CN114931163A - 一种防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法及应用 - Google Patents
一种防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及果实采后病害防治技术领域，具体涉及防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法及应用。本发明的具体步骤为：制备涂膜溶液A和B，将采后待处理的果实浸泡涂膜溶液A中，取出沥干再风干得到单层涂膜果实；再将涂膜果实浸泡在涂膜溶液B中1～2min，取出沥干再风干得到双层涂膜果实；其中涂膜溶液A的成分按质量百分比为：0.5～2.0%壳聚糖、0.5～1.0%冰醋酸、1.0～1.5%植物精油、0.5～1.0%增塑剂，0.05～0.2%表面活性剂，其余为溶剂蒸馏水；涂膜溶液B的成分按质量百分比为：0.5%～2.0%羧甲基纤维素、0.8～1.5%ε‑聚赖氨酸，其余为溶剂蒸馏水。该抗菌膜能有效控制采后病原菌引起的果实腐烂，减轻果实贮藏、运输过程中损失，且绿色、天然、安全性高，对人体无害。
Description
技术领域
本发明属于果实采后病害防治技术领域，具体涉及一种防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法及应用。
背景技术
在果实采后贮藏和运输中，容易腐烂，造成了巨大的经济损失。目前，对于果实病害控制以化学防治为主，高效、低价的同时，也对人体健康和环境造成危害，且容易产生抗药性。因此，植物来源的天然抗菌物质受到越来越多的关注。
植物精油具有良好的安全性和广谱抗菌性。自然界天然存在的壳聚糖具有无毒，生物相容性好，可生物降解等特性，被认为是有前景的食用涂膜材料。但是，壳聚糖成膜后杀菌效果不甚理想，通常将植物精油加入果蔬采后保鲜膜中，不仅提高复合膜的抗菌性能，还可以延缓精油的释放，从而延长膜的抗菌时间。然而，单一的壳聚糖/植物精油可食抗菌膜存在脆性高、水溶解性高等问题。为了改善壳聚糖/植物精油成膜问题，在壳聚糖/精油基膜上添加其它具有不同特性的天然大分子(多糖、蛋白质和脂类)能够弥补单一壳聚糖膜的不足。
关于抑制果实采后病害的技术，文献1、文献2进行了披露：
文献1：CN 110896998A公开了一种抑制苹果采后病害的双层涂膜方法及其配方，具体步骤为：该配方包括涂膜溶液A和涂膜溶液B，其中涂膜溶液A使用状态的成分为:0.2％～2.0wt％壳聚糖0.5％～3.0wt％丁香精油、0.08～0.12wt％吐温80，其余为配方蒸馏水，所述配方蒸馏水为含0.5～1wt％乙酸的蒸馏水；涂膜溶液B使用状态的成分为:0.5％～2.0wt％阿拉伯树胶、0.5～2.0wt％肉桂精油0.08～0.12wt％吐温80，其余为上述配方蒸馏水。将待处理的苹果果实先浸没于涂膜溶液A中0.5～2分钟后，置于空气中通风0.4～1小时晾干，得到单层A涂膜果实，将单层A涂膜果实再次浸没于涂膜溶液B中0.5～2分钟后，置于空气中通风0.4～1小时晾干，得到双层涂膜果实。
文献2：张晶琳等在《壳聚糖/CMC复合涂膜处理对柑橘果实采后品质的影响》一文公开了一种复合涂膜，膜的制备方法为：(1)壳聚糖膜：将5mL 15g/L壳聚糖溶液倒入直径6cm的培养皿中并在恒温恒湿箱(23℃，RH65％)干燥过夜；(2)羧甲基纤维素钠/壳聚糖复合膜：首先将5mL 15g/L羧甲基纤维素钠溶液倒入直径6cm的培养皿中并在恒温恒湿箱(23℃，RH65％)干燥过夜，然后将5mL 15g/L壳聚糖溶液浇铸第二层，制成复合涂膜液。用4层纱布充分吸收涂膜液，均匀涂抹于果实表面后置晾干。
目前关于壳聚糖/羧甲基纤维素复合抗菌活性成分的双层涂膜方式在采后果实病害的应用还未见相关报道。
发明内容
为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法。研究基于壳聚糖、羧甲基纤维素多糖基质，复合植物精油和ε-聚赖氨酸抗菌活性成分的双层涂膜方式对采后果实真菌病害的控制作用。
壳聚糖带正电，羧甲基纤维素带负电，以二者为主要材料的涂膜溶液所带电荷相反，利用分子之间的电荷相互作用，本发明通过静电沉积的方式层层自组装复合膜，与文献1中采用的阿拉伯糖树胶所形成的双层膜对比，静电沉积方法更易于操作和调控，只要控制膜溶液的浓度和层层自组装的层数即可实现对涂膜的厚度以及折光度等特性的控制。此外，与文献1相比，本发明中添加ε-聚赖氨酸为抑菌活性成分，大大降低了精油的使用，减少了精油对果实原有感官风味的影响，相同浓度下本发明控制果实病害的效果更优。文献2中的壳聚糖和羧甲基纤维素双层涂膜能够提高柑橘的亮度、抑制抗坏血酸氧化，减少硬度降低，延缓果实品质的下降，然而双层膜的抗菌性并没得到提高，对果实的病害控制效果也无从得知。本发明添加植物精油和ε-聚赖氨酸为抑菌活性成分，对传统双层膜抗菌性进行改进，实现抗菌活性成分的缓慢释放，有效控制采后主要真菌病害，极大地提高壳聚糖单一涂膜对于采后果实病害的控制作用。
本发明具体包括以下步骤：
(1)先将果实浸泡在涂膜溶液A中，将果实取出后沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干，得到单层涂膜果实；
(2)将(1)中单层涂膜果实浸泡在涂膜溶液B中，将果实取出后沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干，得到双层涂膜果实；
涂膜溶液A的制作方法如下：取壳聚糖溶于含冰醋酸水溶液中，并在室温下搅拌过夜；
得到壳聚糖溶液后，依次加入植物精油、增塑剂、表面活性剂，其余为溶剂蒸馏水，继续搅拌直至形成稳定的乳状液，置于超声仪中脱气；
涂膜溶液B的制作方法如下：取羧甲基纤维素溶于水中，在搅拌过程中缓慢加入，待羧甲基纤维素完全溶解后加入ε-聚赖氨酸，其余为溶剂蒸馏水，继续搅拌至溶液澄清透明，置于超声仪中脱气。
优选的，(1)中，浸泡在溶液A中1～3min，风干0.5～1h。
优选的，(1)中，浸泡在溶液A中2min，风干1h。
优选的，(2)中，浸泡在溶液B中1～2min，风干0.5～1.5h。
优选的，(2)中，浸泡在溶液B中2min，风干1h。
优选的，壳聚糖脱乙酰度＞95％，粘度为100～200mpa.s；壳聚糖溶液中壳聚糖的质量百分比为0.5～2.0％，壳聚糖冰醋酸水溶液浓度为0.7～1.2％(v/v)，搅拌速率为60～150r/min，搅拌时间8～16h，超声脱气10～15min。
优选的，壳聚糖脱乙酰度＞95％，粘度为155mpa.s；壳聚糖溶液中壳聚糖的质量百分比为1.5％，壳聚糖冰醋酸水溶液浓度为1.0％(v/v)，搅拌速率为80r/min，搅拌时间12h，超声脱气10min。
优选的，加入质量百分比1.0～1.5％植物精油，植物精油为柠檬精油、丁香精油、肉桂精油中的至少一种；
加入质量百分比0.5～1.0％增塑剂，增塑剂为甘油、山梨醇、木糖醇的至少一种；
加入质量百分比0.05～0.2％表面活性剂，表面活性剂为吐温-80、吐温-20、司盘-20中的至少一种。
优选的，加入质量百分比1.5％植物精油；
加入质量百分比1.0％增塑剂；
加入质量百分比0.2％表面活性剂。
优选的，溶液中羧甲基纤维素的质量百分比为0.5～2.0％，加入质量百分比0.8～1.5％ε-聚赖氨酸，超声仪脱气10～15min。
优选的，溶液中羧甲基纤维素的质量百分比为1.5％，加入质量百分比1.0％ε-聚赖氨酸，超声仪脱气10min。
本发明防治果实采后病害的方法，包括以下的步骤：
(1)先将果实浸泡在涂膜溶液A中2min，将果实取出，沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干0.5～1h，得到单层涂膜果实；
(2)将上述涂膜果实浸泡在涂膜溶液B中2min，将果实取出，沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干0.5～1.5h，得到双层涂膜果实；
涂膜溶液A的制作方法如下：取壳聚糖溶于0.7～1.2％(v/v)冰醋酸水溶液中，并在60～150r/min转速下室温过夜搅拌8～16h，溶液中壳聚糖的质量百分比为0.5～2.0％；
得到壳聚糖溶液后，依次加入质量百分比1.0～1.5％植物精油、0.5～1.0％增塑剂，0.05～0.2％表面活性剂，其余为溶剂蒸馏水，继续搅拌直至形成稳定的乳状液，置于超声仪中脱气10～15min；
涂膜溶液B的制作方法如下：取羧甲基纤维素溶于溶剂水中，在搅拌过程中缓慢加入，溶液中羧甲基纤维素的质量百分比为0.5～2.0％；
待羧甲基纤维素完全溶解后加入质量百分比0.8～1.5％ε-聚赖氨酸，其余为溶剂蒸馏水，继续搅拌至溶液澄清透明，置于超声仪中脱气10～15min。
本发明的有益效果在于：
1.将所述复合抗菌膜应用到苹果、桃、柑橘以及梨果实的采后防腐保鲜中，对扩展青霉菌、指状青霉菌和链格孢菌等主要采后病原菌引起的果实腐烂，具有显著的抑制作用，减轻由于果实腐败造成的经济损失。
2.本发明所涉及的壳聚糖、羧甲基纤维素为天然大分子多糖、植物精油来源于植物天然成分，ε-聚赖氨酸常被用于食品防腐剂，所制备的抗菌保鲜膜主要成分绿色、健康，具有较高的食品安全性，有望成为传统合成杀菌剂或者商业果蜡的替代品，具有很大的商业利用价值。
3.本发明所涉及的壳聚糖、羧甲基纤维素为主要材料的涂膜溶液所带电荷相反，可以通过静电沉积的方式层层自组装，该方法能一定程度上控制涂膜成型后的层厚度，调节果实的呼吸强度，达到延缓果实腐烂的目的。
4.添加植物精油和ε-聚赖氨酸为抑菌活性成分，对传统单层壳聚糖膜抗菌性进行改进，实现抗菌活性成分的缓慢释放，延长杀菌时间，有效控制真菌病害，极大地提高壳聚糖单一涂膜对于采后果实病害的控制作用。
5.本发明复合膜的拉伸强度是壳聚糖-精油膜的4.13倍，改善了壳聚糖-精油膜单层膜的脆性；同时，通过静电沉积的方式层层自组装复合膜调整了双层膜的厚度，使得复合抗菌膜厚度远低于涂膜溶液A和B的厚度之和，有利于果实产品的呼吸作用。
附图说明
图1为不同涂膜材料对富士苹果采后青霉病的抑制效果，第1-1组至第1-5组在贮藏4天后的果实病害图；
图2为不同涂膜材料对富士苹果采后青霉病的抑制效果，第1-1组至第1-5组在贮藏4天后的果实病斑直径柱形图；
图3为不同涂膜浓度对黄元帅苹果采后青霉病的抑制效果，第2-1组至第2-5组在贮藏6天后的果实病害图；
图4为不同涂膜浓度对黄元帅苹果采后青霉病的抑制效果，第2-1组至第2-5组在贮藏6天后的果实病斑直径柱形图；
图5为不同涂膜浓度对柑橘果实采后绿霉病的抑制效果，第3-1组至第3-5组在贮藏4天后的果实病斑直径柱形图；
图6为不同涂膜浓度对梨果实采后黑斑病的抑制效果，第4-1组至第4-5组在贮藏4天后的果实病斑直径柱形图。
具体实施方式
为了能使本领域技术人员更好的理解本发明，现结合具体实施方式对本发明进行更进一步的阐述。
材料简介：
柠檬精油购自于济南鲁试商贸有限公司。
其它化学试剂均为分析纯，购自于济南力戈试剂有限公司。
实施例1：检测果实抗菌保鲜膜对富士苹果采后青霉病的抑制效果
一种防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法包括以下步骤：
(1)涂膜溶液A的制备：取壳聚糖溶于1.0％(v/v)冰醋酸水溶液中，并在150r/min转速下室温过夜搅拌12h，溶液中壳聚糖的质量百分比为2.0％，待壳聚糖完全溶解后，依次加入质量百分比1.0％柠檬精油、1.0％甘油，0.2％吐温-80，其余为溶剂蒸馏水，继续搅拌直至形成稳定的乳状液，置于超声仪中脱气10min；
所述壳聚糖的脱乙酰度＞95％，粘度为155mpa.s.
(2)涂膜溶液B的制备：取羧甲基纤维素溶于溶剂水中，在搅拌过程中缓慢加入，溶液中羧甲基纤维素的质量百分比为2.0％，待羧甲基纤维素完全溶解后加入质量百分比1.0％ε-聚赖氨酸，其余为溶剂蒸馏水，继续搅拌至溶液澄清透明，置于超声仪中脱气15min。
该抗菌保鲜膜的使用方法包括如下步骤：
1)选择待处理的富士苹果，选具有相同大小，色泽和成熟度的果实，且无明显可见机械损伤或者病虫害的果实进行实验。
2)果实涂膜方法按照如下分组：
第1-1组：将富士苹果浸泡在含1.0％冰醋酸的水溶液中2.5min，并于室温下风干0.8h。
第1-2组：将富士苹果浸泡在含2.0％壳聚糖溶液中2.5min。将果实取出，沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干0.8h，得到单层壳聚糖涂膜果实。
第1-3组：将富士苹果浸泡在含2.0％壳聚糖的涂膜溶液A中2.5min。将果实取出，沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干0.8h，得到单层A涂膜果实。
第1-4组：将富士苹果浸泡在含2.0％羧甲基纤维素的涂膜溶液B中2.5min。将果实取出，沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干0.8h，得到单层B涂膜果实。
第1-5组：将富士苹果浸泡在含2.0％壳聚糖的涂膜溶液A中2.5min。将果实取出，沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干0.8h。将上述单层涂膜果实浸泡在含2.0％羧甲基纤维素的涂膜溶液B中1.5min。将果实取出，沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干1.2h，得到双层涂膜果实。
(3)用无菌针在果实赤道处扎两个损伤口(3mm×3mm)，在伤口处接种15μL的扩展青霉孢子悬浮液(1×104孢子mL-1)。
(4)置于聚乙烯袋(<0.04mm)中，于25℃，相对湿度(RH)为80％～90％的条件下贮藏，在接种后第4天对果实进行拍照，并记录果实的病斑直径。
使用十字交叉的方法计算果实的病斑直径，公式如下：
病斑直径(LD)＝∑病害果实的侵染直径/果实总个数；
如图1和图2所示，第1-2至1-5组富士苹果病斑直径分别比对照组1-1组减少了38.1％，33.3％，42.9％，66.7％，其中第1-5组果实的病害控制效果最好。
实施例2
检测果实抗菌保鲜膜对黄元帅苹果采后青霉病的抑制效果
实施例中，采用的植物精油为柠檬精油；增塑剂为甘油；表面活性剂为吐温-80；
抗菌保鲜膜的制备方法如下：
(1)涂膜溶液A的制备：称取一定质量的壳聚糖溶于冰醋酸水溶液中，并在100r/min转速下室温过夜搅拌16h；待壳聚糖完全溶解后，依次加入柠檬精油、甘油、吐温-80，其余为溶剂蒸馏水，继续搅拌直至形成稳定的乳状液，置于超声仪中脱气12min；
(2)涂膜溶液B的制备：称取一定质量的羧甲基纤维素缓慢溶于溶剂水中。待羧甲基纤维素完全溶解，加入ε-聚赖氨酸，其余为溶剂蒸馏水，继续搅拌至溶液澄清透明，置于超声仪中脱气12min。
根据组成配比(按质量百分比)不同，将所述果实抗菌膜分为五组分别对黄元帅果实青霉病的抑制效果进行检测。每组果蔬杀菌保鲜剂组成配比如下：
第2-1组：涂膜溶液A：0.2％吐温-80，其余为溶剂蒸馏水；涂膜溶液B：溶剂蒸馏水；
第2-2组：涂膜溶液A：0.5％壳聚糖、1.0％冰醋酸、1.5％柠檬精油、0.2％吐温-80，1.0％甘油，其余为溶剂蒸馏水；
涂膜溶液B：0.5％羧甲基纤维素、1.0％ε-聚赖氨酸，其余为溶剂蒸馏水；
第2-3组：涂膜溶液A：1.0％壳聚糖、1.0％冰醋酸、1.5％柠檬精油、0.2％吐温-80，1.0％甘油，其余为溶剂蒸馏水；
涂膜溶液B：1.0％羧甲基纤维素、1.0％ε-聚赖氨酸，其余为溶剂蒸馏水；
第2-4组：涂膜溶液A：1.5％壳聚糖、1.0％冰醋酸、1.5％柠檬精油、0.2％吐温-80，1.0％甘油，其余为溶剂蒸馏水；
涂膜溶液B：1.5％羧甲基纤维素、1.0％ε-聚赖氨酸，其余为溶剂蒸馏水；
第2-5组：涂膜溶液A：2.0％壳聚糖、1.0％冰醋酸、1.5％柠檬精油、0.2％吐温-80，1.0％甘油，其余为溶剂蒸馏水；
涂膜溶液B：2.0％羧甲基纤维素、1.0％ε-聚赖氨酸，其余为溶剂蒸馏水。
该抗菌保鲜膜的使用方法包括如下步骤：
1)选择待处理的黄元帅苹果，选具有相同大小，色泽和成熟度的果实，且无明显可见机械损伤或者病虫害的果实进行实验。
2)所述果实涂膜方法如下：
将黄元帅果实分别浸泡于上述组别的涂膜溶液A中3min。将果实取出，沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干1h，得到单层涂膜果实。将单层涂膜果实浸泡于上述组别的涂膜溶液B中2min。将果实取出，沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干1h，得到双层涂膜果实。
3)用无菌针在果实赤道处扎两个损伤口(3mm×3mm)，在伤口处接种15μL的扩展青霉孢子悬浮液(1×104孢子/mL-1)。
4)置于聚乙烯袋(<0.04mm)中，于25℃，RH为80％～90％的条件下贮藏，在接种后第6天对果实进行拍照，并记录果实的病斑直径。
如图3和图4所示，第2-2至2-5组黄元帅苹果病斑直径分别比对照组2-1组减少了7.1％，11.8％，46.1％，57.1％。
实施例3检测果实抗菌保鲜膜对柑橘果实采后绿霉病的抑制效果
按照实施例2所述抗菌保鲜膜制备的五个组别，分别对柑橘果实绿霉病的抑制效果进行检测。该抗菌保鲜膜的使用方法包括如下步骤：
1)选择待处理的柑橘，选具有相同大小，色泽和成熟度的果实，且无明显可见机械损伤或者病虫害的果实进行实验。
2)所述果实涂膜方法如下：
将柑橘果实分别浸泡于上述组别的涂膜溶液A中2min。将果实取出，沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干1h，得到单层涂膜果实。将单层涂膜果实浸泡于上述组别的涂膜溶液B中2min。将果实取出，沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干1h，得到双层涂膜果实。
3)用无菌针在果实赤道处扎两个损伤口(3mm×3mm)，在伤口处接种15μL的指状青霉孢子悬浮液(1×104孢子/mL-1)。
4)置于聚乙烯袋(<0.04mm)中，于25℃，RH为80％～90％的条件下贮藏，在接种后第4天记录果实的病斑直径。
如图5所示，第3-2至3-5组柑橘果实病斑直径分别比对照组3-1组减少了11.4％，30.2％，44.2％，60.9％，其中第3-5组果实的病害控制效果最好。
实施例4检测果实抗菌保鲜膜对梨果实采后黑斑病的抑制效果
按照实施例2所述抗菌保鲜膜制备的五个组别，分别对梨果实黑斑病的抑制效果进行检测。该抗菌保鲜膜的使用方法包括如下步骤：
1)选择待处理的梨果实，选具有相同大小，色泽和成熟度的果实，且无明显可见机械损伤或者病虫害的果实进行实验。
2)所述果实涂膜方法如下：
将梨果实分别浸泡于上述组别的涂膜溶液A中2min。将果实取出，沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干1h，得到单层涂膜果实。将单层涂膜果实浸泡于上述组别的涂膜溶液B中2min。将果实取出，沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干1h，得到双层涂膜果实。
3)用无菌针在果实赤道处扎两个损伤口(3mm×3mm)，在伤口处接种15μL的链格孢菌孢子悬浮液(1×104孢子/mL-1)。
4)置于聚乙烯袋(<0.04mm)中，于25℃，RH为80％～90％的条件下贮藏，在接种后第4天记录果实的病斑直径。
如图6所示，第4-2至4-5组梨果实病斑直径分别比对照组4-1组减少了11.8％，29.5％，28.4％，47.0％，其中第4-5组果实的病害控制效果最好。
实施例5：不同抗菌膜材料的物理特性表征
一种防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法包括以下步骤：
1)涂膜溶液A的制备：取壳聚糖溶于1.0％(v/v)冰醋酸水溶液中，并在150r/min转速下室温过夜搅拌12h，溶液中壳聚糖的质量百分比为1.0％，待壳聚糖完全溶解后，依次加入质量百分比1.5％柠檬精油、1.0％甘油，0.2％吐温-80，其余为溶剂蒸馏水，继续搅拌直至形成稳定的乳状液，置于超声仪中脱气10min；
2)涂膜溶液B的制备：取羧甲基纤维素溶于溶剂水中，在搅拌过程中缓慢加入，溶液中羧甲基纤维素的质量百分比为1.0％，待羧甲基纤维素完全溶解后加入质量百分比1.0％ε-聚赖氨酸，其余为溶剂蒸馏水，继续搅拌至溶液澄清透明，置于超声仪中脱气15min。
复合膜厚度测定用数字千分尺测量，精度为0.001mm。每个膜随机在五个不同的位置进行测量，样品重复三次；水分含量的测定需将薄膜样品在105℃下干燥至恒重，测定其含水率，计算公式如下(1)；不透明度的测定方法根据膜厚度和在600nm时的吸光度计算，其公式如下(2)；拉伸强度和断裂伸长率的测定参照国标GB/T 6344-2008《软质泡沫聚合材料拉伸强度和断裂伸长率的测定》进行。
公式(1)：水分含量(％)＝(Mi-Md)/Mi×100；
Mi(g)和Md(g)分别为薄膜样品的初始值和干燥后的值。
公式(2)：不透明度(A mm-1)＝A600nm/x；
A为600nm吸光度值，x为薄膜厚度(mm)。
表1不同膜材料的物理特性的测定
由表1可知，复合抗菌膜厚度远低于涂膜溶液A和B的厚度之和，说明本发明通过静电沉积的方式层层自组装复合膜调整了双层膜的厚度，有利于果实产品的呼吸作用；另外，精油的加入明显降低了壳聚糖膜的拉伸强度，也就是膜的脆性增加，但是复合涂膜溶液B后，双层复合抗菌薄膜的物理性质得到改善，该复合膜的拉伸强度是壳聚糖-精油膜的4.13倍，改善了壳聚糖-精油膜单层膜的脆性。因此，复合膜并非是单层膜叠加的规律，而是在膜的厚度、拉伸强度等物理特性方面有所改善。
Claims (10)
1.防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法，其特征在于，包括以下的步骤：
（1）先将果实浸泡在涂膜溶液A中，将果实取出后沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干，得到单层涂膜果实；
（2）将（1）中单层涂膜果实浸泡在涂膜溶液B中，将果实取出后沥干多余的保鲜膜液，并于室温下风干，得到双层涂膜果实；
涂膜溶液A的制作方法如下：取壳聚糖溶于含冰醋酸水溶液中，并在室温下搅拌过夜；
得到壳聚糖溶液后，依次加入植物精油、增塑剂、表面活性剂，其余为溶剂蒸馏水，继续搅拌直至形成稳定的乳状液，置于超声仪中脱气；
涂膜溶液B的制作方法如下：取羧甲基纤维素溶于水中，在搅拌过程中缓慢加入，待羧甲基纤维素完全溶解后加入ε-聚赖氨酸，其余为溶剂蒸馏水，继续搅拌至溶液澄清透明，置于超声仪中脱气。
2.如权利要求1所述的防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法，其特征在于，（1）中，浸泡在溶液A中1～3min，风干0.5～1 h。
3.如权利要求1所述的防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法，其特征在于，（2）中，浸泡在溶液B中1～2min，风干0.5～1.5 h。
4.如权利要求1所述的防治果实采后病害的方法，其特征在于，壳聚糖脱乙酰度＞95%，粘度为100～200 mpa.s。
5.如权利要求1所述的防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法，其特征在于，在涂膜溶液A的制备过程中，溶液中壳聚糖的质量百分比为0.5～2.0%，壳聚糖冰醋酸水溶液浓度为0.7～1.2％(v/v)，搅拌速率为60～150r/min，搅拌时间8～16h，超声脱气10～15 min。
6.如权利要求1所述的防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法，其特征在于，在涂膜溶液A的制备过程中，加入质量百分比1.0～1.5%植物精油，植物精油为柠檬精油、丁香精油、肉桂精油中的至少一种。
7.如权利要求1所述的防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法，其特征在于，在涂膜溶液A的制备过程中，加入质量百分比0.5～1.0%增塑剂，增塑剂为甘油、山梨醇、木糖醇中的至少一种。
8.如权利要求1所述的防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法，其特征在于，在涂膜溶液A的制备过程中，加入质量百分比0.05～0.2%表面活性剂，表面活性剂为吐温-80、吐温-20、司盘-20中的至少一种。
9.如权利要求1所述的防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法，其特征在于，在涂膜溶液B的制备过程中，溶液中羧甲基纤维素的质量百分比为0.5～2.0%。
10.如权利要求1所述的防治果实采后病害的复合抗菌膜的制备方法，其特征在于，在涂膜溶液B的制备过程中，ε-聚赖氨酸的质量百分比为0.8～1.5%，超声仪脱气10～15 min。
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