12

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 12

Leu Ile Thr Thr Phe Asp Tyr

1 5

<210> 13

<211> 16

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 13

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 14

<211> 6

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 14

Ser Gly Tyr Ser Trp His

1 5

<210> 15

<211> 16

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 15

Tyr Ile His Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Gly

1 5 10 15

<210> 16

<211> 10

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 16

Trp Gly Thr Gly His Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 17

<211> 14

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 17

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Thr Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 18

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 18

Gly Thr Asn Asn Arg Val Pro

1 5

<210> 19

<211> 9

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 19

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val

1 5

<210> 20

<211> 15

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 20

Lys Pro Gly Glu Ala Val Ala Ala Arg Lys Leu Phe Ala Pro Gln

1 5 10 15

<210> 21

<211> 23

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 21

Ala Tyr Thr Lys Arg Leu Gly Thr Glu Lys Glu Val Glu Val Ile Gly

1 5 10 15

Gly Ala Asp Lys Tyr His Ser

20

<210> 22

<211> 185

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 兔mAb 6C6 VH结构域

<400> 22

Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys

20 25 30

Pro Glu Gly Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Arg Phe Ser Phe

35 40 45

Ser Ser Ser Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

50 55 60

Leu Glu Trp Ile Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Asp Ser Gly Ser Ser Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Lys Thr Ser Ser

85 90 95

Thr Thr Val Thr Leu Gln Thr Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala

100 105 110

Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ala Ser Val Gly Ala Ala Tyr Asp Tyr Phe

115 120 125

Ala Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gln Pro

130 135 140

Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro

145 150 155 160

Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu

165 170 175

Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly

180 185

<210> 23

<211> 236

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 兔mAb 6C6 VL结构域

<400> 23

Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp

1 5 10 15

Leu Pro Gly Ala Arg Cys Ala Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser

20 25 30

Val Glu Ala Ala Met Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser

35 40 45

Glu Asp Val Ser Ser His Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln

50 55 60

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val

65 70 75 80

Pro Ser Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Ala

85 90 95

Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly

100 105 110

Tyr Tyr Tyr Ile Ser Asp Ser Pro Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu

115 120 125

Val Val Val Lys Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro

130 135 140

Pro Ala Ala Asp Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val

145 150 155 160

Ala Asn Lys Tyr Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly

165 170 175

Thr Thr Gln Thr Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser

180 185 190

Ala Asp Cys Thr Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr

195 200 205

Gln Tyr Asn Ser His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr

210 215 220

Thr Ser Val Val Gln Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys

225 230 235

<210> 24

<211> 187

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 兔4H4 VH结构域

<400> 24

Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

20 25 30

Glu Gly Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser

35 40 45

Ser Gly Tyr Asp Met Cys Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Ile Ala Cys Ile Ser Val Asp Ser Asp Gly Val Thr Tyr Tyr

65 70 75 80

Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr

85 90 95

Thr Val Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr

100 105 110

Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Tyr Glu Ser Ser Ser Gly Val Tyr Ile Pro

115 120 125

Tyr Phe Thr Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly

130 135 140

Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly Asp

145 150 155 160

Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Leu

165 170 175

Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly

180 185

<210> 25

<211> 238

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 兔mAb 4H4 VL结构域

<400> 25

Met Asp Met Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp

1 5 10 15

Leu Pro Gly Ala Arg Cys Ala Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala

20 25 30

Ser Val Glu Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala

35 40 45

Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly

50 55 60

Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln

100 105 110

His Tyr Tyr Tyr Ser Ser Thr Ser Gly Gly Gly Val Phe Gly Gly Gly

115 120 125

Thr Glu Val Val Val Lys Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile

130 135 140

Phe Pro Pro Ala Ala Asp Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val

145 150 155 160

Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val

165 170 175

Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln

180 185 190

Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr

195 200 205

Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln

210 215 220

Gly Thr Thr Ser Val Val Gln Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys

225 230 235

<210> 26

<211> 179

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 兔mAb 23C11 VH结构域

<400> 26

Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro

20 25 30

Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser

35 40 45

Asn Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Trp Ile Gly Ile Ile Tyr Gly Asp Asp Asn Thr Tyr Cys Ala Asn Trp

65 70 75 80

Thr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu

85 90 95

Thr Ile Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala

100 105 110

Arg Gly Pro Asp Tyr Ile Ala Ala Lys Met Asp Ile Trp Gly Pro Gly

115 120 125

Thr Leu Val Thr Val Ser Leu Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe

130 135 140

Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu

145 150 155 160

Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp

165 170 175

Asn Ser Gly

<210> 27

<211> 239

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 兔mAb 23C11 VL结构域

<400> 27

Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp

1 5 10 15

Leu Pro Gly Ala Arg Cys Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser

20 25 30

Val Glu Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser

35 40 45

Gln Ser Ile Ser Gly Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

50 55 60

Arg Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val

65 70 75 80

Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr

85 90 95

Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys

100 105 110

Thr Tyr Gly Ser Ser Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Asn Ala Phe Gly Gly

115 120 125

Gly Thr Glu Val Val Val Lys Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu

130 135 140

Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile

145 150 155 160

Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu

165 170 175

Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro

180 185 190

Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu

195 200 205

Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr

210 215 220

Gln Gly Thr Thr Ser Val Val Gln Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys

225 230 235

<210> 28

<211> 234

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 28

Met Ser Cys Ile Asn Leu Pro Thr Val Leu Pro Gly Ser Pro Ser Lys

1 5 10 15

Thr Arg Gly Gln Ile Gln Val Ile Leu Gly Pro Met Phe Ser Gly Lys

20 25 30

Ser Thr Glu Leu Met Arg Arg Val Arg Arg Phe Gln Ile Ala Gln Tyr

35 40 45

Lys Cys Leu Val Ile Lys Tyr Ala Lys Asp Thr Arg Tyr Ser Ser Ser

50 55 60

Phe Cys Thr His Asp Arg Asn Thr Met Glu Ala Leu Pro Ala Cys Leu

65 70 75 80

Leu Arg Asp Val Ala Gln Glu Ala Leu Gly Val Ala Val Ile Gly Ile

85 90 95

Asp Glu Gly Gln Phe Phe Pro Asp Ile Val Glu Phe Cys Glu Ala Met

100 105 110

Ala Asn Ala Gly Lys Thr Val Ile Val Ala Ala Leu Asp Gly Thr Phe

115 120 125

Gln Arg Lys Pro Phe Gly Ala Ile Leu Asn Leu Val Pro Leu Ala Glu

130 135 140

Ser Val Val Lys Leu Thr Ala Val Cys Met Glu Cys Phe Arg Glu Ala

145 150 155 160

Ala Tyr Thr Lys Arg Leu Gly Thr Glu Lys Glu Val Glu Val Ile Gly

165 170 175

Gly Ala Asp Lys Tyr His Ser Val Cys Arg Leu Cys Tyr Phe Lys Lys

180 185 190

Ala Ser Gly Gln Pro Ala Gly Pro Asp Asn Lys Glu Asn Cys Pro Val

195 200 205

Pro Gly Lys Pro Gly Glu Ala Val Ala Ala Arg Lys Leu Phe Ala Pro

210 215 220

Gln Gln Ile Leu Gln Cys Ser Pro Ala Asn

225 230

Claims

1.一种用于预测患者生存的方法，其包括：

使用与人TK1的血清形式特异性结合的抗体或其片段测定来自诊断为前列腺癌的患者的身体样品中血清胸苷激酶1(STK1)物质的水平；以及

基于所述身体样品中所测定的STK1物质水平来预测所述患者的生存。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，

测定STK1物质的水平包括使用与人TK1的血清形式特异性结合的抗体或其片段测定血清样品或血浆样品中STK1物质的水平；以及

预测患者的生存包括基于所述血清样品或所述血浆样品中所测定的STK1物质水平来预测所述患者的生存。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中测定身体样品中STK1物质的水平包括：

使所述身体样品与所述抗体或其片段接触；以及

测量与所述STK1物质结合的抗体或其片段的量。

4.根据权利要求3所述的方法，其还包括将与所述STK1物质结合的抗体或其片段的测量量与STK1物质的水平相关联。

5.根据权利要求4所述的方法，其中将抗体或片段的测量量相关联包括使用与重组人TK1结合的抗体或其片段的测量量与重组人TK1浓度之间的预定相关性，将所述抗体或其片段的测量量与STK1物质的水平相关联。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中测定STK1物质的水平包括使用与人TK1的血清形式特异性结合的抗体或其片段测定取自所述患者的所述身体样品中与将所述患者诊断为前列腺癌有关的所述STK1物质的水平。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中测定STK1物质的水平包括使用与人TK1的血清形式特异性结合的抗体或其片段在诊断为转移性前列腺癌的患者的所述身体样品中测定所述STK1物质的水平。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其还包括基于所述身体样品中所测定的STK1物质水平来估计所述患者的危险比率(HR)，其中预测患者的生存包括基于所估计的HR预测所述患者的生存。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其还包括将所述身体样品中所测定的STK1物质水平与阈值进行比较，其中预测患者的生存包括如果所述身体样品中所测定的STK1物质水平超过所述阈值，则预测所述患者的生存较差，否则预测所述患者的生存良好。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述阈值在0.25至0.75μg/L的区间内，优选在0.3至0.65μg/L的区间内，且更优选在0.325至0.375μg/L的区间内选择。

11.根据权利要求9所述的方法，其中所述阈值在0.15至0.45μg/L的区间内，优选在0.175至0.40μg/L的区间内，更优选在0.20至0.30μg/L的区间内，且甚至更优选在0.20至0.25μg/L的区间内选择。

12.根据权利要求9所述的方法，其中所述阈值在0.30至0.90μg/L的区间内，优选在0.40至0.80μg/L的区间内，更优选在0.50至0.70μg/L的区间内，且甚至更优选在0.60至0.65μg/L的区间内选择。

13.根据权利要求9所述的方法，其中，

比较所测定的STK1物质水平包括将所述身体样品中所测定的STK1物质水平与第一阈值和第二阈值进行比较；

预测患者的生存包括：如果所述身体样品中所测定的STK1物质水平低于、或等于或低于第一阈值，则预测良好的生存率；如果所述身体样品中所测定的STK1物质水平等于或高于、或高于第一阈值但低于、或等于或低于第二阈值，则预测中等的生存率；并且如果所述身体样品中所测定的STK1物质水平等于或高于、或高于第二阈值，则预测较差的生存率。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，

所述第一阈值在0.15μg/L至0.45μg/L的区间内，优选在0.175μg/L至0.40μg/L的区间内，诸如在0.20μg/L至0.30μg/L的区间内，且更优选在0.225μg/L至0.25μg/L的区间内选择；并且

所述第二阈值在0.30μg/L至0.90μg/L的区间内，优选在0.40μg/L至0.80μg/L的区间内，诸如在0.45μg/L至0.70μg/L的区间内，且更优选在0.50μg/L至0.60μg/L的区间内选择，限制条件是所述第二阈值大于所述第一阈值。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其还包括测定来自所述患者的身体样品中的前列腺特异性抗原(PSA)，其中预测患者的生存包括基于所述身体样品中所测定的STK1物质水平和基于所述身体样品中所测定的PSA来预测所述患者的生存。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其还包括确定所述患者的International Society of Urological Pathology(ISUP)Gleason等级组或Gleason评分，其中预测患者的生存包括基于所述身体样品中所测定的STK1物质水平和基于所确定的ISUP Gleason等级组或Gleason评分来预测所述患者的生存。

17.根据权利要求16所述的方法，其还包括测定来自所述患者的身体样品中的前列腺特异性抗原(PSA)，其中预测患者的生存包括基于所述身体样品中所测定的STK1物质水平、基于所述身体样品中所测定的PSA和基于所确定的ISUP Gleason等级组或Gleason评分来预测所述患者的生存。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述抗体或其片段是与人TK1血清形式特异性结合的单克隆抗体或片段。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述单克隆抗体或其片段选自由以下组成的组：

对人TK1的GEAVAARKLF(SEQ ID NO:1)具有特异性的单克隆抗体或其片段；

对人TK1的NCPVPGKPGE(SEQ ID NO:2)、PVPGKPGEAV(SEQ ID NO:3)和NCPVPGKPGEAV(SEQ ID NO:4)中的至少一个具有特异性的单克隆抗体或其片段；以及

对人TK1的构象依赖性表位具有特异性的单克隆抗体或其片段。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述单克隆抗体或其片段包含：

具有氨基酸序列SEQ ID NO:5的可变重(VH)结构域互补决定区1(CDR1)；

具有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VH结构域CDR2；

具有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VH结构域CDR3；

具有氨基酸序列SEQ ID NO:8的可变轻(VL)结构域CDR1；

具有氨基酸序列SEQ ID NO:9的VL结构域CDR2；以及

具有氨基酸序列SEQ ID NO:10的VL结构域CDR3。

21.根据权利要求19所述的方法，其中所述单克隆抗体或其片段包含：

具有氨基酸序列SEQ ID NO:11的VH结构域CDR2；

具有氨基酸序列SEQ ID NO:12的VH结构域CDR3；

具有氨基酸序列SEQ ID NO:13的可变轻(VL)结构域CDR1；

具有氨基酸序列SEQ ID NO:9的VL结构域CDR2；以及

具有氨基酸序列SEQ ID NO:10的VL结构域CDR3。

22.根据权利要求19所述的方法，其中所述单克隆抗体或其片段包含：

具有氨基酸序列SEQ ID NO:14的可变重(VH)结构域互补决定区1(CDR1)；

具有氨基酸序列SEQ ID NO:15的VH结构域CDR2；

具有氨基酸序列SEQ ID NO:16的VH结构域CDR3；

具有氨基酸序列SEQ ID NO:17的可变轻(VL)结构域CDR1；

具有氨基酸序列SEQ ID NO:18的VL结构域CDR2；以及

具有氨基酸序列SEQ ID NO:19的VL结构域CDR3。

23.根据权利要求18至22中任一项所述的方法，其中测定STK1物质的水平包括使用用于测定身体样品中STK1物质水平的试剂盒测定所述身体样品中STK1物质的水平，所述试剂盒包含：

对选自由以下组成的组中的表位具有特异性的第一单克隆抗体或其第一片段：

人TK1的GEAVAARKLF(SEQ ID NO:1)；

人TK1的NCPVPGKPGE(SEQ ID NO:2)、PVPGKPGEAV(SEQ ID NO:3)和NCPVPGKPGEAV(SEQID NO:4)中的至少一个；以及

人TK1的构象依赖性表位；和

对选自由以下组成的组中的表位具有特异性的第二单克隆抗体或其第二片段：

人TK1的GEAVAARKLF(SEQ ID NO:1)；

人TK1的构象依赖性表位。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述第一单克隆抗体或其第一片段和所述第二单克隆抗体或其第二片段中的一个被固定到固体支撑物上或意图固定到固体支撑物上。

25.根据权利要求23或24所述的方法，其中所述试剂盒是酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒。

26.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，其还包括基于所述患者的预测生存为所述患者选择抗癌治疗。

27.根据权利要求1至26中任一项所述的方法，其还包括基于所述患者的预测生存为所述患者选择患者监测计划。