CN114836344B - 乳酸片球菌及其在酒精性肝炎中的应用 - Google Patents

乳酸片球菌及其在酒精性肝炎中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了乳酸片球菌及其在酒精性肝炎中的应用，属于微生物领域，该乳酸片球菌LA412保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20211378；本发明中的乳酸片球菌野生型菌株及其乳酸脱氢酶超表达菌株能够通过调节炎性细胞因子、紧密连接蛋白、短链脂肪酸的表达，修复受损的肝脏组织，恢复肠道稳态，对于酒精性肝脏疾病的预防和治疗具有潜在的应用前景。

Description

乳酸片球菌及其在酒精性肝炎中的应用
技术领域
本发明涉及微生物领域，特别是涉及一种乳酸片球菌及其在酒精性肝炎中的应用。
背景技术
酒精性肝炎是长期酒精饮食引发的一种肝脏疾病，初期表现为脂肪肝或炎症，进而发展为肝纤维化、肝硬化甚至是肝癌。酒精性肝炎是常见的肝脏疾病之一，严重危害人民健康，其机制尚不完全清楚，并且缺乏有效治疗药物。
乳酸片球菌是一类重要的乳酸菌，被用作生产乳酸等工业原料的传统菌株。乳酸片球菌能够分泌合成片球菌素，抑制李斯特菌等病原菌的生长与繁殖，被广泛用于食品保藏。此外，乳酸片球菌能够适应肠道环境，且具有维护肠道健康等益生性能，可作为益生菌应用于饲料行业。
乳酸是一类三碳短链脂肪酸。短链脂肪酸是结肠和回肠的重要能量来源，能够维持肠道结构完整性，且具有免疫调控作用，能够维护肠道免疫屏障。乳酸脱氢酶是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，是宿主代谢合成乳酸的关键酶类。若能利用野生型乳酸片球菌以及乳酸脱氢酶超表达菌株用于预防和治疗酒精性肝炎，将具有良好的市场价值和重要的应用潜力。
发明内容
本发明的目的是提供一种乳酸片球菌及其在酒精性肝炎中的应用，以解决上述现有技术存在的问题，该菌株能够预防和治疗酒精性肝炎，在酒精性肝炎领域具有潜在应用前景。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一种乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)LA412，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，保藏时间：2021年11月5日，保藏编号为CCTCC NO：M 20211378。
本发明提供一种上述的乳酸片球菌LA412在制备预防和/或治疗酒精性肝炎的产品中的应用。
进一步地，所述产品通过如下(a1)至(a17)中的至少一种途径预防和/或治疗酒精性肝炎：
(a1)降低酒精性肝炎小鼠血清中的谷草转氨酶AST含量；
(a2)降低酒精性肝炎小鼠血清中的谷丙转氨酶ALT含量；
(a3)降低酒精性肝炎小鼠肝脏重量；
(a4)减少酒精性肝炎小鼠肝脏肿大；
(a5)降低酒精性肝炎小鼠脂多糖LPS含量；
(a6)降低酒精性肝炎小鼠甘油三酯TG含量；
(a7)降低酒精性肝炎小鼠肝脏组织空泡的数量；
(a8)改善酒精引起的肝脏损伤；
(a9)增加酒精性肝炎小鼠抗炎性细胞因子IL-10的表达水平；
(a10)降低酒精性肝炎小鼠促炎性细胞因子IL-1β的表达水平；
(a11)降低酒精性肝炎小鼠促炎性细胞因子肿瘤坏死因子TNF-α的表达水平；
(a12)增加酒精性肝炎小鼠结肠紧密连接蛋白Occludin的表达水平；
(a13)增加酒精性肝炎小鼠结肠紧密连接蛋白ZO-1的表达水平；
(a14)恢复肠道屏障功能；
(a15)恢复酒精造成的肠道微生态紊乱；
(a16)增加酒精性肝炎小鼠肠道有益菌的丰度；
(a17)减少酒精性肝炎小鼠肠道有害菌的丰度。
本发明提供一种预防和/或治疗酒精性肝炎的产品，包含有效量的如上述的乳酸片球菌LA412，以及药学上可接受的辅料。
本发明所述“有效量”一词指欲产生所求特定效果所需化合物或活性成分的量，可以其在产品中所占重量百分比表示。如同本领域技术人员所知悉的，该有效量会因为欲引起特定效果的给予方式而有所不同。一般来说，活性成分或化合物在产品中的量可占该产品种类的约1％至约100％，较佳的为约30％至约100％。
进一步地，所述产品为保健品或药品。
本发明所述“产品”一词包含有效量的欲产生特定效果的所需乳酸菌以及药学上可接受的辅料。如图本领域技术人员所知悉的，产品的形态可随着欲引起特定效果的给予方式有所不同，如锭剂、粉剂、乳剂和针剂等，并且，该辅料也随着产品的形态而可分为固态、半固态或液体。举例而言，辅料可以包含但不限于，溶剂、明胶、乳化剂、悬浮剂、分解剂、崩解剂、烃基混合物、水、甘油、生理食盐水、缓冲生理盐水、羊毛脂、石蜡、蜂蜡、二甲基硅油或乙醇等。
本发明公开了以下技术效果：
本发明中的乳酸片球菌野生型菌株及其乳酸脱氢酶超表达菌株能够通过调节炎性细胞因子、紧密连接蛋白、短链脂肪酸的表达，修复受损的肝脏组织，恢复肠道稳态，对于酒精性肝脏疾病的预防和治疗具有潜在的应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为小鼠的肝体比称重结果，其中Ctrl为对照组，EtOH为模型组，LA412为乳酸片球菌组，LA412::ldh为乳酸脱氢酶超表达组；
图2为小鼠肝脏组织切片HE染色和油红O染色结果，其中Ctrl为对照组，EtOH为模型组，LA412为乳酸片球菌组，LA412::ldh为乳酸脱氢酶超表达组；
图3为小鼠结肠Occludin蛋白检测结果，其中Ctrl为对照组，EtOH为模型组，LA412为乳酸片球菌组，LA412::ldh为乳酸脱氢酶超表达组；
图4为小鼠结肠ZO-1蛋白检测结果，其中Ctrl为对照组，EtOH为模型组，LA412为乳酸片球菌组，LA412::ldh为乳酸脱氢酶超表达组；
图5为小鼠促炎性细胞因子肿瘤坏死因子TNF-α的检测结果；其中Ctrl为对照组，EtOH为模型组，LA412为乳酸片球菌组，LA412::ldh为乳酸脱氢酶超表达组；
图6为小鼠肠道内微生物门水平丰度检测结果，其中Ctrl为对照组，EtOH为模型组，LA412为乳酸片球菌组，LA412::ldh为乳酸脱氢酶超表达组；
图7为小鼠肠道内微生物属水平丰度检测结果，其中Ctrl为对照组，EtOH为模型组，LA412为乳酸片球菌组，LA412::ldh为乳酸脱氢酶超表达组。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
本发明所使用的试验材料无特殊说明，均为市场销售产品。以下实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
7-8周龄雄性SPF级C57小鼠，体质量(20±2)g：华中农业大学动物中心，动物许可证号：HZAUMO-2021-0010。
Lieber-DeCarli基础对照液体饲料TP4030C(600mL 40℃左右温水，218.80g主料，0.53g胆碱，2.50g维生素搅拌至均匀液体，定容至1000mL，混匀)和Lieber-DeCarli酒精液体饲料TP4030D(600mL 40℃左右温水，148g主料，0.53g胆碱，2.50g维生素搅拌至均匀液体，200mL 40℃左右温水中加入50mL无水乙醇，定容至1000mL，混匀)，灌胃用酒精溶液浓度为31.5％(v/v)，灌胃用糊精溶液浓度为45％(w/v)：南通特洛菲饲料科技有限公司。
采用南京建成谷丙转氨酶试剂盒(C009-2-1)检测血清中的谷丙转氨酶(Alanineaminotransferase，ALT/GPT)含量。采用南京建成谷草转氨酶试剂盒(C009-2-1)检测血清中的谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase，AST/GPT)含量。采用江苏酶免小鼠小鼠脂多糖酶联免疫试剂盒(MM-0634M1)检测血清中的脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)含量。采用南京建成总甘油三酯试剂盒(A110-1)检测肝脏中的总甘油三酯(triglyceride，TG)含量。采用江苏酶免小鼠白细胞介素-10酶联免疫试剂盒(MM-0176M1)检测肝脏中的白细胞介素-10(Interleukin-10，IL-10)含量。采用江苏酶免小鼠白细胞介素-1β酶联免疫试剂盒(MM-0040M1)检测肝脏中的白细胞介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)含量。采用江苏酶免小鼠肿瘤坏死因子α酶联免疫试剂盒(MM-0132M1)检测肝脏中的肿瘤坏死因子α(Tumornecrosis factor-α，TNF-α)含量。Anti-Occludin抗体(Occludin抗体)、内参Anti-beta Actin(β-actin)、二抗Goat Anti-Rabbit IgG(HRP)为英国abcam公司。HE切片与油红O切片的制备是由武汉塞维尔生物科技有限公司完成；小鼠结肠组织RNA的提取采用上海碧云天RNAeasyTM动物RNA抽提试剂盒(离心柱式)(R0024)；反转录采用南京诺唯赞HiScriptIII RT SuperMix for qPCR(+gDNA wiper)试剂盒(R223-01)；荧光定量PCR采用的南京诺唯赞Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix试剂盒(Q712-02)。
实施例1菌株的分离、鉴定、构建与保藏
一、菌株的分离
2019年11月，从发酵大豆产品中采取样本，用液体MRS培养基扩大培养，培养液经固体MRS培养基平板划线培养，挑取单菌落得到多株纯培养菌株。其中一株菌株满足如下条件：革兰氏染色阳性、过氧化氢酶试验阴性、硝酸盐还原试验阴性、不运动。将该菌株接种至液体MRS培养基培养，加入30％甘油，-80℃冰箱保存，并命名为LA412。
二、菌株的鉴定
将分离得到的菌株LA412进行形态鉴定、生理生化鉴定以及分子鉴定。该菌株属于乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)，其生理生化鉴定结果：革兰氏阳性，过氧化氢酶试验阴性，硝酸盐还原试验阴性、不运动。最适生长温度为37-55℃，适宜pH为5.0-7.5。
三、超表达菌株的构建
基于乳酸片球菌LA412内源性CRISPR-Cas系统构建了基因组编辑质粒，借助于该质粒将乳酸脱氢酶表达框整合至LA412基因组，得到了能够超表达乳酸脱氢酶的乳酸片球菌菌株LA412::ldh。
四、菌株的保藏
乳酸片球菌LA412，已于2021年11月5日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：中国，武汉，武汉大学)，保藏登记号为CCTCC NO：M 20211378。乳酸片球菌，简称乳酸片球菌LA412。
实施例2乳酸片球菌LA412以及LA412::ldh对酒精性肝炎小鼠的改善作用
一、菌悬液的制备
菌悬液的制备方法：用PBS缓冲液悬浮供试菌，使菌浓度为1.0×108CFU/200μL。供试菌为乳酸片球菌LA412以及乳酸脱氢酶超表达菌株LA412::ldh，得到的菌悬液命名为LA412菌悬液以及乳酸脱氢酶超表达菌株LA412::ldh菌悬液。
二、分组处理方式
60只雄性C57小鼠，随机分成4组，每组15只，分组处理如下：空白组(简称Ctrl)：从试验开始至结束均采用Lieber-DeCarli基础对照液体饲料饲喂；从试验第8天开始至第15天，给予无菌PBS缓冲液(给予方式：灌胃，给予量：200μL/每只/每天)；第16天，给予45％(w/v)糊精溶液(给予方式：灌胃，给予量：每只小鼠灌胃溶液的体积(μL)＝体重(g)×20)；
模型组(简称EtOH)：从试验开始至第4天采用Lieber-DeCarli基础对照液体饲料饲喂，从第5天至结束均采用Lieber-DeCarli酒精液体饲料饲喂；从试验第8天开始至第15天，给予无菌PBS缓冲液(给予方式：灌胃，给予量：200μL/每只/每天)；第16天，给予31.5％(v/v)酒精溶液(给予方式：灌胃，给予量：每只小鼠灌胃溶液的体积(μL)＝体重(g)×20)；
乳酸片球菌组(简称LA412)：从试验开始至第4天采用Lieber-DeCarli基础对照液体饲料饲喂，从第5天至实验结束均采用Lieber-DeCarli酒精液体饲料饲喂；从试验第8天开始至第15天，给予LA412菌悬液(给予方式：灌胃，给予量：200μL/每只/每天)；第16天，给予31.5％(v/v)酒精溶液(给予方式：灌胃，给予量：每只小鼠灌胃溶液的体积(μL)＝体重(g)×20)；
乳酸脱氢酶超表达组(简称LA412::ldh)：从试验开始至第4天采用Lieber-DeCarli基础对照液体饲料饲喂，从第5天至实验结束均采用Lieber-DeCarli酒精液体饲料饲喂；从试验第8天开始至第15天，给予LA412::ldh菌悬液(给予方式：灌胃，给予量：200μL/每只/每天)；第16天，给予31.5％(v/v)酒精溶液(给予方式：灌胃，给予量：每只小鼠灌胃溶液的体积(μL)＝体重(g)×20)。
每只小鼠灌试验开始至结束为试验第1天至16天。
三、血清相关指标检测
实验第16天早上8点，实验组、模型组灌胃31.5％(v/v)酒精溶液，对照组灌胃45％(w/v)糊精溶液，灌胃9小时后从眼眶取血，血液4℃、3000r/min离心15min，收集血清。
检测血清中谷丙转氨酶(ALT/GPT)、谷草转氨酶(AST/GPT)、脂多糖(LPS)浓度，结果见表1。
表1
组别 ALT(U/g) AST(U/g) LPS(ng/g)
Ctrl 0.09±0.02**** 0.16±0.05*** 1.31±0.31****
EtOH 0.46±0.10 0.51±0.20 2.89±0.43
LA412 0.26±0.03**** 0.26±0.01* 1.40±0.52****
LA412::ldh 0.18±0.04**** 0.31±0.07* 1.76±0.53**
注：其他三组与模型组相比的显著性用“*”表示。*，P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001；****,P<0.0001。
由表1可知，与模型组相比，LA412组与LA412::ldh组小鼠血清中ALT、AST、LPS水平显著降低，说明乳酸片球菌LA412以及乳酸脱氢酶超表达菌株LA412::ldh组能明显降低酒精性肝病模型小鼠的血清中ALT、AST、LPS水平，预防肝病的发生。
四、肝脏相关指标检测
实验第16天取完血清后，处死并解剖小鼠，收集肝脏。称取完整肝脏重量并记录计算小鼠的肝体比。检测肝脏中总甘油三酯(TG)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素10(IL-10)的含量。
总甘油三酯(TG)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素10(IL-10)的检测结果见表2。
表2
组别 TG(mmol/g) IL-1β(ng/g) IL-10(pg/mg)
Ctrl 0.08±0.03**** 0.74±0.44* 49.93±13.08***
EtOH 0.33±0.07 1.36±0.29 30.13±3.73
LA412 0.23±0.04*** 0.94±0.47 43.11±5.51*
LA412::ldh 0.16±0.03****# 0.69±0.25* 54.26±11.62***
注：其他三组与模型组相比的显著性用“*”表示，乳酸脱氢酶超表达LA412::ldh组与乳酸片球菌LA412组相比的显著性用“#”表示。#或*，P<0.05；##或**,P<0.01；###或***,P<0.001；####或****,P<0.0001。
小鼠的肝体比检测结果见图1，促炎性细胞因子肿瘤坏死因子TNF-α的检测结果见图5；Ctrl为对照组，EtOH为模型组，LA412为乳酸片球菌治疗组，LA412::ldh为乳酸脱氢酶超表达组。与对照组相比，模型组小鼠的肝体比均有显著升高，与模型组相比，LA412组与LA412::ldh组小鼠的肝体比显著降低；与对照组相比，模型组小鼠甘油三脂TG、炎症因子IL-1β以及肿瘤坏死因子TNF-α含量明显升高，与模型组相比LA412与LA412::ldh组降低了甘油三脂TG以及炎症因子IL-1β与肿瘤坏死因子TNF-α的含量；与对照组相比，模型组抗炎因子IL-10显著降低，与模型组相比，LA412与LA412::ldh组显著升高抗炎因子IL-10的含量；这说明乳酸片球菌LA412以及乳酸脱氢酶超表达菌株LA412::ldh能明显改善由乙醇导致的肝脏肿大以及脂肪肝，能够通过降低炎症反应预防肝病的发生。
五、组织形态学观察
实验第16天取完血清后，处死并解剖小鼠，收集肝脏。将肝脏切片，进行苏木素-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色和油红O(Oil Red O)染色，光学显微镜观察肝脏病变，400×显微照相。
小鼠肝脏组织HE和油红O切片染色结果见图2，其中Ctrl为对照组，EtOH为模型组，LA412为乳酸片球菌组，LA412::ldh为乳酸脱氢酶超表达菌株组。对照组小鼠肝脏细胞形态正常，肝小叶结构完整，未见肝细胞变性、坏死或炎性细胞浸润，未见明显脂质沉积；模型组小鼠肝脏细胞变性，体积增大，胞浆内充满气球样的脂肪空泡，发生显著性的脂质沉积；LA412与LA412::ldh组小鼠肝脏细胞形态趋于正常，与模型组相比脂质沉积明显改善；以上HE和油红O切片染色结果表明，酒精饲料能够引起肝脏脂质累积，肝细胞变性，体积增大，胞浆出现脂肪空泡，产生炎性细胞浸润，最终导致酒精性肝病；乳酸片球菌LA412以及乳酸脱氢酶超表达菌株LA412::ldh可以减少脂肪空泡的形成，减少肝脏脂肪的沉积，缓解肝细胞变性，最终缓解小鼠酒精性肝病的进程。
六、荧光定量PCR分析
实验第16天取完血清后，处死并解剖小鼠，收集结肠，按照RNAeasyTM动物RNA抽提试剂盒说明书的方法提取RNA，按照HiScript III RT SuperMix for qPCR(+gDNA wiper)试剂盒的方法反转录，采用荧光定量PCR法检测结肠Occludin、ZO-1蛋白在mRNA水平的表达情况。
荧光定量PCR检测紧密连接蛋白表达结果见图3与图4，其中Ctrl为空白组，EtOH为模型组，LA412为乳酸片球菌组，LA412::ldh为乳酸脱氢酶超表达菌株组。与空白组相比，模型组小鼠结肠中的Occludin与ZO-1的表达量显著降低；与模型组相比，LA412与LA412::ldh组小鼠结肠中的Occludin与ZO-1的表达量显著升高，结果表明乳酸片球菌LA412以及乳酸脱氢酶超表达LA412::ldh菌株能够增加紧密连接蛋白的表达，恢复肠道屏障功能；从而缓解由乙醇导致的肝损伤。
七、物种组成分析
实验第16天取完血清后，处死并解剖小鼠，收集盲肠内容物，液氮速冻，DNA提取及高通量测序由上海派森诺生物科技股份有限公司进行。通过标准细菌16S V3-V4区域进行各组小鼠肠道内微生物多样性检测。
16S微生物组成分析检测结果见图6和图7。如图6所示，在门的水平上，与对照组相比，模型组小鼠盲肠内含物中有害菌变形菌门(Proteobacteria)的含量显著升高；与模型组相比，乳酸片球菌LA412组以及乳酸脱氢酶超表达菌株LA412::ldh组小鼠的盲肠内含物中的有益菌拟杆菌门(Bacteroidetes)含量显著增加，有害菌变形菌门(Proteobacteria)含量显著降低。
如图7所示，在属的水平上，与对照组相比，模型组小鼠盲肠内容物中的有害菌Escherichia-Shigella的含量显著升高，与模型组相比，乳酸片球菌LA412组以及乳酸脱氢酶超表达组小鼠盲肠内容物中的Escherichia-Shigella的含量显著降低。
16S微生物组成分析检测结果表明：酒精饮食能够上调肠道中有害菌的含量，下调有益菌的含量；乳酸片球菌LA412与乳酸脱氢酶超表达菌株LA412::ldh能够恢复酒精饮食引起的有害菌含量的上调，有益菌的含量的下调，说明乳酸片球菌与乳酸脱氢酶超表达菌可能通过恢复肠道菌群，从而预防与治疗酒精引起的肝损伤。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (4)

1.一种乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）LA412，其特征在于，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，保藏时间：2021年11月5日，保藏编号为CCTCC NO：M 20211378。
2.一种权利要求1所述的乳酸片球菌LA412在制备预防和/或治疗酒精性肝炎的药品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药品通过如下（a1）至（a17）中的至少一种途径预防和/或治疗酒精性肝炎：
（a1）降低酒精性肝炎小鼠血清中的谷草转氨酶AST含量；
（a2）降低酒精性肝炎小鼠血清中的谷丙转氨酶ALT含量；
（a3）降低酒精性肝炎小鼠肝脏重量；
（a4）减少酒精性肝炎小鼠肝脏肿大；
（a5）降低酒精性肝炎小鼠脂多糖LPS含量；
（a6）降低酒精性肝炎小鼠甘油三酯TG含量；
（a7）降低酒精性肝炎小鼠肝脏组织空泡的数量；
（a8）改善酒精引起的肝脏损伤；
（a9）增加酒精性肝炎小鼠抗炎性细胞因子IL-10的表达水平；
（a10）降低酒精性肝炎小鼠促炎性细胞因子IL-1β的表达水平；
（a11）降低酒精性肝炎小鼠促炎性细胞因子肿瘤坏死因子TNF-α的表达水平；
（a12）增加酒精性肝炎小鼠结肠紧密连接蛋白Occludin的表达水平；
（a13）增加酒精性肝炎小鼠结肠紧密连接蛋白ZO-1的表达水平；
（a14）恢复肠道屏障功能；
（a15）恢复酒精造成的肠道微生态紊乱；
（a16）增加酒精性肝炎小鼠肠道有益菌的丰度；
（a17）减少酒精性肝炎小鼠肠道有害菌的丰度。
4.一种预防和/或治疗酒精性肝炎的药品，其特征在于，包含有效量的如权利要求1所述的乳酸片球菌LA412，以及药学上可接受的辅料。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108641988A (zh) * 2018-06-15 2018-10-12 吉林省农业科学院 植物乳杆菌na136及其在缓解非酒精性脂肪肝病中的应用
CN111437294A (zh) * 2020-05-28 2020-07-24 东北农业大学 一种预防急、慢性酒精性肝损伤的乳酸菌配方及其应用
CN114107121A (zh) * 2021-12-06 2022-03-01 华中农业大学 一种凝结芽孢杆菌及其在酒精性肝病的治疗中的应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9023345B2 (en) * 2011-03-01 2015-05-05 Novus International, Inc. Methods for improving gut health
US10946050B2 (en) * 2015-03-16 2021-03-16 Imagilin Technology Llc Compositions comprising probiotics and methods of use thereof

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108641988A (zh) * 2018-06-15 2018-10-12 吉林省农业科学院 植物乳杆菌na136及其在缓解非酒精性脂肪肝病中的应用
CN111437294A (zh) * 2020-05-28 2020-07-24 东北农业大学 一种预防急、慢性酒精性肝损伤的乳酸菌配方及其应用
CN114107121A (zh) * 2021-12-06 2022-03-01 华中农业大学 一种凝结芽孢杆菌及其在酒精性肝病的治疗中的应用

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