CN115023443A - 抗mdr1抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

提供了靶向细胞外排泵MDR1的抗体。还提供了包括或编码此类抗体的药物组合物、核酸、重组表达载体、细胞和试剂盒。还公开了使用所述抗体检测细胞例如肿瘤细胞中的MDR1表达的存在或不存在、MDR1表达水平和/或抑制MDR1功能的方法。此外，提供了与MDR1和肿瘤相关抗原结合的多特异性抗体。还提供了用于治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用如本文公开的抗MDR1抗体或靶向MDR1和肿瘤相关抗原二者的多特异性抗体。

Description

抗MDR1抗体及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年1月29日提交的美国临时专利申请号62/967,470和2020年9月30日提交的美国临时专利申请号63/085,818的优先权权益，将所述申请通过引用以其整体并入本文。
通过引用以文本文件形式提供的序列表并入
序列表以创建于2021年1月28日且大小为291KB的文本文件“KNJY-003WO SEQLIST_ST25.txt”随同提供。将文本文件的内容通过引用以其整体并入本文。
背景技术
耐药性是一种众所周知的当疾病对药物治疗变得耐受时会产生的现象，其在包括肿瘤学在内的各个医学领域都是一个重大且日益严峻的挑战。尽管许多类型的癌症最初对化学疗法敏感，但随着时间的推移，它们可能通过这些机制和其他机制(包括促进药物抑制、降解和增强的外排的DNA突变和代谢变化)而产生耐药性。
外排泵(EP)是由活细胞表达的蛋白质，并且已经进化成从细胞自然外排各种化合物。ATP结合盒(ABC)转运蛋白家族蛋白的成员是使药物外排的EP的例子。尽管转运蛋白的结构因蛋白质而异(例如，人类中有49个已知的ABC家族成员)，但它们均按两个不同结构域(即高度保守的核苷酸结合结构域和更可变的跨膜结构域)的存在进行分类。由ATP结合盒亚家族B成员1(ABCB1)基因编码的多药耐药蛋白1(MDR1)是这些转运蛋白中第一个被鉴定出的并且已经进行了广泛的研究。MDR1表达响应于用某些化疗药物的治疗而增加。
EP能够使肿瘤对化学治疗剂产生耐药性。这种耐药性通常与化学治疗剂从耐药性细胞的外排增强相关。当这种化学疗法耐药性适用于多于一种化学治疗剂时，其被称为多药耐药性(MDR)。
因此，需要开发可用于测定EP表达和/或抑制EP的试剂。
发明内容
提供了靶向细胞外排泵MDR1的抗体。还提供了包括或编码此类抗体的药物组合物、核酸、重组表达载体、细胞和试剂盒。还公开了使用所述抗体检测细胞例如肿瘤细胞中的MDR1表达的存在或不存在、MDR1表达水平和/或抑制MDR1功能的方法。此外，提供了与MDR1和肿瘤相关抗原(TAA)结合的多特异性抗体。还提供了用于治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用如本文公开的抗MDR1抗体或靶向MDR1和TAA二者的多特异性抗体。
附图说明
图1示出了本公开文本的纯化的抗MDR1抗体的色谱图。获得了纯度为92.08％的IgG抗体(MW 171.74kDa)。还有重/轻二聚体“HL”(MW 94.88kDa)和重/重“HH”(MW126.85kDa)以不显著的量存在。
图2A-图2B描绘了与过表达MDR1的293T细胞单点结合的抗MDR1抗体。
图3A-图3D描绘了与MDR1结合的抗MDR1单克隆抗体的滴定。
图4A-图4D展示了所列的抗MDR1抗体对长春新碱细胞毒性的影响。
图5A-图5C示出了所列抗MDR1抗体对裸小鼠耐药性卵巢癌(A2780ADR)模型的功效。
图6示出了所列抗MDR1抗体对裸小鼠耐药性MES-SA-DX5子宫肉瘤模型的功效。
图7示出了抗MDR1抗体B1.223对NSG小鼠耐药性MES-SA-DX5子宫肉瘤模型的功效。
图8展示了耐药性肿瘤中的ABCB1敲除诱导对紫杉醇的化学敏感性。
图9总结了所列抗体与人MDR1的各个区的结合。
图10A-图10C示出了B1.129抗体及其人源化形式与人MDR1和食蟹猴MDR1的结合。
图11示出了B1.28抗体及其人源化形式与人MDR1和食蟹猴MDR1的结合。
图12示出了B1.261抗体及其人源化形式与人MDR1和食蟹猴MDR1的结合
图13总结了所列抗体对MDR1底物外排的影响。
图14示出了抗MDR1和抗CD47双特异性抗体与在C6细胞表面表达的人MDR1的结合。
图15示出了抗MDR1和抗CD47双特异性抗体与在C6细胞表面表达的食蟹猴CD47和人CD47的结合。
图16示出了所列双特异性抗体在DX5 WT、DX5 B1 KO、DX5 CD47 KO细胞系上的结合选择性滴定。
图17A示出了人源化抗MDR1和抗CD47双特异性抗体与过表达人ABCB1(hB1)或人CD47(hKT14)或食蟹猴CD47(cKT14)的C6细胞的结合。
图17B示出了人源化抗MDR1和抗CD47双特异性抗体与过表达人ABCB1(hB1)或人CD47(hKT14)或食蟹猴CD47(cKT14)的C6细胞的结合。
图18A-图18B总结了使用ELISA或表达CD47的细胞并且使用表达ABCB1的细胞测定各种双特异性抗体与CD47的结合的结果。N.D.＝未确定。
图19展示了根据本公开文本的某些实施方案的各种双特异性抗体形式。
图20展示了具有scFv-Fab-Fc形式的抗MDR1和抗CD47双特异性抗体。
图21示出了KT14.5F9hu scFv-B1.28.hu13和KT14.B6H12hu scFv-B1.28.hu13抗体与C6细胞表面上表达的人CD47和人MDR1二者结合。
图22示出了KT14.5F9hu scFv-B1.261.hu1和KT14.B6H12hu scFv-B1.261.hu1抗体与C6细胞表面上表达的人CD47和人MDR1二者结合。
图23A-图23C示出了当单独施用或与紫杉醇共同施用时，本公开文本的抗MDR1和抗CD47双特异性抗体对MES-SA-DX5异种移植模型中的肿瘤体积的影响。
图24列出了以双特异性抗体形式测试的抗MDR1重链、抗HER2重链、和抗MDR1共同轻链的各种组合，以鉴定与两种抗原均结合的组合。
图25列出了以双特异性抗体形式测试的抗MDR1重链、抗PDL1重链、和抗MDR1共同轻链的各种组合，以鉴定与两种抗原均结合的组合。
定义
术语“抗体”和“免疫球蛋白”包括任何同种型的抗体或免疫球蛋白、保留与抗原的特异性结合的抗体片段(包括但不限于Fab、Fv、scFv、Fd、Fab’、Fv、F(ab’)2)、嵌合抗体、人源化抗体、单克隆抗体、单链抗体(包括仅包含重链的抗体(例如VHH骆驼抗体))、双特异性抗体以及包含抗体的抗原结合部分和非抗体蛋白的融合蛋白。免疫球蛋白可以根据其重链的恒定结构域的氨基酸序列而分配至不同类别。存在五个主要免疫球蛋白类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些类别中的若干可以进一步分成亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。术语“抗体”和“免疫球蛋白”具体包括而不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4抗体。抗体可以被可检测地标记，例如用放射性同位素、产生可检测产物的酶、荧光蛋白等标记。抗体可以进一步与其他部分缀合，所述其他部分如特异性结合对的成员，例如生物素(生物素-亲和素特异性结合对的成员)等。抗体还可以与固体支持物(包括但不限于聚苯乙烯板或珠等)结合。抗体可以是单价或二价的。抗体可以与毒性部分，如化学治疗剂缀合。
“抗体片段”包含完整抗体的一部分，例如完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双抗体；线性抗体(Zapata等人,ProteinEng.8(10):1057-1062(1995))；单链抗体分子，包括仅包含重链的抗体(例如VHH骆驼抗体)；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。抗体的木瓜蛋白酶消化产生两个称为“Fab”片段的相同抗原结合片段(每个片段具有单个抗原结合位点)和残留的“Fc”片段(这一名称反映了容易结晶的能力)。胃蛋白酶处理产生F(ab')2片段，其具有两个抗原结合位点并且仍能够使抗原交联。
“Fv”是含有完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。此区域由紧密非共价缔合的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体组成。在此构型中，每个可变结构域的三个CDR相互作用以将抗原结合位点限定在VH-VL二聚体的表面上。这六个CDR共同为抗体赋予抗原结合特异性。然而，即使单个可变结构域(或仅包含对抗原具有特异性的三个CDR的Fv的一半)也具有识别和结合抗原的能力，但其亲和力低于包含每个可变结构域的三个CDR的整个结合位点。
“Fab”片段也含有轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(CH1)。Fab片段与Fab'片段的不同之处在于在重链CH1结构域的羧基末端处添加几个残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是本文中Fab'的名称，其中恒定结构域的一个或多个半胱氨酸残基带有游离巯基。F(ab')2抗体片段最初是作为Fab'片段对产生的，它们之间具有铰链半胱氨酸。抗体片段的其他化学偶联也是已知的。
来自任何脊椎动物物种的抗体(免疫球蛋白)的“轻链”可以基于其恒定结构域的氨基酸序列而分配至两种明显不同类型(称为κ和λ)之一。
“单链Fv”、“sFv”或“scFv”抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单条多肽链中。在一些实施方案中，Fv多肽进一步在VH结构域与VL结构域之间包含使得sFv能够形成抗原结合所需的结构的多肽接头。关于sFv的综述，参见The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies中的Pluckthun,第113卷,Rosenburg和Moore编著,Springer-Verlag,New York,第269-315页(1994)。
术语“双抗体”是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，所述片段包含在同一多肽链中连接至轻链可变结构域(VL)的重链可变结构域(VH)(VH-VL)。通过使用过短而不允许在同一条链上的两个结构域之间配对的接头，迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。双抗体更全面地描述于例如EP 404,097；WO 93/11161；和Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)中。
各种非传统抗体构型示于图19中。
如本文所用，术语“亲和力”是指两种药剂的可逆结合的平衡常数，并且表示为解离常数(Kd)。与抗体对不相关的氨基酸序列的亲和力相比，亲和力可以大至少1倍、大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少20倍、大至少30倍、大至少40倍、大至少50倍、大至少60倍、大至少70倍、大至少80倍、大至少90倍、大至少100倍或大至少1000倍或更大。抗体对靶蛋白的亲和力可以是例如约100纳摩尔(nM)至约0.1nM、约100nM至约1皮摩尔(pM)或约100nM至约1飞摩尔(fM)或更高。如本文所用，术语“亲合力”是指在稀释之后，两种或更多种药剂的复合物对解离的抗性。关于抗体和/或抗原结合片段，术语“免疫反应性”和“优先结合”在本文中可互换地使用。
术语“结合”是指归因于例如共价、静电、疏水性和离子和/或氢键相互作用(包括诸如盐桥和水桥等相互作用)的在两个分子之间的直接缔合。MDR1特异性抗体与MDR1多肽内的表位特异性结合。在某些实施方案中，抗MDR1抗体不与不表达MDR1的细胞结合，或以显著较低的亲和力与不表达MDR1的细胞结合。表位可以是由氨基酸的连续延伸段形成的线性表位或由氨基酸的非连续延伸段形成的非线性表位或构象表位。非特异性结合将指代亲和力小于约10-7M的结合，例如亲和力为10-6M、10-5M、10-4M等的结合。
如本文所用，术语“CDR”或“互补决定区”旨在意指在重链多肽和轻链多肽二者的可变区内发现的非连续抗原结合位点。CDR是高变区，并且其间穿插有更保守的区域，称为“框架区(FR)”。CDR已由Kabat等人,J.Biol.Chem.252:6609-6616(1977)；Kabat等人,U.S.Dept.of Health and人Services,“Sequences of proteins of immunologicalinterest”(1991)；Chothia等人,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)；和MacCallum等人,J.Mol.Biol.262:732-745(1996)描述，其中定义包括相互比较时氨基酸残基的重叠或子集。然而，应用任一定义来指代抗体或移植的抗体或其变体的CDR旨在处于如本文所定义和使用的术语的范围内。包括如通过每个以上引用的参考文献所定义的CDR的氨基酸残基在下表1中列出作为比较。
表1：CDR定义
Kabat<sup>1</sup> Chothia<sup>2</sup> MacCallum<sup>3</sup>
V<sub>H</sub> CDR1 31-35 26-32 30-35
V<sub>H</sub> CDR2 50-65 53-55 47-58
V<sub>H</sub> CDR3 95-102 96-101 93-101
V<sub>L</sub> CDR1 24-34 26-32 30-36
V<sub>L</sub> CDR2 50-56 50-52 46-55
V<sub>L</sub> CDR3 89-97 91-96 89-96
1残基编号遵循Kabat等人(同上)的命名法
2残基编号遵循Chothia等人(同上)的命名法
3残基编号遵循MacCallum等人(同上)的命名法
如本文所用，术语“框架”在关于抗体可变区使用时旨在意指抗体可变区内CDR区外的所有氨基酸残基。可变区框架通常是长度在约100-120个氨基酸之间的不连续氨基酸序列，但旨在仅指CDR外的那些氨基酸。如本文所用，术语“框架区”旨在意指由CDR分隔的框架的每个结构域。VH链可以包含按以下顺序从N末端到C末端排列的三个CDR和四个FR：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。类似地，VL链可以包含按以下顺序从N末端到C末端排列的三个CDR和四个FR：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
如本文所用，术语抗体包括两条重链和两条轻链的四聚体，其中重链和轻链通过例如二硫键互相连接。重链恒定区由三个结构域即CH1、CH2和CH3构成。轻链恒定区由一个结构域即CL构成。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合区。抗体的恒定区通常介导抗体与宿主组织和因子的结合，所述宿主组织和因子包括免疫系统的各种细胞和补体系统的第一组分。术语“抗体”包括类型IgA、IgG、IgE、IgD、IgM及其亚型的免疫球蛋白。在一些实施方案中，主题抗体是IgG同种型，例如IgG1。
如本文所用，术语“免疫球蛋白”是指包括基本上由免疫球蛋白基因编码的一种或多种多肽在内的蛋白质。公认的人免疫球蛋白基因包括κ、λ、α(IgA1和IgA2)、γ(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、δ、ε和μ恒定区基因；以及许多免疫球蛋白可变区基因。全长免疫球蛋白轻链(约25kD或214个氨基酸)由N末端的可变区基因(约110个氨基酸)和C末端的κ或λ恒定区编码。全长免疫球蛋白重链(约50kD或446个氨基酸)由N末端的可变区基因(约116个氨基酸)和C末端的其他上述恒定区基因之一例如γ(编码约330个氨基酸)编码。在一些实施方案中，主题抗体包含全长免疫球蛋白重链和全长免疫球蛋白轻链。
术语“抗原结合片段”是指全长抗体的能够与抗原特异性结合的一个或多个片段。结合片段的例子包括(i)Fab片段(包含VL、VH、CL和CH1结构域例如由其组成的单价片段)；(ii)F(ab')2片段(包含通过铰链区处的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段)；(iii)Fd片段(包含VH和CH1结构域，例如由其组成)；(iv)Fv片段(包含抗体单臂的VH和VL结构域，例如由其组成)；(v)dAb片段(包含VH结构域，例如由其组成)；(vi)分离的CDR；(vii)单链Fv(scFv)(包含使用使得VH和VL结构域配对形成单价分子的重组手段通过合成接头而连接的抗体单臂的VH和VL结构域，例如由其组成)；(viii)双抗体(包含两个scFv，例如由其组成，其中VH和VL结构域连接使得它们未配对形成单价分子；scFv的每一个的VH与另一个scFv的VL结构域配对形成二价分子)。
术语“嵌合”抗体是指重链和/或轻链的一部分源自特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分源自不同来源或物种的抗体。
“人抗体”是具有与由人或人细胞产生的或者源自利用人抗体库或其他人抗体编码序列的非人来源的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的这种定义特别排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。
“人共有框架”是代表在人免疫球蛋白可变轻链(VL)或可变重链(VH)框架序列的选择中最常出现的氨基酸残基的框架(FR)。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择是从可变结构域序列的亚组进行。通常，序列的亚组是如在Kabat等人,Sequences of Proteinsof Immunological Interest,第五版,NIH Publication 91-3242,Bethesda Md.(1991),第1-3卷中所述的亚组。在一个实施方案中，对于VL，所述亚组是如在Kabat等人(同上)中的亚组κI。在一个实施方案中，对于VH，所述亚组是如在Kabat等人(同上)中的亚组III。
“人源化”抗体是指包含来自非人CDR的氨基酸残基和来自人框架(FR)的氨基酸残基的嵌合抗体。人源化抗体恒定区的至少一部分源自人抗体，例如人IgG1抗体。在优选的实施方案中，本文公开的抗体分子包含含有如本文提供的可变重链区和具有UniProt:P01857-1第1版所示的氨基酸序列的人IgG1恒定区的重链。在优选的实施方案中，本文公开的抗体分子包含含有如本文提供的可变轻链区和人轻链恒定区的轻链。在优选的实施方案中，所述人轻链恒定区是具有UniProtKB/Swiss-Prot:P01834.2中所示的氨基酸的人κ轻链恒定区。在某些方面，存在于主题抗体中的人IgG1重链恒定区可以包含突变，例如用于调节Fc功能的取代。例如，可以引入LALAPG效应子功能突变(L234A、L235A和P329G)或N297A突变以降低抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。取代的编号基于EU编号系统。当提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时，通常使用“EU编号系统”或“EU索引”(例如，Kabat等人,Sequences ofProteins of Immunological Interest,第5版Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,MD.(1991)中报道的EU索引)。“如在Kabat中的EU索引”是指人IgG 1EU抗体的残基编号。
抗体(例如，非人抗体)的“人源化形式”是指已经经历人源化的抗体。
术语“表位”是指由免疫系统，例如由抗体、B细胞或T细胞识别的抗原区域。例如，表位是抗体结合的特定抗原区域。所述术语具体包括线性(连续)表位和非线性(构象或不连续)表位。
“分离的”抗体是已鉴定出并且与其天然环境的组分分离和/或从其天然环境的组分回收的抗体。其天然环境的污染物组分是会干扰抗体的诊断或治疗用途的材料，并且可以包括酶、激素和其他蛋白质或非蛋白质溶质。在一些实施方案中，抗体将被纯化(1)至如通过Lowry方法测定的按重量计大于90％、大于95％或大于98％，例如按重量计大于99％的抗体；(2)至通过使用旋杯式测序仪足以获得N末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度；或(3)至在还原或非还原条件下使用考马斯蓝或银染试剂通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测得的同质性。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为抗体的天然环境的至少一种组分将不存在。在一些情况下，将通过至少一个纯化步骤来制备分离的抗体。
术语“MDR1”和“ABCB1”在本文中可互换使用，是指天然序列多药耐药性细胞外排泵蛋白，包括人MDR1及其天然存在的变体，如等位基因变体。
如本文所用的术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或导致细胞死亡或破坏的物质。“化学治疗剂”(也称为“抗肿瘤剂”)可以是用于治疗癌症或其他疾病或障碍的细胞毒性剂。
如本文所用，术语“治疗”(“treatment”、“treating”)等是指获得所需的药理和/或生理作用。所述作用就完全或部分预防疾病或其症状而言可以是预防性的和/或就部分或完全治愈疾病和/或可归因于所述疾病的不利影响而言可以是治疗性的。如本文所用，“治疗”涵盖哺乳动物包括人的疾病的任何治疗，并且包括：(a)预防疾病在可能易患疾病但尚未诊断为患有所述疾病的受试者中发生；(b)抑制疾病，即遏止其发展；以及(c)缓解疾病，即导致疾病消退。
术语“个体”、“受试者”、“宿主”和“患者”在本文中可互换地使用，是指哺乳动物，包括但不限于鼠(大鼠、小鼠)、非人灵长类动物、人、犬科动物、猫科动物、有蹄类动物(例如，马、牛、绵羊、猪、山羊)等。
“治疗有效量”或“有效量”是指当施用至哺乳动物或其他受试者以用于治疗疾病时足以影响对于疾病的这种治疗的靶标特异性抗体的量。“治疗有效量”将根据抗体、疾病及其严重性和待治疗的受试者的年龄、体重等而变化。
本文使用的术语“难治性”是指对治疗无反应的疾病或病症。关于癌症，如本文所用的“难治性癌症”是指对治疗无反应的癌症。难治性癌症可能在治疗开始时具有耐药性，或者可能在治疗期间变得具有耐药性。难治性癌症也可以称为耐药性癌症。
“生物样品”包括从个体获得的各种样品类型，并且可以用于诊断或监测测定。所述定义包括生物来源的血液和其他液体样品、固体组织样品(如活检标本)或组织培养物或由组织培养物得到的细胞及其后代。所述定义还包括在采购后以任何方式进行操作的样品，如通过用试剂处理、增溶或富集某些组分(如多核苷酸)进行操作。术语“生物样品”包括临床样品，并且还包括培养中的细胞、细胞上清液、细胞裂解物、血清、血浆、生物流体和组织样品。
一对序列之间的同一性百分比可以通过以下方法来计算：所述序列对中的匹配数量乘以100并除以比对区域(包括空位)的长度。同一性评分仅计数完美匹配，而不考虑氨基酸之间的相似性程度。在长度中仅包括内部空位，而不包括序列末端的空位。同一性百分比＝(匹配x 100)/比对区域(具有空位)的长度
短语“保守氨基酸取代”是指在以下组内的氨基酸残基的取代：1)L、I、M、V、F；2)R、K；3)F、Y、H、W、R；4)G、A、T、S；5)Q、N；以及6)D、E。保守氨基酸取代可以通过将蛋白质中的一个或多个氨基酸用具有相似的酸度、碱度、电荷、极性或侧链大小的侧链的氨基酸替代来保持蛋白质的活性。
术语“载体”意指用于将蛋白质编码信息转移至宿主细胞中的任何分子或实体(例如，核酸、质粒、噬菌体或病毒)。
术语“表达载体”或“表达构建体”是指适合于宿主细胞转化并且含有如下核酸序列的载体，所述核酸序列指导和/或控制(与宿主细胞结合)与其操作性地连接的一个或多个异源编码区的表达。表达构建体可以包含但不限于如下序列，所述序列影响或控制转录、翻译以及(如果存在内含子的话)影响与其可操作地连接的编码区的RNA剪接。
术语“刺激”是指通过刺激分子(例如，TCR/CD3复合物或CAR)与其同源配体(或在CAR的情况下为肿瘤抗原)的结合从而介导信号转导事件(如但不限于经由TCR/CD3复合物的信号转导或经由适当的NK受体或CAR的信号传导结构域的信号转导)而诱导的初级反应。刺激可以介导某些分子表达的改变。
术语“刺激分子”是指由免疫细胞(例如，T细胞、NK细胞、B细胞)表达的分子，所述分子提供一个或多个胞质信号传导序列，其针对免疫细胞信号传导途径的至少某个方面以刺激方式调节免疫细胞的激活。在一个方面，所述信号是初级信号，其通过例如TCR/CD3复合物与装载肽的MHC分子的结合而启动，并且其导致介导T细胞应答，包括但不限于增殖、激活、分化等。以刺激方式起作用的初级胞质信号传导序列(也称为“初级信号传导结构域”)可以含有信号传导基序，其被称为免疫受体酪氨酸激活基序或ITAM。在本发明中具有特定用途的含有ITAM的胞质信号序列的例子包括但不限于源自CD3ζ、共同的FcRγ(FCER1G)、FcγRIIa、FcRβ(FcεR1b)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD79a、CD79b、DAP10和DAP12的那些。
术语“共刺激分子”是指T细胞上的同源结合配偶体，其与共刺激配体特异性结合，从而介导T细胞的共刺激应答，如但不限于增殖。共刺激分子是有助于高效免疫应答的除抗原受体或其配体以外的细胞表面分子。共刺激分子包括但不限于MHC I类分子、BTLA和Toll配体受体以及OX40、CD27、CD28、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)和4-1BB(CD137)。
术语“自体的”是指源自同一个体的任何材料，之后要将所述材料重新引入所述个体体内。
如本文所用的术语“细胞内信号传导结构域”是指分子的细胞内部分。细胞内信号传导结构域产生促进含有CAR的细胞(例如，CAR-T细胞)的免疫效应子功能的信号。例如在CAR-T细胞中的免疫效应子功能的例子包括溶细胞活性和辅助活性，包括细胞因子的分泌。
如本文所用的术语“免疫效应细胞”是指参与免疫应答，例如参与促进免疫效应子应答的细胞。免疫效应细胞的例子包括T细胞(例如，α/βT细胞和γ/δT细胞)、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、肥大细胞和髓源性吞噬细胞。
对于取代、插入或缺失的指导可以基于来自不同物种的蛋白质的氨基酸序列的比对，或者来自基于具有相同或相似功能的多种蛋白质的共有序列。
具体实施方式
提供了靶向细胞外排泵MDR1的抗体。还提供了包括或编码此类抗体的药物组合物、核酸、重组表达载体、细胞和试剂盒。还公开了使用所述抗体检测细胞例如肿瘤细胞中的MDR1表达的存在或不存在、MDR1表达水平和/或抑制MDR1功能的方法。此外，提供了与MDR1和TAA结合的多特异性抗体。还提供了用于治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用如本文公开的抗MDR1抗体或靶向MDR1和肿瘤相关抗原二者的多特异性抗体。
在更详细地描述本发明之前，应理解本发明不限于所描述的特定实施方案，因为此类实施方案当然可以变化。还应理解本文所用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并不旨在是限制性的，因为本发明的范围将仅受所随附权利要求的限制。
在提供值范围的情况下，应理解除非上下文另有明确规定，否则在该范围的上限值与下限值之间的每个中间值(至下限值的单位的十分之一)以及所陈述的范围内的任何其他所陈述的或中间值包括在本发明内。这些更小范围的上限值和下限值可以独立地被包括在更小范围内，并且也被涵盖在本发明内，服从于在所陈述的范围内任何确切排除的限值。在所陈述的范围包括一个或两个限值的情况下，排除了那些被包括的任一个或两个限值的范围也被包括在本发明中。
某些范围在本文中通过前面带有术语“约”的数值呈现。在本文中使用术语“约”是为了对其后的精确数值以及接近或近似于所述术语后的数值提供文字支持。在确定数字是否接近或近似于具体列举的数字时，接近或近似的未列举的数字可以是在呈现它的上下文中提供具体列举的数字的基本等效形式的数字。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科技术语均具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。尽管在本发明的实践或测试中也可以使用与本文所述的方法和材料类似或等效的任何方法和材料，但现在描述代表性的说明性方法和材料。
将在本说明书中引用的所有出版物和专利均通过引用并入本文，就好像每个单独的出版物或专利被具体且单独地指出通过引用并入本文，并且通过引用并入本文以公开和描述出版物所引用的相关的方法和/或材料。对任何出版物的引用是针对其在申请日之前的公开，并且不应当被解释为承认本发明不能获得比这种出版物更早的申请日。另外，所提供的出版物的日期可能不同于实际出版日期，实际出版日期可能需要独立确认。
应注意，除非上下文另有明确规定，否则如在本文以及在所附权利要求中所用的，单数形式“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”以及“所述(the)”包括复数指示物。还应注意，可以起草权利要求以排除任何任选要素。因此，本声明旨在充当结合权利要求要素的叙述使用的诸如“唯一地”、“仅”等排他性术语或使用“否定型”限制的先行基础。
在阅读本公开文本之后，如对于本领域技术人员应清楚的是，本文描述和说明的单独实施方案中的每个实施方案具有不连续的组成部分和特征，所述组成部分和特征可以在不偏离本发明的范围或精神的情况下容易地与任何其他若干实施方案的特征分离或组合。可以按所叙述的事件的顺序或按逻辑上可能的任何其他顺序来执行所叙述的任何方法。
虽然已经或将会为了语法流畅性而用功能性解释描述所述方法和组合物，但应明确地理解，除非根据35 U.S.C.§112(f)明确地制定，否则权利要求不应被解释为通过构建“手段”或“步骤”限制以任何方式进行必然限制，而应被赋予权利要求所提供的定义的含义和在等同物的司法原则下的等同物的全部范围，并且在根据35 U.S.C.§112(f)明确地制定权利要求的情况下，权利要求应被赋予根据35 U.S.C.§112(f)的全部法定等同物。
抗体
如上所总结，本公开文本提供了结合细胞外排泵MDR1(也称为P-糖蛋白1(Pgp)或ABCB1)的抗体。
MDR1也称为P-糖蛋白1(Pgp)或ABCB1，其是由ATP结合盒亚家族B成员1(ABCB1)基因表达的负责减少多药耐药性细胞中的药物积累的能量依赖性外排泵。抗MDR1抗体在本文中也称为抗Pgp、抗ABCB1或抗B1抗体。
在一些方面，本文公开的抗体与包含MDR1的细胞外结构域上的一个或多个位点的表位结合。在某些方面，本公开文本的抗MDR1抗体与人MDR1结合。在某些方面，本公开文本的抗MDR1抗体与人细胞的细胞表面上表达的人MDR1结合。在某些方面，本文公开的抗体与包含人MDR1的细胞外结构域(ECD)上的一个或多个位点的表位结合，其中所述ECD可以包括序列：
MMLVFGEMTDIFANAGNLEDLMSNITNRSDINDTGFFMNLEEDMTRYAY(SEQ ID NO:1)，所述序列对应于具有登录号NP_000918的人MDR1序列的氨基酸残基68-116。在某些方面，本文公开的抗体与包含人MDR1的细胞外结构域(ECD)上的一个或多个位点的表位结合，其中所述ECD可以包括序列TRGWKL(SEQ ID NO:2)，所述序列对应于具有登录号NP_000918的人MDR1序列的氨基酸残基209-215。在某些方面，本文公开的抗体与包含人MDR1的细胞外结构域(ECD)上的一个或多个位点的表位结合，其中所述ECD可以包括序列GTTLVLSGEYSIGQ(SEQ ID NO:3)，所述序列对应于具有登录号NP_000918的人MDR1序列的氨基酸残基317-330。在某些方面，本文公开的抗体与包含人MDR1的细胞外结构域(ECD)上的一个或多个位点的表位结合，其中ECD可以包括序列SKIIGVFTRIDDPETKRQNSNLFS(SEQ ID NO:4)，所述序列对应于具有登录号NP_000918的人MDR1序列的氨基酸残基733-756。在某些方面，本文公开的抗体与包含人MDR1的细胞外结构域(ECD)上的一个或多个位点的表位结合，其中ECD可以包括序列RFGAYLVAHKLMSFED(SEQ ID NO:5)，所述序列对应于具有登录号NP_000918的人MDR1序列的氨基酸残基958-973。
本公开文本的抗MDR1抗体可以具有以下特性中的一种或多种：
i)抑制由MDR1的外排；
ii)增加癌细胞对用化学治疗剂治疗的敏感性，从而将化学治疗剂的IC50降低至少5、10、50或100倍；
iii)与人MDR1和食蟹猴MDR1结合；
iv)不与CD47交叉反应；
v)在体外细胞杀伤测定中有效；
vi)即使在不存在化学疗法的情况下也能有效抑制肿瘤生长；
vii)优先结合受限于开放构型的MDR1突变体；
viii)优先结合受限于封闭构型的MDR1突变体；并且
ix)优先结合人MDR1的细胞外环1外的区域或结合人MDR1的细胞外环1和细胞外环4。
在某些方面，除了具有上文列出的一种或多种特性i)-ix)之外，本公开文本的抗体可以具有100nM或更低，例如100nM-4nM、80nM-4nM、60nM-4nM、40nM-4nM、30nM-4nM、20nM-4nM、15nM-4nM或10nM-4nM的EC50。在某些方面，除了具有上文列出的一种或多种特性i)-ix)之外，本公开文本的抗体的EC50可以为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半。
测试抗体的EC50可以通过流式细胞术或ELISA来测定。例如，流式细胞术可以涉及使表达MDR1(例如人野生型MDR1或突变型MDR1)的细胞与流式细胞术缓冲液中的抗体(其中抗体被连续稀释)接触，以及在室温或4℃下孵育足以使抗体与细胞结合的时间段(例如10min-1h)。孵育后，可以任选地洗涤细胞以去除非特异性结合的抗体和/或可以使细胞与特异性结合至所述测试抗体的荧光标记的二抗接触。孵育后，可以去除荧光标记的二抗并洗涤细胞。可以通过流式细胞术对洗涤的细胞进行分选，并且计数与荧光标记的二抗结合的细胞的数量。提供半最大反应(例如，最大荧光强度的一半)的浓度被测量为EC50。在流式细胞术测定的变型中，细胞可以是过表达MDR1的293T细胞。
测试抗体的IC50可以通过测量细胞生长的抑制来确定。IC50可以通过单独使用测试抗体来测量，以确定产生半最大反应的抗体浓度。可以在不存在和存在测试抗体的情况下测量化学治疗剂的IC50，以确定抗体对化学治疗剂IC50的影响。化学治疗剂可以是长春新碱。细胞可以是癌细胞系。癌细胞系可以是N6/ADR，其为多柔比星选择的人急性成淋巴细胞性白血病(ALL)细胞系NALM6的B1阳性变体。N6/ADR细胞也称为NALM6/ADR细胞。如果确定抗体的IC50，则可以使细胞单独与抗体接触，其中以连续稀释度测试所述抗体。可以使细胞与抗体和化学治疗剂接触以确定抗体对药剂的IC50的影响，其中以连续稀释度测试所述药剂。可以将细胞在37℃下孵育一段时间(例如24h-84h)，并且使用标准试剂和方法评估细胞活力。本文公开的抗体可以增加癌细胞对用化学治疗剂治疗的敏感性，从而将化学治疗剂的IC50降低至少5倍。所述癌细胞可以是N6/ADR。化学治疗剂可以是长春新碱。在某些方面，本公开文本的抗体可以将长春新碱抑制N6/ADR癌细胞生长的IC50降低5倍或更多，例如6倍或更多、7倍或更多、8倍或更多、9倍或更多、或10倍或更多，例如，5至50倍或更多，例如，至少60、70、80、90或100倍。抗MDR1抗体B1-207、B1-223、KB1-225、KB1.116、KB1.80、KB1.261和KB1.263将长春新碱抑制N6/ADR癌细胞生长的IC50降低至少400倍，即从4118pM降低至10.3pM或更低。参见图4A-图4D和表7。
在某些方面，所述抗MDR1抗体与人MDR-1和食蟹猴MDR-1二者结合。此特性可用于确定抗体在动物模型中的安全性。
在某些方面，本文公开的抗MDR1抗体对MDR1具有特异性并且不显示与其他抗原的显著结合。例如，与抗MDR1抗体15D3相比，本文公开的抗体不与肿瘤相关抗原CD47交叉反应。
在某些方面，本文公开的抗体的抗MDR1体外细胞杀伤活性可能优于对于15D3、MRK16、MM4和/或UIC2所观察到的体外细胞杀伤活性。例如，本文公开的抗体的体外细胞杀伤活性可以为15D3、MRK16、MM4和/或UIC2的体外细胞杀伤活性的两倍或更多。
在某些方面，本文提供的抗体优先结合受限于开放构型的MDR1突变体。MDR1突变体可以是包含取代E556Q和E1201Q的人MDR1或食蟹猴MDR1，其中氨基酸位置的编号参考人MDR1。此类抗体可以以如与野生型MDR1或受限于封闭构型的MDR1突变体相比至少两倍(例如，2X、3X、4X、5X、6X、7X、8X、9X、10X或更高)的亲和力与受限于开放构型的MDR1突变体结合。
在某些方面，本文提供的抗体优先结合受限于封闭构型的MDR1突变体。所述MDR1突变体可以是包含以下取代的人MDR1或食蟹猴MDR1：(i)K433M、S434A、K1076M、S1077A；(ii)K433M、S434A、Q475A、K1076M、S1077A、Q1118A；和/或(iii)K433M、S434A、Q475A、R588E、K1076M、S1077A、Q1118A、R1233E，其中氨基酸位置的编号参考人MDR1。此类抗体可以以如与野生型MDR1或受限于开放构型的MDR1突变体相比至少两倍(例如，3X、4X、5X、6X、7X、8X、9X、10X或更高)的亲和力与受限于封闭构型的MDR1突变体结合。
在某些方面，本文提供的抗体优先结合在ECD的环1中包含缺失的MDR1突变体。缺失可以包括氨基酸残基82-99或79-102的缺失，其中氨基酸位置的编号参考人MDR1。此类抗体可以以如与野生型MDR1或受限于开放或封闭构型的MDR1突变体相比至少两倍(例如，3X、4X、5X、6X、7X、8X、9X、10X或更高)的亲和力与在环1中包含缺失的MDR1突变体结合。
在某些方面，本文提供的抗体与包含人MDR1的细胞外环1和细胞外环4的表位结合。此类抗体的例子包括这样的抗体，所述抗体包含如表2中所列抗MDR1抗体B1.228B、B1.198、B1.223、B1.219、B1.184、B1.207、B1.201、B1.129、B1.273或B1.236的含有HCDR1-3的VH链和含有LCDR1-3的VL链。
在某些方面，本文提供的抗体是单特异性二价抗MDR1抗体。在某些方面，本公开文本的单特异性二价抗MDR1抗体不包括存在于抗MDR1抗体15D3、MRK16、MM4和UIC2中的HCDR1-3和LCDR1-3中的至少一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、十一种或全部十二种。
在某些方面，本公开文本的抗体与分别包含以下的抗体竞争结合MDR1：表2中所列抗体的可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区对的重链互补决定区(HCDR)和轻链CDR(LCDR)。例如，在一方面，本公开文本的抗MDR1抗体与表2中所列的B1.201抗体竞争结合MDR1。
在某些方面，所述抗体包含表2中所列抗体的VH区的HCDR1、HCDR2和HCDR3。在某些方面，HCDR1、HCDR2和HCDR3是按照Kabat命名法定义的。例如，在一方面，本公开文本的与表2中所列的B1.27抗体竞争结合MDR1的抗MDR1抗体包含B1.27抗体的VH区的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
可以采用任何合适的方法来确定第一抗体是否与第二抗体竞争结合MDR1。第一抗体是否与第二抗体“竞争”结合化合物可以使用本领域已知的竞争结合测定容易地确定。例如，可以经由抗体竞争测定来鉴定竞争性抗体。例如，第一抗体的样品可以与固体支持物结合。然后，添加怀疑能够与这种第一抗体竞争的第二抗体的样品。两种抗体中的一种被标记。如果标记的抗体和未标记的抗体与化合物上分开且离散的位点结合，则标记的抗体将以相同的水平结合，无论是否存在可疑的竞争性抗体。然而，如果相互作用的位点相同或重叠，则未标记的抗体将竞争，并且与抗原结合的标记的抗体的量将降低。如果未标记的抗体以过量存在，则非常少(如果有的话)的标记的抗体将结合。
出于本公开文本的目的，竞争性抗体是使抗体与化合物的结合降低约30％或更多、约40％或更多、约50％或更多、约60％或更多、约70％或更多、约80％或更多、约85％或更多、约90％或更多、约95％或更多、或约99％或更多的那些。进行此类竞争测定的程序的细节是本领域中熟知的，并且可以例如在Harlow和Lane,Antibodies,A LaboratoryManual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,冷泉港,纽约,1988,567-569,1988,ISBN0-87969-314-2中找到。此类测定可以通过使用纯化的抗体进行定量。标准曲线可以通过对一种抗体针对其自身进行滴定，即将相同的抗体用于标记和竞争者二者来建立。可以滴定未标记的竞争性抗体抑制标记的抗体与靶表位结合的能力。可以将结果进行绘图，并且可以将实现期望的结合抑制程度所需的浓度进行比较。
在某些方面，结合多药耐药蛋白1(MDR1)的抗体分子包含(i)表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的HCDR1-3和轻链CDR(LCDR1-3)；(ii)表2中所列抗体的VH区的HCDR1-3；或(iii)表2中所列抗体的VH区的LCDR1-3。HCDR和LCDR可以基于Kabat命名法定义。
术语“抗体分子”包括如本文定义的抗体，并且包括其抗原结合片段。在某些方面，所述抗体分子包含两条可变轻(VL)链和两条可变重(VH)链。在某些方面，所述抗体分子还包含重链恒定区和轻链恒定区。所述重链恒定区和轻链恒定区可以来自人抗体，例如人IgG1抗体。人IgG1重链(HC)恒定区可以被修饰以包含降低抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的突变。另外地或可替代地，所述两条VH链可以各自与不同的人IgG1 HC恒定区缀合，其中所述单独的人IgG1 HC恒定区具有有利于在不同的人IgG1 HC恒定区之间形成二聚体的取代。在本文中进一步详细描述了此类HC区。在某些方面，在所述抗体分子是双特异性抗体分子的情况下，人IgG1 HC恒定区中的一个可以包含取代以引入具有带正电的侧链的一个或多个氨基酸，并且另一个人IgG1 HC恒定区可以包含取代以引入具有带负电的侧链的一个或多个氨基酸，从而有利于在两个不同的HC之间形成二聚体。
在某些方面，所述抗体分子包含表2中所列抗体的一对VH区和VL区的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-27抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-28抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-30抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-39抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-85抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-99抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-178抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-179抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-184抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-188抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-193b抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-197抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-198抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-201抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-207抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体分子包含表2中所列的B1-223抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。
在某些方面，所述抗体包含表2中所列抗体的一对VH区和VL区的HCDR1-3和/或LCDR1-3，并且将化学治疗剂的IC50降低5倍或更多、6倍或更多、7倍或更多、8倍或更多、9倍或更多、或10倍或更多，例如降低5至50倍或更多，例如降低至少60、70、80、90、或100倍。抗MDR1抗体B1-207、B1-223、KB1-225、KB1.116、KB1.80、KB1.261和KB1.263将长春新碱抑制N6/ADR癌细胞生长的IC50降低至少400倍，即从4118pM降低至10.3pM或更低。参见图4A-图4D和表7。
EC50可以是产生50％最大反应(例如，所述反应是抗体与其抗原的结合)的抗体浓度。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-27抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-28抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-30抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-39抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-85抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-99抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-178抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-179抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-184抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-188抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-193b抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-197抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-198抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-201抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-207抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在一方面，所述抗体具有100nM或更低的EC50和/或为诸如15D3、MRK16、MM4和/或UIC2等抗MDR1抗体的EC50的至少一半的EC50，并且包含表2中所列的B1-223抗体的HCDR1-3和/或LCDR1-3。在某些方面，本公开文本的抗体具有4-10nM的EC50，如使用表达人MDR1的293T细胞系的FACS测量的。在某些方面，本公开文本的具有如使用表达人MDR1的293T细胞系的FACS测量的4-10nM EC50的抗体包含表2中所列的B1-28抗体、B1-184抗体、B1-197抗体、B1-201抗体、B1-207抗体、B1-223抗体、B1-85抗体或B1-30抗体的HCDR1-3和LCDR1-3。参见例如，图3D。
在一些实施方案中，主题抗体当与表达MDR1的细胞结合时，可以阻止细胞MDR1蛋白起作用。因此，本公开文本的抗体可以抑制通过所述MDR1蛋白的外排，包括例如其中与在不存在主题抗体的情况下通过MDR1的外排相比，外排降低5％或更多，包括例如10％或更多、15％或更多、20％或更多、25％或更多、30％或更多、40％或更多、50％或更多、60％或更多、70％或更多、80％或更多或者90％或更多。在一些实施方案中，主题抗体当与表达MDR1的细胞结合时，可以以其他方式通过其他机制阻碍MDR1的作用，例如，使MDR1渗漏，这进而可增强化学治疗剂的摄取和/或降低细胞的活力。
在某些实施方案中，本公开文本的抗体包含含有B1-28抗体的HCDR1-3的VH链和含有B1-28抗体的LCDR1-3的VL链。
在某些实施方案中，本公开文本的抗体包含含有B1-261抗体的HCDR1-3的VH链和含有B1-261抗体的LCDR1-3的VL链。
在某些实施方案中，本公开文本的抗体结合人ABCB1和食蟹猴ABCB1二者。此类抗体可以包含含有B1-28抗体的HCDR1-3的VH链和含有B1-28抗体的LCDR1-3的VL链或含有B1-261抗体的HCDR1-3的VH链和含有B1-261抗体的LCDR1-3的VL链。在某些实施方案中，所述抗体可以包含B1-28抗体的VH链和B1-28抗体的VL链或B1-261抗体的VH链和B1-261抗体的VL链。
在某些实施方案中，本公开文本的抗体包含含有B1-129抗体的HCDR1-3的VH链和含有B1-129抗体的LCDR1-3的VL链。
在某些实施方案中，本公开文本的抗体与ABCB1的ECD中的环1结合。在某些实施方案中，所述抗体可以包含含有B1-129抗体的HCDR1-3的VH链和含有B1-129抗体的LCDR1-3的VL链。在某些实施方案中，所述抗体可以包含B1-129抗体的VH链和B1-129抗体的VL链。
在某些实施方案中，本公开文本的抗体包含含有B1-225抗体的HCDR1-3的VH链和含有B1-225抗体的LCDR1-3的VL链。
在某些实施方案中，本公开文本的抗体包含含有B1-223抗体的HCDR1-3的VH链和含有B1-223抗体的LCDR1-3的VL链。
在某些方面，本公开文本的与人MDR1特异性结合的抗体包含表2中所列抗体的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列和LCDR1、LCDR2和LCDR3序列。除了与人MDR1结合外，本文提供的抗体还可以与来自其他哺乳动物物种(如小鼠、猴、黑猩猩等)的MDR1结合。
表2：从左至右，第1栏：抗MDR1抗体名称，第2栏：VH区，第3栏：HCDR1，第4栏：HCDR2，第5栏：HCDR3，第6栏：VL区，第7栏：LCDR1，第8栏：LCDR2，第9栏：LCDR3。
Figure BDA0003771923880000231
Figure BDA0003771923880000241
Figure BDA0003771923880000251
Figure BDA0003771923880000261
Figure BDA0003771923880000271
Figure BDA0003771923880000281
Figure BDA0003771923880000291
Figure BDA0003771923880000301
Figure BDA0003771923880000311
Figure BDA0003771923880000321
Figure BDA0003771923880000331
Figure BDA0003771923880000341
Figure BDA0003771923880000351
Figure BDA0003771923880000361
Figure BDA0003771923880000371
Figure BDA0003771923880000381
Figure BDA0003771923880000391
在一些实施方案中，所述抗体包含存在于分开的多肽中的VL区和VH区；在其他实施方案中，VL区和VH区包含在单个多肽中。
本公开文本的抗体可以包含人源化轻链、人源化重链或二者。
本公开文本的抗体可以选自Ig单体、Fab片段、F(ab’)2片段、Fd片段、scFv、scAb、dAb和Fv。
在某些方面，主题抗体可以包括含有表2中所列的VH链的HCDR的VH链和含有MRK16抗体、15D3抗体或UIC2抗体的LCDR的VL链。MRK16抗体、15D3抗体和UIC2抗体的VL链序列如下：
MRK16 VL链：
DVLMTQTPVSLSVSLGDQASISCRSSQSIVHSTGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKISNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:283)
15D3 VL链：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSTGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRLEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTRLEIK(SEQ ID NO:284)
UIC2 VL链：
DVVMTQTPRSLPVSLGDQASISCRSSQSLLHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHIPPWTFGGGTKLDIK(SEQ ID NO:285)
在某些方面，主题抗体可以包括含有表2中所列的VL链的LCDR的VL链和含有MRK16抗体、15D3抗体或UIC2抗体的HCDR的VH链。MRK16抗体、15D3抗体和UIC2抗体的VH链序列如下：
MRK16 VH链：
EVILVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTISRDNAKNNLYLQMSSLRSEDTALYYCARYYRYEAWFASWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:286)
15D3 VH链：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:287)
UIC2 VH链：
AVQLQQSGPELVKTGASVKISCKASGYSFSNYYIHWVKQSHGKSLEWIGFISCYNGATFYNQKFKGKATFTVDTSSSTAYMKFNSLTFEDSAVYYCARLPIQFGNFYPMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:288)
在某些抗体中，前述抗体是单特异性二价抗体。
在某些方面，本公开文本的抗体是多特异性的，其能够结合存在于两种不同的靶蛋白上的至少两种不同表位。与多特异性抗体结合的不同靶蛋白的数量以及因此不同表位的数量可以变化，并且可以是两个(即，双特异性)、三个(三特异性)、四个或更多个。
在某些方面，本公开文本的抗体是多特异性的，其能够结合至少两种不同表位，其中一种表位在MDR1(例如，人MDR1)上，并且另一种表位是肿瘤相关抗原(TAA)。所述TAA可以是已知在癌细胞中过表达的任何抗原。例如，所述TAA可以是在正常细胞中未以可检测的水平表达并且在癌细胞中表达的抗原，其中所述正常细胞和癌细胞是相同的细胞类型，例如上皮细胞。例如，TAA可以是新抗原，其是由一种或多种肿瘤特异性突变产生的一类肿瘤抗原，与未突变的蛋白质的氨基酸序列相比，所述一种或多种肿瘤特异性突变改变了所编码的蛋白质的氨基酸序列。在其他方面，TAA是在正常细胞中表达而在癌细胞中以较高水平表达的抗原。TAA可以在哺乳动物癌细胞的细胞表面上表达。在某些方面，TAA可以是CD47、Her2或PDL1。
在某些方面，多特异性抗体增加癌细胞对用化学治疗剂治疗的敏感性，从而如与抗MDR1单特异性二价抗体共同施用时的化学治疗剂的IC50相比，与多特异性抗体共同施用时的化学治疗剂的IC50降低至少2倍。IC50可以通过如本文提供的方法来测量。化学治疗剂可以是长春新碱。癌细胞可以是耐药性癌细胞N6/ADR。在某些方面，本公开文本的多特异性抗体可以将化学治疗剂的IC50降低5倍或更多，例如6倍或更多、7倍或更多、8倍或更多、9倍或更多或10倍或更多，例如降低5至10倍。
在某些方面，即使在不施用化学治疗剂(如长春新碱)的情况下，所述多特异性抗体也可以具有体内细胞杀伤活性，例如，减少肿瘤体积。
在某些方面，所述多特异性抗体可以是一种结合多药耐药蛋白1(MDR1)和肿瘤相关抗原(TAA)的双特异性抗体分子，所述抗体分子包含两条相同的可变轻(VL)链、第一可变重(VH)链和第二VH链，其中所述VL链各自包含针对MDR1的抗原结合位点，所述第一VH链包含针对MDR1的抗原结合位点，并且所述第二VH链包含针对所述TAA的抗原结合位点，并且其中所述第二VH链在与所述轻链之一配对时结合所述TAA。
在某些方面，所述两条VL链的抗原结合位点包含表2中所列抗体的轻链CDR1-3(LCDR1-3)。在某些方面，两条VL链的抗原结合位点包含含有具有以下氨基酸序列的VL链的抗MDR1抗体V6的轻链CDR1-3(LCDR1-3)：
LWVPGSTGDVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRF SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:289)。在某些方面，所述LCDR1包含氨基酸序列：RSSQSLVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:290)；所述LCDR2包含氨基酸序列：KVSNRFS(SEQ ID NO:12)；并且所述LCDR3包含氨基酸序列：FQGSHFPRT(SEQ ID NO: 42)。
在某些方面，所述第一VH链的抗原结合位点包含表2中所列抗体的重链CDR1-3(HCDR1-3)。
在某些方面，所述第一VH链包含除表2中所列抗体之外的抗MDR1抗体的HCDR1-3，任选地其中所述第一VH链包含除表2中所列抗体之外的抗MDR1抗体的VH链的氨基酸序列。
在某些方面，所述抗MDR1抗体包含具有以下氨基酸序列的VH链：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGX2TYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:291)，其中X2是N、Q或S；
AVQLQQSGPELVKTGASVKISCKASGYSFSNYYIHWVKQSHGKSLEWIGFISCYNGATFYNQKFKGKATFTVDTSSSTAYMKFNSLTFEDSAVYYCARLPIQFGNFYPMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:288)；或
EVILVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTISRDNAKNNLYLQMSSLRSEDTALYYCARYYRYEAWFASWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:286)。
在某些方面，所述抗MDR1抗体包含具有以下氨基酸序列的VH链：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGX2TYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:292)，其中X2是N、Q或S，任选地其中X2是Q或S。
一条或多条VL链可以包含表2中所列的B1-28抗体的LCDR1-3，任选地其中所述VL链包含表2中所列的B1-28抗体的VL链的氨基酸序列。
在某些方面，所述VL链可以包含除表2中所列抗体之外的抗MDR1抗体的LCDR1-3，任选地其中所述可变轻链包含除表2中所列抗体之外的抗体的VL链的氨基酸序列。
在某些方面，所述抗MDR1抗体包含以下轻链氨基酸序列：
DVLMTQTPVSLSVSLGDQASISCRSSQSIVHSTGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKISNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:283)；
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSTGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRLEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTRLEIK(SEQ ID NO:284)；或
DVVMTQTPRSLPVSLGDQASISCRSSQSLLHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHIPPWTFGGGTKLDIK(SEQ ID NO:285)。
在某些方面，双特异性抗体与MDR1和TAA结合并且将化学治疗剂的IC50降低5倍或更多，并且包含：共同轻链、含有来自表2中所列VH链的HCDR的VH链和含有来自抗TAA抗体的HCDR的VH链。共同轻链可以包含来自表2中所列VL链(例如，从中衍生出VH HCDR的表2中的抗体的VL)或来自另一种抗MDR1抗体(如MRK16、15D3或UIC2)的LCDR。
在某些方面，所述双特异性抗体能够提高癌细胞对用化学治疗剂治疗的敏感性，其中当与所述抗体共同施用时所述化学治疗剂的半最大抑制浓度(IC50)比当与如下抗MDR1抗体共同施用时所述化学治疗剂的IC50低至少5倍(例如，低6倍、低10倍、低15倍或低20倍)，所述抗MDR1抗体包含具有以下序列的VH链：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:293)；以及具有以下序列的VL链：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSTGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRLEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTRLEIK(SEQ ID NO:284)。
在某些方面，所述第二VH链包含抗CD47抗体5F9的VH链的HCDR1-3，所述VH链含有以下氨基酸序列：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:294)。
在某些方面，所述第二VH链包含抗CD47抗体B6H12的VH链的HCDR1-3，所述VH链含有以下氨基酸序列：
EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYGMSWVRQTPDKRLEWVATITSGGTYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQIDSLKSEDTAIYFCARSLAGNAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:295)。
B6H12抗体是与人CD47结合并且包含含有以下氨基酸序列的VL区的鼠抗体：
DIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQTISDYLHWYQQKSHESPRLLIKFASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHGFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:296)。
B6H12抗体的人源化形式具有以下所示的VH区和VL区：
B6H12人源化VH序列：
Figure BDA0003771923880000441
HCDR1-3加下划线并且加粗。
B6H12人源化VL序列：
Figure BDA0003771923880000442
LCDR1-3加下划线并且加粗。
在某些方面，所述双特异性抗体与MDR1和TAA结合并且将化学治疗剂的IC50降低5倍或更多，并且包含：含有来自表2中所列VL链的LCDR的共同轻链、含有来自另一种抗MDR1抗体(如MRK16、15D3或UIC2)或来自表2所列VH链(例如，从中衍生出VL LCDR的表2中的抗体的VH)的HCDR的VH链以及含有来自抗TAA抗体的HCDR的VH链。所述抗TAA抗体可以是抗CD47抗体(如鼠抗体5F9或鼠抗体B6H13)或其人源化形式。例如，所述双特异性抗体包含：
抗CD47抗体5F9的VH区的HCDR1-3，其中所述VH区包含氨基酸序列：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:294)；或者
抗CD47抗体B6H12的VH区的HCDR1-3，其中所述VH区包含氨基酸序列：
EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYGMSWVRQTPDKRLEWVATITSGGTYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQIDSLKSEDTAIYFCA RSLAGNAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:295)。在某些实施方案中，所述B6H12抗体的VH区包含含有以下序列的HCDR1：GYGMS(SEQ ID NO:379)；含有以下序列的HCDR2：TITSGGTYTYYPDSVKG(SEQ ID NO:299)；和含有以下序列的HCDR3：SLAGNAMDY(SEQ ID NO:300)。
在某些实施方案中，所述双特异性抗体包含抗CD47小鼠抗体B6H12或其人源化形式的VH区，其中B6H12抗体的VH区包含氨基酸序列：
EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYGMSWVRQTPDKRLEWVATITSGGTYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQIDSLKSEDTAIYFCARSLAGNAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:295)。
在某些实施方案中，所述双特异性抗体包含抗CD47小鼠抗体B6H12的人源化形式的VH区，其中所述VH区包含氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYGMSWVRQAPGKGLEWVATITSGGTYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSLAGNAMDYWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO:297)。
在某些方面，所述双特异性抗体包含含有来自具有以下VH区的抗MDR1抗体的VH区的HCDR的MDR1结合结构域：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:293)；和TAA结合结构域，其中任选地所述TAA结合结构域是如下的CD47结合结构域，其包含来自具有以下VH区的抗CD47抗体的VH区的HCDR：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:294)；和
共同轻链，其含有来自表2所列VL链的LCDR，例如含有来自抗体B1-28、B1-178、B1-28、B1-184、B1-188、B1-193B、B1-197、B1-198、B1-201、B1-207、B1-223、B1-85、B1-99、B1-27、B1-39或B1-30的VL链的LCDR。
在某些方面，所述双特异性抗体可以包含具有以下HCDR序列的来自抗MDR1抗体的VH区的HCDR1-3：HCDR1：RYTMS(SEQ ID NO:301)；HCDR2：TISSGGGNTYYPDSVKG(SEQ ID NO:302)、TISSGGGQTYYPDSVKG(SEQ ID NO:303)或TISSGGGSTYYPDSVKG(SEQ ID NO:304)；和HCDR3：YGAGDAWFAY(SEQ ID NO:305)；具有以下HCDR序列的来自抗CD47抗体的VH区的HCDR：HCDR1：NYNMH(SEQ ID NO:306)；HCDR2：TIYPGNDDTSYNQKFKD(SEQ ID NO:307)；和HCDR3：GGYRAMDY(SEQ ID NO:308)；和含有抗MDR1抗体B1-28的VL区的LCDR的共同轻链。在某些方面，所述LCDR序列是：LCDR1：RSSQNIVHSTGNTYLD(SEQ ID NO:11)，LCDR2：KVSNRFS(SEQ IDNO:12)，和LCDR3：FQGSHIPRT(SEQ ID NO:13)。
除非另有说明，否则CDR按照Kabat命名法定义。
在某些方面，所述双特异性抗体分子的第一VH链包含含有以下的氨基酸序列：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGX2TYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:291)，其中X2是N、Q或S；第二VH链包含含有以下的氨基酸序列：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:294)；和/或两条VL链包含含有表2中所列的B1-28抗体的VL链的氨基酸序列。
在某些实施方案中，所述双特异性抗体包含：含有来自B1.188的VH链的HCDR1-3的VH链、含有来自抗MDR1抗体MRK16的VL链的LCDR1-3的共同VL链和含有来自抗CD47抗体5F9的VH链的HCDR1-3的VH链。来自B1.188的VH链的HCDR1-3、来自MRK16的VL链的LCDR1-3和来自5F9的VH链的HCDR1-3列于表5中。在某些实施方案中，所述双特异性抗体包含B1.188的VH链、作为共同轻链的MRK16的VL链、和5F9的VH链。
在某些实施方案中，所述双特异性抗体包含：含有来自B1.261的VH链的HCDR1-3的VH链、含有来自抗MDR1抗体MRK16的VL链的LCDR1-3的共同VL链和含有来自抗CD47抗体5F9的VH链的HCDR1-3的VH链。来自B1.261的VH链的HCDR1-3、来自MRK16的VL链的LCDR1-3和来自5F9的VH链的HCDR1-3列于表5中。在某些实施方案中，所述双特异性抗体包含B1.261的VH链、作为共同轻链的MRK16的VL链、和5F9的VH链。
在某些实施方案中，所述双特异性抗体包含：含有来自B1.129的VH链的HCDR1-3的VH链、含有来自抗MDR1抗体MRK16的VL链的LCDR1-3的共同VL链和含有来自抗CD47抗体5F9的VH链的HCDR1-3的VH链。来自B1.129的VH链的HCDR1-3、来自MRK16的VL链的LCDR1-3和来自5F9的VH链的HCDR1-3列于表5中。在某些实施方案中，所述双特异性抗体包含B1.129的VH链、作为共同轻链的MRK16的VL链、和5F9的VH链。
在某些实施方案中，所述双特异性抗体包含：含有来自B1.225的VH链的HCDR1-3的VH链、含有来自抗MDR1抗体MRK16的VL链的LCDR1-3的共同VL链和含有来自抗CD47抗体5F9的VH链的HCDR1-3的VH链。来自B1.225的VH链的HCDR1-3、来自MRK16的VL链的LCDR1-3和来自5F9的VH链的HCDR1-3列于表5中。在某些实施方案中，所述双特异性抗体包含B1.225的VH链、作为共同轻链的MRK16的VL链、和5F9的VH链。
在某些实施方案中，所述双特异性抗体包含：含有来自B1.223的VH链的HCDR1-3的VH链、含有来自抗MDR1抗体MRK16的VL链的LCDR1-3的共同VL链和含有来自抗CD47抗体5F9的VH链的HCDR1-3的VH链。来自B1.223的VH链的HCDR1-3、来自MRK16的VL链的LCDR1-3和来自5F9的VH链的HCDR1-3列于表5中。在某些实施方案中，所述双特异性抗体包含B1.223的VH链、作为共同轻链的MRK16的VL链、和5F9的VH链。
在某些实施方案中，所述双特异性抗体包含：含有来自B1.28的VH链的HCDR1-3的VH链、含有来自B1.28的VL链的LCDR1-3的共同VL链和含有来自抗CD47抗体5F9的VH链的HCDR1-3的VH链。来自B1.28的VH链的HCDR1-3、来自B1.28的VL链的LCDR1-3和来自5F9的VH链的HCDR1-3列于表5中。在某些实施方案中，所述双特异性抗体包含B1.28的VH链、作为共同轻链的B1.28的VL链、和5F9的VH链。在某些实施方案中，B1.28的VH链、B1.28的VL链和5F9的VH链可以是人源化的并且具有如表5所示的序列。
在某些情况下，本公开文本的第一抗MDR1和抗CD47双特异性抗体包含以下序列：
含有15D3抗体的VH链的HCDR1-3的第一VH链；
含有5F9抗体的VH链的HCDR1-3的第二VH链；和
含有B1.27抗体、B1.VL6.CDR3mod抗体、B1.225v1抗体或B1.89v抗体的VL链的LCDR1-3的共同VL链。B1.VL6.CDR3mod抗体、B1.225v1抗体和B1.89v抗体的LCDR1-3以及VL链的序列示于表5中。
在某些情况下，本公开文本的第二抗MDR1和抗CD47双特异性抗体包含以下序列：
含有B1.188抗体的VH链的HCDR1-3的第一VH链；
含有5F9抗体的VH链的HCDR1-3的第二VH链；和
含有MRK16抗体的VL链的LCDR1-3的共同VL链。
在某些情况下，本公开文本的第三抗MDR1和抗CD47双特异性抗体包含以下序列：
含有B1.225抗体的VH链的HCDR1-3的第一VH链；
含有5F9抗体的VH链的HCDR1-3的第二VH链；和
含有MRK16抗体的VL链的LCDR1-3的共同VL链。
在某些情况下，本公开文本的第四抗MDR1和抗CD47双特异性抗体包含以下序列：
含有B1.28抗体的VH链的HCDR1-3的第一VH链；
含有5F9抗体的VH链的HCDR1-3的第二VH链；和
含有B1.28抗体的VL链的LCDR1-3的共同VL链。
在某些情况下，所述第一VH链可以包含B1.28的人源化VH链的氨基酸序列。
在某些情况下，本公开文本的第五抗MDR1和抗CD47双特异性抗体包含以下序列：
含有B1.261抗体的VH链的HCDR1-3的第一VH链；
含有5F9抗体的VH链的HCDR1-3的第二VH链；和
含有MRK16抗体的VL链的LCDR1-3的共同VL链。
在某些情况下，所述第一VH链可以是B1.261抗体的人源化VH链。在某些情况下，所述人源化形式可以包含B1.261 VH4抗体的VH的氨基酸序列。在某些情况下，所述共同VL链可以是MRK16抗体的人源化VL链。
在某些情况下，本公开文本的第六抗MDR1和抗CD47双特异性抗体包含以下序列：
含有B1.261抗体的VH链的HCDR1-3的第一VH链；
含有5F9抗体的VH链的HCDR1-3的第二VH链；和
含有B1.261抗体的VL链的LCDR1-3的共同VL链。
在某些情况下，所述第一VH链可以是B1.261抗体的人源化VH链。在某些情况下，所述人源化形式可以包含B1.261 VH4抗体的VH的氨基酸序列。在某些情况下，所述共同VL链可以是B1.261抗体的人源化VL链。在某些情况下，所述人源化形式可以包含B1.261 VH4抗体的VL的氨基酸序列。
以下双特异性抗体可以尤其用于与细胞表面上的人CD47和食蟹猴CD47以及人ABCB1结合：15D3DD KT14KK B1.28.huL2 LC；15D3DD KT14KK B1VL6/CDR3v2 LC；15D3DDKT14KK MRK16v5 LC；和15D3DD KT14KK B1.89v1 LC(参见图17A-图17B)。这些抗体的重链和轻链的氨基酸序列如下：
15D3DD重链：
Figure BDA0003771923880000501
KT14KK重链：
Figure BDA0003771923880000502
VH区在上述重链序列中以粗体指示。HCDR是斜体并且加下划线。本发明涵盖的双特异性抗体可以包含这些重链，或包含存在于这些重链中的仅HCDR或仅VH链。
B1.28.huL2共同轻链：
Figure BDA0003771923880000511
B1VL6/CDR3v2共同轻链：
Figure BDA0003771923880000512
MRK16v5 LC共同轻链：
Figure BDA0003771923880000513
B1.89v1共同轻链：
Figure BDA0003771923880000514
LCDR是粗体字。本发明涵盖的双特异性抗体可以包含这些共同轻链之一与如上文所述的15D3DD重链和KT14重链或其HCDR或VH链的组合。
在某些情况下，所述TAA是Her2或PD-L1。
抗MDR1和抗PD-L1双特异性抗体
在某些方面，所述TAA可以是程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)。PD-L1也称为分化簇274(CD274)或B7同源物1(B7-H1)。在某些方面，与MDR1和PD-L1结合的双特异性抗体分子包含如在前述章节中描述的共同轻链和第一VH链，并且所述第二VH链包含含有以下氨基酸序列的VH链的HCDR1-3：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:314)
根据Kabat命名法定义的HCDR1-3是：
HCDR1:DSWIH(SEQ ID NO:315)
HCDR2:WISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:316)
HCDR3:RHWPGGFDY(SEQ ID NO:317)
与MDR1和PD-L1结合的双特异性抗体的第二VH链可以具有与以下氨基酸序列至少80％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:314)
与MDR1和PD-L1结合的双特异性抗体的第二VH链可以存在于具有与以下氨基酸序列至少80％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列的重链中：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:318)
在某些情况下，本公开文本的抗MDR1和抗PDL1双特异性抗体包含以下序列：
含有B1.261抗体的VH链的HCDR1-3的第一VH链；
含有阿特利珠单抗抗体的VH链的HCDR1-3的第二VH链；和
含有B1.261抗体或MRK16抗体的VL链的LCDR1-3的共同VL链。
在某些情况下，抗MDR1和抗PD-L1双特异性抗体的第一VH链是人源化的并且包含氨基酸序列：
B1.261.huH1(VH4)：
EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTSYGVHWVRQPPGKGLEWLVVIWSDGSTTYNSALKSRLTISKDNSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARHGRWLLQRGGAMDYWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO:126)
B1.261.huH2(VH3)：
EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFSLTSYGVHWVRQPPGKGLEWLVVIWSDGSTTYNSALKSRLTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGRWLLQRGGAMDYWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO:129)
在某些情况下，抗MDR1和抗PDL1双特异性抗体的共同VL链是人源化的并且包含氨基酸序列：
Figure BDA0003771923880000531
抗MDR1和抗HER2双特异性抗体
在某些方面，所述TAA可以是HER2。Erb-B2受体酪氨酸激酶2或HER2是受体酪氨酸激酶的表皮生长因子(EGF)受体家族的成员。HER2蛋白本身没有配体结合结构域，因此不能结合生长因子。然而，它确实与其他配体结合的EGF受体家族成员紧密结合以形成异二聚体，稳定配体结合并且增强激酶介导的下游信号传导通路的激活。在许多癌症(包括乳腺肿瘤和卵巢肿瘤)中报道了编码HER2的基因的扩增和/或过表达。
在某些方面，与MDR1和HER2结合的双特异性抗体分子包含如在前述章节中描述的共同轻链和第一VH链，并且第二VH链包含抗Her2抗体(如曲妥珠单抗或帕妥珠单抗)的VH链的HCDR1-3。
曲妥珠单抗重链序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRF TISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:320)
VH区加下划线。
根据Kabat命名法定义的HCDR1-3是：
HCDR1:GFNIKDT(SEQ ID NO:321)
HCDR2:YPTNGY(SEQ ID NO:322)
HCDR3:WGGDGFYAMDY(SEQ ID NO:323)
与MDR1和HER2结合的双特异性抗体的第二VH链可以具有与曲妥珠单抗的VH链或曲妥珠单抗的重链的氨基酸序列至少80％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列。
帕妥珠单抗重链序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRF TLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:324)
VH区加下划线。
根据Kabat命名法定义的HCDR1-3是：
HCDR1:GFTFTDY(SEQ ID NO:325)
HCDR2:NPNSGG(SEQ ID NO:326)
HCDR3:NLGPSFYFDY(SEQ ID NO:327)
与MDR1和HER2结合的双特异性抗体的第二VH链可以具有与帕妥珠单抗的VH链或帕妥珠单抗的重链的氨基酸序列至少80％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列。
在某些情况下，本公开文本的第一抗MDR1和抗HER2双特异性抗体包含以下序列：
含有B1.129抗体的VH链的HCDR1-3的第一VH链；
含有帕妥珠单抗或帕妥珠单抗抗体的VH链的HCDR1-3的第二VH链；和
含有B1.129抗体的VL链的LCDR1-3的共同VL链。
在某些情况下，本公开文本的第二抗MDR1和抗HER2双特异性抗体包含以下序列：
含有B1.188抗体的VH链的HCDR1-3的第一VH链；
含有帕妥珠单抗或帕妥珠单抗抗体的VH链的HCDR1-3的第二VH链；和
含有B1.188抗体或MRK16抗体的VL链的LCDR1-3的共同VL链。
在某些情况下，本公开文本的第三抗MDR1和抗HER2双特异性抗体包含以下序列：
含有B1.261抗体的VH链的HCDR1-3的第一VH链；
含有帕妥珠单抗或帕妥珠单抗抗体的VH链的HCDR1-3的第二VH链；和
含有B1.261抗体或MRK16抗体的VL链的LCDR1-3的共同VL链。
在某些情况下，抗MDR1和抗PDL1双特异性抗体的第一VH链是人源化的并且包含氨基酸序列：
B1.261.huH1(VH4)：
EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTSYGVHWVRQPPGKGLEWLVVIWSDGSTTYNSALKSRLTISKDNSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARHGRWLLQRGGAMDYWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO:126)
B1.261.huH2(VH3)：
EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFSLTSYGVHWVRQPPGKGLEWLVVIWSDGSTTYNSALKSRLTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGRWLLQRGGAMDYWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO:129)
在某些情况下，抗MDR1和抗PDL1双特异性抗体的共同VL链是人源化的并且包含氨基酸序列：
Figure BDA0003771923880000561
如本文其他地方所述，所述VL链、所述第一VH链和所述第二VH链中的至少一个、两个或全部可以是人源化的。另外，所述VH链的Fc区可以包含取代以增加所述第一与第二VH链之间的异二聚化。在某些方面，所述第一重链可以是人源化的并且包含带电荷对取代K392D和K409D，并且所述第二重链包含带电荷对取代E356K和D399K。
在某些实施方案中，VH和VL链中的一条或多条可以通过例如将至少一个、两个、三个或四个框架区用来自人抗体的框架区替代进行人源化。
在某些方面，双特异性抗体与表达MDR1和肿瘤相关抗原二者的癌细胞特异性结合。在某些方面，如与所述双特异性抗体和表达MDR1或肿瘤相关抗原的细胞的结合相比，所述双特异性抗体优先结合表达MDR1和肿瘤相关抗原二者的癌细胞。
在某些方面，所述双特异性抗体结合表达MDR1和肿瘤相关抗原二者的癌细胞，但是不结合(或以显著较低的亲和力结合)展示低或不可检测的MDR1或相关的肿瘤相关抗原表达的正常细胞。换言之，本公开文本的双特异性抗体不结合不表达MDR1和TAA二者的细胞。
在一些实施方案中，本公开文本的多特异性抗体可以包含共同轻链。如本文所用，术语“共同轻链”通常将指代使用同一轻链的两个拷贝并掺入所述多特异性抗体中。换句话说，组装的多特异性抗体中的轻链将与MDR1特异性重链缔合，并且同一轻链的第二拷贝将与癌症相关抗原特异性重链缔合。在某些方面，所述共同轻链可以包含表2中所列的VL链的LCDR。VH链可以包含表2中所列的VH链的HCDR。
本公开文本涵盖的双特异性抗体不包括如下双特异性抗体，其与MDR-1和CD47结合并包含来自15D3抗体的VH链的HCDR；来自5F9抗体的VH链的HCDR；和来自MRK16抗体的VL链的LCDR。具体地，本公开文本的双特异性抗体不包含以下的组合：
具有存在于以下VH序列中的HCDR的VH链：EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:293)；
具有存在于以下VH序列中的HCDR的VH链：QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:294)；
和具有存在于以下VL序列中的LCDR的共同可变轻链：DVLMTQTPVSLSVSLGDQASISCRSSQSIVHSTGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKISNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:283)。
具体地，本公开文本的双特异性抗体不包含以下的组合：
具有以下HCDR序列的来自抗MDR1抗体的VH区的HCDR：HCDR1：RYTMS(SEQ ID NO:301)、HCDR2：TISSGGGNTYYPDSVKG(SEQ ID NO:302)和HCDR3：YGAGDAWFAY(SEQ ID NO:305)；
具有以下HCDR序列的来自抗CD47抗体的VH区的HCDR：HCDR1：NYNMH(SEQ ID NO:306)、HCDR2：TIYPGNDDTSYNQKFKD(SEQ ID NO:307)和HCDR3：GGYRAMDY(SEQ ID NO:308)；
和具有以下LCDR序列的具有抗MDR1抗体的LCDR的共同轻链：LCDR1：RSSQSIVHSTGNTYLE(SEQ ID NO:25)、LCDR2：KISNRFS(SEQ ID NO:328)和LCDR3：FQASHFPRT(SEQ ID NO:329)。
某些与细胞表面上的MDR1和CD47结合的双特异性抗体可以包含作为共同轻链的抗MDR1抗体V6的VL链的LCDR1-3，并且可以包含抗MDR1抗体B1.28、B1.30、B1.89、B1.129、B1.225、B1.261、15D3或MRK16的VH链的HCDR1-3以及5F9抗体或B6H12抗体的VH链的HCDR1-3。某些与细胞表面上的MDR1和CD47结合的双特异性抗体可以包含作为共同轻链的抗MDR1抗体V6的VL链或其人源化形式，并且可以包含抗MDR1抗体抗MDR1抗体B1.28、B1.30、B1.89、B1.129、B1.225、B1.261、15D3或MRK16或其人源化形式的VH链以及5F9抗体的VH链或B6H12抗体的VH链或B6H12抗体或5F9抗体的人源化形式的VH链。
在一些实施方案中，主题抗体是重组或经修饰的抗体，例如嵌合的、人源化的、去免疫化的或体外产生的抗体。如本文所用的术语“重组”或“经修饰的”抗体旨在包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有抗体，如(i)使用转染至宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体；(ii)从重组的组合抗体文库分离的抗体；(iii)从对于人免疫球蛋白基因是转基因的动物(例如小鼠)分离的抗体；或(iv)通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列的任何其他手段制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组抗体包括人源化的、CDR移植的、嵌合的、去免疫化的和体外产生的抗体；并且可以任选地包含源自人种系免疫球蛋白序列的恒定区。
经修饰的抗体可以包含经修饰的结构域，包括其中任何抗体结构域可以从天然存在的形式修饰而来。在一些实施方案中，经修饰的抗体可以包含经修饰的重链，包括经修饰的Fc结构域、包括经修饰的CH2和/或经修饰的CH3结构域。在一些情况下，经修饰的Fc结构域可以采用静电转向(electrostatic steering)效应，包括但不限于例如通过使用Gunasekeran等人,(2010)Journal of Biological Chemistry 285,19637-19646中描述的程序；将其披露内容通过引用以其整体并入本文。在一些情况下，双特异性抗体通过CH3结构域处的电荷对取代来组装，包括但不限于例如其中一条重链被修饰以含有K392D和K409D取代且另一条重链被修饰以含有E356K和D399K取代。电荷对取代的链可以优先彼此形成异二聚体。氨基酸取代的编号是按照对于Ig HC的EU编号系统。
在一些情况下，本公开文本的抗体包含电荷对取代。在一些情况下，本公开文本的抗体不包含电荷对取代。在一些情况下，可以采用促进所需链的优先异二聚体形成的替代手段。
在一些情况下，经修饰的重链可以包含杵臼结构(knob-into-hole)修饰。“杵臼结构”氨基酸修饰是在产生多特异性抗体(包括双特异性IgG抗体)时用于重链的异二聚化的抗体工程化中的合理设计策略。例如，在将杵臼结构策略掺入由两种具有不同特异性的单克隆抗体制成的双特异性抗体中时，氨基酸变化被工程化以在单克隆抗体1(mAb1)的重链CH3上产生“杵”并且在单克隆抗体2(mAb2)的重链CH3上产生“臼”。杵可以由大氨基酸(例如像酪氨酸(Y))表示，而臼可以由小氨基酸(如苏氨酸(T))表示。例如，杵臼结构对修饰可以通过在第一CH3结构域中的T22Y取代和在配偶体CH3结构域中的Y86T取代来产生。杵臼结构修饰的例子描述于Carter,J.Immunol.Methods,248(1-2):7-15(2001)；Ridgway,J.B.等人Protein Eng.9(7):617-2(1996)；和Merchant,A.M.等人Nat.Biotechnol.16(7):677-81(1998)中；将其披露内容以其整体并入本文。在由成对的经杵臼结构修饰的结构域产生的抗体中，所述双特异性异二聚体将通常表示主要部分。
如上所述，主题抗MDR1抗体特异性结合MDR1的一个或多个表位。因此，所述表位是MDR1表位。与抗MDR1抗体结合的MDR1表位的大小可以变化，包括其中所述MDR1表位由具有MDR1序列的连续延伸段的多肽形成，所述连续延伸段的范围可以是从3aa或更少至12aa或更多，包括但不限于例如4aa、5aa、6aa、7aa、8aa、9aa、10aa、11aa、12aa、4aa至10aa、5aa至10aa、6aa至10aa、4aa至8aa、5aa至8aa、6aa至8aa等。
在一些实施方案中，所述MDR1表位可以由如下多肽形成，所述多肽与以下MDR1序列的连续延伸段具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％的氨基酸序列同一性，所述MDR1序列包括但不限于例如人MDR1序列：MDLEGDRNGGAKKKNFFKLNNKSEKDKKEKKPTVSVFSMFRYSNWLDKLYMVVGTLAAIIHGAGLPLMMLVFGEMTDIFANAGNLEDLMSNITNRSDINDTGFFMNLEEDMTRYAYYYSGIGAGVLVAAYIQVSFWCLAAGRQIHKIRKQFFHAIMRQEIGWFDVHDVGELNTRLTDDVSKINEGIGDKIGMFFQSMATFFTGFIVGFTRGWKLTLVILAISPVLGLSAAVWAKILSSFTDKELLAYAKAGAVAEEVLAAIRTVIAFGGQKKELERYNKNLEEAKRIGIKKAITANISIGAAFLLIYASYALAFWYGTTLVLSGEYSIGQVLTVFFSVLIGAFSVGQASPSIEAFANARGAAYEIFKIIDNKPSIDSYSKSGHKPDNIKGNLEFRNVHFSYPSRKEVKILKGLNLKVQSGQTVALVGNSGCGKSTTVQLMQRLYDPTEGMVSVDGQDIRTINVRFLREIIGVVSQEPVLFATTIAENIRYGRENVTMDEIEKAVKEANAYDFIMKLPHKFDTLVGERGAQLSGGQKQRIAIARALVRNPKILLLDEATSALDTESEAVVQVALDKARKGRTTIVIAHRLSTVRNADVIAGFDDGVIVEKGNHDELMKEKGIYFKLVTMQTAGNEVELENAADESKSEIDALEMSSNDSRSSLIRKRSTRRSVRGSQAQDRKLSTKEALDESIPPVSFWRIMKLNLTEWPYFVVGVFCAIINGGLQPAFAIIFSKIIGVFTRIDDPETKRQNSNLFSLLFLALGIISFITFFLQGFTFGKAGEILTKRLRYMVFRSMLRQDVSWFDDPKNTTGALTTRLANDAAQVKGAIGSRLAVITQNIANLGTGIIISFIYGWQLTLLLLAIVPIIAIAGVVEMKMLSGQALKDKKELEGSGKIATEAIENFRTVVSLTQEQKFEHMYAQSLQVPYRNSLRKAHIFGITFSFTQAMMYFSYAGCFRFGAYLVAHKLMSFEDVLLVFSAVVFGAMAVGQVSSFAPDYAKAKISAAHIIMIIEKTPLIDSYSTEGLMPNTLEGNVTFGEVVFNYPTRPDIPVLQGLSLEVKKGQTLALVGSSGCGKSTVVQLLERFYDPLAGKVLLDGKEIKRLNVQWLRAHLGIVSQEPILFDCSIAENIAYGDNSRVVSQEEIVRAAKEANIHAFIESLPNKYSTKVGDKGTQLSGGQKQRIAIARALVRQPHILLLDEATSALDTESEKVVQEALDKAREGRTCIVIAHRLSTIQNADLIVVFQNGRVKEHGTHQQLLAQKGIYFSMVSVQAGTKRQ(SEQ IDNO:330)；或啮齿动物MDR1序列，例如像小鼠MDR1a序列或小鼠MDR1b序列：
小鼠MDR1a序列：
MELEEDLKGRADKNFSKMGKKSKKEKKEKKPAVSVLTMFRYAGWLDRLYMLVGTLAAIIHGVALPLMMLIFGDMTDSFASVGNVSKNSTNMSEADKRAMFAKLEEEMTTYAYYYTGIGAGVLIVAYIQVSFWCLAAGRQIHKIRQKFFHAIMNQEIGWFDVHDVGELNTRLTDDVSKINEGIGDKIGMFFQAMATFFGGFIIGFTRGWKLTLVILAISPVLGLSAGIWAKILSSFTDKELHAYAKAGAVAEEVLAAIRTVIAFGGQKKELERYNNNLEEAKRLGIKKAITANISMGAAFLLIYASYALAFWYGTSLVISKEYSIGQVLTVFFSVLIGAFSVGQASPNIEAFANARGAAYEVFKIIDNKPSIDSFSKSGHKPDNIQGNLEFKNIHFSYPSRKEVQILKGLNLKVKSGQTVALVGNSGCGKSTTVQLMQRLYDPLDGMVSIDGQDIRTINVRYLREIIGVVSQEPVLFATTIAENIRYGREDVTMDEIEKAVKEANAYDFIMKLPHQFDTLVGERGAQLSGGQKQRIAIARALVRNPKILLLDEATSALDTESEAVVQAALDKAREGRTTIVIAHRLSTVRNADVIAGFDGGVIVEQGNHDELMREKGIYFKLVMTQTAGNEIELGNEACKSKDEIDNLDMSSKDSGSSLIRRRSTRKSICGPHDQDRKLSTKEALDEDVPPASFWRILKLNSTEWPYFVVGIFCAIINGGLQPAFSVIFSKVVGVFTNGGPPETQRQNSNLFSLLFLILGIISFITFFLQGFTFGKAGEILTKRLRYMVFKSMLRQDVSWFDDPKNTTGALTTRLANDAAQVKGATGSRLAVIFQNIANLGTGIIISLIYGWQLTLLLLAIVPIIAIAGVVEMKMLSGQALKDKKELEGSGKIATEAIENFRTVVSLTREQKFETMYAQSLQIPYRNAMKKAHVFGITFSFTQAMMYFSYAACFRFGAYLVTQQLMTFENVLLVFSAIVFGAMAVGQVSSFAPDYAKATVSASHIIRIIEKTPEIDSYSTQGLKPNMLEGNVQFSGVVFNYPTRPSIPVLQGLSLEVKKGQTLALVGSSGCGKSTVVQLLERFYDPMAGSVFLDGKEIKQLNVQWLRAQLGIVSQEPILFDCSIAENIAYGDNSRVVSYEEIVRAAKEANIHQFIDSLPDKYNTRVGDKGTQLSGGQKQRIAIARALVRQPHILLLDEATSALDTESEKVVQEALDKAREGRTCIVIAHRLSTIQNADLIVVIQNGKVKEHGTHQQLLAQKGIYFSMVSVQAGAKRS(SEQ IDNO:331)
小鼠MDR1b序列：
MEFEENLKGRADKNFSKMGKKSKKEKKEKKPAVGVFGMFRYADWLDKLCMILGTLAAIIHGTLLPLLMLVFGNMTDSFTKAEASILPSITNQSGPNSTLIISNSSLEEEMAIYAYYYTGIGAGVLIVAYIQVSLWCLAAGRQIHKIRQKFFHAIMNQEIGWFDVHDVGELNTRLTDDVSKINDGIGDKIGMFFQSITTFLAGFIIGFISGWKLTLVILAVSPLIGLSSALWAKVLTSFTNKELQAYAKAGAVAEEVLAAIRTVIAFGGQQKELERYNKNLEEAKNVGIKKAITASISIGIAYLLVYASYALAFWYGTSLVLSNEYSIGEVLTVFFSILLGTFSIGHLAPNIEAFANARGAAFEIFKIIDNEPSIDSFSTKGYKPDSIMGNLEFKNVHFNYPSRSEVQILKGLNLKVKSGQTVALVGNSGCGKSTTVQLMQRLYDPLEGVVSIDGQDIRTINVRYLREIIGVVSQEPVLFATTIAENIRYGREDVTMDEIEKAVKEANAYDFIMKLPHQFDTLVGERGAQLSGGQKQRIAIARALVRNPKILLLDEATSALDTESEAVVQAALDKAREGRTTIVIAHRLSTVRNADVIAGFDGGVIVEQGNHDELMREKGIYFKLVMTQTRGNEIEPGNNAYGSQSDTDASELTSEESKSPLIRRSIYRSVHRKQDQERRLSMKEAVDEDVPLVSFWRILNLNLSEWPYLLVGVLCAVINGCIQPVFAIVFSRIVGVFSRDDDHETKRQNCNLFSLFFLVMGLISFVTYFFQGFTFGKAGEILTKRVRYMVFKSMLRQDISWFDDHKNSTGSLTTRLASDASSVKGAMGARLAVVTQNVANLGTGVILSLVYGWQLTLLLVVIIPLIVLGGIIEMKLLSGQALKDKKQLEISGKIATEAIENFRTIVSLTREQKFETMYAQSLQVPYRNAMKKAHVFGITFSFTQAMMYFSYAACFRFGAYLVAQQLMTFENVMLVFSAVVFGAMAAGNTSSFAPDYAKAKVSASHIIRIIEKTPEIDSYSTEGLKPTLLEGNVKFNGVQFNYPTRPNIPVLQGLSLEVKKGQTLALVGSSGCGKSTVVQLLERFYDPMAGSVFLDGKEIKQLNVQWLRAHLGIVSQEPILFDCSIAENIAYGDNSRAVSHEEIVRAAKEANIHQFIDSLPDKYNTRVGDKGTQLSGGQKQRIAIARALVRQPHILLLDEATSALDTESEKVVQEALDKAREGRTCIVIAHRLSTIQNADLIVVIENGKVKEHGTHQQLLAQKGIYFSMVQAGAKRS(SEQ IDNO:332)，或非人灵长类动物序列，例如像黑猩猩(Pan troglodyte，Chimpanzee)序列：
MDLEGDRNGGAKKKNFFKLNNKSEKDKKEKKPTVSVFSMFRYSNWLDKLYMVVGTLAAIIHGAGLPLMMLVFGEMTDIFANAGNLEDLMSNITNRSDINDTGFFMNLEEDMTRYAYYYSGIGAGVLVAAYIQVSFWCLAAGRQIHKIRKQFFHAIMRQEIGWFDVHDVGELNTRLTDDVSKINEGIGDKIGMFFQSMATFFTGFIVGFTRGWKLTLVILAISPVLGLSAAVWAKILSSFTDKELLAYAKAGAVAEEVLAAIRTVIAFGGQKKELERYNKNLEEAKRIGIKKAITANISIGAAFLLIYASYALAFWYGTTLVLSGEYSIGQVLTVFFSVLIGAFSVGQASPSIEAFANARGAAYEIFKIIDNKPSIDSYSKSGHKPDNIKGNLEFRNVHFSYPSRKQVKILKGLNLKVQSGQTVALVGNSGCGKSTTVQLMQRLYDPTEGMVSVDGQDIRTINVRFLREIIGVVSQEPVLFATTIAENIRYGRENVTMDEIEKAVKEANAYDFIMKLPHKFDTLVGERGAQLSGGQKQRIAIARALVRNPKILLLDEATSALDTESEAVVQVALDKARKGRTTIVIAHRLSTVRNADVIAGFDDGVIVEKGNHDELMKEKGIYFKLVTMQTAGNEVELENAADESKSEIDALEMSSNDSRSSLIRKRSTRRSVRGSQAQDRKLSTKEALDESIPPVSFWRIMKLNLTEWPYFVVGVFCAIINGGLQPAFAIIFSKIIGVFTRIDDPETKRQNSNLFSLLFLVLGIISFITFFLQGFTFGKAGEILTKRLRYMVFRSMLRQDVSWFDDPKNTTGALTTRLANDAAQVKGAIGSRLAVITQNIANLGTGIIISFIYGWQLTLLLLAIVPIIAIAGVVEMKMLSGQALKDKKELEGAGKIASEAIENFRTVVSLTQEQKFEHMYAQSLQVPYRNSLRKAHIFGITFSFTQAMMYFSYAGCFRFGAYLVAHKLMSFEDVLLVFSAVVFGAMAVGQVSSFAPDYAKAKISAAHIIMIIEKTPLIDSYSTEGLTPNTLEGNVTFGEVVFNYPTRPDIPVLQGLSLEVKKGQTLALVGSSGCGKSTVVQLLERFYDPLAGKVLLDGKEIKRLNVQWLRAHLGIVSQEPILFDCSIAENIAYGDNSRVVSQEEIVRAAKEANIHAFIESLPNKYSTRVGDKGTQLSGGQKQRIAIARALVRQPHILLLDEATSALDTESEKVVQEALDKAREGRTCIVIAHRLSTIQNADLIVVFQNGRVKEHGTHQQLLAQKGIYFSMVSVQAGTKRQ(SEQID NO:333)，或食蟹猴(Macaca fascicularis)(食蟹猕猴)序列：
MDLEGDRNGGAEKKNFFKLNNKSKKDKKERKPTVSVFSMFRYSNWLDKLYMVVGTLAAIIHGAGLPLMMLVFGDMTDTFANAGNLGDLGALLFNNTNSSNITDTVPVMNLEEDMTRYAYYYSGIGAGVLVAAYIQVSFWCLAAGRQIHKIRKQFFHAIMRQEIGWFDVHDVGELNTRLTDDVSKINEGIGDKIGMFFQSMATFFTGFIVGFTRGWKLTLVILAISPVLGLSAAVWAKILSSFTDKELLAYAKAGAVAEEVLAAIRTVIAFGGQKKELERYNKNLEEAKRIGIKKAITANISIGAAFLLIYASYALAFWYGTTLVLSKEYSIGQVLTVFFSVLIGAFSVGQASPSIEAFANARGAAFEIFKIIDNKPSIDSYSKSGHKPDNIKGNLEFRNVHFSYPSRKEVKILKGLNLKVQSGQTVALVGNSGCGKSTTVQLMQRLYDPTEGMVSVDGQDIRTINVRFLREIIGVVSQEPVLFATTIAENIRYGREDVTMDEIEKAVKEANAYDFIMKLPQKFDTLVGERGAQLSGGQKQRIAIARALVRNPKILLLDEATSALDTESEAVVQVALDKARKGRTTIVIAHRLSTVRNADVIAGFDDGVIVEKGNHDELMKEKGIYFKLVTMQTAGNEIELENAADESKSEIDTLEMSSHDSGSSLIRKRSTRRSVRGSQGQDRKLSTKEALDESIPPVSFWRIMKLNLTEWPYFVVGVFCAIINGGLQPAFAVIFSKIIGIFTRNDDAETKRQNSNLFSLLFLVLGIVSFITFFLQGFTFGKAGEILTKRLRYMVFRSMLRQDVSWFDDPKNTTGALTTRLANDAAQVKGAIGSRLAIITQNIANLGTGIIISLIYGWQLTLLLLAIVPIIAIAGVVEMKMLSGQALKDKKELEGAGKIATEAIENFRTVVSLTQEQKFEHMYDQSLQVPYRNSLRKAHIFGITFSFTQAMMYFSYAGCFRFGAYLVAHSLMSFEDVLLVFSAVVFGAMAVGQVSSFAPDYAKAKVSAAHIIMIIEKTPLIDSYSTEGLKPNTLEGNVTFNEVVFNYPTRLDIPVLQGLSLEVKKGQTLALVGSSGCGKSTVVQLLERFYDPLAGKVLLDGKEIKQLNVQWLRAHLGIVSQEPILFDCSISENIAYGDNSRVVSQEEIVRAAKEANIHAFIESLPNKYSTRVGDKGTQLSGGQKQRIAIARALVRQPHILLLDEATSALDTESEKVVQEALDKAREGRTCIVIAHRLSTIQNADLIVVFQNGRVKEHGTHQQLLAQKGIYFSMVSVQAGAKRQ(SEQ ID NO:334)等。
主题抗MDR1抗体展现出与MDR1的高亲和力结合。例如，主题抗MDR1抗体以至少约10-7M、至少约10-8M、至少约10-9M或至少约10-10M的亲和力与人MDR1结合。主题抗MDR1抗体以从约10-7M至约10-8M、从约10-8M至约10-9M或从约10-9M至约10-10M的亲和力与存在于MDR1上的表位结合。
主题抗MDR1抗体基本上未展现出与由其他相关的但序列不相似的蛋白质(如相关的但序列不相似的EP)内的氨基酸形成的任何表位的结合。主题抗MDR1抗体与由相关的但序列不相似的蛋白质内的氨基酸形成的表位的任何结合通常是非特异性结合，其亲和力显著低于所述MDR1结合结构域与MDR1上的表位的特异性结合。显著较低的亲和力通常是至少2倍、3倍、5倍、10倍、50倍、100倍、500倍或1000倍低的亲和力。
主题抗MDR1抗体可以减少分子通过MDR1转运蛋白(例如人MDR1)的转运。例如，与在不存在所述抗MDR1抗体的情况下转运的程度相比，主题抗MDR1抗体可以使转运降低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或更多。
在一些实施方案中，主题抗体包含作为包括例如啮齿动物、非人灵长类动物和人序列在内的哺乳动物序列(例如，由各自的重链FR编码序列编码)的FR区。
主题抗体可以包含如下重链可变(VH)区，所述重链可变区包含与表2中所示抗体的VH-VL对的VH区序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多(包括100％)相同的氨基酸序列。主题抗体可以包含如下轻链可变(VL)区，所述轻链可变区包含与表2中所列抗体的VH-VL区对的VL的序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多(包括100％)相同的氨基酸序列。
主题抗体的区域和/或链可以通过一个或多个接头区连接或可以不通过一个或多个接头区连接。在存在的情况下，所述接头区的长度可以为约5个氨基酸至约50个氨基酸，例如长度为约5aa至约10aa、约10aa至约15aa、约15aa至约20aa、约20aa至约25aa、约25aa至约30aa、约30aa至约35aa、约35aa至约40aa、约40aa至约45aa或约45aa至约50aa。
适用于主题抗体的接头包括“柔性接头”。如果存在的话，所述接头分子通常具有足够的长度以允许在连接的区域之间的一些柔性运动。所述接头分子通常为约6-50个原子长。所述接头分子还可以是例如芳基乙炔、含有2-10个单体单元的乙二醇寡聚物、二胺、二酸、氨基酸或其组合。根据本公开文本可以使用可与多肽结合的其他接头分子。
可以容易地选择合适的接头，并且合适的接头可以具有任何合适的不同长度，如1个氨基酸(例如，Gly)至20个氨基酸、2个氨基酸至15个氨基酸、3个氨基酸至12个氨基酸，包括4个氨基酸至10个氨基酸、5个氨基酸至9个氨基酸、6个氨基酸至8个氨基酸或7个氨基酸至8个氨基酸，并且可以是1、2、3、4、5、6或7个氨基酸。
示例性的柔性接头包括甘氨酸聚合物(G)n、甘氨酸-丝氨酸聚合物(包括例如(GS)n、GSGGSn(SEQ ID NO:335)和GGGSn(SEQ ID NO:336)，其中n是至少一的整数)、甘氨酸-丙氨酸聚合物、丙氨酸-丝氨酸聚合物和本领域已知的其他柔性接头。甘氨酸和甘氨酸-丝氨酸聚合物是令人感兴趣的，因为这两种氨基酸均是相对非结构化的，因此可以充当组分之间的中性系链。甘氨酸聚合物特别令人感兴趣，因为甘氨酸接近的
Figure BDA0003771923880000651
空间甚至比丙氨酸显著更大，并且比侧链较长的残基受到的限制小得多(参见Scheraga,Rev.Computational Chem.11173-142(1992))。示例性柔性接头包括但不限于GGSG(SEQ IDNO:337)、GGSGG(SEQ ID NO:338)、GSGSG(SEQ ID NO:339)、GSGGG(SEQ ID NO:340)、GGGSG(SEQ ID NO:341)、GSSSG(SEQ ID NO:342)等。普通熟练技术人员应认识到，与上述任何元件缀合的肽的设计可以包括完全或部分柔性的接头，使得所述接头可以包括柔性接头以及赋予不那么柔性的结构的一个或多个部分。
在其他情况下，可以通过将氨基酸C220突变为丝氨酸或任何其他天然氨基酸、通过去除C220、通过去除完整铰链或通过将IgG1铰链用IgG3铰链替代来降低本公开文本的抗体的铰链区的柔性，形成其中轻链经由其C末端半胱氨酸连接的抗体，类似于在人同种型IgA2m中发现的情况。这导致Fab相对于Fc的柔性降低，从而导致交联能力降低。另一种降低IgG1分子柔性的策略是将IgG1铰链用IgG2铰链或IgG2样铰链替代。可替代地，可以引入类似于IgG2铰链的IgG1铰链变体。此突变体(TH7Δ6-9)含有突变T223C和两个缺失(K222和T225)，以便创建具有另外的半胱氨酸的较短铰链。
将小鼠CDR取代至人可变结构域框架中可以导致保留其正确的空间方向，其中例如人可变结构域框架采用与CDR所起源的小鼠可变框架相同或相似的构象。这可以通过从人抗体获得人可变结构域来实现，所述人抗体的框架序列展现出与CDR所来源的鼠可变框架结构域的高度序列同一性。所述重链和轻链可变框架区可以源自相同或不同的人抗体序列。所述人抗体序列可以是天然存在的人抗体的序列，或者可以是若干种人抗体的共有序列。参见Kettleborough等人,Protein Engineering 4:773(1991)；Kolbinger等人,Protein Engineering 6:971(1993)。
已经鉴定出鼠供体免疫球蛋白和适当的人受体免疫球蛋白的互补决定区，下一步是确定来自这些组分的哪些残基(如果有的话)应当被取代以优化所得人源化抗体的特性。一般而言，应当尽量减少用鼠氨基酸残基取代人氨基酸残基，因为引入鼠残基会增加抗体在人体中引起人抗小鼠抗体(HAMA)应答的风险。可以进行本领域公认的确定免疫应答的方法来监测特定患者或临床试验期间的HAMA应答。施用了人源化抗体的患者可以在施用所述疗法的开始和整个过程中进行免疫原性评估。使用本领域技术人员已知的方法，包括表面等离子共振技术(BIACORE)和/或固相ELISA分析，例如通过检测来自患者的血清样品中人源化治疗剂的抗体来测量HAMA应答。在许多实施方案中，主题人源化抗体基本上不会在人类受试者中引起HAMA应答。
基于对CDR构象和/或与抗原的结合的可能影响，选择来自人可变区框架残基的某些氨基酸进行取代。鼠CDR区与人可变框架区的非自然并置可能导致构象限制，除非通过某些氨基酸残基的取代来纠正，否则这导致结合亲和力的丧失。
用于取代的氨基酸残基的选择可以部分地通过计算机建模来确定。用于产生免疫球蛋白分子三维图像的计算机硬件和软件是本领域已知的。一般而言，从免疫球蛋白链或其结构域的已解析结构开始产生分子模型。将待建模的链与已解析的三维结构的链或结构域进行氨基酸序列相似性比较，并且选择显示出最大序列相似性的链或结构域作为构建分子模型的起点。选择具有至少50％序列同一性的链或结构域进行建模，并且优选地选择具有至少60％、70％、80％、90％序列同一性或更多的链或结构域进行建模。对已解析的起始结构进行修饰，以允许被建模的免疫球蛋白链或结构域中的实际氨基酸与起始结构中的氨基酸之间存在差异。然后将经修饰的结构组装成复合免疫球蛋白。最后，通过最小化能量并验证所有原子彼此之间在适当距离内以及键的长度和角度在化学上可接受的限值内来完善模型。
在一些实施方案中，主题抗体包括scFv多聚体。例如，在一些实施方案中，主题抗体是scFv二聚体(例如，包含两个串联scFv(scFv2))、scFv三聚体(例如，包含三个串联scFv(scFv3))、scFv四聚体(例如，包含四个串联scFv(scFv4))，或者是多于四个scFv(例如，串联)的多聚体。scFv单体可以经由长度为约2个氨基酸至约15个氨基酸(例如，长度为2aa、3aa、4aa、5aa、6aa、7aa、8aa、9aa、10aa、11aa、12aa、13aa、14aa或15aa)的接头串联连接。合适的接头包括例如(Gly)x，其中x是2至15的整数。其他合适的接头是以上讨论的接头。在一些实施方案中，如上所述，主题scFv多聚体中的每个scFV单体是人源化的。在某些方面，双特异性抗体可以是文献中已知的任何分子形式。对于不同的双特异性抗体形式和制造方法的全面综述参见例如，Brinkmann和Kontermann,MAbs.2017,9(2):182-212。例如，本公开文本的双特异性抗体可以具有描述于Spiess C.等人,Mol Immunol.2015年10月；67(2 PtA):95-106中的分子形式。
在一些实施方案中，主题抗体包含免疫球蛋白的恒定区(例如，Fc区)。所述Fc区(如果存在的话)可以是人Fc区。如果存在恒定区，则所述抗体可以含有轻链和重链恒定区二者。合适的重链恒定区包括CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区。本文所述的抗体包括具有所有类型(包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE)和任何同种型(包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)的恒定区的抗体。合适的重链Fc区的例子是人同种型IgG1 Fc。轻链恒定区可以是λ或κ。主题抗体(例如，主题人源化抗体)可以包含来自多于一个类别或同种型的序列。抗体可以表达为含有两条轻链和两条重链的四聚体，表达为单独的重链、轻链，表达为Fab、Fab'、F(ab')2和Fv，或者表达为单链抗体，其中重链和轻链可变结构域通过间隔子连接。
在一些实施方案中，主题抗体在羧基末端包含游离巯基(-SH)基团，其中所述游离巯基可以用于将所述抗体附接至第二多肽(例如，另一种抗体，包括主题抗体)、支架、载体等。
主题抗体可以使用例如戊二醛、同双功能交联剂或异双功能交联剂与第二部分(例如，脂质、除主题抗体以外的多肽、合成聚合物、碳水化合物、毒素等)共价连接。戊二醛经由多肽的氨基部分使多肽交联。同双功能交联剂(例如，同双功能亚氨酸酯、同双功能N-羟基琥珀酰亚胺基(NHS)酯或同双功能巯基反应性交联剂)含有两个或更多个相同的反应性部分，并且可以用于一步反应程序中，其中将所述交联剂添加至含有待连接的多肽的混合物的溶液中。同双功能NHS酯和亚氨酸酯使含有胺的多肽交联。在温和的碱性pH下，亚氨酸酯仅与伯胺反应形成亚氨酰胺(imidoamide)，并且交联的多肽的总电荷不受影响。同双功能巯基反应性交联剂包括双马来酰亚胺己烷(BMH)、1,5-二氟-2,4-二硝基苯(DFDNB)和1,4-双[3-(2-吡啶基二硫代)丙酰胺基]丁烷(DPDPB)。
组合物和配制品
本公开文本提供了包含主题抗体的组合物。主题抗体组合物除主题抗体之外还可以包含以下中的一种或多种：盐，例如NaCl、MgCl2、KCl、MgSO4等；缓冲剂，例如Tris缓冲液、组氨酸缓冲液、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-(2-乙磺酸)(HEPES)、2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)、2-(N-吗啉代)乙磺酸钠盐(MES)、3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOPS)、N-三[羟甲基]甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)等；增溶剂；洗涤剂，例如非离子型洗涤剂如Tween-20等；蛋白酶抑制剂；甘油；等等。
本公开文本的组合物还包括包含本文所述的抗体的药物组合物。一般而言，配制品包含有效量的主题抗体。“有效量”意指足以产生所需结果的剂量，所述所需结果例如受试者的癌症的减轻、受试者的癌症的生长速率的降低、癌症症状的改善等。通常，所需结果至少是与对照相比癌症症状的减轻、癌症生长的减缓、癌症大小的减小等。可以以避免血脑屏障的方式递送或配制主题抗体。
在一些情况下，抗体可以包含递送增强剂，包括其中此类增强剂可以促进血脑屏障的跨越、增加的渗透性，例如从而允许高效的透皮递送等。
在一些情况下，可以不在具有递送增强剂的配制品中施用本公开文本的抗体。在一些情况下，本公开文本的抗体本身可以增强穿过血脑屏障的渗透性。在一些情况下，本公开文本的抗体可以用作递送增强剂以促进抗肿瘤剂(例如免疫治疗剂或化学治疗剂)穿过血脑屏障。在一些情况下，本公开文本的抗体可以用作递送增强剂以促进活性剂(如另一种抗体或化学治疗剂)穿过血脑屏障、血脑脊液(CSF)屏障、血睾屏障或血胎盘屏障。
在主题方法中，可以使用能够产生所需的治疗效果或诊断效果的任何便利手段向宿主施用主题抗体。因此，所述药剂可以被掺入多种用于治疗性施用的配制品中。更具体地，主题抗体可以通过与适当的药学上可接受的载体或稀释剂组合而被配制成药物组合物，并且可以被配制成呈固体、半固体、液体或气体形式的制剂，如片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、软膏、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂和气雾剂。
在药物剂型中，主题抗体可以与药学上可接受的赋形剂结合施用，或者它们还可以单独或与其他药学活性化合物适当联合以及组合使用。以下方法和赋形剂仅仅是示例性的，而决不是限制性的。
可以通过以下方式将主题抗体配制成注射用制剂：将所述主题抗体溶解、悬浮或乳化在水性或非水性溶剂(如植物油或其他类似的油、合成脂肪酸甘油酯、高级脂肪酸酯或丙二醇)中；并且如果需要的话，与常规添加剂(如增溶剂、等渗剂、助悬剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂)一起配制。
通过将具有所需纯度的抗体与任选的生理上可接受的载体、赋形剂、稳定剂、表面活性剂、缓冲剂和/或张力剂混合来制备包含主题抗体的药物组合物。可接受的载体、赋形剂和/或稳定剂在所采用的剂量和浓度下对受体无毒，并且包括缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸、谷胱甘肽、半胱氨酸、甲硫氨酸和柠檬酸；防腐剂(如乙醇、苯甲醇、苯酚、间甲酚、对氯间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯或丙酯、苯扎氯铵或其组合)；氨基酸，如精氨酸、甘氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、脯氨酸及其组合；单糖、二糖和其他碳水化合物；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如明胶或血清白蛋白；螯合剂，如EDTA；糖，如海藻糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖、甘露糖、麦芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、葡糖胺、N-甲基葡糖胺、半乳糖胺和神经氨酸；和/或非离子型表面活性剂，如Tween、Brij、Pluronic、Triton-X或聚乙二醇(PEG)。
所述药物组合物可以呈液体形式、冻干形式或从冻干形式重构的液体形式，其中所述冻干制剂在施用之前用无菌溶液重构。
主题药物组合物中的示例性抗体浓度的范围可以是从约1mg/mL至约200mg/ml、或从约50mg/mL至约200mg/mL、或从约150mg/mL至约200mg/mL。
所述抗体的水性配制品可以在pH缓冲溶液中，例如在范围从约4.0至约7.5、或从约5.0至约6.0、或可替代地约5.5的pH下制备。适合于此范围内的pH的缓冲液的例子包括磷酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液和其他有机酸缓冲液。缓冲液浓度可以是约1mM至约100mM或约5mM至约50mM，这取决于例如缓冲液和配制品的所需张力。
在一些实施方案中，所述水性配制品是等渗的，但高渗或低渗溶液可能是合适的。术语“等渗”表示具有与其比较的某些其他溶液(如生理盐溶液或血清)相同张力的溶液。可以以约5mM至约350mM的量，例如以100mM至350nM的量使用张力剂。
还可以将表面活性剂添加至所述抗体配制品中以减少配制的抗体的聚集和/或最小化所述配制品中颗粒的形成和/或减少吸附。示例性的表面活性剂包括聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯(Tween)、聚氧乙烯烷基醚(Brij)、烷基苯基聚氧乙烯醚(Triton-X)、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(泊洛沙姆、Pluronic)和十二烷基硫酸钠(SDS)。表面活性剂的示例性浓度的范围可以是从约0.001％至约1％w/v。
还可以添加冻干保护剂，以保护不稳定的活性成分(例如蛋白质)在冻干过程期间免受去稳定条件的影响。例如，已知的冻干保护剂包括糖(包括葡萄糖和蔗糖)；多元醇(包括甘露醇、山梨醇和甘油)；和氨基酸(包括丙氨酸、甘氨酸和谷氨酸)。冻干保护剂可以以约10mM至500nM的量被包含。
在一些实施方案中，主题配制品包含主题抗体和一种或多种以上鉴定的药剂(例如，表面活性剂、缓冲剂、稳定剂、张力剂)，并且基本上不含一种或多种防腐剂，如乙醇、苯甲醇、苯酚、间甲酚、对氯间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯或丙酯、苯扎氯铵及其组合。在其他实施方案中，在所述配制品中包含防腐剂，例如浓度范围为约0.001％至约2％(w/v)。
例如，主题配制品可以是适合于肠胃外施用的液体或冻干配制品，并且可以包含：约1mg/mL至约200mg/mL的主题抗体；约0.001％至约1％的至少一种表面活性剂；约1mM至约100mM的缓冲剂；任选的约10mM至约500mM的稳定剂；和约5mM至约305mM的张力剂；并且具有约4.0至约7.0的pH。
主题抗体可以用于待经由吸入施用的气雾剂配制品中。可以将主题抗体配制在加压的可接受的推进剂(如二氯二氟甲烷、丙烷、氮等)中。
如本文所用，术语“单位剂型”是指适合作为人和动物受试者的单位剂量的物理上离散的单位，每个单位含有经计算足以产生所需效果的量的预定量的本发明的化合物以及药学上可接受的稀释剂、载体或媒介物。主题抗体的规格可以取决于所采用的特定抗体和待实现的效果以及在宿主中与每种抗体相关的药效动力学。
主题抗体可以作为可注射配制品来施用。通常，可注射组合物被制备为液体溶液或悬浮液；还可以制备适合于在注射前溶解或悬浮于液体媒介物中的固体形式。也可以乳化所述制剂或将所述抗体封装在脂质体媒介物中。
合适的赋形剂媒介物是例如水、盐水、右旋糖、甘油、乙醇等及其组合。另外(如果需要的话)，所述媒介物可以含有少量的辅助物质，如润湿剂或乳化剂或pH缓冲剂。制备此类剂型的实际方法是本领域技术人员已知的或应是本领域技术人员清楚的。
所述药学上可接受的赋形剂(如媒介物、佐剂、载体或稀释剂)对公众而言易于得到。此外，药学上可接受的辅助物质(如pH调节剂和缓冲剂、张力调节剂、稳定剂、润湿剂等)对公众而言易于得到。
在一些实施方案中，将主题抗体配制成控制释放配制品。可以使用本领域熟知的方法制备持续释放制剂。
剂量
合适的剂量可以由主治医师或其他有资格的医务人员根据各种临床因素来确定。如在医学领域中熟知的，对于任何一名患者的剂量取决于许多因素，包括患者的体型、体表面积、年龄、待施用的特定化合物、患者的性别、施用时间和途径、一般健康状况和正在同时施用的其他药物。主题抗体可以以在每剂1ng/kg体重与20mg/kg体重之间(例如在0.1mg/kg体重至10mg/kg体重之间，例如在0.5mg/kg体重至5mg/kg体重之间)的量施用；然而，设想了低于或高于该示例性范围的剂量，尤其在考虑到上述因素的情况下。如果方案是连续输注，则也可以在每公斤体重每分钟1μg至10mg的范围内。
技术人员应容易理解，剂量水平可以根据特定抗体、症状的严重性和受试者对副作用的易感性而变化。给定化合物的优选剂量可由本领域技术人员通过多种方式容易地确定。
除了基于体型的给药方案，鉴于体型对单克隆抗体的分布和消除的相对较小的影响，还考虑了主题抗体的固定剂量施用。参见例如，Hendrikx等人,Oncologist 2017,22(10):1212-1221。
施用途径
使用适合于药物递送的任何可用方法和途径(包括体内和离体方法以及全身和局部施用途径)向个体施用主题抗体。
常规且药学上可接受的施用途径包括鼻内、肌内、气管内、皮下、皮内、外用施加、静脉内、动脉内、直肠、鼻腔、口服和其他肠内和肠胃外施用途径。如果需要的话，施用途径可以进行组合，或者根据抗体和/或所需的效果进行调整。可以将主题抗体组合物以单剂量或以多剂量来施用。在一些实施方案中，口服施用主题抗体组合物。在一些实施方案中，经由吸入途径施用主题抗体组合物。在一些实施方案中，鼻内施用主题抗体组合物。在一些实施方案中，局部施用主题抗体组合物。在一些实施方案中，颅内施用主题抗体组合物。在一些实施方案中，静脉内施用主题抗体组合物。
可以使用适合于递送常规药物的任何可用的常规方法和途径(包括全身或局部途径)向宿主施用所述药剂。一般而言，本发明考虑的施用途径包括但不必限于肠内、肠胃外或吸入途径。
除吸入施用以外的肠胃外施用途径包括但不必限于外用、透皮、皮下、肌内、眶内、囊内、脊柱内、胸骨内和静脉内途径，即除通过消化道以外的任何施用途径。可以进行肠胃外施用以实现主题抗体的全身或局部递送。在需要全身递送的情况下，施用通常涉及药物制剂的侵入性的或全身性吸收的外用或粘膜施用。
还可以通过肠内施用将主题抗体递送至受试者。肠内施用途径包括但不必限于口服和直肠(例如，使用栓剂)递送。
通常通过静脉内输注或通过肠胃外(静脉内、皮下、肌内或皮内)注射，优选通过静脉内输注或注射，或通过皮下注射来施用主题抗体。尤其是对于长期接受治疗的患者来说，皮下施用具有显著的益处。此类益处包括患者便利、较短的递送时间以及不需要专用输注设施。因此，皮下配制品和递送可以改善患者的便利性和生活质量，并且为医疗保健系统节省成本。皮下施用在组合疗法中可能特别有益，例如使用皮下固定剂量组合，所述组合含有在同一配制品中共同配制的两种或更多种活性分子。可替代地，多室装置可以将产品依序注射或在皮下注射前将它们直接预混合。更多细节参见例如，Bittner等人,BioDrugs2018,32:425-440；和Viola等人,J Control Release 2018,286:301-314。
治疗意指至少改善与困扰宿主的病理学病症相关的症状，其中在广义上使用的改善是指至少减少与所治疗的病理学病症(如癌症和/或癌症的生长和与其相关的疼痛)相关的参数(例如症状)的量值。因此，治疗还包括以下情形，其中病理学病症或至少与其相关的症状被完全抑制，例如防止发生，或停止，例如终止，使得宿主不再患有所述病理学病症或至少表征所述病理学病症的症状。
可以根据本文公开的方法对多个受试者(其中术语“受试者”在本文中与术语“个体”和“患者”可互换使用)进行治疗。通常，此类受试者是“哺乳动物”(“mammal”或“mammalian”)，其中这些术语被广泛用于描述哺乳纲中的生物，包括食肉目(例如，狗和猫)、啮齿目(例如，小鼠、豚鼠和大鼠)和灵长目(例如，人、黑猩猩和猴)。在一些实施方案中，所述宿主将是人。
提供了具有单位剂量的主题抗体(例如以口服或可注射剂量的形式)的试剂盒。在一些实施方案中，除所述单位剂量之外，所述容器还含有描述所述抗体在治疗目标病理学病症中的用途和伴随的益处的信息性包装插页。
核酸
本公开文本提供了包含编码主题抗体的核苷酸序列的核酸。编码主题抗体的核苷酸序列可以与一种或多种调节元件(如启动子和增强子)可操作地连接，所述一种或多种调节元件允许所述核苷酸序列在预期的靶细胞(例如，经基因修饰以合成和/或分泌所编码的抗体的细胞)中表达。
合适的启动子和增强子元件是本领域已知的。对于在细菌细胞中的表达，合适的启动子包括但不限于lacI、lacZ、T3、T7、gpt、λP和trc。对于在真核细胞中的表达，合适的启动子包括但不限于轻链和/或重链免疫球蛋白基因启动子和增强子元件；巨细胞病毒立即早期启动子；单纯疱疹病毒胸苷激酶启动子；早期和晚期SV40启动子；存在于来自逆转录病毒的长末端重复序列中的启动子；小鼠金属硫蛋白-I启动子；以及各种本领域已知的组织特异性启动子。
编码主题抗体的核苷酸序列可以存在于表达载体和/或克隆载体中。在主题抗体包含两种或更多种单独的多肽的情况下，编码这两种多肽的核苷酸序列可以在相同或单独的载体中克隆。可以使用各种策略从单个核酸或单一载体表达单独的多肽，所述各种策略如单独的启动子、一个或多个内部核糖体进入位点(IRES)、一个或多个自切割序列(例如2A切割序列，例如P2A、T2A、E2A和F2A)、其组合等。表达载体可以包含可选择的标记物、复制起点以及提供所述载体的复制和/或维持的其他特征。
本领域技术人员已知大量合适的载体和启动子；许多可商购用于产生主题重组构建体。通过举例的方式提供了以下载体。细菌的：pBs、phagescript、PsiX174、pBluescriptSK、pBs KS、pNH8a、pNH16a、pNH18a、pNH46a(Stratagene，美国加利福尼亚州拉荷亚)；pTrc99A、pKK223-3、pKK233-3、pDR540和pRIT5(Pharmacia，瑞典乌普萨拉)。真核的：pWLneo、pSV2cat、pOG44、PXR1、pSG(Stratagene)、pSVK3、pBPV、pMSG和pSVL(Pharmacia)。
表达载体通常具有位于启动子序列附近的便利的限制位点，以提供编码异源蛋白质的核酸序列的插入。可以存在在表达宿主中有效的可选择的标记物。合适的表达载体包括但不限于病毒载体(例如基于以下的病毒载体：痘苗病毒；脊髓灰质炎病毒；腺病毒；腺相关病毒；SV40；单纯疱疹病毒；人类免疫缺陷病毒；逆转录病毒载体(例如，鼠白血病病毒、脾坏死病毒和源自如以下的逆转录病毒的载体：劳斯肉瘤病毒、哈维肉瘤病毒、禽白血病病毒、人类免疫缺陷病毒、骨髓增生性肉瘤病毒和乳腺瘤病毒)；等。
在一些情况下，可以例如通过使细胞与核酸接触而将所述核酸(例如，如本文所述)引入所述细胞中。引入了核酸的细胞在本文中将通常称为经基因修饰的细胞。可以采用各种核酸递送方法，包括但不限于例如裸核酸递送、病毒递送、化学转染、基因枪法等。
细胞
本公开文本提供了用主题核酸进行基因修饰的分离的经基因修饰的细胞(例如，体外细胞、离体细胞、经培养的细胞等)。在一些实施方案中，主题分离的经基因修饰的细胞可以产生主题抗体。在一些情况下，经基因修饰的细胞可以将抗体例如递送至有需要的受试者。在一些情况下，经基因修饰的细胞可以用于多特异性抗体的产生、筛选和/或发现。
合适的细胞包括真核细胞，如哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞；以及原核细胞，如细菌细胞。可以例如通过磷酸钙沉淀、DEAE葡聚糖介导的转染、脂质体介导的转染、电穿孔或其他已知方法来实现将主题核酸引入所述宿主细胞中。
合适的哺乳动物细胞包括原代细胞和永生化细胞系。合适的哺乳动物细胞系包括人细胞系、非人灵长类动物细胞系、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠)细胞系等。合适的哺乳动物细胞系包括但不限于HeLa细胞、CHO细胞、293细胞、3T3细胞、Vero细胞、Huh-7细胞、BHK细胞、PC12细胞、COS细胞、COS-7细胞、RAT1细胞、小鼠L细胞、人胚胎肾(HEK)细胞、HLHepG2细胞等。
在一些情况下，有用的哺乳动物细胞可以包括源自哺乳动物组织或器官的细胞。在一些情况下，所采用的细胞是肾细胞，包括例如已建立的肾细胞系的肾细胞，如HEK 293T细胞。
在一些情况下，本公开文本的细胞可以是免疫细胞。如本文所用，术语“免疫细胞”通常包括源自骨髓中产生的造血干细胞(HSC)的白血细胞(白细胞)。“免疫细胞”包括例如淋巴细胞(T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞)和髓源性细胞(嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突细胞)。“T细胞”包括表达CD3的所有类型的免疫细胞，包括辅助性T细胞(CD4+细胞)、细胞毒性T细胞(CD8+细胞)、调节性T细胞(Treg)和γ-δT细胞。“细胞毒性细胞”包括CD8+T细胞、自然杀伤(NK)细胞和嗜中性粒细胞，所述细胞能够介导细胞毒性反应。
在一些情况下，表达抗体如本公开文本的多特异性抗体的有用细胞可以包括生产T细胞。在一些情况下，可以采用经工程化以包含编码本公开文本的抗体的核酸序列的生产T细胞将所述抗体递送至有需要的受试者。
在一些情况下，本公开文本的免疫细胞包括包含嵌合抗原受体(CAR)的免疫效应细胞，所述嵌合抗原受体包含MDR1结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中所述MDR1结合结构域包含表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区(HCDR)和轻链CDR(LCDR)。在一方面，细胞内信号传导结构域可以包括源自至少一种共刺激分子(例如4-1BB(即CD137)、CD27和/或CD28)的一个或多个功能性信号传导结构域。细胞内信号传导结构域可以包括源自共刺激分子的功能信号传导结构域和源自刺激分子的功能信号传导结构域。
免疫效应细胞可以是T细胞。免疫效应细胞可以是自体细胞。
方法
如上所总结，本公开文本的方法包括使细胞与本公开文本的抗体接触的方法、根据涉及向受试者施用本公开文本的抗体的方法治疗所述受试者的方法、制备本申请中描述的元件(包括例如抗体、多特异性抗体、双特异性抗体分子、组合物和配制品、核酸、表达载体、细胞等)的方法。
如上所总结，本公开文本的方法包括使癌细胞与本公开文本的抗体接触，例如，以检测MDR1在癌细胞上的表达、测量MDR1在癌细胞上的表达水平或促进和/或增强癌细胞的杀伤。在一些情况下，对癌细胞的杀伤是由免疫应答或免疫细胞作用于与抗体结合的癌细胞介导的。在一些情况下，对癌细胞的杀伤是由例如由于所述抗体对MDR1抑制导致的对癌细胞的细胞外排的抑制来介导的。在一些情况下，对癌细胞的杀伤是由抑制癌细胞的细胞外排加免疫介导的应答(例如，经由抗体的Fc区)的组合介导的。在一些情况下，与所述多特异性抗体接触的细胞可以是多药耐药性癌细胞。涉及使癌细胞与本公开文本的抗体接触的方法可以包括或可以不包括使癌细胞与另外的疗法或活性剂(包括例如化学治疗剂、免疫疗法、放射疗法等)接触。
例如与在不存在所述多特异性抗体的情况下对癌细胞的杀伤水平相比，使癌细胞与本公开文本的多特异性抗体接触将通常增强对癌细胞的杀伤。在一些情况下，在采用另外的活性剂的情况下，可以观察到与仅使用所述另外的活性剂观察到的杀伤水平相比增强的对癌细胞的杀伤。可归因于所述多特异性抗体的癌细胞杀伤的增强的量将变化，并且范围可以是癌细胞杀伤增加至少5％至增加至少90％或更多，包括但不限于例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％等。此类增加可以和仅与一种或多种另外的活性剂接触进行比较。
可以通过多种手段来评估增强的对癌细胞的杀伤，所述多种手段包括但不限于例如观察性研究、基于细胞的体外细胞毒性测定、流式细胞术、细胞活力标记(例如，使用一种或多种细胞活力染色剂)等。
治疗方法
本公开文本提供了治疗癌症特别是表达MDR1或过表达MRD1的癌症的方法，所述方法通常涉及向有需要的个体(例如，患有这种癌症的个体)单独(例如，在单一疗法中)或与一种或多种另外的治疗剂组合(例如，在组合疗法中)施用有效量的如本文提供的抗体。本公开文本的抗体的施用可以通过任何便利且适当的递送途径进行。
因此，施用包括但不限于例如通过注射递送抗体、通过输注递送抗体、递送编码抗体的核酸或表达载体、通过向受试者施用表达和分泌抗体的细胞来递送所述抗体、递送在细胞表面表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫效应细胞(例如，CAR-T细胞)，所述嵌合抗原受体包含MDR1结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中所述MDR1结合结构域包含表2中所列抗体的一对VH区和VL区的HCDR和LCDR等。药剂、编码药剂的核酸、表达药剂的细胞等的施用可以包括与所述药剂接触、与所述核酸接触、与所述细胞接触等。
在一些实施方案中，主题抗体的有效量是如下量，与在未用所述抗体治疗的情况下不利症状的严重性相比，所述量当以一个或多个剂量单独(例如，在单一疗法中)或与一种或多种另外的治疗剂组合(例如，在组合疗法中)施用时将癌症的不利症状有效减轻至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或更多。
在一些实施方案中，主题抗体的有效量是如下量，所述量当以一个或多个剂量单独(例如，在单一疗法中)或与一种或多种另外的治疗剂组合(例如，在组合疗法中)施用时有效改善所治疗的个体的癌症，即减缓癌症的生长、停止癌症的生长、逆转癌症的生长、杀伤癌细胞(包括肿瘤细胞等)。例如，与未用所述抗体治疗的情况相比，主题抗体的有效量可以将个体的癌症生长速率降低或将癌症大小减小至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％或更多。
在一些情况下，受试者可以进行全身治疗，包括在用或未用一种或多种另外的试剂的情况下用主题抗体。如本文所用，“全身治疗”意指并非仅针对靶标特定肿瘤(例如像原发性肿瘤或定义的继发性肿瘤)或含有特定癌症的组织(例如像，在肝癌的情况下的肝脏、在血液癌症的情况下的血液等)的治疗。全身治疗将通常针对受试者的整个身体，并且可以包括但不限于例如全身放射疗法、全身化学疗法、全身免疫疗法、其组合等。
在一些情况下，受试者可以进行局部治疗，包括在用或未用一种或多种另外的试剂的情况下用主题抗体。如本文所用，“局部治疗”是指明确针对肿瘤(例如像原发性肿瘤或定义的继发性肿瘤)的位置或明确针对含有癌症的组织(例如像，在肝癌的情况下的肝脏、在血液癌症的情况下的血液等)的治疗。在一些情况下，局部治疗也可以以影响肿瘤周围环境(如肿瘤周围的组织，如紧邻肿瘤的组织)的方式来施用。局部治疗将通常不影响或不靶向远离癌症部位(包括肿瘤部位，如原发性肿瘤)的组织。除主题抗体之外或与主题抗体组合施用的有用的局部治疗例如包括但不限于手术、局部放射疗法、局部冷冻疗法、局部激光疗法、局部外用疗法、其组合等。
在一些实施方案中，主题治疗方法涉及施用主题抗体和一种或多种另外的治疗剂。合适的另外的治疗剂包括但不限于化学治疗剂、放射疗法试剂、免疫疗法试剂、其他抗体或多特异性抗体药剂等。可在主题施用本公开文本的多特异性抗体之前、期间或之后施用至受试者的另外的疗法将根据多种因素而变化，所述多种因素包括例如癌症的类型、受试者的病史、一般健康状况和/或任何共病等。有用的癌症疗法包括但不限于例如放射疗法、化学疗法、免疫疗法等。
放射疗法包括但不限于从外部施加的源(如束)或通过植入小放射源递送的x射线或γ射线。
用于癌症治疗的合适抗体包括但不限于裸抗体，例如曲妥珠单抗(Herceptin)、贝伐单抗(AvastinTM)、西妥昔单抗(ErbituxTM)、帕尼单抗(VectibixTM)、伊匹单抗(YervoyTM)、利妥昔单抗(Rituxan)、阿仑单抗(LemtradaTM)、奥法木单抗(ArzerraTM)、奥戈伏单抗(OvaRexTM)、兰洛利珠单抗(Lambrolizumab)(MK-3475)、帕妥珠单抗(PerjetaTM)、兰尼单抗(LucentisTM)等；以及缀合的抗体，例如吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)(MylortargTM)、维汀-布仑妥昔单抗(Brentuximab vedotin)(AdcetrisTM)、90Y标记的替伊莫单抗(ZevalinTM)、131I标记的托西莫单抗(BexxarTM)等。
用于癌症治疗的合适抗体还包括但不限于针对肿瘤相关抗原产生的抗体。此类抗原包括但不限于CD20、CD30、CD33、CD52、EpCAM、CEA、gpA33、粘蛋白、TAG-72、CAIX、PSMA、叶酸结合蛋白、神经节苷脂(例如，GD2、GD3、GM2等)、Ley、VEGF、VEGFR、整合素α-V-β-3、整合素α-5-β-1、EGFR、ERBB2、ERBB3、MET、IGF1R、EPHA3、TRAILR1、TRAILR2、RANKL、FAP、生腱蛋白、程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)、雄激素受体(AR)、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)、BCR-Abl、c-kit、PIK3CA、EML4-ALK、KRAS、ALK、ROS1、AKT1、BRAF、MEKJ、MEK2、NRAS、RAC1、ESR1、CTLA-4、LAG-3和TIM-3等。这些抗体可以作为与本文提供的抗MDR1抗体的组合疗法施用，或作为包含这些抗体中的一种的至少抗原结合部分和本文提供的抗MDR1抗体的抗原结合部分的多特异性抗体施用。
常规癌症疗法还包括癌症的靶向疗法，包括但不限于例如，靶向HER2(ERBB2/neu)的恩美曲妥珠单抗(Ado-trastuzumab emtansine)(Kadcyla)(被批准用于乳腺癌)；靶向EGFR(HER1/ERBB1)、HER2(ERBB2/neu)的阿法替尼(Gilotrif)(被批准用于非小细胞肺癌)；靶向阿迪白介素(Proleukin)(被批准用于肾细胞癌、黑色素瘤)；靶向ALK的艾乐替尼(Alecensa)(被批准用于非小细胞肺癌)；靶向CD52的阿仑妥珠单抗(Campath)(被批准用于B细胞慢性淋巴细胞性白血病)；靶向PD-L1的阿特利珠单抗(Tecentriq)(被批准用于尿路上皮癌、非小细胞肺癌)；靶向PD-L1的阿维鲁单抗(Bavencio)(被批准用于默克尔细胞癌)；靶向KIT、PDGFRβ、VEGFR1/2/3的阿昔替尼(Inlyta)(被批准用于肾细胞癌)；靶向BAFF的贝利木单抗(Benlysta)(被批准用于红斑狼疮)；靶向HDAC的贝诺司他(Beleodaq)(被批准用于外周T细胞淋巴瘤)；靶向VEGF配体的贝伐单抗(Avastin)(被批准用于宫颈癌、结直肠癌、输卵管癌、胶质母细胞瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、腹膜癌、肾细胞癌)；靶向CD19/CD3的布利妥莫单抗(Blincyto)(被批准用于急性成淋巴细胞性白血病(前体B细胞))；靶向蛋白酶体的硼佐替米(Velcade)(被批准用于多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤)；靶向ABL的柏舒替尼(Bosulif)(被批准用于慢性髓细胞性白血病)；靶向CD30的维汀-布仑妥昔单抗(Adcetris)(被批准用于霍奇金淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤)；靶向ALK的布利替尼(Alunbrig)(被批准用于非小细胞肺癌(ALK+))；靶向FLT3、KIT、MET、RET、VEGFR2的卡赞替尼(Cabometyx、Cometriq)(被批准用于甲状腺髓样癌、肾细胞癌)；靶向蛋白酶体的卡非佐米(Kyprolis)(被批准用于多发性骨髓瘤)；靶向ALK的塞利替尼(Zykadia)(被批准用于非小细胞肺癌)；靶向EGFR(HER1/ERBB1)的塞妥昔单抗(Erbitux)(被批准用于结直肠癌、头颈部鳞状细胞癌)；靶向MEK的卡比替尼(Cotellic)(被批准用于黑色素瘤)；靶向ALK、MET、ROS1的克佐替尼(Xalkori)(被批准用于非小细胞肺癌)；靶向BRAF的达拉非尼(Tafinlar)(被批准用于黑色素瘤、非小细胞肺癌)；靶向CD38的达雷妥木单抗(Darzalex)(被批准用于多发性骨髓瘤)；靶向ABL的达沙替尼(Sprycel)(被批准用于慢性髓细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病)；靶向RANKL的迪诺舒单抗(Xgeva)(被批准用于骨巨细胞瘤)；靶向B4GALNT1(GD2)的地努妥昔单抗(Unituxin)(被批准用于儿童神经母细胞瘤)；靶向PD-L1的度伐鲁单抗(Imfinzi)(被批准用于尿路上皮癌)；靶向SLAMF7(CS1/CD319/CRACC)的依洛妥珠单抗(Empliciti)(被批准用于多发性骨髓瘤)；靶向IDH2的依那德尼(Idhifa)(被批准用于急性髓性白血病)；靶向EGFR(HER1/ERBB1)的厄洛替尼(Tarceva)(被批准用于非小细胞肺癌、胰腺癌)；靶向mTOR的依罗莫司(Afinitor)(被批准用于胰腺肿瘤、胃肠道肿瘤或肺源性神经内分泌肿瘤、肾细胞癌、不可切除的室管膜下巨细胞星形细胞瘤、乳腺癌)；靶向EGFR(HER1/ERBB1)的格非替尼(Iressa)(被批准用于非小细胞肺癌)；靶向CD20的替坦-艾瑞妥莫单抗(Zevalin)(被批准用于非霍奇金淋巴瘤)；靶向BTK的艾卢替尼(Imbruvica)(被批准用于套细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、华氏巨球蛋白血症)；靶向PI3Kδ的艾拉利司(Zydelig)(被批准用于慢性淋巴细胞性白血病、滤泡性B细胞非霍奇金淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤)；靶向KIT、PDGFR、ABL的伊马替尼(Gleevec)(被批准用于GI间质瘤(KIT+)、隆突性皮肤纤维肉瘤、多种血液恶性肿瘤)；靶向CTLA-4的伊匹单抗(Yervoy)(被批准用于黑色素瘤)；靶向蛋白酶体的艾沙佐米(Ninlaro)(被批准用于多发性骨髓瘤)；靶向HER2(ERBB2/neu)、EGFR(HER1/ERBB1)的拉帕替尼(Tykerb)(被批准用于乳腺癌(HER2+))；靶向VEGFR2的仑伐替尼(Lenvima)(被批准用于肾细胞癌、甲状腺癌)；靶向FLT3的米多滔林(Rydapt)(被批准用于急性髓性白血病(FLT3+))；靶向EGFR(HER1/ERBB1)的奈西妥木单抗(Portrazza)(被批准用于鳞状非小细胞肺癌)；靶向HER2(ERBB2/neu)的奈雷替尼(Nerlynx)(被批准用于乳腺癌)；靶向ABL的尼洛替尼(Tasigna)(被批准用于慢性髓细胞性白血病)；靶向PARP的尼雷帕利(Zejula)(被批准用于卵巢癌、输卵管癌、腹膜癌)；靶向PD-1的纳武单抗(Opdivo)(被批准用于结直肠癌、头颈鳞状细胞癌、霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾细胞癌、尿路上皮癌)；靶向CD20的奥比妥珠单抗(Gazyva)(被批准用于慢性淋巴细胞性白血病、滤泡性淋巴瘤)；靶向CD20的奥法妥木单抗(Arzerra、HuMax-CD20)(被批准用于慢性淋巴细胞性白血病)；靶向PARP的奥拉帕利(Lynparza)(被批准用于卵巢癌)；靶向PDGFRα的奥拉妥单抗(Lartruvo)(被批准用于软组织肉瘤)；靶向EGFR的奥希替尼(Tagrisso)(被批准用于非小细胞肺癌)；靶向CDK4、CDK6的帕柏西利(Ibrance)(被批准用于乳腺癌)；靶向EGFR(HER1/ERBB1)的帕尼妥木单抗(Vectibix)(被批准用于结直肠癌)；靶向HDAC的帕诺司他(Farydak)(被批准用于多发性骨髓瘤)；靶向VEGFR、PDGFR、KIT的帕佐帕尼(Votrient)(被批准用于肾细胞癌)；靶向PD-1的派姆单抗(Keytruda)(被批准用于经典霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤、非小细胞肺癌(PD-L1+)、头颈鳞状细胞癌、实体瘤(MSI-H))；靶向HER2(ERBB2/neu)的帕妥珠单抗(Perjeta)(被批准用于乳腺癌(HER2+))；靶向ABL、FGFR1-3、FLT3、VEGFR2的珀那替尼(Iclusig)(被批准用于慢性髓细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病)；靶向VEGFR2的雷姆赛卢单抗(Cyramza)(被批准用于结直肠癌、胃癌或胃食管交界处(GEJ)腺癌、非小细胞肺癌)；靶向KIT、PDGFRβ、RAF、RET、VEGFR1/2/3的瑞拉非尼(Stivarga)(被批准用于结直肠癌、胃肠道间质瘤、肝细胞癌)；靶向CDK4、CDK6的利波西利(Kisqali)(被批准用于乳腺癌(HR+、HER2-))；靶向CD20的瑞妥昔单抗(Rituxan、Mabthera)(被批准用于非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、类风湿性关节炎、肉芽肿性多血管炎)；靶向CD20的瑞妥昔单抗/人透明质酸酶(Rituxan Hycela)(被批准用于慢性淋巴细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤)；靶向HDAC的洛米迪星(Istodax)(被批准用于皮肤T细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤)；靶向PARP的卢卡帕利(Rubraca)(被批准用于卵巢癌)；靶向JAK1/2的卢利替尼(Jakafi)(被批准用于骨髓纤维化)；靶向IL-6的司妥昔单抗(Sylvant)(被批准用于多中心型卡斯尔曼病)；靶向Sipuleucel-T(Provenge)(被批准用于前列腺癌)；靶向Smoothened的索尼地吉(Odomzo)(被批准用于基底细胞癌)；靶向VEGFR、PDGFR、KIT、RAF的索拉非尼(Nexavar)(被批准用于肝细胞癌、肾细胞癌、甲状腺癌)；靶向mTOR的特罗莫司(Torisel)(被批准用于肾细胞癌)；靶向CD20的托司妥莫单抗(Bexxar)(被批准用于非霍奇金淋巴瘤)；靶向MEK的曲美替尼(Mekinist)(被批准用于黑色素瘤、非小细胞肺癌)；靶向HER2(ERBB2/neu)的曲妥珠单抗(Herceptin)(被批准用于乳腺癌(HER2+)、胃癌(HER2+))；靶向EGFR(HER1/ERBB1)、RET、VEGFR2的万迪他尼(Caprelsa)(被批准用于甲状腺髓样癌)；靶向BRAF的维拉非尼(Zelboraf)(被批准用于黑色素瘤)；靶向BCL2的维奈妥拉(Venclexta)(被批准用于慢性淋巴细胞性白血病)；靶向PTCH、Smoothened的维莫德吉(Erivedge)(被批准用于基底细胞癌)；靶向HDAC的沃诺司他(Zolinza)(被批准用于皮肤T细胞淋巴瘤)；靶向PIGF、VEGFA/B的Ziv-阿柏西普(Zaltrap)(被批准用于结直肠癌)；等。这些抗体可以作为与本文提供的抗MDR1抗体的组合疗法施用。
适合于与本公开文本的方法结合使用的生物反应调节剂包括但不限于：(1)酪氨酸激酶(RTK)活性的抑制剂；(2)丝氨酸/苏氨酸激酶活性的抑制剂；(3)肿瘤相关抗原拮抗剂，如与肿瘤抗原特异性结合的抗体；(4)凋亡受体激动剂；(5)白细胞介素-2；(6)干扰素-α；(7)干扰素-γ；(8)集落刺激因子；(9)血管生成的抑制剂；以及(10)肿瘤坏死因子的拮抗剂。
化学治疗剂或抗肿瘤剂是减少癌细胞增殖的非肽(即，非蛋白质)化合物，并且包括细胞毒性剂和细胞抑制剂。化学治疗剂的非限制性例子包括烷化剂(例如亚硝基脲)、抗代谢物(例如甲氨蝶呤)、抗肿瘤抗生素(例如蒽环类)、植物生物碱(例如长春花生物碱、紫杉烷等)、拓扑异构酶抑制剂和类固醇激素。
用于减少细胞增殖的药剂是本领域已知的并且被广泛使用。此类药剂包括烷基化剂，如氮芥、亚硝基脲、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸盐和三氮烯，包括但不限于二氯甲基二乙胺、环磷酰胺(CytoxanTM)、美法仑(左旋苯丙氨酸氮芥)、卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、司莫司汀(甲基-CCNU)、链脲佐菌素、氯脲霉素、乌拉莫司汀、双氯乙基甲胺、异环磷酰胺、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、曲他胺、三亚乙基硫代磷胺(triethylenethiophosphoramine)、白消安、达卡巴嗪和替莫唑胺。
抗代谢剂包括叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂，包括但不限于阿糖胞苷(cytarabine)(CYTOSAR-U)、胞嘧啶阿拉伯糖苷(cytosine arabinoside)、氟尿嘧啶(5-FU)、氟尿苷(FudR)、6-硫鸟嘌呤、6-巯基嘌呤(6-MP)、喷司他丁(pentostatin)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲氨蝶呤、10-炔丙基-5,8-二去氮杂叶酸酯(PDDF、CB3717)、5,8-二去氮杂四氢叶酸(DDATHF)、亚叶酸钙、磷酸氟达拉滨、喷司他丁(pentostatine)和吉西他滨。
合适的天然产物及其衍生物(例如，长春花生物碱、抗肿瘤抗生素、酶、淋巴因子和表鬼臼毒素)包括但不限于Ara-C、紫杉醇
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多西紫杉醇
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脱氧助间型霉素、丝裂霉素C、左旋天冬酰胺酶、硫唑嘌呤；布喹那；生物碱，例如长春新碱、长春碱、长春瑞滨、长春地辛等；鬼臼毒素，例如依托泊苷、替尼泊苷等；抗生素，例如蒽环类、盐酸道诺霉素(daunorubicin)(道诺霉素(daunomycin)、红比霉素、佐柔比星)、伊达比星、多柔比星、表柔比星和吗啉代衍生物等；酚噁腙双环肽(phenoxizone biscyclopeptide)，例如更生霉素；碱性糖肽，例如博来霉素；蒽醌糖苷，例如普卡霉素(光神霉素)；蒽二酮，例如米托蒽醌；氮杂环丙烯并吡咯并吲哚二酮(azirinopyrrolo indoledione)，例如丝裂霉素；大环免疫抑制剂，例如环孢菌素、FK-506(他克莫司、普乐可复)、雷帕霉素等；等等。
其他抗增殖细胞毒性剂是诺维本(navelbene)、CPT-11、阿那曲唑、来曲唑(letrazole)、卡培他滨、雷洛昔芬(reloxafine)、环磷酰胺、异环磷酰胺(ifosamide)和曲洛昔芬(droloxafine)。
具有抗增殖活性的微管影响剂也是适合使用的，并且包括但不限于别秋水仙碱(NSC 406042)、软海绵素B(NSC 609395)、秋水仙碱(NSC 757)、秋水仙碱衍生物(例如，NSC33410)、尾海兔素(dolstatin)10(NSC 376128)、美登素(NSC 153858)、利索新(rhizoxin)(NSC 332598)、紫杉醇
Figure BDA0003771923880000833
Figure BDA0003771923880000834
衍生物、多西紫杉醇
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硫代秋水仙碱(NSC 361792)、三苯甲基半胱氨酸(trityl cysterin)、硫酸长春碱、硫酸长春新碱、天然和合成的埃博霉素(包括但不限于埃博霉素A、埃博霉素B)、圆皮海绵内酯；雌莫司汀、诺考达唑等。
适合使用的激素调节剂和类固醇(包括合成类似物)包括但不限于肾上腺皮质类固醇，例如泼尼松、地塞米松等；雌激素和孕激素(pregestin)，例如己酸羟孕酮、醋酸甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、雌二醇、克罗米芬、他莫西芬等；和肾上腺皮质抑制剂，例如氨鲁米特；17α-乙炔基雌二醇；己烯雌酚、睾酮、氟羟甲睾酮、屈他雄酮丙酸酯、睾内酯、甲基泼尼松龙、甲基-睾酮、泼尼松龙、去炎松、氯烯雌醚、羟孕酮、氨鲁米特、雌莫司汀、醋酸甲羟孕酮、亮丙瑞林、氟他胺(Drogenil)、托瑞米芬(Fareston)和诺雷德。雌激素刺激增殖和分化，因此与雌激素受体结合的化合物被用于阻断这种活性。皮质类固醇可以抑制T细胞增殖。
其他化学治疗剂包括金属络合物，例如顺铂(顺式-DDP)、卡铂等；脲，例如羟基脲；和肼，例如N-甲基肼；表鬼臼毒素(epidophyllotoxin)；拓扑异构酶抑制剂；丙卡巴肼；米托蒽醌；亚叶酸钙；替加氟等。其他感兴趣的抗增殖剂包括免疫抑制剂，例如霉酚酸、沙利度胺、脱氧斯格埃林(desoxyspergualin)、氮杂孢菌素(azasporine)、来氟米特、咪唑立宾、氮杂螺烷(SKF 105685)；
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(ZD 1839、4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-吗啉基)丙氧基)喹唑啉)等。
“紫杉烷”包括紫杉醇以及任何活性紫杉烷衍生物或前药。“紫杉醇”(其在本文中应当被理解为包括类似物、配制品和衍生物，例如像多西紫杉醇、TAXOLTM、TAXOTERETM(多西紫杉醇的配制品)、紫杉醇的10-去乙酰基类似物和紫杉醇的3'N-去苯甲酰基-3'N-叔丁氧基羰基类似物)可以利用本领域技术人员已知的技术容易地制备(还参见WO 94/07882、WO94/07881、WO 94/07880、WO 94/07876、WO 93/23555、WO 93/10076；美国专利号5,294,637；5,283,253；5,279,949；5,274,137；5,202,448；5,200,534；5,229,529；和EP 590,267)，或从各种商业来源获得，所述商业来源包括例如密苏里州圣路易斯的Sigma Chemical Co.(来自短叶红豆杉(Taxus brevifolia)的T7402或来自云南红豆杉(Taxus yannanensis)的T-1912)。
紫杉醇应当被理解为不仅是指紫杉醇的常见化学可用形式，也指类似物和衍生物(例如，TaxotereTM多西紫杉醇，如上所述)和紫杉醇缀合物(例如，Abraxane(白蛋白结合型)、紫杉醇-PEG、紫杉醇-葡聚糖或紫杉醇-木糖)。
术语“紫杉烷”内还包括多种已知的衍生物，包括亲水性衍生物和疏水性衍生物二者。紫杉烷衍生物包括但不限于国际专利申请号WO 99/18113中描述的半乳糖和甘露糖衍生物；WO 99/14209中描述的哌嗪子基及其他衍生物；WO 99/09021、WO 98/22451和美国专利号5,869,680中描述的紫杉烷衍生物；WO 98/28288中描述的6-硫代衍生物；美国专利号5,821,263中描述的亚磺酰胺衍生物；以及美国专利号5,415,869中描述的泰素衍生物。紫杉烷衍生物还包括紫杉醇的前药，包括但不限于WO 98/58927；WO 98/13059；以及美国专利号5,824,701中描述的那些。
有用的免疫疗法包括：抗PD-1/PD-L1免疫疗法和/或其他免疫疗法靶标，例如像可在治疗方法中被靶向的免疫检查点标记物(如CTLA-4、LAG-3和TIM-3)。抗PD-1/PD-L1免疫疗法包括但不限于例如包括向受试者施用有效量的一种或多种抗PD-1/PD-L1治疗性拮抗剂的疗法，其中此类拮抗剂包括但不限于例如
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(纳武单抗)、
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(派姆单抗)、TecentriqTM(阿特珠单抗)、德瓦鲁单抗(MEDI4736)、阿维鲁单抗(MSB0010718C)、BMS-936559(MDX-1105)、CA-170、BMS-202、BMS-8、BMS-37、BMS-242等。这些抗体可以作为与本文提供的抗MDR1抗体的组合疗法施用。
CTLA-4也称为CD152，其与CD80和CD86结合。针对CTLA-4的抗体已被批准用于治疗某些癌症类型。CTLA-4与其他免疫疗法的共同抑制作用使得CTLA-4成为与其他免疫疗法组合使用以治疗某些癌症的良好候选物。TIM-3也可以被靶向以用于针对若干种癌症类型的免疫疗法。
LAG-3正处于用于治疗癌症的临床试验中。抗LAG-3免疫疗法包括采用拮抗剂LAG-3抗体的免疫疗法，所述拮抗剂LAG-3抗体既可以激活T效应细胞(通过将LAG-3抑制信号下调至预激活的LAG-3+细胞中)又可以抑制诱导的(即抗原特异性的)Treg抑制活性。有用的LAG-3拮抗性抗体包括瑞拉利单抗(relatlimab)(BMS-986016；由Bristol-Myers Squibb开发)、IMP701(由Immutep开发)、TSR-033(抗LAG-3mAb；由TESARO,Inc.开发)等。
免疫疗法还包括基于T细胞的免疫疗法，例如像过继细胞疗法(ACT)和嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法。例如，可以向受试者施用经工程化以靶向由受试者的癌症表达的抗原的CAR T细胞群体。在一些情况下，基于T细胞的疗法可以涉及从受试者获得细胞样品(如血液样品或肿瘤活检)，并且在对培养的免疫细胞进行或未进行基因修饰的情况下离体培养来自所述样品的免疫细胞。例如，可以从受试者获得免疫细胞，将其进行离体培养并用对癌症表达的抗原具有特异性的CAR进行修饰以产生CAR T细胞群体。然后，可以将CAR T细胞重新引入所述受试者中以靶向癌症。取决于待治疗的特定癌症，基于T细胞的免疫疗法可以以各种方式进行配置，例如通过靶向各种抗原、通过收集/培养各种细胞类型等进行配置。另外，可以全身施用(例如，通过静脉内注射)或局部施用(例如，通过输注(例如，腹膜内输注、胸膜导管输注等)、直接注射等)基于T细胞的免疫疗法。
在一些情况下，本文所述的治疗方法可以包括向受试者施用多药耐药转运蛋白(包括但不限于例如除MDR1以外的多药耐药转运蛋白)的一种或多种抑制剂。多药耐药转运蛋白的有用抑制剂包括例如酪氨酸激酶抑制剂、天然产物、微小RNA和小分子抑制剂。多药耐药转运蛋白的抑制剂包括ABC转运蛋白抑制剂。
适合于使用本公开文本的方法进行治疗的个体包括：患有癌症的个体；被诊断为患有癌症的个体；用化学疗法、放射疗法、抗体疗法、手术等治疗癌症的个体；已进行癌症治疗(例如，用化学疗法、放射疗法、抗体疗法、手术等中的一种或多种)且对所述治疗没有反应的个体；已进行癌症治疗(例如，用化学疗法、放射疗法、抗体疗法、手术等中的一种或多种)且最初对所述治疗有反应但随后复发(即，癌症复发)的个体。
本公开文本的方法可以用于靶向和治疗多种癌症，包括例如原发性癌症、继发性癌症、再生长癌症、复发性癌症、难治性癌症等。例如，在一些情况下，本公开文本的方法可以用作在受试者中鉴定出的原发性癌症的初始治疗。在一些情况下，本公开文本的方法可以例如在患有先前治疗难治性的癌症的受试者中、在患有先前治疗后再生长的癌症的受试者中、在对先前治疗具有混合反应(例如，对受试者中的至少一种肿瘤有阳性反应且对受试者中的至少第二种肿瘤有阴性或中性反应)的受试者等中用作非原发性(例如，继发性或后期)治疗。
在一些情况下，本公开文本的方法可以用于治疗患有耐药性癌症(如多药耐药性癌症)的受试者。多药耐药性(MDR)是许多癌症对化学疗法药物产生耐药性从而导致最少的细胞死亡和耐药性肿瘤的扩大的机制。MDR癌症可以涉及一种或多种耐药性机制，包括但不限于例如增加的外排泵表达、减少的药物吸收、细胞死亡或凋亡的抑制、调节药物代谢等。在一些情况下，本公开文本的方法可以阻止、逆转或规避MDR。
在一些情况下，本公开文本的方法可以包括用有效量的本文所述的主题抗体与不同于第一药剂的第二药剂的组合治疗患有对所述第一药剂具有耐药性的癌症的受试者。例如，在一些情况下，受试者的癌症可能对第一化学治疗剂具有耐药性，并且所述受试者可以通过施用有效量的如本文所述的主题抗体与不同于所述第一化学治疗剂的第二化学治疗剂的组合来治疗。根据例如待治疗的癌症的类型、产生耐药性的可能性等，可以采用第一和第二化学治疗剂的各种组合。
已知许多癌症会产生耐药性。出于这个和其他原因、本公开文本的方法可用于治疗各种癌症，包括但不限于例如，急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、肾上腺皮质癌、艾滋病相关癌症(例如卡波西肉瘤、淋巴瘤等)、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、非典型畸胎样/横纹肌样瘤、基底细胞癌、胆管癌(肝外)、膀胱癌、骨癌(例如，尤因肉瘤、骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤等)、脑干胶质瘤、脑瘤(例如，星形细胞瘤、中枢神经系统胚胎性肿瘤、中枢神经系统生殖细胞肿瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤等)、乳腺癌(例如，女性乳腺癌、男性乳腺癌、儿童期乳腺癌等)、支气管肿瘤、伯基特淋巴瘤、类癌肿瘤(例如儿童期类癌肿瘤、胃肠道类癌肿瘤等)、原发灶不明癌、心脏(心)肿瘤、中枢神经系统(例如，非典型畸胎样/横纹肌样肿瘤、胚胎性肿瘤、生殖细胞肿瘤、淋巴瘤等)、宫颈癌、儿童期癌症、脊索瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性骨髓增殖性肿瘤、结肠癌、结直肠癌、颅咽管瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、导管(例如胆管、肝外等)、导管原位癌(DCIS)、胚胎性肿瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食管癌、鼻腔神经胶质瘤、尤因肉瘤、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、眼癌(例如，眼内黑色素瘤、视网膜母细胞瘤等)、骨纤维性组织细胞瘤(例如，恶性骨纤维性组织细胞瘤、骨肉瘤等)、胆囊癌、胃部(胃)癌、胃肠道类癌肿瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、生殖细胞肿瘤(例如，颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、卵巢生殖细胞肿瘤、睾丸生殖细胞肿瘤等)、妊娠滋养细胞疾病、神经胶质瘤、毛细胞白血病、头颈癌、心脏癌症、肝细胞(肝)癌、组织细胞增生症(例如，朗格汉斯细胞组织细胞增生症等)、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、眼内黑色素瘤、胰岛细胞肿瘤、胰岛细胞瘤(例如胰腺神经内分泌肿瘤等)、卡波西肉瘤、肾癌(例如，肾细胞肾癌、肾母细胞瘤、儿童期肾肿瘤等)、朗格汉斯细胞组织细胞增生症、喉癌、白血病(例如，急性成淋巴细胞性白血病(ALL))、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性髓细胞性白血病(CML)、毛细胞白血病等)、唇部和口腔癌、肝癌(原发性)、小叶原位癌(LCIS)、肺癌(例如，非小细胞肺癌、小细胞肺癌等)、淋巴瘤(例如，艾滋病相关淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、原发性中枢神经系统(CNS)淋巴瘤等)、巨球蛋白血症(例如华氏巨球蛋白血症等)、男性乳腺癌、骨恶性纤维组织细胞瘤和骨肉瘤、黑色素瘤、默克尔细胞癌、间皮瘤、原发灶隐匿转移性颈部鳞癌、涉及NUT基因的中线道癌、口癌、多发性内分泌瘤形成综合征、多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤、蕈样肉芽肿病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增殖性肿瘤、髓细胞性白血病(例如，慢性髓细胞性白血病(CML)等)、髓性白血病(例如，急性髓性白血病(AML)等)、骨髓增殖性肿瘤(例如，慢性骨髓增殖性肿瘤等)、鼻腔和鼻窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、口癌、口腔癌(例如，唇癌等)、口咽癌、骨肉瘤和骨恶性纤维组织细胞瘤、卵巢癌(例如上皮细胞卵巢癌、生殖细胞肿瘤、低度恶性潜能肿瘤等)、胰腺癌、胰腺神经内分泌肿瘤(胰岛细胞瘤)、乳头状瘤病、副神经节瘤、副鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、垂体瘤、胸膜肺母细胞瘤、原发性中枢神经系统(CNS)淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞(肾)癌、肾盂和输尿管移行细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤(例如，尤因肉瘤、卡波西肉瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、软组织肉瘤、子宫肉瘤等)、塞扎里综合征、皮肤癌(例如，儿童期皮肤癌、黑色素瘤、默克尔细胞癌、非黑色素瘤等)、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、颈部鳞癌(例如，原发灶隐匿颈部鳞癌、转移性颈部鳞癌等)、胃(胃部)癌、T细胞淋巴瘤、睾丸癌、喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、肾盂及输尿管移行细胞癌、输尿管和肾盂癌、尿道癌、子宫癌(例如子宫内膜癌等)、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌、华氏巨球蛋白血症、肾母细胞瘤等。
在一些情况下，本文所述的治疗方法可以在先前已进行一种或多种常规治疗的受试者中进行。例如，在肿瘤学的情况下，在一些情况下，本文所述的方法可以在常规癌症疗法之后进行，所述常规癌症疗法包括但不限于例如常规化学疗法、常规放射疗法、常规免疫疗法、手术等。在一些情况下，当受试者对常规疗法没有反应或常规疗法难治时，可以使用本文所述的方法。在一些情况下，当受试者对常规疗法已经有反应时，可以使用本文所述的方法。
在一些情况下，本公开文本的方法可以用于靶向、治疗或清除受试者在先前癌症疗法后残留的微小残留病(MRD)。可以使用本发明方法获得MRD的靶向、治疗和/或清除，无论MRD是否被确定为或已经被确定为先前治疗难治性的。在一些情况下，在确定MRD为先前治疗难治性的或除采用本文所述的多特异性抗体的那些以外的一种或多种可用治疗选项难治性的之后，可以使用本公开文本的方法靶向、治疗和/或清除受试者的MRD。
在某些实施方案中，本文的抗体可用于治疗表达或过表达MDR1的血液癌症和实体瘤，包括而不限于对一种或多种化学治疗剂和/或生物药剂没有反应或显示出差的反应、或具有耐药性或难治的癌症，包括多药耐药性癌症。在某些实施方案中，由本发明抗体治疗的癌症另外地表达或过表达另一种共刺激分子，如4-1BB(即CD137)、CD27和/或CD28。
优选地，可以由本发明的抗MDR1抗体治疗的癌症另外地过表达CD47，其为一种已知在人恶性肿瘤中发挥免疫调节作用并且用于参与肿瘤侵袭和转移的细胞表面分子。用于治疗表达MDR1和CD47二者的癌症的抗MDR1抗体优选是多特异性的(例如双特异性的)，具有对MDR1和CD47二者的结合亲和力。
本文公开的抗体可用于以单一药剂(单一疗法)或与其他治疗模式组合治疗此类癌症。其他治疗模式包括，例如，施用至少一种另外的活性剂，如化学治疗剂、多药耐药性转运蛋白的抑制剂、免疫治疗剂或其组合。所述治疗可以改善肿瘤对其他治疗选项的反应，包括减少化学治疗剂和/或生物药剂的有效量、减少或避免副作用、和/或改善患有难治性或耐药性(包括多药耐药性)癌症的患者的治疗反应。靶向的肿瘤包括而不限于白血病(如急性髓性白血病(AML)和急性成淋巴细胞性白血病(ALL))、卵巢癌、结直肠癌、胃癌、乳腺癌、尿路上皮癌、肾癌和肺癌。在一个实施方案中，本文的抗MDR1抗体的施用改善了患者对用紫杉烷(如紫杉醇和/或多西紫杉醇)、蒽环类(如多柔比星、道诺霉素、表柔比星或伊达比星，尤其是多柔比星)和/或长春花生物碱(如长春碱、长春新碱、长春地辛或长春瑞滨，尤其是长春碱或长春新碱)治疗的反应。
在一些情况下，本发明方法可以预防性地用于监测。例如，当有需要的受试者没有可检测的疾病但有风险患上复发性癌症(包括例如耐药性癌症)时，可以向所述受试者施用涉及一种或多种本文所述的单特异性抗体或多特异性抗体的治疗。在一些情况下，当受试者有特别高的风险患上原发性癌症时，可以采用预防性方法，所述原发性癌症将被预测具有耐药性或预期变得具有耐药性。在一些情况下，当受试者先前已进行癌症治疗并且有风险复发或有风险产生耐药性时，可以采用预防性方法。
在一些情况下，本公开文本的方法可以涉及分析癌症的一种或多种标记物或治疗性靶标的表达。例如，在一些情况下，方法可以涉及分析来自受试者的癌症样品以确定所述癌症是否表达高于预定阈值的MDR1、高于预定阈值的肿瘤相关抗原或二者。
在一些情况下，受试者是否用本公开文本的抗体治疗可能取决于MDR1表达评估的结果、癌症相关抗原表达的结果或二者。例如，在一些情况下，如果癌症表达等于或高于预定阈值的MDR1，则可以对所述受试者用本公开文本的抗MDR1抗体或本公开文本的多特异性抗体治疗，而如果所述癌症表达低于预定阈值的MDR1，则对所述受试者可以不用抗MDR1抗体治疗，而是用本公开文本的多特异性抗体治疗。
可以采用任何便利的测定来分析MDR1和/或肿瘤相关抗原水平，所述便利的测定包括但不限于例如流式细胞术、基于核酸的测定(例如，扩增、测序等)、细胞计数法、免疫组织化学等。可以采用任何便利的生物样品，包括但不限于例如癌症活检样品。用于评估一种或多种标记物和/或靶标的表达的有用的预定阈值可以通过任何便利且适当的方法来确定，所述方法包括将所测量的表达水平与相应的对照进行比较。例如，在一些情况下，在样品中测定的MDR1和/或肿瘤相关抗原水平的有用的预定阈值可以对应于如在参考细胞(如健康/正常细胞)中测量的MDR1和/或肿瘤相关抗原水平。
制备方法
如上所总结，本公开文本的方法还包括制备和/或鉴定如本文所述的抗体的方法。主题抗体可以通过任何已知的方法产生，所述已知的方法例如用于蛋白质合成的常规合成方法；重组DNA方法等。
在主题抗体是单链多肽的情况下，其可以使用标准的化学肽合成技术来合成。在化学合成多肽的情况下，所述合成可以经由液相或固相进行。固相多肽合成(SPPS)是用于主题抗体的化学合成的合适方法的例子，其中序列的C末端氨基酸附接至不溶性支持物，接着依序添加所述序列中的其余氨基酸。各种形式的SPPS(如Fmoc和Boc)可用于合成主题抗体。
标准重组方法可以用于产生主题抗体。例如，将编码轻链和重链可变区(任选地与恒定区连接)的核酸插入表达载体中。所述轻链和重链可以在相同或不同的表达载体中克隆。编码免疫球蛋白链的DNA区段与一种或多种表达载体中的控制序列可操作地连接，所述控制序列确保免疫球蛋白多肽的表达。表达控制序列包括但不限于启动子(例如，天然缔合启动子或异源启动子)、信号序列、增强子元件和转录终止序列。所述表达控制序列可以是能够转化或转染真核宿主细胞(例如，COS或CHO细胞)的载体中的真核启动子系统。一旦已经将载体掺入适当的宿主中，就将所述宿主在适合于高水平表达核苷酸序列以及收集和纯化所述抗体的条件下维持。
由于遗传密码的简并性，多种核酸序列可以编码每个免疫球蛋白氨基酸序列。可以通过从头固相DNA合成或通过对所需多核苷酸的较早制备的变体进行的聚合酶链式反应(PCR)诱变来产生所需的核酸序列。寡核苷酸介导的诱变是用于制备靶多肽DNA的取代、缺失和插入变体的合适方法的例子。参见Adelman等人,DNA2:183(1983)。简而言之，通过使编码所需突变的寡核苷酸与单链DNA模板杂交来改变靶多肽DNA。杂交后，DNA聚合酶用于合成模板的整个第二互补链，所述模板掺入了寡核苷酸引物并编码靶多肽DNA中选择的改变。
合适的表达载体通常可在宿主生物中作为附加体或作为宿主染色体DNA的组成部分进行复制。一般来说，表达载体含有选择标记物(例如，氨苄青霉素抗性、潮霉素抗性、四环素抗性、卡那霉素抗性或新霉素抗性)以允许检测用所需DNA序列转化的那些细胞。
大肠杆菌是原核宿主细胞的例子，其可以用于克隆编码主题抗体的多核苷酸。适合使用的其他微生物宿主包括杆菌纲(bacilli)(如枯草芽孢杆菌)和其他肠杆菌科(enterobacteriaceae)(如沙门氏菌属(Salmonella)、沙雷氏菌属(Serratia)和各种假单胞菌属(Pseudomonas)物种)。
其他微生物(如酵母)也可用于表达。酵母属(Saccharomyces)(例如，酿酒酵母)和毕赤酵母属(Pichia)是合适的酵母宿主细胞的例子，其中合适的载体具有所需的表达控制序列(例如，启动子)、复制起点、终止序列等。典型的启动子包括3-磷酸甘油酸激酶和其他糖酵解酶。诱导型酵母启动子尤其包括来自醇脱氢酶、异细胞色素C以及负责麦芽糖和半乳糖利用的酶的启动子。
除微生物之外，哺乳动物细胞(例如，在体外细胞培养物中生长的哺乳动物细胞)也可以用于表达和产生本发明的多肽(例如，编码免疫球蛋白或其片段的多核苷酸)。参见Winnacker,From Genes to Clones,VCH Publishers,纽约,纽约(1987)。合适的哺乳动物宿主细胞包括CHO细胞系、各种Cos细胞系、HeLa细胞、HEK细胞、骨髓瘤细胞系和转化的B细胞或杂交瘤。这些细胞的表达载体可以包括表达控制序列如复制起点、启动子和增强子(Queen等人,Immunol.Rev.89:49(1986))和必要的处理信息位点如核糖体结合位点、RNA剪接位点、聚腺苷酸化位点和转录终止子序列。合适的表达控制序列的例子是源自免疫球蛋白基因、SV40、腺病毒、牛乳头瘤病毒、巨细胞病毒等的启动子。参见Co等人,J.Immunol.148:1149(1992)。
一旦合成(化学地或重组地)，整个抗体、其二聚体、单条轻链和重链或其他形式的主题抗体(例如，scFv等)就可以根据本领域的标准程序进行纯化，所述标准程序包括硫酸铵沉淀、亲和柱、柱色谱、高效液相色谱(HPLC)纯化、凝胶电泳等(一般参见Scopes,ProteinPurification(Springer-Verlag,纽约,(1982))。主题抗体可以是基本上纯的，例如至少约80％至85％纯、至少约85％至90％纯、至少约90％至95％纯、或98％至99％纯、或更纯，例如不含污染物(如细胞碎片、除主题抗体以外的大分子等)。
在一些实施方案中，产生本公开文本的多特异性抗体的方法可以包括产生候选抗体以及针对活性进行筛选。此类方法可以通过使用一系列步骤产生特异性结合表达MDR1和癌症相关抗原二者的细胞的多特异性抗体。此类方法的步骤可以包括：产生多特异性抗体或多种抗体，其各自包括或预期包括MDR1结合结构域和癌症相关抗原结合结构域；使表达MDR1和癌症相关抗原的第一测试细胞与所述多特异性抗体或多种抗体接触；使表达MDR1或癌症相关抗原的第二细胞与所述多特异性抗体或多种抗体接触；比较所述多特异性抗体与所述第一细胞的结合和所述多特异性抗体与所述第二细胞的结合以确定结合特异性比率；以及当所述比率高于预定阈值时，将所述多特异性抗体或所述多种抗体中的一种或多种鉴定为对于表达MDR1和癌症相关抗原二者的细胞具有特异性。在采用这种用于比较结合的阈值的情况下，所述阈值可以变化并且范围可以是1.5:1或更大，包括但不限于例如2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、20:1、50:1、100:1等。
在此类方法中可以使用各种细胞，包括但不限于例如本文所述的细胞。在一些情况下，可以进行所述抗体与仅表达MDR1的细胞和仅表达癌症相关抗原的细胞二者的结合。例如，在一些情况下，所述方法可以包括，相对于上述步骤，在所述第二细胞表达MDR1而不表达癌症相关抗原的情况下，所述方法还包括使表达癌症相关抗原而不表达MDR1的第三细胞与所述多特异性抗体接触。
在一些情况下，此类方法可以采用一种或多种对照，包括但不限于例如对照细胞、对照试剂等。有用的对照细胞包括具有一种或多种相关基因或蛋白质的已知表达或已知的表达缺乏的细胞。有用的对照试剂可以包括但不限于例如对照抗体，如但不限于例如针对已知靶标的单特异性抗体。例如，在一些情况下，本公开文本的此类方法还可以包括使所述第一细胞、所述第二细胞和/或所述第三细胞与选自单特异性抗MDR1抗体和单特异性抗癌症相关抗原抗体的对照抗体接触。根据所使用的特定方法，可以视情况采用各种其他或另外的对照。
试剂盒
本公开文本的方面还包括试剂盒。所述试剂盒可以包含例如本文所述的抗体、多特异性抗体、试剂、组合物、配制品、细胞、核酸、表达载体等的任何组合。主题试剂盒可以包含以下中的一种或多种：主题抗体、编码其的核酸或含有主题核酸的细胞。试剂盒可以被配置用于各种目的，包括例如治疗试剂盒(例如，其中试剂盒可以包含抗MDR1抗体或多特异性抗体和例如一种或多种另外的活性剂，如化学治疗剂)、用于产生抗体的试剂盒、用于筛选抗体的试剂盒等。
所述试剂盒的任选组分将变化，并且可以例如包含：缓冲液；蛋白酶抑制剂等。在主题试剂盒包含主题核酸的情况下，所述核酸还可以具有限制位点、多克隆位点、引物位点等。所述试剂盒的各种组分可以存在于单独的容器中，或者某些相容的组分可以根据需要预组合至单个容器中。
除上述组分之外，主题试剂盒还可以包含用于使用所述试剂盒的组分来实践主题方法的说明书。用于实践主题方法的说明书通常记录在合适的记录介质上。例如，说明书可以印刷在基材(如纸或塑料等)上。因此，说明书可以作为包装插页存在于所述试剂盒中，可以存在于所述试剂盒的容器或其组分的标签中(即，与包装或子包装相关联)等。在其他实施方案中，说明书作为存在于合适的计算机可读存储介质(例如，只读式光盘存储器(CD-ROM)、数字通用光盘(DVD)、软盘等)上的电子存储数据文件存在。在又其他实施方案中，真实的说明书不存在于所述试剂盒中，而是提供了用于从远程源(例如经由因特网)获得说明书的手段。这个实施方案的例子是包含网址的试剂盒，在其中可以查看说明书和/或可以从其下载说明书。与说明书一样，将这种用于获得说明书的手段记录在合适的基材上。
本公开文本的示例性非限制性方面
上述本发明主题的各方面(包括实施方案)可以单独或与一个或多个其他方面或实施方案组合发挥益处。在不限制前述描述的情况下，下文提供了本公开文本的某些非限制性方面。正如本领域普通技术人员在阅读本公开文本后将清楚的，每个单独编号的方面可以与任何前述或后面单独编号的方面一起使用或组合。这旨在为所有此类方面组合提供支持，并且不限于下文明确提供的方面的组合。本领域普通技术人员将清楚的是，在不脱离本发明的精神或范围的情况下可以进行各种改变和修改。
1.一种与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体，其中所述抗体与包含以下的抗体竞争结合MDR1：表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)。
2.根据方面1所述的抗体，其中所述抗体与包含表2中所列抗体的一对可变重链(VH)和可变轻链(VL)区的抗体竞争结合MDR1。
3.根据方面1所述的抗体，其中所述抗体与选自以下的抗体竞争结合MDR1：表2中所列的抗体B1.28、B1.261、B1.129、B1.225和B1.223。
4.根据方面1所述的抗体，其中所述抗体包含表2中所列抗体的VH区的HCDR。
5.根据方面1或2所述的抗体，其中所述抗体包含表2中所列抗体的VL区的LCDR。
6.根据方面1所述的抗体，所述抗体包含：
表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区(HCDR)和轻链CDR(LCDR)。
7.一种与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体分子，其中所述抗体分子的抗原结合位点包含：
表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)；
表2中所列抗体的VH区的HCDR1-3；或
表2中所列抗体的VL区的LCDR1-3。
8.根据方面7所述的抗体分子，其中所述抗体包含表2中所列抗体的一对VH区和VL区的HCDR1-3和LCDR1-3。
9.根据方面7所述的抗体，其中所述抗体包含表2中所列第一抗体的VH区的HCDR1-3。
10.根据方面7所述的抗体分子，其中所述抗体包含表2中的第二抗体的VL区的LCDR1-3。
11.根据方面7所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含表2中所列抗体的可变轻(VL)链和/或可变重(VH)链。
12.根据方面8所述的抗体分子，其中所述抗体包含
(i)B1.28抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.28抗体的VL区的LCDR1-3；
(ii)B1.261抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.261抗体的VL区的LCDR1-3；
(iii)B1.129抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.129抗体的VL区的LCDR1-3；
(iv)B1.225抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.225抗体的VL区的LCDR1-3；
(v)B1.188抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.188抗体的VL区的LCDR1-3；
(vi)B1.27抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.27抗体的VL区的LCDR1-3；
或
(vii)B1.223抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.223抗体的VL区的LCDR1-3，其中所述VH和VL区列于表2中。
13.根据方面7-12中任一项所述的抗体分子，其中所述抗体分子与人MDR1和食蟹猴MDR1结合。
14.根据方面13所述的抗体，其中所述抗体分子包含B1.129抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.129抗体的VL区的LCDR1-3、B1.28抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.28抗体的VL区的LCDR1-3，或者其中所述抗体分子包含B1.261抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.261抗体的VL区的LCDR1-3。
15.根据方面7-14中任一项所述的抗体分子，其中所述抗体分子与MDR1的细胞外结构域中的环1结合。
16.根据方面15所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含：所述B1.129抗体的VH区的HCDR1-3和VL区的LCDR1-3，或所述B1.223抗体的VH区的HCDR1-3和VL区的LCDR1-3。
17.根据方面7-16中任一项所述的抗体分子，其中所述抗体分子抑制癌细胞外排钙黄绿素、道诺霉素(Dioc2)和罗丹明中的一种或多种。
18.根据方面17所述的抗体分子，其中所述癌细胞是过表达MDR1的293T细胞。
19.根据方面17所述的抗体分子，其中所述癌细胞是MES-SA-DX5癌细胞。
20.根据方面17-20中任一项所述的抗体分子，其中所述抗体包含所述B1.129抗体的VH区的HCDR 1-3和VL区的LCDR 1-3。
21.一种与细胞表面上表达的MDR1特异性结合的抗体分子，所述抗体包含：
(i)可变重(VH)链，所述可变重链包含含有以下氨基酸序列的重链互补决定区(HCDR)1：GFTFSRY(SEQ ID NO:343)；含有以下氨基酸序列的HCDR2：SSGGGN(SEQ ID NO:344)；和含有以下氨基酸序列的HCDR3：GAGDAWFAY(SEQ ID NO:345)；和
(ii)可变轻(VL)链，所述可变轻链包含含有以下氨基酸序列的轻链互补决定区(LCDR)1：RSSQNIVHSTGNTYLD(SEQ ID NO:11)；含有以下氨基酸序列的LCDR2：KVSNRFS(SEQID NO:12)；和含有以下氨基酸序列的LCDR3：FQGSHIPRT(SEQ ID NO:13)；
包含以下氨基酸序列的VH链：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:287)；和包含以下氨基酸序列的VL链：
DVVLTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQNIVHSTGNTYLDWYQQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQGSHIPRTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:20)；
(iii)包含以下氨基酸序列的重链：
EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYTMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYDTTPPVLDSDGSFFLYSDLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:309)和包含以下氨基酸序列的轻链：
DVVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNIVHSTGNTYLDWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPRTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:21)；
(iv)VH链，所述VH链包含含有以下氨基酸序列的HCDR1：GYTFTNY(SEQ ID NO:346)；含有以下氨基酸序列的HCDR2：YPGNDD(SEQ ID NO:347)；和含有以下氨基酸序列的HCDR3：GGYRAMDY(SEQ ID NO:308)；以及VL链，所述VL链包含含有以下氨基酸序列的LCDR1：RSSQNIVHSTGNTYLD(SEQ ID NO:11)；含有以下氨基酸序列的LCDR2：KVSNRFS(SEQ ID NO:12)；和含有以下氨基酸序列的LCDR3：FQGSHIPRT(SEQ ID NO:13)；
(v)包含以下氨基酸序列的VH链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:294)和包含以下氨基酸序列的轻链：
DVVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNIVHSTGNTYLDWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPRTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:21)；
(vi)包含以下氨基酸序列的重链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRKELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLKSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:310)和包含以下氨基酸序列的轻链：
DVVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNIVHSTGNTYLDWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPRTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:21)；
(vii)VH链，所述VH链包含含有以下氨基酸序列的HCDR1：GFTFSRY(SEQ ID NO:343)；含有以下氨基酸序列的HCDR2：SSGGGN(SEQ ID NO:344)；和含有以下氨基酸序列的HCDR3：GAGDAWFAY(SEQ ID NO:345)；以及VL链，所述VL链包含含有以下氨基酸序列的LCDR1：RSSQSLVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:290)；含有以下氨基酸序列的LCDR2：KVSNRFS(SEQID NO:12)；和含有以下氨基酸序列的LCDR3：QGSHFPRT(SEQ ID NO:348)；
(viii)包含以下氨基酸序列的VH链：evkvvesggvlvrpggslklscaasgftfsrytmswvrqtpekrlewvatissgggntyypdsvkgrftvsrdnamsslylqmsslrsedtalyycarygagdawfaywgqgtlvtvss(SEQ ID NO:287)；和包含以下氨基酸序列的VL链：
DIVMTQSPLSLPVSLGDPASISCRSSQSLVHSNGNTYLEYYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:311)；
(ix)包含以下氨基酸序列的重链：
EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYTMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYDTTPPVLDSDGSFFLYSDLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:309)和包含以下氨基酸序列的轻链：
DIVMTQSPLSLPVSLGDPASISCRSSQSLVHSNGNTYLEYYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:311)；
(x)VH链，所述VH链包含含有以下氨基酸序列的HCDR1：GYTFTNY(SEQ ID NO:346)；含有以下氨基酸序列的HCDR2：YPGNDD(SEQ ID NO:347)；和含有以下氨基酸序列的HCDR3：GGYRAMDY(SEQ ID NO:308)；以及VL链，所述VL链包含含有以下氨基酸序列的LCDR1：RSSQSLVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:290)；含有以下氨基酸序列的LCDR2：KVSNRFS(SEQ ID NO:12)；和含有以下氨基酸序列的LCDR3：QGSHFPRT(SEQ ID NO:348)；
(xi)包含以下氨基酸序列的VH链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:294)和包含以下氨基酸序列的轻链：
DIVMTQSPLSLPVSLGDPASISCRSSQSLVHSNGNTYLEYYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:311)；
(xii)包含以下氨基酸序列的重链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRKELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLKSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:310)和包含以下氨基酸序列的轻链：
DIVMTQSPLSLPVSLGDPASISCRSSQSLVHSNGNTYLEYYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:311)；
(xiii)VH链，所述VH链包含含有以下氨基酸序列的HCDR1：GFTFSRY(SEQ ID NO:343)；含有以下氨基酸序列的HCDR2：SSGGGN(SEQ ID NO:344)；和含有以下氨基酸序列的HCDR3：GAGDAWFAY(SEQ ID NO:345)；以及VL链，所述VL链包含含有以下氨基酸序列的LCDR1：RSSQTIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:39)；含有以下氨基酸序列的LCDR2：KVSKRFS(SEQ IDNO:40)；和含有以下氨基酸序列的LCDR3：FQASHFPRT(SEQ ID NO:329)；
(xiv)包含以下氨基酸序列的VH链：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:287)；和包含以下氨基酸序列的VL链：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:313)；
(xv)包含以下氨基酸序列的重链：
EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYTMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYDTTPPVLDSDGSFFLYSDLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:309)和包含以下氨基酸序列的VL链：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:313)；
(xvi)VH链，所述VH链包含含有以下氨基酸序列的HCDR1：GYTFTNY(SEQ ID NO:346)；含有以下氨基酸序列的HCDR2：YPGNDD(SEQ ID NO:347)；和含有以下氨基酸序列的HCDR3：GGYRAMDY(SEQ ID NO:308)；以及VL链，所述VL链包含含有以下氨基酸序列的LCDR1：RSSQTIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:39)；含有以下氨基酸序列的LCDR2：KVSKRFS(SEQ ID NO:40)；和含有以下氨基酸序列的LCDR3：FQASHFPRT(SEQ ID NO:329)；CDR 5F9/VL B1-89v1
(xvii)包含以下氨基酸序列的VH链：
qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftnynmhwvrqapgqrlewmgtiypgnddtsynqkfkdrvtitadtsastaymelsslrsedtavyycarggyramdywgqgtlvtvss(SEQ ID NO:294)和包含以下氨基酸序列的轻链：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:313)；或
(xviii)包含以下氨基酸序列的重链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRKELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLKSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:310)和包含以下氨基酸序列的轻链：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:313)。
22.一种结合多药耐药蛋白1(MDR1)和肿瘤相关抗原(TAA)的双特异性抗体分子，所述抗体分子包含两条相同的可变轻(VL)链、第一可变重(VH)链和第二VH链，其中所述VL链各自包含针对MDR1的抗原结合位点，所述第一VH链包含针对MDR1的抗原结合位点，并且所述第二VH链包含针对所述TAA的抗原结合位点，并且其中所述第二VH链在与所述轻链之一配对时结合所述TAA。
23.根据方面22所述的双特异性抗体分子，其中所述两条VL链的抗原结合位点包含表2中所列抗体的轻链CDR1-3(LCDR1-3)。
24.根据方面22或23所述的双特异性抗体分子，其中所述第一VH链的抗原结合位点包含表2中所列抗体的重链CDR1-3(HCDR1-3)。
25.根据方面22或23所述的双特异性抗体分子，其中所述第一VH链包含除表2中所列抗体之外的抗MDR1抗体的HCDR1-3，任选地其中所述第一VH链包含除表2中所列抗体之外的抗MDR1抗体的VH链的氨基酸序列。
26.根据方面25所述的双特异性抗体分子，其中所述抗MDR1抗体包含：
具有以下氨基酸序列的15D3抗体的VH链：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:293)；
具有以下氨基酸序列的UIC2抗体的VH链：
AVQLQQSGPELVKTGASVKISCKASGYSFSNYYIHWVKQSHGKSLEWIGFISCYNGATFYNQKFKGKATFTVDTSSSTAYMKFNSLTFEDSAVYYCARLPIQFGNFYPMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:288)；或
具有以下氨基酸序列的MRK16抗体的VH链：
EVILVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTISRDNAKNNLYLQMSSLRSEDTALYYCARYYRYEAWFASWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:286)。
27.根据方面26所述的双特异性抗体分子，其中所述抗MDR1抗体包含具有以下氨基酸序列的VH链：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGX2TYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:292)，其中X2是N、Q或S，
任选地其中X2是Q或S。
28.根据方面22至27中任一项所述的双特异性抗体分子，其中所述一条或多条VL链包含表2中所列的B1-28抗体的LCDR1-3，
任选地其中所述VL链包含表2中所列B1-28抗体的VL链的氨基酸序列；或者
其中所述一条或多条VL链包含具有包含以下氨基酸序列的VL链的抗MDR1 V6抗体的LCDR1-3：
LWVPGSTGDVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:289)，
任选地其中所述VL链包含所述V6抗体的VL链的氨基酸序列。
29.根据方面22或24所述的双特异性抗体分子，其中所述VL链包含除表2中所列抗体之外的抗MDR1抗体的LCDR1-3，任选地其中所述轻链包含除表2中所列抗体之外的抗体的VL链的氨基酸序列。
30.根据方面29所述的双特异性抗体分子，其中所述抗MDR1抗体包含以下的LCDR1-3：
含有以下氨基酸序列的MRK16抗体的可变轻链：
DVLMTQTPVSLSVSLGDQASISCRSSQSIVHSTGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKISNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:283)；
含有以下氨基酸序列的15D3抗体的可变轻链：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSTGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRLEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTRLEIK(SEQ ID NO:284)；或
含有以下氨基酸序列的UIC2抗体的可变轻链：
DVVMTQTPRSLPVSLGDQASISCRSSQSLLHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHIPPWTFGGGTKLDIK(SEQ ID NO:285)。
31.根据前述方面中任一项所述的抗体分子或双特异性抗体分子，其中所述抗体在与表达MDR1的细胞结合时抑制通过所述MDR1的外排。
32.根据方面22至31中任一项所述的双特异性抗体分子，其中所述抗体能够提高癌细胞对用化学治疗剂治疗的敏感性，其中当与所述抗体共同施用时所述化学治疗剂的半最大抑制浓度(IC50)比当与如下抗MDR1抗体共同施用时所述化学治疗剂的IC50低至少5倍，所述抗MDR1抗体包含具有以下序列的VH链：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:293)；以及
具有以下序列的VL链：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSTGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRLEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTRLEIK(SEQ ID NO:284)。
33.根据方面22至32中任一项所述的双特异性抗体分子，其中所述TAA是CD47。
34.根据方面33所述的双特异性抗体分子，其中所述双特异性抗体包含抗CD47抗体5F9的VH区的HCDR1-3，其中所述VH区包含以下氨基酸序列：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:294)；或者
其中所述双特异性抗体包含抗CD47抗体B6H12的VH区的HCDR1-3，其中所述VH区包含以下氨基酸序列：
EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYGMSWVRQTPDKRLEWVATITSGGTYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQIDSLKSEDTAIYFCARSLAGNAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:295)。
35.根据方面34所述的双特异性抗体分子，其中：
所述第一VH链包含具有以下HCDR序列的来自抗MDR1抗体的VH链的HCDR1-3：HCDR1：RYTMS(SEQ ID NO:301)；HCDR2：TISSGGGNTYYPDSVKG(SEQ ID NO:302)、TISSGGGQTYYPDSVKG(SEQ ID NO:303)或TISSGGGSTYYPDSVKG(SEQ ID NO:304)；和HCDR3：ARYGAGDAWFAY(SEQ ID NO:349)；并且
所述VL链各自包含表2中所列B1-28抗体的VL区的LCDR1-3，其中所述LCDR序列是：LCDR1：RSSQNIVHSTGNTYLD(SEQ ID NO:11)、LCDR2：KVSNRFS(SEQ ID NO:12)和LCDR3：FQGSHIPRT(SEQ ID NO:13)。
36.根据方面35所述的双特异性抗体分子，其中：
所述第一VH链包含含有以下的氨基酸序列：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGX2TYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:291)，其中X2是N、Q或S；
所述第二VH链包含含有以下的氨基酸序列：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:294)；
以及
所述两条VL链包含含有表2中所列B1-28抗体的VL区链的氨基酸序列。
37.根据方面22所述的双特异性抗体分子，其中
所述第一VH链包含表2中所示的(i)B1.28抗体；(ii)B1.30抗体；(iii)B1.89抗体；(iv)B1.129抗体；(v)B1.225；(vi)B1.261抗体的VH链的HCDR1-3；或所述15D3或所述MRK16抗体的VH链的HCDR1-3；
所述相同的VL链各自包含(i)所述MRK16抗体的VL链的LCDR1-3或(ii)所述V6抗体的VL链的LCDR1-3；并且
所述第二VH链包含所述5F9抗体或所述B6H12抗体的VH链的HCDR1-3。
38.根据方面22所述的双特异性抗体分子，其中所述第一VH链包含表2中所示的(i)B1.188抗体；(ii)B1.28抗体；(iii)B1.261抗体；(iv)B1.129抗体；或(v)B1.223抗体的VH链的HCDR1-3；所述相同的VL链各自包含所述MRK16抗体的VL链的LCDR1-3；并且所述第二VH链包含所述5F9抗体或所述B6H12抗体的VH链的HCDR1-3。
39.根据方面38所述的双特异性抗体分子，其中所述第一VH链包含表2中所示的(i)B1.188抗体；(ii)B1.28抗体；(iii)B1.261抗体；(iv)B1.129抗体；或(v)B1.223抗体的VH链；所述相同的VL链各自包含所述MRK16抗体的VL链；并且所述第二VH链包含所述5F9抗体或所述B6H12抗体的VH链。
40.根据方面27所述的双特异性抗体分子，其中所述第一VH链包含表2中所示的B1.225抗体的VH链的HCDR1-3；所述相同的VL链各自包含所述MRK16抗体的VL链的LCDR1-3；并且所述第二VH链包含所述5F9抗体或所述B6H12抗体的VH链的HCDR1-3。
41.根据方面40所述的双特异性抗体分子，其中所述第一VH链包含表2中所示的B1.225抗体的VH链；所述相同的VL链各自包含所述MRK16抗体的VL链；并且所述第二VH链包含所述5F9抗体的VH链。
42.根据前述方面中任一项所述的抗体分子或双特异性抗体分子，其中所述抗体包含人源化轻链。
43.根据前述方面中任一项所述的抗体分子或双特异性抗体分子，其中所述抗体包含人源化重链。
44.根据前述方面中任一项所述的抗体分子或双特异性抗体分子，用于治疗受试者的癌症的方法中，所述方法包括向所述受试者施用所述抗体。
45.根据方面44所述的用于所述用途的抗体分子或双特异性抗体分子，其中所述方法包括将所述抗体与至少一种另外的活性剂组合施用，其中所述至少一种另外的活性剂包括化学治疗剂、多药耐药转运蛋白的抑制剂、免疫治疗剂或其组合。
46.根据方面45所述的用于所述用途的抗体分子或双特异性抗体分子，其中所述至少一种另外的活性剂是化学治疗剂，任选地其中所述化学治疗剂是泰素(taxol)、长春花生物碱或蒽环类。
47.根据方面46所述的用于所述用途的抗体分子或双特异性抗体分子，其中所述所治疗的受试者患有已被确定为对用所述化学治疗剂的治疗具有耐药性的癌症。
48.一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据方面1至21中任一项所述的抗体分子或根据方面22至43中任一项所述的双特异性抗体分子。
49.根据方面48所述的方法，其中所述方法包括将所述抗体分子或双特异性抗体分子与至少一种另外的活性剂组合施用，其中所述至少一种另外的活性剂包括化学治疗剂、多药耐药转运蛋白的抑制剂、免疫治疗剂或其组合。
50.根据方面49所述的方法，其中所述至少一种另外的活性剂是化学治疗剂，任选地其中所述化学治疗剂是泰素、长春花生物碱或蒽环类。
51.根据方面50所述的方法，其中所述所治疗的受试者患有被分类为对所述化学治疗剂具有耐药性的癌症。
52.一种或多种核酸，所述一种或多种核酸包含一种或多种编码根据方面1至21中任一项所述的抗体分子或根据方面22至43中任一项所述的双特异性抗体分子的序列。
53.一种或多种重组表达载体，所述一种或多种重组表达载体包含根据方面52所述的一种或多种核酸。
54.一种用根据方面52所述的一种或多种重组表达载体进行基因修饰的宿主细胞。
55.一种包含嵌合抗原受体(CAR)的免疫效应细胞，所述嵌合抗原受体包含MDR1结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中所述MDR1结合结构域包含表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区(HCDR)和/或轻链CDR(LCDR)。
56.一种抑制由活细胞表达的MDR1的外排活性的方法，所述方法包括使所述细胞与根据方面1至21中任一项所述的抗体分子或根据方面22至43中任一项所述的双特异性抗体分子接触。
57.根据方面56所述的方法，所述方法进一步包括使所述细胞与MDR1介导的外排的抑制剂接触。
58.根据方面56或57所述的方法，所述方法进一步包括使所述细胞与化学治疗剂接触。
59.根据方面56至58中任一项所述的方法，其中所述细胞是癌细胞。
60.根据方面59所述的方法，其中所述癌细胞是多药耐药性癌细胞。
61.一种测定细胞的细胞表面上MDR1的表达的方法，所述方法包括使所述细胞与根据方面1至47中任一项所述的抗体分子接触。
62.根据方面61所述的方法，其中所述抗体被可检测地标记。
63.一种用于诊断受试者的与MDR1表达相关的疾病或病症的方法，所述方法包括使来自所述受试者的组织样品或细胞样品与根据方面1-47中任一项所述的抗体分子接触。
64.根据方面63所述的方法，其中所述抗体分子包含如图19中的抗体分子所示的VH和VL链排列。
65.一种与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体，用作药剂，其中所述抗体与包含以下的抗体竞争结合MDR1：表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)。
66.一种与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体用于制造用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述抗体与包含以下的抗体竞争结合MDR1：表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)。
67.一种药物组合物，用于治疗受试者的癌症的方法中，所述药物组合物包含与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体，其中所述抗体与包含以下的抗体竞争结合MDR1：表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)，所述方法包括向所述受试者施用所述抗体。
68.一种与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体分子，用作药剂，其中所述抗体分子的抗原结合位点包含：
表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)；
表2中所列抗体的VH区的HCDR1-3；或表2中所列抗体的VL区的LCDR1-3。
69.一种与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体分子用于制造用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述抗体分子的抗原结合位点包含：
表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)；表2中所列抗体的VH区的HCDR1-3；或表2中所列抗体的VL区的LCDR1-3。
70.一种药物组合物，用于治疗受试者的癌症的方法中，所述药物组合物包含与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体，其中所述抗体分子的抗原结合位点包含：
表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)；表2中所列抗体的VH区的HCDR1-3；或表2中所列抗体的VL区的LCDR1-3，所述方法包括向所述受试者施用所述抗体。
71.根据方面21所述的抗体分子，用作药剂。
72.根据方面21所述的抗体分子用于制造用于治疗癌症的药剂的用途。
73.一种包含根据方面21所述的抗体分子的药物组合物，用于治疗受试者的癌症的方法中，所述方法包括向所述受试者施用所述抗体。
74.一种结合多药耐药蛋白1(MDR1)和肿瘤相关抗原(TAA)的双特异性抗体分子，用作药剂，所述抗体分子包含两条相同的可变轻(VL)链、第一可变重(VH)链和第二VH链，其中所述VL链各自包含针对MDR1的抗原结合位点，所述第一VH链包含针对MDR1的抗原结合位点，并且所述第二VH链包含针对所述TAA的抗原结合位点，并且其中所述第二VH链在与所述轻链之一配对时结合所述TAA。
75.一种结合多药耐药蛋白1(MDR1)和肿瘤相关抗原(TAA)的双特异性抗体分子用于制造用于治疗癌症的药剂的用途，所述抗体分子包含两条相同的可变轻(VL)链、第一可变重(VH)链和第二VH链，其中所述VL链各自包含针对MDR1的抗原结合位点，所述第一VH链包含针对MDR1的抗原结合位点，并且所述第二VH链包含针对所述TAA的抗原结合位点，并且其中所述第二VH链在与所述轻链之一配对时结合所述TAA。
76.一种药物组合物，用于治疗受试者的癌症的方法中，所述药物组合物包含用于制造用于治疗癌症的药剂的结合多药耐药蛋白1(MDR1)和肿瘤相关抗原(TAA)的双特异性抗体分子，所述抗体分子包含两条相同的可变轻(VL)链、第一可变重(VH)链和第二VH链，其中所述VL链各自包含针对MDR1的抗原结合位点，所述第一VH链包含针对MDR1的抗原结合位点，并且所述第二VH链包含针对所述TAA的抗原结合位点，并且其中所述第二VH链在与所述轻链之一配对时结合所述TAA，所述方法包括向所述受试者施用所述抗体。
77.根据方面74所述的用作药剂的双特异性分子、根据方面75所述的用途或根据方面76所述的药物组合物，其中所述双特异性分子包含表2中所列抗体的VL区的LCDR1-3。
通过说明的方式而不是通过限制的方式，提供以下实施例。
实施例
提出以下实施例以向本领域普通技术人员提供如何制备和使用本发明的完整公开和描述，并且不旨在限制诸位发明人视为其发明的范围，也不旨在表示下面的实验是全部或唯一进行的实验。已经努力确保关于所使用的数字(例如量、温度等)的准确性，但是应当考虑一些实验误差和偏差。除非另有指示，否则份数是重量份，分子量是重均分子量，温度是按摄氏度计，并且压力是大气压或接近大气压。
分子与细胞生物化学中的一般方法可以在标准教科书中找到，如MolecularCloning:A Laboratory Manual,第3版(Sambrook等人,HaRBor Laboratory Press 2001)；Short Protocols in Molecular Biology,第4版(Ausubel等人编辑,John Wiley&Sons1999)；Protein Methods(Bollag等人,John Wiley&Sons 1996)；Nonviral Vectors forGene Therapy(Wagner等人编辑,Academic Press 1999)；Viral Vectors(Kaplift&Loewy编辑,Academic Press 1995)；Immunology Methods Manual(I.Lefkovits编辑,AcademicPress 1997)；以及Cell and Tissue Culture:Laboratory Procedures inBiotechnology(Doyle&Griffiths,John Wiley&Sons 1998)，将其披露内容通过引用并入本文。用于本公开文本中提及或与之相关的方法的试剂、克隆载体、细胞和试剂盒可从以下获得：诸如BioRad、Agilent Technologies、Thermo Fisher Scientific、Sigma-Aldrich、New England Biolabs(NEB)、Takara Bio USA,Inc.等商业供应商，以及贮库例如像Addgene,Inc.、美国典型培养物保藏中心(ATCC)等。
实施例1：与表达高水平Pgp(MDR1)的细胞特异性结合但是与具有减少的或不存在 MDR1表达的细胞显著较少结合或根本不结合的抗体的产生
材料和方法
抗体产生
将野生型(WT)和突变型MDR1用于免疫。产生了含有将泵限制在开放构型中的突变的突变型MDR1和含有将泵限制在封闭构型中的突变的另一MDR1突变体。用以产生受限于开放构型的MDR1突变体的在人MDR1和食蟹猴MDR1中的突变如下：E556Q和E1201Q。用以产生受限于封闭构型的MDR1突变体的在人MDR1中的突变如下：(i)K433M、S434A、K1076M、S1077A；(ii)K433M、S434A、Q475A、K1076M、S1077A、Q1118A；和/或(iii)K433M、S434A、Q475A、R588E、K1076M、S1077A、Q1118A、R1233E。另外的MDR1突变体包括人MDR1的环1中的缺失，其中缺失氨基酸残基82-99或79-102。取代位置的氨基酸残基编号参考人MDR1的序列。
使野生型(WT)和突变型MDR1在3T3细胞中表达。将雌性小鼠使用各种初免增强策略用MDR1(野生型或突变型)DNA和/或MDR1(野生型或突变型)表达细胞免疫8周。在一些情况下，多于一种的抗原(一种或多种WT或突变型MDR1)用于免疫以增加所产生抗体的多样性。将脾细胞和淋巴结细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。对于杂交瘤，通过流式细胞术针对抗ABCB1抗体的存在进行筛选，然后在细胞杀伤测定中针对功能活性进行筛选。将来自选定的鼠IgG的CDR克隆到哺乳动物IgG1骨架表达载体中，并且转染到HEK 293哺乳动物细胞系中以表达全长IgG1抗体。
DNA序列确定
通过双链测序确定DNA序列。
DNA和蛋白质序列分析和序列数据管理
Vector NTI(ThermoFisher)软件包用于序列定位、分析、注释和说明。
细胞培养和抗体产生
标准细胞培养技术如Current Protocols in Cell Biology(2000),Bonifacino,J.S.,Dasso,M.,Harford,J.B.,Lippincott-Schwartz,J.和Yamada,K.M.(编辑),JohnWiley&Sons,Inc.中所述来使用。
表达载体
对于抗体表达载体的产生，将重链和轻链DNA序列的可变区亚克隆至框内，其中将人IgG1恒定重链或人IgG1κ恒定轻链预先插入至优化用于在哺乳动物细胞系中表达的相应通用受体表达载体中。将待表达的基因克隆至pCI-neo哺乳动物表达载体(Promega)中，所述表达载体使用全长人巨细胞病毒(CMV)即时早期启动子以供高水平基因表达。将两条抗体链克隆至两个不同的载体中。
来自小鼠IgG重链和κ轻链的N末端信号序列分别用于重链和轻链的分泌性表达。所述信号肽在表达过程中被切割，留下完整的N末端。在Fab构建体中，CH1 IgG1恒定区的C末端与6×His标签融合用于纯化。
将针对Pgp产生的单克隆抗体作为重组工程化抗体克隆到人IgG1/κ表达载体中。
获得来自小鼠杂交瘤序列的可变重链和轻链片段，并且将其克隆到前导序列和恒定区的相同背景中。
mAb、Fab’2、Fab和双特异性mAb的产生
根据制造商的建议，用哺乳动物表达载体对悬浮生长的Expi293细胞(A14527，ThermoFisher)进行基于聚合物的共转染来表达抗体构建体。
转染后约六天，通过离心收获细胞。详细地，将每1ml转染的培养物中的1ug总编码DNA稀释至
Figure BDA0003771923880001131
培养基(Life Technologies)中，并与Expifectamine试剂(LifeTechnologies)在同一培养基中孵育20min。然后将混合物添加至在37℃下在用空气中8％的CO2覆盖的情况下以250万个细胞/ml在
Figure BDA0003771923880001132
表达培养基(Life Technologies)中悬浮生长的
Figure BDA0003771923880001133
细胞中。6天后，通过离心收获含有抗体构建体的培养基。
mAb的纯化
为了纯化含有Fc的抗体形式，将每1ml的上清液中10μl MabSelectTM SuReTM(GEHealthcare)添加至收获的培养基中，并在4℃下保持搅拌过夜。第二天，使用真空歧管单元(Pall Lifesciences，美国)将蛋白A树脂施加在24孔滤板中。将树脂用PBS洗涤，并将所述抗体在50mM磷酸盐(pH 3)中洗脱，并用10x PBS(pH 13)中和。
使用Ni Sepharose 6快速流动组氨酸标记的蛋白质纯化树脂(GE Healthcare)，按照相同的程序纯化Fab。将珠用PBS洗涤，接着用25mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)、补充有20mM咪唑的150mM NaCl洗涤。用2体积的25mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)、补充有500mM咪唑的150mMNaCl洗脱所述复合物。最后，将纯化的Fab经缓冲液交换至PBS中。抗Pgp单克隆抗体的色谱图示于图1中。
mAb的分析测试(GXII还原和非还原型)
最终蛋白质制剂的纯度和单体含量是通过使用如制造商描述的蛋白质表达LabChip试剂盒(Perkin-Elmer)在Caliper’s LabChip GXII上进行高通量分析来测定的。用含有0.2％SDS和荧光染色染料的聚合物溶液将芯片自动装在仪器上。脱色通道填充不含SDS和染料的聚合物溶液。简而言之，通过将小体积(2-5μL)的样品与具有或不具有DDT的caliper样品缓冲液混合，制备了还原和非还原条件下的蛋白质。使样品在75℃下变性5分钟，在2000g下离心3分钟，然后运行。电泳图由LabChip GXII Touch软件(Perkin Elmer)产生。
使用试剂细胞系测试：结合、亲和力、外排阻断、细胞对化学治疗剂的增敏
将人胚肾(HEK)细胞系HEK 293FT(Life Technologies)在37℃且5％CO2孵育下在补充有10％胎牛血清(HyClone)、2mM GlutaMAX(Life Technologies)、100U/mL青霉素和100g/mL链霉素的杜尔贝克改良的伊格尔培养基(DMEM)中维持。
使用优化的PEIProTM转染方案(Polyplus)，将293T细胞用pLenti-C-Myc-DDK-DDK-P2A-Puro质粒中的人P糖蛋白标记的ORF克隆瞬时转染。将DNA和
Figure BDA0003771923880001141
分别在培养基中稀释，然后轻轻混合约10min。这种混合导致形成转染复合物，将其直接添加至细胞培养物中。根据制造商的方案，使用多药耐药直接染料外排测定(Chemicon)来测量外排阻断。
ABCB1特异性结合的检测
使用天然表达Pgp的293T细胞系、过表达人Pgp靶标的293T幼稚细胞、Pgp敲低293T细胞(慢病毒iRNA处理后)通过FACS测试mAb(Fab和Fab’2抗体)的结合特异性。简而言之，将不同的细胞系与各种量的mAb或双特异性mAb或人lgG1同种型对照抗体在冰上孵育1h。将细胞用FACS缓冲液(含有0.5％BSA的PBS)洗涤三次。添加Alexa647标记的山羊抗人抗体作为二抗，并将样品在冰上再孵育1小时。使用BD FACSCanto(BD Biosciences)洗涤和分析样品。
MDR1过表达细胞系产生
通过用在哺乳动物表达载体中的人MDR1 cDNA转染、然后多步选择对0.2mg/ml或0.5mg/ml的潮霉素具有抗性的转染子来产生MDR1过表达HEK 293T细胞或C6细胞。与检测抗体MRK16-PE一起孵育后，使用FACS Aria分离MDR1高表达克隆。
外排阻断实验程序
将表达人MDR1的HEK 293T细胞或表达人MDR1的MES-SA/DX5细胞洗涤数次，并且以在无酚红DMEM中的1x10e6个细胞/ml的细胞密度以50μl等分试样/孔等分到96孔板中。将细胞与300nM至1nM抗体混合并且在37℃下孵育1h。为了确定外排阻断，在37℃下将细胞在如下的B1荧光底物的存在下孵育1.5h：0.6μM罗丹明；5μM道诺霉素(DiOC2(3))或0.6μM钙黄绿素AM。然后将细胞洗涤两次并且最终重悬在200ml PBS中。通过流式细胞术测量罗丹明、DiOC2(3)或钙黄绿素AM荧光。
细胞结合测定
通过流式细胞术评价抗体与细胞的结合。将稳定转染以表达人ABCB1的293T细胞(293T_KPB1_OX)在流式细胞术缓冲液(PBS+2％FBS+0.02％叠氮化钠)中洗涤一次，在流式细胞术缓冲液中以2x10^6个细胞/mL重悬，并以0.1mL/孔分配至96孔微量滴定板中。在图中，“B1”是指ABCB1(也称为MDR1或Pgp)。将重组抗体以5ug/mL添加至细胞中以用于初始结合确认，或在流式细胞术缓冲液中从100ug/mL进行连续稀释。将细胞在冰上孵育30min后，将细胞用流式细胞术缓冲液洗涤两次。用PE标记的F(ab′)2片段山羊抗人IgG(JacksonImmunoResearch)检测结合的抗体，并在Attune NxT流式细胞仪上进行评价。
单克隆抗体与KPB1结合的滴定
通过将抗体从666.7nM进行3倍连续稀释来进行重组抗体与ABCB1转染子的结合滴定。将在流式细胞术缓冲液中稀释的抗体与细胞在冰上孵育30min。用流式细胞术缓冲液洗涤2次后，将结合的抗体用在流式细胞仪缓冲液中以1:200稀释的PE标记的F(ab′)2片段山羊抗人IgG(Jackson ImmunoResearch)检测，并且在冰上与细胞一起孵育20min。用流式细胞术缓冲液洗涤2次后，在Attune NxT流式细胞仪上测量荧光。将数据用GraphPad Prism8.0软件分析以确定EC50。
细胞毒性测定
在N6/ADR(多柔比星选择的人急性成淋巴细胞性白血病(ALL)细胞系NALM6的ABCB1阳性变体)上评价抗体对长春新碱细胞毒性的影响。将细胞以5000个细胞/孔铺板于白色平底96孔组织培养板中的0.05mL测定培养基(RPMI-1640+10％FBS)中。通过以下方法制备2X最终测定浓度的长春新碱：在含有100ug/mL(2X最终浓度)的测试抗体或对照抗体或7uM(2X最终浓度)的小分子KPB1抑制剂伐司扑达的测定介质中从200uM连续稀释。将等效体积(0.05mL)的长春新碱/抗体混合物添加至96孔板中的N6/ADR细胞中。然后将板在37℃下在5％CO2中孵育。72h后，将板平衡至室温，并使用
Figure BDA0003771923880001161
发光细胞活力测定根据制造商推荐的方案测定细胞活力。在Molecular
Figure BDA0003771923880001162
3多模式微板阅读器上测量发光，并使用GraphPad Prism 8.0软件分析数据。
实施例2：抗ABCB1单克隆抗体的体内功效
测试抗ABCB1抗体B1.129、B1.261、B1.223、B1.225、B1.188、B1.28和B1.226对免疫缺陷小鼠中的肿瘤生长的影响。使用以下癌细胞系产生肿瘤模型。
MES-SA DX5：多药耐药性细胞系MES-SA/Dx5(Sigma.95051031)源自人子宫肉瘤细胞系MES-SA(Sigma目录号95051030)，所述人子宫肉瘤细胞系最初是从一名56岁高加索女性子宫切除术时的肿瘤中获得的。Dx5变体展现出对多柔比星的100倍耐药性，并且据报道倍增时间为30小时。MES-SA/Dx-5细胞展现出对多种化学治疗剂(包括道诺霉素、更生霉素、长春新碱、泰素、秋水仙碱)显著的交叉耐药性，并且展现出对丝裂霉素C和美法仑的中等交叉耐药性。未观察到对博来霉素、顺铂、卡莫司汀、5-氟尿嘧啶或甲氨蝶呤的交叉耐药性。
A2780 ADR：阿霉素耐药性细胞系A2780ADR是通过将亲本A2780细胞系(Sigma目录号93112519)暴露于阿霉素而开发的。A2780ADR对美法仑和长春碱具有交叉耐药性。为了保持耐药性，必须将阿霉素添加到培养基中。细胞以单层生长并且在旋转培养物中悬浮生长，并且在免疫缺陷小鼠中是致瘤的。与顺铂耐药性变体A2780cis一起，这些细胞系仅在它们暴露于单一药物方面有所不同，并且应当有助于找到导致人卵巢癌中多向耐药性表达的分子变化。
MES-SA DX5和A2780ADR细胞表达外排泵ABCB1和肿瘤靶标CD47。包含15D3VH:MRK16VL::MRK16VL:5F9VH链(KB1-1401)的双特异性抗体示出了与MES-SA DX5和A2780ADR二者的结合。在体内研究中，KB1-1401双特异性抗体使MES-SA DX5和A2780ADR肿瘤对紫杉醇敏感。KB1-1401双特异性抗体也称为KNJY Bis P1.1或KBis1.1。
卵巢癌
向裸鼠植入A2780 ADR细胞，从而为卵巢癌建模。抗B1单克隆抗体在裸小鼠的A2780 ADR卵巢癌模型中有效。抗ABCB1抗体B1.28、B1.261、B1.129、B1.226、B1.223、B1.225、B1.188作为单一药剂以及与紫杉醇组合时均减少了卵巢癌(A2780 ADR)小鼠模型中的肿瘤体积。参见图5A-图5C。
子宫肉瘤
向裸小鼠植入MES-SA DX5细胞，从而为子宫肉瘤建模。抗B1单克隆抗体在裸小鼠的MES-SA DX5子宫肉瘤模型中有效。抗ABCB1抗体B1.261、B1.129和B1.223作为单一药剂以及与紫杉醇组合时均减少了子宫肉瘤(MES-SA DX5)的小鼠模型中的肿瘤体积。参见图6。
图5C.KPA02是称为MRK16的抗ABCB1抗体。KPA08是通过将两种抗ABCB1抗体MRK16和15D3组合产生的抗ABCB1抗体。KPA08抗体包含来自15D3的两条重链和来自MRK16的两条轻链。KPA01是称为15D3的抗ABCB1抗体。KPA06是抗CD47抗体5F9。
15D3抗体(KPA01)不会使MES-SA DX5子宫肉瘤对紫杉醇敏感。作为单一药剂以及与紫杉醇一起时，B1.129抗体在抑制肿瘤生长方面比15D3抗体(KPA01)更有效。B1.261和B.223二者均使MES-SA DX5子宫肉瘤对紫杉醇敏感。参见图6。
向NSG小鼠植入MES-SA DX5细胞，从而为子宫肉瘤建模。抗B1单克隆抗体在NSG小鼠的MES-SA DX5子宫肉瘤模型中有效。图7示出了B1.223使MES-SA DX5子宫肉瘤对紫杉醇敏感。
图8示出了ABCB1表达是MES-SA DX5子宫肉瘤对紫杉醇的耐药性所需要的。使用缺乏ABCB1表达的MES-SA DX5细胞(DX5-B1 KO)形成的MES-SA DX5子宫肉瘤对紫杉醇敏感。
实施例3：抗MDR1抗体的表位定位
为了确定表2中所列的抗MDR1 mAb与MDR1的两种主要的细胞外环1和环4的结合，构建多个突变来改变或替代这两个环。为了检查与食蟹猴细胞外环的结合，将食蟹猴MDR1的细胞外环1和/或环4使用标准技术移植(具有C末端FLAG标签)以替代人MDR1中的人环。为了检查对正常人环的结合依赖性，还产生了在环1中具有缺失79-102和缺失82-99的MDR1变体。环1也称为ECD1。环4也称为ECD4。将这些突变体MDR1外排泵变体使用标准方法在293T细胞上表达，以产生可用于区分各种抗MDR1 mAb的结合的细胞。将不同的细胞与不同的抗MDR1 mAb一起在4℃下孵育1小时。将细胞用FACS缓冲液(含有0.5％BSA的PBS)洗涤两次。添加Alexa647标记的山羊抗人抗体作为二抗，并将样品在冰上再孵育1小时。将样品再次洗涤并且通过流式细胞术分析。
图9总结了使用突变体人MDR1的初步表位定位的发现。“+”指示根据如与WT人ABCB1相比，与缺乏ECD的突变体ABCB1的结合显著降低，所列的ECD是抗体结合所需要的。“-”指示根据如与WT人ABCB1相比，与缺乏ECD的突变体ABCB1的结合没有显著改变，所列的ECD不是抗体结合所需要的。例如，抗MDR1 mAb B1.129需要ECD1和ECD4以与人MDR1结合。使所有抗MDR1抗体与ECD4接触。KPA01和KPA08抗体不需要ECD1即可与ABCB1结合。此数据表明，图9中所列的许多抗B1抗体与包括存在于ECD1和ECD4中的序列的表位结合，如通过“+”指示ECD1和ECD4结合二者。相比之下，KPA01和KPA08抗体与包括ECD4序列但不包括ECD1序列的表位结合。ECD1是指人ABCB1的第一细胞外结构域，ECD4是指人ABCB1的第四细胞外结构域并且“其他”是指人ABCB1的细胞外结构域2-3和5-6的剩余部分。仅测试了与ECD1和ECD4的结合。
实施例4：抗MDR1抗体的表征
评估了抗MDR1 mAb B1.129及其人源化形式与过表达人MDR1的293T细胞系的结合或与用食蟹猴MDR1转染的293T细胞的结合。图10A-图10B示出了B1.129 mAb与人(hB1，图10A)和食蟹猴(cB1，图10B)MDR1二者结合。B1.129.hz1还以较低的亲和力与hB1和cB1二者结合，而B1.129.hz2没有显示出与hB1或cB1的显著结合。B1.129.hz1和B1.129.hz2抗体分别与表2中所列的人源化形式B1.129.huH1-huL1(KV3)和B1.129.huH1-huL1(KV1)相同。图10C总结了B1.129抗体的结合数据。
评估了抗MDR1 mAb B1.28及其人源化形式与过表达人MDR1的293T细胞系的结合或与用食蟹猴MDR1转染的293T细胞的结合。图11示出了B1.28 mAb与hB1和cB1二者结合。如与B1.28 mAb相比，B1.28.hz1 mAb还以较低的亲和力与hB1和cB1二者结合。B1.28.hz1抗体与表2中所列的人源化形式B1.28 human1相同。
图12示出了抗MDR1 mAb B1.261及其两种人源化形式与hB1和cB1结合。
如外排阻断实验程序中所述评估抗MDR1抗体对MDR1底物钙黄绿素、DIOC2和罗丹明的外排的影响。数据总结于图13中。
如图13所示，B1.129 mAb比抗MDR1抗体15D3更大程度地抑制钙黄绿素的外排。B1.129 mAb还在两种不同的hB1表达细胞系中抑制了DIOC2和罗丹明的外排。相比之下，15D3对两种细胞系中的DIOC2外排没有可观察到的影响(-)，并且对293T.hB1细胞系中的罗丹明外排具有低抑制作用(+/-)，而对MES-SA/Dx5细胞中的罗丹明外排没有影响。
实施例5：抗MDR1抗体对癌细胞的化疗增敏
测试了表2中所列的抗MDR1抗体对长春新碱对N6ADR细胞的化学毒性的影响。参见图4A-图4D。表7示出了多种抗MDR1 mAb将长春新碱的细胞毒性增加到与使用另一种细胞毒性剂伐司扑达所达到的水平相似或甚至更高的水平。表2中提供的许多抗MDR1抗体将长春新碱的化学毒性提高了40倍或更多。这些抗体在表7中以斜体显示。
表7：所列抗MDR1抗体对长春新碱对N6/ADR细胞的细胞毒性的影响
Figure BDA0003771923880001191
Figure BDA0003771923880001201
实施例6：结合MDR1和CD47的双特异性抗体的产生
15D3VH:B1-28VL::B1-28VL:5F9VH双特异性抗体
产生了具有抗MDR1抗体15D3的可变重链(VH)、抗CD47抗体5F9的可变重链和来自抗MDR1抗体“B1-28”的共同可变轻链(参见表2)的双特异性抗体。产生了15D3的VH链的人源化形式，所述人源化形式包括来自人IGHV3组的框架区并且包括15D3 CDR H2中的N56Q/N56S取代。这些可变重链(HC)在本文中称为15D3 Hz0(人源化15D3 HC)；15D3 Hz1(人源化15D3 HC+CDR H2中的N56Q取代)；和15D3 Hz2(人源化15D3 HC+CDR H2中的N56S取代)，并且具有以下氨基酸序列：
15D3 Hz0:
EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYTMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:350)
15D3 Hz1:
EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYTMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGGQTYYPDSVKGRFTVSRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:351)
15D3 Hz2:
EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYTMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGGSTYYPDSVKGRFTVSRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:352)
5F9抗体可变重链序列如下：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:294)
人源化B1-28 VL链的序列如下：
DVVLTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQNIVHSTGNTYLDWYQQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQGSHIPRTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:20)
人源化B1-28 VH链的序列如下：
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFGLYTMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGSNTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYYRYDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:19)
双特异性抗体包含15D3Hz1或15D3Hz2可变区。与具有带电荷对取代K392D和K409D的人IgG1 Fc区融合的15D3可变重链区，和与具有带电荷对取代E356K和D399K的人IgG1 Fc区融合的5F9可变重链区。
通过结合滴定和化学毒性测定来表征双特异性抗体。
细胞结合测定。通过流式细胞术评价抗体与细胞的结合。将稳定转染以表达人ABCB1的293T细胞(293T_ABCB1_OX)在流式细胞术缓冲液(PBS+2％FBS+0.02％叠氮化钠)中洗涤一次，在流式细胞术缓冲液中以2x10^6个细胞/mL重悬，并以0.1 mL/孔分配至96孔微量滴定板中。将重组抗体以5ug/mL添加至细胞中以用于初始结合确认，或在流式细胞术缓冲液中从100ug/mL进行连续稀释。将细胞在冰上孵育30 min后，将细胞用流式细胞术缓冲液洗涤两次。用PE标记的F(ab′)2片段山羊抗人IgG(Jackson ImmunoResearch)检测结合的抗体，并在Attune NxT流式细胞仪上进行评价。EC50被计算为给出半最大反应的抗体浓度。
细胞毒性测定。在N6/ADR(多柔比星选择的人急性成淋巴细胞性白血病(ALL)细胞系NALM6的B1阳性变体)上评价抗体对长春新碱细胞毒性的影响。将细胞以5000个细胞/孔铺板于白色平底96孔组织培养板中的0.05mL测定培养基(RPMI-1640+10％FBS)中。通过以下方法制备2X最终测定浓度的长春新碱：在含有100ug/mL(2X最终浓度)的测试抗体或对照抗体或7uM(2X最终浓度)的小分子B1抑制剂伐司扑达的测定介质中从200uM连续稀释。将等效体积(0.05mL)的长春新碱/抗体混合物添加至96孔板中的N6/ADR细胞中。然后将板在37℃下在5％CO2中孵育。72h后，将板平衡至室温，并使用
Figure BDA0003771923880001221
发光细胞活力测定根据制造商推荐的方案测定细胞活力。在Molecular
Figure BDA0003771923880001222
3多模式微板阅读器上测量发光，并使用GraphPad Prism 8.0软件分析数据。半最大抑制浓度(IC50)是反应(细胞生长)降低50％时药物(长春新碱或其他化学疗法细胞毒性剂)的浓度。
双特异性抗体(BisAb-1和BisAb-2)与293T_ABCB1_OX细胞的细胞结合总结于表3中：
表3：
EC50(nM) Ab HC1 HC2 LC
118.4 BisAb-1 15D3 HC-Hz1 DD hIgG1 KT14 IgG1 KK B1-28 VL humaniz
75.3 BisAb-2 15D3 HC-Hz2 DD hIgG1 KT14 IgG1 KK B1-28 VL humaniz
14.6 15D3
0.3 KT14
KT14是指CD47。表3中的KT14抗体(Ab)是抗CD47抗体5F9(对于氨基酸序列，参见表5)。在BisAb-1和BisAb-2二者中，使用来自抗CD47抗体5F9的HC。
抗体对长春新碱细胞毒性的影响总结于表4中。虽然hIgG1、15D3和MRK16抗体不会增强长春新碱介导的细胞毒性，但是Bis-Ab-1和BisAb-2抗体二者增强了长春新碱的细胞毒性。
表4：
处理 IC50(nM)
Vin 0.5429
Vin+hIgG1 0.7869
Vin+15D3 0.4663
Vin+MRK16 0.7335
Vin+BisAb-1 0.0064
Vin+BisAb-2 0.1608
表5：产生另外的双特异性抗体：
Figure BDA0003771923880001231
Figure BDA0003771923880001241
Figure BDA0003771923880001251
Figure BDA0003771923880001261
Figure BDA0003771923880001271
Figure BDA0003771923880001281
Figure BDA0003771923880001291
Figure BDA0003771923880001301
Figure BDA0003771923880001311
表6总结了用于产生图中数据的抗体所用的名称：
Figure BDA0003771923880001312
Figure BDA0003771923880001321
将抗MDR1抗体15D3的重链与抗CD47抗体5F9的重链以及来自抗MDR1抗体的不同轻链组合。这些双特异性抗体与过表达人B1的C6细胞结合的数据示于图14中。
通过转染大鼠成纤维细胞C6细胞来产生在稳定细胞系中表达hABCB1或hKT14的细胞。因为5F9和抗ABCB1抗体分别对鼠KT14或ABCB1几乎没有亲和力，因此使用C6细胞系测量对在所述细胞系中表达的人靶标的亲和力。KT14/Fc/KT14 Ab是指5F9的单臂形式，即仅一条重链和一条轻链。
图15示出了这些双特异性抗体与过表达食蟹猴CD47(cKT14)或人CD47(hKT14)的C6细胞的结合。通过流式细胞术评价结合，并且通过生物层干涉测量法(BLI)评价重组蛋白。通过使用ForteBio Octet通过生物层干涉测量法(BLI)测量抗体与重组人CD47(rhCD47)的结合来计算Octet KD-。将传感器加载抗体，然后与300nM、100nM和33nM rhCD47缔合。针对每种分析物的缔合和解离计算结合常数。应用了1:1曲线拟合并且产生了全局拟合。BsAb的结合显现需要大量的B1，而增加CD47的量不会增加结合亲和力。因此，预期BsAb对过表达B1的细胞具有特异性。对CD47的低亲和力有利于减少脱靶效应，因为CD47在许多正常细胞上表达。
使用B1+/CD47+MES-SA-DX5细胞(下文称为DX5WT细胞)、源自DXWT细胞的B1基因敲除和CD47基因敲除细胞系(下文分别称为DX5 B1 KO(B1-/CD47+)和DX5 CD47 KO(B1+/CD47-)细胞)评估抗MDR1和抗CD47双特异性抗体的结合选择性。
在添加抗体之前，将DX5WT细胞和DX5 CD47 KO细胞分别用CellTraceTM Violet和CellTraceTM Far Red(Life Technologies，纽约)染色，而DX5 B1 KO细胞未染色。将细胞在FACS缓冲液中以1:1:1的比率合并，最终浓度为6x106个细胞/ml(每个细胞群体为2x106个细胞/ml)。然后将3x105个细胞/孔与抗体的连续稀释物在室温下孵育1h。然后将细胞用FACS缓冲液洗涤3次，并且用PE缀合的山羊抗人IgG Fcγ特异性抗体(JacksonImmunoResearch)检测细胞结合的抗体。
在Attune NXT(Thermo Fisher Scientific)上进行流式细胞术，对单独的细胞群体根据示踪染料表达或排除进行门控，并且通过物理散射特性排除双峰。通过平均荧光强度(MFI)确定抗体结合。
图16示出了所列双特异性抗体在DX5 WT、DX5 B1 KO、DX5 CD47 KO细胞系上的结合选择性滴定。
图17A和图17B示出了在将HC和LC人源化后，抗MDR1和抗CD47双特异性抗体与人MDR1和食蟹猴MDR1表达细胞的结合。人源化HC和LC的氨基酸序列如下：
15D3 hmz DD IgG1(HC):
EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYTMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:350)
B1.28.huL1(LC):
DVVLTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQNIVHSTGNTYLDWYQQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQGSHIPRTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:20)
B1.28.huL2(LC):
DVVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNIVHSTGNTYLDWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPRTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:21)
B1.28.huL3(LC):
EVVLTQSPATLSLSPGERATLSCRSSQNIVHSTGNTYLDWYQQKPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCFQGSHIPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:22)
B1V6.CDRv1.hmzLC:
DIVMTQTPLSLPVTLGDPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:367)
B1V6.CDRv2.hmzLC:
DIVMTQSPLSLPVSLGDPASISCRSSQSLVHSNGNTYLEYYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:311)
B1V6.CDRv3.hmzLC:
DIVLTQTPLSLPVSLGDPASISCRSSQSLVHSSGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:368)
为了找到最佳双特异性抗体，将表2中所列的抗MDR1抗体的许多重链与抗CD47抗体5F9的重链以及来自抗MDR1抗体的不同轻链组合。一些LC来自表2中所列的抗MDR1抗体。
使用ELISA或表达CD47的细胞并且使用表达ABCB1的细胞测定这些各种双特异性抗体与CD47的结合的结果示于图18A和图18B中。
KPB1 VL/CDR3 LC已经从KJB1-6轻链抗体进行了工程化，在VH CDR3中引入了突变。
KPB1-6 LC序列：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPFTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:369)
VL CDR1:RSSQSLVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:290)
VL CDR2:KVSNRFS(SEQ ID NO:12)
VL CDR3:QGSHVPFT(SEQ ID NO:370)
KPB1 VL/CDR3 LC序列：
DIVMTQSPLSLPVSLGDPASISCRSSQSLVHSNGNTYLEYYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:311)
VL CDR1:RSSQSLVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:290)
VL CDR2:KVSNRFS(SEQ ID NO:12)
VL CDR3:QGSHFPRT(SEQ ID NO:348)
除非另有规定，否则本文公开的所有双特异性抗体包含源自抗MDR1抗体的HC、源自抗肿瘤相关抗原抗体(例如抗CD47 Ab)的HC和源自抗MDR1抗体的共同轻链。这些抗体以形式VH/VH/VL或VH:VL::VL:VH列出。
实施例7：具有非传统排列的HC和LC的双特异性抗体的产生
本文公开的单特异性和双特异性抗体可以包含呈图19中展示的形式的重链和轻链。
抗MDR1和抗CD47双特异性抗体以如图20所描绘的scFv-Fab-Fc形式产生。双特异性抗体的抗CD47臂的Fc区被描绘为具有由氨基酸取代产生的“臼”，并且抗MDR-1臂的Fc区包括由氨基酸取代产生的“杵”。然而，杵和臼的突变可被逆转，使得抗CD47臂含有杵，而抗MDR1臂含有臼。产生了四种双特异性抗体：
KT14.5F9hu scFv-B1.28.hu13
KT14.B6H12hu scFv-B1.28.hu13
KT14.5F9hu scFv-B1.261.hu1
KT14.B6H12hu scFv-B1.261.hu1
KT14.5F9hu scFv和KT14.B6H12hu scFv包含具有“杵”突变的人IgG1Fc区以促进与包括“臼”突变的抗MDR1抗体的Fc区配对。
KT14.5F9hu scFv-hIgG1_杵具有以下氨基酸序列：
Figure BDA0003771923880001351
Figure BDA0003771923880001361
HCDR1-3以粗体指示。LCDR1-3加粗并且加下划线。KT14.B6H12hu scFv-hIgG1_杵具有以下氨基酸序列：
Figure BDA0003771923880001362
HCDR1-3以粗体指示。LCDR1-3加粗并且加下划线。
B1.28.hu13-hIgG1_臼具有以下氨基酸序列：
Figure BDA0003771923880001363
HCDR1-3以粗体指示。
所使用的B1.28.LC具有以下氨基酸序列：
Figure BDA0003771923880001371
LCDR1-3以粗体并且加下划线指示。
B1.261.huH1.hIgG1_臼具有以下氨基酸序列：
Figure BDA0003771923880001372
HCDR1-3以粗体指示。
B1.261.huL1具有以下氨基酸序列：
Figure BDA0003771923880001373
LCDR1-3以粗体并且加下划线指示。
图21示出了KT14.5F9hu scFv-B1.28.hu13和KT14.B6H12hu scFv-B1.28.hu13抗体与C6细胞表面上表达的人CD47和人MDR1二者结合。
图22示出了KT14.5F9hu scFv-B1.261.hu1和KT14.B6H12hu scFv-B1.261.hu1抗体与C6细胞表面上表达的人CD47和人MDR1二者结合。
实施例8：抗MDR1和抗CD47抗体的体内功效
图23A-图23C示出了抗MDR1和抗CD47双特异性抗体在减少MES-SA-DX5模型中的肿瘤体积方面的体内功效。图23A示出了B1-188 VH:MRK16LC::MRK16LC:5F9 HC抗体(B1-188/KT14/MRK16)和B1-225 VH:MRK16 LC::MRK16 LC:5F9 HC抗体(B1-225/KT14/MRK16)在单独和与紫杉醇治疗组合时减少肿瘤体积。B1-225/KT14/MRK16具有与包括15D3VH:MRK16LC::MRK16LC:5F9 HC抗体(15D3/KT14/MRK16)在内的KBisP1.1抗体的功效相似的功效。
图23B示出了每种双特异性抗体作为单一药剂以及与紫杉醇组合时将肿瘤体积减少至低于用紫杉醇和阴性对照抗体观察到的水平。
图23C示出了将MRK16 LC用来自抗MDR1抗体B1.VL6、B1.225v1或B1.27的LC替代增强了双特异性抗体作为单一药剂或与紫杉醇组合时的功效。
实施例9：与MDR-1和Her2结合的双特异性抗体的产生
将表2中所列的抗MDR1抗体的重链与抗Her2抗体曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的重链组合。
曲妥珠单抗轻链序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:376)
曲妥珠单抗重链序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:320)
帕妥珠单抗重链序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:324)
帕妥珠单抗轻链序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:377)
表述“KT-1”在本文中用于指代抗体曲妥珠单抗。表述“KT-1-2”在本文中用于指代抗体帕妥珠单抗。图24列出了以双特异性抗体形式测试的抗MDR1重链、抗HER2重链、和抗MDR1共同轻链的各种组合，以鉴定与两种抗原均结合的组合。使用表达HER2的SKBR细胞系确定与HER2的结合。
实施例10：与MDR-1和PDL1结合的双特异性抗体的产生
将表2中所列的抗MDR1抗体的重链与抗PDL1抗体阿特利珠单抗的重链组合。
阿特利珠单抗轻链序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:378)
阿特利珠单抗重链序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:318)
图25列出了以双特异性抗体形式测试的抗MDR1重链、抗PDL1重链、和抗MDR1共同轻链的各种组合，以鉴定与两种抗原均结合的组合。
尽管出于清楚理解的目的已经通过说明和实施例详细地描述了前述发明，但是根据本发明的教导，本领域普通技术人员容易清楚的是，可以在不脱离所附权利要求的精神或范围的情况下对其进行某些改变和修改。
因此，前面仅说明了本发明的原理。应当理解，本领域技术人员将能够设计出各种安排，这些安排虽然未在本文中明确描述或示出，但体现了本发明的原理并且包括在其精神和范围内。此外，本文所述的所有实施例和条件语言主要旨在帮助读者理解本发明的原理和诸位发明人为推进本领域所贡献的概念，并且应被解释为不限于此类具体叙述的实施例和条件。此外，本文叙述本发明的原理、方面和实施方案以及其具体实施例的所有陈述旨在包括其结构和功能等同物二者。另外，此类等同物旨在包括当前已知的等同物和将来开发的等同物，即，所开发的执行相同功能的任何元件，而不管结构如何。此外，本文所公开的任何内容都不旨在专用于公众，不管这种公开内容是否在权利要求中明确地叙述。
因此，本发明的范围不旨在受限于本文示出并描述的示例性实施方案。相反，本发明的范围和精神由所附权利要求体现。在权利要求中，35 U.S.C.§112(f)或35 U.S.C.§112(6)被明确地定义为仅当在权利要求中限制的开头引用了确切短语“用于……的手段”或确切短语“用于……的步骤”时，才在权利要求中针对这种限制援引；如果未在权利要求的限制中使用这种确切短语，那么不援引35 U.S.C.§112(f)或35 U.S.C.§112(6)。
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<213> 智人(Homo sapiens)
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Met Met Leu Val Phe Gly Glu Met Thr Asp Ile Phe Ala Asn Ala Gly
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Asn Leu Glu Asp Leu Met Ser Asn Ile Thr Asn Arg Ser Asp Ile Asn
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Asp Thr Gly Phe Phe Met Asn Leu Glu Glu Asp Met Thr Arg Tyr Ala
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Tyr
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Thr Arg Gly Trp Lys Leu
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<213> 智人(Homo sapiens)
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Gly Thr Thr Leu Val Leu Ser Gly Glu Tyr Ser Ile Gly Gln
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 4
Ser Lys Ile Ile Gly Val Phe Thr Arg Ile Asp Asp Pro Glu Thr Lys
1 5 10 15
Arg Gln Asn Ser Asn Leu Phe Ser
20
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<213> 智人(Homo sapiens)
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1 5 10 15
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<213> 小家鼠(Mus musculus)
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
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Ala Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Pro Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Tyr Gly Asn Tyr Gly Trp Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
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Leu Val Thr Val Ser Ser
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Gly
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<400> 14
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Leu Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 15
Leu Tyr Thr Met Ser
1 5
<210> 16
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 16
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 17
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 17
Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 18
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 18
Asp Val Leu Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser
20 25 30
Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 19
<211> 119
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 人源化序列
<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Leu Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 20
<211> 112
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 人源化序列
<400> 20
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser
20 25 30
Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 21
<211> 112
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 人源化序列
<400> 21
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser
20 25 30
Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 22
<211> 112
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 人源化序列
<400> 22
Glu Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser
20 25 30
Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 23
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 23
Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 24
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 24
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Thr Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 25
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 25
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 26
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 26
Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Asn Tyr Gly Trp Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 27
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 27
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Ala Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 28
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 28
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 29
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ile Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Gly Asn Phe Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 30
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 30
Asn Tyr Gly Val Ser
1 5
<210> 31
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 31
Thr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ile Val Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 32
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 32
Gly Tyr Gly Asn Phe Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 33
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 33
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Asn Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 34
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 34
Lys Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Phe Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Tyr Asp Glu Ala Trp Phe Ala Ser Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 35
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 35
Asn Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 36
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 36
Thr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Phe Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 37
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 37
Tyr Gly Tyr Asp Glu Ala Trp Phe Ala Ser
1 5 10
<210> 38
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 38
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Thr Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 39
Arg Ser Ser Gln Thr Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 40
Lys Val Ser Lys Arg Phe Ser
1 5
<210> 41
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 41
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Arg Thr
1 5
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 42
Phe Gln Gly Ser His Phe Pro Arg Thr
1 5
<210> 43
<211> 121
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 43
Glu Val Ile Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ala Ile Asn Ser Asn Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Tyr Tyr Gly Tyr Glu Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 44
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 44
Asn Tyr Tyr Met Ser
1 5
<210> 45
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 45
Ala Ile Asn Ser Asn Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 46
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 46
His Tyr Tyr Gly Tyr Glu Gly Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 47
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 47
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 48
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 48
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His
1 5 10
<210> 49
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 49
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 50
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 50
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 51
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 51
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Ile Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Tyr Gly Asn Phe Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly His Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 52
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 52
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 53
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 53
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Ser Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 54
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 54
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Tyr Gly Ser Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 55
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 55
Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr
1 5
<210> 56
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 56
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Val Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Ile Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Ala Tyr Tyr Gly Asn Leu Val Gly Tyr Gly Val Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 57
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 57
Thr Tyr Val Ile His
1 5
<210> 58
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 58
Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 59
<211> 13
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 59
Ala Tyr Tyr Gly Asn Leu Val Gly Tyr Gly Val Asp Tyr
1 5 10
<210> 60
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 60
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Pro Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Phe Ile
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Phe
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Trp Gly Ser Asn Leu Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 61
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 61
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Phe Ile Tyr
1 5 10
<210> 62
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 62
His Gln Trp Gly Ser Asn Leu Pro Thr
1 5
<210> 63
<211> 122
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 人源化序列
<400> 63
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Val Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Ala Tyr Tyr Gly Asn Leu Val Gly Tyr Gly Val Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 64
<211> 106
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 人源化序列
<400> 64
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Phe Ile
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Pro Trp Ile Phe
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Trp Gly Ser Asn Leu Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 65
<211> 106
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 人源化序列
<400> 65
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Phe Ile
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Pro Trp Ile Phe
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Trp Gly Ser Asn Leu Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 66
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 66
Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Gly Asn Phe Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 67
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 67
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Met Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 68
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 68
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 69
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 69
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 70
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 70
Glu Ala Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Asn Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Leu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Ser Asn Leu Ala Trp Phe Ala Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 71
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 71
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Asn Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 72
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 72
Tyr Ser Asn Leu Ala Trp Phe Ala Ser
1 5
<210> 73
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 73
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Phe Leu Ile Ser Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 74
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 74
Gly Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Tyr Ser Asn Tyr Gly Arg Phe Ala Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Thr
115
<210> 75
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 75
Tyr Ser Asn Tyr Gly Arg Phe Ala Ser
1 5
<210> 76
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 76
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Phe Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 77
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 77
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 78
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 78
Lys Val Ser Asn Arg Phe Phe
1 5
<210> 79
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 79
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 80
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 80
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Phe Thr
1 5
<210> 81
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 81
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Leu Ser Ser Gly Gly Thr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Ser Asn Leu Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 82
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 82
Thr Leu Ser Ser Gly Gly Thr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 83
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 83
Tyr Ser Asn Leu Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 84
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 84
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Phe Leu Ile Ser Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Glu Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 85
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 85
Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Gly Asn Phe Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 86
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 86
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 87
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 87
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Gly Asn Phe Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 88
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 88
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Tyr Ser Asn Tyr Gly Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 89
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 89
Tyr Ser Asn Tyr Gly Arg Phe Ala Tyr
1 5
<210> 90
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 90
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Asp Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Phe Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 91
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 91
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Asp Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 92
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 92
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Met Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Phe Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Phe Ser Asn Phe Gly Arg Phe Ala Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 93
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 93
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 94
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 94
Phe Ser Asn Phe Gly Arg Phe Ala Ser
1 5
<210> 95
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 95
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Phe Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Phe Gly Val Pro
50 55 60
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65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 96
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 96
Arg Phe Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 97
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 97
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
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Thr Lys Tyr Ser Asn Tyr Gly Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Thr
115
<210> 98
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 98
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
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Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 99
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 99
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Thr
115
<210> 100
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 100
Thr Ile Ser Ser Val Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 101
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 101
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
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Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
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Asp Arg Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
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Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Glu
100 105 110
<210> 102
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 102
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
Ala Lys Phe Ser Asn Tyr Gly Arg Phe Ala Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 103
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 103
Phe Ser Asn Tyr Gly Arg Phe Ala Ser
1 5
<210> 104
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 104
Asp Ile Gln Met Ile Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Phe Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 105
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 105
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu His
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Thr Asn Asp Ala Trp Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 106
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 106
Asn Tyr Gly Met Ser
1 5
<210> 107
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 107
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 108
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 108
Arg Gly Thr Asn Asp Ala Trp Phe Gly Tyr
1 5 10
<210> 109
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 109
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Phe Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Gln Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 110
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 110
Arg Phe Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 111
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 111
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Gln Tyr Thr
1 5 10
<210> 112
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 112
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Thr Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Ser Asn Leu Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 113
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 113
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Phe Met Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 114
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 114
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Phe Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Phe Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Glu
100 105 110
<210> 115
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 115
Glu Ala Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Asn Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Leu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Lys Tyr Ser Asn Leu Ala Trp Phe Ala Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 116
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 116
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Ile Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Phe Leu Ile Ser Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
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<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 117
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Ile Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 118
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 118
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Val Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Ile Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg His Gly Arg Trp Leu Leu Gln Arg Gly Gly Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 119
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 119
Ser Tyr Gly Val His
1 5
<210> 120
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 120
Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 121
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 121
His Gly Arg Trp Leu Leu Gln Arg Gly Gly Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 122
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 122
Asp Val Val Met Thr Gln Ala Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Cys Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 123
Arg Ala Ser Gln Asn Val Gly Ser Tyr Ile Ala
1 5 10
<210> 124
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 124
Ser Ala Ser Tyr Arg Cys Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 125
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 126
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 126
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
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Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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Val Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
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100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 127
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 127
Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Ser Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 128
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 128
Ser Ala Ser Tyr Arg Ser Ser
1 5
<210> 129
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 129
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Val Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
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Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Arg His Gly Arg Trp Leu Leu Gln Arg Gly Gly Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 130
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 130
Gln Val Gln Met Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Val Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Ile Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
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Arg His Gly Arg Trp Leu Leu Gln Arg Gly Gly Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 131
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 131
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Cys Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 132
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 132
Arg Ala Ser Gln Asn Val Gly Ser Tyr Val Ala
1 5 10
<210> 133
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 133
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ser Asn Gly Ala Tyr Thr Tyr Phe Pro Asp Thr Val
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Thr Arg Arg Gly Trp Asp Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 134
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 134
Ala Ile Ser Ser Asn Gly Ala Tyr Thr Tyr Phe Pro Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 135
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 135
Arg Gly Trp Asp Thr Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 136
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 136
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser
20 25 30
Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 137
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 137
Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 138
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 138
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 139
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 139
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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Ala Arg Tyr Ser Asn Tyr Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 140
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 140
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Met
1 5 10 15
Gly
<210> 141
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 141
Tyr Ser Asn Tyr Gly Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 142
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 142
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
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50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser Leu Val Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 143
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 143
Phe Gln Gly Ser Leu Val Pro Arg Thr
1 5
<210> 144
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 144
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Ser Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 145
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 145
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 146
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 146
Tyr Tyr Val Tyr Asp Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 147
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 147
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
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100 105 110
<210> 148
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 148
Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
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<210> 149
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 149
Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Phe Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 150
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 150
Gln Gly His Trp Gly Arg Thr Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 151
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 151
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Ser Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
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Gly Glu Asp Gly Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro
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100 105
<210> 152
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 152
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His
1 5 10
<210> 153
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 153
Ser Thr Ser Ser Leu Ala Ser
1 5
<210> 154
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 154
Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 155
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 155
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Thr Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Ser Cys Tyr Asn Gly Ala Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Leu Pro Ile Gln Phe Gly Asn Phe Tyr Pro Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 156
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 156
Asn Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 157
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 157
Phe Ile Ser Cys Tyr Asn Gly Ala Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 158
<211> 13
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 158
Leu Pro Ile Gln Phe Gly Asn Phe Tyr Pro Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 159
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 159
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
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<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 160
Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His
1 5 10
<210> 161
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 161
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 162
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 162
His Gln Tyr His Arg Ser Pro Pro Thr
1 5
<210> 163
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 163
Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Met Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Lys Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Ser Asn Tyr Gly Trp Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 164
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 164
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 165
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 165
Tyr Ser Asn Tyr Gly Trp Phe Pro Tyr
1 5
<210> 166
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 166
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Thr Ile Val His Ser
20 25 30
Asp Gly Tyr Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 167
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 167
Arg Ser Ser Gln Thr Ile Val His Ser Asp Gly Tyr Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 168
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 168
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Asp Gly Ser Tyr Thr Tyr His Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Ser Cys
85 90 95
Thr Arg Gln Gly Asn Trp Gly Arg Thr Trp Phe Thr Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 169
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 169
Thr Ile Ser Ser Asp Gly Ser Tyr Thr Tyr His Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 170
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 170
Gln Gly Asn Trp Gly Arg Thr Trp Phe Thr Tyr
1 5 10
<210> 171
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 171
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Ser Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 172
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 172
Glu Val Ile Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Lys Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Tyr Ser Asn Tyr Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 173
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 173
Asp Ile Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Thr
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 174
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 174
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Thr Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 175
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 175
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Met Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Gly Thr Ala His
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Cys Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Ser Tyr Gly Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 176
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 176
Gly Tyr Phe Met Asn
1 5
<210> 177
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 177
Arg Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 178
<211> 13
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 178
Cys Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Ser Tyr Gly Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 179
<211> 111
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 179
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val His Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile His Ala Ala Ser His Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Met Glu Glu Asp Asp Ile Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Lys Leu Lys
100 105 110
<210> 180
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 180
Arg Ala Ser Glu Ser Val His Asn Tyr Gly Val Ser Phe Met Asn
1 5 10 15
<210> 181
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 181
Ala Ala Ser His Gln Gly Ser
1 5
<210> 182
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 182
Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Leu Thr
1 5
<210> 183
<211> 261
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 183
Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Ser
1 5 10 15
Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Phe Ser Ile Thr Ser Gly Tyr
20 25 30
Gly Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Phe Ile Asn Ser Ala Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Pro Leu Lys
50 55 60
Ser Gln Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu
65 70 75 80
His Leu Thr Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Trp Gly His Thr Leu Gly Val Thr Arg Asp Phe Trp Tyr Phe Asp
100 105 110
Phe Trp Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser
260
<210> 184
<211> 6
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 小家鼠(Mus musculus)或褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 184
Ser Gly Tyr Gly Trp Asn
1 5
<210> 185
<211> 16
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 185
Phe Ile Asn Ser Ala Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Pro Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 186
<211> 16
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 186
Trp Gly His Thr Leu Gly Val Thr Arg Asp Phe Trp Tyr Phe Asp Phe
1 5 10 15
<210> 187
<211> 211
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 187
Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Pro Ala Ser Leu Gly Glu Ser Val
1 5 10 15
Thr Ile Ile Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Asn Leu Asn Trp
20 25 30
Tyr Arg Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Pro Leu Ile Tyr Tyr Thr
35 40 45
Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Ser Phe Ser Gly Ser Arg Ser
50 55 60
Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe
65 70 75 80
Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Ala Ser Phe Pro Trp Thr Phe Gly
85 90 95
Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val
100 105 110
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
115 120 125
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
130 135 140
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
145 150 155 160
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
180 185 190
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
195 200 205
Gly Glu Cys
210
<210> 188
<211> 11
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 小家鼠(Mus musculus)或褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 188
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Asn Leu Asn
1 5 10
<210> 189
<211> 7
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 小家鼠(Mus musculus)或褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 189
Tyr Thr Ser Ile Leu Gln Ser
1 5
<210> 190
<211> 9
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 小家鼠(Mus musculus)或褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 190
Gln Gln Asp Ala Ser Phe Pro Trp Thr
1 5
<210> 191
<211> 305
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 191
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Thr Asn Ile Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg His Tyr Tyr Ser Ser Tyr Ile Tyr Pro Thr Gly Gly Phe Ala
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Gln Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser
305
<210> 192
<211> 5
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 小家鼠(Mus musculus)或褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 192
Asn Tyr Trp Met Thr
1 5
<210> 193
<211> 17
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 193
Ser Ile Thr Asn Ile Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 194
<211> 15
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 194
His Tyr Tyr Ser Ser Tyr Ile Tyr Pro Thr Gly Gly Phe Ala Tyr
1 5 10 15
<210> 195
<211> 212
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 195
Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Thr Thr Ile Ala Ala Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr
20 25 30
Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp Leu Tyr Asp
35 40 45
Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Thr Met Glu Thr Glu Asp
65 70 75 80
Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Thr Pro Pro Thr Phe
85 90 95
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
100 105 110
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
115 120 125
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
130 135 140
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
145 150 155 160
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
165 170 175
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
180 185 190
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
195 200 205
Arg Gly Glu Cys
210
<210> 196
<211> 10
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 小家鼠(Mus musculus)或褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 196
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr
1 5 10
<210> 197
<211> 7
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 小家鼠(Mus musculus)或褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 197
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 198
<211> 9
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 198
Gln Gln Trp Ser Ser Thr Pro Pro Thr
1 5
<210> 199
<211> 210
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 199
Met Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val
1 5 10 15
Thr Leu Thr Cys Lys Gly Ser Gln Asn Ile Asn Asn Phe Leu Ala Trp
20 25 30
Tyr Gln Gln Lys Arg Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Thr
35 40 45
Asn Ser Leu His Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu His Ser Glu Asp Leu
65 70 75 80
Ala Thr Tyr Tyr Cys Tyr Gln Tyr Asn Asn Gly Tyr Thr Phe Gly Ala
85 90 95
Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
100 105 110
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val
115 120 125
Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp
130 135 140
Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr
145 150 155 160
Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr
165 170 175
Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val
180 185 190
Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly
195 200 205
Glu Cys
210
<210> 200
<211> 11
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 200
Lys Gly Ser Gln Asn Ile Asn Asn Phe Leu Ala
1 5 10
<210> 201
<211> 7
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 201
Lys Thr Asn Ser Leu His Thr
1 5
<210> 202
<211> 8
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 202
Tyr Gln Tyr Asn Asn Gly Tyr Thr
1 5
<210> 203
<211> 290
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 小家鼠(Mus musculus)或褐家鼠(Rattus norvegicus)
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (277)..(277)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 203
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Gly Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Asn Ser Ala Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Pro Leu
50 55 60
Lys Ser Gln Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly His Thr Met Gly Thr Ile Arg Asp Phe Trp Tyr Phe
100 105 110
Asp Phe Trp Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser His Xaa Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val
290
<210> 204
<211> 16
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 小家鼠(Mus musculus)或褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 204
Tyr Ile Asn Ser Ala Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Pro Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 205
<211> 16
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 205
Trp Gly His Thr Met Gly Thr Ile Arg Asp Phe Trp Tyr Phe Asp Phe
1 5 10 15
<210> 206
<211> 125
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 206
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Phe Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Phe Gly Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Asn Ser Ala Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Pro Leu
50 55 60
Lys Ser Gln Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly His Ser Met Gly Thr Thr Arg Asp Tyr Trp Tyr Phe
100 105 110
Asp Phe Trp Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 207
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 207
Ser Gly Phe Gly Trp Asn
1 5
<210> 208
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 208
Trp Gly His Ser Met Gly Thr Thr Arg Asp Tyr Trp Tyr Phe Asp Phe
1 5 10 15
<210> 209
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 209
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Pro Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Ile Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Asn
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Ser Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Thr Met Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Ala Ser Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 210
<211> 124
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 210
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Leu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Thr Asn Thr Gly Ala Ala Thr Phe Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg His Tyr Tyr Ser Ser Tyr Val Tyr Pro Thr Gly Gly Phe Ala
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 211
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 211
Ser Ile Thr Asn Thr Gly Ala Ala Thr Phe Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 212
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 212
His Tyr Tyr Ser Ser Tyr Val Tyr Pro Thr Gly Gly Phe Ala Tyr
1 5 10 15
<210> 213
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 213
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Thr Ile Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Ala Thr Pro Lys Leu Cys Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Asn Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Thr Met Glu Thr Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Thr Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
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<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 214
Arg Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr
1 5 10
<210> 215
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 215
Gln Gln Trp Thr Thr Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 216
<211> 124
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 216
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg His Tyr Tyr Ser Ser Tyr Val Tyr Pro Thr Gly Gly Phe Ala
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 217
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 217
Ser Ile Thr His Thr Gly Gly Asn Thr Phe Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 218
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 218
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Thr Ile Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Asn Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Thr Met Glu Thr Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Thr Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 219
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 219
Gln Gln Trp Thr Ser Thr Pro Pro Thr
1 5
<210> 220
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 220
Tyr Ile Asn Ser Ala Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Pro Leu Lys Gly
1 5 10 15
<210> 221
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 221
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1 5 10 15
<210> 222
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 222
Asp Ile His Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Pro Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Ile Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Asn
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Ala Ile Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Thr Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gly Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Ala Ser Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 223
<211> 125
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 223
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Ala
20 25 30
Tyr Gly Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Asn Ser Ala Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Pro Leu
50 55 60
Lys Ser Gln Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly His Thr Met Gly Val Thr Arg Asp Tyr Trp Tyr Phe
100 105 110
Asp Phe Trp Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 224
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 224
Ser Ala Tyr Gly Trp Asn
1 5
<210> 225
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 225
Trp Gly His Thr Met Gly Val Thr Arg Asp Tyr Trp Tyr Phe Asp Phe
1 5 10 15
<210> 226
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 226
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Pro Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Ile Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Asn
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Ile Leu His Ser Gly Val Pro Ser Ser Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Ala Ser Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 227
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 227
Tyr Thr Ser Ile Leu His Ser
1 5
<210> 228
<211> 117
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 228
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Met Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Ala Pro Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asp Lys Val Asn Gly Tyr Thr Thr Val Tyr Asn Pro
50 55 60
Ser Val Gln Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg Asn Trp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 229
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 229
Asp Phe Tyr Met Asn
1 5
<210> 230
<211> 19
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 230
Phe Ile Arg Asp Lys Val Asn Gly Tyr Thr Thr Val Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Val Gln Gly
<210> 231
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 231
Asn Trp Ala Leu Asp Tyr
1 5
<210> 232
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 232
Asp Ile Gln Met Thr Gln Phe Pro Ser Phe Leu Phe Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Thr Asn Ser Leu Leu Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Phe Gly Thr His Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 233
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 233
Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 234
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 234
Asp Thr Asn Ser Leu Leu Thr
1 5
<210> 235
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 235
Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 236
<211> 115
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 236
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Gln Leu Ser Cys Leu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Thr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asp Ala Lys Asn Ala Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Arg Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gln Glu Gly Ala Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 237
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 237
Asn Tyr Gly Met Thr
1 5
<210> 238
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 238
Gln Glu Gly Ala Ala Tyr
1 5
<210> 239
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 239
Glu Ile Val Met Ile Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Ser Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Tyr
20 25 30
Val Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Arg Arg Met Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Ala Tyr His Cys Leu Gln Tyr Asn Lys Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 240
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 240
Arg Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Tyr Val Asn
1 5 10
<210> 241
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 241
Arg Ala Thr Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 242
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 242
Leu Gln Tyr Asn Lys Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 243
<211> 117
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 243
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Met Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Ile Arg Gln Pro Ala Gly Lys Ala Pro Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Leu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Thr
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Gln Asn Met
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 244
<211> 19
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 244
Leu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Thr Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 245
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 245
Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 246
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 246
Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Asn Leu Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Ser Val Ser Ile Asn Cys Lys Ala Ser Lys Ser Ile Tyr Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Asn Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Thr Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 247
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 247
Lys Ala Ser Lys Ser Ile Tyr Lys Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 248
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 248
Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 249
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 249
Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 250
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 250
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Thr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Gln Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ala Trp Gly Gly Ser Tyr Leu His Trp Tyr Phe Asp Phe Trp
100 105 110
Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 251
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 251
Ser Ile Thr Asn Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 252
<211> 13
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 252
Ala Trp Gly Gly Ser Tyr Leu His Trp Tyr Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 253
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 253
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Lys Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Thr Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Gln Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asp Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 254
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 254
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 255
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 255
Trp Ala Ser Thr Arg Gln Ser
1 5
<210> 256
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 256
Gln Gln Tyr Tyr Asp Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 257
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 257
Glu Val Gln Ile Leu Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Gly Ser Gly Phe Thr Phe Lys Asn Ser
20 25 30
Trp Met Ser Trp Thr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Thr Asn Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Gln Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ala Trp Gly Gly Val Tyr Leu His Trp Tyr Phe Asp Phe Trp
100 105 110
Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 258
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 258
Asn Ser Trp Met Ser
1 5
<210> 259
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 259
Ser Ile Thr Asn Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 260
<211> 13
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 260
Ala Trp Gly Gly Val Tyr Leu His Trp Tyr Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 261
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 261
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ala Arg Gln Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asp Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 262
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 262
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 263
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 263
Trp Ala Ser Ala Arg Gln Ser
1 5
<210> 264
<211> 117
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 264
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ile Asn Thr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Glu Trp Thr Thr Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 265
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 265
Ser Ile Ile Asn Thr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 266
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 266
Glu Trp Thr Thr Val Gly Asp Tyr
1 5
<210> 267
<211> 109
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 267
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln
1 5 10 15
Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Thr Asn Gln Asn Val Asp Tyr Tyr Gly
20 25 30
Asn Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Gln Pro Lys
35 40 45
Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg
50 55 60
Phe Ser Gly Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro
65 70 75 80
Val Glu Ala Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg Asn
85 90 95
Leu Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 268
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 268
Lys Thr Asn Gln Asn Val Asp Tyr Tyr Gly Asn Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 269
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 269
Leu Ala Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 270
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 270
Gln Gln Ser Arg Asn Leu Arg Thr
1 5
<210> 271
<211> 109
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 271
Asp Ile Trp Met Thr Gln Ser Pro Ala Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln
1 5 10 15
Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Thr Asn Gln Asn Val Asp Tyr Tyr Gly
20 25 30
Asn Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Gln Pro Lys
35 40 45
Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg
50 55 60
Phe Ser Gly Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro
65 70 75 80
Val Glu Ala Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg Asn
85 90 95
Leu Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 272
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 272
Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Thr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Thr Asn Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Gln Asn Thr Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ala Trp Gly Ala Val Tyr Leu His Trp Phe Phe Asp Phe Trp
100 105 110
Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 273
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 273
Asn Tyr Trp Met Ser
1 5
<210> 274
<211> 13
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 274
Ala Trp Gly Ala Val Tyr Leu His Trp Phe Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 275
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 275
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Met Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Ile Arg Gln Pro Ala Gly Lys Ala Pro Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Lys His Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Ser
50 55 60
Ser Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Gln Asn Met
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ile Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Thr Thr Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Val Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 276
<211> 19
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 276
Phe Ile Arg Asn Lys His Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Ser Ser
1 5 10 15
Leu Lys Gly
<210> 277
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 277
Gly Gly Thr Thr Gly Thr Asp Tyr
1 5
<210> 278
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 278
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Lys Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 279
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 279
Lys Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Lys Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 280
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 280
Asn Thr Lys Ser Leu Gln Thr
1 5
<210> 281
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 281
Gln Gln Tyr Asn Ser Trp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 282
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 282
Ser Ile Ser Ser Thr Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Met Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 283
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 283
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Val Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 284
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 284
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Leu Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 285
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 285
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Arg Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Ile Pro Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile
100 105 110
Lys
<210> 286
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 286
Glu Val Ile Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Glu Ala Trp Phe Ala Ser Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 287
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 287
Glu Val Lys Val Val Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Met Ser Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Ala Gly Asp Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 288
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 288
Ala Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Thr Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Ser Cys Tyr Asn Gly Ala Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Lys Phe Asn Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Pro Ile Gln Phe Gly Asn Phe Tyr Pro Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 289
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 289
Leu Trp Val Pro Gly Ser Thr Gly Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro
1 5 10 15
Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg
20 25 30
Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp
35 40 45
Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val
50 55 60
Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
65 70 75 80
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu
85 90 95
Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser His Phe Pro Arg Thr Phe Gly
100 105 110
Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
115 120
<210> 290
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 290
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 291
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (57)..(57)
<223> 位置57处的氨基酸是N、Q或S
<400> 291
Glu Val Lys Val Val Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Xaa Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Met Ser Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Ala Gly Asp Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 292
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (57)..(57)
<223> 位置57处的氨基酸是N、Q或S和任选地Q或S
<400> 292
Glu Val Lys Val Val Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Xaa Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Met Ser Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Ala Gly Asp Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 293
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 293
Glu Val Lys Val Val Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Met Ser Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Ala Gly Asp Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 294
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 294
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 295
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 295
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Thr Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asp Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Ala Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 296
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 296
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Gly Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 297
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 297
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Thr Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Ala Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 298
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 298
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Gly Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 299
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 299
Thr Ile Thr Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 300
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 300
Ser Leu Ala Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 301
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 301
Arg Tyr Thr Met Ser
1 5
<210> 302
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 302
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 303
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 303
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 304
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 304
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 305
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 305
Tyr Gly Ala Gly Asp Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 306
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 306
Asn Tyr Asn Met His
1 5
<210> 307
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 307
Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 308
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 308
Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 309
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 309
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Ala Gly Asp Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 310
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 310
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Lys Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 311
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 311
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Tyr Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 312
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 312
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 313
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 313
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Thr Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 314
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 314
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 315
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 315
Asp Ser Trp Ile His
1 5
<210> 316
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 316
Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 317
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 317
Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr
1 5
<210> 318
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 318
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 319
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 319
Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Ser Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 320
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 320
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 321
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 321
Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
1 5
<210> 322
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 322
Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr
1 5
<210> 323
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 323
Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 324
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 324
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 325
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 325
Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
1 5
<210> 326
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 326
Asn Pro Asn Ser Gly Gly
1 5
<210> 327
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 327
Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 328
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 328
Lys Ile Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 329
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 329
Phe Gln Ala Ser His Phe Pro Arg Thr
1 5
<210> 330
<211> 1280
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 330
Met Asp Leu Glu Gly Asp Arg Asn Gly Gly Ala Lys Lys Lys Asn Phe
1 5 10 15
Phe Lys Leu Asn Asn Lys Ser Glu Lys Asp Lys Lys Glu Lys Lys Pro
20 25 30
Thr Val Ser Val Phe Ser Met Phe Arg Tyr Ser Asn Trp Leu Asp Lys
35 40 45
Leu Tyr Met Val Val Gly Thr Leu Ala Ala Ile Ile His Gly Ala Gly
50 55 60
Leu Pro Leu Met Met Leu Val Phe Gly Glu Met Thr Asp Ile Phe Ala
65 70 75 80
Asn Ala Gly Asn Leu Glu Asp Leu Met Ser Asn Ile Thr Asn Arg Ser
85 90 95
Asp Ile Asn Asp Thr Gly Phe Phe Met Asn Leu Glu Glu Asp Met Thr
100 105 110
Arg Tyr Ala Tyr Tyr Tyr Ser Gly Ile Gly Ala Gly Val Leu Val Ala
115 120 125
Ala Tyr Ile Gln Val Ser Phe Trp Cys Leu Ala Ala Gly Arg Gln Ile
130 135 140
His Lys Ile Arg Lys Gln Phe Phe His Ala Ile Met Arg Gln Glu Ile
145 150 155 160
Gly Trp Phe Asp Val His Asp Val Gly Glu Leu Asn Thr Arg Leu Thr
165 170 175
Asp Asp Val Ser Lys Ile Asn Glu Gly Ile Gly Asp Lys Ile Gly Met
180 185 190
Phe Phe Gln Ser Met Ala Thr Phe Phe Thr Gly Phe Ile Val Gly Phe
195 200 205
Thr Arg Gly Trp Lys Leu Thr Leu Val Ile Leu Ala Ile Ser Pro Val
210 215 220
Leu Gly Leu Ser Ala Ala Val Trp Ala Lys Ile Leu Ser Ser Phe Thr
225 230 235 240
Asp Lys Glu Leu Leu Ala Tyr Ala Lys Ala Gly Ala Val Ala Glu Glu
245 250 255
Val Leu Ala Ala Ile Arg Thr Val Ile Ala Phe Gly Gly Gln Lys Lys
260 265 270
Glu Leu Glu Arg Tyr Asn Lys Asn Leu Glu Glu Ala Lys Arg Ile Gly
275 280 285
Ile Lys Lys Ala Ile Thr Ala Asn Ile Ser Ile Gly Ala Ala Phe Leu
290 295 300
Leu Ile Tyr Ala Ser Tyr Ala Leu Ala Phe Trp Tyr Gly Thr Thr Leu
305 310 315 320
Val Leu Ser Gly Glu Tyr Ser Ile Gly Gln Val Leu Thr Val Phe Phe
325 330 335
Ser Val Leu Ile Gly Ala Phe Ser Val Gly Gln Ala Ser Pro Ser Ile
340 345 350
Glu Ala Phe Ala Asn Ala Arg Gly Ala Ala Tyr Glu Ile Phe Lys Ile
355 360 365
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<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 332
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<211> 1280
<212> PRT
<213> 黑猩猩(Pan troglodytes)
<400> 333
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340 345 350
Glu Ala Phe Ala Asn Ala Arg Gly Ala Ala Tyr Glu Ile Phe Lys Ile
355 360 365
Ile Asp Asn Lys Pro Ser Ile Asp Ser Tyr Ser Lys Ser Gly His Lys
370 375 380
Pro Asp Asn Ile Lys Gly Asn Leu Glu Phe Arg Asn Val His Phe Ser
385 390 395 400
Tyr Pro Ser Arg Lys Gln Val Lys Ile Leu Lys Gly Leu Asn Leu Lys
405 410 415
Val Gln Ser Gly Gln Thr Val Ala Leu Val Gly Asn Ser Gly Cys Gly
420 425 430
Lys Ser Thr Thr Val Gln Leu Met Gln Arg Leu Tyr Asp Pro Thr Glu
435 440 445
Gly Met Val Ser Val Asp Gly Gln Asp Ile Arg Thr Ile Asn Val Arg
450 455 460
Phe Leu Arg Glu Ile Ile Gly Val Val Ser Gln Glu Pro Val Leu Phe
465 470 475 480
Ala Thr Thr Ile Ala Glu Asn Ile Arg Tyr Gly Arg Glu Asn Val Thr
485 490 495
Met Asp Glu Ile Glu Lys Ala Val Lys Glu Ala Asn Ala Tyr Asp Phe
500 505 510
Ile Met Lys Leu Pro His Lys Phe Asp Thr Leu Val Gly Glu Arg Gly
515 520 525
Ala Gln Leu Ser Gly Gly Gln Lys Gln Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala
530 535 540
Leu Val Arg Asn Pro Lys Ile Leu Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala
545 550 555 560
Leu Asp Thr Glu Ser Glu Ala Val Val Gln Val Ala Leu Asp Lys Ala
565 570 575
Arg Lys Gly Arg Thr Thr Ile Val Ile Ala His Arg Leu Ser Thr Val
580 585 590
Arg Asn Ala Asp Val Ile Ala Gly Phe Asp Asp Gly Val Ile Val Glu
595 600 605
Lys Gly Asn His Asp Glu Leu Met Lys Glu Lys Gly Ile Tyr Phe Lys
610 615 620
Leu Val Thr Met Gln Thr Ala Gly Asn Glu Val Glu Leu Glu Asn Ala
625 630 635 640
Ala Asp Glu Ser Lys Ser Glu Ile Asp Ala Leu Glu Met Ser Ser Asn
645 650 655
Asp Ser Arg Ser Ser Leu Ile Arg Lys Arg Ser Thr Arg Arg Ser Val
660 665 670
Arg Gly Ser Gln Ala Gln Asp Arg Lys Leu Ser Thr Lys Glu Ala Leu
675 680 685
Asp Glu Ser Ile Pro Pro Val Ser Phe Trp Arg Ile Met Lys Leu Asn
690 695 700
Leu Thr Glu Trp Pro Tyr Phe Val Val Gly Val Phe Cys Ala Ile Ile
705 710 715 720
Asn Gly Gly Leu Gln Pro Ala Phe Ala Ile Ile Phe Ser Lys Ile Ile
725 730 735
Gly Val Phe Thr Arg Ile Asp Asp Pro Glu Thr Lys Arg Gln Asn Ser
740 745 750
Asn Leu Phe Ser Leu Leu Phe Leu Val Leu Gly Ile Ile Ser Phe Ile
755 760 765
Thr Phe Phe Leu Gln Gly Phe Thr Phe Gly Lys Ala Gly Glu Ile Leu
770 775 780
Thr Lys Arg Leu Arg Tyr Met Val Phe Arg Ser Met Leu Arg Gln Asp
785 790 795 800
Val Ser Trp Phe Asp Asp Pro Lys Asn Thr Thr Gly Ala Leu Thr Thr
805 810 815
Arg Leu Ala Asn Asp Ala Ala Gln Val Lys Gly Ala Ile Gly Ser Arg
820 825 830
Leu Ala Val Ile Thr Gln Asn Ile Ala Asn Leu Gly Thr Gly Ile Ile
835 840 845
Ile Ser Phe Ile Tyr Gly Trp Gln Leu Thr Leu Leu Leu Leu Ala Ile
850 855 860
Val Pro Ile Ile Ala Ile Ala Gly Val Val Glu Met Lys Met Leu Ser
865 870 875 880
Gly Gln Ala Leu Lys Asp Lys Lys Glu Leu Glu Gly Ala Gly Lys Ile
885 890 895
Ala Ser Glu Ala Ile Glu Asn Phe Arg Thr Val Val Ser Leu Thr Gln
900 905 910
Glu Gln Lys Phe Glu His Met Tyr Ala Gln Ser Leu Gln Val Pro Tyr
915 920 925
Arg Asn Ser Leu Arg Lys Ala His Ile Phe Gly Ile Thr Phe Ser Phe
930 935 940
Thr Gln Ala Met Met Tyr Phe Ser Tyr Ala Gly Cys Phe Arg Phe Gly
945 950 955 960
Ala Tyr Leu Val Ala His Lys Leu Met Ser Phe Glu Asp Val Leu Leu
965 970 975
Val Phe Ser Ala Val Val Phe Gly Ala Met Ala Val Gly Gln Val Ser
980 985 990
Ser Phe Ala Pro Asp Tyr Ala Lys Ala Lys Ile Ser Ala Ala His Ile
995 1000 1005
Ile Met Ile Ile Glu Lys Thr Pro Leu Ile Asp Ser Tyr Ser Thr
1010 1015 1020
Glu Gly Leu Thr Pro Asn Thr Leu Glu Gly Asn Val Thr Phe Gly
1025 1030 1035
Glu Val Val Phe Asn Tyr Pro Thr Arg Pro Asp Ile Pro Val Leu
1040 1045 1050
Gln Gly Leu Ser Leu Glu Val Lys Lys Gly Gln Thr Leu Ala Leu
1055 1060 1065
Val Gly Ser Ser Gly Cys Gly Lys Ser Thr Val Val Gln Leu Leu
1070 1075 1080
Glu Arg Phe Tyr Asp Pro Leu Ala Gly Lys Val Leu Leu Asp Gly
1085 1090 1095
Lys Glu Ile Lys Arg Leu Asn Val Gln Trp Leu Arg Ala His Leu
1100 1105 1110
Gly Ile Val Ser Gln Glu Pro Ile Leu Phe Asp Cys Ser Ile Ala
1115 1120 1125
Glu Asn Ile Ala Tyr Gly Asp Asn Ser Arg Val Val Ser Gln Glu
1130 1135 1140
Glu Ile Val Arg Ala Ala Lys Glu Ala Asn Ile His Ala Phe Ile
1145 1150 1155
Glu Ser Leu Pro Asn Lys Tyr Ser Thr Arg Val Gly Asp Lys Gly
1160 1165 1170
Thr Gln Leu Ser Gly Gly Gln Lys Gln Arg Ile Ala Ile Ala Arg
1175 1180 1185
Ala Leu Val Arg Gln Pro His Ile Leu Leu Leu Asp Glu Ala Thr
1190 1195 1200
Ser Ala Leu Asp Thr Glu Ser Glu Lys Val Val Gln Glu Ala Leu
1205 1210 1215
Asp Lys Ala Arg Glu Gly Arg Thr Cys Ile Val Ile Ala His Arg
1220 1225 1230
Leu Ser Thr Ile Gln Asn Ala Asp Leu Ile Val Val Phe Gln Asn
1235 1240 1245
Gly Arg Val Lys Glu His Gly Thr His Gln Gln Leu Leu Ala Gln
1250 1255 1260
Lys Gly Ile Tyr Phe Ser Met Val Ser Val Gln Ala Gly Thr Lys
1265 1270 1275
Arg Gln
1280
<210> 334
<211> 1283
<212> PRT
<213> 食蟹猴(Macaca fascicularis)
<400> 334
Met Asp Leu Glu Gly Asp Arg Asn Gly Gly Ala Glu Lys Lys Asn Phe
1 5 10 15
Phe Lys Leu Asn Asn Lys Ser Lys Lys Asp Lys Lys Glu Arg Lys Pro
20 25 30
Thr Val Ser Val Phe Ser Met Phe Arg Tyr Ser Asn Trp Leu Asp Lys
35 40 45
Leu Tyr Met Val Val Gly Thr Leu Ala Ala Ile Ile His Gly Ala Gly
50 55 60
Leu Pro Leu Met Met Leu Val Phe Gly Asp Met Thr Asp Thr Phe Ala
65 70 75 80
Asn Ala Gly Asn Leu Gly Asp Leu Gly Ala Leu Leu Phe Asn Asn Thr
85 90 95
Asn Ser Ser Asn Ile Thr Asp Thr Val Pro Val Met Asn Leu Glu Glu
100 105 110
Asp Met Thr Arg Tyr Ala Tyr Tyr Tyr Ser Gly Ile Gly Ala Gly Val
115 120 125
Leu Val Ala Ala Tyr Ile Gln Val Ser Phe Trp Cys Leu Ala Ala Gly
130 135 140
Arg Gln Ile His Lys Ile Arg Lys Gln Phe Phe His Ala Ile Met Arg
145 150 155 160
Gln Glu Ile Gly Trp Phe Asp Val His Asp Val Gly Glu Leu Asn Thr
165 170 175
Arg Leu Thr Asp Asp Val Ser Lys Ile Asn Glu Gly Ile Gly Asp Lys
180 185 190
Ile Gly Met Phe Phe Gln Ser Met Ala Thr Phe Phe Thr Gly Phe Ile
195 200 205
Val Gly Phe Thr Arg Gly Trp Lys Leu Thr Leu Val Ile Leu Ala Ile
210 215 220
Ser Pro Val Leu Gly Leu Ser Ala Ala Val Trp Ala Lys Ile Leu Ser
225 230 235 240
Ser Phe Thr Asp Lys Glu Leu Leu Ala Tyr Ala Lys Ala Gly Ala Val
245 250 255
Ala Glu Glu Val Leu Ala Ala Ile Arg Thr Val Ile Ala Phe Gly Gly
260 265 270
Gln Lys Lys Glu Leu Glu Arg Tyr Asn Lys Asn Leu Glu Glu Ala Lys
275 280 285
Arg Ile Gly Ile Lys Lys Ala Ile Thr Ala Asn Ile Ser Ile Gly Ala
290 295 300
Ala Phe Leu Leu Ile Tyr Ala Ser Tyr Ala Leu Ala Phe Trp Tyr Gly
305 310 315 320
Thr Thr Leu Val Leu Ser Lys Glu Tyr Ser Ile Gly Gln Val Leu Thr
325 330 335
Val Phe Phe Ser Val Leu Ile Gly Ala Phe Ser Val Gly Gln Ala Ser
340 345 350
Pro Ser Ile Glu Ala Phe Ala Asn Ala Arg Gly Ala Ala Phe Glu Ile
355 360 365
Phe Lys Ile Ile Asp Asn Lys Pro Ser Ile Asp Ser Tyr Ser Lys Ser
370 375 380
Gly His Lys Pro Asp Asn Ile Lys Gly Asn Leu Glu Phe Arg Asn Val
385 390 395 400
His Phe Ser Tyr Pro Ser Arg Lys Glu Val Lys Ile Leu Lys Gly Leu
405 410 415
Asn Leu Lys Val Gln Ser Gly Gln Thr Val Ala Leu Val Gly Asn Ser
420 425 430
Gly Cys Gly Lys Ser Thr Thr Val Gln Leu Met Gln Arg Leu Tyr Asp
435 440 445
Pro Thr Glu Gly Met Val Ser Val Asp Gly Gln Asp Ile Arg Thr Ile
450 455 460
Asn Val Arg Phe Leu Arg Glu Ile Ile Gly Val Val Ser Gln Glu Pro
465 470 475 480
Val Leu Phe Ala Thr Thr Ile Ala Glu Asn Ile Arg Tyr Gly Arg Glu
485 490 495
Asp Val Thr Met Asp Glu Ile Glu Lys Ala Val Lys Glu Ala Asn Ala
500 505 510
Tyr Asp Phe Ile Met Lys Leu Pro Gln Lys Phe Asp Thr Leu Val Gly
515 520 525
Glu Arg Gly Ala Gln Leu Ser Gly Gly Gln Lys Gln Arg Ile Ala Ile
530 535 540
Ala Arg Ala Leu Val Arg Asn Pro Lys Ile Leu Leu Leu Asp Glu Ala
545 550 555 560
Thr Ser Ala Leu Asp Thr Glu Ser Glu Ala Val Val Gln Val Ala Leu
565 570 575
Asp Lys Ala Arg Lys Gly Arg Thr Thr Ile Val Ile Ala His Arg Leu
580 585 590
Ser Thr Val Arg Asn Ala Asp Val Ile Ala Gly Phe Asp Asp Gly Val
595 600 605
Ile Val Glu Lys Gly Asn His Asp Glu Leu Met Lys Glu Lys Gly Ile
610 615 620
Tyr Phe Lys Leu Val Thr Met Gln Thr Ala Gly Asn Glu Ile Glu Leu
625 630 635 640
Glu Asn Ala Ala Asp Glu Ser Lys Ser Glu Ile Asp Thr Leu Glu Met
645 650 655
Ser Ser His Asp Ser Gly Ser Ser Leu Ile Arg Lys Arg Ser Thr Arg
660 665 670
Arg Ser Val Arg Gly Ser Gln Gly Gln Asp Arg Lys Leu Ser Thr Lys
675 680 685
Glu Ala Leu Asp Glu Ser Ile Pro Pro Val Ser Phe Trp Arg Ile Met
690 695 700
Lys Leu Asn Leu Thr Glu Trp Pro Tyr Phe Val Val Gly Val Phe Cys
705 710 715 720
Ala Ile Ile Asn Gly Gly Leu Gln Pro Ala Phe Ala Val Ile Phe Ser
725 730 735
Lys Ile Ile Gly Ile Phe Thr Arg Asn Asp Asp Ala Glu Thr Lys Arg
740 745 750
Gln Asn Ser Asn Leu Phe Ser Leu Leu Phe Leu Val Leu Gly Ile Val
755 760 765
Ser Phe Ile Thr Phe Phe Leu Gln Gly Phe Thr Phe Gly Lys Ala Gly
770 775 780
Glu Ile Leu Thr Lys Arg Leu Arg Tyr Met Val Phe Arg Ser Met Leu
785 790 795 800
Arg Gln Asp Val Ser Trp Phe Asp Asp Pro Lys Asn Thr Thr Gly Ala
805 810 815
Leu Thr Thr Arg Leu Ala Asn Asp Ala Ala Gln Val Lys Gly Ala Ile
820 825 830
Gly Ser Arg Leu Ala Ile Ile Thr Gln Asn Ile Ala Asn Leu Gly Thr
835 840 845
Gly Ile Ile Ile Ser Leu Ile Tyr Gly Trp Gln Leu Thr Leu Leu Leu
850 855 860
Leu Ala Ile Val Pro Ile Ile Ala Ile Ala Gly Val Val Glu Met Lys
865 870 875 880
Met Leu Ser Gly Gln Ala Leu Lys Asp Lys Lys Glu Leu Glu Gly Ala
885 890 895
Gly Lys Ile Ala Thr Glu Ala Ile Glu Asn Phe Arg Thr Val Val Ser
900 905 910
Leu Thr Gln Glu Gln Lys Phe Glu His Met Tyr Asp Gln Ser Leu Gln
915 920 925
Val Pro Tyr Arg Asn Ser Leu Arg Lys Ala His Ile Phe Gly Ile Thr
930 935 940
Phe Ser Phe Thr Gln Ala Met Met Tyr Phe Ser Tyr Ala Gly Cys Phe
945 950 955 960
Arg Phe Gly Ala Tyr Leu Val Ala His Ser Leu Met Ser Phe Glu Asp
965 970 975
Val Leu Leu Val Phe Ser Ala Val Val Phe Gly Ala Met Ala Val Gly
980 985 990
Gln Val Ser Ser Phe Ala Pro Asp Tyr Ala Lys Ala Lys Val Ser Ala
995 1000 1005
Ala His Ile Ile Met Ile Ile Glu Lys Thr Pro Leu Ile Asp Ser
1010 1015 1020
Tyr Ser Thr Glu Gly Leu Lys Pro Asn Thr Leu Glu Gly Asn Val
1025 1030 1035
Thr Phe Asn Glu Val Val Phe Asn Tyr Pro Thr Arg Leu Asp Ile
1040 1045 1050
Pro Val Leu Gln Gly Leu Ser Leu Glu Val Lys Lys Gly Gln Thr
1055 1060 1065
Leu Ala Leu Val Gly Ser Ser Gly Cys Gly Lys Ser Thr Val Val
1070 1075 1080
Gln Leu Leu Glu Arg Phe Tyr Asp Pro Leu Ala Gly Lys Val Leu
1085 1090 1095
Leu Asp Gly Lys Glu Ile Lys Gln Leu Asn Val Gln Trp Leu Arg
1100 1105 1110
Ala His Leu Gly Ile Val Ser Gln Glu Pro Ile Leu Phe Asp Cys
1115 1120 1125
Ser Ile Ser Glu Asn Ile Ala Tyr Gly Asp Asn Ser Arg Val Val
1130 1135 1140
Ser Gln Glu Glu Ile Val Arg Ala Ala Lys Glu Ala Asn Ile His
1145 1150 1155
Ala Phe Ile Glu Ser Leu Pro Asn Lys Tyr Ser Thr Arg Val Gly
1160 1165 1170
Asp Lys Gly Thr Gln Leu Ser Gly Gly Gln Lys Gln Arg Ile Ala
1175 1180 1185
Ile Ala Arg Ala Leu Val Arg Gln Pro His Ile Leu Leu Leu Asp
1190 1195 1200
Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Thr Glu Ser Glu Lys Val Val Gln
1205 1210 1215
Glu Ala Leu Asp Lys Ala Arg Glu Gly Arg Thr Cys Ile Val Ile
1220 1225 1230
Ala His Arg Leu Ser Thr Ile Gln Asn Ala Asp Leu Ile Val Val
1235 1240 1245
Phe Gln Asn Gly Arg Val Lys Glu His Gly Thr His Gln Gln Leu
1250 1255 1260
Leu Ala Gln Lys Gly Ile Tyr Phe Ser Met Val Ser Val Gln Ala
1265 1270 1275
Gly Ala Lys Arg Gln
1280
<210> 335
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> 重复
<222> (1)..(5)
<223> 位置1至5处的氨基酸重复n次, 其中n是至少一的整数
<400> 335
Gly Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 336
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> 重复
<222> (1)..(4)
<223> 位置1至4处的氨基酸重复n次, 其中n是至少一的整数
<400> 336
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 337
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 337
Gly Gly Ser Gly
1
<210> 338
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 338
Gly Gly Ser Gly Gly
1 5
<210> 339
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 339
Gly Ser Gly Ser Gly
1 5
<210> 340
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 340
Gly Ser Gly Gly Gly
1 5
<210> 341
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 341
Gly Gly Gly Ser Gly
1 5
<210> 342
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 342
Gly Ser Ser Ser Gly
1 5
<210> 343
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 343
Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
1 5
<210> 344
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 344
Ser Ser Gly Gly Gly Asn
1 5
<210> 345
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 345
Gly Ala Gly Asp Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 346
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 346
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
1 5
<210> 347
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 347
Tyr Pro Gly Asn Asp Asp
1 5
<210> 348
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 348
Gln Gly Ser His Phe Pro Arg Thr
1 5
<210> 349
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 349
Ala Arg Tyr Gly Ala Gly Asp Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 350
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 350
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Ala Gly Asp Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 351
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 351
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Ala Gly Asp Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 352
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 352
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Ala Gly Asp Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 353
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 353
Asp Val Val Leu Ala Gln Thr Pro Pro Thr Leu Ser Ala Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Arg Leu Glu Ser Arg Val Pro
50 55 60
Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Gly Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Ser
85 90 95
Thr His Ala Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
Arg Thr Val
115
<210> 354
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 354
Leu Val Ser Arg Leu Glu Ser
1 5
<210> 355
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 355
Val Gln Ser Thr His Ala Pro Arg Thr
1 5
<210> 356
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 356
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Phe Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Phe Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 357
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 357
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe
115 120
<210> 358
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 358
Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
1 5
<210> 359
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 359
Trp Ser Asp Gly Ser
1 5
<210> 360
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 360
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 361
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 361
Asp Val Leu Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
20 25
<210> 362
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 362
Gln Asn Ile Val His Ser Thr Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 363
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 363
Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
<210> 364
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 364
Gln Ala Ser His Phe Pro Arg Thr
1 5
<210> 365
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 365
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 366
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 366
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 367
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Asp Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
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<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 368
Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
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<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 369
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 370
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 370
Gln Gly Ser His Val Pro Phe Thr
1 5
<210> 371
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 371
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
130 135 140
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser
145 150 155 160
Ile Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe
180 185 190
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr
210 215 220
Cys Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Thr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
245 250 255
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
260 265 270
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
275 280 285
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
290 295 300
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
305 310 315 320
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
325 330 335
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
340 345 350
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
355 360 365
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg
370 375 380
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly
385 390 395 400
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
405 410 415
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
420 425 430
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
435 440 445
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
450 455 460
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 372
<211> 472
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 372
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Thr Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Ala Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Ala Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu
130 135 140
Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Thr Ile Ser Asp Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
165 170 175
Pro Gln Leu Leu Ile Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro
180 185 190
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Lys Ile
195 200 205
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly
210 215 220
His Gly Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
225 230 235 240
Gly Gly Gly Gly Thr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
245 250 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340 345 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
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370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
420 425 430
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 373
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 373
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Leu Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 374
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 374
Glu Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser
20 25 30
Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 375
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 375
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Val Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg His Gly Arg Trp Leu Leu Gln Arg Gly Gly Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 376
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 376
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
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100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 377
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 377
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
20 25 30
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100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 378
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 378
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 379
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 379
Gly Tyr Gly Met Ser
1 5
<210> 380
<211> 16
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 380
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15

Claims (77)

1.一种与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体，其中所述抗体与包含以下的抗体竞争结合MDR1：表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体与包含表2中所列抗体的一对可变重链(VH)和可变轻链(VL)区的抗体竞争结合MDR1。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体与选自以下的抗体竞争结合MDR1：表2中所列的抗体B1.28、B1.261、B1.129、B1.225和B1.223。
4.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含表2中所列抗体的VH区的HCDR。
5.根据权利要求1或2所述的抗体，其中所述抗体包含表2中所列抗体的VL区的LCDR。
6.根据权利要求1所述的抗体，所述抗体包含：
表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区(HCDR)和轻链CDR(LCDR)。
7.一种与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体分子，其中所述抗体分子的抗原结合位点包含：
表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)；
表2中所列抗体的VH区的HCDR1-3；或
表2中所列抗体的VL区的LCDR1-3。
8.根据权利要求7所述的抗体分子，其中所述抗体包含表2中所列抗体的一对VH区和VL区的HCDR1-3和LCDR1-3。
9.根据权利要求7所述的抗体，其中所述抗体包含表2中所列第一抗体的VH区的HCDR1-3。
10.根据权利要求7所述的抗体分子，其中所述抗体包含表2中的第二抗体的VL区的LCDR1-3。
11.根据权利要求7所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含表2中所列抗体的可变轻(VL)链和/或可变重(VH)链。
12.根据权利要求8所述的抗体分子，其中所述抗体包含
(i)B1.28抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.28抗体的VL区的LCDR1-3；
(ii)B1.261抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.261抗体的VL区的LCDR1-3；
(iii)B1.129抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.129抗体的VL区的LCDR1-3；
(iv)B1.225抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.225抗体的VL区的LCDR1-3；
(v)B1.188抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.188抗体的VL区的LCDR1-3；
(vi)B1.27抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.27抗体的VL区的LCDR1-3；
或
(vii)B1.223抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.223抗体的VL区的LCDR1-3，其中所述VH区和VL区列于表2中。
13.根据权利要求7-12中任一项所述的抗体分子，其中所述抗体分子与人MDR1和食蟹猴MDR1结合。
14.根据权利要求13所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含B1.129抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.129抗体的VL区的LCDR1-3、B1.28抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.28抗体的VL区的LCDR1-3，或者其中所述抗体分子包含B1.261抗体的VH区的HCDR1-3和所述B1.261抗体的VL区的LCDR1-3。
15.根据权利要求7-14中任一项所述的抗体分子，其中所述抗体分子与MDR1的细胞外结构域中的环1结合。
16.根据权利要求15所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含：所述B1.129抗体的VH区的HCDR1-3和VL区的LCDR1-3，或所述B1.223抗体的VH区的HCDR1-3和VL区的LCDR1-3。
17.根据权利要求7-16中任一项所述的抗体分子，其中所述抗体分子抑制癌细胞外排钙黄绿素、道诺霉素(Dioc2)和罗丹明中的一种或多种。
18.根据权利要求17所述的抗体分子，其中所述癌细胞是过表达MDR1的293T细胞。
19.根据权利要求17所述的抗体分子，其中所述癌细胞是MES-SA-DX5癌细胞。
20.根据权利要求17-20中任一项所述的抗体分子，其中所述抗体包含所述B1.129抗体的VH区的HCDR1-3和VL区的LCDR1-3。
21.一种与细胞表面上表达的MDR1特异性结合的抗体分子，所述抗体包含：
(i)可变重(VH)链，所述可变重链包含含有以下氨基酸序列的重链互补决定区(HCDR)1：GFTFSRY(SEQ ID NO:343)；含有以下氨基酸序列的HCDR2：SSGGGN(SEQ ID NO:344)；和含有以下氨基酸序列的HCDR3：GAGDAWFAY(SEQ ID NO:345)；以及可变轻(VL)链，所述可变轻链包含含有以下氨基酸序列的轻链互补决定区(LCDR)1：RSSQNIVHSTGNTYLD(SEQ ID NO:11)；含有以下氨基酸序列的LCDR2：KVSNRFS(SEQ ID NO:12)；和含有以下氨基酸序列的LCDR3：FQGSHIPRT(SEQ ID NO:13)；
(ii)包含以下氨基酸序列的VH链：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:287)；和包含以下氨基酸序列的VL链：DVVLTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQNIVHSTGNTYLDWYQQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQGSHIPRTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:20)；
(iii)包含以下氨基酸序列的重链：
EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYTMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYDTTPPVLDSDGSFFLYSDLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQID NO:309)和包含以下氨基酸序列的轻链：
DVVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNIVHSTGNTYLDWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPRTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:21)；
(iv)VH链，所述VH链包含含有以下氨基酸序列的HCDR1：GYTFTNY(SEQ ID NO:346)；含有以下氨基酸序列的HCDR2：YPGNDD(SEQ ID NO:347)；和含有以下氨基酸序列的HCDR3：GGYRAMDY(SEQ ID NO:308)；以及VL链，所述VL链包含含有以下氨基酸序列的LCDR1：RSSQNIVHSTGNTYLD(SEQ ID NO:11)；含有以下氨基酸序列的LCDR2：KVSNRFS(SEQ ID NO:12)；和含有以下氨基酸序列的LCDR3：FQGSHIPRT(SEQ ID NO:13)；
(v)包含以下氨基酸序列的VH链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:294)和包含以下氨基酸序列的轻链：
DVVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNIVHSTGNTYLDWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPRTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:21)；
(vi)包含以下氨基酸序列的重链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRKELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLKSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ IDNO:310)和包含以下氨基酸序列的轻链：
DVVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNIVHSTGNTYLDWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPRTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:21)；
(vii)VH链，所述VH链包含含有以下氨基酸序列的HCDR1：GFTFSRY(SEQ ID NO:343)；含有以下氨基酸序列的HCDR2：SSGGGN(SEQ ID NO:344)；和含有以下氨基酸序列的HCDR3：GAGDAWFAY(SEQ ID NO:345)；以及VL链，所述VL链包含含有以下氨基酸序列的LCDR1：RSSQSLVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:290)；含有以下氨基酸序列的LCDR2：KVSNRFS(SEQ ID NO:12)；和含有以下氨基酸序列的LCDR3：QGSHFPRT(SEQ ID NO:348)；
(viii)包含以下氨基酸序列的VH链：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:287)；和包含以下氨基酸序列的VL链：
DIVMTQSPLSLPVSLGDPASISCRSSQSLVHSNGNTYLEYYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:311)；
(ix)包含以下氨基酸序列的重链：EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYTMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYDTTPPVLDSDGSFFLYSDLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:309)和包含以下氨基酸序列的轻链：DIVMTQSPLSLPVSLGDPASISCRSSQSLVHSNGNTYLEYYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:311)；
(x)VH链，所述VH链包含含有以下氨基酸序列的HCDR1：GYTFTNY(SEQ ID NO:346)；含有以下氨基酸序列的HCDR2：YPGNDD(SEQ ID NO:347)；和含有以下氨基酸序列的HCDR3：GGYRAMDY(SEQ ID NO:308)；以及VL链，所述VL链包含含有以下氨基酸序列的LCDR1：RSSQSLVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:290)；含有以下氨基酸序列的LCDR2：KVSNRFS(SEQ ID NO:12)；和含有以下氨基酸序列的LCDR3：QGSHFPRT(SEQ ID NO:348)；
(xi)包含以下氨基酸序列的VH链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ IDNO:294)和包含以下氨基酸序列的轻链：
DIVMTQSPLSLPVSLGDPASISCRSSQSLVHSNGNTYLEYYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:311)；
(xii)包含以下氨基酸序列的重链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRKELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLKSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ IDNO:310)和包含以下氨基酸序列的轻链：DIVMTQSPLSLPVSLGDPASISCRSSQSLVHSNGNTYLEYYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ IDNO:311)；
(xiii)VH链，所述VH链包含含有以下氨基酸序列的HCDR1：GFTFSRY(SEQ ID NO:343)；含有以下氨基酸序列的HCDR2：SSGGGN(SEQ ID NO:344)；和含有以下氨基酸序列的HCDR3：GAGDAWFAY(SEQ ID NO:345)；以及VL链，所述VL链包含含有以下氨基酸序列的LCDR1：RSSQTIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:39)；含有以下氨基酸序列的LCDR2：KVSKRFS(SEQ ID NO:40)；和含有以下氨基酸序列的LCDR3：FQASHFPRT(SEQ ID NO:329)；
(xiv)包含以下氨基酸序列的VH链：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ IDNO:287)；和包含以下氨基酸序列的VL链：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:313)；
(xv)包含以下氨基酸序列的重链：EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYTMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYDTTPPVLDSDGSFFLYSDLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:309)和包含以下氨基酸序列的VL链：DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:313)；
(xvi)VH链，所述VH链包含含有以下氨基酸序列的HCDR1：GYTFTNY(SEQ ID NO:346)；含有以下氨基酸序列的HCDR2：YPGNDD(SEQ ID NO:347)；和含有以下氨基酸序列的HCDR3：GGYRAMDY(SEQ ID NO:308)；以及VL链，所述VL链包含含有以下氨基酸序列的LCDR1：RSSQTIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:39)；含有以下氨基酸序列的LCDR2：KVSKRFS(SEQ ID NO:40)；和含有以下氨基酸序列的LCDR3：FQASHFPRT(SEQ ID NO:329)；
(xvii)包含以下氨基酸序列的VH链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ IDNO:294)和包含以下氨基酸序列的轻链：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:313)；或
(xviii)包含以下氨基酸序列的重链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRKELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLKSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ IDNO:310)和包含以下氨基酸序列的轻链：DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ IDNO:313)。
22.一种结合多药耐药蛋白1(MDR1)和肿瘤相关抗原(TAA)的双特异性抗体分子，所述抗体分子包含两条相同的可变轻(VL)链、第一可变重(VH)链和第二VH链，
其中所述VL链各自包含针对MDR1的抗原结合位点，所述第一VH链包含针对MDR1的抗原结合位点，并且所述第二VH链包含针对所述TAA的抗原结合位点，并且
其中所述第二VH链在与所述轻链之一配对时结合所述TAA。
23.根据权利要求22所述的双特异性抗体分子，其中所述两条VL链的抗原结合位点包含表2中所列抗体的轻链CDR1-3(LCDR1-3)。
24.根据权利要求22或23所述的双特异性抗体分子，其中所述第一VH链的抗原结合位点包含表2中所列抗体的重链CDR1-3(HCDR1-3)。
25.根据权利要求22或23所述的双特异性抗体分子，其中所述第一VH链包含除表2中所列抗体之外的抗MDR1抗体的HCDR1-3，任选地其中所述第一VH链包含除表2中所列抗体之外的抗MDR1抗体的VH链的氨基酸序列。
26.根据权利要求25所述的双特异性抗体分子，其中所述抗MDR1抗体包含：
具有以下氨基酸序列的15D3抗体的VH链：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:293)；
具有以下氨基酸序列的UIC2抗体的VH链：
AVQLQQSGPELVKTGASVKISCKASGYSFSNYYIHWVKQSHGKSLEWIGFISCYNGATFYNQKFKGKATFTVDTSSSTAYMKFNSLTFEDSAVYYCARLPIQFGNFYPMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:288)；或
具有以下氨基酸序列的MRK16抗体的VH链：
EVILVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTISRDNAKNNLYLQMSSLRSEDTALYYCARYYRYEAWFASWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:286)。
27.根据权利要求26所述的双特异性抗体分子，其中所述抗MDR1抗体包含具有以下氨基酸序列的VH链：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGX2TYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:292)，其中X2是N、Q或S，
任选地其中X2是Q或S。
28.根据权利要求22至27中任一项所述的双特异性抗体分子，其中所述一条或多条VL链包含表2中所列B1-28抗体的LCDR1-3，
任选地其中所述VL链包含表2中所列B1-28抗体的VL链的氨基酸序列；或者
其中所述一条或多条VL链包含抗MDR1 V6抗体的LCDR1-3，所述抗MDR1 V6抗体具有包含以下氨基酸序列的VL链：
LWVPGSTGDVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:289)，
任选地其中所述VL链包含所述V6抗体的VL链的氨基酸序列。
29.根据权利要求22或24所述的双特异性抗体分子，其中所述VL链包含除表2中所列抗体之外的抗MDR1抗体的LCDR1-3，任选地其中所述轻链包含除表2中所列抗体之外的抗体的VL链的氨基酸序列。
30.根据权利要求29所述的双特异性抗体分子，其中所述抗MDR1抗体包含以下的LCDR1-3：
含有以下氨基酸序列的MRK16抗体的可变轻链：
DVLMTQTPVSLSVSLGDQASISCRSSQSIVHSTGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKISNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASHFPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:283)；
含有以下氨基酸序列的15D3抗体的可变轻链：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSTGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRLEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTRLEIK(SEQ ID NO:284)；或
含有以下氨基酸序列的UIC2抗体的可变轻链：
DVVMTQTPRSLPVSLGDQASISCRSSQSLLHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHIPPWTFGGGTKLDIK(SEQ ID NO:285)。
31.根据前述权利要求中任一项所述的抗体分子或双特异性抗体分子，其中所述抗体在与表达MDR1的细胞结合时抑制通过所述MDR1的外排。
32.根据权利要求22至31中任一项所述的双特异性抗体分子，其中所述抗体能够提高癌细胞对用化学治疗剂治疗的敏感性，
其中当与所述抗体共同施用时所述化学治疗剂的半最大抑制浓度(IC50)比当与如下抗MDR1抗体共同施用时所述化学治疗剂的IC50低至少5倍，所述抗MDR1抗体包含具有以下序列的VH链：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGNTYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:293)；以及
具有以下序列的VL链：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSTGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRLEAEDLGVYYCFQGSHFPRTFGGGTRLEIK(SEQ ID NO:284)。
33.根据权利要求22至32中任一项所述的双特异性抗体分子，其中所述TAA是CD47。
34.根据权利要求33所述的双特异性抗体分子，其中所述双特异性抗体包含抗CD47抗体5F9的VH区的HCDR1-3，其中所述VH区包含以下氨基酸序列：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:294)；或者
其中所述双特异性抗体包含抗CD47抗体B6H12的VH区的HCDR1-3，其中所述VH区包含以下氨基酸序列：
EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYGMSWVRQTPDKRLEWVATITSGGTYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQIDSLKSEDTAIYFCARSLAGNAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:295)。
35.根据权利要求34所述的双特异性抗体分子，其中：
所述第一VH链包含具有以下HCDR序列的来自抗MDR1抗体的VH链的HCDR1-3：
HCDR1：RYTMS(SEQ ID NO:301)；HCDR2：TISSGGGNTYYPDSVKG(SEQ ID NO:302)、TISSGGGQTYYPDSVKG(SEQ ID NO:303)或TISSGGGSTYYPDSVKG(SEQ ID NO:304)；和HCDR3：ARYGAGDAWFAY(SEQ ID NO:349)；并且
所述VL链各自包含表2中所列B1-28抗体的VL区的LCDR1-3，其中所述LCDR序列是：
LCDR1：RSSQNIVHSTGNTYLD(SEQ ID NO:11)、LCDR2：KVSNRFS(SEQ ID NO:12)和LCDR3：FQGSHIPRT(SEQ ID NO:13)。
36.根据权利要求35所述的双特异性抗体分子，其中：
所述第一VH链包含含有以下的氨基酸序列：
EVKVVESGGVLVRPGGSLKLSCAASGFTFSRYTMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGGX2TYYPDSVKGRFTVSRDNAMSSLYLQMSSLRSEDTALYYCARYGAGDAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:291)，其中X2是N、Q或S；
所述第二VH链包含含有以下的氨基酸序列：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYNMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTSYNQKFKDRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:294)；
并且
所述两条VL链包含含有表2中所列B1-28抗体的VL区链的氨基酸序列。
37.根据权利要求22所述的双特异性抗体分子，其中
所述第一VH链包含表2中所示的(i)B1.28抗体；(ii)B1.30抗体；(iii)B1.89抗体；(iv)B1.129抗体；(v)B1.225；(vi)B1.261抗体的VH链的HCDR1-3；或所述15D3或所述MRK16抗体的VH链的HCDR1-3；
所述相同的VL链各自包含(i)所述MRK16抗体的VL链的LCDR1-3或(ii)所述V6抗体的VL链的LCDR1-3；并且
所述第二VH链包含所述5F9抗体或所述B6H12抗体的VH链的HCDR1-3。
38.根据权利要求22所述的双特异性抗体分子，其中所述第一VH链包含表2中所示的(i)B1.188抗体；(ii)B1.28抗体；(iii)B1.261抗体；(iv)B1.129抗体；或(v)B1.223抗体的VH链的HCDR1-3；所述相同的VL链各自包含所述MRK16抗体的VL链的LCDR1-3；并且所述第二VH链包含所述5F9抗体或所述B6H12抗体的VH链的HCDR1-3。
39.根据权利要求38所述的双特异性抗体分子，其中所述第一VH链包含表2中所示的(i)B1.188抗体；(ii)B1.28抗体；(iii)B1.261抗体；(iv)B1.129抗体；或(v)B1.223抗体的VH链；所述相同的VL链各自包含所述MRK16抗体的VL链；并且所述第二VH链包含所述5F9抗体或所述B6H12抗体的VH链。
40.根据权利要求27所述的双特异性抗体分子，其中所述第一VH链包含表2中所示的B1.225抗体的VH链的HCDR1-3；所述相同的VL链各自包含所述MRK16抗体的VL链的LCDR1-3；并且所述第二VH链包含所述5F9抗体或所述B6H12抗体的VH链的HCDR1-3。
41.根据权利要求40所述的双特异性抗体分子，其中所述第一VH链包含表2中所示的B1.225抗体的VH链；所述相同的VL链各自包含所述MRK16抗体的VL链；并且所述第二VH链包含所述5F9抗体的VH链。
42.根据前述权利要求中任一项所述的抗体分子或双特异性抗体分子，其中所述抗体包含人源化轻链。
43.根据前述权利要求中任一项所述的抗体分子或双特异性抗体分子，其中所述抗体包含人源化重链。
44.根据前述权利要求中任一项所述的抗体分子或双特异性抗体分子，其用于在受试者中治疗癌症的方法中的用途，所述方法包括向所述受试者施用所述抗体。
45.根据权利要求44所述的用于所述用途的抗体分子或双特异性抗体分子，其中所述方法包括将所述抗体与至少一种另外的活性剂组合施用，其中所述至少一种另外的活性剂包括化学治疗剂、多药耐药转运蛋白的抑制剂、免疫治疗剂或其组合。
46.根据权利要求45所述的用于所述用途的抗体分子或双特异性抗体分子，其中所述至少一种另外的活性剂是化学治疗剂，任选地其中所述化学治疗剂是泰素、长春花生物碱或蒽环类。
47.根据权利要求46所述的用于所述用途的抗体分子或双特异性抗体分子，其中所述所治疗的受试者患有已被确定为对用所述化学治疗剂治疗具有耐药性的癌症。
48.一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至21中任一项所述的抗体分子或根据权利要求22至43中任一项所述的双特异性抗体分子。
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述方法包括将所述抗体分子或双特异性抗体分子与至少一种另外的活性剂组合施用，其中所述至少一种另外的活性剂包括化学治疗剂、多药耐药转运蛋白的抑制剂、免疫治疗剂或其组合。
50.根据权利要求49所述的方法，其中所述至少一种另外的活性剂是化学治疗剂，任选地其中所述化学治疗剂是泰素、长春花生物碱或蒽环类。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述所治疗的受试者患有被分类为对所述化学治疗剂具有耐药性的癌症。
52.一种或多种核酸，所述一种或多种核酸包含一种或多种编码根据权利要求1至21中任一项所述的抗体分子或根据权利要求22至43中任一项所述的双特异性抗体分子的序列。
53.一种或多种重组表达载体，所述一种或多种重组表达载体包含根据权利要求52所述的一种或多种核酸。
54.一种用根据权利要求53所述的一种或多种重组表达载体进行基因修饰的宿主细胞。
55.一种包含嵌合抗原受体(CAR)的免疫效应细胞，所述嵌合抗原受体包含MDR1结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中所述MDR1结合结构域包含表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区(HCDR)和/或轻链CDR(LCDR)。
56.一种抑制由活细胞表达的MDR1的外排活性的方法，所述方法包括使所述细胞与根据权利要求1至21中任一项所述的抗体分子或根据权利要求22至43中任一项所述的双特异性抗体分子接触。
57.根据权利要求56所述的方法，所述方法进一步包括使所述细胞与MDR1介导的外排的抑制剂接触。
58.根据权利要求56或57所述的方法，所述方法进一步包括使所述细胞与化学治疗剂接触。
59.根据权利要求56至58中任一项所述的方法，其中所述细胞是癌细胞。
60.根据权利要求59所述的方法，其中所述癌细胞是多药耐药性癌细胞。
61.一种测定细胞的细胞表面上MDR1的表达的方法，所述方法包括使所述细胞与根据权利要求1至47中任一项所述的抗体分子接触。
62.根据权利要求61所述的方法，其中所述抗体被可检测地标记。
63.一种用于诊断受试者的与MDR1表达相关的疾病或病症的方法，所述方法包括使来自所述受试者的组织样品或细胞样品与根据权利要求1-47中任一项所述的抗体分子接触。
64.根据权利要求63所述的方法，其中所述抗体分子包含如图19中的抗体分子所示的VH和VL链排列。
65.一种与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体，用作药剂，其中所述抗体与包含以下的抗体竞争结合MDR1：表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)。
66.一种与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述抗体与包含以下的抗体竞争结合MDR1：表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)。
67.一种药物组合物，用于治疗受试者的癌症的方法中，所述药物组合物包含与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体，其中所述抗体与包含以下的抗体竞争结合MDR1：表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)，所述方法包括向所述受试者施用所述抗体。
68.一种与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体分子，用作药剂，其中所述抗体分子的抗原结合位点包含：
表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)；
表2中所列抗体的VH区的HCDR1-3；或表2中所列抗体的VL区的LCDR1-3。
69.一种与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体分子用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述抗体分子的抗原结合位点包含：
表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)；表2中所列抗体的VH区的HCDR1-3；或表2中所列抗体的VL区的LCDR1-3。
70.一种药物组合物，用于治疗受试者的癌症的方法中，所述药物组合物包含与多药耐药蛋白1(MDR1)特异性结合的抗体，其中所述抗体分子的抗原结合位点包含：
表2中所列抗体的一对可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区的重链互补决定区1-3(HCDR1-3)和轻链CDR1-3(LCDR1-3)；表2中所列抗体的VH区的HCDR1-3；或表2中所列抗体的VL区的LCDR1-3，所述方法包括向所述受试者施用所述抗体。
71.根据权利要求1、7或21所述的抗体分子，用作药剂。
72.根据权利要求1、7或21所述的抗体分子用于制备用于治疗癌症的药剂的用途。
73.一种包含根据权利要求1、7或21所述的抗体分子的药物组合物，用于治疗受试者的癌症的方法中，所述方法包括向所述受试者施用所述抗体。
74.一种结合多药耐药蛋白1(MDR1)和肿瘤相关抗原(TAA)的双特异性抗体分子，用作药剂，所述抗体分子包含两条相同的可变轻(VL)链、第一可变重(VH)链和第二VH链，其中所述VL链各自包含针对MDR1的抗原结合位点，所述第一VH链包含针对MDR1的抗原结合位点，并且所述第二VH链包含针对所述TAA的抗原结合位点，
并且其中所述第二VH链在与所述轻链之一配对时结合所述TAA。
75.一种结合多药耐药蛋白1(MDR1)和肿瘤相关抗原(TAA)的双特异性抗体分子用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，所述抗体分子包含两条相同的可变轻(VL)链、第一可变重(VH)链和第二VH链，
其中所述VL链各自包含针对MDR1的抗原结合位点，所述第一VH链包含针对MDR1的抗原结合位点，并且所述第二VH链包含针对所述TAA的抗原结合位点，
并且其中所述第二VH链在与所述轻链之一配对时结合所述TAA。
76.一种药物组合物，用于在受试者中治疗癌症的方法中的用途，所述药物组合物包含用于制备用于治疗癌症的药剂的结合多药耐药蛋白1(MDR1)和肿瘤相关抗原(TAA)的双特异性抗体分子，
所述抗体分子包含两条相同的可变轻(VL)链、第一可变重(VH)链和第二VH链，其中所述VL链各自包含针对MDR1的抗原结合位点，所述第一VH链包含针对MDR1的抗原结合位点，并且所述第二VH链包含针对所述TAA的抗原结合位点，
并且其中所述第二VH链在与所述轻链之一配对时结合所述TAA，
所述方法包括向所述受试者施用所述抗体。
77.根据权利要求74所述的用作药剂的双特异性分子、根据权利要求75所述的用途、或根据权利要求76所述的药物组合物，其中所述双特异性分子包含表2中所列抗体的VL区的LCDR1-3。
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