CN114907476A - 抗tigit抗体及其用途 - Google Patents

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栾珊珊
夏广新
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Abstract

本申请涉及一种抗TIGIT抗体及其用途，所述抗TIGIT抗体以约5E‑09M或以下的KD值与人TIGIT蛋白特异性结合。本申请还提供了包含所述抗TIGIT抗体的免疫缀合物、制备所述TIGIT抗体的方法以及所述抗TIGIT抗体的用途。

Description

抗TIGIT抗体及其用途
技术领域
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种抗TIGIT抗体及其用途。
背景技术
免疫检查点T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域(TIGIT，又名Vstm3，WUCAM)发现于2009年，是I型跨膜蛋白。TIGIT的配体有两种，CD155(也称为脊髓灰质炎病毒受体或PVR)和CD112(也称为脊髓灰质炎病毒受体相关配体2、PVRL2、粘连蛋白-2)，TIGIT与CD155的结合亲和力远高于CD112。
TIGIT与激活性受体CD226竞争性结合配体CD155，传递抑制信号，抑制细胞过度活化并抑制促炎性细胞因子分泌(Manieri,Trends Immunol,2017,38(1):20-8)。TIGIT主要在调节性T细胞(Treg)、活化的T细胞和自然杀伤细胞(NK)等细胞上表达(YU,Nat Immunol,2009,10(1):48-57)，可以直接抑制T细胞和NK细胞的增殖、杀伤、脱颗粒及细胞因子分泌，也可以通过促进DC细胞分泌IL-10抑制T细胞活性(Nicholas,Trends Immunol.2017,38(1):20-28)。此外，表达在Treg上的TIGIT可以维持Treg的免疫抑制功能(Manieri,TrendsImmunol,2017,38(1):20-8)。TIGIT在多种肿瘤细胞、浸润淋巴细胞和外周血单核细胞中显著上调，其配体CD155和CD112也在多种肿瘤细胞广泛表达，提示TIGIT在肿瘤免疫逃逸过程中可能起着关键作用(Tassi,Cancer Res.2017,77:851-861.Kong,Clin Cancer Res,2016,22:3057-66.Casado,Cancer Immunol Immunother,2009,58(9):1517-26.)。
目前，已知的抗TIGIT抗体还存在选择性不强等缺陷。因此，有必要开发对TIGIT蛋白亲和力高、特异性强的新型抗TIGIT抗体。
发明内容
本申请提供了一种分离的抗原结合蛋白，其具有下列性质中的一种或多种：1)在Biacore测定中，以约5E-09M或以下的KD值与人TIGIT蛋白特异性结合；2)在流式检测中，以约0.5μg/ml或以下的EC50值与表达于CHOK1细胞上的人TIGIT特异性结合；3)阻断CD155与TIGIT结合；以及4)激活CD226-NFAT信号通路。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含HCDR3，所述HCDR3包含SEQID NO:3所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQID NO：2所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQID NO：1所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含重链可变区VH，所述VH包含所述HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含H-FR1，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接地相连，且所述H-FR1包含SEQ ID NO：70所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中部，所述的分离的抗原结合蛋白中所述H-FR1包含SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:15中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含H-FR2，所述H-FR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述H-FR2包含SEQ ID NO：71所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述H-FR2包含SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:16中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含H-FR3，所述H-FR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述H-FR3包含SEQ ID NO：72所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述H-FR3包含SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:17中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含H-FR4，所述H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接地相连，且所述H-FR4包含SEQ ID NO：73所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述H-FR4包含SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1包含SEQ ID NO：70所示的氨基酸序列；所述H-FR2包含SEQ ID NO：71所示的氨基酸序列；所述H-FR3包含SEQ ID NO：72所示的氨基酸序列；以及所述H-FR4包含SEQ IDNO：73所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1包含SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:15中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR2包含SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:16中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR3包含SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:17中任一项所示的氨基酸序列；以及所述H-FR4包含SEQ ID NO:10和SEQ IDNO:18中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4包含选自下述任意一组的氨基酸序列：
a)H-FR1：SEQ ID NO:7，H-FR2：SEQ ID NO:8，H-FR3：SEQ ID NO:9和H-FR4：SEQ IDNO:10；
b)H-FR1：SEQ ID NO:15，H-FR2：SEQ ID NO:16，H-FR3：SEQ ID NO:17和H-FR4：SEQID NO:18。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含重链可变区VH，所述VH包含SEQ ID NO：78所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述VH包含SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含LCDR3，所述LCDR3包含SEQID NO：6所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含LCDR2，所述LCDR2包含SEQID NO：5所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含LCDR1，所述LCDR1包含SEQID NO：4所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含轻链可变区VL，所述VL包含所述LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列；所述LCDR2包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列；以及所述LCDR1包含SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含L-FR1，所述L-FR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接或间接地相连，且所述L-FR1包含SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述L-FR1包含SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:19中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含L-FR2，所述L-FR2位于所述LCDR1与所述LCDR2之间，且所述L-FR2包含SEQ ID NO：75所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述L-FR2包含SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:26中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含L-FR3，所述L-FR3位于所述LCDR2与所述LCDR3之间，且所述L-FR3包含SEQ ID NO：76所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述L-FR3包含SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:25中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含L-FR4，所述L-FR4的N末端与所述LCDR3的C末端直接或间接地相连，且所述L-FR4包含SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述L-FR4包含SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:27中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含L-FR1，L-FR2，L-FR3和L-FR4，所述L-FR1包含SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列；所述L-FR2包含SEQ ID NO：75所示的氨基酸序列；所述L-FR3包含SEQ ID NO：76所示的氨基酸序列；以及所述L-FR4包含SEQ IDNO：77所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含L-FR1，L-FR2，L-FR3和L-FR4，所述L-FR1包含SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:19中任一项所示的氨基酸序列；所述L-FR2包含SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:26中任一项所示的氨基酸序列；所述L-FR3包含SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:25中任一项所示的氨基酸序列；以及所述L-FR4包含SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:27中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述L-FR1、L-FR2、L-FR3和L-FR4包含选自下述任意一组的氨基酸序列：
a)L-FR1：SEQ ID NO:11，L-FR2：SEQ ID NO:12，L-FR3：SEQ ID NO:13和L-FR4：SEQID NO:14；
b)L-FR1：SEQ ID NO:19，L-FR2：SEQ ID NO:20，L-FR3：SEQ ID NO:21和L-FR4：SEQID NO:22；
c)L-FR1：SEQ ID NO:19，L-FR2：SEQ ID NO:23，L-FR3：SEQ ID NO:21和L-FR4：SEQID NO:22；
d)L-FR1：SEQ ID NO:19，L-FR2：SEQ ID NO:24，L-FR3：SEQ ID NO:25和L-FR4：SEQID NO:22；
e)L-FR1：SEQ ID NO:19，L-FR2：SEQ ID NO:26，L-FR3：SEQ ID NO:25和L-FR4：SEQID NO:27。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含轻链可变区VL，所述VL包含SEQ ID NO：79所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述VL包含SEQ ID NO:30、SEQID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含重链恒定区，且所述重链恒定区包括源自IgG的恒定区或源自IgY的恒定区。
在某些实施方式中，所述的分离的抗体结合蛋白中所述重链恒定区包含源自选自下组蛋白的恒定区：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述重链恒定区包含SEQ IDNO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:58中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含轻链恒定区，且所述轻链恒定区包括源自Igκ的恒定区或源自Igλ的恒定区。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述轻链恒定区包括源自人Igκ的恒定区。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述轻链恒定区包含SEQ IDNO：80所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含重链HC，所述HC包含SEQ IDNO:81和SEQ ID NO:82中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含轻链LC，所述LC包含SEQ IDNO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白中所述HC和LC包含选自下述任意一组的氨基酸序列：
a)HC：SEQ ID NO：81和LC：SEQ ID NO：83；
b)HC：SEQ ID NO：82和LC：SEQ ID NO：84；
c)HC：SEQ ID NO：82和LC：SEQ ID NO：85；
d)HC：SEQ ID NO：82和LC：SEQ ID NO：86；
e)HC：SEQ ID NO：82和LC：SEQ ID NO：87。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包括抗体或其抗原结合片段。
在某些实施方式中，所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv，VHH和/或dAb。
在某些实施方式中，所述抗体选自下组：单克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。
另一方面，本申请提供了一种多肽，其包含所述的分离的抗原结合蛋白。
另一方面，本申请提供了一种免疫缀合物，其包含所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽。
另一方面，本申请提供了一种分离的核酸分子，其编码所述的分离的抗原结合蛋白，或者所述的多肽。
另一方面，本申请提供了一种或多种载体，其包含所述的分离的核酸分子。
另一方面，本申请提供了一种或多种细胞，其包含所述的分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述的分离的核酸分子和/或所述的载体。
另一方面，本申请提供了一种制备所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽的方法，所述方法包括再使得所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽表达的条件下，培养所述的细胞。
另一方面，本申请提供了一种或多种药物组合物，其包含所述的分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述的分离的核酸分子，所述的载体，所述的细胞，和/或药学上可接受的佐剂和/或赋形剂。
另一方面，本申请提供了一种药物组合，其包含所述的分离的抗原结合蛋白和免疫检查点抑制剂。
在某些实施方式中，所述药物组合中的免疫检查点抑制剂包括抑制PD-1/PD-L1相互作用的物质。
在某些实施方式中，所述药物组合中的免疫检查点抑制剂选自下组：PD-1/PD-L1阻断剂、PD-1拮抗剂、PD-L1拮抗剂、PD-1抑制剂和PD-L1抑制剂。
在某些实施方式中，所述药物组合中的免疫检查点抑制剂包括抗PD-1抗体。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-1抗体包含HCDR3，所述HCDR3包含SEQID NO:37所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-1抗体包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQID NO:36所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-1抗体包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQID NO:35所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-1抗体包含重链可变区VH，所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-1抗体包含重链可变区VH，所述VH包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-1抗体包含LCDR3，所述LCDR3包含SEQID NO:40所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-1抗体包含LCDR2，所述LCDR2包含SEQID NO:39所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-1抗体包含LCDR1，所述LCDR1包含SEQID NO:38所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-1抗体包含轻链可变区VL，所述VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列；所述LCDR2包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列；以及所述LCDR1包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-1抗体包含轻链可变区VL，所述VL包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-1抗体包括帕博利珠单抗。
在某些实施方式中，所述药物组合中的免疫检查点抑制剂包括抗PD-L1抗体。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-L1抗体包含HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-L1抗体包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-L1抗体包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-L1抗体包含重链可变区VH，所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-L1抗体包含重链可变区VH，所述VH包含SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-L1抗体包含LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-L1抗体包含LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-L1抗体包含LCDR1，所述LCDR1包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-L1抗体包含轻链可变区VL，所述VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列；所述LCDR2包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列；以及所述LCDR1包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-L1抗体包含轻链可变区VL，所述VL包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述药物组合中的抗PD-L1抗体包括阿替利珠单抗。
在某些实施方式中，所述的药物组合可以是药物组合物。
另一方面，本申请提供了一种用于检测或测定TIGIT的方法，所述方法包括使用所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽。
另一方面，本申请提供了一种TIGIT的检测试剂盒，其包含所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽。
另一方面，本申请提供了所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽在试剂盒制备中的用途。
另一方面，本申请提供了一种调节免疫应答的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的所述的分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述的分离的核酸分子，所述的载体，所述的细胞和/或中任一项所述的药物组合物，和/或药学上可接受的治疗剂。
另一方面，本申请提供了一种调节免疫应答的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的所述的药物组合，和/或药学上可接受的治疗剂。
另一方面，本申请提供了所述的分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述的分离的核酸分子，所述的载体，所述的细胞和/或所述的药物组合物，其用于预防、缓解和/或治疗肿瘤。
另一方面，本申请提供了所述的药物组合，其用于预防、缓解和/或治疗肿瘤。
在某些实施方式中，所述用途中的所述肿瘤包括与选自下组蛋白的表达相关的肿瘤：TIGIT，CD155和CD112。
在某些实施方式中，所述用途中的所述肿瘤包括实体瘤。
在某些实施方式中，所述用途中的所述肿瘤包括结肠癌。
另一方面，本申请提供了所述的分离的抗原结合蛋白和/或所述的多肽在制备预防和/或治疗疾病或病症的药物中的用途，其中所述疾病或病症包括肿瘤。
另一方面，本申请提供了所述的药物组合在制备预防和/或治疗疾病或病症的药物中的用途，其中所述疾病或病症包括肿瘤。
在某些实施方式中，所述用途中的所述肿瘤包括与选自下组蛋白的表达相关的肿瘤：TIGIT，CD155和CD112。
在某些实施方式中，所述用途中的所述肿瘤包括实体瘤。
在某些实施方式中，所述用途中的所述肿瘤包括结肠癌。
另一方面，本申请提供了一种预防和/或治疗疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的所述的分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述的分离的核酸分子，所述的载体，和/或所述的细胞，其中所述疾病或病症包括肿瘤。
另一方面，本申请提供了一种预防和/或治疗疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的所述的药物组合，其中所述疾病或病症包括肿瘤。
在某些实施方式中，所述方法中的所述肿瘤包括与选自下组蛋白的表达相关的肿瘤：TIGIT，CD155和CD112。
在某些实施方式中，所述方法中的所述肿瘤包括实体瘤。
在某些实施方式中，所述方法中的所述肿瘤包括结肠癌。
本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。
附图说明
本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明如下：
图1显示的是本申请所述TIGIT抗原与CD155的结合活性。
图2显示的是本申请所述第一批免疫小鼠效价。
图3显示的是本申请所述第二批免疫小鼠效价。
图4显示的是本申请所述第三批免疫小鼠效价。
图5显示的是本申请所述第四批免疫小鼠效价。
图6显示的是本申请所述第五批免疫小鼠效价。
图7显示的是本申请所述的抗原结合蛋白与表达于细胞上的人TIGIT的结合活性。
图8显示的是本申请所述的抗原结合蛋白对其配体CD155的阻断。
图9显示的是本申请所述的抗原结合蛋白的生物学活性。
图10显示的是本申请所述示例性的人源化抗TIGIT抗体与表达于细胞上的人TIGIT的结合活性。
图11显示的是本申请所述示例性的人源化抗TIGIT抗体对其配体CD155的阻断。
图12显示的是本申请所述示例性的人源化抗TIGIT抗体的生物学活性。
图13A-13B显示的是本申请所述示例性的抗TIGIT抗体A0在MC38细胞接种的TIGIT转基因小鼠中的肿瘤抑制效果。
图14A-14B显示的是本申请所述示例性的抗TIGIT抗体A1、A2分别和PD-1抗体联用在小鼠体内的肿瘤抑制效果。
图15A-15B显示的是本申请所述示例性的抗TIGIT抗体A1、A2分别和PD-L1抗体联用在小鼠体内的肿瘤抑制效果。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。
术语定义
在本申请中，术语“分离的”通常指从天然状态下经人工手段获得的。如果自然界中出现某一种“分离”的物质或成分，那么可能是其所处的天然环境发生了改变，或从天然环境下分离出该物质，或二者情况均有发生。例如，某一活体动物体内天然存在某种未被分离的多聚核苷酸或多肽，而从这种天然状态下分离出来的高纯度的相同的多聚核苷酸或多肽即称之为分离的。术语“分离的”不排除混有人工或合成的物质，也不排除存在不影响物质活性的其它不纯物质。
在本申请中，术语“抗原结合蛋白”通常是指一种能够特异性识别和/或中和特定抗原的多肽分子。例如，在本申请中，术语“抗原结合蛋白”可包括“抗体”或“抗原结合片段”。例如，所述抗体可包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链组成的免疫球蛋白，并且可包括任何包含其抗原结合部分的分子。术语“抗体”可包括单克隆抗体、抗体片段或抗体衍生物，包括但不限于鼠源抗体、人抗体(全人源抗体)、人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体(例如，scFv)，以及与抗原结合的抗体片段(例如，Fab、Fab’，VHH和(Fab)2片段)。术语“抗体”还可包括抗体的所有重组体形式，例如在原核细胞中表达的抗体、未糖基化的抗体以及本文所述的任何与抗原结合的抗体片段及其衍生物。每条重链可由重链可变区(VH)和重链恒定区构成。每条轻链可由轻链可变区(VL)和轻链恒定区构成。VH和VL区可进一步被区分为称为互补决定区(CDR)的高变区，它们散布在称为构架区(FR)的更保守的区域中。每个VH和VL可由三个CDR和四个FR区构成，它们从氨基端至羧基端可按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原(例如，人TIGIT)相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导该免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的多种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一成分(Clq)。所述CDRs的确切边界已根据不同系统不同地限定。由Kabat(Kabat等人，Sequencesof Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1987)和(1991))描述的系统，不仅提供了可应用于抗原结合片段的任何可变区的明确残基编号系统，还提供了限定CDRs的精确残基边界。这些CDRs可以被称为Kabat CDRs。Chothia和同事(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987)以及Chothia等人，Nature 342：877-883(1989))发现尽管在氨基酸序列水平上具有大的多样性，但是KabatCDRs内的某些亚部分采取几乎相同的肽主链构象。这些亚部分命名为L1、L2和L3或H1、H2和H3，其中“L”和“H”分别指轻链和重链区域。这些区域可以被称为Chothia CDRs，所述Chothia CDRs具有与Kabat CDRs重叠的边界。与Kabat CDRs重叠的限定CDRs的其他边界已由Padlan(FASEB J.9：133-139(1995))和MacCallum(J Mol Biol 262(5)：732-45(1996))描述。另外，其他的CDR边界定义可能不严格地遵循上述系统之一，但仍将与Kabat CDRs重叠，尽管按照特定残基或残基组或甚至整个CDRs并不显著影响抗原结合的预测或实验发现，它们可以缩短或加长。在本申请中，所述CDR可通过Kabat编号系统定义。
在本申请中，术语“抗原结合片段”通常是指抗体中发挥特异性结合抗原功能的一个或多个片段。抗体的抗原结合功能可通过抗体的全长片段来实现。抗体的抗原结合功能也可通过以下来实现：包括Fv、ScFv、dsFv、Fab、Fab’或F(ab’)2的片段的重链，或者，包括Fv、scFv、dsFv、Fab、Fab’或F(ab’)2的片段的轻链。(1)Fab片段，通常为由VL、VH、CL和CH结构域组成的一价片段；(2)F(ab’)2片段，包含通过铰链区处的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(3)由VH和CH结构域组成的Fd片段；(4)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；(5)由VH结构域组成的dAb片段(Ward等，(1989)Nature 341：544-546)；(6)分离的互补决定区(CDR)和(7)可任选地通过接头连接的两个或以上分离的CDR的组合。例如，还可包括由VL和VH配对形成的一价单链分子Fv(scFv)(参见Bird等(1988)Science 242：423-426；以及Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.85：5879-5883)。例如，还可包括缺失抗体轻链而只有重链可变区的一类抗体VHH(例如，可参见康晓圳等，生物工程学报,2018,34(12):1974-1984)。所述“抗原结合部分”还可包括免疫球蛋白融合蛋白，所述融合蛋白包含选自以下的结合结构域：(1)与免疫球蛋白铰链区多肽融合的结合结构域多肽；(2)与铰链区融合的免疫球蛋白重链CH2恒定区；和(3)与CH2恒定区融合的免疫球蛋白重链CH3恒定区。
在本申请中，术语“单克隆抗体”通常是指一群基本同源的抗体，即包含该群的各个抗体除了可能的以微量存在的天然发生的突变之外是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，直接针对单个抗原性位点。例如，所述单克隆抗体可以通过杂交瘤技术制备或者通过使用重组DNA方法在细菌、真核动物或植物细胞中产生。单克隆抗体也可以得自噬菌体抗体文库，使用例如Clackson etal.,Nature,352:624-628(1991)和Marks et al.,Mol.Biol.，222:581-597(1991)所述的技术进行。
在本申请中，术语“嵌合抗体”通常是指这样的抗体，其中每个重链或轻链氨基酸序列的一部分与来自特定物种的抗体中相应氨基酸序列同源，或者属于特定的类别，而该链的其余区段则与另一物种中的相应序列同源。例如，轻链和重链的可变区均来自一个动物物种(如小鼠、大鼠等)的抗体的可变区，而恒定部分则与来自另一物种(如人)的抗体序列同源。例如，为获得嵌合抗体，可利用非人源的B细胞或杂交瘤细胞产生可变区，而与其组合的恒定区则来自人。所述可变区具有易于制备的优点，并且其特异性不受与其组合的恒定区的来源的影响。同时，由于嵌合抗体的恒定区可来源于人类，因此嵌合在注射时抗体引发免疫应答的可能性会低于使用恒定区为非人来源的抗体。
在本申请中，术语“人源化抗体”通常是指一种嵌合抗体，其含有较少的来自非人免疫球蛋白的序列，从而降低异种抗体引入到人类中时的免疫原性，同时保持抗体的完全抗原结合亲和力和特异性。例如，可以使用CDR移植(Jones et al.,Nature 321:522(1986))及其变体；包括“重塑”(reshaping)，(Verhoeyen,et al.,1988Science 239:1534-1536；Riechmann,et al.,1988Nature 332:323-337；Tempest,et al.,Bio/Technol 19919:266-271)，“高度加成”(hyperchimerization)，(Queen,et al.,1989Proc Natl AcadSci USA 86:10029-10033；Co,et al.,1991Proc Natl Acad Sci USA 88:2869-2873；Co,et al.,1992J Immunol 148:1149-1154)和“贴面”(veneering)，(Mark,et al.,“Derivation of therapeutically active humanized and veneered anti-CD18antibodies.”In:Metcalf B W,Dalton B J,eds.Cellular adhesion:moleculardefinition to therapeutic potential.New York:Plenum Press,1994:291-312)、表面重建(美国专利US5639641)等技术手段，对非人源的结合域进行人源化。如果其他区域，例如铰链区和恒定区结构域也源自非人来源，则这些区域也可以被人源化。
在本申请中，术语“鼠源抗体”通常是指可变区框架和CDR区得自小鼠种系免疫球蛋白序列的抗体。此外，如果抗体包含恒定区，其也得自小鼠种系免疫球蛋白序列。本申请的鼠源抗体可以包含不由小鼠种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基，例如可以包括通过体外随机突变或点突变或通过体内体细胞突变而导入的突变。
在本申请中，术语“TIGIT蛋白”或“TIGIT抗原”可以互换使用，并且包括TIGIT的任何功能活性片段、变体和同源物，其由细胞天然表达或在用TIGIT基因转染的细胞上表达。在本申请中，TIGIT可以为人TIGIT，其在UniProt/Swiss-Prot中的登录号为Q495A1。例如，TIGIT可以为人TIGIT的功能活性片段。例如，所述“功能活性片段”可以包括保留至少一种天然存在的蛋白质的内源功能(例如，与本申请所述的抗原结合蛋白结合)的片段。例如，所述“功能活性片段”可以包括与本申请的抗原结合蛋白结合的结构域。在本申请中，TIGIT可在免疫细胞表面表达。例如，可在调节性T细胞(Treg)表面表达。
除了本文提到的特定蛋白质和核苷酸之外，本申请还可包括其功能活性片段、衍生物、类似物、同源物及其片段。
术语“功能活性片段”指与天然存在序列具有基本上同一的氨基酸序列或由基本上同一的核苷酸序列编码并能够具有天然存在序列的一种或多种活性的多肽。在本申请的上下文中，任何给定序列的功能活性片段是指其中残基的特定序列(无论是氨基酸或核苷酸残基)已经经过修饰而使得所述多肽或多核苷酸基本上保留至少一种内源功能的序列。可以通过天然存在的蛋白质和/或多核苷酸中存在的至少一个氨基酸残基和/或核苷酸残基的添加、缺失、取代、修饰、替换和/或变异来获得编码功能活性片段的序列，只要保持原来的功能活性即可。
在本申请中，术语“衍生物”通常是指本申请的多肽或多核苷酸而言包括自/对序列的一个(或多个)氨基酸残基的任何取代、变异、修饰、替换、缺失和/或添加，只要所得的多肽或多核苷酸基本上保留其至少一种内源功能。
在本申请中，术语“类似物”通常对多肽或多核苷酸而言，包括多肽或多核苷酸的任何模拟物，即拥有该模拟物模拟的多肽或多核苷酸的至少一种内源功能的化学化合物。
通常，可以进行氨基酸取代，例如至少1个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或20个以上)氨基酸取代，只要经修饰的序列基本上保持需要的活性或能力。氨基酸取代可包括使用非天然存在的类似物。
在本申请中，术语“同源物”通常是指与天然存在序列具有一定同源性的氨基酸序列或核苷酸序列。术语“同源性”可以等同于序列“同一性”。同源序列可以包括可以与主题序列是至少80％、85％、90％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％相同的氨基酸序列。通常，同源物将包含与主题氨基酸序列相同的活性位点等。同源性可以根据相似性(即具有相似化学性质/功能的氨基酸残基)来考虑，也可以在序列同一性方面表达同源性。在本申请中，提及的氨基酸序列或核苷酸序列的SEQ ID NO中的任一项具有百分比同一性的序列是指在所提及的SEQ ID NO的整个长度上具有所述百分比同一性的序列。为了确定序列同一性，可进行序列比对，其可通过本领域技术人员了解的各种方式进行，例如，使用BLAST、BLAST-2、ALIGN、NEEDLE或Megalign(DNASTAR)软件等。本领域技术人员能够确定用于比对的适当参数，包括在所比较的全长序列中实现最优比对所需要的任何算法。
用于本申请的蛋白质或多肽也可以具有氨基酸残基的缺失、插入或取代，所述氨基酸残基产生沉默的变化并导致功能上等同的蛋白质。可以根据残基的极性、电荷、溶解性、疏水性、亲水性和/或两性性质的相似性进行有意的氨基酸取代，只要保留内源性功能即可。例如，带负电荷的氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸；带正电荷的氨基酸包括赖氨酸和精氨酸；并且含具有相似亲水性值的不带电极性头基的氨基酸包括天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸。
在本申请中，术语“肿瘤”通常是指局部组织细胞增生所形成的赘生物。例如，所述肿瘤可包括实体瘤。例如，所述肿瘤可包括与TIGIT，CD155或CD112的表达相关的肿瘤。术语“与TIGIT，CD155或CD112的表达相关的肿瘤”通常是指存在TIGIT，CD155或CD112表达的肿瘤。所述“与TIGIT的表达相关的肿瘤”可以包括TIGIT表达异常的肿瘤。例如，在TIGIT表达异常的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的TIGIT表达量上调或下调。所述与TIGIT、CD155或CD112的蛋白表达相关的肿瘤可以是TIGIT、CD155或CD112阳性的肿瘤。在TIGIT、CD155或CD112阳性的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的TIGIT、CD155或CD112的蛋白表达量高约1％，5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％或更高。
在本申请中，术语“实体瘤”通常是指可通过临床检测(例如，X线射片，CT扫描，B超或触诊)到的有形肿块。例如，所述实体瘤可以包括结肠癌。
在本申请中，术语“免疫缀合物”通常是指所述其他治疗剂与所述分离的抗原结合蛋白缀合(例如，通过连接分子共价相连)而形成的缀合物，该缀合物可以通过所述分离的抗原结合蛋白与靶细胞上的抗原的特异性结合，将所述其他治疗剂递送至靶细胞(例如，肿瘤细胞)。此外，所述抗原也可以由所述靶细胞分泌，并位于所述靶细胞外的间隙。
在本申请中，术语“受试者”通常指人类或非人类动物，包括但不限于猫、狗、马、猪、奶牛、羊、兔、小鼠、大鼠或猴。
在本申请中，术语“核酸分子”通常是指从其天然环境中分离的或人工合成的任何长度的分离形式的核苷酸、脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物。
在本申请中，术语“载体”通常是指一种核酸分子，该种核酸分子能够转运与其连接的另一核酸。所述载体可将插入的核酸分子转移到细胞中和/或细胞之间。所述载体可包括主要用于将DNA或RNA插入细胞中的载体、主要用于复制DNA或RNA的载体，以及主要用于DNA或RNA的转录和/或翻译的表达的载体。所述载体可以是当引入合适的细胞时能够转录并翻译成多肽的多核苷酸。通常，通过培养包含所述载体的合适的细胞，所述载体可以产生期望的表达产物。在本申请中，所述载体可包含慢病毒载体。
在本申请中，术语“细胞”通常是指可以或已经含有包括本申请所述的核酸分子的质粒或载体，或者能够表达本申请所述的多肽或本申请所述的抗原结合蛋白的个体细胞，细胞系或细胞培养物。所述细胞可以包括单个细胞的子代。由于天然的，意外的或故意的突变，子代细胞与原始亲本细胞在形态上或在基因组上可能不一定完全相同，但能够表达本申请所述的多肽或抗原结合蛋白即可。所述细胞可以通过使用本申请所述的载体体外转染细胞而得到。所述细胞可以是原核细胞(例如大肠杆菌)，也可以是真核细胞(例如酵母细胞，例如COS细胞，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，HeLa细胞，HEK293细胞，COS-1细胞，NS0细胞或骨髓瘤细胞)。在一些实施方式中，所述细胞可以是免疫细胞。例如，所述免疫细胞可以选自下组：T细胞、B细胞、天然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞、NKT细胞、单核细胞、树突状细胞、粒细胞、淋巴细胞、白细胞和/或外周血单个核细胞。
在本申请中，术语“治疗”通常是指：(i)预防可能易患疾病、病症和/或病状、但尚未诊断出患病的患者出现该疾病、病症或病状；(ii)抑制该疾病、病症或病状，亦即遏制其发展；以及(iii)缓解该疾病、病症或病状，亦即使得该疾病、病症和/或病状和/或与该疾病、病症和/或病状相关联的症状消退。
在本申请中，术语“多肽”、“肽”、“蛋白”和“蛋白质”可互换地使用，通常是指具有任何长度的氨基酸的聚合物。该聚合物可以是直链或支链的，它可以包含修饰的氨基酸，并且可以被非氨基酸中断。这些术语还涵盖已经被修饰的氨基酸聚合物。这些修饰可以包含：二硫键形成、糖基化、脂化(lipidation)、乙酰化、磷酸化、或任何其他操纵(如与标记组分结合)。术语“氨基酸”包括天然的和/或非天然的或者合成的氨基酸，包括甘氨酸以及D和L旋光异构体、以及氨基酸类似物和肽模拟物。
在本申请中，术语“多核苷酸”、“核苷酸”、“核苷酸序列”、“核酸”和“寡核苷酸”可互换地使用，通常是指具有任何长度的核苷酸的聚合形式，如脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸、或其类似物。多核苷酸可具有任何三维结构，并且可以执行已知或未知的任何功能。以下是多核苷酸的非限制性实例：基因或基因片段的编码区或非编码区、根据连接分析定义的多个座位(一个座位)、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转运RNA、核糖体RNA、短干扰RNA(siRNA)、短发夹RNA(shRNA)、micro-RNA(miRNA)、核酶、cDNA、重组多核苷酸、分支多核苷酸、质粒、载体、任何序列的分离的DNA、任何序列的分离的RNA、核酸探针、和引物。多核苷酸可以包含一个或多个经修饰的核苷酸，如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。如果存在，可以在聚合物组装之前或之后进行核苷酸结构的修饰。核苷酸的序列可以被非核苷酸组分中断。多核苷酸可以在聚合后，如通过与标记的组分缀合来进一步修饰。
在本申请中，术语“KD”(同样地，“KD”或“KD”)通常指“亲和常数”或“平衡解离常数”，并指在滴定测量中在平衡时、或者通过将解离速率常数(kd)除以结合速率常数(ka)所获得的值。使用结合速率常数(ka)、解离速率常数(kd)和平衡解离常数(KD)表示结合蛋白(例如本申请所述的分离的抗原结合蛋白)对抗原(例如，PD-1蛋白)的结合亲和力。确定结合和解离速率常数的方法为本领域熟知。使用基于荧光的技术提供了高灵敏度以及在生理缓冲液中在平衡时检查样品的能力。例如，可以通过Octet测定所述KD值，也可以使用其他实验途径和仪器例如BIAcore(生物分子相互作用分析)测定(例如，可以从BIAcoreInternationalAB，aGEHealthcarecompany，Uppsala，瑞典获得的仪器)。另外，也可以使用可以从SapidyneInstruments(Boise，Idaho)获得的KinExA(动态排阻测定(KineticExclusionAssay))测定所述KD值，或者使用表面等离子共振仪(SPR)测定所述KD值。在本申请中，可以通过胺偶联试剂盒测定所述KD值。
在本申请中，术语“和/或”应理解为意指可选项中的任一项或可选项的两项。
在本申请中，术语“包含”通常是指包括明确指定的特征，但不排除其他要素。在某些情形中，“包含”也涵盖仅包括指定的组分的情况。例如，包含也表示为也表示“由……组成”的含义。
在本申请中，术语“约”通常是指在指定数值以上或以下0.5％-10％的范围内变动，例如在指定数值以上或以下0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、或10％的范围内变动。
在本申请中，术语“包括”通常是指包含、总括、含有或包涵的含义。在某些情况下，也表示“为”、“由……组成”的含义。
发明详述
本申请所述分离的抗原结合蛋白
一方面，本申请提供一种分离的抗原结合蛋白，其在Biacore测定中，可以以约5E-09M或以下的KD值(例如，所述KD不高于约5E-09M、不高于约4.5E-09M、不高于约4E-09M、不高于约3.5E-09M、不高于约3E-09M、不高于约2.5E-09M、不高于约2E-09M、不高于约1.5E-09M、不高于约1E-09M、不高于约9E-10M、不高于约5E-10M、不高于约1E-10M、不高于约5E-11M、不高于约1E-11M或不高于5E-12M或以下)与人TIGIT蛋白特异性结合。
在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白在流式检测中，可以以约0.5μg/ml或以下的EC50值(例如，所述EC50值不高于约0.5μg/ml、不高于约0.4μg/ml、不高于约0.3μg/ml、不高于约0.2μg/ml或不高于约0.1μg/ml或以下)与表达于CHOK1细胞上的人TIGIT特异性结合。
在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可以阻断CD155与TIGIT结合。例如，可以通过ELISA检测测定所述分离的抗原结合蛋白阻断CD155与TIGIT结合的能力。例如，所述分离的抗原结合蛋白可以以约0.5μg/ml或以下的EC50值(例如，所述EC50值不高于约0.5μg/ml、不高于约0.4μg/ml、不高于约0.3μg/ml、不高于约0.2μg/ml或不高于约0.1μg/ml或以下)阻断CD155与TIGIT结合。
在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可激活CD226-NFAT信号通路。例如，可以通过荧光素酶报告基因系统检测CD226-NFAT信号通路是否激活。在荧光素酶报告基因系统检测中，TIGIT可以与CD226竞争结合CD155，从而抑制Jurkat-hTIGIT-NFAT-CD226细胞效应功能，使荧光素酶表达降低；抗TIGIT抗体与Jurkat-hTIGIT-NFAT-CD226细胞上的TIGIT结合后，可以阻断CHOK1-CD155-2A-OKT3细胞的CD155与TIGIT的结合，OKT3和CD226结合激活Jurkat-hTIGIT-NFAT-CD226细胞，增强荧光素酶表达。在本申请中，所述抗TIGIT抗体可以以约1.5μg/ml或以下生物发光(RLU)的EC50值(例如，EC50值不高于约1.5μg/ml、不高于约1.4μg/ml、不高于约1.3μg/ml、不高于约1.2μg/ml、不高于约1.1μg/ml、不高于约1.0μg/ml、不高于约0.9μg/ml、不高于约0.8μg/ml、不高于约0.7μg/ml、不高于0.5μg/ml、0.3μg/ml或0.lμg/ml或以下)阻断人TIGIT与人CD155相互作用。
一方面，本申请提供一种分离的抗原结合蛋白，其可以包含抗体重链可变区VH中的至少一个CDR，所述VH可以包含SEQ ID NO：78所示的氨基酸序列。
例如，所述VH可以包含SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29中任一项所示的氨基酸序列。在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白的HCDR可以通过任何形式划分，只要VH与SEQ IDNO:28和SEQ ID NO:29中任一项所示的氨基酸序列相同，以任何形式划分得到的HCDR都可落入本申请的保护范围内。
抗体的CDR又称互补决定区，是可变区的一部分。该区域的氨基酸残基可以与抗原或抗原表位接触。抗体CDR可以通过多种编码系统来确定，如CCG、Kabat、Chothia、IMGT、AbM、综合考虑Kabat/Chothia等。这些编码系统为本领域内已知，具体可参见，例如，http://www.bioinf.org.uk/abs/index.html#kabatnum。本领域技术人员可以根据抗体的序列和结构，用不同的编码系统确定出CDR区。使用不同的编码系统，CDR区可能存在差别。在本申请中，所述CDR涵盖根据任何CDR划分方式划分得到的CDR序列；也涵盖其变体，所述变体包括所述CDR的氨基酸序列经过取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸。例如1-30个、1-20个或1-10个，又例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或9个氨基酸取代、缺失和/或插入；也涵盖其同源物，所述同源物可以为与所述CDR的氨基酸序列具有至少约85％(例如，具有至少约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高的)序列同源性的氨基酸序列。在某些实施方式中，本申请所述分离的抗原结合蛋白通过Kabat编码系统定义。
在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可与人TIGIT结合。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区VH，所述VH可包含HCDR1、HCDR2和HCDR3中的至少一个、两个或三个。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的HCDR3可包含SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的HCDR3序列可根据Kabat编码系统定义。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的HCDR2可包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的HCDR2序列可根据Kabat编码系统定义。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的HCDR1序列可根据Kabat编码系统定义。
例如，所述抗原结合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的HCDR2可包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；且所述抗原结合蛋白的HCDR3可包含SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A0到A4或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有HCDR1-3)的抗体。
例如，所述抗原结合蛋白的VH可包含框架区H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO：70所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的H-FR1序列可根据Kabat编码系统定义。
X1LQLX5QSGX9EX11X12KPGASVKX20SCKASGYSFT(SEQ ID NO：70)，其中，X1可以是E或Q，X5可以是Q或V，X9可以是A或P，X11可以是L或V，X12可以是K或V，X20可以是I或V。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:15中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO：71所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的H-FR2序列可根据Kabat编码系统定义。
WVX3QX5X6GX8SLEWIG(SEQ ID NO：71)，其中，X3可以是K或R，X5可以是A或S，X6可以是N或P，X8可以是K或Q。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:16中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO：72所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的H-FR3序列可根据Kabat编码系统定义。
X1X2TX4TX6DQSX10STAYMX16LNSLX21SEDX25AVYYCAN(SEQ ID NO：72)，其中，X1可以是K或R，X2可以是A或V，X4可以是L或M，X6可以是R或V，X10可以是S或T，X16可以是E或Q，X21可以是R或T，X25可以是S或T。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:17中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR4可包含SEQ ID NO：73所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的H-FR4序列可根据Kabat编码系统定义。
WGX3GTX6VTVSS(SEQ ID NO：73)，其中，X3可以是Q或T，X6可以是L或T。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR4可包含SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:15中任一项所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:16中任一项所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:17中任一项所示的氨基酸序列；且所述抗原结合蛋白的H-FR4可包含SEQ ID NO:10和SEQ IDNO:18中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列；且所述抗原结合蛋白的H-FR4可包含SEQ IDNO：10所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A0或与其具有相同H-FR1-4的抗体。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的H-FR2可包含SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的H-FR3可包含SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列；且所述抗原结合蛋白的H-FR4可包含SEQ IDNO：18所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A1-A4或与其具有相同H-FR1-4的抗体。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区，所述重链可变区可包含SEQID NO：78所示的氨基酸序列。
X1LQLX5QSGX9EX11X12KPGASVKX20SCKASGYSFTDYNMNWVX38QX40X41GX43SLEWIGVINPNHGTISYNQKFKGX67X68TX70TX72DQSX76STAYMX82LNSLX87SEDX91AVYYCANNWDVWYFDVWGX110GTX113VTVSS(SEQ ID NO：78)，其中，X1可以是E或Q，X5可以是Q或V，X9可以是A或P，X11可以是L或V，X12可以是K或V，X20可以是I或V，X38可以是K或R，X40可以是A或S，X41可以是N或P，X43可以是K或Q，X67可以是K或R，X68可以是A或V，X70可以是L或M，X72可以是R或V，X76可以是S或T，X82可以是E或Q，X87可以是R或T，X91可以是S或T，X110可以是Q或T，X113可以是L或T。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的重链可变区可包含SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链恒定区，所述重链恒定区可包括源自IgG的恒定区或源自IgY的恒定区。
例如，所述抗原结合蛋白可包括源自IgG的恒定区。例如，所述抗原结合蛋白可包括重链。其中所述重链可包括重链可变区和重链恒定区。所述重链可变区和所述重链恒定区可直接或间接地相连。例如，所述重链可变区可以与所述重链恒定区直接相连。例如，所述重链恒定区可以包含源自选自下组蛋白的恒定区：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。例如，所述抗原结合蛋白的重链恒定区可包含SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57和SEQ IDNO:58所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可以包含抗体轻链可变区VL中的至少一个CDR，所述VL可以包含SEQ ID NO：79所示的氨基酸序列。
例如，所述抗原结合蛋白的VL可以包含SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34中任一项所示的氨基酸序列。在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白的LCDR可以通过任何形式划分，只要VL与SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ IDNO:32、SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34中任一项所示的氨基酸序列相同，以任何形式划分得到的LCDR都可落入本申请的保护范围内。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包括轻链可变区VL，所述VL可包含LCDR1、LCDR2和LCDR3中的至少一个，至少两个或至少三个。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的LCDR3可包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的LCDR3可根据Kabat编号系统定义。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的LCDR2可包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的LCDR2可根据Kabat编号系统定义。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的LCDR1可包含SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的LCDR1可根据Kabat编号系统定义。
例如，本申请所述抗原结合蛋白的LCDR1可包含SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的LCDR2可包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列；且所述抗原结合蛋白的LCDR3可包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A0到A4或与其具有相同LCDR3(例如，与其具有相同LCDR1-3)的抗体。
例如，所述抗原结合蛋白的VL可包含框架区L-FR1，L-FR2，L-FR3和L-FR4。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的L-FR1可包含SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的L-FR1可根据Kabat编号系统定义。
DIQMTQSPX9SLSASVGX17X18VTITC(SEQ ID NO：74)，其中，X9可以是A或S，X17可以是D或E，X18可以是R或T。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的L-FR1可包含SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:19中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的L-FR2可包含SEQ ID NO：75所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的L-FR2可根据Kabat编号系统定义。
WYX3QKX6GX8X9PX11LLX14Y(SEQ ID NO：75)，其中，X3可以是Q或R，X6可以是P或Q，X8可以是K或N，X9可以是A或S，X11可以是K或Q，X14可以是I或V。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的L-FR2可包含SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:20、SEQID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:26中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的L-FR3可包含SEQ ID NO：76所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的L-FR3可根据Kabat编号系统定义。
GVPSRFSGSGSGTX14FX16LX18IX20SLQPEDFX28X29YYC(SEQ ID NO：76)，其中，X14可以是D或Q，X16可以是S或T，X18可以是K或T，X20可以是N或S，X28可以是A或G，X29可以是S或T。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的L-FR3可包含SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:25中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的L-FR4可包含SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的L-FR4可根据Kabat编号系统定义。
FGX3GTKX7EIK(SEQ ID NO：77)，其中，X3可以是G或Q，X7可以是L或V。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的L-FR4可包含SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:27中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的L-FR1可包含SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:19中任一项所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的L-FR2可包含SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:26中任一项所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的L-FR3可包含SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:25中任一项所示的氨基酸序列；且所述抗原结合蛋白的L-FR4可包含SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:27中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的L-FR1可包含SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的L-FR2可包含SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的L-FR3可包含SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列；且所述抗原结合蛋白的L-FR4可包含SEQ IDNO：14所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A0或与其具有相同L-FR1-4的抗体。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的L-FR1可包含SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的L-FR2可包含SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的L-FR3可包含SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列；且所述抗原结合蛋白的L-FR4可包含SEQ IDNO：22所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A1或与其具有相同H-FR1-4的抗体。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的L-FR1可包含SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的L-FR2可包含SEQ ID NO：23所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的L-FR3可包含SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列；且所述抗原结合蛋白的L-FR4可包含SEQ IDNO：22所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A2或与其具有相同L-FR1-4的抗体。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的L-FR1可包含SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的L-FR2可包含SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的L-FR3可包含SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列；且所述抗原结合蛋白的L-FR4可包含SEQ IDNO：22所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A3或与其具有相同H-FR1-4的抗体。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的L-FR1可包含SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的L-FR2可包含SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列；所述抗原结合蛋白的L-FR3可包含SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列；且所述抗原结合蛋白的L-FR4可包含SEQ IDNO：27所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A4或与其具有相同L-FR1-4的抗体。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含轻链可变区，所述轻链可变区可包含SEQID NO：79所示的氨基酸序列。
DIQMTQSPX9SLSASVGX17X18VTITCRPSENIYSYLAWYX37QKX40GX42X43PX45LLX48YNAKALAEGVPSRFSGSGSGTX70FX72LX74IX76SLQPEDFX84X85YYCQHHFGAPWTFGX100GTKX104EIK(SEQ ID NO：79)，其中，X9可以是A或S，X17可以是D或E，X18可以是R或T，X37可以是Q或R，X40可以是P或Q，X42可以是K或N，X43可以是A或S，X45可以是K或Q，X48可以是I或V，X70可以是D或Q，X72可以是S或T，X74可以是K或T，X76可以是N或S，X84可以是A或G，X85可以是S或T，X100可以是G或Q，X104可以是L或V。
在本申请中，所述抗原结合蛋白的轻链可变区可包含SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含轻链恒定区，所述轻链恒定区可包括源自Igκ的恒定区或源自Igλ的恒定区。例如，所述轻链恒定区可包括源自Igκ的恒定区。
例如，所述抗原结合蛋白的轻链恒定区包含SEQ ID NO:80中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含HCDR1-3和LCDR1-3。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述LCDR1可包括SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述LCDR2可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述LCDR3可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A0-A4或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同HCDR1-3)和LCDR3(例如，与其具有相同LCDR1-3)的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区和轻链可变区。所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述抗原结合蛋白可包含SEQ ID NO：28所示的重链可变区的HCDR1-3。所述轻链可变区可包含LCDR1-3以及L-FR1-4。例如，所述抗原结合蛋白可包含SEQ ID NO：30所示的轻链可变区的LCDR1-3。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQID NO:3所示的氨基酸序列；所述LCDR1可包括SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述LCDR2可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述LCDR3可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQID NO:10所示的氨基酸序列；所述L-FR1可包括SEQ ID NO:11的氨基酸序列；所述L-FR2可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；所述L-FR3可包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；所述L-FR4可包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的重链可变区可包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗原结合片段A0或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述抗原结合蛋白的轻链可变区可包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A0或与其具有相同轻链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白包含重链和轻链，所述抗原结合蛋白的重链可包含SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A0或与其具有相同重链的抗原结合蛋白。例如，所述抗原结合蛋白的轻链可包含SEQ ID NO:83所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A0或与其具有相同轻链的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述抗原结合蛋白可包含SEQ ID NO：29所示的重链可变区的HCDR1-3。所述轻链可变区可包含LCDR1-3以及L-FR1-4。例如，所述抗原结合蛋白可包含SEQ ID NO：31所示的轻链可变区的LCDR1-3。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQID NO:3所示的氨基酸序列；所述LCDR1可包括SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述LCDR2可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述LCDR3可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列；所述L-FR1可包括SEQ ID NO:19的氨基酸序列；所述L-FR2可包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列；所述L-FR3可包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列；所述L-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的重链可变区可包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗原结合片段A1或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述抗原结合蛋白的轻链可变区可包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A1或与其具有相同轻链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白包含重链和轻链，所述抗原结合蛋白的重链可包含SEQ ID NO:82所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A1或与其具有相同重链的抗原结合蛋白。例如，所述抗原结合蛋白的轻链可包含SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A1或与其具有相同轻链的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述抗原结合蛋白可包含SEQ ID NO：29所示的重链可变区的HCDR1-3。所述轻链可变区可包含LCDR1-3以及L-FR1-4。例如，所述抗原结合蛋白可包含SEQ ID NO：32所示的轻链可变区的LCDR1-3。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQID NO:3所示的氨基酸序列；所述LCDR1可包括SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述LCDR2可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述LCDR3可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列；所述L-FR1可包括SEQ ID NO:19的氨基酸序列；所述L-FR2可包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；所述L-FR3可包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列；所述L-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的重链可变区可包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗原结合片段A2或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述抗原结合蛋白的轻链可变区可包含SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A2或与其具有相同轻链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白包含重链和轻链，所述抗原结合蛋白的重链可包含SEQ ID NO:82所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A2或与其具有相同重链的抗原结合蛋白。例如，所述抗原结合蛋白的轻链可包含SEQ ID NO:85所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A2或与其具有相同轻链的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述抗原结合蛋白可包含SEQ ID NO：29所示的重链可变区的HCDR1-3。所述轻链可变区可包含LCDR1-3以及L-FR1-4。例如，所述抗原结合蛋白可包含SEQ ID NO：33所示的轻链可变区的LCDR1-3。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQID NO:3所示的氨基酸序列；所述LCDR1可包括SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述LCDR2可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述LCDR3可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列；所述L-FR1可包括SEQ ID NO:19的氨基酸序列；所述L-FR2可包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列；所述L-FR3可包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列；所述L-FR4可包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的重链可变区可包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗原结合片段A3或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述抗原结合蛋白的轻链可变区可包含SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A3或与其具有相同轻链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白包含重链和轻链，所述抗原结合蛋白的重链可包含SEQ ID NO:82所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A3或与其具有相同重链的抗原结合蛋白。例如，所述抗原结合蛋白的轻链可包含SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A3或与其具有相同轻链的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区可包含HCDR1-3以及H-FR1-4。例如，所述抗原结合蛋白可包含SEQ ID NO：29所示的重链可变区的HCDR1-3。所述轻链可变区可包含LCDR1-3以及L-FR1-4。例如，所述抗原结合蛋白可包含SEQ ID NO：34所示的轻链可变区的LCDR1-3。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQID NO:3所示的氨基酸序列；所述LCDR1可包括SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述LCDR2可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述LCDR3可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。例如，所述H-FR1可包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；所述H-FR2可包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；所述H-FR3可包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；所述H-FR4可包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列；所述L-FR1可包括SEQ ID NO:19的氨基酸序列；所述L-FR2可包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；所述L-FR3可包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列；所述L-FR4可包含SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白的重链可变区可包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗原结合片段A4或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述抗原结合蛋白的轻链可变区可包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A4或与其具有相同轻链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗原结合蛋白包含重链和轻链，所述抗原结合蛋白的重链可包含SEQ ID NO:82所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A4或与其具有相同重链的抗原结合蛋白。例如，所述抗原结合蛋白的轻链可包含SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列。例如，所述抗原结合蛋白可包括抗体A4或与其具有相同轻链的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白还可与参比抗体竞争结合所述人TIGIT蛋白，所述参比抗体可包含重链可变区VH，所述VH可包含HCDR1、HCDR2和HCDR3中的至少一个、两个或三个。
在本申请中，所述参比抗体的HCDR3可包含SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的HCDR3的序列可根据Kabat编码系统定义。
在本申请中，所述参比抗体的HCDR2可包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的HCDR2的序列可根据Kabat编码系统定义。
在本申请中，所述参比抗体的HCDR1可包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的HCDR1的序列可根据Kabat编码系统定义。
例如，所述参比抗体的HCDR1可包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可包含SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体A0到A4或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同HCDR1-3)的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述参比抗体可包含重链可变区，所述重链可变区可包含SEQ IDNO：78所示的氨基酸序列。
X1LQLX5QSGX9EX11X12KPGASVKX20SCKASGYSFTDYNMNWVX38QX40X41GX43SLEWIGVINPNHGTISYNQKFKGX67X68TX70TX72DQSX76STAYMX82LNSLX87SEDX91AVYYCANNWDVWYFDVWGX110GTX113VTVSS(SEQ ID NO：78)，其中，X1可以是E或Q，X5可以是Q或V，X9可以是A或P，X11可以是L或V，X12可以是K或V，X20可以是I或V，X38可以是K或R，X40可以是A或S，X41可以是N或P，X43可以是K或Q，X67可以是K或R，X68可以是A或V，X70可以是L或M，X72可以是R或V，X76可以是S或T，X82可以是E或Q，X87可以是R或T，X91可以是S或T，X110可以是Q或T，X113可以是L或T。
在本申请中，所述参比抗体的重链可变区可包含SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述参比抗体可包含重链恒定区，所述重链恒定区可包括源自IgG的恒定区或源自IgY的恒定区。
例如，所述参比抗体的重链恒定区可包含SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ IDNO:57和SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述参比抗体可包括轻链可变区VL，所述VL可包含LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在本申请中，所述参比抗体的LCDR3可包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的LCDR3的序列可根据Kabat编码系统定义。
在本申请中，所述参比抗体的LCDR2可包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的LCDR2的序列可根据Kabat编码系统定义。
在本申请中，所述参比抗体的LCDR1可包含SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的LCDR1的序列可根据Kabat编码系统定义。
例如，本申请所述参比抗体的LCDR1可包含SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列；所述LCDR2可包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列；且所述LCDR3可包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体A0到A4或与其具有相同LCDR3(例如，与其具有相同LCDR1-3)的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述参比抗体可包含轻链可变区，所述轻链可变区可包含SEQ IDNO：79所示的氨基酸序列。
DIQMTQSPX9SLSASVGX17X18VTITCRPSENIYSYLAWYX37QKX40GX42X43PX45LLX48YNAKALAEGVPSRFSGSGSGTX70FX72LX74IX76SLQPEDFX84X85YYCQHHFGAPWTFGX100GTKX104EIK(SEQ ID NO：79)，其中，X9可以是A或S，X17可以是D或E，X18可以是R或T，X37可以是Q或R，X40可以是P或Q，X42可以是K或N，X43可以是A或S，X45可以是K或Q，X48可以是I或V，X70可以是D或Q，X72可以是S或T，X74可以是K或T，X76可以是N或S，X84可以是A或G，X85可以是S或T，X100可以是G或Q，X104可以是L或V。
在本申请中，所述参比抗体的轻链可变区可包含SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述参比抗体可包含轻链恒定区，所述轻链恒定区包括源自Igκ的恒定区或源自Igλ的恒定区。
例如，所述参比抗体的轻链恒定区包含SEQ ID NO：80所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述参比抗体可包含HCDR1-3和LCDR1-3。例如，所述HCDR1可包含SEQID NO:1所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述LCDR1可包括SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述LCDR2可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述LCDR3可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体A0-A4或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同HCDR1-3)和LCDR3(例如，与其具有相同LCDR1-3)的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述参比抗体可包含重链可变区和轻链可变区。例如，所述参比抗体的重链可变区可包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体A0或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述参比抗体的轻链可变区可包含SEQID NO:30所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体A0或与其具有相同轻链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述参比抗体可包括抗体A0或与其具有相同重链可变区及轻链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述参比抗体可包含重链可变区和轻链可变区。例如，所述参比抗体的重链可变区可包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体A1或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述参比抗体的轻链可变区可包含SEQID NO:31所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体A1或与其具有相同轻链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述参比抗体可包括抗体A1或与其具有相同重链可变区及轻链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述参比抗体可包含重链可变区和轻链可变区。例如，所述参比抗体的重链可变区可包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体A2或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述参比抗体的轻链可变区可包含SEQID NO:32所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体A2或与其具有相同轻链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述参比抗体可包括抗体A2或与其具有相同重链可变区及轻链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述参比抗体可包含重链可变区和轻链可变区。例如，所述参比抗体的重链可变区可包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体A3或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述参比抗体的轻链可变区可包含SEQID NO:33所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体A3或与其具有相同轻链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述参比抗体可包括抗体A3或与其具有相同重链可变区及轻链可变区的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述参比抗体可包含重链可变区和轻链可变区。例如，所述参比抗体的重链可变区可包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体A4或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述参比抗体的轻链可变区可包含SEQID NO:34所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体A4或与其具有相同轻链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述参比抗体可包括抗体A4或与其具有相同重链可变区及轻链可变区的抗原结合蛋白。
多肽和免疫缀合物
另一方面，本申请提供了一种或多种多肽，其可包含本申请的分离的抗原结合蛋白。
另一方面，本申请提供了一种或多种免疫缀合物，所述免疫缀合物可包含本申请的分离的抗原结合蛋白。在某些实施方式中，所述免疫缀合物还可包含药学上可接受的治疗剂。
核酸、载体和细胞
另一方面，本申请还提供了分离的一种或多种核酸分子，所述一种或多种核酸分子可编码本申请所述分离的抗原结合蛋白。例如，所述一种或多种核酸分子中的每一个核酸分子可以编码完整的所述抗原结合蛋白，也可以编码其中的一部分(例如，HCDR1-3、重链可变区中的一种或多种)。
本申请所述的核酸分子可以为分离的。例如，其可以是通过以下方法产生或合成的：(i)在体外扩增的，例如通过聚合酶链式反应(PCR)扩增产生的，(ii)通过克隆重组产生的，(iii)纯化的，例如通过酶切和凝胶电泳分级分离，或者(iv)合成的，例如通过化学合成。例如，所述分离的核酸可以是通过重组DNA技术制备的核酸分子。
在本申请中，可以通过本领域已知的多种方法来制备编码所述分离的抗原结合蛋白的核酸，这些方法包括但不限于，采用逆转录PCR和PCR获得本申请所述分离的抗原结合蛋白的核酸分子。
另一方面，本申请提供了一种或多种载体，其包含本申请所述的一种或多种核酸分子。每种载体中可包含一种或多种所述核酸分子。此外，所述载体中还可包含其他基因，例如允许在适当的宿主细胞中和在适当的条件下选择该载体的标记基因。此外，所述载体还可包含允许编码区在适当宿主中正确表达的表达控制元件。这样的控制元件为本领域技术人员所熟知的，例如，可包括启动子、核糖体结合位点、增强子和调节基因转录或mRNA翻译的其他控制元件等。在某些实施方式中，所述表达控制序列为可调的元件。所述表达控制序列的具体结构可根据物种或细胞类型的功能而变化，但通常包含分别参与转录和翻译起始的5’非转录序列和5’及3’非翻译序列，例如TATA盒、加帽序列、CAAT序列等。例如，5’非转录表达控制序列可包含启动子区，启动子区可包含用于转录控制功能性连接核酸的启动子序列。所述表达控制序列还可包括增强子序列或上游活化子序列。在本申请中，适当的启动子可包括，例如用于SP6、T3和T7聚合酶的启动子、人U6RNA启动子、CMV启动子及其人工杂合启动子(如CMV)，其中启动子的某部分可与其他细胞蛋白(如人GAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶)基因启动子的某部分融合，其可包含或不包含另外的内含子。本申请所述的一种或多种核酸分子可以与所述表达控制元件可操作地连接。
所述载体可以包括，例如质粒、粘粒、病毒、噬菌体或者在例如遗传工程中通常使用的其他载体。例如，所述载体可为表达载体。例如，所述载体可为病毒载体。可以将病毒载体直接给予至患者(体内)或可以通过间接的形式，例如，在体外使用病毒处理细胞，然后将处理过的细胞给予至患者(离体)。病毒载体技术在本领域中是公知的，并在例如Sambrook等(2001,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York)和其他病毒学和分子生物学手册中进行了描述。常规的基于病毒的系统可以包括用于基因转移的逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体以及单纯疱疹病毒载体。在某些情形中，可以用逆转录病毒、慢病毒和腺相关病毒的方法将基因转移整合进宿主基因组中，使插入的基因长期表达。慢病毒载体是能够转导或感染非分裂细胞并典型地产生较高病毒效价的逆转录病毒载体。慢病毒载体可包含长末端重复序列5’LTR和截短的3’LTR、RRE、rev应答元件(cPPT)、中央终止序列(CTS)和/或翻译后调控元件(WPRE)。本申请所述的载体可以被引入细胞。
另一方面，本申请提供了一种细胞。所述细胞可包含本申请所述的分离的抗原结合蛋白、所述的多肽、所述的免疫缀合物、一种或多种核酸分子和/或本申请所述的一种或多种载体。例如，每种或每个细胞可包含一个或一种本申请所述的核酸分子或载体。例如，每种或每个细胞可包含多个(例如，2个或以上)或多种(例如，2种或以上)本申请所述的核酸分子或载体。例如，可将本申请所述的载体引入所述宿主细胞中，例如原核细胞(例如，细菌细胞)、CHO细胞、NS/0细胞、HEK293T细胞、293F细胞或HEK293A细胞，或者其他真核细胞，如来自植物的细胞、真菌或酵母细胞等。可通过本领域已知的方法将本申请所述的载体引入所述宿主细胞中，例如电穿孔、lipofectine转染、lipofectamin转染等。例如，所述细胞可以包括酵母细胞。例如，所述细胞可以包括大肠杆菌细胞。例如，所述细胞可以包括哺乳动物细胞。例如，所述细胞可以包括免疫细胞。
所述细胞可以包括免疫细胞。在某些情形中，所述细胞可以包括免疫细胞。例如，所述细胞可包括T细胞、B细胞、天然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、NKT细胞、单核细胞、树突状细胞、粒细胞、淋巴细胞、白细胞和/或外周血单个核细胞。
药物组合物和药物组合
另一方面，本申请提供了一种药物组合物。所述药物组合物可包含本申请所述的分离的抗原结合蛋白、所述的多肽、所述的免疫缀合物、所述分离的核酸分子、所述的载体、所述的细胞，和/或药学上可接受的佐剂和/或赋形剂。在本申请中，所述药学上可接受的佐剂可以包括缓冲剂、抗氧化剂、防腐剂、低分子量多肽、蛋白质、亲水聚合物、氨基酸、糖、螯合剂、反离子、金属复合物和/或非离子表面活性剂。除非与本申请所述的细胞不相容，否则任何常规介质或试剂均可以考虑用于本申请的药物组合物中。在本申请中，所述药学上可接受的赋形剂可以包括在药物制剂中除主药以外的附加物，也可称为辅料。例如，所述赋形剂可以包括片剂中的粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂。例如，所述赋形剂可以包括中药丸剂中的酒、醋、药汁等。例如，所述赋形剂可以包括半固体制剂软膏剂、霜剂中的基质部分。例如，所述赋形剂可以包括液体制剂中的防腐剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂。
另一方面，本申请提供了一种药物组合，其包含所述分离的抗原结合蛋白和免疫检查点抑制剂。
在本申请中，所述免疫检查点抑制剂可包括抑制PD-1/PD-L1相互作用的物质。例如，所述免疫检查点抑制剂可选自下组：PD-1/PD-L1阻断剂、PD-1拮抗剂、PD-L1拮抗剂、PD-1抑制剂和PD-L1抑制剂。
例如，所述PD-1/PD-L1阻断剂可选自下组：BMS202(PD-1/PD-L1抑制剂2)、BMS-1(PD-1/PD-L1抑制剂1)、PD-1/PD-L1抑制剂3、BMS-1166和BMS-1001。
例如，所述PD-1抑制剂可包括抗PD-1抗体。例如，所述PD-L1抑制剂可包括抗PD-L1抗体。
例如，所述抗PD-1抗体可选自下组：Nivolumab(纳武单抗)、Pembrolizumab(帕博利珠单抗)、Camrelizumab(卡瑞利珠单抗)、Toripalimab(特瑞普利单抗)、Sintilimab(信迪利单抗)和Tislelizumab(替雷利珠单抗)。例如，所述抗PD-L1抗体可选自下组：Durvalumab(德瓦鲁单抗)、Atezolizumab(阿替利珠单抗)和avelumab(阿维单抗)。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含选自下组的抗体的HCDR3：Nivolumab(纳武单抗)、Pembrolizumab(帕博利珠单抗)、Camrelizumab(卡瑞利珠单抗)、Toripalimab(特瑞普利单抗)、Sintilimab(信迪利单抗)和Tislelizumab(替雷利珠单抗)。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含选自下组的抗体的HCDR2：Nivolumab(纳武单抗)、Pembrolizumab(帕博利珠单抗)、Camrelizumab(卡瑞利珠单抗)、Toripalimab(特瑞普利单抗)、Sintilimab(信迪利单抗)和Tislelizumab(替雷利珠单抗)。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含选自下组的抗体的HCDR1：Nivolumab(纳武单抗)、Pembrolizumab(帕博利珠单抗)、Camrelizumab(卡瑞利珠单抗)、Toripalimab(特瑞普利单抗)、Sintilimab(信迪利单抗)和Tislelizumab(替雷利珠单抗)。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含选自下组的抗体的LCDR3：Nivolumab(纳武单抗)、Pembrolizumab(帕博利珠单抗)、Camrelizumab(卡瑞利珠单抗)、Toripalimab(特瑞普利单抗)、Sintilimab(信迪利单抗)和Tislelizumab(替雷利珠单抗)。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含选自下组的抗体的LCDR2：Nivolumab(纳武单抗)、Pembrolizumab(帕博利珠单抗)、Camrelizumab(卡瑞利珠单抗)、Toripalimab(特瑞普利单抗)、Sintilimab(信迪利单抗)和Tislelizumab(替雷利珠单抗)。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含选自下组的抗体的LCDR1：Nivolumab(纳武单抗)、Pembrolizumab(帕博利珠单抗)、Camrelizumab(卡瑞利珠单抗)、Toripalimab(特瑞普利单抗)、Sintilimab(信迪利单抗)和Tislelizumab(替雷利珠单抗)。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含选自下组的抗体的VH：Nivolumab(纳武单抗)、Pembrolizumab(帕博利珠单抗)、Camrelizumab(卡瑞利珠单抗)、Toripalimab(特瑞普利单抗)、Sintilimab(信迪利单抗)和Tislelizumab(替雷利珠单抗)。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含选自下组的抗体的VL：Nivolumab(纳武单抗)、Pembrolizumab(帕博利珠单抗)、Camrelizumab(卡瑞利珠单抗)、Toripalimab(特瑞普利单抗)、Sintilimab(信迪利单抗)和Tislelizumab(替雷利珠单抗)。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含选自下组的抗体的HCDR3：Durvalumab(德瓦鲁单抗)、Atezolizumab(阿替利珠单抗)和avelumab(阿维单抗)。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含选自下组的抗体的HCDR2：Durvalumab(德瓦鲁单抗)、Atezolizumab(阿替利珠单抗)和avelumab(阿维单抗)。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含选自下组的抗体的HCDR1：Durvalumab(德瓦鲁单抗)、Atezolizumab(阿替利珠单抗)和avelumab(阿维单抗)。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含选自下组的抗体的LCDR3：Durvalumab(德瓦鲁单抗)、Atezolizumab(阿替利珠单抗)和avelumab(阿维单抗)。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含选自下组的抗体的LCDR2：Durvalumab(德瓦鲁单抗)、Atezolizumab(阿替利珠单抗)和avelumab(阿维单抗)。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含选自下组的抗体的LCDR1：Durvalumab(德瓦鲁单抗)、Atezolizumab(阿替利珠单抗)和avelumab(阿维单抗)。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含选自下组的抗体的VH：Durvalumab(德瓦鲁单抗)、Atezolizumab(阿替利珠单抗)和avelumab(阿维单抗)。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含选自下组的抗体的VL：Durvalumab(德瓦鲁单抗)、Atezolizumab(阿替利珠单抗)和avelumab(阿维单抗)。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含HCDR3，所述HCDR3可包含SEQ ID NO：37所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-1抗体包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-1抗体包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO：35所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-1抗体包含重链可变区VH，所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO：37所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO：35所示的氨基酸序列。例如，所述抗PD-1抗体可包括帕博利珠单抗或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同HCDR1-3)的抗体。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含重链可变区VH，所述VH可包含SEQ ID NO：41所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含LCDR3，所述LCDR3可包含SEQ ID NO：40所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含LCDR2，所述LCDR2可包含SEQ ID NO：39所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含LCDR1，所述LCDR1可包含SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含轻链可变区VL，所述VL可包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR3可包含SEQ ID NO：40所示的氨基酸序列；所述LCDR2可包含SEQ ID NO：39所示的氨基酸序列；以及所述LCDR1可包含SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列。例如，所述抗PD-1抗体可包括帕博利珠单抗或与其具有相同LCDR3(例如，与其具有相同LCDR1-3)的抗体。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含轻链可变区VL，所述VL可包含SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-1抗体可包含重链和轻链，所述重链可包含HCDR1-3以及H-FR1-4，且所述轻链可包含LCDR1-3以及L-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQID NO:37所示的氨基酸序列；所述LCDR1可包括SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列；所述LCDR2可包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列；所述LCDR3可包含SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列。例如，所述抗PD-1抗体可包括帕博利珠单抗或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同HCDR1-3)和LCDR3(例如，与其具有相同LCDR1-3)的抗原结合蛋白。
例如，所述抗PD-1抗体的重链可变区可包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列。例如，所述抗PD-1抗体可包括帕博利珠单抗或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述抗PD-1抗体的轻链可变区可包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列。例如，所述抗PD-1抗体可包括帕博利珠单抗或与其具有相同轻链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述抗PD-1抗体的重链可包含SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列。例如，所述抗PD-1抗体可包括帕博利珠单抗或与其具有相同重链的抗原结合蛋白。例如，所述抗PD-1抗体的轻链可包含SEQID NO:44所示的氨基酸序列。例如，所述抗PD-1抗体可包括帕博利珠单抗或与其具有相同轻链的抗原结合蛋白。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含HCDR3，所述HCDR3可包含SEQ ID NO：51所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO：50所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO：49所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体包含重链可变区VH，所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO：51所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO：50所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO：49所示的氨基酸序列。例如，所述抗PD-L1抗体可包括阿替利珠单抗或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同HCDR1-3)的抗体。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含重链可变区VH，所述VH可包含SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含LCDR3，所述LCDR3可包含SEQ ID NO：54所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含LCDR2，所述LCDR2可包含SEQ ID NO：53所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含LCDR1，所述LCDR1可包含SEQ ID NO：52所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含轻链可变区VL，所述VL可包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR3可包含SEQ ID NO：54所示的氨基酸序列；所述LCDR2可包含SEQ ID NO：53所示的氨基酸序列；以及所述LCDR1可包含SEQ ID NO：52所示的氨基酸序列。例如，所述抗PD-L1抗体可包括阿替利珠单抗或与其具有相同LCDR3(例如，与其具有相同LCDR1-3)的抗体。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含轻链可变区VL，所述VL可包含SEQ ID NO：46所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗PD-L1抗体可包含重链和轻链，所述重链可包含HCDR1-3以及H-FR1-4，且所述轻链可包含LCDR1-3以及L-FR1-4。例如，所述HCDR1可包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列；所述HCDR3可包含SEQID NO:51所示的氨基酸序列；所述LCDR1可包括SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列；所述LCDR2可包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列；所述LCDR3可包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。例如，所述抗PD-L1抗体可包括阿替利珠单抗或与其具有相同HCDR3(例如，与其具有相同HCDR1-3)和LCDR3(例如，与其具有相同LCDR1-3)的抗原结合蛋白。
例如，所述抗PD-L1抗体的重链可变区可包含SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列。例如，所述抗PD-L1抗体可包括阿替利珠单抗或与其具有相同重链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述抗PD-L1抗体的轻链可变区可包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列。例如，所述抗PD-L1抗体可包括阿替利珠单抗或与其具有相同轻链可变区的抗原结合蛋白。例如，所述抗PD-L1抗体的重链可包含SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列。例如，所述抗PD-L1抗体可包括阿替利珠单抗或与其具有相同重链的抗原结合蛋白。例如，所述抗PD-L1抗体的轻链可包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。例如，所述抗PD-L1抗体可包括阿替利珠单抗或与其具有相同轻链的抗原结合蛋白。
试剂盒、用途和方法
另一方面，本申请提供了一种用于检测或测定TIGIT的方法，所述方法可包括使用所述分离的抗原结合蛋白或所述的多肽。
在本申请中，所述方法可包括体外方法，离体方法，非诊断或非治疗目的的方法。
例如，所述方法可包括用于非诊断目的的检测TIGIT的存在和/或含量的方法，其可包括下述步骤：
1)使样品与本申请的抗原结合蛋白接触；以及
2)检测样品结合的所述抗原结合蛋白的存在和/或含量来确定获自受试者的样品中TIGIT的存在和/或表达水平。
另一方面，本申请提供了一种TIGIT的试剂盒，其可包括使用所述分离的抗原结合蛋白或所述的多肽。
在本申请中，所述试剂盒还可包含使用说明，所述使用说明记载用于检测TIGIT的存在和/或含量的方法。例如，所述方法可包括体外方法，离体方法，非诊断或非治疗目的的方法。
另一方面，本申请提供了一种所述的分离的抗原结合蛋白或所述的多肽在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒可用于检测TIGIT的存在和/或含量的方法。例如，所述方法可包括体外方法，离体方法，非诊断或非治疗目的的方法。
另一方面，本申请提供了一种调节免疫应答的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的所述分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述分离的核酸分子，所述的载体，所述的细胞和/或所述的药物组合物，和/或药学上可接受的治疗剂。
在本申请中，所述调节免疫应答的方法可包括体外方法，离体方法，非诊断或非治疗目的的方法。
另一方面，本申请提供了一种调节免疫应答的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的所述的药物组合，和/或药学上可接受的治疗剂。
在本申请中，所述调节免疫应答的方法可包括体外方法，离体方法，非诊断或非治疗目的的方法。
另一方面，本申请提供了一种抑制TIGIT与CD155结合的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的所述分离的抗原结合蛋白，所述的多肽，所述的免疫缀合物，所述的分离的核酸分子，所述的载体，和/或所述的细胞。所述方法可以是离体或体外方法。
另一方面，本申请提供了分离的抗原结合蛋白、所述的多肽、所述的免疫缀合物、所述分离的核酸分子、所述的载体、所述的药物组合物用于预防、缓解和/或治疗肿瘤。
例如，所述肿瘤可包括实体瘤。例如，所述肿瘤可包括与TIGIT，CD155或CD112等蛋白的表达相关的肿瘤。例如，所述“与TIGIT，CD155或CD112等蛋白的表达相关的肿瘤”可以包括存在TIGIT，CD155或CD112表达的肿瘤。所述“与TIGIT的表达相关的肿瘤”可以包括TIGIT表达异常的肿瘤。例如，在TIGIT表达异常的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的TIGIT表达量上调或下调。所述与TIGIT，CD155或CD112等蛋白表达相关的肿瘤可以包括TIGIT，CD155或CD112阳性的肿瘤。在TIGIT，CD155或CD112阳性的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的TIGIT，CD155或CD112的蛋白表达量高约1％，5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％或更高。
在本申请中，所述肿瘤可以包括结肠癌。
另一方面，在本申请中，所述的试剂盒和/或所述的药物组合用于预防、缓解和/或治疗肿瘤。
例如，所述肿瘤可包括实体瘤。例如，所述肿瘤可包括与TIGIT，CD155或CD112等蛋白的表达相关的肿瘤。例如，所述“与TIGIT，CD155或CD112等蛋白的表达相关的肿瘤”可以包括存在TIGIT，CD155或CD112表达的肿瘤。所述“与TIGIT的表达相关的肿瘤”可以包括TIGIT表达异常的肿瘤。例如，在TIGIT表达异常的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的TIGIT表达量上调或下调。所述与TIGIT，CD155或CD112等蛋白表达相关的肿瘤可以包括TIGIT，CD155或CD112阳性的肿瘤。在TIGIT，CD155或CD112阳性的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的TIGIT，CD155或CD112的蛋白表达量高约1％，5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％或更高。例如，所述肿瘤可以包括结肠癌。
另一方面，本申请提供了一种所述的分离的抗原结合蛋白、所述的多肽、所述的免疫缀合物、所述的分离的核酸分子、所述的载体，所述的细胞和/或所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防、缓解和/或治疗肿瘤。
例如，所述肿瘤可包括实体瘤。例如，所述肿瘤可包括与TIGIT，CD155或CD112等蛋白的表达相关的肿瘤。例如，所述“与TIGIT，CD155或CD112等蛋白的表达相关的肿瘤”可以包括存在TIGIT，CD155或CD112表达的肿瘤。所述“与TIGIT的表达相关的肿瘤”可以包括TIGIT表达异常的肿瘤。例如，在TIGIT表达异常的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的TIGIT表达量上调或下调。所述与TIGIT，CD155或CD112等蛋白表达相关的肿瘤可以包括TIGIT，CD155或CD112阳性的肿瘤。在TIGIT，CD155或CD112阳性的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的TIGIT，CD155或CD112的蛋白表达量高约1％，5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％或更高。例如，所述肿瘤可以包括结肠癌。
另一方面，本申请提供了一种药物组合在制备药物中的用途，所述药物用于预防、缓解和/或治疗肿瘤。
例如，所述肿瘤可包括实体瘤。例如，所述肿瘤可包括与TIGIT，CD155或CD112等蛋白的表达相关的肿瘤。例如，所述“与TIGIT，CD155或CD112等蛋白的表达相关的肿瘤”可以包括存在TIGIT，CD155或CD112表达的肿瘤。所述“与TIGIT的表达相关的肿瘤”可以包括TIGIT表达异常的肿瘤。例如，在TIGIT表达异常的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的TIGIT表达量上调或下调。所述与TIGIT，CD155或CD112等蛋白表达相关的肿瘤可以包括TIGIT，CD155或CD112阳性的肿瘤。在TIGIT，CD155或CD112阳性的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的TIGIT，CD155或CD112的蛋白表达量高约1％，5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％或更高。例如，所述肿瘤可以包括结肠癌。
另一方面，本申请提供了一种预防和/或治疗疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用所述的分离的抗原结合蛋白、所述的分离的核酸分子、所述的载体，所述的细胞、所述的药物组合物，其中所述疾病或病症包括肿瘤。
例如，所述肿瘤可包括实体瘤。例如，所述肿瘤可包括与TIGIT，CD155或CD112等蛋白的表达相关的肿瘤。例如，所述“与TIGIT，CD155或CD112等蛋白的表达相关的肿瘤”可以包括存在TIGIT，CD155或CD112表达的肿瘤。所述“与TIGIT的表达相关的肿瘤”可以包括TIGIT表达异常的肿瘤。例如，在TIGIT表达异常的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的TIGIT表达量上调或下调。所述与TIGIT，CD155或CD112等蛋白表达相关的肿瘤可以包括TIGIT，CD155或CD112阳性的肿瘤。在TIGIT，CD155或CD112阳性的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的TIGIT，CD155或CD112的蛋白表达量高约1％，5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％或更高。在本申请中，所述肿瘤可包括结肠癌。
另一方面，本申请提供了一种预防和/或治疗疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用所述的药物组合，其中所述疾病或病症包括肿瘤。
例如，所述肿瘤可包括实体瘤。例如，所述肿瘤可包括与TIGIT，CD155或CD112等蛋白的表达相关的肿瘤。例如，所述“与TIGIT，CD155或CD112等蛋白的表达相关的肿瘤”可以包括存在TIGIT，CD155或CD112表达的肿瘤。所述“与TIGIT的表达相关的肿瘤”可以包括TIGIT表达异常的肿瘤。例如，在TIGIT表达异常的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的TIGIT表达量上调或下调。所述与TIGIT，CD155或CD112等蛋白表达相关的肿瘤可以包括TIGIT，CD155或CD112阳性的肿瘤。在TIGIT，CD155或CD112阳性的肿瘤中，与正常细胞相比，肿瘤细胞表面或肿瘤微环境中的TIGIT，CD155或CD112的蛋白表达量高约1％，5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，60％，70％，80％或更高。例如，所述肿瘤可以包括结肠癌。
本申请所述药物组合物、药物组合及方法可与其他类型的癌症疗法结合使用，诸如化学疗法、手术、放射、基因疗法等。本申请中所描述的药物组合物及方法可用于其他依赖于免疫反应的疾病病状，诸如炎症、免疫疾病及感染性疾病。
在本申请中，所述受试者可以包括人或非人动物。例如，所述非人动物可以选自下组：猴、鸡、鹅、猫、狗、小鼠和大鼠。此外，非人动物也可以包括任何除人以外的动物物种，例如家畜动物，或啮齿类动物，或灵长类动物，或家养动物，或家禽动物。所述人可以是高加索人、非洲人、亚洲人、闪族人，或其他种族，或各种种族的杂合体。又例如，所述人可以是老年、成年、青少年、儿童或者婴儿。
可以根据在实验动物中的有效量推测在人类中的有效量。例如，Freireich等人描述了动物和人的剂量的相互关系(基于每平方米身体表面的毫克数)(Freireich et al.，Cancer Chemother.Rep.50，219(1966))。身体表面积可以从患者的身高和体重近似确定。参见例如Scientific Tables，Geigy Pharmaceuticals，Ardsley，N.Y.，537(1970)。
不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的融合蛋白、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。
实施例
实施例1TIGIT抗原活性检测
1.1抗原包被：用DPBS溶液配制浓度梯度稀释的人TIGIT-Fc，记为hTIGIT-Fc(SinoBiological，货号：10917-H02H)溶液，每孔加入100μl，4℃包被过夜。
1.2清洗：PBST(含0.05％Tween 20)溶液清洗三遍。
1.3封闭：采用DPBS(含3％BSA)对抗原进行封闭，每孔加入200μl，置于室温，封闭1h。
1.4配体结合：采用DPBS(含1％BSA)溶液稀释Biotinylated-CD155(Acrobiosystem，货号：CD5-H82F6)至5μg/ml，每孔加入100μl，37℃1h。
1.5二抗结合：弃去反应液，PBST溶液清洗三遍，加入二抗，每孔加入100μl，置于37℃反应1h。
1.6ELISA检测：弃去反应液，PBST溶液清洗三遍；每孔加入100μl TMB溶液，轻微振荡反应至显蓝色；每孔加入50μl H2SO4，轻微振荡反应至显黄色；450nm下检测OD值。检测结果如图1所示。
实施例2 Jurkat-TIGIT-NFAT-CD226细胞构建
为筛选有生物学活性的抗TIGIT抗体，将编码人TIGIT(序列见SEQ ID NO:67)和人CD226(序列见SEQ ID NO:88)的cDNA克隆到pLVX-IRES-Puro(Takara，632186)载体上，将获得的质粒和NFAT-luciferace报告基因质粒(Promega)共转染到Jurkat细胞(中科院细胞库，TCHU123)，通过流式分选或亚克隆的方法，产生过表达人TIGIT和人CD226，同时带有NFAT-luciferace报告基因系统的Jurkat细胞。
实施例3 CHOK1-CD155-2A-OKT3细胞构建
将编码人CD155(序列见SEQ ID NO:68)和抗CD3抗体OKT3 scFV(序列见SEQ IDNO:69)的cDNA克隆到pLVX-IRES-Puro(Takara，632186)载体上，然后用293T细胞(中科院细胞库，SCSP-502)包装慢病毒，用慢病毒感染CHOK1细胞株(中科院细胞库，SCSP-507)，通过流式分选或亚克隆的方法，得到同时高表达人CD155和抗CD3抗体OKT3的CHOK1细胞株。
实施例4抗TIGIT抗体的制备
通过用6周龄的雌性BALB/c(北京维通利华实验动物技术有限公司，体重18克)小鼠进行免疫接种，获得抗TIGIT抗体。
根据本实施例的方法产生的示例性抗TIGIT抗体的某些生物特性详细地描述于以下阐述的实施例中。
4.1杂交瘤细胞的制备
杂交瘤技术是通过融合经抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0，从而同时保持这两种细胞的主要特征。被特异性抗原免疫的小鼠脾细胞(B淋巴细胞)的主要特征是它的抗体分泌功能，但不能在体外进行连续培养，而小鼠骨髓瘤细胞具有所谓的永生性，能够在培养条件下无限分裂、增殖。在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才能形成具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。本实验通过人TIGIT-Fc蛋白(Sino Biological，货号：10917-H02H)和sigma Adjuvant System(Sigma，货号：S6322)佐剂免疫小鼠，再将获取的小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合，获得能够表达阳性抗体的杂交瘤细胞。
4.1.1动物免疫
实验动物以及免疫信息如表1所示。
表1实验动物及免疫信息
小鼠类型 BALB/c(北京维通利华实验动物技术有限公司)
免疫抗原 人TIGIT-Fc(Sino Biological，货号：10917-H02H)
免疫方法 25μg/只，肌肉注射
免疫次数 5
最后加强免疫 50μg TIGIT蛋白，腹腔注射(ip)，在融合前三天进行
4.1.2小鼠免疫后检测免疫小鼠血清效价
抗原包被：采用DPBS溶液配制0.5μg/ml的人TIGIT-his(Gencript，货号：Z03457-1)溶液，取96孔板，每孔加入100μl，4℃包被过夜。
清洗：PBST(含0.05％Tween 20)溶液清洗三遍。
封闭：采用DPBS(含3％BSA)对抗原进行封闭，每孔加入100μl，置于室温，封闭1h。
抗体结合：采用DPBS(含1％BSA)溶液稀释血清溶液，首个浓度稀释300倍，并依次进行2倍梯度稀释，稀释8个浓度，每孔加入100μl；阴性对照为未免疫小鼠的血清。置于室温，反应1h。
二抗结合：弃去反应液，PBST溶液清洗三遍；按照1:5000的稀释比例加入二抗，每孔加入100μl，置于室温反应1h。
ELISA检测：弃去反应液，PBST溶液清洗三遍；每孔加入100μl TMB溶液，轻微振荡反应至显蓝色；每孔加入50μl H2SO4，轻微振荡反应至显黄色；450nm下检测OD值。
第一批到第五批免疫小鼠血清效价如图2-图6所示。
4.1.3杂交瘤融合
电融合槽准备：用1％氢氧化钠，75％乙醇彻底浸泡电融合槽后，用PBS清洗干净后于超净台中吹干备用。
通过下述步骤分离脾细胞：
解剖：摘取眼球完全放血后拉颈处死，75％乙醇浸泡片刻，常规解剖取脾。
收集脾细胞：将脾放入无菌平皿，边拎起边加入3-4ml无血清DMEM清洗，然后移入另外一个无菌、盛有20ml无血清DMEM的平皿中，放滤网并用注射器芯研磨，吸取全部上清，1200rpm/min离心5min，收集脾细胞。
裂解红细胞：去除上清，用10ml ACK(Gibco)裂解缓冲液重悬细胞。然后再加入5mlACK裂解缓冲液。悬液静置5min后，1200rpm离心5min。去上清后用10ml基础培养基重悬细胞，然后再加入20ml PBS，1200rpm离心5min。去除上清后，细胞重悬于20ml PBS中并计数。
收集SP2/0：收集SP2/0细胞，1200rpm/min离心5min并弃上清。将收集的SP2/0细胞用PBS稀释10倍，混匀后吸取10μl，与10μl AOPI染液混合，进行细胞计数。
细胞融合：将SP2/0和脾细胞以1:5～1:2的比例混合，1000rpm离心6min。去除上清后，用适量融合缓冲液重悬细胞，调整混合细胞密度至1×107个细胞/ml。每个电融合皿中加入9ml细胞悬液进行电融合，融合结束后，细胞在电极匣中静置5分钟。
4.1.4融合细胞铺板：取出细胞悬液并转移至筛选培养基(配置方法如表3所示)，用含电融合缓冲液轻轻冲洗腔室2次，也转移至培养基中，计算细胞密度，每孔2E4个脾细胞，200μl/孔培养基铺板。将细胞板置于细胞培养箱培养，融合后第7天更换筛选培养基。培养第10天(或更久，根据细胞生长状态)后进行筛选。
通过流式检测(FACS)和ELISA检测筛选出表达特异性抗TIGIT抗体的杂交瘤细胞。
4.1.5阳性杂交瘤细胞亚克隆
亚克隆步骤：准备一块96孔板，将96孔细胞板中第二列至第十二列加入100μl如上所述的基础培养基，将上述融合筛选出的阳性孔的细胞制成细胞悬液并加入第1列。将第1列细胞悬液取100μl加入第2列，充分混匀后取100μl加入下一列。重复上述步骤，直至最后一列；倍比稀释好的细胞悬液静止5-10min，待细胞全部沉至底面，镜下观察计数。取100个细胞对应的体积加入20ml如上所述的基础培养基中，并混匀铺板，每孔200μl。一周后显微镜下观察，判断并标记出单克隆孔，待测挑出阳性孔。
4.1.6阳性杂交瘤单细胞筛选
通过流式检测(FACS)和ELISA检测筛选出表达特异性抗TIGIT抗体的杂交瘤单克隆细胞。
细胞冻存：观察细胞状态，等细胞生长良好，活力>90％时，1000rpm离心5min，收集上清。用冻存液(90％FBS，10％DMSO)重悬细胞至1×107个细胞/ml，分装至冻存管，放入程序降温盒中，-80℃冻存。
Trizol样品收集：观察细胞状态，等细胞生长良好，活力>90％时，1000rpm离心5min，收集上清。用Trizol溶液重悬细胞至1×107个细胞/ml，分装至离心管，-80℃冻存。
抗TIGIT抗体测序
本申请利用分子生物学技术，获得表达特异性抗TIGIT抗体的杂交瘤单克隆细胞中的抗TIGIT序列，并进行嵌合和人源化改造。
4.2抗体蛋白的表达和纯化
用杂交瘤测序所得的抗体可变区和人IgG融合构建嵌合抗体质粒，使用大量抽提试剂盒提取抗体表达质粒，瞬转表达HEK293细胞。溶液1：用1ml培养液稀释15μg质粒，混匀。溶液2：用1ml培养液稀释60μl转染试剂，混匀。将溶液2加入溶液1中，混匀，37℃孵育15分钟后，将混合转染液逐滴加入细胞液中，边摇边加，放至摇床培养，表达一周，收集上清，8000rpm离心5min。
Protein A亲和层析柱纯化抗体蛋白。(1)平衡层析柱：1×PBS，流速1ml/min，20ml(2)上样：流速1ml/min(3)洗杂：1×PBS，流速1ml/min，20ml(4)洗脱：柠檬酸缓冲液(PH3.4)，1ml/min，分管收集，每管约500μl。共收集10管，使用NanoDrop仪器读取280nm吸光度值。(5)透析：将高浓度蛋白吸至透析袋放1×PBS的烧杯中透析。使用高效液相色谱仪LC-20AT及凝胶色谱柱的纯度检测合格，内毒素检测合格。
实施例5抗TIGIT抗体与表达于细胞上的人TIGIT的结合
基于流式细胞术测定法测定抗体与表达于CHOK1细胞表面的人TIGIT的结合能力。通过比较不同抗体与表达于CHOK1细胞表面的人TIGIT的结合曲线来测定其结合能力。
5.1将CHOK1/人TIGIT细胞(吉满生物，GM-C01116)铺于96孔板中，每孔种2E5细胞。
5.2用含2％FBS的PBS分别配制阳性对照抗体、阴性对照抗体和纯化后的嵌合抗TIGIT抗体A0，最大浓度为15μg/ml，5倍稀释，8个点，每管加入100μl，4摄氏度孵育1小时。
5.3用含2％FBS的PBS洗板3次。
5.4将PE labeled-human IgG(Biolegend,410708)分别用2％FBS的PBS 1:2000稀释，每孔加入100μl，4摄氏度孵育0.5小时。
5.5用含2％FBS的PBS洗板2次。用100μl含2％FBS的PBS重新悬浮细胞。
5.6使用流式细胞仪测定PE通道的中位荧光度值(MFI)。
在以上试验中，A0结合CHOK1细胞上过表达的人TIGIT，与阳性对照抗体P1(VH如SEQ ID NO：59所示，重链如SEQ ID NO：61所示，VL如SEQ ID NO：60所示，轻链如SEQ ID NO：62所示)、P4(VH如SEQ ID NO：63所示，重链如SEQ ID NO：65所示，VL如SEQ ID NO：64所示，轻链如SEQ ID NO：66所示)具有相似或更优的EC50数值，即相似或更优的结合能力(表2)。抗TIGIT抗体与表达于细胞上的人TIGIT的结合能力如图7所示。
表2抗TIGIT抗体与表达于细胞上的人TIGIT的结合活性
Figure BDA0003495523810000451
Figure BDA0003495523810000461
注：NA表示“未检出”
实施例6抗TIGIT抗体对其配体CD155的阻断
采用流式细胞术的方法测定抗体的配体阻断能力。
6.1将CHOK1/人TIGIT细胞(吉满生物，GM-C01116)铺细胞于96孔板中，每孔种2E5细胞。
6.2用含2％FBS的PBS配制浓度为0.6μg/ml的Biotinylated-CD155(AcroBiosystems,CD5-H82F6)。用配制的Biotinylated-CD155的2％FBS的PBS分别配制阳性对照抗体、阴性对照抗体和纯化后的A0，抗体最大浓度为15μg/ml。
(3)然后分别加100μl混合液于上述96孔板中，4摄氏度孵育1小时。
(4)用含2％FBS的PBS洗板3次。
(5)将PE-streptavidin(Biolegend,405203)用2％FBS的PBS 1:2000稀释，每孔加入100μl，4摄氏度孵育0.5小时。
(6)用含2％FBS的PBS洗板2次。用100μl含2％FBS的PBS重新悬浮细胞。
(7)使用流式细胞仪测定PE通道的中位荧光度值(MFI)。
在以上试验中，A0阻断TIGIT配体CD155结合CHOK1细胞上过表达的人TIGIT，与阳性对照抗体P1、P4具有相似的EC50数值(如表3所示)，即相似的阻断配体CD155结合能力(图8)。
表3抗TIGIT抗体对其配体CD155的阻断结果
克隆 EC50(μg/ml)of％抑制 最大抑制
P1 0.1891 99.66％
P4 0.1033 100.06％
IgG对照 NA 3.03％
A0 0.1381 99.79％
注：NA表示“未检出”
实施例7抗TIGIT抗体的生物学活性
通过荧光素酶报告基因系统检测的荧光强度比较不同抗TIGIT抗体在Jurkat-hTIGIT-NFAT-CD226细胞(由本公司建立)中的荧光素酶的表达，TIGIT的抗原序列(NM_173799.4)如SEQ ID NO：67所示，CD155的抗原序列(NM_006505.5)如SEQ ID NO：68所示，CD226的抗原序列如SEQ ID NO：88所示。TIGIT与CD226竞争结合CD155，从而抑制Jurkat-hTIGIT-NFAT-CD226细胞效应功能，使荧光素酶表达降低；抗TIGIT抗体与Jurkat-hTIGIT-NFAT-CD226细胞上的TIGIT结合后，阻断CHOK1-CD155-2A-OKT3细胞的CD155与TIGIT的结合，OKT3和CD226能够正向刺激Jurkat-hTIGIT-NFAT-CD226细胞，增强荧光素酶表达，OKT3scFv如SEQ ID NO：69所示。
7.1用RPMI 1640+10％FBS配制的培养基重悬Jurkat-hTIGIT-NFAT-CD226细胞，加入40μl至96孔板中(Corning,3903)。
7.2加入20μl稀释好的阳性对照抗体P1和P4、阴性对照抗体和A0(60μg/ml开始(终浓度15μg/ml)，3倍连续稀释，8个点，含0点。
7.3用RPMI 1640+10％FBS配制的培养基重悬CHOK1-CD155-2A-OKT3细胞，加入20μl至96孔板中。
7.4放入37℃，5％CO2培养箱中，孵育5小时。
7.5每孔加入80μl Luciferase Assay reagent(Promega,E6120)，用酶标仪检测96孔板的生物荧光值(RLU)。
在以上试验中，A0作用于Jurkat-hTIGIT-NFAT-CD226细胞上过表达的人TIGIT，EC50数值如表4所示，A0能够阻断人TIGIT与人CD155相互作用的生物学活性(图9)。
表4抗TIGIT抗体的生物学活性
克隆 EC50(μg/ml)of RLU 最大RLU
P1 0.6330 9083
P4 0.5342 8842
IgG对照 NA 6323
A0 0.9219 8264
注：NA表示“未检出”
实施例8抗人TIGIT抗体的人源化设计
为了降低鼠源抗体的免疫原性，将已筛选出的有生物学活性的抗体进行人源化。鼠源单克隆抗体的人源化根据本领域许多文献公示的方法进行。简言之，使用人抗体恒定结构域替代亲本(鼠源抗体)恒定结构域，根据鼠源抗体和人抗体的同源性选择人种系抗体序列，进行CDR移植。然后以鼠源抗体的三维结构为基础，通过VL和VH的氨基酸残基进行回复突变，将鼠源抗体的恒定区替换为人恒定区，得到最终的人源化分子。
实施例9人源化抗TIGIT抗体与表达于细胞上的人TIGIT的结合
基于流式细胞术测定法测定人源化抗体与表达于CHOK1细胞表面的人TIGIT的结合能力。通过比较不同抗体与表达于CHOK1细胞表面的人TIGIT的结合曲线来测定其结合能力。
9.1将CHOK1/hTIGIT细胞(吉满生物，GM-C01116)铺于96孔板中。
9.2用含2％FBS的PBS分别配制阳性对照抗体P1和P4、阴性对照抗体、嵌合抗体A0和人源化抗体A1到A4，最大浓度为15μg/ml，5倍稀释，8个点，每管加入100μl，4摄氏度孵育1小时。
9.3用含2％FBS的PBS洗板3次。
9.4将PE labeled-human IgG(Biolegend,410708)分别用2％FBS的PBS 1:2000稀释，每孔加入100μl，4摄氏度孵育0.5小时。
9.5用含2％FBS的PBS洗板2次。用100μl含2％FBS的PBS重新悬浮细胞。
9.6使用流式细胞仪测定PE通道的中位荧光度值(MFI)。
在以上试验中，人源化抗体A1-A4结合CHOK1细胞上过表达的人TIGIT，与阳性对照抗体P1、P4具有相似的EC50数值(如表5所示)，即相似的结合能力(图10)。
表5抗TIGIT抗体与表达于细胞上的人TIGIT的结合活性
克隆 EC50(μg/ml)of MFI 最大MFI
P1 0.2642 13542.61
P4 0.2139 10337.59
IgG对照 NA 228.82
A0 ～0.1387 9887.94
A1 0.3605 10787.92
A2 0.3122 10598.27
A3 0.3293 10218.52
A4 0.4957 10055.16
注：NA表示“未检出”
实施例10人源化抗TIGIT抗体对其配体CD155的阻断
采用流式细胞术的方法测定抗体的配体阻断能力。
10.1将CHOK1/hTIGIT细胞(吉满生物)铺细胞于96孔板中。
10.2用含2％FBS的PBS配制浓度为0.6μg/ml的Biotinylated-CD155(AcroBiosystems,CD5-H82F6)。用配制的Biotinylated-CD155的2％FBS的PBS分别配制阳性对照抗体P1和P4、阴性对照抗体、嵌合抗体A0和人源化抗体A1-A4，抗体最大浓度为15μg/ml。
10.3然后分别加100μl混合液于上述96孔板中，4摄氏度孵育1小时。
10.4用含2％FBS的PBS洗板3次。
10.5将PE-streptavidin(Biolegend,405203)用2％FBS的PBS 1:2000稀释，每孔加入100μl，4摄氏度孵育0.5小时。
10.6用含2％FBS的PBS洗板2次。用100μl含2％FBS的PBS重新悬浮细胞。
10.7使用流式细胞仪测定PE通道的中位荧光度值。
在以上试验中，人源化抗体A1-A4阻断TIGIT配体CD155结合CHOK1细胞上过表达的人TIGIT，与阳性对照抗体P1、P4和嵌合抗体A0具有相似的EC50数值(如表6所示)，即相似的阻断配体CD155结合能力(图11)。
表6人源化抗TIGIT抗体对其配体CD155的阻断
克隆 EC50(μg/ml)of％抑制 最大抑制
P1 0.3061 99.99％
P4 0.3088 100.14％
IgG对照 NA 6.36％
A0 0.3835 99.23％
A1 0.4304 99.29％
A2 0.4055 99.58％
A3 0.4267 99.56％
A4 0.2698 99.53％
注：NA表示“未检出”
实施例11人源化抗TIGIT抗体的生物学活性
通过荧光素酶报告基因系统检测的荧光强度比较不同抗TIGIT抗体在Jurkat-hTIGIT-NFAT-CD226细胞中的荧光素酶的表达。TIGIT与CD226竞争结合CD155，从而抑制Jurkat-hTIGIT-NFAT-CD226细胞效应功能，使荧光素酶表达降低；抗TIGIT抗体与Jurkat-hTIGIT-NFAT-CD226细胞上的TIGIT结合后，阻断CHOK1-CD155-2A-OKT3细胞的CD155与TIGIT的结合，OKT3和CD226能够正向刺激Jurkat-hTIGIT-NFAT-CD226细胞，增强荧光素酶表达。
11.1用RPMI 1640+10％FBS配制的培养基重悬Jurkat-hTIGIT-NFAT-CD226细胞加入40μl至96孔板中(Corning,3903)。
11.2加入20μl稀释好的阳性对照抗体P1和P4、阴性对照抗体、嵌合抗体A0和人源化抗体A1-A4(60μg/ml开始(终浓度15μg/ml)，3倍连续稀释，8个点，含0点。
11.3用RPMI 1640+10％FBS配制的培养基重悬CHOK1-CD155-2A-OKT3细胞加入20μl至96孔板中。
11.4放入37℃，5％CO2培养箱中，孵育5小时。
11.5每孔加入80μl Luciferase Assay reagent(Promega,E6120)，用酶标仪检测96孔板的生物荧光值。
在以上试验中，4个人源化抗体(A1-A4)作用于Jurkat-hTIGIT-NFAT-CD226细胞上过表达的人TIGIT，与嵌合抗体B011-A-142E4C5具有相似或更优的EC50数值(表7)，即相似或更优的阻断人TIGIT与人CD155相互作用的生物学活性(图12)。
表7人源化抗TIGIT抗体的生物学活性
克隆 EC50(μg/ml)of RLU Max RLU
P1 0.3047 10518
P4 0.3570 9610
IgG对照 NA 7107
A0 1.3250 9272
A1 1.1810 8947
A2 1.0140 9214
A3 0.7818 9368
A4 0.8468 8810
注：NA表示“未检出”
实施例12人源化抗TIGIT抗体与抗原蛋白的结合亲和力
用Biacore检测不同抗体与SPH-B011-A-Antigen-his蛋白的结合亲和性。
偶联抗人Fc或抗鼠Fc抗体。混合100ml 10×HBS-EP+缓冲液和900ml Milli-Q水，得到1L 1×HBS-EP+缓冲液。用1:1混合的50mM NHS和200mM EDC(NHS和EDC来自氨基偶联试剂盒(从GE Healthcare购买，货号BR-1006-33)活化CM5芯片1-8通道的表面，流速为10μl/min，时间420秒。以10μl/min流速注射抗人Fc或抗鼠Fc抗体(稀释在pH4.5的醋酸钠溶液中，浓度20μg/ml)200秒，最后用1M乙醇胺盐酸盐(pH8.5)封闭芯片上多余的有活性的羧基。用1×HBS-EP+以10μl/min流速，冲洗芯片表面2小时，以稳定基线,仪器设定温度为25℃。
结合动力学参数的测定。抗体与抗原(人TIGIT)相互作用。初始循环，由测样和再生两步组成，测量前重复3次，以稳定基线。测样：以30μl/min流速向1-8通道注射1×HBS-EP+缓冲液120秒，解离60秒。再生：向1-8通道注射10mM甘氨酸pH1.5，30μl/min，30秒，稳定30秒。
结合动力学参数测定的实验步骤：动力学测定的运行缓冲液是1×HBS-EP+(pH7.4)溶液。捕获：在抗人Fc或抗鼠Fc芯片第1-8通道的Test channel分别注射不同抗体，流速10μl/min，60s，进行捕获。用1×HBS-EP+(pH 7.4)溶液将抗原(人TIGIT)稀释至100nM。测样：以30μl/min流速向1-8通道注射，1个0浓度样品用于去除背景信号；抗原抗体的结合和解离时间分别为180和400秒。再生：以30μl/min流速向1-8通道注射10mM Glycine pH1.5，30秒，然后稳定60秒。
在以上试验中，检测了人源化抗体A1-A4与人TIGIT的结合亲和力，A1-A4的KD范围在E-9M(如表8所示)。
表8人源化抗TIGIT抗体与抗原蛋白的结合亲和力
克隆 ka(1/Ms) kd(1/s) KD(M)
A1 5.44E+05 2.51E-03 4.62E-09
A2 5.60E+05 2.41E-03 4.30E-09
A3 4.83E+05 2.25E-03 4.66E-09
A4 5.29E+05 2.57E-03 4.85E-09
实施例13动物体内药效试验
本实验利用人TIGIT敲入-MC38小鼠肿瘤模型研究抗TIGIT抗体A0的抗肿瘤活性。
研究了候选分子A0单独给药(20mg/kg)在人TIGIT敲入-MC38小鼠模型中的药效学。小鼠结肠癌MC38细胞(和元生物技术(上海)股份有限公司)被移植到雌性TIGIT转基因小鼠(江苏集萃药康生物科技有限公司)。细胞移植后的第6天、第9天、第12天、第15天、第18天和第21天，给各组小鼠分别腹腔注射同型IgG对照抗体、阳性对照P1和本申请的A0抗体；细胞移植后的第6天、第9天、第12天、第16天、第18天、第21天和第24天测量肿瘤体积。接种后第24天计算肿瘤体积抑制率(TGI％)，计算公式如下：TGI(％)＝[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100；其中Ti：给药组肿瘤体积均数，T0：给药组D0天的肿瘤体积均数，Vi：同型对照组肿瘤体积均数，V0：同型对照组D0天的肿瘤体积均数。肿瘤体积测定：采用游标卡尺测定肿瘤的长径(a)和宽径(b)，肿瘤体积按如下公式计算：TV＝1/2×a×b2。采用电子天平测定体重。结果如表9和图13A所示。
观察表9和图13A实验结果，可见本申请的A0抗体与同型IgG对照相比，在20mg/kg剂量下对肿瘤生长有一定的抑制作用，肿瘤体积抑制率为17％；
观察图13B实验结果，本研究中所有组小鼠在细胞接种后24天，小鼠体重均无明显变化。
表9第24天肿瘤抑制率
Figure BDA0003495523810000521
实施例14人源化TIGIT抗体与PD-1抗体联用的抗肿瘤活性
本实验采用MC38/hPDL1细胞接种人B-hPD-1/hPD-L1/hTIGIT转基因小鼠测定本发明的抗TIGIT抗体A1、A2分别与PD-1抗体联用的抗肿瘤活性。
小鼠结肠癌MC38/hPDL1(mPDL1 KO)细胞(康源博创生物科技(北京)有限公司被移植到雌性C57BL/6背景的人B-hPD-1/hPD-L1/hTIGIT转基因小鼠(百奥赛图江苏基因生物技术有限公司)。肿瘤细胞接种第8天单次给药，PD-1抗体(帕博利珠单抗Pembrolizumab，来源：泰州市百英生物科技有限公司，货号：B2014-CHO)；肿瘤细胞接种第8、11、15、18、22、25天给药，同型IgG对照抗体、本申请的A1抗体、本申请的A2抗体；给药期间监测各组小鼠瘤体积和体重变化，监测频率均为2次/周，连续监测3周。在每次给药前测定体重和肿瘤体积，细胞接种后第28天计算肿瘤体积抑制率(TGI％)，计算公式如下：TGI(％)＝[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100；其中Ti：给药组肿瘤体积均数，T0：给药组D0天的肿瘤体积均数，Vi：同型对照组肿瘤体积均数，V0：同型对照组D0天的肿瘤体积均数。肿瘤体积测定：采用游标卡尺测定肿瘤的长径(a)和宽径(b)，肿瘤体积按如下公式计算：TV＝1/2×a×b2。采用电子天平测定体重。结果如表10和图14A所示。
观察表10和图14A实验结果，本申请的A1抗体和A2抗体在10mg/kg剂量下肿瘤体积抑制率分别为41％和40％，PD-1抗体在3mg/kg剂量下肿瘤体积抑制率为68％；A1抗体和PD-1抗体联用剂量下肿瘤体积抑制率为83％；A2抗体和PD-1抗体联用剂量下肿瘤体积抑制率为77％；本申请的A1抗体、A2抗体分别和PD-1抗体联用均显著性抑制肿瘤的生长。
观察图14B实验结果，本研究中所有组小鼠在细胞接种后28天，小鼠体重均无明显变化。
表10第28天肿瘤抑制率
Figure BDA0003495523810000531
*：与IgG对照抗体肿瘤体积相比，P<0.05，**：与IgG对照抗体肿瘤体积相比，P<0.01。
本试验采用MC38/hPDL1细胞接种人B-hPD-1/hPD-L1/hTIGIT转基因小鼠测定本发明的抗TIGIT抗体与PD-L1抗体联用的抗肿瘤作用。
人B-hPD-1/hPD-L1/hTIGIT转基因小鼠：
雌性C57BL/6背景的人B-hPD-1/hPD-L1/hTIGIT转基因小鼠(约6周)购自百奥赛图江苏基因生物技术有限公司。小鼠在到达后适应性饲养7天，随后开始研究。
细胞：小鼠结肠癌MC38细胞购自舜冉上海生物科技有限公司，百奥赛图基因生物技术有限公司对MC38细胞进行了基因改造，使其过量表达人源PD-L1，同时敲除鼠源PD-L1，该细胞被命名为B-CAG-hPD-L1 MC38细胞，简称为MC38-hPD-L1细胞系。离心收集细胞，在PBS中重悬细胞。在第0天取0.1ml细胞悬液皮下接种至人B-hPD-1/hPD-L1/hTIGIT转基因小鼠右腋窝皮下来建立MC38/hPDL1荷瘤小鼠模型。
给药：
肿瘤细胞接种第7天，检测各只小鼠瘤体积，挑选出瘤体积在80mm3～130mm3范围内的小鼠按瘤体积平均分组(每组6只小鼠)，每周2次给药，共6次。
上述试验显示，抗TIGIT抗体与抗PD-L1抗体联用具有良好的抑制肿瘤生长的效果，且小鼠体重均无明显变化。
实施例15人源化TIGIT抗体与PD-L1抗体联用的抗肿瘤活性
本实验采用MC38/hPD-L1细胞接种人B-hPD-1/hPD-L1/hTIGIT转基因小鼠测定本发明的抗TIGIT抗体A1、A2分别与PD-L1抗体联用的抗肿瘤活性。
小鼠结肠癌MC38/hPD-L1(mPD-L1 KO)细胞(康源博创生物科技(北京)有限公司)被移植到雌性C57BL/6背景的人B-hPD-1/hPD-L1/hTIGIT转基因小鼠(百奥赛图江苏基因生物技术有限公司)。肿瘤细胞接种第6、9、13、16、20、23天给药，同型IgG对照抗体、PD-L1抗体(阿替利珠单抗Atezolizumab，来源：杭州皓阳生物技术有限公司，货号：HSP099-20)、本申请的A1抗体、本申请的A2抗体；给药期间监测各组小鼠瘤体积和体重变化，监测频率均为2次/周，连续监测3周。在每次给药前测定体重和肿瘤体积，细胞接种后第27天计算肿瘤体积抑制率(TGI％)，计算公式如下：TGI(％)＝[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100；其中Ti：给药组肿瘤体积均数，T0：给药组D0天的肿瘤体积均数，Vi：同型对照组肿瘤体积均数，V0：同型对照组D0天的肿瘤体积均数。肿瘤体积测定：采用游标卡尺测定肿瘤的长径(a)和宽径(b)，肿瘤体积按如下公式计算：TV＝1/2×a×b2。采用电子天平测定体重。结果如表11和图15所示。
观察表11和图15A实验结果，本申请的A1抗体和A2抗体在10mg/kg剂量下肿瘤体积抑制率分别为8％和15％，PD-L1抗体在3mg/kg剂量下肿瘤体积抑制率为-24％；A1抗体和PD-L1抗体联用剂量下肿瘤体积抑制率为22％；A2抗体和PD-L1抗体联用剂量下肿瘤体积抑制率为41％；本申请的A2抗体和PD-L1抗体联用显著性抑制肿瘤的生长。
观察图15B实验结果，本研究中所有组小鼠在细胞接种后27天，小鼠体重均无明显变化。
表11第27天肿瘤抑制率
Figure BDA0003495523810000541
Figure BDA0003495523810000551
注：**：与IgG对照抗体肿瘤体积相比，P<0.01。
序列表
<110> 上海医药集团股份有限公司
<120> 抗TIGIT抗体及其用途
<130> 0124-PA-014
<160> 88
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0-A4 HCDR1
<400> 1
Asp Tyr Asn Met Asn
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0-A4 HCDR2
<400> 2
Val Ile Asn Pro Asn His Gly Thr Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0-A4 HCDR3
<400> 3
Asn Trp Asp Val Trp Tyr Phe Asp Val
1 5
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0-A4 LCDR1
<400> 4
Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0-A4 LCDR2
<400> 5
Asn Ala Lys Ala Leu Ala Glu
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0-A4 LCDR3
<400> 6
Gln His His Phe Gly Ala Pro Trp Thr
1 5
<210> 7
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0 H-FR1
<400> 7
Glu Leu Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr
20 25 30
<210> 8
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0 H-FR2
<400> 8
Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 9
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0 H-FR3
<400> 9
Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
1 5 10 15
Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Asn
20 25 30
<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0 H-FR4
<400> 10
Trp Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 11
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0 L-FR1
<400> 11
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 12
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0 L-FR2
<400> 12
Trp Tyr Arg Gln Lys Gln Gly Asn Ser Pro Gln Leu Leu Val Tyr
1 5 10 15
<210> 13
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0 L-FR3
<400> 13
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser
1 5 10 15
Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 14
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0 L-FR4
<400> 14
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 15
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A1 H-FR1；A2 H-FR1；A3 H-FR1；A4 H-FR1
<400> 15
Gln Leu Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr
20 25 30
<210> 16
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A1 H-FR2；A2 H-FR2；A3 H-FR2；A4 H-FR2
<400> 16
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 17
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A1 H-FR3；A2 H-FR3；A3 H-FR3；A4 H-FR3
<400> 17
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Gln Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Asn
20 25 30
<210> 18
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A1 H-FR4；A2 H-FR4；A3 H-FR4；A4 H-FR4
<400> 18
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
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<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 19
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 20
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A1 L-FR2
<400> 20
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 21
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A1 L-FR3；A2 L-FR3
<400> 21
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 22
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A1 L-FR4；A2 L-FR4；A3 L-FR4
<400> 22
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 23
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A2 L-FR2
<400> 23
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr
1 5 10 15
<210> 24
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 24
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr
1 5 10 15
<210> 25
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A3 L-FR3；A4 L-FR3
<400> 25
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 26
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A4 L-FR2
<400> 26
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr
1 5 10 15
<210> 27
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A4 L-FR4
<400> 27
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 28
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0 VH
<400> 28
Glu Leu Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Asn His Gly Thr Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Asn Asn Trp Asp Val Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 29
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A1 VH；A2 VH；A3 VH；A4 VH
<400> 29
Gln Leu Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Asn His Gly Thr Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Gln Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Asn Asn Trp Asp Val Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 30
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0 VL
<400> 30
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Arg Gln Lys Gln Gly Asn Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Ala Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ala Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 31
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A1 VL
<400> 31
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Ala Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ala Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 32
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A2 VL
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Ala Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ala Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 33
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A3 VL
<400> 33
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Ala Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ala Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 34
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A4 VL
<400> 34
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ser Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Ala Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ala Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 35
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 帕博利珠单抗 HCDR1
<400> 35
Asn Tyr Tyr Met Tyr
1 5
<210> 36
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 帕博利珠单抗 HCDR2
<400> 36
Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asn
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 帕博利珠单抗 HCDR3
<400> 37
Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 38
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 帕博利珠单抗 LCDR1
<400> 38
Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 39
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 帕博利珠单抗 LCDR2
<400> 39
Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser
1 5
<210> 40
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 帕博利珠单抗 LCDR3
<400> 40
Gln His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 41
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 帕博利珠单抗 VH
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 42
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 帕博利珠单抗 VL
<400> 42
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 43
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 帕博利珠单抗 重链
<400> 43
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 44
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 帕博利珠单抗 轻链
<400> 44
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 45
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿替利珠单抗 VH
<400> 45
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 46
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿替利珠单抗 VL
<400> 46
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 47
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿替利珠单抗重链
<400> 47
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 48
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿替利珠单抗轻链
<400> 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 49
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿替利珠单抗 HCDR1
<400> 49
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile His
1 5 10
<210> 50
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿替利珠单抗 HCDR2
<400> 50
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿替利珠单抗 HCDR3
<400> 51
Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr
1 5
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿替利珠单抗 LCDR1
<400> 52
Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 53
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿替利珠单抗 LCDR2
<400> 53
Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser
1 5
<210> 54
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿替利珠单抗 LCDR3
<400> 54
Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr
1 5
<210> 55
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人重链IgG1 CH
<400> 55
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 56
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人重链IgG2 CH
<400> 56
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 57
<211> 377
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人重链IgG3 CH
<400> 57
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro
100 105 110
Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg
115 120 125
Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys
130 135 140
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
370 375
<210> 58
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人重链IgG4 CH
<400> 58
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 59
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P1 VH
<400> 59
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly
20 25 30
Ile Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Val Ser Gly Asn Tyr Tyr Asn Val Asp Tyr
100 105 110
Tyr Phe Phe Gly Val Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
115 120 125
Ser Ser
130
<210> 60
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P1 VL
<400> 60
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Leu Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 61
<211> 460
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P1重链
<400> 61
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly
20 25 30
Ile Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Val Ser Gly Asn Tyr Tyr Asn Val Asp Tyr
100 105 110
Tyr Phe Phe Gly Val Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
115 120 125
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
130 135 140
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
145 150 155 160
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
165 170 175
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
195 200 205
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
210 215 220
Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
225 230 235 240
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
245 250 255
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
260 265 270
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
275 280 285
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
290 295 300
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
305 310 315 320
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
325 330 335
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
340 345 350
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
355 360 365
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
370 375 380
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
385 390 395 400
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
405 410 415
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
420 425 430
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
435 440 445
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 62
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P1轻链
<400> 62
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Leu Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 63
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P4 VH
<400> 63
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Lys Thr Tyr Tyr Arg Phe Lys Trp Tyr Ser Asp Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Val Lys Gly Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Phe Tyr Cys Thr Arg Glu Ser Thr Thr Tyr Asp Leu Leu Ala Gly Pro
100 105 110
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 64
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P4 VL
<400> 64
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Thr Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Lys Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 65
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P4重链
<400> 65
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Lys Thr Tyr Tyr Arg Phe Lys Trp Tyr Ser Asp Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Val Lys Gly Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Phe Tyr Cys Thr Arg Glu Ser Thr Thr Tyr Asp Leu Leu Ala Gly Pro
100 105 110
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 66
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P4轻链
<400> 66
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Thr Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Lys Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 67
<211> 735
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人TIGIT CDS
<400> 67
atgcgctggt gtctcctcct gatctgggcc caggggctga ggcaggctcc cctcgcctca 60
ggaatgatga caggcacaat agaaacaacg gggaacattt ctgcagagaa aggtggctct 120
atcatcttac aatgtcacct ctcctccacc acggcacaag tgacccaggt caactgggag 180
cagcaggacc agcttctggc catttgtaat gctgacttgg ggtggcacat ctccccatcc 240
ttcaaggatc gagtggcccc aggtcccggc ctgggcctca ccctccagtc gctgaccgtg 300
aacgatacag gggagtactt ctgcatctat cacacctacc ctgatgggac gtacactggg 360
agaatcttcc tggaggtcct agaaagctca gtggctgagc acggtgccag gttccagatt 420
ccattgcttg gagccatggc cgcgacgctg gtggtcatct gcacagcagt catcgtggtg 480
gtcgcgttga ctagaaagaa gaaagccctc agaatccatt ctgtggaagg tgacctcagg 540
agaaaatcag ctggacagga ggaatggagc cccagtgctc cctcaccccc aggaagctgt 600
gtccaggcag aagctgcacc tgctgggctc tgtggagagc agcggggaga ggactgtgcc 660
gagctgcatg actacttcaa tgtcctgagt tacagaagcc tgggtaactg cagcttcttc 720
acagagactg gttag 735
<210> 68
<211> 1251
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人CD155 CDS
<400> 68
atggcccgag ccatggccgc cgcgtggccg ctgctgctgg tggcgctact ggtgctgtcc 60
tggccacccc caggaaccgg ggacgtcgtc gtgcaggcgc ccacccaggt gcccggcttc 120
ttgggcgact ccgtgacgct gccctgctac ctacaggtgc ccaacatgga ggtgacgcat 180
gtgtcacagc tgacttgggc gcggcatggt gaatctggca gcatggccgt cttccaccaa 240
acgcagggcc ccagctattc ggagtccaaa cggctggaat tcgtggcagc cagactgggc 300
gcggagctgc ggaatgcctc gctgaggatg ttcgggttgc gcgtagagga tgaaggcaac 360
tacacctgcc tgttcgtcac gttcccgcag ggcagcagga gcgtggatat ctggctccga 420
gtgcttgcca agccccagaa cacagctgag gttcagaagg tccagctcac tggagagcca 480
gtgcccatgg cccgctgcgt ctccacaggg ggtcgcccgc cagcccaaat cacctggcac 540
tcagacctgg gcgggatgcc caatacgagc caggtgccag ggttcctgtc tggcacagtc 600
actgtcacca gcctctggat attggtgccc tcaagccagg tggacggcaa gaatgtgacc 660
tgcaaggtgg agcacgagag ctttgagaag cctcagctgc tgactgtgaa cctcaccgtg 720
tactaccccc cagaggtatc catctctggc tatgataaca actggtacct tggccagaat 780
gaggccaccc tgacctgcga tgctcgcagc aacccagagc ccacaggcta taattggagc 840
acgaccatgg gtcccctgcc accctttgct gtggcccagg gcgcccagct cctgatccgt 900
cctgtggaca aaccaatcaa cacaacttta atctgcaacg tcaccaatgc cctaggagct 960
cgccaggcag aactgaccgt ccaggtcaaa gagggacctc ccagtgagca ctcaggcatg 1020
tcccgtaacg ccatcatctt cctggttctg ggaatcctgg tttttctgat cctgctgggg 1080
atcgggattt atttctattg gtccaaatgt tcccgtgagg tcctttggca ctgtcatctg 1140
tgtccctcga gtacagagca tgccagcgcc tcagctaatg ggcatgtctc ctattcagct 1200
gtgagcagag agaacagctc ttcccaggat ccacagacag agggcacaag g 1251
<210> 69
<211> 1035
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> OKT3 scFV
<400> 69
atggctctgc ccgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgctgctgca tgctgctaga 60
cccggctccc aagtgcaact gcagcaaagc ggcgctgaac tggctagacc cggagcctcc 120
gtgaagatga gctgcaaggc ctccggctac accttcacaa gatacaccat gcactgggtc 180
aagcagaggc ccggacaagg actggagtgg atcggctaca tcaacccctc taggggctat 240
accaactaca accagaagtt caaggacaaa gccacactga ccaccgataa gtccagcagc 300
accgcctaca tgcaactcag ctctctgacc agcgaggact ccgccgtgta ctactgcgcc 360
agatactacg acgaccacta ttgtctggac tactggggcc aaggcaccac actgacagtg 420
agctccggag gcggaggaag cggaggagga ggaagcggcg gaggaggcag ccaaattgtg 480
ctgacacaga gccccgctat catgagcgct tcccccggcg agaaggtgac catgacatgc 540
tccgctagca gcagcgtgag ctacatgaac tggtatcagc agaagtccgg cacaagcccc 600
aaaaggtgga tctatgacac cagcaagctg gccagcggag tgcccgccca cttcagaggc 660
tccggaagcg gcaccagcta cagcctcacc atctccggca tggaggccga agatgccgcc 720
acctactact gccagcagtg gtcctccaac cccttcacct ttggctccgg caccaaactc 780
gagatcaacc ccgcccctag acctcctacc cccgccccta caatcgcctc ccagcctctg 840
tctctgagac ccgaggcttg cagacccgcc gccggaggag ccgtgcatac aaggggactg 900
gacttcgctt gcgacatcta catctgggcc cctctggctg gaacatgtgg cgtgctgctg 960
ctcagcctcg tgatcaccct ctactgcaac catagaaata gaaggagagt gtgcaagtgc 1020
cccagacccg tggtg 1035
<210> 70
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> H-FR1通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa = Glu或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa = Gln或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa = Ala或Pro
<220>
<221> misc_feature
<222> (11)..(11)
<223> Xaa = Leu或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa = Lys或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(20)
<223> Xaa = Ile或Val
<400> 70
Xaa Leu Gln Leu Xaa Gln Ser Gly Xaa Glu Xaa Xaa Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Xaa Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr
20 25 30
<210> 71
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> H-FR2通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa = Lys或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa = Ala或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa = Asn或Pro
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa = Lys或Gln
<400> 71
Trp Val Xaa Gln Xaa Xaa Gly Xaa Ser Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 72
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> H-FR3通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa = Lys或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa = Ala或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa = Leu或Met
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa = Arg或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa = Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa = Glu或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> Xaa = Arg或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (25)..(25)
<223> Xaa = Ser或Thr
<400> 72
Xaa Xaa Thr Xaa Thr Xaa Asp Gln Ser Xaa Ser Thr Ala Tyr Met Xaa
1 5 10 15
Leu Asn Ser Leu Xaa Ser Glu Asp Xaa Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Asn
20 25 30
<210> 73
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> H-FR4通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa = Gln或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa = Leu或Thr
<400> 73
Trp Gly Xaa Gly Thr Xaa Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 74
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> L-FR1通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa = Ala或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (17)..(17)
<223> Xaa = Asp或Glu
<220>
<221> misc_feature
<222> (18)..(18)
<223> Xaa = Arg或Thr
<400> 74
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Xaa Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Xaa Xaa Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 75
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> L-FR2通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa = Gln或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa = Pro或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa = Lys或Asn
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa = Ala或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (11)..(11)
<223> Xaa = Lys或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (14)..(14)
<223> Xaa = Ile或Val
<400> 75
Trp Tyr Xaa Gln Lys Xaa Gly Xaa Xaa Pro Xaa Leu Leu Xaa Tyr
1 5 10 15
<210> 76
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> L-FR3通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (14)..(14)
<223> Xaa = Asp或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa = Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (18)..(18)
<223> Xaa = Lys或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(20)
<223> Xaa = Asn或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (28)..(28)
<223> Xaa = Ala或Gly
<220>
<221> misc_feature
<222> (29)..(29)
<223> Xaa = Ser或Thr
<400> 76
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Xaa Phe Xaa
1 5 10 15
Leu Xaa Ile Xaa Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Xaa Xaa Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 77
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> L-FR4通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa = Gly或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> Xaa = Leu或Val
<400> 77
Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Xaa Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 78
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa = Glu或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa = Gln或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa = Ala或Pro
<220>
<221> misc_feature
<222> (11)..(11)
<223> Xaa = Leu或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa = Lys或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(20)
<223> Xaa = Ile或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (38)..(38)
<223> Xaa = Lys或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (40)..(40)
<223> Xaa = Ala或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (41)..(41)
<223> Xaa = Asn或Pro
<220>
<221> misc_feature
<222> (43)..(43)
<223> Xaa = Lys或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (67)..(67)
<223> Xaa = Lys或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (68)..(68)
<223> Xaa = Ala或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (70)..(70)
<223> Xaa = Leu或Met
<220>
<221> misc_feature
<222> (72)..(72)
<223> Xaa = Arg或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (76)..(76)
<223> Xaa = Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (82)..(82)
<223> Xaa = Glu或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (87)..(87)
<223> Xaa = Arg或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (91)..(91)
<223> Xaa = Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (110)..(110)
<223> Xaa = Gln或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (113)..(113)
<223> Xaa = Leu或Thr
<400> 78
Xaa Leu Gln Leu Xaa Gln Ser Gly Xaa Glu Xaa Xaa Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Xaa Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Xaa Gln Xaa Xaa Gly Xaa Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Asn His Gly Thr Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Xaa Xaa Thr Xaa Thr Xaa Asp Gln Ser Xaa Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Xaa Leu Asn Ser Leu Xaa Ser Glu Asp Xaa Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Asn Asn Trp Asp Val Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Xaa Gly Thr
100 105 110
Xaa Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 79
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VL通式
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa = Ala或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (17)..(17)
<223> Xaa = Asp或Glu
<220>
<221> misc_feature
<222> (18)..(18)
<223> Xaa = Arg或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (37)..(37)
<223> Xaa = Gln或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (40)..(40)
<223> Xaa = Pro或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (42)..(42)
<223> Xaa = Lys或Asn
<220>
<221> misc_feature
<222> (43)..(43)
<223> Xaa = Ala或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (45)..(45)
<223> Xaa = Lys或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (48)..(48)
<223> Xaa = Ile或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (70)..(70)
<223> Xaa = Asp或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (72)..(72)
<223> Xaa = Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (74)..(74)
<223> Xaa = Lys或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (76)..(76)
<223> Xaa = Asn或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (84)..(84)
<223> Xaa = Ala或Gly
<220>
<221> misc_feature
<222> (85)..(85)
<223> Xaa = Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (100)..(100)
<223> Xaa = Gly或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (104)..(104)
<223> Xaa = Leu或Val
<400> 79
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Xaa Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Xaa Xaa Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Xaa Gln Lys Xaa Gly Xaa Xaa Pro Xaa Leu Leu Xaa
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Ala Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Xaa Phe Xaa Leu Xaa Ile Xaa Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Xaa Xaa Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ala Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Xaa Glu Ile Lys
100 105
<210> 80
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链恒定区
<400> 80
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 81
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0重链（恒定区源自人IgG1）
<400> 81
Glu Leu Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Asn His Gly Thr Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Asn Asn Trp Asp Val Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 82
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A1重链（恒定区源自人IgG1）；A2重链（恒定区源自人IgG1）；A3重链（恒定区源自人IgG1）；A4重链（恒定区源自人IgG1）
<400> 82
Gln Leu Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Asn His Gly Thr Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Gln Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Asn Asn Trp Asp Val Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 83
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A0轻链
<400> 83
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Arg Gln Lys Gln Gly Asn Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Ala Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ala Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 84
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A1轻链
<400> 84
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Ala Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ala Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 85
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A2轻链
<400> 85
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Ala Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ala Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 86
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A3轻链
<400> 86
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Ala Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ala Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 87
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A4轻链
<400> 87
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ser Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Ala Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ala Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 88
<211> 1011
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人CD226 CDS
<400> 88
atggattatc ctactttact tttggctctt cttcatgtat acagagctct atgtgaagag 60
gtgctttggc atacatcagt tccctttgcc gagaacatgt ctctagaatg tgtgtatcca 120
tcaatgggca tcttaacaca ggtggagtgg ttcaagatcg ggacccagca ggattccata 180
gccattttca gccctactca tggcatggtc ataaggaagc cctatgctga gagggtttac 240
tttttgaatt caacgatggc ttccaataac atgactcttt tctttcggaa tgcctctgaa 300
gatgatgttg gctactattc ctgctctctt tacacttacc cacagggaac ttggcagaag 360
gtgatacagg tggttcagtc agatagtttt gaggcagctg tgccatcaaa tagccacatt 420
gtttcggaac ctggaaagaa tgtcacactc acttgtcagc ctcagatgac gtggcctgtg 480
caggcagtga ggtgggaaaa gatccagccc cgtcagatcg acctcttaac ttactgcaac 540
ttggtccatg gcagaaattt cacctccaag ttcccaagac aaatagtgag caactgcagc 600
cacggaaggt ggagcgtcat cgtcatcccc gatgtcacag tctcagactc ggggctttac 660
cgctgctact tgcaggccag cgcaggagaa aacgaaacct tcgtgatgag attgactgta 720
gccgagggta aaaccgataa ccaatatacc ctctttgtgg ctggagggac agttttattg 780
ttgttgtttg ttatctcaat taccaccatc attgtcattt tccttaacag aaggagaagg 840
agagagagaa gagatctatt tacagagtcc tgggatacac agaaggcacc caataactat 900
agaagtccca tctctaccag tcaacctacc aatcaatcca tggatgatac aagagaggat 960
atttatgtca actatccaac cttctctcgc agaccaaaga ctagagttta a 1011

Claims (102)

1.分离的抗原结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：
a)在Biacore测定中，以约5E-09M或以下的KD值与人TIGIT蛋白特异性结合；
b)在流式检测中，以约0.5μg/ml或以下的EC50值与表达于CHOK1细胞上的人TIGIT特异性结合；
c)阻断CD155与TIGIT结合；以及
d)激活CD226-NFAT信号通路。
2.根据权利要求1所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR3，所述HCDR3包含SEQ IDNO:3所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含重链可变区VH，所述VH包含所述HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR1，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接地相连，且所述H-FR1包含SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列。
7.根据权利要求6所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR1包含SEQ ID NO:7和SEQID NO:15中任一项所示的氨基酸序列。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR2，所述H-FR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述H-FR2包含SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
9.根据权利要求8所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR2包含SEQ ID NO:8和SEQID NO:16中任一项所示的氨基酸序列。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR3，所述H-FR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述H-FR3包含SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列。
11.根据权利要求10所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR3包含SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:17中任一项所示的氨基酸序列。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR4，所述H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接地相连，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列。
13.根据权利要求12所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR4包含SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1包含SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列；所述H-FR2包含SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列；所述H-FR3包含SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列；以及所述H-FR4包含SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4，所述H-FR1包含SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:15中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR2包含SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:16中任一项所示的氨基酸序列；所述H-FR3包含SEQID NO:9和SEQ ID NO:17中任一项所示的氨基酸序列；以及所述H-FR4包含SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:18中任一项所示的氨基酸序列。
16.根据权利要求15所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4包含选自下述任意一组的氨基酸序列：
a)H-FR1：SEQ ID NO:7，H-FR2：SEQ ID NO:8，H-FR3：SEQ ID NO:9和H-FR4：SEQ ID NO:10；
b)H-FR1：SEQ ID NO:15，H-FR2：SEQ ID NO:16，H-FR3：SEQ ID NO:17和H-FR4：SEQ IDNO:18。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含重链可变区VH，所述VH包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列。
18.根据权利要求17所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述VH包含SEQ ID NO:28和SEQID NO:29中任一项所示的氨基酸序列。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含LCDR1，所述LCDR1包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含轻链可变区VL，所述VL包含所述LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；所述LCDR2包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；以及所述LCDR1包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含L-FR1，所述L-FR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接或间接地相连，且所述L-FR1包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列。
24.根据权利要求23所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述L-FR1包含SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:19中任一项所示的氨基酸序列。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含L-FR2，所述L-FR2位于所述LCDR1与所述LCDR2之间，且所述L-FR2包含SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列。
26.根据权利要求25所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述L-FR2包含SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:26中任一项所示的氨基酸序列。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含L-FR3，所述L-FR3位于所述LCDR2与所述LCDR3之间，且所述L-FR3包含SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列。
28.根据权利要求27所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述L-FR3包含SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:25中任一项所示的氨基酸序列。
29.根据权利要求1-28中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含L-FR4，所述L-FR4的N末端与所述LCDR3的C末端直接或间接地相连，且所述L-FR4包含SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列。
30.根据权利要求29所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述L-FR4包含SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:27中任一项所示的氨基酸序列。
31.根据权利要求1-30中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含L-FR1，L-FR2，L-FR3和L-FR4，所述L-FR1包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列；所述L-FR2包含SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列；所述L-FR3包含SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列；以及所述L-FR4包含SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列。
32.根据权利要求1-31中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含L-FR1，L-FR2，L-FR3和L-FR4，所述L-FR1包含SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:19中任一项所示的氨基酸序列；所述L-FR2包含SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:26中任一项所示的氨基酸序列；所述L-FR3包含SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:25中任一项所示的氨基酸序列；以及所述L-FR4包含SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:22和SEQ IDNO:27中任一项所示的氨基酸序列。
33.根据权利要求32所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述L-FR1、L-FR2、L-FR3和L-FR4包含选自下述任意一组的氨基酸序列：
a)L-FR1：SEQ ID NO:11，L-FR2：SEQ ID NO:12，L-FR3：SEQ ID NO:13和L-FR4：SEQ IDNO:14；
b)L-FR1：SEQ ID NO:19，L-FR2：SEQ ID NO:20，L-FR3：SEQ ID NO:21和L-FR4：SEQ IDNO:22；
c)L-FR1：SEQ ID NO:19，L-FR2：SEQ ID NO:23，L-FR3：SEQ ID NO:21和L-FR4：SEQ IDNO:22；
d)L-FR1：SEQ ID NO:19，L-FR2：SEQ ID NO:24，L-FR3：SEQ ID NO:25和L-FR4：SEQ IDNO:22；
e)L-FR1：SEQ ID NO:19，L-FR2：SEQ ID NO:26，L-FR3：SEQ ID NO:25和L-FR4：SEQ IDNO:27。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含轻链可变区VL，所述VL包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列。
35.根据权利要求34所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述VL包含SEQ ID NO:30、SEQID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34中任一项所示的氨基酸序列。
36.根据权利要求1-35中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含重链恒定区，且所述重链恒定区包括源自IgG的恒定区或源自IgY的恒定区。
37.根据权利要求36所述的分离的抗体结合蛋白，其中所述重链恒定区包含源自选自下组蛋白的恒定区：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
38.根据权利要求36-37中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述重链恒定区包含SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:58中任一项所示的氨基酸序列。
39.根据权利要求1-38中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含轻链恒定区，且所述轻链恒定区包括源自Igκ的恒定区或源自Igλ的恒定区。
40.根据权利要求39所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述轻链恒定区包括源自人Igκ的恒定区。
41.根据权利要求39-40中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列。
42.根据权利要求1-41中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含重链HC，所述HC包含SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:82中任一项所示的氨基酸序列。
43.根据权利要求1-42中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含轻链LC，所述LC包含SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87中任一项所示的氨基酸序列。
44.根据权利要求43中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HC和LC包含选自下述任意一组的氨基酸序列：
a)HC：SEQ ID NO:81和LC：SEQ ID NO:83；
b)HC：SEQ ID NO:82和LC：SEQ ID NO:84；
c)HC：SEQ ID NO:82和LC：SEQ ID NO:85；
d)HC：SEQ ID NO:82和LC：SEQ ID NO:86；
e)HC：SEQ ID NO:82和LC：SEQ ID NO:87。
45.根据权利要求1-44中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体或其抗原结合片段。
46.根据权利要求45所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv，VHH和/或dAb。
47.根据权利要求45-46中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体选自下组：单克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。
48.多肽，其包含权利要求1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。
49.免疫缀合物，其包含权利要求1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或权利要求48所述的多肽。
50.分离的核酸分子，其编码权利要求1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，或者权利要求48所述的多肽。
51.载体，其包含权利要求50所述的分离的核酸分子。
52.细胞，其包含权利要求1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，权利要求48所述的多肽，权利要求49所述的免疫缀合物，权利要求50所述的分离的核酸分子和/或权利要求51所述的载体。
53.制备权利要求1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或权利要求48所述的多肽的方法，所述方法包括再使得权利要求1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或权利要求48所述的多肽表达的条件下，培养权利要求52所述的细胞。
54.药物组合物，其包含权利要求1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，权利要求48所述的多肽，权利要求49所述的免疫缀合物，权利要求50所述的分离的核酸分子，权利要求51所述的载体，权利要求52所述的细胞，和/或药学上可接受的佐剂和/或赋形剂。
55.药物组合，其包含权利要求1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白和免疫检查点抑制剂。
56.根据权利要求55所述的药物组合，其中所述免疫检查点抑制剂包括抑制PD-1/PD-L1相互作用的物质。
57.根据权利要求55-56中任一项所述的药物组合，其中所述免疫检查点抑制剂选自下组：
PD-1/PD-L1阻断剂、PD-1拮抗剂、PD-L1拮抗剂、PD-1抑制剂和PD-L1抑制剂。
58.根据权利要求55-57中任一项所述的药物组合，其中所述免疫检查点抑制剂包括抗PD-1抗体。
59.根据权利要求58所述的药物组合，其中所述抗PD-1抗体包含HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列。
60.根据权利要求58-59中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-1抗体包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列。
61.根据权利要求58-60中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-1抗体包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列。
62.根据权利要求58-61中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-1抗体包含重链可变区VH，所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列。
63.根据权利要求58-62中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-1抗体包含重链可变区VH，所述VH包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列。
64.根据权利要求58-63中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-1抗体包含LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列。
65.根据权利要求58-64中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-1抗体包含LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列。
66.根据权利要求58-65中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-1抗体包含LCDR1，所述LCDR1包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列。
67.根据权利要求58-66中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-1抗体包含轻链可变区VL，所述VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列；所述LCDR2包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列；以及所述LCDR1包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列。
68.根据权利要求58-67中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-1抗体包含轻链可变区VL，所述VL包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列。
69.根据权利要求58-68中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-1抗体包括帕博利珠单抗。
70.根据权利要求55-69中任一项所述的药物组合，其中所述免疫检查点抑制剂包括抗PD-L1抗体。
71.根据权利要求70所述的药物组合，其中所述抗PD-L1抗体包含HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列。
72.根据权利要求70-71中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-L1抗体包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。
73.根据权利要求70-72中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-L1抗体包含HCDR1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列。
74.根据权利要求70-73中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-L1抗体包含重链可变区VH，所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列；所述HCDR2包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列；以及所述HCDR1包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列。
75.根据权利要求70-74中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-L1抗体包含重链可变区VH，所述VH包含SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列。
76.根据权利要求70-75中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-L1抗体包含LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
77.根据权利要求70-76中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-L1抗体包含LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列。
78.根据权利要求70-77中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-L1抗体包含LCDR1，所述LCDR1包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列。
79.根据权利要求70-78中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-L1抗体包含轻链可变区VL，所述VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列；所述LCDR2包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列；以及所述LCDR1包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列。
80.根据权利要求70-79中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-L1抗体包含轻链可变区VL，所述VL包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列。
81.根据权利要求70-80中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-L1抗体包括阿替利珠单抗。
82.根据权利要求55-81中任一项所述的药物组合，其可以是药物组合物。
83.一种用于检测或测定TIGIT的方法，所述方法包括使用权利要求1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或权利要求48所述的多肽。
84.一种TIGIT的检测试剂盒，其包含权利要求1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或权利要求48所述的多肽。
85.权利要求1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或权利要求48所述的多肽在制备试剂盒中的用途。
86.一种调节免疫应答的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的权利要求1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，权利要求48所述的多肽，权利要求49所述的免疫缀合物，权利要求50所述的分离的核酸分子，权利要求51所述的载体，权利要求52所述的细胞和/或权利要求54中任一项所述的药物组合物，和/或药学上可接受的治疗剂。
87.一种调节免疫应答的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的权利要求55-82中任一项所述的药物组合，和/或药学上可接受的治疗剂。
88.权利要求1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，权利要求48所述的多肽，权利要求49所述的免疫缀合物，权利要求50所述的分离的核酸分子，权利要求51所述的载体，权利要求52所述的细胞和/或权利要求54中任一项所述的药物组合物，其用于预防、缓解和/或治疗肿瘤。
89.权利要求55-82中任一项所述的药物组合，其用于预防、缓解和/或治疗肿瘤。
90.根据权利要求89所述的用途，其中所述肿瘤包括与选自下组蛋白的表达相关的肿瘤：
TIGIT，CD155和CD112。
91.根据权利要求89-90中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括实体瘤。
92.根据权利要求89-91中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括结肠癌。
93.权利要求1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白和/或权利要求48所述的多肽在制备预防和/或治疗疾病或病症的药物中的用途，其中所述疾病或病症包括肿瘤。
94.权利要求55-82中任一项所述的药物组合在制备预防和/或治疗疾病或病症的药物中的用途，其中所述疾病或病症包括肿瘤。
95.根据权利要求94所述的用途，其中所述肿瘤包括与选自下组蛋白的表达相关的肿瘤：TIGIT，CD155和CD112。
96.根据权利要求94-95中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括实体瘤。
97.根据权利要求94-96中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括结肠癌。
98.一种预防和/或治疗疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的权利要求1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，权利要求48所述的多肽，权利要求49所述的免疫缀合物，权利要求50所述的分离的核酸分子，权利要求51所述的载体，和/或权利要求52所述的细胞，其中所述疾病或病症包括肿瘤。
99.一种预防和/或治疗疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的权利要求55-82中任一项所述的药物组合，其中所述疾病或病症包括肿瘤。
100.根据权利要求99所述的用途，其中所述肿瘤包括与选自下组蛋白的表达相关的肿瘤：TIGIT，CD155和CD112。
101.根据权利要求99-100中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括实体瘤。
102.根据权利要求99-101中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括结肠癌。
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