CN115011528A - 一种发酵乳杆菌在制备常温乳制品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于微生物领域，具体公开了一种发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)菌株，其保藏编号为CGMCC NO.17321；还公开了该菌株在制备长效高活力型常温酸奶、乳饮料以及固体饮料方面的应用。上述发酵乳杆菌的应用，首次采用后添加的方式将该发酵乳杆菌添加入酸奶基料中，得到含有发酵乳杆菌活菌的乳制品，上述乳制品在25℃常温保藏6个月后，活菌数高。本发明公开了发酵乳杆菌在制备长效高活力型常温酸奶、乳饮料及固体饮料方面的新应用。与添加了其他常规乳酸菌制备的乳制品相比，添加发酵乳杆菌CGMCC NO.17321所制备的乳制品经长期常温保藏后，活菌数更高。
Description
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及一种发酵乳杆菌在制备常温乳制品中的应用。
背景技术
乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB)是一类能够利用发酵碳水化合物产生大量乳酸的革兰氏染色阳性细菌，包括乳杆菌属(Lactobacillus)、片球菌属(Pediococcus)、链球菌属(Streptococcus)、明串株菌属(Leuconostoc)和双歧杆菌属(Bifidobacterium)等至少20个属，这类细菌在自然界分布极为广泛，除极少数外，其绝大部分都是人体内必不可少的、且具有重要生理功能的菌群，广泛存在于人体的肠道中。已有研究表明，乳酸菌菌体自身可以改善肠道菌群的构成、抑制腐败菌的繁殖、阻碍病原菌的定殖、恢复肠道菌群平衡、形成抗菌生物屏障、清除肠道垃圾、增强免疫、维护人体健康状态。由于乳酸菌的功能完全符合益生菌的定义——即对其宿主的健康状况有积极影响的活微生物，所以被纳入益生菌的范畴。
发酵乳杆菌是传统发酵制品(豆制品、肉制品等)中的优势微生物，在发酵食品的制作和功效方面发挥其特有的作用，此外，发酵乳杆菌具有抗菌、降胆固醇、调节免疫等生理活性，然而发酵乳杆菌是无法直接利用牛奶来增殖的，因此，目前还未见含有发酵乳杆菌菌株的乳制品，另一方面，即使将发酵乳杆菌添直接添加入新鲜牛奶中，也只能在低温条件下依靠减缓代谢来提高存活率，一旦暴露于常温条件下就会迅速死亡殆尽，这对相关产品的运输、保藏以及使用提出了极为苛刻的要求。因此，如何找到适当的制备工艺将发酵乳杆菌菌株应用于乳制品，，以获得富含发酵乳杆菌的长效高活力型常温乳制品，是本领域技术人员亟待解决的问题。
发明内容
基于上述技术问题，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一种发酵乳杆菌菌株，其特征在于，该菌株的分类命名为发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum，保藏编号为CGMCC NO.17321。即本文所述的所述发酵乳杆菌CGMCC NO.17321。
本发明还提供了一种发酵乳杆菌在制备常温乳制品中的应用，所述发酵乳杆菌为如上所述的分类命名为发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum，保藏编号为CGMCCNO.17321的发酵乳杆菌；所述应用是将该发酵乳杆菌加入到灭菌后的酸奶基料中混匀。通过这种方法得到的常温乳制品在常温保藏6个月后，所述发酵乳杆菌的活菌数＞1×104CFU/mL。
具体的，所述应用包括以下步骤：
(a)将发酵剂接种于发酵基料中进行发酵；
(b)灭菌；
(c)加入所述发酵乳杆菌，混匀。
经过步骤(a)后得到酸奶基料。
经过步骤(b)后得到灭菌的酸奶基料。
进一步的，所述常温乳制品是一种长效高活力型常温乳制品，其在常温保藏6个月后，活菌数仍＞1×104CFU/mL。在一个具体实施方式中，所述常温是指25℃。
进一步的，所述发酵乳杆菌的添加量为5×105-5×107CFU/mL。
具体的，如上的步骤(a)中所述发酵剂为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌。在一些具体实施方案中，所述保加利亚乳杆菌的接种量为5×105-4.5×107CFU/mL，所述嗜热链球菌的接种量为4.5×106-7.5×106CFU/mL。
在一些具体实施方案中，所述发酵的发酵温度为39-43，发酵时间为5-7h。
在一些具体实施方案中，所述常温乳制品为常温酸奶、乳饮料或固体饮料。
进一步的，在一些实施方式中，所述发酵基料包含90wt％以上的牛奶；在一些具体实施方案中，所述发酵基料包括90-93wt％的牛奶、5.5-7.5wt％的蔗糖、0-3wt％的乳蛋白粉和0-0.7wt％的增稠剂。优选的，所述乳蛋白粉为全乳蛋白粉或乳清蛋白粉中的一种；优选的，所述增稠剂为变性淀粉、琼脂、果胶和明胶中的一种或多种。用该发酵基料通过前述应用制得的是一种常温酸奶或常温乳饮料。
在另一些实施方式中，所述发酵基料包含6wt％以上的乳粉，所述乳粉优选脱脂乳粉。在一个具体实施方案中，所述发酵基料包括6-12wt％的脱脂乳粉和88-94wt％的水。用该发酵基料通过前述的应用制得的是一种固体饮料。
进一步地，上述应用得到的常温酸奶在常温保藏6个月后，活菌数＞1×105CFU/mL，pH＞4.00，滴定酸度＜90°T，黏度下降率＜10％。在一个具体实施方式中，所述常温是指25℃。
进一步地，上述应用在制备常温乳饮料中还包括以下步骤：将勾兑液与步骤(a)得到的酸奶基料混匀，均质，然后进行步骤(b)的灭菌，所述勾兑液包括甜味剂和/或酸味剂。
进一步地，所述勾兑液与酸奶基料的勾兑体积比例为1:1-1:3。
进一步地，上述应用得到的常温乳饮料在常温保藏6个月后，活菌数＞1×104CFU/mL，甜度折合成蔗糖甜度8.7％-10.6％，滴定酸度55°T-70°T。在一个具体实施方式中，所述常温是指25℃。
进一步地，上述应用在制备发酵乳杆菌固体饮料的中还包括以下步骤：在步骤(a)后调整pH值，然后进行步骤(b)的灭菌；在所述将发酵乳杆菌添加入无菌的酸奶基料混匀后，冷冻干燥后即得发酵乳杆菌固体饮料。
进一步地，所述调整pH值是指将pH调整到6.5-7.5。
进一步地，上述应用得到的的发酵乳杆菌固体饮料在常温保藏6个月后，活菌数＞1×106CFU/g，存活率＞50％。在一个具体实施方式中，所述常温是指25℃。
上述发酵乳杆菌的应用，首次采用后添加的方式将发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)CGMCC NO.17321添加入酸奶基料中，得到含有发酵乳杆菌活菌的乳制品，上述乳制品在25℃常温保藏6个月后，活菌数高。披露了发酵乳杆菌在制备长效高活力型常温酸奶、乳饮料及固体饮料方面的新应用。与添加了其他常规乳酸菌制备的乳制品相比，添加发酵乳杆菌CGMCC NO.17321所制备的乳制品经长期常温保藏后，活菌数更高。
具体实施方式
为更清楚的对本发明技术方案予以阐述，下面将结合具体实施方式对本发明的技术方案进行进一步阐述：
本申请提供了一种发酵乳杆菌在制备常温乳制品中的应用，该菌株的分类命名为发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum，保藏编号为CGMCC NO.17321。该菌种于2019年3月8日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101。
在一个具体的实施方式中，提供了该株发酵乳杆菌菌株在制备长效高活力型常温酸奶方面的应用。
进一步地，上述常温酸奶的制备方法包括以下步骤：(a)将发酵剂接种于发酵基料中进行发酵得到酸奶基料；(b)灭菌，得到无菌的酸奶基料；(b)将发酵乳杆菌CGMCCNO.17321添加入无菌的酸奶基料混匀，即得长效高活力型常温酸奶。
进一步地，上述制备酸奶的步骤(a)中，发酵剂为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，其中，保加利亚乳杆菌的接种量为5×105-4.5×107CFU/mL，较佳地为2.25×106-1.75×107CFU/mL，更佳地为5×106CFU/mL，嗜热链球菌的接种量为4.5×106-7.5×106CFU/mL，较佳地为5×106-5.25×106CFU/mL，更佳地为5×106CFU/mL。
进一步地，上述制备酸奶的步骤(a)中，发酵基料包括牛奶、蔗糖、乳蛋白粉和增稠剂，其中，牛奶占发酵基料的质量百分比为90-93％，蔗糖占发酵基料的质量百分比为5.5-7.5％，乳蛋白粉为全乳蛋白粉或乳清蛋白粉中的一种，占发酵基料的质量百分比为0-3％，增稠剂为变性淀粉、琼脂、果胶和明胶中的一种或多种，占发酵基料的质量百分比为0-0.7％。
进一步地，上述制备酸奶的步骤(a)中，发酵温度为39℃-43℃，较佳地为40℃-42℃，最佳地为41℃；发酵时间为5-7h，较佳地为5.5-6.5h，最佳地为6h。
进一步地，上述制备酸奶的步骤(c)中，发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的添加量为5×105-5×107CFU/mL，较佳地为1×106-1×107CFU/mL，最佳地为5×106CFU/mL。
在优选的酸奶制备工艺参数的范围之外所制备的酸奶经25℃常温保藏6个月后，酸奶中的活菌数量明显下降。例如，在一些具体实施方式中，在嗜热链球菌接种量过少或牛奶浓度过低或发酵温度过低或发酵时间过短时，嗜热链球菌发酵过慢，所产生的可被发酵乳杆菌再次利用的代谢产物较少，使得发酵乳杆菌在长期的常温保藏过程中因维持正常代谢的营养物质(嗜热链球菌的代谢产物)过少而大量衰亡。在另一些具体实施方式中，当发酵乳杆菌添加量过多时，发酵乳杆菌利用酸奶中的嗜热链球菌代谢产物，迅速合成并大量积累包括乳酸在内的代谢产物，后者直接恶化了生境，从而影响了自身的存活能力，最终导致活菌数大幅下降。
而在优选范围之内，嗜热链球菌接种量，牛奶浓度，发酵温度，发酵时间以及发酵乳杆菌添加量相互影响，使得所制备的酸奶经25℃常温保藏6个月后，其中的活菌数依然稳定维持在1×105CFU/mL以上。
进一步地，上述制备的长效高活力型常温酸奶在25℃常温保藏6个月后，活菌数＞1×105CFU/mL，pH＞4.00，滴定酸度＜90°T，黏度下降率＜10％。
在另一个具体的实施方式中，提供了该发酵乳杆菌菌株在制备长效高活力型常温乳饮料方面的应用。
进一步地，上述长效高活力型常温乳饮料的制备方法包括以下步骤：(a)将发酵剂接种于发酵基料中进行发酵，得到酸奶基料；(b)勾兑液包括甜味剂和/或酸味剂，将勾兑液与步骤(a)制得的酸奶基料混匀，均质，灭菌，得到无菌的乳饮料基料；(c)将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321添加入无菌的乳饮料基料混匀，即得长效高活力型常温乳饮料。
进一步地，上述制备乳饮料的步骤(a)中，发酵剂为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，其中，保加利亚乳杆菌的接种量为5×105-4.5×107CFU/mL，较佳地为2.25×106-1.75×107CFU/mL，更佳地为5×106CFU/mL，嗜热链球菌的接种量为4.5×106-7.5×106CFU/mL，较佳地为5×106-5.25×106CFU/mL，更佳地为5×106CFU/mL。
进一步地，上述制备乳饮料的步骤(a)中，发酵基料包括牛奶、蔗糖、乳蛋白粉和增稠剂，其中，牛奶占发酵基料的质量百分比为90-93％，蔗糖占发酵基料的质量百分比为5.5-7.5％，乳蛋白粉为全乳蛋白粉或乳清蛋白粉中的一种，占发酵基料的质量百分比为0-3％，增稠剂为变性淀粉、琼脂、果胶和明胶中的一种或多种，占发酵基料的质量百分比为0-0.7％。
进一步地，上述制备乳饮料的步骤(a)中，发酵温度为39-43℃，较佳地为40-42℃，最佳地为41℃；发酵时间为5-7h，较佳地为5.5-6.5h，最佳地为6h。
进一步地，上述制备乳饮料的步骤(b)中的甜味剂为本领域常规的甜味剂，优选的为木糖醇、阿斯巴甜、甜蜜素和安赛蜜中的一种或多种。最终勾兑出的乳饮料中，甜度折合成蔗糖甜度为9.5％-11.5％。甜味剂可以先配制成甜味勾兑液，再采用甜味勾兑液与酸奶基料进行勾兑。甜味勾兑液的甜度折合成蔗糖甜度优选为16％-27.6％。
进一步地，上述制备乳饮料的步骤(b)中的酸味剂为本领域常规的酸味剂，优选的为柠檬酸、苹果酸、酒石酸、乳酸和醋酸中的一种或多种。最终勾兑出的乳饮料的滴定酸度50°T-60°T。酸味剂可以先配制成酸味勾兑液，再采用酸味勾兑液与酸奶基料进行勾兑。
进一步地，上述制备乳饮料的步骤(b)中勾兑液包括甜味勾兑液和酸味勾兑液，勾兑液与酸奶基料的勾兑体积比例较佳地为1:1-1:3，更佳地为1:1.5-1:2.5，优选地为1:2。通过上述优选比例的勾兑，使得上述乳饮料的酸甜比适宜，更受到消费者的喜爱。
进一步地，上述制备乳饮料的步骤(c)中，发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的添加量为5×105-5×107CFU/mL，较佳地为1×106-1×107CFU/mL，最佳地为5×106CFU/mL。
在优选的乳饮料制备工艺参数的范围之外所制备的乳饮料经25℃常温保藏6个月后，乳饮料中的活菌数量明显下降。例如，在一些具体是实施方式中，在嗜热链球菌接种量过少或牛奶浓度过低或发酵温度过低或发酵时间过短嗜热链球菌发酵过慢，所产生的可被发酵乳杆菌再次利用的代谢产物较少，使得发酵乳杆菌在长期的常温保藏过程中因维持正常代谢的营养物质(嗜热链球菌的代谢产物)过少而大量衰亡。在另一些具体实施方式中，当勾兑比例过大时，发酵乳杆菌同样会因为营养物质被过度稀释导致的匮乏而死亡。在一些具体实施方式中，当发酵乳杆菌添加量过多时，发酵乳杆菌利用酸奶中的嗜热链球菌代谢产物，迅速合成并大量积累包括乳酸在内的代谢产物，后者直接恶化了生境，从而影响了自身的存活能力，最终导致活菌数大幅下降。
而在优选范围之内，嗜热链球菌接种量，牛奶浓度，发酵温度，发酵时间，勾兑比例以及发酵乳杆菌添加量相互影响，使得所制备的乳饮料经25℃常温保藏6个月后，其中的活菌数依然稳定维持在1×104CFU/mL以上。
进一步的，上述制备的长效高活力型常温乳饮料在25℃常温保藏6个月后，活菌数＞1×104CFU/mL，甜度折合成蔗糖甜度8.7％-10.6％，滴定酸度55°T-70°T。
在另一个具体的实施方式中，提供了该株发酵乳杆菌菌株在制备发酵乳杆菌固体饮料方面的应用。
进一步地，上述发酵乳杆菌固体饮料的制备方法，包括以下步骤：(a)将发酵剂接种于发酵基料中进行发酵，得到酸奶基料；(b)调整酸奶基料的pH值，灭菌；(c)将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321添加入无菌的酸奶基料混匀，冻干后即得发酵乳杆菌固体饮料。
进一步地，上述制备固体饮料的步骤(a)中，发酵剂为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，其中，保加利亚乳杆菌的接种量为5×105-4.5×107CFU/mL，较佳地为2.25×106-1.75×107CFU/mL，更佳地为5×106CFU/mL，嗜热链球菌的接种量为4.5×106-7.5×106CFU/mL，较佳地为5×106-5.25×106CFU/mL，更佳地为5×106CFU/mL。
进一步地，上述制备固体饮料的步骤(a)中，发酵基料包括脱脂乳粉和水，其中，脱脂乳粉占发酵基料的质量百分比为6-12％，水占发酵基料的质量百分比为88-94％。
进一步地，上述制备固体饮料的步骤(a)中，发酵温度为39℃-43℃，较佳地为40℃-42℃，最佳地为41℃；发酵时间为5-7h，较佳地为5.5-6.5h，最佳地为6h。
进一步地，上述制备固体饮料的步骤(b)中，pH调整为6.5-7.5。其中，所述pH的调整方法为本领域常规的pH调整方法，较佳地为加入食品级碱调整，所述食品级碱优选的是：Na2CO3、NaHCO3、NaOH中的一种或多种。所述pH较佳地调整为7.0。
进一步地，上述制备固体饮料的步骤(c)中，发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的添加量为5×105-5×107CFU/mL，较佳地为1×106-1×107CFU/mL，最佳地为5×106CFU/mL。
在优选的固体饮料制备工艺参数的范围之外所制备的固体饮料经25℃常温保藏6个月后，固体饮料中的活菌数量和存活率明显下降。例如，在一些具体实施方式中，在嗜热链球菌接种量过少或脱脂乳浓度过低或发酵温度过低或发酵时间过短时，嗜热链球菌发酵过慢，所产生的可被发酵乳杆菌再次利用的代谢产物较少，使得发酵乳杆菌在长期的常温保藏过程中因维持正常代谢的营养物质(嗜热链球菌的代谢产物)过少而大量衰亡。在另一些具体化实施方式中，当酸奶基料pH调整过低时，该生境已不利于发酵乳杆菌的存活，再加上冷冻干燥的浓缩作用加剧了生境的酸化，最终导致菌体在保藏期内大量死亡。
而在优选范围之内，嗜热链球菌接种量，脱脂乳浓度，发酵温度，发酵时间以及酸奶基料pH相互影响，使得所制备的固体饮料经25℃常温保藏6个月后，其中的活菌数依然稳定维持在1×106CFU/g以上，存活率保持在50％以上。
进一步地，上述制备的发酵乳杆菌固体饮料在25℃常温保藏6个月后，其活菌数＞1×106CFU/g，菌株存活率数＞50％。
上述发酵乳杆菌的应用，首次采用后添加的方式将发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)CGMCC NO.17321添加入酸奶基料中，得到含有发酵乳杆菌活菌的乳制品，上述乳制品在25℃常温保藏6个月后，活菌数高。披露了发酵乳杆菌在制备长效高活力型常温酸奶、乳饮料及固体饮料方面的新应用。与添加了其他常规乳酸菌制备的乳制品相比，添加发酵乳杆菌CGMCC NO.17321所制备的乳制品经长期常温保藏后，活菌数更高。此外，上述发酵乳杆菌的应用在确保其长期保藏活性的前提下，简化了工艺流程，省去了添加抗氧化剂等环节，使操作更简单可行，成本更低廉，同时，也打破了市场上没有单一发酵乳杆菌乳制品的格局。
下面通过实施例进一步说明上述具体实施方式，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。实施例中所使用的乳蛋白粉由戴维林国际贸易有限公司提供，所使用的增稠剂由奕方农业科技股份有限公司提供，所使用的脱脂乳粉由光明乳业股份有限公司提供，所使用的试剂若未加说明，均为分析纯试剂，购买自国药集团。其他试验仪器、试剂，如未做特别说明，均可通过商业途径直接购得。
实施例1发酵乳杆菌在制备长效高活力型常温酸奶方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：
保加利亚乳杆菌种子：将保加利亚乳杆菌LB-340(由丹尼斯克公司提供，丹麦)的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于MRS固体培养基(购买自Merck Co.，美国)，37℃厌氧培养48h取出，用接种环挑取单菌落放入10mL MRS液体培养基(购买自Merck Co.，美国)，运用涡旋振荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，37℃培养24h取出，以2％(v/v)接种量接种于MRS液体培养基，37℃再次培养24h后，培养物15,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子，种子液的菌浓度为4×109CFU/mL。
嗜热链球菌种子：将嗜热链球菌ST-BODY-3(由科.汉森公司提供，丹麦)的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于M17固体培养基(购买自OXOID Co.，英国)，37℃厌氧培养48h取出，用接种环挑取单菌落放入10mL M17液体培养基(购买自OXOID Co.，英国)，运用涡旋振荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，37℃培养24h取出，以2％(v/v)接种量接种于M17液体培养基，37℃再次培养24h后，培养物15,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子，种子液的菌浓度为8.5×108CFU/mL。
发酵乳杆菌菌剂：将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于MRS固体培养基(购买自Merck Co.，美国)，37℃厌氧培养48h取出，用接种环挑取单菌落放入10mL MRS液体培养基(购买自Merck Co.，美国)，运用涡旋振荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，37℃培养24h取出，以2％(v/v)接种量接种于MRS液体培养基，37℃再次培养24h后，培养物15,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到用于后添加的发酵乳杆菌菌剂，该菌剂浓度为5×109CFU/mL。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为93％的牛奶与7％的蔗糖混匀，充分溶解后，90℃灭菌10min，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、长效高活力型常温酸奶的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量5×106CFU/mL和5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，41℃培养6h后灭菌，得无菌的酸奶基料。将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的菌剂以初始添加量5×107CFU/mL添加入无菌的酸奶基料中混匀，即得本实施例的酸奶A。
经检测，酸奶A的pH为4.53，酸度为73°T，黏度为335cP。
实施例2发酵乳杆菌在制备长效高活力型常温酸奶方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为90％的牛奶、7.5％的蔗糖和2.5％的全乳蛋白粉混匀，充分溶解后，135℃灭菌5s，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、长效高活力型常温酸奶的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量5×105CFU/mL和4.5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，40℃培养7h后灭菌，得无菌的酸奶基料。将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的菌剂以初始添加量1×106CFU/mL添加入无菌的酸奶基料中混匀，即得本实施例的酸奶B。
经检测，酸奶B的pH为4.25，酸度为82°T，黏度为357cP。
实施例3发酵乳杆菌在制备长效高活力型常温酸奶方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为92.8％的牛奶、6.5％的蔗糖、0.17％的琼脂和0.53％的变性淀粉混匀，充分溶解后，90℃灭菌10min，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、长效高活力型常温酸奶的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量2.25×106CFU/mL和5.25×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，42℃培养7h后灭菌，得无菌的酸奶基料。将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的菌剂以初始添加量5×105CFU/mL添加入无菌的酸奶基料中混匀，即得本实施例的酸奶C。
经检测，酸奶C的pH为4.2，酸度为84°T，黏度为459cP。
实施例4发酵乳杆菌在制备长效高活力型常温酸奶方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为92.4％的牛奶、5.5％的蔗糖、1.5％的全乳蛋白粉、0.35％的变性淀粉和0.25％的果胶混匀，充分溶解后，135℃灭菌5s，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、长效高活力型常温酸奶的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量1.75×107CFU/mL和7.5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，39℃培养5.5h后灭菌，得无菌的酸奶基料。将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的菌剂以初始添加量7.5×105CFU/mL添加入无菌的酸奶基料中混匀，即得本实施例的酸奶D。
经检测，酸奶D的pH为4.38，酸度为75°T，黏度为443cP。
实施例5发酵乳杆菌在制备长效高活力型常温酸奶方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为91.1％的牛奶、7％的蔗糖、1.5％的乳清蛋白粉、0.25％的果胶和0.15％的明胶混匀，充分溶解后，90℃灭菌10min，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、长效高活力型常温酸奶的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量4.5×107CFU/mL和5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，43℃培养5h后灭菌，得无菌的酸奶基料。将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的菌剂以初始添加量5×106CFU/mL添加入无菌的酸奶基料中混匀，即得本实施例的酸奶E。
经检测，酸奶E的pH为4.27，酸度为81°T，黏度为438cP。
实施例6发酵乳杆菌在制备长效高活力型常温酸奶方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为91.3％的牛奶、6％的蔗糖、1％的全乳蛋白粉、1％的乳清蛋白粉、0.15％的琼脂、0.15％的变性淀粉、0.2％的果胶和0.2％的明胶混匀，充分溶解后，135℃灭菌5s，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、长效高活力型常温酸奶的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量5×106CFU/mL和5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，41℃培养6.5h后灭菌，得无菌的酸奶基料。将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的菌剂以初始添加量1×107CFU/mL添加入无菌的酸奶基料中混匀，即得本实施例的酸奶F。
经检测，酸奶F的pH为4.4，酸度为77°T，黏度为466cP。
实施例7发酵乳杆菌在制备长效高活力型常温乳饮料方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为93％的牛奶与7％的蔗糖混匀，充分溶解后，90℃灭菌10min，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、长效高活力型常温乳饮料的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量5×106CFU/mL和5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，41℃培养6h后灭菌，得无菌的酸奶基料。
将阿斯巴甜以1.34g/L的比例完全溶解于50℃的水中制得含有24％的蔗糖甜度的甜味勾兑液，将柠檬酸完全溶解于50℃的水中制得高浓度的酸味勾兑液。将上述甜味勾兑液与酸奶基料以1:2(v/v)充分混合均匀，再与酸味勾兑液缓慢混合直至所需酸度(60°T)。然后在15MP压力下进行均质，并于95℃灭菌30min，得无菌的乳饮料基料。
将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的菌剂以初始添加量5×107CFU/mL添加入无菌的乳饮料基料中混匀，即得本实施例的乳饮料A。
经检测，本实施例生产的乳饮料甜度折合成蔗糖甜度为11.5％，滴定酸度为60°T。
实施例8发酵乳杆菌在制备长效高活力型常温乳饮料方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为90％的牛奶、7.5％的蔗糖和2.5％的全乳蛋白粉混匀，充分溶解后，135℃灭菌5s，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、长效高活力型常温乳饮料的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量5×105CFU/mL和4.5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，40℃培养7h后灭菌，得无菌的酸奶基料。
将甜蜜素、安赛蜜分别以0.68g/L和0.68g/L的比例完全溶解于50℃的水中制得含有16％的蔗糖甜度的甜味勾兑液，将苹果酸、酒石酸、乳酸完全溶解于50℃的水中制得高浓度的酸味勾兑液。将上述甜味勾兑液与酸奶基料以1：1(v/v)充分混合均匀，再与酸味勾兑液缓慢混合直至所需酸度(57°T)。然后在30MP压力下进行均质，并于125℃灭菌5min，得无菌的乳饮料基料。
将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的菌剂以初始添加量1×106CFU/mL添加入无菌的乳饮料基料中混匀，即得本实施例的乳饮料B。
经检测，本实施例生产的乳饮料甜度折合成蔗糖甜度为11.1％，滴定酸度为57°T。
实施例9发酵乳杆菌在制备长效高活力型常温乳饮料方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为92.8％的牛奶、6.5％的蔗糖、0.17％的琼脂和0.53％的变性淀粉混匀，充分溶解后，90℃灭菌10min，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、长效高活力型常温乳饮料的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量2.25×106CFU/mL和5.25×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，42℃培养7h后灭菌，得无菌的酸奶基料。
将阿斯巴甜、木糖醇、甜蜜素分别以0.67g/L、13.4g/L和0.67g/L的比例完全溶解于50℃的水中制得含有16.75％的蔗糖甜度的甜味勾兑液，将柠檬酸、醋酸完全溶解于50℃的水中制得高浓度的酸味勾兑液。将上述甜味勾兑液与酸奶基料以1:1.5(v/v)充分混合均匀，再与酸味勾兑液缓慢混合直至所需酸度(50°T)。然后在25MP压力下进行均质，并于120℃灭菌10min，得无菌的乳饮料基料。
将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的菌剂以初始添加量5×105CFU/mL添加入无菌的乳饮料基料中混匀，即得本实施例的乳饮料C。
经检测，本实施例生产的乳饮料甜度折合成蔗糖甜度为9.5％，滴定酸度为50°T。
实施例10发酵乳杆菌在制备长效高活力型常温乳饮料方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为92.4％的牛奶、5.5％的蔗糖、1.5％的全乳蛋白粉、0.35％的变性淀粉和0.25％的果胶混匀，充分溶解后，135℃灭菌5s，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、长效高活力型常温乳饮料的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量1.75×107CFU/mL和7.5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，39℃培养5.5h后灭菌，得无菌的酸奶基料。
将安赛蜜、阿斯巴甜分别以0.7g/L和0.7g/L的比例完全溶解于50℃的水中制得含有26.75％的蔗糖甜度的甜味勾兑液，将柠檬酸、乳酸、醋酸完全溶解于50℃的水中制得高浓度的酸味勾兑液。将上述甜味勾兑液与酸奶基料以1:2.5(v/v)充分混合均匀，再与酸味勾兑液缓慢混合直至所需酸度54°T)。然后在20MP压力下进行均质，并于100℃灭菌15min，得无菌的乳饮料基料。
将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的菌剂以初始添加量7.5×105CFU/mL添加入无菌的乳饮料基料中混匀，即得本实施例的乳饮料D。
经检测，本实施例生产的乳饮料甜度折合成蔗糖甜度为10.22％，滴定酸度为54°T。
实施例11发酵乳杆菌在制备长效高活力型常温乳饮料方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为91.1％的牛奶、7％的蔗糖、1.5％的乳清蛋白粉、0.25％的果胶和0.15％的明胶混匀，充分溶解后，90℃灭菌10min，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、长效高活力型常温乳饮料的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量1.75×107CFU/mL和7.5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，39℃培养5.5h后灭菌，得无菌的酸奶基料。
将木糖醇、阿斯巴甜、甜蜜素、安赛蜜分别以0.31g/L、0.61g/L、1.22g/L、0.61g/L的比例完全溶解于50℃的水中制得含有27.6％的蔗糖甜度的甜味勾兑液，将柠檬酸、苹果酸、酒石酸、乳酸、醋酸完全溶解于50℃的水中制得高浓度的酸味勾兑液。将上述甜味勾兑液与酸奶基料以1:3(v/v)充分混合均匀，再与酸味勾兑液缓慢混合直至所需酸度(55°T)。然后在22MP压力下进行均质，并于115℃灭菌12min，得无菌的乳饮料基料。
将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的菌剂以初始添加量5×106CFU/mL添加入无菌的乳饮料基料中混匀，即得本实施例的乳饮料E。
经检测，本实施例生产的乳饮料甜度折合成蔗糖甜度为10.87％，滴定酸度为55°T。
实施例12发酵乳杆菌在制备长效高活力型常温乳饮料方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为91.3％的牛奶、6％的蔗糖、1％的全乳蛋白粉、1％的乳清蛋白粉、0.15％的琼脂、0.15％的变性淀粉、0.2％的果胶和0.2％的明胶混匀，充分溶解后，135℃灭菌5s，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、长效高活力型常温乳饮料的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量5×106CFU/mL和5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，41℃培养6.5h后灭菌，得无菌的酸奶基料。
将阿斯巴甜以1.2g/L的比例完全溶解于50℃的水中制得含有21.5％的蔗糖甜度的甜味勾兑液，将柠檬酸完全溶解于50℃的水中制得高浓度的酸味勾兑液。将上述甜味勾兑液与酸奶基料以1:2(v/v)充分混合均匀，再与酸味勾兑液缓慢混合直至所需酸度(52°T)。然后在15MP压力下进行均质，并于95℃灭菌30min，得无菌的乳饮料基料。
将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321的菌剂以初始添加量1×107CFU/mL添加入无菌的乳饮料基料中混匀，即得本实施例的乳饮料F。
经检测，本实施例生产的乳饮料甜度折合成蔗糖甜度为10％，酸度为52°T。
实施例13发酵乳杆菌在制备发酵乳杆菌固体饮料方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为10％的脱脂乳粉与90％的水混匀，充分溶解后，90℃灭菌10min，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、发酵乳杆菌固体饮料的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量5×106CFU/mL和5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，41℃培养6h后灭菌，得无菌的酸奶基料。将酸奶基料以无菌的Na2CO3溶液调节pH至7.0后，以5×107CFU/mL的添加量加入发酵乳杆菌CGMCC NO.17321菌剂，混匀，冷冻干燥后即得本实施例的发酵乳杆菌固体饮料A。经检测，上述发酵乳杆菌固体饮料A的活菌数为5×108CFU/g。
实施例14发酵乳杆菌在制备发酵乳杆菌固体饮料方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为12％的脱脂乳粉与88％的水混匀，充分溶解后，135℃灭菌5s，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、发酵乳杆菌固体饮料的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量5×105CFU/mL和4.5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，40℃培养7h后灭菌，得无菌的酸奶基料。将酸奶基料以无菌的NaHCO3溶液调节pH至6.5后，以1×106CFU/mL的添加量加入发酵乳杆菌CGMCC NO.17321菌剂，混匀，冷冻干燥后即得本实施例的发酵乳杆菌固体饮料B。经检测，上述发酵乳杆菌固体饮料B的活菌数为8.3×106CFU/g。
实施例15发酵乳杆菌在制备发酵乳杆菌固体饮料方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为6％的脱脂乳粉与94％的水混匀，充分溶解后，90℃灭菌10min，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、发酵乳杆菌固体饮料的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量2.25×106CFU/mL和5.25×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，42℃培养7h后灭菌，得无菌的酸奶基料。将酸奶基料以无菌的NaOH溶液调节pH至7.5后，以5×105CFU/mL的添加量加入发酵乳杆菌CGMCC NO.17321菌剂，混匀，冷冻干燥后即得本实施例的发酵乳杆菌固体饮料C。经检测，上述发酵乳杆菌固体饮料C的活菌数为8.3×106CFU/g。
实施例16发酵乳杆菌在制备发酵乳杆菌固体饮料方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为8％的脱脂乳粉与92％的水混匀，充分溶解后，135℃灭菌5s，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、发酵乳杆菌固体饮料的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量1.75×107CFU/mL和7.5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，39℃培养5.5h后灭菌，得无菌的酸奶基料。将酸奶基料以无菌的Na2CO3、NaOH混合溶液调节pH至6.8后，以7.5×105CFU/mL的添加量加入发酵乳杆菌CGMCC NO.17321菌剂，混匀，冷冻干燥后即得本实施例的发酵乳杆菌固体饮料D。经检测，上述发酵乳杆菌固体饮料D的活菌数为9.4×106CFU/g。
实施例17发酵乳杆菌在制备发酵乳杆菌固体饮料方面的应用
1、材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或发酵乳杆菌菌剂的制备：同实施例1。
(b)发酵基料的制备：
将质量百分比为7％的脱脂乳粉与93％的水混匀，充分溶解后，90℃灭菌10min，冷却至室温，即得所需的无菌发酵基料。
2、发酵乳杆菌固体饮料的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量4.5×107CFU/mL和5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，43℃培养5h后灭菌，得无菌的酸奶基料。将酸奶基料以无菌的Na2CO3、NaHCO3、NaOH混合溶液调节pH至7.2后，以5×106CFU/mL的添加量加入发酵乳杆菌CGMCC NO.17321菌剂，混匀，冷冻干燥后即得本实施例的发酵乳杆菌固体饮料E。经检测，上述发酵乳杆菌固体饮料E的活菌数为7.1×107CFU/g。
效果实施例1长效高活力型常温酸奶的25℃常温保藏实验
取上述实施例1-6所制备的酸奶A、B、C、D、E和F置于25℃常温条件下进行保藏，并于0、2个月、4个月和6个月时取出，分别测定各样品的活菌数、pH、酸度、黏度(黏度下降率＝(初始黏度-实测黏度)÷初始黏度×100％)，结果如表1-4所示。
表1 25℃常温保藏期内酸奶的活菌数统计表
表2 25℃常温保藏期内酸奶的pH统计表
表3 25℃常温保藏期内酸奶的酸度统计表
表4 25℃常温保藏期内酸奶的黏度及黏度下降率统计表
由表1-4可知，所有测试的酸奶在25℃常温保藏期内，活菌数均稳定维持在1×105CFU/mL以上，pH均保持在4.00以上，滴定酸度始终在90°T以下，黏度下降率不到10％。
效果实施例2长效高活力型常温酸奶的口味与喜好程度测试
将上述实施例1-6所制备的酸奶A、B、C、D、E和F置于25℃常温保藏6个月后，进行口味测试。测试人数50人。品尝方式：采用不记名打分的方式进行品尝；分别对上述酸奶的色泽、酸甜比、风味、口感、营养项进行单独打分，每一项满分是20分，计算平均分及其总分，统计结果记录于表5。同时，根据对产品的整体喜好程度给出的意见，统计对每个单品的喜好人数，统计结果记录于表6。
表5酸奶口味测试结果统计表
表6酸奶喜好程度测试结果统计表
从酸奶口味测试和喜好程度统计结果可以看出，总体而言，通过本发明技术方案中的方法所制得的长效高活力型常温酸奶在产品风味、酸甜比、风味、口感、营养等方面可被大部分消费者所接受。
效果实施例3长效高活力型常温乳饮料的25℃常温保藏实验
取上述实施例7-12所制备的乳饮料A、B、C、D、E和F置于25℃常温条件下进行保藏，并于0、2个月、4个月和6个月时取出，分别测定各样品的活菌数、甜度(折合成蔗糖甜度)和滴定酸度，结果如表7-9所示。
表7 25℃常温保藏期内乳饮料的活菌数统计表
表8 25℃常温保藏期内乳饮料的甜度统计表
表9 25℃常温保藏期内乳饮料的酸度统计表
表7-9可知，所有测试的乳饮料在25℃常温保藏期内，活菌数均稳定维持在1×104CFU/mL以上，甜度折合成蔗糖甜度均保持在8.7％-10.6％，滴定酸度始终在55°T-70°T。
效果实施例4乳饮料口味与喜好程度测试
将上述实施例7-12所制备的乳饮料A、B、C、D、E和F置于25℃常温保藏6个月后，进行口味测试。测试人数50人。品尝方式：采用不记名打分的方式进行品尝；分别对上述乳饮料的色泽、酸甜比、风味、口感、营养项进行单独打分，每一项满分是20分，计算平均分及其总分，统计结果记录于表10。同时，根据对产品的整体喜好程度给出的意见，统计对每个单品的喜好人数，统计结果记录于表11。
表10乳饮料口味测试结果统计表
表11乳饮料喜好程度测试结果统计表
从乳饮料口味测试和喜好程度统计结果可以看出，总体而言，通过本发明技术方案中的方法所制得的长效高活力型常温乳饮料在产品风味、酸甜比、风味、口感、营养等方面可被大部分消费者所接受。
效果实施例5发酵乳杆菌固体饮料的25℃常温保藏实验
取上述实施例13-17所制备的发酵乳杆菌固体饮料A、B、C、D和E置于25℃常温条件下进行保藏，并于0、2个月、4个月和6个月时取出，分别测定各样品的活菌数、计算存活率(存活率＝(初始活菌数-实测活菌数)÷初始活菌数×100％)，结果如表12所示。
表12 25℃常温保藏期内发酵乳杆菌固体饮料的活菌数和存活率统计表
由表12可知，所有测试的发酵乳杆菌固体饮料在25℃常温保藏期内，活菌数均稳定维持在1×106CFU/g以上，存活率达到50％以上。
对比例1优选范围外制备的酸奶的常温保藏效果
将实施例1中的嗜热链球菌接种量，牛奶浓度，发酵温度，发酵时间以及发酵乳杆菌添加量逐一进行调整，获得了以下一组不同方法制备的酸奶，将各组所得酸奶置于25℃常温条件下保藏6个月，分别测定各样品的活菌数，结果如表13所示。
表13不同方法制备所得酸奶经25℃常温保藏6个月后的活菌数比较
从表13所示的结果中可以得出，将所述酸奶的制备方法中嗜热链球菌接种量，牛奶浓度，发酵温度，发酵时间以及发酵乳杆菌添加量调整到优选范围之外的时候，所制备的酸奶经25℃常温保藏6个月后，酸奶中依然有活菌存在，但是活菌数量明显下降。
对比例2添加不同乳酸菌制备的酸奶的常温保藏效果比较
参考实施例1所述方法，比较添加发酵乳杆菌CGMCC NO.17321、双歧杆菌(B.animalis)BB12(由科.汉森公司提供，丹麦)、干酪乳杆菌(L.casei)ATCC 393(购买自ATCC)、鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)LGG(由科.汉森公司提供，丹麦)制备的酸奶经25℃常温保藏6个月后的活菌数，具体操作如下：
1.材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或不同乳酸菌菌剂的制备：
保加利亚乳杆菌种子：同实施例1。
嗜热链球菌种子：同实施例1。
发酵乳杆菌菌剂：同实施例1。
双歧杆菌菌剂：将双歧杆菌BB12的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于TPY固体培养基(购买自Merck Co.，美国)，37℃厌氧培养48h取出，用接种环挑取单菌落放入10mL TPY液体培养基(购买自Merck Co.，美国)，运用涡旋振荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，37℃培养24h取出，以2％(v/v)接种量接种于TPY液体培养基，37℃再次培养24h后，培养物15,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到用于后添加的双歧杆菌菌剂，该菌剂浓度为4.3×108CFU/mL。
干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌菌剂：将干酪乳杆菌ATCC 393、鼠李糖乳杆菌LGG的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于MRS固体培养基(购买自Merck Co.，美国)，37℃厌氧培养48h取出，用接种环挑取单菌落放入10mL MRS液体培养基(购买自MerckCo.，美国)，运用涡旋振荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，37℃培养24h取出，以2％(v/v)接种量接种于MRS液体培养基，37℃再次培养24h后，培养物15,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到用于后添加的菌剂，两种乳酸菌菌剂浓度分别为2.7×109CFU/mL和5.9×109CFU/mL。
(b)发酵基料的制备：同实施例1。
2.添加不同乳酸菌的酸奶的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量5×106CFU/mL和5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，41℃培养6h后灭菌，得无菌的酸奶基料。将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321、双歧杆菌BB12、干酪乳杆菌ATCC 393、鼠李糖乳杆菌LGG的菌剂分别以初始添加量5×107CFU/mL添加入无菌的酸奶基料中混匀，即得添加不同乳酸菌制备而成的酸奶。
3.25℃常温保藏
将上述添加不同乳酸菌制备而成的酸奶置于25℃常温保藏6个月，测定其中的活菌数，结果如表14所示。
表14添加不同乳酸菌制备的酸奶经25℃常温保藏6个月后活菌数比较
由表14可知，添加发酵乳杆菌CGMCC NO.17321制备的酸奶经25℃常温保藏6个月后，其中活菌数达到3.6×105CFU/mL，存活效果显著，而添加了其他常规乳酸菌制备的酸奶在相同条件下无菌体存活。
对比例3优选范围外制备的乳饮料的常温保藏效果
将实施例7中的嗜热链球菌接种量，牛奶浓度，发酵温度，发酵时间，勾兑比例以及发酵乳杆菌添加量逐一进行调整，获得了以下一组不同方法制备的乳饮料，将各组所得乳饮料置于25℃常温条件下保藏6个月，分别测定各样品的活菌数，结果如表15所示。
表15不同方法制备所得乳饮料经25℃常温保藏6个月后的活菌数比较
从表15所示的结果中可以得出，将所述乳饮料的制备方法中嗜热链球菌接种量，牛奶浓度，发酵温度，发酵时间，勾兑比例以及发酵乳杆菌添加量调整到优选范围之外的时候，所制备的乳饮料经25℃常温保藏6个月后，乳饮料中依然有活菌存在，但是活菌数量明显下降。
对比例4添加不同乳酸菌制备的乳饮料的常温保藏效果比较
参考实施例7所述方法，比较添加发酵乳杆菌CGMCC NO.17321、双歧杆菌(B.animalis)BB12(由科.汉森公司提供，丹麦)、干酪乳杆菌(L.casei)ATCC 393(购买自ATCC)、鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)LGG(由科.汉森公司提供，丹麦)制备的乳饮料经25℃常温保藏6个月后的活菌数，具体操作如下：
1.材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或不同乳酸菌菌剂的制备：
保加利亚乳杆菌种子：同实施例1。
嗜热链球菌种子：同实施例1。
发酵乳杆菌菌剂：同实施例1。
双歧杆菌菌剂：同对比例2。
干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌菌剂：同对比例2。
(b)发酵基料的制备：同实施例7。
2、添加不同乳酸菌的乳饮料的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量5×106CFU/mL和5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，41℃培养6h后灭菌，得无菌的酸奶基料。
将阿斯巴甜以1.34g/L的比例完全溶解于50℃的水中制得含有24％的蔗糖甜度的甜味勾兑液，将柠檬酸完全溶解于50℃的水中制得高浓度的酸味勾兑液。将上述甜味勾兑液与酸奶基料以1:2(v/v)充分混合均匀，再与酸味勾兑液缓慢混合直至所需酸度(60oT)。然后在15MP压力下进行均质，并于95℃灭菌30min，得无菌的乳饮料基料。
将发酵乳杆菌CGMCC NO.17321、双歧杆菌BB12、干酪乳杆菌ATCC393、鼠李糖乳杆菌LGG的菌剂分别以初始添加量5×107CFU/mL添加入无菌的乳饮料基料中混匀，即得添加不同乳酸菌制备而成的乳饮料。
3.25℃常温保藏
将上述添加不同乳酸菌制备而成的乳饮料置于25℃常温保藏6个月，测定其中的活菌数，结果如表16所示。
表16添加不同乳酸菌制得的乳饮料经25℃常温保藏6个月后活菌数比较
由表16可知，添加发酵乳杆菌CGMCC NO.17321制备的乳饮料经25℃常温保藏6个月后，其中活菌数达到1.2×104CFU/mL，存活效果显著，而添加了其他常规乳酸菌制备的乳饮料在相同条件下无菌体存活。
对比例5优选范围外制备的固体饮料的常温保藏效果
将实施例13中的嗜热链球菌接种量，脱脂乳浓度，发酵温度，发酵时间以及酸奶基料pH逐一进行调整，获得了以下一组不同方法制备的发酵乳杆菌固体饮料，将各组所得固体饮料置于25℃常温条件下保藏6个月，分别测定各样品的活菌数，并计算存活率，结果如表17所示。
表17不同方法制备所得固体饮料经25℃常温保藏6个月后的活菌数和存活率比较
从表17所示的结果中可以得出，将所述发酵乳杆菌固体饮料的制备方法中嗜热链球菌接种量，脱脂乳浓度，发酵温度，发酵时间以及酸奶基料pH调整到优选范围之外的时候，所制备的固体饮料经25℃常温保藏6个月后，固体饮料中依然有活菌存在，但是活菌数量和存活率均明显下降。
对比例6添加不同乳酸菌制备的固体饮料的常温保藏效果比较
参考实施例13所述方法，比较添加发酵乳杆菌CGMCC NO.17321、双歧杆菌(B.animalis)BB12(由科.汉森公司提供，丹麦)、干酪乳杆菌(L.casei)ATCC 393(购买自ATCC)、鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)LGG(由科.汉森公司提供，丹麦)制备的固体饮料经25℃常温保藏6个月后的活菌数，具体操作如下：
1.材料与方法
(a)种子(发酵菌种)或不同乳酸菌菌剂的制备：
保加利亚乳杆菌种子：同实施例1。
嗜热链球菌种子：同实施例1。
发酵乳杆菌菌剂：同实施例1。
双歧杆菌菌剂：同对比例2。
干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌菌剂：同对比例2。
(b)发酵基料的制备：同实施例13。
2.添加不同乳酸菌的固体饮料的制备
将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌种子分别以初始接种量5×106CFU/mL和5×106CFU/mL无菌接种于上述无菌的发酵基料中，41℃培养6h后灭菌，得无菌的酸奶基料。将酸奶基料以无菌的Na2CO3溶液调节pH至7.0后，以5×107CFU/mL的添加量加入发酵乳杆菌CGMCC NO.17321、双歧杆菌BB12、干酪乳杆菌ATCC 393、鼠李糖乳杆菌LGG的菌剂，混匀，冷冻干燥后即得添加不同乳酸菌制备而成的固体饮料。
3.25℃常温保藏
将上述添加不同乳酸菌制备而成的固体饮料置于25℃常温保藏6个月，测定其中的活菌数，结果如表18所示。
表18添加不同乳酸菌制备的固体饮料经25℃常温保藏6个月后活菌数比较
由表18可知，添加发酵乳杆菌CGMCC NO.17321制备的固体饮料经25℃常温保藏6个月后，其中活菌数达到3.2×108CFU/g，存活效果显著，而添加了其他常规乳酸菌制备的固体饮料在相同条件下无菌体存活。
以上对本发明所提供的发酵乳杆菌及其应用进行了详细介绍。本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (10)
1.一种发酵乳杆菌菌株，其特征在于，所述发酵乳杆菌的分类命名为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)，保藏编号为CGMCC NO.17321。
2.权利要求1所述发酵乳杆菌菌株在制备常温乳制品中的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：
(a)将发酵剂接种于发酵基料中进行发酵；
(b)灭菌；
(c)加入所述发酵乳杆菌，混匀。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述常温乳制品经过常温保藏6个月后，活菌数＞1×104CFU/mL。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述步骤(c)中发酵乳杆菌的添加量为5×105-5×107CFU/mL。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述发酵剂为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，所述保加利亚乳杆菌的接种量为5×105-4.5×107CFU/mL，所述嗜热链球菌的接种量为4.5×106-7.5×106CFU/mL。
6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述发酵的发酵温度为39℃-43℃，发酵时间为5-7h。
7.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述发酵基料选自：
(a)发酵基料包括90-93wt％的牛奶；或，
(b)发酵基料包括6-12wt％的脱脂乳粉和88-94wt％的水。
8.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述常温乳制品为常温酸奶、乳饮料或固体饮料。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用在制备常温乳饮料中还包括以下步骤：在步骤(a)后加入勾兑液，均质，再进行步骤(b)的灭菌，所述勾兑液包括甜味剂和/或酸味剂，所述勾兑液与步骤(a)的产物的勾兑体积比例为1:1-1:3。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用在制备固体饮料中还包括以下步骤：在步骤(a)后还包括调整pH值到6.5-7.5，然后进行步骤(b)的灭菌。
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