CN114994156A - 一种无试剂型电化学葡萄糖生物传感器及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种无试剂型电化学葡萄糖生物传感器的制备方法,属于生物传感器技术领域,包括如下步骤:(1)壳聚糖溶液配置;(2)金电极表面的预处理;(3)电沉积普鲁士蓝膜;(4)激活普鲁士蓝膜,制备Au/PB电极;(5)制备Au/PB/CS电极;(6)制备Au/PB/AuNPs‑CS电极;(7)制备Au/PB/GOx‑AuNPs‑CS生物传感器。本发明首先将普鲁士蓝电沉积在电极表面;然后用壳聚糖作为保护膜提供一个保护界面去改善普鲁士蓝修饰电极在中性pH下工作时不稳定的缺陷;提高其对过氧化氢的电催化活性,同时金纳米粒子的使用有效克服了壳聚糖低导电率的缺陷;最后将葡萄糖氧化酶固定在纳米复合膜中制备得到具有抗干扰能力强、高灵敏度和良好线性关系的无试剂电化学葡萄糖生物传感器。
Description
技术领域
本发明属于生物传感器技术领域,具体涉及一种无试剂型电化学葡萄糖生物传感器及其制备方法。
背景技术
糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病,如果不及时治疗则会引起许多的并发症。糖尿病的并发症有急性并发症和慢性并发症两种。急性并发症包括糖尿病酮症酸中毒,非酮症高渗性昏迷或死亡。慢性并发症包括心脑血管病变、糖尿病肾病、糖尿病足和糖尿病性视网膜病变等,严重影响患者生活质量。对于已经不幸罹患糖尿病的患者而言,他们迫切需要一种全面的早期发现糖尿病的方法,以对人类健康造成不利影响的疾病进行风险评估、诊断和进一步管理。
同时,根据国际糖尿病联合会(International Diabetes Federation,IDF)2019年发布的最新数据显示,全球约有6亿的成年人患有糖尿病,约占总人口的十分之一,中国作为人口大国,成年人患糖尿病人数也有1.16亿,约占全球患病人数的1/4。因此为了实现糖尿病早期监测和日益增长的检测需求,在过去几年中,许多葡萄糖检测的策略得到了广泛的研究。其中,基于葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase,GOx)的电化学生物传感器特别被认为是一个可行的方式,该类传感器在对血糖检测方面具有操作简单,使用方便等优点,因此逐渐成为血糖检测的主流方式。
电化学生物传感器是当代分析科学的重要研究方向之一,电化学生物传感器是一种以固定化的生物敏感材料为识别元件,以电化学电极为信号转换器,经电化学工作站信号放大装置输出,产生电化学特征检测信号从而实现对某些分子检测的分析系统。其中,生物敏感材料是生物传感器的核心部分,直接影响传感器的性能。目标底物分子在传感界面通过生物敏感材料的识别作用,与分析物反应后经信号转换器得到电化学信号,其产生的电化学信号与被检测物浓度有关,最终实现对被分析物质的检测。电化学生物传感器具有灵敏度高、选择性好、设备简单、价格低廉、易微型化等特点。
将纳米技术与电化学传感技术相结合,发展出的新型纳米电化学传感器具有更好的稳定性、灵敏度及选择性等性能,从而在生物及医疗技术研究、食品生产及安全监测、制药工业及药物检测、临床检测、环境分析等领域都表现出了巨大的市场价值和应用前景。
电化学葡萄糖检测通常是在溶解氧存在条件下,通过葡萄糖氧化酶与葡萄糖发生反应生成过氧化氢,可通过在高电位氧化进行检测生成的过氧化氢从而达到检测葡萄糖的目的。但是,有毒的副产物过氧化氢可能会降低生物传感器的长期稳定性;另外,在如此高的氧化电位下,生物体液中的许多物质(如,抗坏血酸、多巴胺、尿酸等)也会被同时氧化产生信号,从而引起干扰电流。因此,如何抑制和避免非测试物质的干扰,提高测试物质的选择性,一直是研究重点。为了过氧化氢的还原催化,最广泛的是一种方式是采用过氧化物酶,例如辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP);另一种方式是采用“人工过氧化氢酶”普鲁士蓝(Prussian Blue,PB)修饰电极来催化还原过氧化氢,它可以很容易的附着在各种电极上并作为一种无机导电膜去代替溶液中的电子转移介质,然后通过直接产生电化学信号实现无试剂的电化学生物传感器制作;并且普鲁士蓝具有价格低廉,对过氧化氢检测的高灵敏性和较好的稳定性等优点。
辣根过氧化物酶(HRP)的催化能力是由于具有铁血红素基团电活性中心。使用辣根过氧化物酶的缺点是,第一,它在溶液中的稳定性不好;第二,其价格比较高会增加生物传感器的制造成本。鲁士蓝的缺点是,第一,由于普鲁士蓝是铁和六氰合铁的络合物,其中的铁离子在pH值大于6.4的情况下会发生水解形成Fe(OH)3,使得Fe(II)-CN-Fe(III)键的破坏,所以会导致催化剂活性的逐渐丧失,第二,普鲁士蓝的还原形式普鲁士白(Prussianwhite,PW)是水溶性的,会扩散远离电极表面。由此可见,虽然普鲁士蓝对于催化过氧化氢是一种理想的电子媒介体,但其在中性或碱性环境中不稳定,大大影响了其在生物分子检测领域的应用,非常有必要找到一种合适的方法来提高普鲁士蓝膜在中性pH中的检测效果。
发明内容
本发明的目的是针对现有的问题,提供了一种无试剂型电化学葡萄糖生物传感器及其制备方法。
本发明是通过以下技术方案实现的:
一种无试剂型电化学葡萄糖生物传感器的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)壳聚糖溶液配置:
分别用天平准确称量0.5g和1g壳聚糖溶解在稀盐酸中,并用氢氧化钾溶液调节pH到6.0,制备质量分数为0.5%和1%的CS溶液;
(2)金电极表面的预处理:
用1200目的Carbimet型金相砂纸和1.0、0.3mm、0.05mmγ-氧化铝粉依次将裸金电极抛光至镜面,用超纯水冲洗后,分别用氢氧化钾溶液、无水乙醇和超纯水分别超声处理5min,以实现对金电极表面的清洗;
(3)电沉积普鲁士蓝膜:
将清洗干净的裸金电极浸入生长液中,然后施加一个恒电位进行电沉积,获得普鲁士蓝膜;电沉积一段时间是为了控制电极上PB的含量,使其不至于因沉积时间过长导致PB层厚度太大从而减低电子传输速率;
(4)激活普鲁士蓝膜,制备Au/PB电极:
电沉积后,将电极用超纯水彻底清洗后转移到支持电解质溶液中,-0.05~0.35V的电位范围内以50mv/s的扫描速率进行CV激活,直到出现稳的的CV曲线,然后将电极用超纯水清洗后在65℃干燥30min,得到Au/PB电极;
(5)制备Au/PB/CS电极:
取6ul质量分数为0.5%的CS溶液滴到Au/PB电极表面,在室温下干燥成膜,制得Au/PB/CS电极;在一定温度下干燥一段时间是为了获得稳定的PB结构;
(6)制备Au/PB/AuNPs-CS电极:
取等量质量分数为0.05mg/ml直径为20nm的金纳米粒子(AuNPs)溶液和质量分数为1%的壳聚糖(CS)溶液混合并超声处理15min后得到质量分数为0.5%的AuNPs-CS溶液,取6ul的AuNPs-CS溶液滴到Au/PB电极表面,在室温下干燥成膜,制得Au/PB/AuNPs-CS电极;将金纳米粒子和壳聚糖混合溶液进行超声处理,是为了使溶液充分混合;
(7)制备Au/PB/GOx-AuNPs-CS生物传感器:
将葡萄糖氧化酶(GOx)溶解在AuNPs-CS溶液中并超声处理15min,制得0.5mg/ml的GOx-AuNPs-CS溶液,取6ul GOx-AuNPs-CS溶液滴到Au/PB电极表面,在室温下干燥成膜,制得Au/PB/GOx-AuNPs-CS生物传感器,用于葡萄糖的检测;葡萄糖氧化酶浓度为0.5mg/ml,是为了保证制备的生物传感器有较大的线性范围。
进一步地,步骤(1)中所述的CS溶液不使用时放在4℃冰箱中冷藏保存。
进一步地,步骤(3)中所述的生长液为:0.3mM的铁氰化钾(K3[Fe(CN)6])和0.3mM的氯化铁(FeCl3)溶解在100mL pH=2的0.1M/L的氯化钾溶液。
进一步地,步骤(3)中所述的恒电位为0.4V,电沉积的时间为100s。
进一步地,步骤(4)中所述的电解质溶液为pH=2的0.1M/L的氯化钾溶液。
进一步地,步骤(6)中所述的金纳米粒子为市售金纳米粒子,通过柠檬酸还原法制得。
该传感器对葡萄糖检测的反应机理是:固定在电极表面的葡萄糖氧化酶在存在氧气(O2)的情况下对葡萄糖的专一催化会产生过氧化氢,生成的过氧化氢又会迅速被电沉积在电极表面的普鲁士蓝在较低的电位下被电催化还原,电化学工作站可以检测到普鲁士蓝对产生的过氧化氢的电催化还原的特征信号,其产生的电化学信号与被检测物浓度有关,由于葡萄糖的消耗量与过氧化氢的生成量是等量变化的,所以最终实现对葡萄糖的检测目的。制备过程和检测原理如图1所示。
本发明相比现有技术具有以下优点:
1、本申请使用电沉积在电极表面的普鲁士蓝电催化还原葡萄糖被葡萄糖氧化酶催化产生的产物过氧化氢,然后普鲁士蓝又作为电子转移介质可以直接产生电化学信号,实现无试剂的电化学葡萄糖检测。
2、本申请使用壳聚糖在普鲁士蓝表面成膜,提高了普鲁士蓝修饰电极的稳定性,避免了可溶性普鲁士白从电极表面的扩散远离,提高了普鲁士蓝对过氧化氢的电催化能力。
3、本申请通过将壳聚糖与高导电纳米材料金纳米粒子结合,有效改善了壳聚糖导电率低的缺陷。
4、本申请其制备流程简单方便,成本低,制备的传感器具有抗干扰能力强、响应时间快、灵敏度高以及良好的线性关系等优点。
5、本发明提出一种无试剂型电化学葡萄糖生物传感器及其制备方法。首先将普鲁士蓝电沉积在电极表面,一方面普鲁士蓝可以作为电子转移介质,另一方面普鲁士蓝可在较低电位下催化还原葡萄糖氧化酶对葡萄糖专一催化的产物过氧化氢达到减小干扰的目的;然后用壳聚糖作为保护膜提供一个保护界面去改善普鲁士蓝修饰电极在中性pH下工作时不稳定的缺陷;提高其对过氧化氢的电催化活性,同时金纳米粒子(Au Nanoparticles,AuNPs)的使用有效克服了壳聚糖低导电率的缺陷;最后将葡萄糖氧化酶固定在纳米复合膜中制备得到具有抗干扰能力强、高灵敏度和良好线性关系的无试剂电化学葡萄糖生物传感器。
附图说明
图1为一种无试剂型电化学葡萄糖生物传感器及其制备方法和对葡萄糖检测的反应机理示意图;
图2为金/普鲁士蓝修饰电极(a)和金/普鲁士蓝/壳聚糖修饰电极(b)在+0.1V电位下连续滴加过氧化氢的安培响应;
图3为不同修饰电极在含有0.1M kCl的0.1M PBS(pH 6.5)中以50mV/s扫描速率的循环伏安测试结果图;
图4为金/普鲁士蓝/金纳米粒子-壳聚糖修饰电极在+0.1V电位下对过氧化氢的安培响应;
图5为金/普鲁士蓝/葡萄糖氧化酶-金纳米粒子-壳聚糖生物传感器在0.1mol/L的pH=6.5磷酸缓冲液(含0.1mol/L氯化钾)溶液不存在葡萄糖(虚线a)和存在2mM葡萄糖(实线b)以50mv/s扫描速度情况下的CV响应;
图6为金/普鲁士蓝/葡萄糖氧化酶-金纳米粒子-壳聚糖生物传感器在+0.1V电位下连续滴加葡萄糖的安培响应;
图7为金/普鲁士蓝/葡萄糖氧化酶-金纳米粒子-壳聚糖生物传感器响应电流和葡萄糖浓度线性校准曲线。
图1中:1裸金电极,2电沉积普鲁士蓝后的金/普鲁士蓝电极,3移液枪,4含金纳米粒子和葡萄糖氧化酶的壳聚糖混合液,5金纳米粒子,6葡萄糖氧化酶,7葡萄糖氧化酶-金纳米粒子-壳聚糖的生物纳米复合膜,8金/普鲁士蓝/葡萄糖氧化酶-金纳米粒子-壳聚糖生物传感器。
图3中,a为金/普鲁士蓝/壳聚糖修饰电极,b为金/普鲁士蓝/金纳米粒子-壳聚糖纳米修饰电极,c为金/普鲁士蓝修饰电极。
具体实施方式
下面通过结合附图和优选的实施方式对本发明的具体实施例作进一步的说明。
在本发明的描述中需要说明的是,A/B,A/B/C,A/B/C/D-E,A/B/C/D-E-F,均表示经过不同修饰过程后得到的修饰电极,其中的“A”、“B”、“C”、“D”、“E”、“F”,表示修饰电极表面不同的物质成分,“/”表示的是修饰步骤,即“A/B/C”表示A/B修饰电极的基础上在将C修饰后得到修饰电极A/B/C,“-”表示结合的意思,即“D-E-F”表示,将D、E、F三种物质混合后得到的混合成分。
在此公开一种无试剂型电化学葡萄糖生物传感器及其制备方法,制备过程如下:将裸金电极1在普鲁士蓝生长液中电沉积100s,并激活干燥后得到普鲁士蓝修饰的金电极2,电极2中的普鲁士蓝将过氧化氢催化还原为氢氧根离子(OH--),可以实现对过氧化氢的检测。将含金纳米粒子和葡萄糖氧化酶的壳聚糖混合液4滴在普鲁士蓝修饰电极2表面干燥成膜制备得到金/普鲁士蓝/葡萄糖氧化-金纳米粒-壳聚糖生物传感器8。
实施例1:
一种无试剂型电化学葡萄糖生物传感器的制备方法,包括如下步骤:
(1)壳聚糖溶液配置:
分别用天平准确称量0.5g和1g壳聚糖溶解在稀盐酸中,并用氢氧化钾溶液调节pH到6.0,制备质量分数为0.5%和1%的CS溶液,CS溶液不使用时放在4℃冰箱中冷藏保存;
(2)金电极表面的预处理:
用1200目的Carbimet型金相砂纸和1.0、0.3mm、0.05mmγ-氧化铝粉依次将裸金电极抛光至镜面,用超纯水冲洗后,分别用氢氧化钾溶液、无水乙醇和超纯水分别超声处理5min,以实现对金电极表面的清洗;
(3)电沉积普鲁士蓝膜:
将清洗干净的裸金电极浸入生长液(生长液为:0.3mM的铁氰化钾和0.3mM的氯化铁溶解在100mL pH=2的0.1M/L的氯化钾溶液)中,然后施加一个0.4V恒电位进行电沉积100s,获得普鲁士蓝膜;
(4)激活普鲁士蓝膜,制备Au/PB电极:
电沉积后,将电极用超纯水彻底清洗后转移到支持电解质溶液(电解质溶液为pH=2的0.1M/L的氯化钾溶液)中,-0.05~0.35V的电位范围内以50mv/s的扫描速率进行CV激活,直到出现稳的的CV曲线,然后将电极用超纯水清洗后在65℃干燥30min,得到Au/PB电极;
(5)制备Au/PB/CS电极:
取6ul质量分数为0.5%的CS溶液滴到Au/PB电极表面,在室温下干燥成膜,制得Au/PB/CS电极;
(6)制备Au/PB/AuNPs-CS电极:
取等量质量分数为0.05mg/ml直径为20nm的金纳米粒子溶液(金纳米粒子为市售金纳米粒子,通过柠檬酸还原法制得)和质量分数为1%的壳聚糖溶液混合并超声处理15min后得到质量分数为0.5%的AuNPs-CS溶液,取6ul的AuNPs-CS溶液滴到Au/PB电极表面,在室温下干燥成膜,制得Au/PB/AuNPs-CS电极;
(7)制备Au/PB/GOx-AuNPs-CS生物传感器:
将葡萄糖氧化酶溶解在AuNPs-CS溶液中并超声处理15min,制得0.5mg/ml的GOx-AuNPs-CS溶液,取6ul GOx-AuNPs-CS溶液滴到Au/PB电极表面,在室温下干燥成膜,制得Au/PB/GOx-AuNPs-CS生物传感器,用于葡萄糖的检测。
测试1:使用辰华760e电化学工作站在+0.1V恒定电压下采用三电极体系(其中分别将步骤4和5制得的电极为工作电极,铂丝为对电极,Ag/AgCl为参比电极)向以恒定速率搅拌的、0.1mol/L的pH=6.5磷酸缓冲液(含0.1mol/L氯化钾)中不断液滴加过氧化氢进行安培测试。
测试结果如图2所示,其中,曲线a为步骤4制备的电极在+0.1V电位下对过氧化氢的安培响应,曲线b为步骤5制备的电极在+0.1V电位下对过氧化氢的安培响应;插图(a)为步骤4制备电极的过氧化氢校准图,(b)为步骤5制备电极的过氧化氢校准图。可以看出步骤5中电极由于壳聚糖膜为反应提供了一个微环境使得电极在与过氧化氢反应时更加温和,同时也提高了普鲁士蓝修饰电极的稳定性,得到对过氧化氢测试更大的线性范围。
测试2:在辰华760e电化学工作站上采用三电极体系(其中分别将步骤4、5和6制得的电极为工作电极,铂丝为对电极,Ag/AgCl为参比电极)在0.1mol/L的pH=6.5磷酸缓冲液(含0.1mol/L氯化钾)中以50mv/s的扫描速率在-0.1~0.5V的电位窗口进行循环伏安法测试.
测试结果如图3所示。其中,a为步骤5制备的电极CV测试结果,b为步骤6制备的电极CV测试结果,c为步骤4制备的电极CV测试结果。通过曲线a与c相比可以清楚地观察到当电极被修饰一层壳聚糖膜后,CV曲线的峰值响应电流显著下降和特征锋电位的负向偏移,这是由于壳聚糖膜的低导电率使得电极表面的电阻转移受到一定阻碍;通过对比曲线a与b可以发现当金纳米粒子被添加到壳聚糖薄膜涂层后的响应电流又得到大幅的增加,证明了金纳米粒子可以有效增强壳聚糖膜的导电性改善其电导率相对较差的缺陷。
测试3:使用辰华760e电化学工作站在+0.1V恒定电压下采用三电极体系(以步骤6制得的电极为工作电极,铂丝为对电极,Ag/AgCl为参比电极)不断向以恒定速率搅拌的、0.1mol/L的pH=6.5磷酸缓冲液(含0.1mol/L氯化钾)溶液滴加过氧化氢进行安培测试。
计时电流响应如图4所示。由于金纳米粒子-壳聚糖纳米复合膜作为保护层有效保护了普鲁士蓝,使得该修饰电极对过氧化氢测试具有较大的线性响应范围,其线性范围为0.01到7.95mM;同时由于金纳米粒子和普鲁士蓝协同电子传导作用,该修饰电极的响应时间短(2s内达到稳态电流的95%)、最低检测限低(0.273μM,信噪比为3),以及较高的检测灵敏度(508.447μAmM-1cm-2)。
测试4:在辰华760e电化学工作站上采用三电极体系(以步骤7制得的生物传感器为工作电极,铂丝为对电极,Ag/AgCl为参比电极)在0.1mol/L的pH=6.5磷酸缓冲液(含0.1mol/L氯化钾)中不含葡萄糖(虚线a)和含2mM葡萄糖(实线b)时以50mv/s的扫描速率在-0.1~0.5V的电位窗口进行循环伏安法测试。
测试结果如图5所示。与不含葡萄糖的CV响应相比,氧化峰值电流降低,还原峰值电流增加,这是因为葡萄糖在溶解氧存在下被葡萄糖氧化酶催化氧化为葡萄糖内酯和副产物过氧化氢,然后生成的过氧化氢会被还原消耗,上述结果表明,我们通过使用普鲁士蓝修饰电极并将葡萄糖氧化酶固定在AuNPs-CS纳米复合膜中构建葡萄糖生物传感器是简单且可行的。
测试5:使用辰华760e电化学工作站在+0.1V恒定电压下采用三电极体系(以步骤7制得的生物传感器为工作电极,铂丝为对电极,Ag/AgCl为参比电极)不断向以恒定速率搅拌的、0.1mol/L的pH=6.5磷酸缓冲液(含0.1mol/L氯化钾)溶液滴加葡萄糖进行安培测试。
计时电流响应如图6所示:通过对图6的数据分析处理得到本发明制备的生物传感器的响应电流与葡萄糖浓度的校准曲线图7。
如图7所示该传感器的电流响应分为两个部分:第一部分的线性响应范围为0.025到2mM、响应时间在小于2s、最低检测限为1.63μM(信噪比为3),检测灵敏度为40.67μAmM- 1cm-2;第二部分的线性响应范围为2~6.5mM、响应时间在小于2s、最低检测限为7.28μM(信噪比为3),检测灵敏度为9.14μAmM-1cm-2。。该传感器对葡萄糖最低检测限低、具有较大的线性范围、灵敏度高、响应时间快、抗干扰能力强等优点。
Claims (6)
1.一种无试剂型电化学葡萄糖生物传感器的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)壳聚糖溶液配置:
分别用天平准确称量0.5g和1g壳聚糖溶解在稀盐酸中,并用氢氧化钾溶液调节pH到6.0,制备质量分数为0.5%和1%的CS溶液;
(2)金电极表面的预处理:
用1200目的Carbimet型金相砂纸和1.0、0.3mm、0.05mmγ-氧化铝粉依次将裸金电极抛光至镜面,用超纯水冲洗后,分别用氢氧化钾溶液、无水乙醇和超纯水分别超声处理5min,以实现对金电极表面的清洗;
(3)电沉积普鲁士蓝膜:
将清洗干净的裸金电极浸入生长液中,然后施加一个恒电位进行电沉积,获得普鲁士蓝膜;
(4)激活普鲁士蓝膜,制备Au/PB电极:
电沉积后,将电极用超纯水彻底清洗后转移到支持电解质溶液中,-0.05~0.35V的电位范围内以50mv/s的扫描速率进行CV激活,直到出现稳的的CV曲线,然后将电极用超纯水清洗后在65℃干燥30min,得到Au/PB电极;
(5)制备Au/PB/CS电极:
取6ul质量分数为0.5%的CS溶液滴到Au/PB电极表面,在室温下干燥成膜,制得Au/PB/CS电极;
(6)制备Au/PB/AuNPs-CS电极:
取等量质量分数为0.05mg/ml直径为20nm的金纳米粒子溶液和质量分数为1%的壳聚糖溶液混合并超声处理15min后得到质量分数为0.5%的AuNPs-CS溶液,取6ul的AuNPs-CS溶液滴到Au/PB电极表面,在室温下干燥成膜,制得Au/PB/AuNPs-CS电极;
(7)制备Au/PB/GOx-AuNPs-CS生物传感器:
将葡萄糖氧化酶溶解在AuNPs-CS溶液中并超声处理15min,制得0.5mg/ml的GOx-AuNPs-CS溶液,取6ul GOx-AuNPs-CS溶液滴到Au/PB电极表面,在室温下干燥成膜,制得Au/PB/GOx-AuNPs-CS生物传感器,用于葡萄糖的检测。
2.根据权利要求1所述一种无试剂型电化学葡萄糖生物传感器的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述的CS溶液不使用时放在4℃冰箱中冷藏保存。
3.根据权利要求1所述一种无试剂型电化学葡萄糖生物传感器的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所述的生长液为:0.3mM的铁氰化钾和0.3mM的氯化铁溶解在100mL pH=2的0.1M/L的氯化钾溶液。
4.根据权利要求1所述一种无试剂型电化学葡萄糖生物传感器的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所述的恒电位为0.4V,电沉积的时间为100s。
5.根据权利要求1所述一种无试剂型电化学葡萄糖生物传感器的制备方法,其特征在于,步骤(4)中所述的电解质溶液为pH=2的0.1M/L的氯化钾溶液。
6.根据权利要求1所述一种无试剂型电化学葡萄糖生物传感器的制备方法,其特征在于,步骤(6)中所述的金纳米粒子为市售金纳米粒子,通过柠檬酸还原法制得。
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