CN114994090A - 一种利用汞放射性同位素测定硫化汞或含硫化汞物质中汞经口绝对生物利用度的方法 - Google Patents
一种利用汞放射性同位素测定硫化汞或含硫化汞物质中汞经口绝对生物利用度的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种利用汞放射性同位素测定硫化汞或含硫化汞物质中汞经口绝对生物利用度的方法,属于生物利用度测定技术领域。本发明通过克服从样品采集、前处理和测定过程中产生的汞污染干扰技术屏障,同时利用203Hg(半衰期为46.612天)标记待测样品以及高敏感γ‑射线计数法,建立了基于体内保留汞量和尿液排泄汞量为基础的口服硫化汞的汞绝对生物利用度(吸收率)测定方法,该方法将对硫化汞和硫化汞物质中汞的暴露风险评估和毒理药理研究奠定基础,适用于药物、环境、食品等领域对经口暴露硫化汞或含硫化汞物质中汞绝对生物利用度的测定。
Description
技术领域
本发明涉及生物利用度测定技术领域,具体涉及一种利用汞放射性同位素测定硫化汞或含硫化汞物质中汞经口绝对生物利用度的方法。
背景技术
汞是自然界中普遍存在的一种重金属元素,其化学形态有单质汞、有机汞(如甲基汞)、可溶性无机汞(如氯化汞)以及难溶性无机汞(如硫化汞),其中难溶性的硫化汞被多种传统医药用来治疗疾病,并且具有上千年的应用历史。如中药中的朱砂及众多朱砂制剂安宫牛黄丸、小儿惊风散、复方芦荟胶囊、朱砂安神丸、柏子养心丸、一捻金等;藏药中的佐太及众多佐太制剂七十味珍珠丸、仁青常觉、仁青芒觉、坐珠达西、当佐、二十味珊瑚丸等;蒙药中的银珠及其复方雄银散、嗄木珠尔、孟根乌苏-18味丸等;印度医药中的Kajjali、Ras-Sindoor及其复方制剂。这些含硫化汞药物目前仍然在传统医学临床上经常使用。然而,现代科学认为汞是一种有毒元素,能够对机体产生多种损害作用。那么这些含硫化汞药物对机体是否产生以及产生何种程度的有效汞暴露风险,仍不清楚。
美国环保总署(EPA)和世界卫生组织(WHO)等机构研究报告给出了单质汞、可溶性无机汞、有机汞的口服生物利用度(吸收率),具体研究现状如下:
(1)金属态单质汞口服生物利用度:EPA研究报告指出液态的金属汞元素被消化道吸收的量非常有限,如Bornmann等人研究发现大鼠口服单质汞其生物利用度小于0.01%(Bornmann,G.,G.Henke,H.Alfes,et al.1970.Concerning the enteral absorption ofmetallic mercury.Arch.Toxicol.26:203-209)。
(2)可溶性无机汞口服生物利用度:EPA和WHO研究报告指出,可溶性无机汞在胃肠道内的生物利用度较高。如Rohla等人采用放射性203Hg标记的可溶无机汞发现人胃肠道对汞的生物利用度为7~15%(Miettinen,J.K.1973.Absorption and eliminationofdietary(Hg++)and methyl mercury in man.In:Mercury,Mercurial,and Mercaptans,M.W.Miller and T.W.Clarkson,Ed.Springfield,IL.p.233-243;Rahola,T.,T.Hattula,A.Korolainen and J.K.Miettinen.1973.Elimination of free and protein-boundionic mercury in man.Ann.Clin.Res.5:214-219)。Kostial等人和Nielsen等人采用放射性203Hg标记方法在大鼠和小鼠上发现,胃肠道对口服可溶性无机汞的真实生物利用度接近于20%,但是实际测定结果略低(Kostial,K.,D.Kello,S.Jugo,et al.1978.Influence ofage on metal metabolism and toxicity.Environ.Health Perspect.25:81-86;Nielsen,J.B.1992.Toxicokinetics of mercuric-chloride and methylmercuricchloride in mice.J.Toxicol.Environ.Health.37(1):85-122)。Piotroski等人采用203Hg标记的氯化汞研究Hg2+在肠道中的吸收,估算在0.2~12.5mg/kg体重时约有3~4%的氯化汞被吸收,在17.5mg/kg体重时约有8.5%的氯化汞被吸收,在20mg/kg体重时约有6.5%的氯化汞被吸收(Piotrowski JK,Szymańska JA,Skrzypińska-Gawrysiak M,Kotelo J,Sporny S.Intestinal absorption of inorganic mercury in rat.PharmacolToxicol.1992Jan;70(1):53-5.doi:10.1111/j.1600-0773.1992.tb00426.x.PMID:1594537)。
(3)甲基汞口服生物利用度:EPA和WHO研究报告指出,甲基汞能够在肠道内被高效吸收。如Ablerg等人和Miettinen等人通过放射性203Hg标记甲基汞发现大约鱼身体95%的甲基汞能够被测试对象胃肠道吸收(Aberg,B.,L.Ekman,R.Falk,U.Greitz,G.Persson andJ.Snihs.1969.Metabolism of methyl mercury 203Hg compounds in man:Excretion anddistribution.Arch.Environ.Health 19:478-484;Miettinen,J.K.1973.Absorption andelimination of dietary(Hg++)and methyl mercury in man.In:Mercury,Mercurial,and Mercaptans,M.W.Miller and T.W.Clarkson,Ed.Springfield,IL.p.233-243)。另外,Aberg等人利用放射性203Hg标记的硝酸甲基汞研究其被机体吸收情况,结果发现在水溶液中有超过95%硝酸甲基汞被机体吸收(B.,L.Ekman,R.Falk,U.Greitz,G.Persson andJ.Snihs.1969.Metabolism of methyl mercury(203Hg)compounds in man:Excretionand distribution.Arch.Environ.Health 19:478-484)。
尽管EPA和WHO关于汞的研究报告和研究文献给出了单质汞、可溶性无机汞和有机汞的口服生物利用度度,但是没有给出硫化汞的生物利用度。硫化汞是典型的极难溶性共价硫化物,黑色β-HgS的HgS溶度积(Ksp)为1.6×10-52,红色α-HgS的HgS溶度积(Ksp)为4×10-53(Lange’s Handbook of Chemistry(15th ed))。EPA的研究报告(Hassett-Sipple,B,Swartout,J,and Schoeny,R.Mercury study report to Congress.Volume 5.Healtheffects of mercury and mercury compounds.United States:N.p.,1997.Web.doi:10.2172/575119.;P U.S.EPA.Provisional Peer-Reviewed Toxicity Values forMercuric Sulfide.U.S.Environmental Protection Agency,Washington,DC,EPA/690/R-02/011F,2002.)和WHO指南(Guidance foridentifying populations at risk frommercury exposure,WHO,2008)指出硫化汞是不溶性化合物,其中的汞很难被胃肠道吸收。Revis等采用放射性203Hg标记的硫化汞给予5只雄性小鼠单次灌胃,连续收集10天粪便,然后处死小鼠取出肠道;接着采用反向计算的方法计算硫化汞吸收率,具体为首先计算出灌胃摄入硫化汞中总汞量与粪便和肠道中汞总量的差值,然后用这个差值除以灌胃硫化汞中总汞量,得到的值作为硫化汞口服吸收率(硫化汞口服吸收率=(灌胃摄入硫化汞中总汞量-粪便和肠道中总汞量)/灌胃摄入硫化汞中总汞量),经计算具体为0.4%(Revis,N.W.,Osborne,T.R.,Holdsworth,G.et al.Mercury in soil:A method for assessingacceptable limits.Arch.Environ.Contam.Toxicol.19,221-226(1990))。然而,EPA的报告(EPA/690/R-02/011F)指出,采用该反向计算方法获得的硫化汞口服吸收率不可靠,因为误差非常大,不具有统计学意义。具体的,灌胃摄入硫化汞中汞的总放射性强度为336,580±39,304dpm(mean±SD),粪便和肠道中汞的总放射性强度为335,276±46,498dpm(mean±SD),这两组数据之差得出的硫化汞口服吸收率为0.4%;然而这两组数据标准差(SD)均大于平均值的10%,故这两组数据仅有的0.4%差异不具有统计学意义。另外,Jie Liu等人在综述中根据文献报道推测朱砂(主要成分为α-HgS)的口服吸生物利用度(吸收率)<0.2%(Liu J,Shi JZ,Yu LM,Goyer RA,Waalkes MP.Mercury in traditional medicines:iscinnabar toxicologically similar to common mercurials?Exp Biol Med(Maywood).2008Jul;233(7):810-7.doi:10.3181/0712-MR-336.Epub 2008Apr 29.PMID:18445765;PMCID:PMC2755212),这是根据氯化汞组和朱砂组小鼠器官中汞浓度倍差间接推算出的;若根据红色硫化汞的溶度积(4×10-53)这个生物利用度(吸收率)值可能被严重高估。
综上可知,目前尚不清楚经口暴露硫化汞以及含硫化汞药物中汞的生物利用度,且缺乏可靠的、适用于硫化汞的汞胃肠生物利用度的测定方法。生物利用度是反映所给药物进入人体循环的药量比例,它描述口服药物由胃肠道吸收及经过肝脏而到达体循环血液中的药量占口服总量的百分比。生物利用度分为绝对生物利用度与相对生物利用度。绝对生物利用度是药物吸收进入体循环的量与给药量的比值,实际工作中以血管外给药的药-时曲线下面积(AUC)与静脉注射的药-时曲线下面积的比值作为绝对生物利用度,通常认为静脉制剂绝对生物利用度为100%;而相对生物利用度则是指同一种药物不同制剂之间比较吸收程度与速度而得到的生物利用度值。其中,绝对生物利用度是评估含硫化汞药物、环境硫化汞等暴露风险不可替代的重要指标。然而,由于硫化汞是典型性极难溶性化合物,通过口服途径与静脉注射的药-时曲线下面积(AUC)比值方法不适用于测定其口服绝对生物利用度。因此,如何准确测定硫化汞以及含硫化汞物质中汞的口服绝对生物利用度,是目前亟需解决的技术
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用汞放射性同位素测定硫化汞或含硫化汞物质中汞经口绝对生物利用度的方法,采用本发明提供的方法能够实现硫化汞或含硫化汞物质中汞经口绝对生物利用度的准确测定,为硫化汞和含硫化汞传统药物中汞的暴露风险评估和毒理药理研究奠定了基础。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
本发明提供了一种利用放射性同位素203Hg测定硫化汞或含硫化汞物质中汞经口绝对生物利用度的方法,包括以下步骤:
将糊化淀粉液与待测样品混合,得到药物淀粉混悬液,所述待测样品为203Hg标记的硫化汞或含硫化汞物质;
通过注射器将所述药物淀粉混悬液灌胃给药于实验动物,作为实验组动物;将所述糊化淀粉液灌胃给药于实验动物,作为空白对照组动物;其中,在进行灌胃给药前,测定灌胃给药所用注射器中药物淀粉混悬液或糊化淀粉液中总203Hg的电离辐射计数;在进行灌胃给药后,测定所述注射器中残留的药物淀粉混悬液或糊化淀粉液中203Hg的电离辐射计数;
分别收集灌胃给药后所述实验组动物和空白对照组动物的尿液,然后去除所得实验动物的消化道,依次经第一清洗、混酸溶液浸泡处理以及第二清洗,收集所得实验动物剩余身体;其中,在灌胃给药前将所述实验动物刺激排尿并将所得尿液丢弃,在灌胃给药后与去除消化道前间隔预定时间连续收集尿液;所述混酸溶液为硝酸与盐酸的混合溶液;
将收集得到的尿液以及实验动物剩余身体分别进行测定,分别得到尿液中203Hg电离辐射计数以及实验动物剩余身体中保留203Hg的电离辐射计数;
根据式I所示公式计算得到待测样品中汞的经口绝对生物利用度:
汞的经口绝对生物利用度(%)=(Na0-Nb0)/(Nc0-Nd0)×100% 式I;
其中,Na0—实验组动物尿液和剩余身体中保留总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nb0—空白对照组动物尿液和剩余身体中保留总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nc0—实验组动物灌胃给药摄入的203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nd0—空白对照组动物灌胃给药摄入的203Hg校正后的零时电离辐射计数;
所述Na0、Nb0、Nc0和Nd0分别根据式II、式III、式IV和式V所示公式计算得到:
Na0=Na0 body+Na0 urine 式II;
Nb0=Nb0 body+Nb0 urine 式III;
Nc0=Nc0 before-Nc0 after 式IV;
Nd0=Nd0 before-Nd0 after 式V;
其中,Na0 body—实验组动物剩余身体中保留203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Na0 urine—实验组动物尿液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nb0 body—空白对照组动物剩余身体中保留203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nb0 urine—空白对照组动物尿液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nc0 before—对实验组动物进行灌胃给药前所用注射器中药物淀粉混悬液中总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nc0 after—对实验组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的药物淀粉混悬液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nd0 before—对空白对照组动物进行灌胃给药前所用注射器中糊化淀粉液中总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nd0 after—对空白对照组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的糊化淀粉液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
所述Na0 body、Na0 urine、Nb0 body、Nb0 urine、Nc0 before、Nc0 after、Nd0 before和Nd0 after是根据203Hg衰变校正计算公式将t时测定的203Hg电离辐射计数Nat body、Nat urine、Nbt body、Nbt urine、Nct before、Nct after、Ndt before和Ndt after分别进行校正后得到的零时电离辐射计数;
所述Nat body为t时测定的实验组动物剩余身体中保留203Hg的电离辐射计数,Nat urine为t时测定的实验组动物尿液中203Hg的电离辐射计数;
所述Nbt body为t时测定的空白对照组动物剩余身体中保留203Hg的电离辐射计数,Nbt urine为t时测定的空白对照组动物尿液中203Hg的电离辐射计数;
所述Nct before为t时测定的对实验组动物进行灌胃给药前所用注射器中药物淀粉混悬液中总203Hg的电离辐射计数,Nct after为t时测定的对实验组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的药物淀粉混悬液中203Hg的电离辐射计数;
所述Ndt before为t时测定的对空白对照组动物进行灌胃给药前所用注射器中糊化淀粉液中总203Hg的电离辐射计数,Ndt after为t时测定的对空白对照组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的糊化淀粉液中203Hg的电离辐射计数;
所述203Hg衰变校正计算公式如式VI所示:
Nt=N0e-λt 式VI;
其中,Nt—t时测定的203Hg电离辐射计数;
N0—203Hg校正后的零时电离辐射计数;
λ—衰减常数,且所述λ=Ln(2)/t1/2,t1/2为203Hg半衰期;
t—以第1只实验动物灌胃给药前的某一时间点或第1只实验动物灌胃给药时的时间点作为零时,且所述t≥0s。
优选地,所述203Hg标记的硫化汞的制备方法包括以下步骤:
采用中子射线对HgO进行辐照,然后进行放置,使所得197HgO衰变减弱,得到203HgO;
将所述203HgO溶解于无机酸中,将所得203Hg2+溶液与沉淀剂溶液混合进行反应,将所得沉淀依次进行洗涤和干燥,得到203Hg标记的硫化汞;所述沉淀剂溶液中的沉淀剂为可溶性硫化物或硫代硫酸盐。
优选地,所述辐照的时间≥1周;所述放置的时间≥10天。
优选地,所述沉淀剂与203HgO的摩尔比为(1~2):1。
优选地,所述203Hg标记的硫化汞的放射比度为1~20mCi/mg。
优选地,所述糊化淀粉液中糊化淀粉的浓度为1~10wt%;所述药物淀粉混悬液的电离辐射强度为0.01~100μCi/mL。
优选地,所述灌胃给药后相邻两次收集尿液的间隔时间为20min~2.5h;首次收集尿液的时间为灌胃给药后20min~2.5h。
优选地,所述混酸溶液中硝酸的浓度为5.9~59wt%,盐酸的浓度为3.3~33wt%。
优选地,所述浸泡处理的时间为1s~10min。
优选地,测定所述203Hg的电离辐射计数采用的设备为连接有大接收面碘化钠晶体闪烁探测器的γ-射线计数器、正电子发射断层扫描仪或单光子发射计算机断层扫描仪。
本发明提供了一种利用放射性同位素203Hg测定硫化汞或含硫化汞物质中汞经口绝对生物利用度的方法。本发明通过克服从样品采集、前处理和检测过程中产生的汞污染干扰技术屏障,同时利用203Hg(半衰期46.612天)标记待测样品以及高敏感γ-射线计数法,建立了基于体内保留汞量和尿液排泄汞量为基础的口服硫化汞的汞绝对生物利用度(吸收率)测定方法,该方法将对硫化汞和硫化汞物质中汞的暴露风险评估和毒理药理研究奠定基础,适用于药物、环境、食品等领域对经口暴露硫化汞或含硫化汞物质中汞绝对生物利用度的测定。与现有技术相比,本发明提供的方法至少具有以下优势:
本发明采用兼具氧化和氯离子配位能力的硝酸和盐酸配制得到混酸溶液,进而利用所述混酸溶液清洗残留在实验动物体表的排泄物来源的硫化物或其他形态汞,能够解决其他常规清洗方法难以将实验动物体表残留汞清除干净的技术难题,从而保障了对难溶性硫化汞中汞的经口绝对生物利用度的准确测定。
本发明利用电离辐射计数计算硫化汞或含硫化汞物质中汞的经口绝对生物利用度,优势是可靠、灵敏度高,测试值不受样品背景中稳定性汞同位素的干扰。
进一步地,本发明采用迂回方式制备203HgS,可有效避免常规直接制备方法引入的203Hg以外的放射性核素197Hg、放射性nS、放射性nO等对汞经口绝对生物利用度测定的干扰。
进一步地,本发明采用连接有大接收面碘化钠晶体闪烁探测器的γ-射线计数器、正电子发射断层扫描仪或单光子发射计算机断层扫描仪,可以对整体目标样品(灌胃给药前含药物淀粉混悬液或糊化淀粉液的注射器、灌胃给药后含残留药物淀粉混悬液或糊化淀粉液的注射器、实验动物剩余身体和尿液)中203Hg的电离辐射计数(cpm)直接测定,不需要像电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法、电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP-OES)法、原子荧光光谱仪(AFS)法、原子吸收光谱(ABS)法、比色法、基于热裂解原理的直接测汞仪法等对样品进行消解、稀释或匀浆(匀质)等复杂前处理,有效降低了对测试准确度的干扰。
具体实施方式
本发明提供了一种利用放射性同位素203Hg测定硫化汞或含硫化汞物质中汞经口绝对生物利用度的方法,包括以下步骤:
将糊化淀粉液与待测样品混合,得到药物淀粉混悬液,所述待测样品为203Hg标记的硫化汞或含硫化汞物质;
通过注射器将所述药物淀粉混悬液灌胃给药于实验动物,作为实验组动物;将所述糊化淀粉液灌胃给药于实验动物,作为空白对照组动物;其中,在进行灌胃给药前,测定灌胃给药所用注射器中药物淀粉混悬液或糊化淀粉液中总203Hg的电离辐射计数;在进行灌胃给药后,测定所述注射器中残留的药物淀粉混悬液或糊化淀粉液中203Hg的电离辐射计数;
分别收集灌胃给药后所述实验组动物和空白对照组动物的尿液,然后去除所得实验动物的消化道,依次经第一清洗、混酸溶液浸泡处理以及第二清洗,收集所得实验动物剩余身体;其中,在灌胃给药前将所述实验动物刺激排尿并将所得尿液丢弃,在灌胃给药后与去除消化道前间隔预定时间连续收集尿液;所述混酸溶液为硝酸与盐酸的混合溶液;
将收集得到的尿液以及实验动物剩余身体分别进行测定,分别得到尿液中203Hg电离辐射计数以及实验动物剩余身体中保留203Hg的电离辐射计数;
根据式I所示公式计算得到待测样品中汞的经口绝对生物利用度:
汞的经口绝对生物利用度(%)=(Na0-Nb0)/(Nc0-Nd0)×100% 式I;
其中,Na0—实验组动物尿液和剩余身体中保留总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nb0—空白对照组动物尿液和剩余身体中保留总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nc0—实验组动物灌胃给药摄入的203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nd0—空白对照组动物灌胃给药摄入的203Hg校正后的零时电离辐射计数;
所述Na0、Nb0、Nc0和Nd0分别根据式II、式III、式IV和式V所示公式计算得到:
Na0=Na0 body+Na0 urine 式II;
Nb0=Nb0 body+Nb0 urine 式III;
Nc0=Nc0 before-Nc0 after 式IV;
Nd0=Nd0 before-Nd0 after 式V;
其中,Na0 body—实验组动物剩余身体中保留203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Na0 urine—实验组动物尿液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nb0 body—空白对照组动物剩余身体中保留203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nb0 urine—空白对照组动物尿液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nc0 before—对实验组动物进行灌胃给药前所用注射器中药物淀粉混悬液中总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nc0 after—对实验组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的药物淀粉混悬液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nd0 before—对空白对照组动物进行灌胃给药前所用注射器中糊化淀粉液中总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nd0 after—对空白对照组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的糊化淀粉液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
所述Na0 body、Na0 urine、Nb0 body、Nb0 urine、Nc0 before、Nc0 after、Nd0 before和Nd0 after是根据203Hg衰变校正计算公式将t时测定的203Hg电离辐射计数Nat body、Nat urine、Nbt body、Nbt urine、Nct before、Nct after、Ndt before和Ndt after分别进行校正后得到的零时电离辐射计数;
所述Nat body为t时测定的实验组动物剩余身体中保留203Hg的电离辐射计数,Nat urine为t时测定的实验组动物尿液中203Hg的电离辐射计数;
所述Nbt body为t时测定的空白对照组动物剩余身体中保留203Hg的电离辐射计数,Nbt urine为t时测定的空白对照组动物尿液中203Hg的电离辐射计数;
所述Nct before为t时测定的对实验组动物进行灌胃给药前所用注射器中药物淀粉混悬液中总203Hg的电离辐射计数,Nct after为t时测定的对实验组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的药物淀粉混悬液中203Hg的电离辐射计数;
所述Ndt before为t时测定的对空白对照组动物进行灌胃给药前所用注射器中糊化淀粉液中总203Hg的电离辐射计数,Ndt after为t时测定的对空白对照组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的糊化淀粉液中203Hg的电离辐射计数;
所述203Hg衰变校正计算公式如式VI所示:
Nt=N0e-λt 式VI;
其中,Nt—t时测定的203Hg电离辐射计数;
N0—203Hg校正后的零时电离辐射计数;
λ—衰减常数,且所述λ=Ln(2)/t1/2,t1/2为203Hg半衰期;
t—以第1只实验动物灌胃给药前的某一时间点或第1只实验动物灌胃给药时的时间点作为零时,并以所述零时为起点到测定203Hg电离辐射计数时所经历的时间,且所述t≥0s。
在本发明中,所述经口绝对生物利用度(或吸收率)是指经口服用的某种物质通过胃肠道吸收进入机体循环的总量与口服摄入该物质的总量之比。
本发明将糊化淀粉液与待测样品混合,得到药物淀粉混悬液,所述待测样品为203Hg标记的硫化汞或含硫化汞物质。本发明首先对203Hg标记的硫化汞(即203HgS)的制备方法进行说明。在本发明中,在本发明中,所述203HgS的制备方法,优选包括以下步骤:
采用中子射线对HgO进行辐照,然后进行放置,使所得197HgO衰变减弱,得到203HgO;
将所述203HgO溶解于无机酸中,将所得203Hg2+溶液与沉淀剂溶液混合进行反应,将所得沉淀依次进行洗涤和干燥,得到203HgS;所述沉淀剂溶液中的沉淀剂为可溶性硫化物或硫代硫酸钠。
本发明优选采用中子射线对HgO进行辐照,然后进行放置,使所得197HgO衰变减弱,得到203HgO。在本发明中,没有特殊说明的话,所述HgO具体是指非放射性HgO。在本发明中,所述辐照的时间优选≥1周,更优选为2~4周;所述放置的时间优选≥10天,更优选为10天。在本发明的实施例中,具体是将HgO放置在双层石英管内,乙炔炬密封,在中子射线下进行辐照,然后将其在铅盒保护状态下进行放置。在本发明中,所述辐照过程中产生197HgO,197Hg的半衰期为64.14h,在静置过程中197HgO衰变减弱,得到203HgO,203Hg的半衰期为46.612天。
得到203HgO后,本发明将所述203HgO溶解于无机酸中,将所得203Hg2+溶液与沉淀剂溶液混合进行反应,将所得沉淀依次进行洗涤和干燥,得到203HgS。在本发明中,所述无机酸优选为盐酸或硝酸,所述无机酸的浓度优选为1~30wt%,更优选为3~10wt%;具体的,可以采用盐酸溶解203HgO,得到203HgCl2溶液;也可以采用硝酸溶解203HgO,得到203Hg(NO3)2溶液。在本发明中,所述沉淀剂溶液的浓度优选为1~100mg/mL,更优选为10~50mg/mL,进一步优选为15~20mg/mL;所述沉淀剂溶液中的沉淀剂为可溶性硫化物或硫代硫酸盐,所述可溶性硫化物优选为硫化钠或硫化氨,所述硫代硫酸盐优选为硫代硫酸钠;所述沉淀剂与203HgO的摩尔比优选为(1~2):1,更优选为(1.1~1.3):1。在本发明中,所述反应的温度优选为70~180℃,更优选为100~120℃;时间优选为30min~24h,更优选为2~4h。在本发明所述反应过程中,在沉淀剂作用下203Hg2+形成203HgS沉淀,本发明优选通过离心或过滤收集203HgS沉淀。在本发明中,所述洗涤优选包括依次进行的盐酸洗和纯水洗。在本发明中,所述盐酸洗优选是将203HgS沉淀于盐酸中进行浸泡洗涤,所述盐酸洗所用盐酸的浓度优选为1~10wt%,更优选为3~5wt%;所述盐酸洗的次数优选为1~3次,每次进行盐酸洗时的浸泡时间优选为1~5min,更优选为2~3min。在本发明中,所述纯水洗优选是将盐酸洗后的203HgS沉淀于纯水中进行浸泡洗涤,所述纯水洗的次数优选为3~5次,每次进行纯水洗时的浸泡时间优选为1~5min,更优选为2~3min。在本发明中,每次洗涤后优选通过离心或过滤收集203HgS沉淀。在本发明中,所述干燥优选为冷冻干燥或烘箱干燥;本发明对所述干燥的具体操作条件没有特殊限定,保证充分干燥即可。在本发明中,经干燥后得到粉末状203HgS。
在本发明中,所述203HgS的放射比度优选为1~20mCi/mg,更优选为5~15mCi/mg,进一步优选为7.5~10mCi/mg。本发明具体是采用γ-射线计数器测定203HgS的放射比度。本发明采用迂回方式制备203HgS,可有效避免常规直接制备方法引入的203Hg以外的放射性核素197Hg、放射性nS、放射性nO等对汞经口绝对生物利用度测定的干扰。
得到203HgS后,本发明将糊化淀粉液与待测样品混合,得到药物淀粉混悬液,所述待测样品为203HgS或含203HgS物质。在本发明中,所述糊化淀粉液中糊化淀粉的浓度优选为1~10wt%,更优选为1~5wt%。在本发明中,所述糊化淀粉液的制备方法,优选包括以下步骤:将淀粉与水混合,得到淀粉液;将所述淀粉液加热至沸腾,得到糊化淀粉液。在本发明中,所述淀粉优选包括马铃薯淀粉或土豆淀粉。本发明对所述含203HgS物质没有特殊限定,采用本领域技术人员熟知的含203HgS物质即可;在本发明的实施例中,具体是以203HgS、安置精华散-203HgS混合物以及二十五味珍珠丸-203HgS混合物为例进行说明;其中,所述安置精华散-203HgS混合物是将安置精华散与203HgS按质量比20.36:1的比例混合得到,以此来模拟硫化汞含量为4.91%的藏药当佐制剂;所述二十五味珍珠丸-203HgS混合物是将二十五味珍珠丸粉碎,然后将所得二十五味珍珠丸粉末与203HgS按质量比63.6:1的比例混合得到,以此来模拟配比为100份重量普通复方制剂:3份重量佐太(所述佐太含54%HgS)的珍宝类藏药复方制剂。在本发明中,所述药物淀粉混悬液的电离辐射强度优选为0.01~100μCi/mL,更优选为0.1~50μCi/mL,进一步优选为2.5~5μCi/mL。在本发明中,因HgS是典型极度难溶化合物,并且密度大易沉淀,本发明基于糊化淀粉液制备药物淀粉混悬液,有利于使待测样品均匀分散,避免灌胃给药时待测样品浓度不均一的问题;而且所述糊化淀粉液不会络合解离出来的痕量汞离子,因此不会影响实验结果,而常用于混悬的羧甲基纤维素钠溶液能够络合汞离子,会影响实验结果。
得到糊化淀粉液与药物淀粉混悬液后,本发明通过注射器将所述药物淀粉混悬液灌胃给药于实验动物,作为实验组动物;将所述糊化淀粉液灌胃给药于实验动物,作为空白对照组动物;其中,在进行灌胃给药前,测定灌胃给药所用注射器中药物淀粉混悬液或糊化淀粉液中总203Hg的电离辐射计数;在进行灌胃给药后,测定所述注射器中残留的药物淀粉混悬液或糊化淀粉液中203Hg的电离辐射计数。在本发明中,所述实验动物优选为小鼠;在本发明的实施例中,具体采用8~12周龄健康CD-1小鼠或4周龄健康Wistar大鼠。在本发明中,设置实验动物组别时,每组优选包括6~15只实验动物。在本发明中,所述实验组动物所需药物淀粉混悬液的体积(灌胃体积)与实验动物的体重比优选为(0.1~0.3)mL:10g;本发明对所述灌胃给药的操作方式没有特殊限定,采用本领域技术人员熟知的方式即可;在本发明的实施例中,具体是采用1mL规格注射器将所述药物淀粉混悬液精确灌胃给药于实验动物。在本发明中,所述空白对照组动物所需糊化淀粉液的体积以及灌胃给药的操作方式优选与实验组动物相同,在此不再赘述。在本发明中,灌胃给药结束后,优选记录下每只实验动物灌胃体积和灌胃时间。需要说明的是,在进行所述灌胃给药前,本发明优选将所述药物淀粉混悬液充分震荡摇匀,避免灌胃给药时待测样品浓度不均一的问题。
本发明优选将灌胃给药后的实验动物放入对应编号的笼具中进行饲养;所述饲养过程中优选自由饮水和进食。本发明优选按照12h光照以及12h黑暗的方式饲养实验组动物以及空白对照组动物;所述饲养的温度优选为18~28℃,更优选为22℃;湿度优选为30~70%,更优选为40%。
本发明在进行灌胃给药前,测定灌胃给药所用注射器中药物淀粉混悬液或糊化淀粉液中总203Hg的电离辐射计数;在进行灌胃给药后,测定所述注射器中残留的药物淀粉混悬液或糊化淀粉液中203Hg的电离辐射计数。在本发明中,测定所述203Hg的电离辐射计数采用的设备优选为连接有大接收面碘化钠晶体闪烁探测器的γ-射线计数器(如PackardAuto-gamma Model 5530等)、正电子发射断层扫描仪(PET)或单光子发射计算机断层扫描仪(SPECT)。本发明优选采用上述设备可以对整体目标样品(灌胃给药前含药物淀粉混悬液或糊化淀粉液的注射器、灌胃给药后含残留药物淀粉混悬液或糊化淀粉液的注射器)中203Hg的电离辐射计数直接测定,不需要像电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法、电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP-OES)法、原子荧光光谱仪(AFS)法、原子吸收光谱(ABS)法、比色法、基于热裂解原理的直接测汞仪法等对样品进行消解、稀释或匀浆(匀质)等复杂前处理,有效降低了对测试准确度的干扰。
灌胃给药后,本发明分别收集灌胃给药后所述实验组动物和空白对照组动物的尿液,然后去除所得实验动物的消化道,依次经第一清洗、混酸溶液浸泡处理以及第二清洗,收集所得实验动物剩余身体。本发明在灌胃给药前将所述实验动物刺激排尿并将所得尿液丢弃,在灌胃给药后与去除消化道前间隔预定时间连续收集尿液。本发明采用该方式能收集几乎所有尿液,可最大限度降低尿汞损失。本发明对所述刺激排尿的方式没有特殊限定,采用本领域技术人员熟知的方式即可,具体如通过压迫实验动物膀胱刺激排尿;本发明每次收集尿液时优选均采用压迫实验动物膀胱的方式刺激排尿。在本发明中,所述灌胃给药后相邻两次收集尿液的间隔时间优选为20min~2.5h,更优选为1~1.5h;首次收集尿液的时间优选为灌胃给药后20min~2.5h,更优选为1~1.5h。本发明优选将尿液收集于一次性洁净容器内,-20~4℃冻存或冷藏,备用。
在本发明中,所述去除实验动物消化道的时间优选为灌胃给药后24~240h,更优选为24~48h。本发明优选通过将实验动物麻醉或安乐死,以实现消化道去除;所述麻醉所用麻醉剂优选包括水合氯醛、戊巴比妥钠或乌拉坦,所述安乐死优选采用试剂优选为二氧化碳。将所述实验动物麻醉或安乐死后,本发明优选等待30~60min使实验动物体内血液凝结,然后剖开腹腔和胸腔,移除从食道到肛门的消化道,再将所得实验动物称重,置于干净的自封袋内,-20~4℃冻存或冷藏,备用。本发明采用该方式的优势为:一方面是无需采集血,将实验动物血液凝结在体内进行整体测试,降低了样品数量;另一方面是可以消除消化道内容物对203HgS测定产生的干扰。
去除消化道后,本发明将所得实验动物依次进行第一清洗、混酸溶液浸泡处理以及第二清洗,收集所得实验动物剩余身体;所述混酸溶液为硝酸与盐酸的混合溶液。在本发明中,所述混酸溶液中硝酸的浓度优选为5.9~59wt%,更优选为20~30wt%;盐酸的浓度优选为3.3~33wt%,更优选为6~10wt%。本发明采用兼具氧化和氯离子配位能力的硝酸和盐酸配制得到混酸溶液,进而利用所述混酸溶液清洗残留在实验动物体表的排泄物来源的硫化物或其他形态汞,能够解决其他常规清洗方法难以将实验动物体表残留汞清除干净的技术难题,从而保障了对难溶性硫化汞中汞的经口绝对生物利用度的准确测定。在本发明中,所述第一清洗优选为采用去污剂对去除消化道的实验动物进行清洗,然后采用流动水冲洗3~7次;所述去污剂优选包括洗洁精、洗衣液或肥皂。在本发明中,采用混合溶液进行浸泡处理的时间优选为1s~10min,更优选为0.5~2min。在本发明中,所述第二清洗优选为采用流动水冲洗3~7次。
收集得到尿液以及实验动物剩余身体后,本发明将所述尿液以及实验动物剩余身体分别进行测定,分别得到尿液中总203Hg电离辐射计数以及实验动物剩余身体中总203Hg电离辐射计数。在本发明中,将所述尿液以及实验动物剩余身体进行测定采用的设备优选与上述测定所述203Hg的电离辐射计数采用的设备一致,在此不再赘述。具体的,本发明优选将收集尿液的培养皿进行整体测定,得到被机体吸收的、通过尿液途径排泄的总203Hg电离辐射计数;将实验动物剩余身体进行整体测定,得到实验动物剩余身体内保留的总203Hg电离辐射计数。
本发明根据式I所示公式计算得到待测样品中汞的经口绝对生物利用度:
汞的经口绝对生物利用度(%)=(Na0-Nb0)/(Nc0-Nd0)×100% 式I;
其中,Na0—实验组动物尿液和剩余身体中保留总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nb0—空白对照组动物尿液和剩余身体中保留总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nc0—实验组动物灌胃给药摄入的203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nd0—空白对照组动物灌胃给药摄入的203Hg校正后的零时电离辐射计数;
所述Na0、Nb0、Nc0和Nd0分别根据式II、式III、式IV和式V所示公式计算得到:
Na0=Na0 body+Na0 urine 式II;
Nb0=Nb0 body+Nb0 urine 式III;
Nc0=Nc0 before-Nc0 after 式IV;
Nd0=Nd0 before-Nd0 after 式V;
其中,Na0 body—实验组动物剩余身体中保留203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Na0 urine—实验组动物尿液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nb0 body—空白对照组动物剩余身体中保留203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nb0 urine—空白对照组动物尿液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nc0 before—对实验组动物进行灌胃给药前所用注射器中药物淀粉混悬液中总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nc0 after—对实验组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的药物淀粉混悬液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nd0 before—对空白对照组动物进行灌胃给药前所用注射器中糊化淀粉液中总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nd0 after—对空白对照组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的糊化淀粉液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
所述Na0 body、Na0 urine、Nb0 body、Nb0 urine、Nc0 before、Nc0 after、Nd0 before和Nd0 after是根据203Hg衰变校正计算公式将t时测定的203Hg电离辐射计数Nat body、Nat urine、Nbt body、Nbt urine、Nct before、Nct after、Ndt before和Ndt after分别进行校正后得到的零时电离辐射计数;
所述Nat body为t时测定的实验组动物剩余身体中保留203Hg的电离辐射计数,Nat urine为t时测定的实验组动物尿液中203Hg的电离辐射计数;
所述Nbt body为t时测定的空白对照组动物剩余身体中保留203Hg的电离辐射计数,Nbt urine为t时测定的空白对照组动物尿液中203Hg的电离辐射计数;
所述Nct before为t时测定的对实验组动物进行灌胃给药前所用注射器中药物淀粉混悬液中总203Hg的电离辐射计数,Nct after为t时测定的对实验组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的药物淀粉混悬液中203Hg的电离辐射计数;
所述Ndt before为t时测定的对空白对照组动物进行灌胃给药前所用注射器中糊化淀粉液中总203Hg的电离辐射计数,Ndt after为t时测定的对空白对照组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的糊化淀粉液中203Hg的电离辐射计数;
所述203Hg衰变校正计算公式如式VI所示:
Nt=N0e-λt 式VI;
其中,Nt—t时测定的203Hg电离辐射计数;
N0—203Hg校正后的零时电离辐射计数;
λ—衰减常数,且所述λ=Ln(2)/t1/2,t1/2为203Hg半衰期;
t—以第1只实验动物灌胃给药前的某一时间点或第1只实验动物灌胃给药时的时间点作为零时,并以所述零时为起点到测定203Hg电离辐射计数时所经历的时间,且所述t≥0s。
在本发明中,所述t具体以制成203HgS后到第1只实验动物灌胃给药前这期间的某一时间点作为零时,或者以第1只实验动物灌胃给药时的时间点作为零时,并以所述零时为起点到测定目标样品中203Hg电离辐射计数时所经历的时间,所述目标样品具体包括灌胃给药前含药物淀粉混悬液或糊化淀粉液的注射器、灌胃给药后含残留药物淀粉混悬液或糊化淀粉液的注射器、实验动物剩余身体和尿液。本发明具体是针对每个目标样品测定时间确定各自相应的时间t,然后根据t时测定的203Hg电离辐射计数(Nt),利用式VI所示公式进行校正,得到203Hg校正后的零时电离辐射计数(N0),进而根据式II、式III、式IV和式V所示公式计算得到Na0、Nb0、Nc0和Nd0,最终根据式I所示公式计算得到待测样品中汞的经口绝对生物利用度。本发明利用电离辐射计数计算硫化汞或含硫化汞物质中汞的经口绝对生物利用度,具有数据可靠、灵敏度高,测试值不受样品背景中稳定性汞同位素干扰的优势。
下面将结合本发明中的实施例,对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
(1)采用迂回方式制备无其他放射性核素干扰的203HgS
将0.2g HgO(0.9238mmol)放置在双层石英管内,乙炔炬密封,在中子射线下辐照4周,然后将其在铅盒保护状态下放置10天使新形成的197HgO(197Hg半衰期为64.14h)衰变减弱,得到203HgO(203Hg半衰期为46.612天),之后加入10mL浓度为3wt%的盐酸(苏州晶瑞化学股份有限公司,UP纯)溶解203HgO,得到203HgCl2溶液(HgCl2浓度为25.0860mg/mL,即0.09238mmol/mL),然后加入10mL硫代硫酸钠(天津恒兴化学试剂厂,AR)水溶液(硫代硫酸钠浓度为17.52744mg/mL,即0.1109mmol/mL),将所得混合液置于反应釜中,在120℃条件下反应4h,生成203HgS沉淀(硫代硫酸钠与HgCl2摩尔比为1.2:1);反应结束后过滤收集203HgS沉淀,采用浓度为5wt%的稀盐酸浸泡洗涤3次,每次浸泡时间为3min,然后用纯水浸泡洗涤5次,每次浸泡时间为3min,过滤收集203HgS沉淀,真空冷冻干燥(FD-1D-50,北京博医康实验仪器有限公司),得到203HgS粉末,采用γ-射线计数器测定203Hg的放射比度为7.5mCi/mg。
(2)配制灌胃给药用的203HgS-淀粉混悬液
将土豆淀粉(青岛万家香食品有限公司,食品级)放入烧杯中,然后按照土豆淀粉与纯水的质量比为2:100的比例向烧杯中加入纯水,搅拌加热至沸腾得到糊化淀粉液;待冷却后,将所述糊化淀粉液与203HgS粉末混合,得到电离辐射强度浓度为5μCi/mL的203HgS-淀粉混悬液,室温保存。
(3)设置小鼠组别与处理
将6~8周龄健康CD-1雌性小鼠分为实验组和空白对照组,每组10只小鼠。实验组小鼠:灌胃体积与小鼠体重比为0.1mL:10g,采用1mL规格注射器精确灌胃给予203HgS-淀粉混悬液;空白对照组小鼠:灌胃体积与小鼠体重比为0.1mL:10g,采用1mL规格注射器精确灌胃给予糊化淀粉液,记录下每只小鼠灌胃体积和灌胃时间。注意在给每只动物灌胃给药前充分震荡摇203HgS-淀粉混悬液,以消除灌胃给药产生的药物浓度不均一问题。灌胃给药后将给小鼠放入对应编号的笼具中,自由饮水和进食,按照12h光照、12h黑暗的方式饲养,饲养温度为22℃,湿度为40%。
(4)样品采集
a)采集尿液。在每只小鼠灌胃给药前,通过压迫膀胱刺激排尿,此尿液丢弃;在灌胃给药后每间隔1h通过压迫膀胱收集尿液于一次性洁净培养皿内,连续收集尿液至安乐死前,收集的尿液于4℃冷藏备用。
b)采集小鼠剩余身体。在每只小鼠给药24h后,采用二氧化碳对小鼠进行安乐死,死亡后等待30min使小鼠体内血液凝结,然后剖开腹腔和胸腔,小心移除从食道到肛门的消化道,再将所得小鼠身体称重,置于干净的自封袋内,4℃冷藏备用;将硝酸(苏州晶瑞化学股份有限公司,UP纯)和盐酸(苏州晶瑞化学股份有限公司,UP纯)于玻璃容器内混合,得到混合酸液,所述混合酸液中硝酸的浓度为20wt%,盐酸的浓度为10wt%;将去除消化道的小鼠身体用含有清洁剂的水清洗,然后用流动水冲洗5遍,用吸水纸吸干,接着浸泡在所述混合酸液中,秒表计时浸泡时间为30s,然后用流动水冲洗7遍,将清洗后的受试小鼠剩余身体收集于洁净容器内,备用。
(5)直接测定整体目标样品中的203Hg电离辐射计数(cpm)
采用连接有大探测面的碘化钠晶体闪烁探测器(7.6cm直径×8.3cm高)的γ-射线计数器(PackardAuto-gamma Model 5530,美国Packard Instrument Company)对整体目标样品中203Hg的电离辐射计数直接测定,具体操作如下:
a)在每只小鼠灌胃给药前,采用连接有大探测面的碘化钠晶体闪烁探测器的γ-射线计数器,测定注射器中药物淀粉混悬液或糊化淀粉液中总203Hg的电离辐射计数(实验组小鼠对应Nct before,空白对照组小鼠对应Ndt before);在每只小鼠灌胃给药后,测定注射器中残留药物淀粉混悬液或糊化淀粉液中203Hg的辐射电离计数(实验组小鼠对应Nct after,空白对照组小鼠对应Ndt after)。
b)将收集尿液的培养皿采用连接有大探测面的碘化钠晶体闪烁探测器的γ-射线计数器,对每只小鼠尿液进行整体测定,得到被机体吸收的、通过尿液排泄的203Hg的电离辐射计数(实验组小鼠对应Nat urine,空白对照组小鼠对应Nbt urine)。
c)将小鼠剩余身体放入连接有大探测面的碘化钠晶体闪烁探测器的γ-射线计数器中进行整体测定,获得小鼠剩余身体中保留203Hg的电离辐射计数(实验组小鼠对应Nat body,空白对照组小鼠对应Nbt body)。
(6)计算小鼠口服HgS的汞绝对生物利用度(吸收率)
根据测定得到的Nat body、Nat urine、Nbt body、Nbt urine、Nct before、Nct after、Ndt before和Ndt after以及测定每个目标样品时对应的时间t,利用203Hg衰变校正计算公式(式VI)分别计算得到Na0 body、Na0 urine、Nb0 body、Nb0 urine、Nc0 before、Nc0 after、Nd0 before和Nd0 after,然后根据式II、式III、式IV和式V所示公式计算得到Na0、Nb0、Nc0和Nd0,最终根据式I所示公式计算得到待测样品中汞的经口绝对生物利用度,具体如下:
汞的经口绝对生物利用度(%)=(Na0-Nb0)/(Nc0-Nd0)×100%式I;
其中,Na0—实验组动物尿液和剩余身体中保留总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nb0—空白对照组动物尿液和剩余身体中保留总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nc0—实验组动物灌胃给药摄入的203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nd0—空白对照组动物灌胃给药摄入的203Hg校正后的零时电离辐射计数;
所述Na0、Nb0、Nc0和Nd0分别根据式II、式III、式IV和式V所示公式计算得到:
Na0=Na0 body+Na0 urine 式II;
Nb0=Nb0 body+Nb0 urine 式III;
Nc0=Nc0 before-Nc0 after 式IV;
Nd0=Nd0 before-Nd0 after 式V;
其中,Na0 body—实验组动物剩余身体中保留203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Na0 urine—实验组动物尿液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nb0 body—空白对照组动物剩余身体中保留203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nb0 urine—空白对照组动物尿液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nc0 before—对实验组动物进行灌胃给药前所用注射器中药物淀粉混悬液中总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nc0 after—对实验组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的药物淀粉混悬液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nd0 before—对空白对照组动物进行灌胃给药前所用注射器中糊化淀粉液中总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nd0 after—对空白对照组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的糊化淀粉液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
所述Na0 body、Na0 urine、Nb0 body、Nb0 urine、Nc0 before、Nc0 after、Nd0 before和Nd0 after是根据203Hg衰变校正计算公式将t时测定的203Hg电离辐射计数Nat body、Nat urine、Nbt body、Nbt urine、Nct before、Nct after、Ndt before和Ndt after分别进行校正后得到的零时电离辐射计数;
所述Nat body为t时测定的实验组动物剩余身体中保留203Hg的电离辐射计数,Nat urine为t时测定的实验组动物尿液中203Hg的电离辐射计数;
所述Nbt body为t时测定的空白对照组动物剩余身体中保留203Hg的电离辐射计数,Nbt urine为t时测定的空白对照组动物尿液中203Hg的电离辐射计数;
所述Nct before为t时测定的对实验组动物进行灌胃给药前所用注射器中药物淀粉混悬液中总203Hg的电离辐射计数,Nct after为t时测定的对实验组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的药物淀粉混悬液中203Hg的电离辐射计数;
所述Ndt before为t时测定的对空白对照组动物进行灌胃给药前所用注射器中糊化淀粉液中总203Hg的电离辐射计数,Ndt after为t时测定的对空白对照组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的糊化淀粉液中203Hg的电离辐射计数;
所述203Hg衰变校正计算公式如式VI所示:
Nt=N0e-λt 式VI;
其中,Nt—t时测定的203Hg电离辐射计数;
N0—203Hg校正后的零时电离辐射计数;
λ—衰减常数,且所述λ=Ln(2)/t1/2,t1/2为203Hg半衰期;
t—以第1只小鼠灌胃给药时的时间点作为零时,并以所述零时为起点到测定203Hg电离辐射计数时所经历的时间,且所述t≥0s。
最终根据式I计算出小鼠口服HgS的汞绝对生物利用度为0.0127±0.0022%(Mean±SD),即万分之一点二七。
实施例2
按照实施例1的方法进行操作,不同之处仅在于:
步骤(1)中采用硫化钠与所述203HgCl2溶液反应生成203HgS沉淀,具体是将10mL硫化钠水溶液(硫化钠浓度为8.6552mg/mL,即0.1109mmol/mL)加入到10mL 203HgCl2溶液(HgCl2浓度为25.0860mg/mL,即0.09238mmol/mL)中,充分混匀,室温反应30min,生成203HgS沉淀(硫化钠与HgCl2摩尔比为1.2:1);反应结束后过滤收集203HgS沉淀,采用浓度为5wt%的稀盐酸浸泡洗涤3次,每次浸泡时间为3min,然后用纯水浸泡洗涤5次,每次浸泡时间为3min,过滤收集203HgS沉淀,真空冷冻干燥(FD-1D-50,北京博医康实验仪器有限公司),得到203HgS粉末,采用γ-射线计数器测定203Hg的放射比度为7.7mCi/mg。
步骤(2)中采用糊化淀粉液配制电离辐射强度浓度为2.5μCi/mL的安置精华散-203HgS-淀粉混悬液,具体是将安置精华散(青海省藏医院,院内制剂)与203HgS粉末按质量比20.36:1的比例配制安置精华散-203HgS混合物1g,以此来模拟硫化汞含量为4.91%的藏药当佐制剂(当佐=10份重量安置精华散+1份重量佐太,所述佐太含54%HgS);然后将所述安置精华散-203HgS混合物与糊化淀粉液混合,配制得到电离辐射强度浓度为2.5μCi/mL的安置精华散-203HgS-淀粉混悬液(即本实施例后续均以安置精华散-203HgS-淀粉混悬液代替实施例1中203HgS-淀粉混悬液)。
步骤(4)的混合酸液中硝酸的浓度为30wt%,盐酸的浓度为6wt%。
步骤(6)中根据式I所示公式计算得到小鼠口服安置精华散-203HgS混合物的汞绝对生物利用度(吸收率)为0.0289±0.0019%(Mean±SD),即万分之二点八九。
实施例3
按照实施例1的方法进行操作,不同之处仅在于:
步骤(2)中采用糊化淀粉液配制电离辐射强度浓度为1μCi/mL的二十五味珍珠丸-203HgS-淀粉混悬液,具体是将二十五味珍珠丸(西藏甘露藏药股份有限公司,国药准字Z54020080)采用微型粉碎机(BJ-150型)粉碎,然后将所得二十五味珍珠丸粉末与203HgS粉末按质量比63.6:1的比例配制二十五味珍珠丸-203HgS混合物1g,以此来模拟配比为100份重量普通复方制剂:3份重量佐太(所述佐太含54%HgS)的珍宝类藏药复方制剂;然后将所述二十五味珍珠丸-203HgS混合物与糊化淀粉液混合,配制得到电离辐射强度浓度为2.5μCi/mL的二十五味珍珠丸-203HgS-淀粉混悬液(即本实施例后续均以二十五味珍珠丸-203HgS-淀粉混悬液代替实施例1中203HgS-淀粉混悬液)。
步骤(3)中实验动物为4周龄健康Wistar雌性大鼠,且每组大鼠7只。
步骤(4)的混合酸液中硝酸的浓度为30wt%,盐酸的浓度为6wt%。
步骤(6)中根据式I所示公式计算得到小鼠口服二十五味珍珠丸-203HgS混合物的汞绝对生物利用度(吸收率)为0.0289±0.0019%(Mean±SD),即万分之二点八九0.0183±0.0005%(Mean±SD),即万分之一点八三。
测试例
为了比较兼具氧化和配位能力的硝酸与盐酸配制的混合酸液清洗法与与常规清洗对实验动物体表吸附粪便来源的203HgS干扰清除效果,设计如下实验:
(1)将8~12周龄的CD-1雄性小鼠分为3组,分别为203HgS-淀粉混悬液涂抹+混合酸液清洗组、203HgS-淀粉混悬液涂抹+常规清洗组、空白+常规清洗组,每组6只小鼠;其中,所述混合酸液中硝酸的浓度为30wt%,盐酸的浓度为6wt%;
(2)将203HgS-淀粉混悬液涂抹+混合酸液清洗组和203HgS-淀粉混悬液涂抹+常规清洗组小鼠周身用电离辐射强度为1μCi/mL的203HgS悬液涂抹,而空白+常规清洗组小鼠则无此处理。
(3)采用二氧化碳对小鼠进行安乐死,除去消化道,获得无消化道的小鼠剩余身体。
(4)将上述用203HgS-淀粉混悬液涂抹的203HgS-淀粉混悬液涂抹+混合酸液清洗组的6只小鼠剩余身体用含有清洁剂的水清洗,然后用流动自来水冲洗5遍,用吸水纸吸干,接着浸泡在所述混合酸液中浸泡30s,然后用流动自来水冲洗7遍;将上述用203HgS-淀粉混悬液涂抹的203HgS-淀粉混悬液涂抹+常规清洗组的6只小鼠用含有清洁剂的水清洗,然后用流动自来水冲洗5遍,接着继续用流动自来水冲洗7遍(即省略掉在所述混合酸液中浸泡的步骤);将空白对照组6只小鼠,用含有清洁剂的水清洗,然后用流动自来水冲洗5遍,接着继续用流动自来水冲洗7遍,放入洁净容器内备用。
(5)采用连接有大探测面的碘化钠晶体闪烁探测器(7.6cm直径×8.3cm高)的γ-射线计数器(Packard Auto-gamma Model 5530,美国Packard Instrument Company)测定上述清洗后的各组小鼠剩余身体203Hg电离辐射计数(cpm),具体结果见表1。
表1对小鼠体表吸附粪便来源的203HgS干扰清除结果(n=6,Mean±SD)
注:与空白+常规清洗组比较,“***”表示p<0.001。
上述结果表明,本发明采用兼具氧化和配位能力的硝酸和盐酸配制得到混酸溶液,采用所述混酸溶液能够对实验动物体表吸附粪便来源的203HgS污染进行有效清除,效果显著,优于常规清洗方法,能够保证硫化汞类物质中汞的口服绝对生物利用度测定的准确性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种利用放射性同位素203Hg测定硫化汞或含硫化汞物质中汞经口绝对生物利用度的方法,包括以下步骤:
将糊化淀粉液与待测样品混合,得到药物淀粉混悬液,所述待测样品为203Hg标记的硫化汞或含硫化汞物质;
通过注射器将所述药物淀粉混悬液灌胃给药于实验动物,作为实验组动物;将所述糊化淀粉液灌胃给药于实验动物,作为空白对照组动物;其中,在进行灌胃给药前,测定灌胃给药所用注射器中药物淀粉混悬液或糊化淀粉液中总203Hg的电离辐射计数;在进行灌胃给药后,测定所述注射器中残留的药物淀粉混悬液或糊化淀粉液中203Hg的电离辐射计数;
分别收集灌胃给药后所述实验组动物和空白对照组动物的尿液,然后去除所得实验动物的消化道,依次经第一清洗、混酸溶液浸泡处理以及第二清洗,收集所得实验动物剩余身体;其中,在灌胃给药前将所述实验动物刺激排尿并将所得尿液丢弃,在灌胃给药后与去除消化道前间隔预定时间连续收集尿液;所述混酸溶液为硝酸与盐酸的混合溶液;
将收集得到的尿液以及实验动物剩余身体分别进行测定,分别得到尿液中203Hg电离辐射计数以及实验动物剩余身体中保留203Hg的电离辐射计数;
根据式I所示公式计算得到待测样品中汞的经口绝对生物利用度:
汞的经口绝对生物利用度(%)=(Na0-Nb0)/(Nc0-Nd0)×100% 式I;
其中,Na0—实验组动物尿液和剩余身体中保留总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nb0—空白对照组动物尿液和剩余身体中保留总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nc0—实验组动物灌胃给药摄入的203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nd0—空白对照组动物灌胃给药摄入的203Hg校正后的零时电离辐射计数;
所述Na0、Nb0、Nc0和Nd0分别根据式II、式III、式IV和式V所示公式计算得到:
Na0=Na0body+Na0urine 式II;
Nb0=Nb0body+Nb0urine 式III;
Nc0=Nc0before-Nc0after 式IV;
Nd0=Nd0before-Nd0after 式V;
其中,Na0body—实验组动物剩余身体中保留203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Na0urine—实验组动物尿液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nb0body—空白对照组动物剩余身体中保留203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nb0urine—空白对照组动物尿液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nc0before—对实验组动物进行灌胃给药前所用注射器中药物淀粉混悬液中总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nc0after—对实验组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的药物淀粉混悬液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nd0before—对空白对照组动物进行灌胃给药前所用注射器中糊化淀粉液中总203Hg校正后的零时电离辐射计数;
Nd0after—对空白对照组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的糊化淀粉液中203Hg校正后的零时电离辐射计数;
所述Na0body、Na0urine、Nb0body、Nb0urine、Nc0before、Nc0after、Nd0before和Nd0after是根据203Hg衰变校正计算公式将t时测定的203Hg电离辐射计数Natbody、Naturine、Nbtbody、Nbturine、Nctbefore、Nctafter、Ndtbefore和Ndtafter分别进行校正后得到的零时电离辐射计数;
所述Natbody为t时测定的实验组动物剩余身体中保留203Hg的电离辐射计数,Naturine为t时测定的实验组动物尿液中203Hg的电离辐射计数;
所述Nbtbody为t时测定的空白对照组动物剩余身体中保留203Hg的电离辐射计数,Nbturine为t时测定的空白对照组动物尿液中203Hg的电离辐射计数;
所述Nctbefore为t时测定的对实验组动物进行灌胃给药前所用注射器中药物淀粉混悬液中总203Hg的电离辐射计数,Nctafter为t时测定的对实验组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的药物淀粉混悬液中203Hg的电离辐射计数;
所述Ndtbefore为t时测定的对空白对照组动物进行灌胃给药前所用注射器中糊化淀粉液中总203Hg的电离辐射计数,Ndtafter为t时测定的对空白对照组动物进行灌胃给药后所用注射器中残留的糊化淀粉液中203Hg的电离辐射计数;
所述203Hg衰变校正计算公式如式VI所示:
Nt=N0e-λt 式VI;
其中,Nt—t时测定的203Hg电离辐射计数;
N0—203Hg校正后的零时电离辐射计数;
λ—衰减常数,且所述λ=Ln(2)/t1/2,t1/2为203Hg半衰期;
t—以第1只实验动物灌胃给药前的某一时间点或第1只实验动物灌胃给药时的时间点作为零时,并以所述零时为起点到测定203Hg电离辐射计数时所经历的时间,且所述t≥0s。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述203Hg标记的硫化汞的制备方法包括以下步骤:
采用中子射线对HgO进行辐照,然后进行放置,使所得197HgO衰变减弱,得到203HgO;
将所述203HgO溶解于无机酸中,将所得203Hg2+溶液与沉淀剂溶液混合进行反应,将所得沉淀依次进行洗涤和干燥,得到203Hg标记的硫化汞;所述沉淀剂溶液中的沉淀剂为可溶性硫化物或硫代硫酸盐。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述辐照的时间≥1周;所述放置的时间≥10天。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述沉淀剂与203HgO的摩尔比为(1~2):1。
5.根据权利要求2~4任一项所述的方法,其特征在于,所述203Hg标记的硫化汞的放射比度为1~20mCi/mg。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述糊化淀粉液中糊化淀粉的浓度为1~10wt%;所述药物淀粉混悬液的电离辐射强度为0.01~100μCi/mL。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述灌胃给药后相邻两次收集尿液的间隔时间为20min~2.5h;首次收集尿液的时间为灌胃给药后20min~2.5h。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述混酸溶液中硝酸的浓度为5.9~59wt%,盐酸的浓度为3.3~33wt%。
9.根据权利要求1或8所述的方法,其特征在于,所述浸泡处理的时间为1s~10min。
10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,测定所述203Hg的电离辐射计数采用的设备为连接有大接收面的碘化钠晶体闪烁探测器的γ-射线计数器、正电子发射断层扫描仪或单光子发射计算机断层扫描仪。
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US20100183543A1 (en) * | 2008-09-19 | 2010-07-22 | Maxygen, Inc. | Method for the treatment of radiation-induced neutropenia by administration of a multi-pegylated granulocyte colony stimulating factor (g-csf) variant |
CN102692446A (zh) * | 2011-03-21 | 2012-09-26 | 上海市食品药品检验所 | 测定含朱砂的药物中可溶性汞和价态汞含量的方法 |
Patent Citations (2)
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US20100183543A1 (en) * | 2008-09-19 | 2010-07-22 | Maxygen, Inc. | Method for the treatment of radiation-induced neutropenia by administration of a multi-pegylated granulocyte colony stimulating factor (g-csf) variant |
CN102692446A (zh) * | 2011-03-21 | 2012-09-26 | 上海市食品药品检验所 | 测定含朱砂的药物中可溶性汞和价态汞含量的方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
UJANG TINGGI等: "Bioavailability study of arsenic and mercury in traditional Chinese medicines (TCM) using an animal model after a single dose exposure", REGULATORY TOXICOLOGY AND PHARMACOLOG, 19 January 2016 (2016-01-19) * |
刘博涵;杨咪咪;马娜娜;王旗;: "朱砂及含朱砂小儿用药"一捻金"单次给药幼年大鼠血汞的代谢动力学", 毒理学杂志, no. 01, 25 February 2018 (2018-02-25) * |
田兴中;何海洋;刘杰;吴芹;时京珍;: "朱砂与含朱砂复方中汞元素在大鼠体内的吸收分布和排泄", 时珍国医国药, no. 05, 20 May 2015 (2015-05-20) * |
郑植元等: "含HgS传统药物朱砂和佐太中汞的胃肠道溶出及吸收蓄积研究", 中国中药杂志, 15 June 2015 (2015-06-15) * |
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