CN114786474A

CN114786474A - 灼烧病毒抗性基因

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Publication number: CN114786474A
Application number: CN202080083946.2A
Authority: CN
Inventors: A·A·诺沃谢尔斯基; D·B·德拉戈尔; R·科普曼斯
Original assignee: Rijk Zwaan Zaadteelt en Zaadhandel BV
Current assignee: Rijk Zwaan Zaadteelt en Zaadhandel BV
Priority date: 2019-12-20
Filing date: 2020-12-21
Publication date: 2022-07-22
Also published as: CA3154842A1; EP4075949A1; US20220361429A1; WO2021123429A1; IL294009A; WO2021123429A9; MX2022004957A

Abstract

本发明涉及经修饰的FBXL13基因，其导致显示出对于属于灼烧病毒属(Torradovirus)的病毒的抗性的植物。本发明还涉及包含所述经修饰的FBXL13基因的属于茄科(Solanaceae)的植物。本发明的经修饰的FBXL13基因提供了当与不包含所述经修饰的FBXL13基因的植物相比较时显示出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的植物。本发明进一步涉及所述经修饰的FBXL13基因的用途，所述用途为用于鉴定和开发显示出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的属于茄科的植物。

Description

灼烧病毒抗性基因

本发明涉及能够赋予对于属于灼烧病毒属(Torradovirus)的病毒的抗性的基因。本发明还涉及包含能够赋予对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的基因的属于茄科(Solanaceae)的植物，以及用于鉴定和开发这样的植物的方法。此外，本发明涉及源自此类植物的植株、种子和繁殖材料在育种计划中作为种质的用途。

商业蔬菜生产受到许多影响作物生长和发育的条件的影响。种植者对某个品种的选择是决定性因素，并且所选择的品种的遗传学构成对于可以取得的结果的基础。另外，存在许多影响给出的成果的外部因素，例如疾病压力。生长条件例如气候、土壤和投入(例如肥料)的使用发挥主要的作用。存在各种栽培其他作物的方式，其中最常见的是：敞地、温室和荫棚生产。有害生物和疾病的存在也影响可以达到的总产量。

对于多种疾病和有害生物抗性进行的育种在提供用于多种生长系统和气候的品种之中是一个重要的方面。这些疾病可以是线虫、细菌、真菌、昆虫和/或病毒的攻击的结果。

更特别地，对于病毒的抗性是在商业番茄生产中的一个重要的和所希望的性状。在2006年左右，在番茄中，尤其是在西班牙生长的植物上，发现了一种新病毒。由于该病毒引起无法被归属于已知病毒的症状，因此将该新病毒暂时性地命名为番茄烧灼病毒(Tomato torrado virus(ToTV))并且其也是一项专利申请(WO2006/085749)的主题。

本发明的目标之一是提供显示出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的属于茄科的植物。该目标已通过提供经修饰的FBXL13基因而得到实现，所述经修饰的FBXL13基因当存在于属于茄科的植物的基因组中时赋予对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性。具有该经突变的基因的属于茄科的植物特别地对于属于灼烧病毒属的病毒具有抗性。

在番茄(Solanum lycopersicum)中进行了在本研究中的经修饰的FBXL13基因的表征。这使得能够鉴定出进一步的具有FBXL13基因的属于茄科的作物，所述FBXL13基因当被修饰时导致当与不具有所述经修饰的FBXL13基因的植物相比较时赋予对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的植物。这些作物包括属于茄科的那些，例如辣椒(Capsicum annuum)、茄子(Solanum melongena)和马铃薯(Solanum tuberosum)。

因此，本发明涉及经修饰的FBXL13基因，其在野生型FBXL13核苷酸序列中包含修饰，所述修饰导致野生型FBXL13氨基酸序列中的修饰。

所述经修饰的FBXL13基因可以是通过转基因方法或顺基因方法(cisgenicmethod)而引入到植物中的外源FBXL13基因。本发明的经修饰的FBXL13基因也可以用于开发赋予对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的植物，包括通过转基因或顺基因方法引入经修饰的外源FBXL13基因。

所述经修饰的FBXL13基因可以是基因构建体的一部分，所述基因构建体包含选择标记、启动子序列、FBXL13基因序列和终止子序列。

本发明可广泛地应用于所有在其基因组中具有FBXL13基因的功能性直向同源物(即执行相同或相似的生物学功能的直向同源物)的植物物种。FBXL13直向同源物(即在其他物种中的FBXL13基因)的鉴定可以在许多作物中进行，其方法是本领域中已知的。本发明可以例如应用于属于从由下列各项组成的组中选择的物种的植物：番茄、马铃薯、茄子和辣椒。

因此，本发明涉及经修饰的FBXL13基因，其在SEQ ID No.1-4的野生型FBXL13核苷酸序列中包含修饰，所述修饰分别导致SEQ ID No.5-8的野生型FBXL13氨基酸序列中的修饰。当此类经修饰的FBXL13基因存在于属于茄科的植物的基因组中时，它赋予对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性。

图1-4分别显示了番茄、茄子、马铃薯和辣椒的野生型FBXL13核苷酸序列SEQ IDNo.1-4。图5-8分别显示了番茄、茄子、马铃薯和辣椒的野生型FBXL13氨基酸序列SEQ IDNo.5-8。

如在本文中所使用的，“野生型”特别地是指FBXL13基因的天然出现的、未修饰的形式；FBXL13的核苷酸序列的天然出现的、未修饰的形式；和FBXL13氨基酸序列的天然出现的、未修饰的形式。几种作物的FBXL13基因和FBXL13蛋白的天然出现的、未修饰的形式分别显示在图1-4和图5-8中。

导致所述经修饰的FBXL13基因的修饰可以选自：改变FBXL13基因的mRNA水平的修饰，改变FBXL13蛋白结构和/或水平的修饰，和/或改变FBXL13蛋白活性的修饰。

本发明的一个方面涉及经修饰的FBXL13基因，其相比于其野生型基因组序列而言包含突变，所述突变导致FBXL13蛋白和/或蛋白活性中的变化，其中所述经修饰的FBXL13基因能够赋予对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的表型。

在一个实施方案中，所述经修饰的FBXL13基因导致相应的蛋白质的降低的活性。在该情景下，该“降低的活性”应当意味着当与相应的野生型植物细胞或相应的野生型植物相比较时FBXL13蛋白的活性的降低。在一个方面，降低应当包括基因表达的整个敲除，或者FBXL13蛋白的功能丧失或功能降低的产生，例如经截短的FBXL13蛋白可能已丧失了功能或者显示出降低的功能。活性的降低可以是编码FBXL13蛋白的基因的表达的降低(也称为敲低)，或编码FBXL13蛋白的基因的表达的敲除，和/或细胞中FBXL13蛋白的数量的下降或细胞中FBXL13蛋白的酶促活性的功能降低或功能丧失。

在一个实施方案中，在所述核苷酸序列中的突变为单核苷酸多态性(SNP)。

在一个实施方案中，在所述核苷酸序列中的突变为插入/缺失(indel)。

在本发明的一个实施方案中，在所述核苷酸序列中的变化导致氨基酸序列中的置换。

在本发明的另一个实施方案中，在所述核苷酸序列中的突变导致氨基酸序列中的提前的终止密码子。包含提前的终止密码子的氨基酸序列(当与其野生型序列相比较时)也称为经截短的氨基酸序列。

在导致本发明的研究中，发现数个番茄植物品系和品种(来自野生以及驯化物种)对于番茄灼烧病毒感染具有抗性。易感品系和品种与抗性品系和品种的比较显示，在番茄中，在Solyc04g79810(ITAG2.4注释)的编码序列中在位置732处的一个胸腺嘧啶(T)的缺失影响必需的密码子；而在参考序列中的核苷酸缺失导致(提前的)终止密码子(TAA)，在易感品系中存在的该额外的核苷酸(胸腺嘧啶)确保当与参考序列相比时所述编码序列被延伸。发明人得出结论，在其基因组中包含如在抗性品系和品种中存在的在Solyc04g79810(ITAG2.4注释)的位置732处的缺失的番茄植物对于番茄灼烧病毒感染具有抗性。

在几个抗性番茄植物中，还发现了在Solyc04g79810的位置731处的另一个SNP。在该位置中，核苷酸从A变化为C。尽管存在该SNP通过将密码子从TAA变化为TCA绕开了通过在位置732处的缺失而引入的初始终止密码子这一事实，但是在位置249处的位于下游5个氨基酸处的另一个提前的终止密码子仍然提供了经截短的蛋白质，其赋予对于番茄植物被番茄灼烧病毒感染的抗性。但是，包含在位置731处的SNP但不包含在位置732处的缺失的番茄植物可能对于番茄灼烧病毒感染不具有抗性，因为在所述缺失不存在下，不生成提前的终止密码子。

本发明还涉及导致经截短的蛋白质的在编码序列的位置732上游的所有修饰。本发明的蛋白质(在位置244处截短的)已经能够在属于茄科的植物中触发本发明的抗性。此外，还发现包含稍微延伸的但经截短的蛋白质(在位置249处)的番茄植物具有抗性。因此，在位置249处或之前截短的所有截短形式将会具有相同的效应，并且因此导致对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性。上面提及的位置涉及番茄。对于番茄以外的其他作物，相应于这些位置的位置适用。

在一个特别的实施方案中，所述经修饰的番茄FBXL13基因包括这样的番茄FBXL13基因，其包含在SEQ ID No.1的位置732处的缺失，或者在其他作物的FBXL13基因中的与之相应的位置处的缺失，其中所述插入/缺失为在那个位置处在所述核苷酸序列中的单碱基对(T)缺失。该修饰导致FBXL13蛋白的截短形式，在SEQ ID No.5的野生型番茄氨基酸序列的位置244处，或者在其他作物中在与之相应的位置处。在番茄中，该缺失导致从Y至终止的氨基酸变化。在其他作物中，核苷酸和氨基酸的变化可能是不同的。所述经修饰的番茄FBXL13编码序列在图9中用SEQ ID No.9指明。产生自所述缺失并且包含所述提前的终止密码子的经修饰的番茄FBXL13氨基酸序列用SEQ ID No.12来指明并且在图12中指明。

在另一个实施方案中，SEQ ID No.9的经修饰的番茄FBXL13核苷酸序列进一步包括在SEQ ID No.9的位置731处的SNP，或者对于番茄以外的其他作物，在相应于SEQ IDNo.9的番茄核苷酸序列的位置731的位置处的SNP。该修饰导致在SEQ ID No.12的番茄氨基酸序列的位置244处的终止密码子的破坏，或者对于番茄以外的其他作物，在相应于SEQ IDNo.12的番茄氨基酸序列的位置244的位置处的终止密码子的破坏。进一步的经修饰的番茄FBXL13编码序列在图10中用SEQ ID No.10指明。产生自所述SNP并且还在位置249处包含提前的终止密码子的经修饰的番茄FBXL13氨基酸序列用SEQ ID No.13来指明并且显示在图13中。优选地，在番茄中，所述SNP是从A至C的核苷酸变化并且导致从终止至S的氨基酸变化。在其他作物中，核苷酸和氨基酸的变化可能是不同的。

对于本发明的基因的修饰可以是隐性的、显性的或中间的。在隐性性状的情况下，所述基因的修饰需要以纯合状态存在以使所述性状完全可见。在本文中所描述的修饰是隐性的，并且因此仅如果所述基因的两个等位基因都具有所述修饰才能赋予对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性。显性或中间的修饰在杂合状态下也可以是可见的。中间性状的杂合表型处在纯合显性基因型和纯合隐性基因型的表型之间。这些修饰类型也是本发明的一部分。

在本发明的一个进一步的实施方案中，在所述氨基酸序列中的修饰为在SEQ IDNo.13的番茄氨基酸序列的位置244处所示的置换，或者在SEQ ID No.12的番茄氨基酸序列的位置244处所示的终止密码子引入。在番茄以外的其他作物的情况下，在所述氨基酸序列中的修饰位于相应于SEQ ID No.5的番茄氨基酸序列的位置244的位置处。

发现本发明的分别由突变和缺失引起的氨基酸置换和终止密码子引入存在于SEQID No.5的番茄氨基酸序列的位置244处，或者在番茄以外的其他作物的情况下，存在于相应于番茄的野生型氨基酸序列SEQ ID No.5的位置244的位置处。该核苷酸突变和核苷酸缺失被认为是非保守的，并且随后的氨基酸变化可以被认为是非保守的。

当在编码DNA序列中的一个或多个碱基对的突变导致编码不同氨基酸的经改变的密码子三联体时，蛋白质中的氨基酸变化出现。由于遗传密码的冗余性，并非在编码DNA序列中的所有点突变都导致氨基酸变化。不导致氨基酸变化的在编码序列中的突变被称为“沉默突变”。其他突变被称为是“保守的”，它们导致一个氨基酸被另一个具有相当的特性的氨基酸替代，从而所述突变不可能改变成熟蛋白质的折叠，或者影响其功能。如在本文中所使用的，“非保守氨基酸变化”是指被另一个具有不同化学特性的氨基酸替代的氨基酸，这可能导致所编码的蛋白质的降低的稳定性、改变的功能性和/或结构效应。

在本发明的一个进一步的优选实施方案中，在所述氨基酸序列中的修饰为在SEQID No.5的野生型番茄氨基酸序列的位置244处的终止密码子的引入，其导致经截短的蛋白质。该经修饰的番茄氨基酸序列被称为SEQ ID No.12。另外，所述番茄氨基酸序列包含备选的导致置换的修饰，所述置换由在SEQ ID No.5的野生型番茄氨基酸序列的位置244处从Y(酪氨酸)至S(丝氨酸)的变化组成。但是，与所述缺失相组合的所述备选的修饰也导致经截短的蛋白质，因为由于所述SNP，现在在SEQ ID No.13的番茄氨基酸序列中所示的位置249处存在终止密码子。当与SEQ ID No.5的经修饰的氨基酸序列相比较时，在位置731处的修饰破坏了在位置244处的终止密码子，其由于缺失成为S(丝氨酸)而引起。

本发明进一步涉及属于茄科的植物，其包含赋予对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的在本文中所定义的经修饰的FBXL13基因。

包含所述经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物显示出抗性表型，即显示出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性，相比于不包含所述经修饰的FBXL13基因的相同物种的等基因植物而言。例如，包含所述经修饰的FBXL13基因的茄子植物、番茄植物、马铃薯植物和辣椒植物显示出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性。因此，这些植物特别适合于在被属于灼烧病毒属的病毒感染的风险增加的条件下进行的栽培。

纯合地或杂合地包含所述经修饰的FBXL13基因的本发明的植物可以是近交系、杂种、双单倍体的植物，或分离种群的植物。

植物可以以杂合状态具有所述经修饰的FBXL13基因。这样的植物可以是所述基因的潜在来源，并且当与任选地也纯合地或杂合地具有所述经修饰的基因的另一植物杂交时，可以导致纯合地或杂合地具有所述经修饰的基因并且显示出灼烧病毒抗性性状的子代植物。优选地，植物以纯合状态包含所述经修饰的FBXL13基因。

在一个实施方案中，本发明涉及包含经修饰的FBXL13基因的属于茄科的突变体植物，其中所述经修饰的FBXL13基因赋予所述植物以对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性，相比于包含未修饰的FBXL13基因的植物而言。

在另一个实施方案中，本发明涉及包含经修饰的FBXL13基因的属于茄科的突变体植物(由于靶向的、诱发的突变)，其中所述经修饰的FBXL13基因赋予所述植物以对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性，相比于包含未修饰的FBXL13基因的植物而言。可以采用基因组编辑方法例如CRISPR系统的使用来获得本发明的植物。

在另一个实施方案中，本发明涉及包含经修饰的FBXL13基因的属于茄科的突变体植物(由于诱发突变)，其中所述经修饰的FBXL13基因赋予所述植物以对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性，相比于包含未修饰的FBXL13基因的植物而言。常规的诱变方法(利用化学化合物或物理手段)可以用于获得本发明的此类植物。

在另一个实施方案中，本发明涉及包含经修饰的FBXL13基因的属于茄科的突变体植物(由于通过技术手段而诱导的突变)，其中所述经修饰的FBXL13基因赋予所述植物以对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性，相比于包含未修饰的FBXL13基因的植物而言。

本发明还涉及用于产生具有导致灼烧病毒抗性表型的所述经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物的方法，这通过使用包含所述经修饰的FBXL13基因的种子来生长出所述植物。

本发明进一步涉及用于产生包含所述经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物的方法，这通过使用在其基因组中携带所述经修饰的FBXL13基因的植物材料的组织培养物。

进一步地，本发明涉及用于产生包含导致灼烧病毒抗性表型的所述经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物的方法，这通过使用在其基因组中携带所述经修饰的FBXL13基因的植物材料的营养繁殖。

本发明进一步提供了用于产生包含所述经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物的方法，这通过使用双单倍体生成技术以从包含所述经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物生成双单倍体品系。

本发明进一步涉及包含本发明的经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物的种子，其中可以从所述种子生长出的植物显示出灼烧病毒抗性表型。

本发明还涉及用于种子产生的方法，其包括从本发明的种子生长出属于茄科的植物，通过允许授粉发生来允许所述植物产生种子，并且收获那些种子。所述种子的产生通过杂交或自交来适宜地进行。以那种方式产生的种子导致从其生长出的植物的灼烧病毒抗性表型。

进一步地，本发明涉及杂种种子，和用于产生这样的杂种种子的方法，其包括使属于茄科的第一亲本植物与属于茄科的第二亲本植物杂交并且收获所得的杂种种子，其中所述第一亲本植物和/或所述第二亲本植物具有本发明的经修饰的FBXL13基因。优选地，杂种种子以纯合状态包含本发明的经修饰的FBXL13基因。显示出本发明的灼烧病毒抗性表型的由于使所得的包含本发明的经修饰的FBXL13基因的种子进行生长而引起的属于茄科的杂种植物也是本发明的植物。优选地，这样的杂种植物以纯合状态包含本发明的经修饰的FBXL13基因。

本发明的另一个方面涉及能够发育成和/或源自包含经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物的繁殖材料，其中所述植物相比于不包含所述经修饰的FBXL13基因的相同物种的等基因植物而言显示出灼烧病毒抗性表型，其中所述繁殖材料包含本发明的经修饰的FBXL13基因，并且其中所述繁殖材料选自由下列各项组成的组：小孢子、花粉、子房、胚珠、胚、胚囊、卵细胞、插条、根、下胚轴、子叶、茎、叶、花、花药、种子、分生细胞、原生质体和细胞，或者其组织培养物。

因此，本发明进一步涉及适合于有性繁殖的属于茄科的植物的部分。此类部分例如选自由下列各项组成的组：小孢子、花粉、子房、胚珠、胚囊和卵细胞。另外，本发明涉及适合于营养繁殖的属于茄科的植物的部分，其特别为插条、根、茎、细胞或原生质体。上面所提及的植物的部分被认为是繁殖材料。从所述繁殖材料产生的植物包含赋予灼烧病毒抗性表型的所述经修饰的FBXL13基因。

根据其一个进一步的方面，本发明提供了包含本发明的经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物的组织培养物，其也是繁殖材料。所述组织培养物包含可再生细胞。这样的组织培养物可以选自或源自植物的任何部分，特别是叶、花粉、胚、子叶、下胚轴、分生细胞、根、根尖、花药、花、种子和茎。可以使所述组织培养物再生为携带本发明的经修饰的FBXL13基因的植物，所述再生出的植物表达本发明的性状并且也是本发明的一部分。

进一步地，本发明涉及所要求保护的属于茄科的植物的细胞。这样的细胞可以以分离的形式，或者可以是完整植物或其部分的一部分，并且仍然构成本发明的细胞，因为这样的细胞含有导致灼烧病毒抗性表型的所述经修饰的FBXL13基因。本发明的植物的每个细胞携带导致灼烧病毒抗性表型的所述经修饰的FBXL13基因。本发明的这样的细胞也可以是可再生细胞，其可以用于再生出新的本发明的植物。

本发明还涉及属于茄科的植物的细胞，所述植物包含所述经修饰的FBXL13基因和所述灼烧病毒抗性表型。本发明还涉及包含所述经修饰的FBXL13基因和所述灼烧病毒抗性表型的植物的细胞，所述植物是通过使包含所述经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物杂交并且选择显示出所述灼烧病毒抗性表型的植物可获得的。

本发明还涉及包含所述经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物的收获部分。这样的收获部分为例如为此类植物的果实或块茎。

本发明进一步涉及包含所述经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物的收获部分，其中所述部分为包含所述经修饰的FBXL13基因的食物产品，任选地由其制成的加工食物产品。

根据另一个方面，本发明涉及由本发明的植物所产生的果实的一部分。本发明的果实的部分任选地以经加工的形式，例如所述部分为果实的薄片、薄片的部分、方块或任何其他部分。任选地，可以将本发明的经加工的果实部分与其他蔬菜、果实或其他食物产品相混合。任选地，将经加工的食物产品包装在容器或袋子中，并且包含本发明的果实或果实部分的这样的包装食物产品也是本发明的一部分。所述食物产品或收获部分可以经历一个或多个加工步骤。这样的加工步骤可以包括但不限于下列处理中的任一种或其组合：切割、洗涤、烹煮、蒸制、烘焙、煎炸、巴氏消毒、冷冻、磨碎、提取油、酸浸或发酵。获得的经加工的形式也是本发明的一部分。本发明还涉及由本发明的植物所产生的果实用于进一步加工为加工食物产品的用途，这通过切割、切片、去皮或任何其他处理，任选地随后的与一种或多种其他食物产品相混合。包含本发明的植物的果实或其部分的一种优选的食物产品为沙拉，其中任选地可以将所述果实与例如莴苣、菠菜、苣荬菜、菊苣、甜菜、莙荙菜等的叶和/或与其他果实和/或蔬菜相混合。

本发明进一步涉及所述经修饰的FBXL13基因用于开发显示出灼烧病毒抗性表型的属于茄科的植物的用途。技术人员熟悉将新的性状引入已经具有其他所希望的农业特性的植物中，例如通过渐渗。渐渗可以通过标准的育种技术来进行，其中选择可以以表型方式或通过使用标志物或者其组合来进行。

本发明还涉及用于在植物中鉴定经修饰的FBXL13基因的标志物，所述标志物包含在本文中所描述的在FBXL13基因中的修饰之中的任一种，并且由此可以鉴定和/或检测所述修饰。本发明的标志物特别地为这样的标志物，其包含并且由此适合于鉴定和/或检测SNP修饰，即多态性，如在图9-11中所呈现的。这样的标志物用于鉴定和/或检测经修饰的CCA基因的用途也是本发明的一部分。

本发明进一步涉及所述经修饰的FBXL13基因或包含所述修饰的其部分的用途，所述用途为作为标志物以用于鉴定显示出灼烧病毒抗性表型的植物。

在本申请中所使用的“用于鉴定......的用途”或“用于鉴定......的方法”包括使用所描述的在FBXL13基因中的插入/缺失和/或SNP作为标志物。本发明还涉及可以基于在FBXL13基因中的修饰(包括插入/缺失或SNP)而开发出的其他标志物，以及可以基于FBXL13基因的野生型序列而开发出的其他标志物。

通常，为了鉴定显示出灼烧病毒抗性表型的属于茄科的植物，因而在FBXL13基因中测定是否存在在番茄的SEQ ID No.1的位置732处的T的缺失，或者在番茄以外的其他作物的情况下，在与之相应的位置处的T的缺失。

除了测定该缺失外，还可以测定是否存在在番茄的SEQ ID No.1的位置731处的从A至C的突变，或者在番茄以外的其他作物的情况下，在与之相应的位置处的从A至C的突变。

本发明涉及用于产生显示出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的属于茄科的植物的方法，其包括通过修饰内源性FBXL13基因以成为非功能性FBXL13基因来降低所述植物中FBXL13蛋白的内源水平。

本发明还涉及用于产生显示出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的属于茄科的植物的方法，其包括通过经由基因沉默或RNAi降低所述植物的FBXL13基因的表达来降低所述植物中FBXL13蛋白的内源水平。

本发明进一步涉及用于产生显示出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的属于茄科的植物的方法，其包括通过种子的诱变处理(特别是通过化学或物理手段)来降低所述植物中FBXL13蛋白的内源水平。

本发明还涉及用于产生显示出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的属于茄科的植物的方法，其包括借助于CRISPR来降低所述植物中FBXL13蛋白的内源水平。

在所述基因和/或其调控序列中的突变优选地借助于一种或多种化学化合物，例如甲磺酸乙酯(EMS)、亚硝基甲基脲、羟胺、原黄素、N-甲基-N-亚硝基胍、N-乙基-N-亚硝基脲、N-甲基-N-硝基-亚硝基胍、硫酸二乙酯、吖丙啶、叠氮化钠、福尔马林、氨基甲酸乙酯、苯酚和环氧乙烷，和/或通过物理手段，例如UV-辐射、快中子(FN)暴露、X-射线、γ辐射，和/或通过插入遗传元件，例如转座子、T-DNA、逆转录病毒元件，而随机地引入。诱变也包括借助于同源重组、基于寡核苷酸的突变引入、锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应子核酸酶(TALEN)或成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)系统的至少一个修饰的更特异性的、靶向的引入。

本发明进一步涉及用于产生显示出灼烧病毒抗性表型的属于茄科的植物的方法，其包括：

a)使包含本发明的经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物与不包含所述经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物杂交，以获得F1群体；

b)进行来自F1的植物的一轮或任选地多轮自交和/或杂交，以获得下一代群体；和

c)选择具有灼烧病毒抗性表型和本发明的经修饰的FBXL13基因的植物。

本发明还涉及用于产生显示出灼烧病毒抗性表型的属于茄科的植物的方法，其包括：

a)使包含本发明的经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物与另一包含所述经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物杂交，以获得F1群体；

b)任选地进行来自F1的植物的一轮或多轮自交和/或杂交，以获得下一代群体；和

本发明另外还提供了将另一所希望的性状引入到显示出灼烧病毒抗性表型的属于茄科的植物中的方法，其包括：

a)使包含本发明的经修饰的FBXL13基因的属于茄科的植物与展现出所希望的性状的属于茄科的第二植物杂交，以获得F1子代；

b)选择显示出灼烧病毒抗性表型和/或包含本发明的经修饰的FBXL13基因和所述所希望的性状的F1子代；

c)使所选择的F1子代与任一亲本植物杂交，以产生回交子代；

d)选择显示出灼烧病毒抗性表型和/或包含所述经修饰的FBXL13基因的回交子代；和

e)任选地，相继地重复步骤c)和d)一次或多次，以产生显示出灼烧病毒抗性表型的所选择的第四或更高的回交子代。本发明包括通过该方法而产生的植物。

在本申请的情景下，单词“性状”是指植物的表型。特别地，单词“性状”是指作为所述经修饰的FBXL13基因的存在的结果的灼烧病毒抗性表型。

本发明进一步涉及用于鉴定显示出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的属于茄科的植物的标志物，其包含所述经修饰的FBXL13基因或者含有所述修饰的其部分。优选地，所述修饰为在番茄的在SEQ ID No.1的位置732处或之前的核苷酸缺失，或者在番茄以外的其他作物的情况下，在相应于番茄的SEQ ID No.1的位置732的位置处或周围或之前的核苷酸缺失，所述修饰导致在相应的蛋白质中引入提前的终止密码子，并且因此导致经截短的蛋白质。

本发明还涉及用于从植物群体中选择显示出灼烧病毒抗性表型的属于茄科的植物的方法，其包括检测在植物群体的植物的基因组中在SEQ ID No.1的番茄核苷酸序列的位置732处，或者对于番茄以外的其他作物，在相应于SEQ ID No.1的番茄核苷酸序列的位置732的位置处的胸腺嘧啶(T)的不存在；并且选择缺乏在SEQ ID No.1的位置732处(如在SEQ ID No.1中所显示的)，或者对于番茄以外的其他作物，在相应于SEQ ID No.1的番茄核苷酸序列的位置732的位置处的胸腺嘧啶(T)的植物。

如在本文中所使用的，术语“突变体”、“突变”、“修饰”、“经修饰的”、“经突变的FBXL13基因”和“经修饰的FBXL13基因”是指对于其野生型FBXL13基因的核苷酸变化和氨基酸变化，其导致野生型基因的修饰形式。所述修饰可以为任何修饰，包括但不限于单核苷酸多态性(SNP)、错义突变、无义突变、插入或缺失。

更特别地，导致野生型FBXL13基因或蛋白的修饰形式的对于野生型FBXL13基因或蛋白的核苷酸变化和氨基酸变化可以导致非功能性FBXL13基因或蛋白，即编码经截短的、不完全的FBXL13蛋白的FBXL13基因。

如在本文中所使用的，“非功能性基因”为不被表达或导致非功能性蛋白质的表达的基因。所述非功能性可以是对该基因的修饰或者由于缺失而引起的该基因的完全不存在的结果。非功能性基因可以是被删除并因此不存在的基因。当一个基因被删除时，相应于该基因的全序列在所述植物的基因组中是不存在的并因此导致该基因的非功能性。备选地，也可以删除对于基因表达来说重要的该基因的部分例如启动子，并且导致非功能性基因。非功能性基因也可以为导致所编码的蛋白质的截短形式的基因，所述截短形式不再是在生物学上有活性的或者不完全是在生物学上有活性的。

如在本文中所使用的，术语“野生型”通常是指如它在自然界中将会出现那样的生物体、基因、蛋白质或性状的形式，与经突变的或经修饰的形式相反。在本发明的情景下，术语“野生型”是指对于属于灼烧病毒属的病毒易感和/或提供对于属于灼烧病毒属的病毒的易感性的生物体、基因或蛋白质。

术语“单核苷酸多态性(“SNP”)”为在植物的基因组或更特别地基因中的特定位置处发生的单个核苷酸的变异。

术语“错义突变”为一个核苷酸的变化，其导致在由基因所编码的蛋白质中一个氨基酸被置换为另一个氨基酸。

术语“无义突变”为一个核苷酸的变化，其导致提前的终止密码子。该突变类型导致经截短的蛋白质，其当与野生型蛋白质相比较时可能是非功能性的，这取决于所述截短的位置。

使用术语“提前的终止密码子”来指明在如它在野生型氨基酸序列中存在那样的终止密码子的上游的一个位置处存在终止密码子。此类提前的终止密码子导致当与野生型蛋白质相比较时经截短的、不完全的和通常非功能性的蛋白质。

如在本文中所使用的，术语“编码序列”为由编码该蛋白质的外显子组成的基因的核苷酸序列的部分。

术语“插入/缺失(indel)”为来自分子生物学领域的术语，并且用于指在基因组中一个或多个碱基的插入或缺失。它被归类于长度范围为1至10,000个碱基对的小的遗传变异之中。

所述经修饰的FBXL13基因在本文中也称为“本发明的基因”、“经修饰的FBXL13基因”或“本发明的经修饰的FBXL13基因”。这些术语在本文中可互换使用。如在本文中所使用的，短语“经修饰的FBXL13基因”意欲涵盖具有任何导致对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的修饰的FBXL13基因。

术语“抗性表型”或“抗性”在本文中可互换使用，并且是指抵抗被属于灼烧病毒属的病毒感染的植物的表型。可以根据在专利申请WO2006/085749中所描述的方法来确定植物是否显示出本发明的抗性，该专利申请公开了用于鉴定番茄灼烧病毒(ToTV)抗性番茄植物的方法。根据本发明，当出现下述情况时，植物是有抗性的：在将植物或植物部分暴露于ToTV后，疾病症状在所述植物或植物部分中仍然不存在或者在严重度的表现方面延迟，相对于在相同条件下生长并且在相同疾病测试中暴露于ToTV的易感对照植物而言。按照关于明晰性、一致性和稳定性的用于测试实施的UPOV指南(TG/44/11Rev.2)，番茄品种Daniela是易感的。因此，在所述疾病测试中使用Daniela作为易感对照。

在生物测定法之前，将该病毒在烟草(Nicotiana tabacum)栽培种Xanthi(其在子叶/第一叶期进行接种)中进行增殖。在三周后，当用于增殖的经接种的植物显示出黄色叶并且显示出全株感染时，收获接种物。播种番茄种子(包括上面提及的易感对照)，并且使其在温室中生长，其中在白天期间温度为23℃和在夜晚期间温度为21℃，而光照期设定为16小时/天。在播种后14天，当完全生长出子叶时，接种番茄植株。任选地，可以在播种后21天在第一真叶上再接种植物。在(再)接种后7天进行首次观察，可以在(再)接种后14天进行第二次观察，而应当在(再)接种后18天进行最后的观察。观察包括植物的目视检查，其中考虑下面提供的疾病症状。抗性的评价应当与易感对照的结果进行比较。

全株感染的疾病症状包括在植物顶部的坏死斑点，从小叶的叶片基部开始。坏死斑点扩展并且被淡绿色或黄色区域包围。这些坏死损伤的结束在于植物材料的灼伤样完全坏死，和最终植物的死亡。并非所有全株感染的叶片都显示出症状，但是在这些叶片中可以检测到所述病毒，例如通过电子显微术。被ToTV感染的果实展现出坏死环。

术语“属于灼烧病毒属的病毒”可以包括但不限于下列病毒：胡萝卜灼烧病毒1(Carrot torrado virus 1)、莴苣坏死性叶卷曲病毒(Lettuce necrotic leaf curlvirus)、益母草黄斑驳病病毒(Motherwort yellow mottle virus)、南瓜褪绿叶斑点病毒(Squash chlorotic leaf spot virus)、番茄枯萎病毒(Tomato marchitez virus)、番茄顶端坏死病毒(Tomato apex necrosis virus)、番茄灼烧病毒(Tomato torrado virus)、番茄灼烧病毒ESP/PRIToTV0301、木薯灼烧样病毒(Cassava Torrado-like virus)、红三叶草灼烧病毒1(Red clover torrado virus 1)、番茄巧克力斑点病毒(Tomato chocolatespot virus)、番茄巧克力病毒(Tomato chocolate virus)、番茄坏死性矮缩病毒(Tomatonecrotic dwarf virus)。

附图

图1：番茄FBXL13野生型编码序列，SEQ ID NO.1。在位置732处，野生型核苷酸为“T”，在此处在方括号之间和加粗所指示的。

图2：茄子FBXL13野生型编码序列，SEQ ID NO.2。

图3：马铃薯FBXL13野生型编码序列，SEQ ID NO.3。

图4：辣椒FBXL13野生型编码序列，SEQ ID NO.4。

图5：番茄FBXL13野生型氨基酸序列，SEQ ID NO.5。在从开始起244个氨基酸处，野生型氨基酸为“Y”，在此处在方括号之间和加粗所指示的。

图6：茄子FBXL13野生型氨基酸序列，SEQ ID NO.6。

图7：马铃薯FBXL13野生型氨基酸序列，SEQ ID NO.7。

图8：辣椒FBXL13野生型氨基酸序列，SEQ ID NO.8。

图9：番茄FBXL13经修饰的编码序列，SEQ ID NO.9。在方括号之间且加粗的核苷酸指明了缺失的位置，从开始起732个核苷酸。由于该缺失，经修饰的编码序列现在具有核苷酸“A”，如在此所显示的。该修饰导致具有提前的终止密码子的基因。

图10：番茄FBXL13经修饰的编码序列，SEQ ID NO.10。在方括号之间且加粗的核苷酸指明了SNP的位置，从开始起731个核苷酸。所述SNP为“C”，如在此所显示的。在该经修饰的编码序列中，在位置732处的野生型核苷酸“T”缺失。所述SNP和所述缺失两者都导致具有提前的终止密码子的基因。

图11：番茄FBXL13经修饰的编码序列，SEQ ID NO.11。在方括号之间且加粗的核苷酸指明了SNP的位置，从开始起731个核苷酸。所述SNP为“C”，如在此所显示的。在该经修饰的编码序列中，在位置732处的野生型核苷酸“T”是存在的。仅所述SNP的存在将不会导致具有提前的终止密码子的基因。

图12：番茄FBXL13经修饰的氨基酸序列，SEQ ID NO.12。该序列代表了经截短的蛋白质，当与图5的具有SEQ ID NO.5的野生型氨基酸序列相比较时。

图13：番茄FBXL13经修饰的氨基酸序列，SEQ ID NO.13。该序列代表了经截短的蛋白质，当与图5的具有SEQ ID NO.5的野生型氨基酸序列相比较时。

图14：番茄FBXL13经修饰的氨基酸序列，SEQ ID NO.14。该序列不代表经截短的蛋白质，而是SNP的结果，在位置244处的野生型氨基酸“Y”变化为“S”。

实施例

实施例1

具有FBXL13基因突变的植物的产生；通过甲磺酸乙酯(ems)的植物的遗传修饰和具有经突变的FBXL13基因的植物的鉴定

通过在室温下将大约5000粒种子浸没入0.5％(w/v)EMS的充气溶液中24小时，用EMS处理相关作物(特别是番茄)的种子。在小塑料容器中使经处理的种子在纸上发芽，并且使所得的植物在温室中生长和自花传粉以产生种子。在成熟后，收获这些种子并且堆积在一个汇集库中。将所得的种子汇集库用作起始材料以鉴定显示出对于番茄灼烧病毒感染的抗性的独个植物。

使所获得的FBXL13突变体在温室中生长，以便通过自体受精来产生品系。分析番茄植物品系以确证对于番茄灼烧病毒感染的抗性。当一个品系对于番茄灼烧病毒感染来说是分离性的之时，选择植物并且在另一轮近交后选择FBXL13品系。通过相比于易感对照品系而言其对于番茄灼烧病毒的抗性来鉴定FBXL13突变体。

实施例2

在番茄中FBXL13基因修饰的鉴定

就针对番茄灼烧病毒的抗性测试了番茄的几个杂交群体。通过使用分子标志物，鉴定出了位于染色体4上的QTL。将目的区域缩窄至34kbp。该区域包含9个基因。

使经测序的亲本品系经历番茄灼烧病毒疾病测试，发现其中许多是抗性的，除了2个亲本品系。

通过使用IGV-工具，将易感亲本品系TO 5029和抗性品系的全基因组测序数据与目的区域(SL2.50ch04:64096226..64132851)进行比较。提取这些品系的序列并且用于通过使用CloneManager软件的进一步分析。

发现了几个SNP和插入/缺失。为了检查潜在地有效的突变(在基因的编码区中)，从Solgenomics网站(www.solgenomics.net)提取来自在该区域中的所有基因的mRNA并且用于与易感和抗性品系的比对。

在亲本品系TO 5029中，鉴定出了总共20个突变，而在另一个抗性亲本品系(S15R.1640001)中，发现了总共16个突变。对于所有SNP和插入/缺失，设计分子标志物以便调查哪个突变与灼烧病毒抗性最佳地相关。在这些标志物之中，分子标志物SL09491几乎100％相关。

在基因座Solyc04g79810的位置731处发现了SNP。在分析之后，得出结论，该SNP具有下面的效应：在易感品系中存在的核苷酸在随后延伸的蛋白质中在那个位置处提供了酪氨酸(Y)氨基酸，而所述SNP在那个位置处提供了丝氨酸(S)。

在导致本发明的研究中，发现数个番茄植物品系和品种(来自野生以及驯化物种)对于番茄灼烧病毒具有抗性。易感品系和品种与抗性品系和品种的进一步比较显示，在Solyc04g79810(ITAG2.4注释)内的缺失影响必需的密码子；而在参考序列中的核苷酸缺失导致(提前的)终止密码子，在易感品系中存在的该额外的核苷酸(胸腺嘧啶)确保当与参考序列相比时所述编码序列被延伸。

发明人得出下面的结论：对于番茄灼烧病毒感染具有抗性的番茄植株总是具有如在抗性品系和品种中存在的在Solyc04g79810(ITAG2.4注释)的位置732处的缺失。在另一些抗性植物中，也可以发现另一个SNP。尽管存在该SNP绕开了初始终止密码子(通过所述缺失而引入的)这一事实，但是位于上游5个氨基酸处的另一个提前的终止密码子仍然提供了经截短的蛋白质，其向番茄植物赋予对于番茄灼烧病毒感染的抗性。

实施例3

包含所述FBXL13基因的作物的鉴定

使用基础局部比对搜索工具(Basic Local Alignment Search Tool；BLAST)程序来针对其他作物植物的核苷酸编码序列和蛋白质序列比较SEQ ID No.1的FBXL13核苷酸序列和SEQ ID NO.5的氨基酸序列。这导致鉴定出了在其他植物中的候选FBXL13直向同源基因。FBXL13编码序列的多重序列比对确证，这些是直向同源的FBXL13基因。氨基酸序列的多重序列比对确证，这些是直向同源的FBXL13蛋白。

序列表

<110> Rijk Zwaan Zaadteelt en Zaadhandel B.V.

<120> 灼烧病毒抗性基因

<130> P128919PC01

<140>

<141>

<160> 14

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 1296

<212> DNA

<213> 番茄（Solanum lycopersicum）

<220>

<223> Solyc04g079810_WT_CDS

<400> 1

atgagtgtaa tgaagcaaca tataccatcc aatttccttt gcaatgcaga acttgaggtg 60

gacgatatca gcaacttacc agcccagatt gtcgacaaga ttctgtctca tttgtcactt 120

agggatgctg tgaggacaag tgtcttgtca agtaaatgga gaaacaaatg ggttactctt 180

ccaaaccttg tatttgacaa tcaatctctt ttgatctcat cccaagacca aaccttcata 240

aaaaataaga tagtaaacat tgttgatcat gttcttttac ttcattctgg tcccatacac 300

aagttcaagc tttctcatcg ggatcttcaa ggggtgtgtg atattgatag atggattctc 360

tttctatcaa ggggtgctgt gaaggagttt attcttgaaa tatggaaagg acatcgctac 420

aaactccact cttctatata tctttgtcaa aagttgaacc acttggagct ttttaattgt 480

cttctaaaac cacctcacac atttaatggt tttaaaagct tgaaaagcct cgatcttcag 540

cacatcacta tggaacagga tgcatttgag caacttgtgt cgagatgcca tttacttgag 600

cggcttacac tgatgaattt tgagggcttc tccgatctta aaatccacgc accgaatctc 660

ctcttctttg atgttggagg tgtctttgaa gacatcaatt tcatgaacac attcaatctt 720

gctatcgttt atattgggct atatgtaaat cctggatttg acaaaaatct tactctaggc 780

agtgctggaa atttggtcaa gttttttgct catttgcctc gtcttcaaag gcttgaagta 840

cagagctttt tcttgaagta tctggctgac aataaagtgc caggaagact acctacacct 900

tgtgatgagc taagttttct ttcaatgcgc ataaatttca accatttgga tgagtgtctg 960

gcagcacttt gccttctcag aagttcccct aacctacaag agcttgagat gttggcacgc 1020

acagaagaac aaagtacttt gagaaccgtt gccagtgtta tgaaagagga ttaccagaat 1080

tgtatgttca atcaattgag gcatgttaag attgctggta taactgggct taaacaagag 1140

ctaaatttcg tcaattttct gctttcaaat tcacctgttc ttgaaagaat gacagtcaag 1200

ccagcttcag ttgacggtgc atgggagatg ctaaaagagt tgctacgctt caggagagct 1260

tctgtacaag ctgaaatcgt ttacgttgac ccataa 1296

<210> 2

<211> 1188

<212> DNA

<213> 茄子（Solanum melongena）

<220>

<223> Sme2.5_01177.1_WT_CDS

<400> 2

atggacactg attcggatag agatttaata agtgatttgc ctcaaagtat catagaaagc 60

atcctcataa gagtcccatt actcgatgct gtaaggacaa gcatattgtc aagaaaatgg 120

agatacaagt gggcaaccat tacacaactt gtttttagtg acacatgtct gactccttgc 180

catgacaaat caattatcag ttgcaatctt gtaaatttca ttacccgttg cctgtttctt 240

catgatggac caatccacaa atttgagttg aatacttctt actcgccaac ttctcctgat 300

ttagatcaat ggctactttt cctttctcgt aaagatatca aagagttgat tattgatata 360

ggagaagatg actggtttag agcaccttcg tgtttgttct tttgtcctaa gttgactcat 420

ttggtgcttg ttcgatgtga attaaacccc cctccaaatt tcaaaggctt cttgtgtttg 480

aagcacctta gtctccagca agttatcatt cctccacatg atattgaagt cctgatttcc 540

agttgccctc ttcttgaaag cttgacatta tcatattttg acagtttgga gcttactatt 600

caagctccaa atctcaaata cttgaatttg gaagctgagc actttgaaca aagctcaggt 660

tgcaattttg gcaagtttct tggtggtgtt cctcgccttg agaggcttat tggccatatt 720

tacttcacta aatatttgag tataggtaat gaggaaggaa gctttcccgt tatgtatcaa 780

aatctgaagt tcattgaact gtaccaagtt agctttgaag acatgaaaga gttactagtt 840

gtgcttcgct tgatcgtgag ctcgcctaat ctagaggagc ttcaaatatc aagttcttca 900

attacaacta ccactgatat atatgatctg gaattttggg agaaagactg gcctggtgac 960

tgcacttttg gtaaactgaa gattgtacaa atgactgatt tctccggtct gcctcatgaa 1020

atcgcgttta tcaaattctt acttggacat tcacctgttc ttgaacaaat gattgttgct 1080

cctactatat atgtcacgga taaagtggtg aaaatgttga tcgacttgtt gacttttcga 1140

cgagcttctc ctcaagctac tgttaaattt gttcaagagc cattgtag 1188

<210> 3

<211> 1269

<212> DNA

<213> 马铃薯（Solanum tuberosum）

<220>

<223> Sotub04g033070.1.1_WT_CDS

<400> 3

atggacactg attcggatag agatttatta agtgatttgc ctcaaagtat catagaaagc 60

atcctcgtaa aagttccatt agtcgatgct gtaaggacaa gcatattgtc aagaaaatgg 120

agatacaagt gggcagccat tacagaactt gtttttaatg acacatgtcg gacttctggc 180

catgacaaat caattatcag ttgcaatctt gtaaatttca ttacccggtg cctgtttctt 240

catgacggac cgattcacaa atttgaattg aatacttcct actcaccagc ttctcctgat 300

ttagatcaat ggctactttt cctttctcgt aaagatatca aagagttgat tattgatata 360

ggagaagatg actggtttag agcaccttca tgtgtgttct tttgtcctaa gttgactcat 420

ttggtgcttg ttcgatgtga attaaaccct cctccaaatt tcaaaggctt cttgtgtttg 480

aagcacctta gtctccagca agttatcatt cctccacatg atattgaagt tctcatctcc 540

agttgtcctc ttctcgagag cttgacattg tcatattttg acagtttgga gcttactatt 600

cgagctccaa atctcaaata tctgaatttg gaaggtgaat ttaaggatat acgccttgag 660

aatactccac atctgattgg tatttcagtt gccatgtata tgactgatga tatagctgag 720

cactttgaac aatgctcagg ttgcaatttc gacaagtttc ttggtggtgt tccttgcctt 780

gagaggctta ttggtcatat atacttcact aaatatttga gtataggaaa tgagcaaggg 840

aactttcccg ttacgtatca aaatctgaag ttcattgaac tgtaccaagt tagttttgaa 900

gacatgaaag agttacttgt tgtgcttcgc ttgattgtga gttctcctaa tctagaggag 960

cttcaaatat ctagttcctc gattacaacc accaccgata tttatgatct agaattttgg 1020

gagagagact ggcctgctga ctgcactttc ggtaaactga agattgtgca tatgactgat 1080

ttctccggtc tgccacatga aatcgcgttt atcaaattct tacttggaca ttcacctgtt 1140

ctcgaacaaa tgattgttgc tcctactgta tatgtcacag ataaagtggt gaaaatgttg 1200

atcgacctgt taacatttcg acgggcttct cctcaagcta cagttaaatt tattcaagag 1260

ccattgtag 1269

<210> 4

<211> 1314

<212> DNA

<213> 辣椒（Capsicum annuum）

<220>

<223> CA04g19850_WT_CDS

<400> 4

atgaatttct tcttctttgt tactatgcag aagcaacgta ttccatccaa cttcccttgc 60

aatgccgaac ttgaggtgga caagatcagc aacttaccag cacagattgt tgacaagatt 120

ttgtctcatt tgtcactcag ggatgctgtg aggacaagcg tcttgtccag taaatggaga 180

tacaaatggg tttctcttcc aaaccttgta tttgacaatc aatctctttt gatttcatcc 240

caagaccaaa ccttcataaa aaataagata gttaacattg ttgatcatgt tctcttactt 300

cattctggtc ccatacaaaa gttcaagctt tctcatcggg atcttcaagg ggtgtgtgat 360

attgatagat ggattctttt tctatcaagg ggttctgtga aggaatttat tcttgaaata 420

tggaaaggac atcgctacaa actccattct tctatatatc tttgtcaaaa gttgatccac 480

ttggagctat ttaattgtct tctaaaacct cctctcacat tcattggttt taaaagtttg 540

aaaagcctcg atcttcagca catcactatg gaacaagatg catttgagca tctcgtatcg 600

agctgccatt tgcttgagcg gcttacactg atgaattttg agggtttctc cgatcttaaa 660

atccatgcac caaatctcct cttctttgac gttggaggcg tctttgaaga catcaatttc 720

atggacacat tcaaccttgc catagtttct attgggttat atgtgaatcc tggatttgac 780

aaaaatctta ctctaggcag tgctggaaac ttggtcaagt tttttgctca tttacctcgt 840

cttcaaaggc tcgaagtaca gagctttttc ttgaagtatc tggctgatgg taaggtaccg 900

ggaagactac ctacgccttg tgatgagctt agttttcttt caatacgcat aaatttcaac 960

catctggatg agtgtctggc tgcactttgt cttctcagaa gttcccctaa cctacaggag 1020

cttgagatgt tggcacgcac agaagaacaa agtgctttga gaaccgttgc cagtgtcatg 1080

gaagaaaact accagaattg tatgtttaat caattgcggc atgtgaagat tgctggtata 1140

tctgggctta aacaggagct aaatttcatc aattttctgc ttgcaaattc acctattctt 1200

gaaaggatga cagttaagcc agcttcagta gacggtgcat gggatatgct aaaagagttg 1260

cttcgcttta ggagagcttc agtacaagcc gagatcgttt accttgaccc ttaa 1314

<210> 5

<211> 430

<212> PRT

<213> 番茄

<220>

<223> Solyc04g079810_WT_蛋白

<400> 5

Met Ser Val Met Lys Gln His Ile Pro Ser Asn Phe Leu Cys Asn Ala

1 5 10 15

Glu Leu Glu Val Asp Asp Ile Ser Asn Leu Pro Ala Gln Ile Val Asp

20 25 30

Lys Ile Leu Ser His Leu Ser Leu Arg Asp Ala Val Arg Thr Ser Val

35 40 45

Leu Ser Ser Lys Trp Arg Asn Lys Trp Val Thr Leu Pro Asn Leu Val

50 55 60

Phe Asp Asn Gln Ser Leu Leu Ile Ser Ser Gln Asp Gln Thr Phe Ile

65 70 75 80

Lys Asn Lys Ile Val Asn Ile Val Asp His Val Leu Leu Leu His Ser

85 90 95

Gly Pro Ile His Lys Phe Lys Leu Ser His Arg Asp Leu Gln Gly Val

100 105 110

Cys Asp Ile Asp Arg Trp Ile Leu Phe Leu Ser Arg Gly Ala Val Lys

115 120 125

Glu Phe Ile Leu Glu Ile Trp Lys Gly His Arg Tyr Lys Leu His Ser

130 135 140

Ser Ile Tyr Leu Cys Gln Lys Leu Asn His Leu Glu Leu Phe Asn Cys

145 150 155 160

Leu Leu Lys Pro Pro His Thr Phe Asn Gly Phe Lys Ser Leu Lys Ser

165 170 175

Leu Asp Leu Gln His Ile Thr Met Glu Gln Asp Ala Phe Glu Gln Leu

180 185 190

Val Ser Arg Cys His Leu Leu Glu Arg Leu Thr Leu Met Asn Phe Glu

195 200 205

Gly Phe Ser Asp Leu Lys Ile His Ala Pro Asn Leu Leu Phe Phe Asp

210 215 220

Val Gly Gly Val Phe Glu Asp Ile Asn Phe Met Asn Thr Phe Asn Leu

225 230 235 240

Ala Ile Val Tyr Ile Gly Leu Tyr Val Asn Pro Gly Phe Asp Lys Asn

245 250 255

Leu Thr Leu Gly Ser Ala Gly Asn Leu Val Lys Phe Phe Ala His Leu

260 265 270

Pro Arg Leu Gln Arg Leu Glu Val Gln Ser Phe Phe Leu Lys Tyr Leu

275 280 285

Ala Asp Asn Lys Val Pro Gly Arg Leu Pro Thr Pro Cys Asp Glu Leu

290 295 300

Ser Phe Leu Ser Met Arg Ile Asn Phe Asn His Leu Asp Glu Cys Leu

305 310 315 320

Ala Ala Leu Cys Leu Leu Arg Ser Ser Pro Asn Leu Gln Glu Leu Glu

325 330 335

Met Leu Ala Arg Thr Glu Glu Gln Ser Thr Leu Arg Thr Val Ala Ser

340 345 350

Val Met Lys Glu Asp Tyr Gln Asn Cys Met Phe Asn Gln Leu Arg His

355 360 365

Val Lys Ile Ala Gly Ile Thr Gly Leu Lys Gln Glu Leu Asn Phe Val

370 375 380

Asn Phe Leu Leu Ser Asn Ser Pro Val Leu Glu Arg Met Thr Val Lys

385 390 395 400

Pro Ala Ser Val Asp Gly Ala Trp Glu Met Leu Glu Leu Leu Arg Phe

405 410 415

Arg Arg Ala Ser Val Gln Ala Glu Ile Val Tyr Val Asp Pro

420 425 430

<210> 6

<211> 395

<212> PRT

<213> 茄子

<220>

<223> Sme2.5_01177.1_WT_蛋白

<400> 6

Met Asp Thr Asp Ser Asp Arg Asp Leu Ile Ser Asp Leu Pro Gln Ser

1 5 10 15

Ile Ile Glu Ser Ile Leu Ile Arg Val Pro Leu Leu Asp Ala Val Arg

20 25 30

Thr Ser Ile Leu Ser Arg Lys Trp Arg Tyr Lys Trp Ala Thr Ile Thr

35 40 45

Gln Leu Val Phe Ser Asp Thr Cys Leu Thr Pro Cys His Asp Lys Ser

50 55 60

Ile Ile Ser Cys Asn Leu Val Asn Phe Ile Thr Arg Cys Leu Phe Leu

65 70 75 80

His Asp Gly Pro Ile His Lys Phe Glu Leu Asn Thr Ser Tyr Ser Pro

85 90 95

Thr Ser Pro Asp Leu Asp Gln Trp Leu Leu Phe Leu Ser Arg Lys Asp

100 105 110

Ile Lys Glu Leu Ile Ile Asp Ile Gly Glu Asp Asp Trp Phe Arg Ala

115 120 125

Pro Ser Cys Leu Phe Phe Cys Pro Lys Leu Thr His Leu Val Leu Val

130 135 140

Arg Cys Glu Leu Asn Pro Pro Pro Asn Phe Lys Gly Phe Leu Cys Leu

145 150 155 160

Lys His Leu Ser Leu Gln Gln Val Ile Ile Pro Pro His Asp Ile Glu

165 170 175

Val Leu Ile Ser Ser Cys Pro Leu Leu Glu Ser Leu Thr Leu Ser Tyr

180 185 190

Phe Asp Ser Leu Glu Leu Thr Ile Gln Ala Pro Asn Leu Lys Tyr Leu

195 200 205

Asn Leu Glu Ala Glu His Phe Glu Gln Ser Ser Gly Cys Asn Phe Gly

210 215 220

Lys Phe Leu Gly Gly Val Pro Arg Leu Glu Arg Leu Ile Gly His Ile

225 230 235 240

Tyr Phe Thr Lys Tyr Leu Ser Ile Gly Asn Glu Glu Gly Ser Phe Pro

245 250 255

Val Met Tyr Gln Asn Leu Lys Phe Ile Glu Leu Tyr Gln Val Ser Phe

260 265 270

Glu Asp Met Lys Glu Leu Leu Val Val Leu Arg Leu Ile Val Ser Ser

275 280 285

Pro Asn Leu Glu Glu Leu Gln Ile Ser Ser Ser Ser Ile Thr Thr Thr

290 295 300

Thr Asp Ile Tyr Asp Leu Glu Phe Trp Glu Lys Asp Trp Pro Gly Asp

305 310 315 320

Cys Thr Phe Gly Lys Leu Lys Ile Val Gln Met Thr Asp Phe Ser Gly

325 330 335

Leu Pro His Glu Ile Ala Phe Ile Lys Phe Leu Leu Gly His Ser Pro

340 345 350

Val Leu Glu Gln Met Ile Val Ala Pro Thr Ile Tyr Val Thr Asp Lys

355 360 365

Val Val Lys Met Leu Ile Asp Leu Leu Thr Phe Arg Arg Ala Ser Pro

370 375 380

Gln Ala Thr Val Lys Phe Val Gln Glu Pro Leu

385 390 395

<210> 7

<211> 422

<212> PRT

<213> 马铃薯

<220>

<223> Sotub04g033070.1.1_WT_蛋白

<400> 7

Met Asp Thr Asp Ser Asp Arg Asp Leu Leu Ser Asp Leu Pro Gln Ser

1 5 10 15

Ile Ile Glu Ser Ile Leu Val Lys Val Pro Leu Val Asp Ala Val Arg

20 25 30

Thr Ser Ile Leu Ser Arg Lys Trp Arg Tyr Lys Trp Ala Ala Ile Thr

35 40 45

Glu Leu Val Phe Asn Asp Thr Cys Arg Thr Ser Gly His Asp Lys Ser

50 55 60

Ile Ile Ser Cys Asn Leu Val Asn Phe Ile Thr Arg Cys Leu Phe Leu

65 70 75 80

His Asp Gly Pro Ile His Lys Phe Glu Leu Asn Thr Ser Tyr Ser Pro

85 90 95

Ala Ser Pro Asp Leu Asp Gln Trp Leu Leu Phe Leu Ser Arg Lys Asp

100 105 110

Ile Lys Glu Leu Ile Ile Asp Ile Gly Glu Asp Asp Trp Phe Arg Ala

115 120 125

Pro Ser Cys Val Phe Phe Cys Pro Lys Leu Thr His Leu Val Leu Val

130 135 140

Arg Cys Glu Leu Asn Pro Pro Pro Asn Phe Lys Gly Phe Leu Cys Leu

145 150 155 160

Lys His Leu Ser Leu Gln Gln Val Ile Ile Pro Pro His Asp Ile Glu

165 170 175

Val Leu Ile Ser Ser Cys Pro Leu Leu Glu Ser Leu Thr Leu Ser Tyr

180 185 190

Phe Asp Ser Leu Glu Leu Thr Ile Arg Ala Pro Asn Leu Lys Tyr Leu

195 200 205

Asn Leu Glu Gly Glu Phe Lys Asp Ile Arg Leu Glu Asn Thr Pro His

210 215 220

Leu Ile Gly Ile Ser Val Ala Met Tyr Met Thr Asp Asp Ile Ala Glu

225 230 235 240

His Phe Glu Gln Cys Ser Gly Cys Asn Phe Asp Lys Phe Leu Gly Gly

245 250 255

Val Pro Cys Leu Glu Arg Leu Ile Gly His Ile Tyr Phe Thr Lys Tyr

260 265 270

Leu Ser Ile Gly Asn Glu Gln Gly Asn Phe Pro Val Thr Tyr Gln Asn

275 280 285

Leu Lys Phe Ile Glu Leu Tyr Gln Val Ser Phe Glu Asp Met Lys Glu

290 295 300

Leu Leu Val Val Leu Arg Leu Ile Val Ser Ser Pro Asn Leu Glu Glu

305 310 315 320

Leu Gln Ile Ser Ser Ser Ser Ile Thr Thr Thr Thr Asp Ile Tyr Asp

325 330 335

Leu Glu Phe Trp Glu Arg Asp Trp Pro Ala Asp Cys Thr Phe Gly Lys

340 345 350

Leu Lys Ile Val His Met Thr Asp Phe Ser Gly Leu Pro His Glu Ile

355 360 365

Ala Phe Ile Lys Phe Leu Leu Gly His Ser Pro Val Leu Glu Gln Met

370 375 380

Ile Val Ala Pro Thr Val Tyr Val Thr Asp Lys Val Val Lys Met Leu

385 390 395 400

Ile Asp Leu Leu Thr Phe Arg Arg Ala Ser Pro Gln Ala Thr Val Lys

405 410 415

Phe Ile Gln Glu Pro Leu

420

<210> 8

<211> 437

<212> PRT

<213> 辣椒

<220>

<223> CA04g19850_WT_蛋白

<400> 8

Met Asn Phe Phe Phe Phe Val Thr Met Gln Lys Gln Arg Ile Pro Ser

1 5 10 15

Asn Phe Pro Cys Asn Ala Glu Leu Glu Val Asp Lys Ile Ser Asn Leu

20 25 30

Pro Ala Gln Ile Val Asp Lys Ile Leu Ser His Leu Ser Leu Arg Asp

35 40 45

Ala Val Arg Thr Ser Val Leu Ser Ser Lys Trp Arg Tyr Lys Trp Val

50 55 60

Ser Leu Pro Asn Leu Val Phe Asp Asn Gln Ser Leu Leu Ile Ser Ser

65 70 75 80

Gln Asp Gln Thr Phe Ile Lys Asn Lys Ile Val Asn Ile Val Asp His

85 90 95

Val Leu Leu Leu His Ser Gly Pro Ile Gln Lys Phe Lys Leu Ser His

100 105 110

Arg Asp Leu Gln Gly Val Cys Asp Ile Asp Arg Trp Ile Leu Phe Leu

115 120 125

Ser Arg Gly Ser Val Lys Glu Phe Ile Leu Glu Ile Trp Lys Gly His

130 135 140

Arg Tyr Lys Leu His Ser Ser Ile Tyr Leu Cys Gln Lys Leu Ile His

145 150 155 160

Leu Glu Leu Phe Asn Cys Leu Leu Lys Pro Pro Leu Thr Phe Ile Gly

165 170 175

Phe Lys Ser Leu Lys Ser Leu Asp Leu Gln His Ile Thr Met Glu Gln

180 185 190

Asp Ala Phe Glu His Leu Val Ser Ser Cys His Leu Leu Glu Arg Leu

195 200 205

Thr Leu Met Asn Phe Glu Gly Phe Ser Asp Leu Lys Ile His Ala Pro

210 215 220

Asn Leu Leu Phe Phe Asp Val Gly Gly Val Phe Glu Asp Ile Asn Phe

225 230 235 240

Met Asp Thr Phe Asn Leu Ala Ile Val Ser Ile Gly Leu Tyr Val Asn

245 250 255

Pro Gly Phe Asp Lys Asn Leu Thr Leu Gly Ser Ala Gly Asn Leu Val

260 265 270

Lys Phe Phe Ala His Leu Pro Arg Leu Gln Arg Leu Glu Val Gln Ser

275 280 285

Phe Phe Leu Lys Tyr Leu Ala Asp Gly Lys Val Pro Gly Arg Leu Pro

290 295 300

Thr Pro Cys Asp Glu Leu Ser Phe Leu Ser Ile Arg Ile Asn Phe Asn

305 310 315 320

His Leu Asp Glu Cys Leu Ala Ala Leu Cys Leu Leu Arg Ser Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Gln Glu Leu Glu Met Leu Ala Arg Thr Glu Glu Gln Ser Ala

340 345 350

Leu Arg Thr Val Ala Ser Val Met Glu Glu Asn Tyr Gln Asn Cys Met

355 360 365

Phe Asn Gln Leu Arg His Val Lys Ile Ala Gly Ile Ser Gly Leu Lys

370 375 380

Gln Glu Leu Asn Phe Ile Asn Phe Leu Leu Ala Asn Ser Pro Ile Leu

385 390 395 400

Glu Arg Met Thr Val Lys Pro Ala Ser Val Asp Gly Ala Trp Asp Met

405 410 415

Leu Lys Glu Leu Leu Arg Phe Arg Arg Ala Ser Val Gln Ala Glu Ile

420 425 430

Val Tyr Leu Asp Pro

435

<210> 9

<211> 732

<212> DNA

<213> 番茄

<220>

<223> Solyc04g079810_缺失_CDS

<400> 9

atgagtgtaa tgaagcaaca tataccatcc aatttccttt gcaatgcaga acttgaggtg 60

gacgatatca gcaacttacc agcccagatt gtcgacaaga ttctgtctca tttgtcactt 120

agggatgctg tgaggacaag tgtcttgtca agtaaatgga gaaacaaatg ggttactctt 180

ccaaaccttg tatttgacaa tcaatctctt ttgatctcat cccaagacca aaccttcata 240

aaaaataaga tagtaaacat tgttgatcat gttcttttac ttcattctgg tcccatacac 300

aagttcaagc tttctcatcg ggatcttcaa ggggtgtgtg atattgatag atggattctc 360

tttctatcaa ggggtgctgt gaaggagttt attcttgaaa tatggaaagg acatcgctac 420

aaactccact cttctatata tctttgtcaa aagttgaacc acttggagct ttttaattgt 480

cttctaaaac cacctcacac atttaatggt tttaaaagct tgaaaagcct cgatcttcag 540

cacatcacta tggaacagga tgcatttgag caacttgtgt cgagatgcca tttacttgag 600

cggcttacac tgatgaattt tgagggcttc tccgatctta aaatccacgc accgaatctc 660

ctcttctttg atgttggagg tgtctttgaa gacatcaatt tcatgaacac attcaatctt 720

gctatcgttt aa 732

<210> 10

<211> 747

<212> DNA

<213> 番茄

<220>

<223> Solyc04g079810_缺失+SNP_CDS

<400> 10

atgagtgtaa tgaagcaaca tataccatcc aatttccttt gcaatgcaga acttgaggtg 60

gacgatatca gcaacttacc agcccagatt gtcgacaaga ttctgtctca tttgtcactt 120

agggatgctg tgaggacaag tgtcttgtca agtaaatgga gaaacaaatg ggttactctt 180

ccaaaccttg tatttgacaa tcaatctctt ttgatctcat cccaagacca aaccttcata 240

aaaaataaga tagtaaacat tgttgatcat gttcttttac ttcattctgg tcccatacac 300

aagttcaagc tttctcatcg ggatcttcaa ggggtgtgtg atattgatag atggattctc 360

tttctatcaa ggggtgctgt gaaggagttt attcttgaaa tatggaaagg acatcgctac 420

aaactccact cttctatata tctttgtcaa aagttgaacc acttggagct ttttaattgt 480

cttctaaaac cacctcacac atttaatggt tttaaaagct tgaaaagcct cgatcttcag 540

cacatcacta tggaacagga tgcatttgag caacttgtgt cgagatgcca tttacttgag 600

cggcttacac tgatgaattt tgagggcttc tccgatctta aaatccacgc accgaatctc 660

ctcttctttg atgttggagg tgtctttgaa gacatcaatt tcatgaacac attcaatctt 720

gctatcgttt cattgggcta tatgtaa 747

<210> 11

<211> 1296

<212> DNA

<213> 番茄

<220>

<223> Solyc04g079810_SNP_CDS

<400> 11

atgagtgtaa tgaagcaaca tataccatcc aatttccttt gcaatgcaga acttgaggtg 60

gacgatatca gcaacttacc agcccagatt gtcgacaaga ttctgtctca tttgtcactt 120

agggatgctg tgaggacaag tgtcttgtca agtaaatgga gaaacaaatg ggttactctt 180

ccaaaccttg tatttgacaa tcaatctctt ttgatctcat cccaagacca aaccttcata 240

aaaaataaga tagtaaacat tgttgatcat gttcttttac ttcattctgg tcccatacac 300

aagttcaagc tttctcatcg ggatcttcaa ggggtgtgtg atattgatag atggattctc 360

tttctatcaa ggggtgctgt gaaggagttt attcttgaaa tatggaaagg acatcgctac 420

aaactccact cttctatata tctttgtcaa aagttgaacc acttggagct ttttaattgt 480

cttctaaaac cacctcacac atttaatggt tttaaaagct tgaaaagcct cgatcttcag 540

cacatcacta tggaacagga tgcatttgag caacttgtgt cgagatgcca tttacttgag 600

cggcttacac tgatgaattt tgagggcttc tccgatctta aaatccacgc accgaatctc 660

ctcttctttg atgttggagg tgtctttgaa gacatcaatt tcatgaacac attcaatctt 720

gctatcgttt ctattgggct atatgtaaat cctggatttg acaaaaatct tactctaggc 780

agtgctggaa atttggtcaa gttttttgct catttgcctc gtcttcaaag gcttgaagta 840

cagagctttt tcttgaagta tctggctgac aataaagtgc caggaagact acctacacct 900

tgtgatgagc taagttttct ttcaatgcgc ataaatttca accatttgga tgagtgtctg 960

gcagcacttt gccttctcag aagttcccct aacctacaag agcttgagat gttggcacgc 1020

acagaagaac aaagtacttt gagaaccgtt gccagtgtta tgaaagagga ttaccagaat 1080

tgtatgttca atcaattgag gcatgttaag attgctggta taactgggct taaacaagag 1140

ctaaatttcg tcaattttct gctttcaaat tcacctgttc ttgaaagaat gacagtcaag 1200

ccagcttcag ttgacggtgc atgggagatg ctaaaagagt tgctacgctt caggagagct 1260

tctgtacaag ctgaaatcgt ttacgttgac ccataa 1296

<210> 12

<211> 243

<212> PRT

<213> 番茄

<220>

<223> Solyc04g079810_缺失_蛋白

<400> 12

Met Ser Val Met Lys Gln His Ile Pro Ser Asn Phe Leu Cys Asn Ala

1 5 10 15

Glu Leu Glu Val Asp Asp Ile Ser Asn Leu Pro Ala Gln Ile Val Asp

20 25 30

Lys Ile Leu Ser His Leu Ser Leu Arg Asp Ala Val Arg Thr Ser Val

35 40 45

Leu Ser Ser Lys Trp Arg Asn Lys Trp Val Thr Leu Pro Asn Leu Val

50 55 60

Phe Asp Asn Gln Ser Leu Leu Ile Ser Ser Gln Asp Gln Thr Phe Ile

65 70 75 80

Lys Asn Lys Ile Val Asn Ile Val Asp His Val Leu Leu Leu His Ser

85 90 95

Gly Pro Ile His Lys Phe Lys Leu Ser His Arg Asp Leu Gln Gly Val

100 105 110

Cys Asp Ile Asp Arg Trp Ile Leu Phe Leu Ser Arg Gly Ala Val Lys

115 120 125

Glu Phe Ile Leu Glu Ile Trp Lys Gly His Arg Tyr Lys Leu His Ser

130 135 140

Ser Ile Tyr Leu Cys Gln Lys Leu Asn His Leu Glu Leu Phe Asn Cys

145 150 155 160

Leu Leu Lys Pro Pro His Thr Phe Asn Gly Phe Lys Ser Leu Lys Ser

165 170 175

Leu Asp Leu Gln His Ile Thr Met Glu Gln Asp Ala Phe Glu Gln Leu

180 185 190

Val Ser Arg Cys His Leu Leu Glu Arg Leu Thr Leu Met Asn Phe Glu

195 200 205

Gly Phe Ser Asp Leu Lys Ile His Ala Pro Asn Leu Leu Phe Phe Asp

210 215 220

Val Gly Gly Val Phe Glu Asp Ile Asn Phe Met Asn Thr Phe Asn Leu

225 230 235 240

Ala Ile Val

<210> 13

<211> 248

<212> PRT

<213> 番茄

<220>

<223> Solyc04g079810_ 缺失+SNP_蛋白

<400> 13

Met Ser Val Met Lys Gln His Ile Pro Ser Asn Phe Leu Cys Asn Ala

1 5 10 15

Glu Leu Glu Val Asp Asp Ile Ser Asn Leu Pro Ala Gln Ile Val Asp

20 25 30

Lys Ile Leu Ser His Leu Ser Leu Arg Asp Ala Val Arg Thr Ser Val

35 40 45

Leu Ser Ser Lys Trp Arg Asn Lys Trp Val Thr Leu Pro Asn Leu Val

50 55 60

Phe Asp Asn Gln Ser Leu Leu Ile Ser Ser Gln Asp Gln Thr Phe Ile

65 70 75 80

Lys Asn Lys Ile Val Asn Ile Val Asp His Val Leu Leu Leu His Ser

85 90 95

Gly Pro Ile His Lys Phe Lys Leu Ser His Arg Asp Leu Gln Gly Val

100 105 110

Cys Asp Ile Asp Arg Trp Ile Leu Phe Leu Ser Arg Gly Ala Val Lys

115 120 125

Glu Phe Ile Leu Glu Ile Trp Lys Gly His Arg Tyr Lys Leu His Ser

130 135 140

Ser Ile Tyr Leu Cys Gln Lys Leu Asn His Leu Glu Leu Phe Asn Cys

145 150 155 160

Leu Leu Lys Pro Pro His Thr Phe Asn Gly Phe Lys Ser Leu Lys Ser

165 170 175

Leu Asp Leu Gln His Ile Thr Met Glu Gln Asp Ala Phe Glu Gln Leu

180 185 190

Val Ser Arg Cys His Leu Leu Glu Arg Leu Thr Leu Met Asn Phe Glu

195 200 205

Gly Phe Ser Asp Leu Lys Ile His Ala Pro Asn Leu Leu Phe Phe Asp

210 215 220

Val Gly Gly Val Phe Glu Asp Ile Asn Phe Met Asn Thr Phe Asn Leu

225 230 235 240

Ala Ile Val Ser Leu Gly Tyr Met

245

<210> 14

<211> 431

<212> PRT

<213> 番茄

<220>

<223> Solyc04g079810_SNP_蛋白

<400> 14

Met Ser Val Met Lys Gln His Ile Pro Ser Asn Phe Leu Cys Asn Ala

1 5 10 15

Glu Leu Glu Val Asp Asp Ile Ser Asn Leu Pro Ala Gln Ile Val Asp

20 25 30

Lys Ile Leu Ser His Leu Ser Leu Arg Asp Ala Val Arg Thr Ser Val

35 40 45

Leu Ser Ser Lys Trp Arg Asn Lys Trp Val Thr Leu Pro Asn Leu Val

50 55 60

Phe Asp Asn Gln Ser Leu Leu Ile Ser Ser Gln Asp Gln Thr Phe Ile

65 70 75 80

Lys Asn Lys Ile Val Asn Ile Val Asp His Val Leu Leu Leu His Ser

85 90 95

Gly Pro Ile His Lys Phe Lys Leu Ser His Arg Asp Leu Gln Gly Val

100 105 110

Cys Asp Ile Asp Arg Trp Ile Leu Phe Leu Ser Arg Gly Ala Val Lys

115 120 125

Glu Phe Ile Leu Glu Ile Trp Lys Gly His Arg Tyr Lys Leu His Ser

130 135 140

Ser Ile Tyr Leu Cys Gln Lys Leu Asn His Leu Glu Leu Phe Asn Cys

145 150 155 160

Leu Leu Lys Pro Pro His Thr Phe Asn Gly Phe Lys Ser Leu Lys Ser

165 170 175

Leu Asp Leu Gln His Ile Thr Met Glu Gln Asp Ala Phe Glu Gln Leu

180 185 190

Val Ser Arg Cys His Leu Leu Glu Arg Leu Thr Leu Met Asn Phe Glu

195 200 205

Gly Phe Ser Asp Leu Lys Ile His Ala Pro Asn Leu Leu Phe Phe Asp

210 215 220

Val Gly Gly Val Phe Glu Asp Ile Asn Phe Met Asn Thr Phe Asn Leu

225 230 235 240

Ala Ile Val Ser Ile Gly Leu Tyr Val Asn Pro Gly Phe Asp Lys Asn

245 250 255

Leu Thr Leu Gly Ser Ala Gly Asn Leu Val Lys Phe Phe Ala His Leu

260 265 270

Pro Arg Leu Gln Arg Leu Glu Val Gln Ser Phe Phe Leu Lys Tyr Leu

275 280 285

Ala Asp Asn Lys Val Pro Gly Arg Leu Pro Thr Pro Cys Asp Glu Leu

290 295 300

Ser Phe Leu Ser Met Arg Ile Asn Phe Asn His Leu Asp Glu Cys Leu

305 310 315 320

Ala Ala Leu Cys Leu Leu Arg Ser Ser Pro Asn Leu Gln Glu Leu Glu

325 330 335

Met Leu Ala Arg Thr Glu Glu Gln Ser Thr Leu Arg Thr Val Ala Ser

340 345 350

Val Met Lys Glu Asp Tyr Gln Asn Cys Met Phe Asn Gln Leu Arg His

355 360 365

Val Lys Ile Ala Gly Ile Thr Gly Leu Lys Gln Glu Leu Asn Phe Val

370 375 380

Asn Phe Leu Leu Ser Asn Ser Pro Val Leu Glu Arg Met Thr Val Lys

385 390 395 400

Pro Ala Ser Val Asp Gly Ala Trp Glu Met Leu Lys Glu Leu Leu Arg

405 410 415

Phe Arg Arg Ala Ser Val Gln Ala Glu Ile Val Tyr Val Asp Pro

420 425 430

Claims

1.经修饰的FBXL13基因，其在SEQ ID No.1-4的野生型FBXL13核苷酸序列中包含修饰，所述修饰导致SEQ ID No.5-8的野生型FBXL13氨基酸序列中的变化，其中所述经修饰的FBXL13基因当存在于属于茄科(Solanaceae)的植物的基因组中时向所述植物赋予对于属于灼烧病毒属(Torradovirus)的病毒的抗性。

2.在权利要求1中所要求保护的经修饰的FBXL13基因，其中所述核苷酸序列的修饰为导致FBXL13蛋白的氨基酸序列中的变化的SNP或插入/缺失。

3.在权利要求1或2中所要求保护的经修饰的FBXL13基因，其中SEQ ID No.1-4的核苷酸序列的修饰导致提前的终止密码子。

4.在权利要求1或2中所要求保护的经修饰的FBXL13基因，其中SEQ ID No.1-4的核苷酸序列的修饰导致SEQ ID No.5-8的氨基酸序列中的置换。

5.在权利要求1-3中任一项之中所要求保护的经修饰的FBXL13基因，其中所述核苷酸序列的修饰为在SEQ ID No.1的番茄(Solanum lycopersicum)核苷酸序列的位置732处的核苷酸的缺失，或者对于番茄以外的其他作物，在相应于SEQ ID No.1的番茄核苷酸序列的位置732的位置处的核苷酸的缺失，其导致SEQ ID No.5的番茄氨基酸序列的截短形式，或者对于番茄以外的其他作物，在相应于SEQ ID No.5的番茄氨基酸序列的位置244的位置处。

6.在权利要求5中所要求保护的经修饰的番茄FBXL13基因，其中所述核苷酸序列由SEQID No.9描述，其导致SEQ ID No.12的氨基酸序列。

7.在权利要求5中所要求保护的经修饰的番茄FBXL13基因，其中所述核苷酸序列进一步包含在SEQ ID No.1的番茄核苷酸序列的位置731处的SNP，或者对于番茄以外的其他作物，在相应于SEQ ID No.1的番茄核苷酸序列的位置731的位置处的SNP，其导致在SEQ IDNo.5的番茄氨基酸序列的位置244处的氨基酸置换，或者对于番茄以外的其他作物，在相应于SEQ ID No.5的番茄氨基酸序列的位置244的位置处的氨基酸置换。

8.在权利要求7中所要求保护的经修饰的番茄FBXL13基因，其中所述核苷酸序列由SEQID No.10描述，其导致SEQ ID No.13的氨基酸序列。

9.属于茄科的植物，其包含在权利要求1-8中任一项之中所要求保护的经修饰的FBXL13基因。

10.在权利要求9中所要求保护的植物，其中所述经修饰的FBXL13基因导致相比于不包含所述FBXL13基因的修饰的相同物种的等基因植物而言显示出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的植物。

11.在权利要求9或10中所要求保护的植物，其中所述植物属于从由下列各项组成的组中选择的物种：茄子(Solanum melongena)、番茄、马铃薯(Solanum tuberosum)和辣椒(Capsicum annuum)。

12.在权利要求9至11中任一项之中所要求保护的植物的种子，其包含经修饰的FBXL13基因。

13.能够发育成在权利要求9至11中任一项之中所要求保护的植物的种子，其包含经修饰的FBXL13基因。

14.能够发育成和/或源自在权利要求9至11中任一项之中所要求保护的植物的繁殖材料，其中所述繁殖材料包含在权利要求1至8中任一项之中所要求保护的经修饰的FBXL13基因，并且其中所述繁殖材料选自小孢子、花粉、子房、胚珠、胚、胚囊、卵细胞、插条、根、下胚轴、子叶、茎、叶、花、花药、种子、分生细胞、原生质体或细胞或者其组织培养物。

15.用于鉴定显示出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的属于茄科的植物的标志物，其包含在权利要求1-8中任一项之中所要求保护的经修饰的FBXL13基因或者含有所述修饰的其部分。

16.在权利要求15中所要求保护的标志物，其中所述修饰为在番茄的在SEQ ID No.1的位置732处或之前的缺失，或者在番茄以外的其他作物的情况下，在相应于番茄的SEQ IDNo.1的位置732的位置处或周围或之前的缺失，所述修饰导致FBXL13蛋白中的提前的终止密码子。

17.在权利要求1-8中任一项之中所要求保护的经修饰的FBXL13基因的用途，所述用途为用于开发相比于不包含所述经修饰的FBXL13基因的属于茄科的等基因植物而言显示出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的属于茄科的植物。

18.在权利要求1-8中任一项之中所要求保护的经修饰的FBXL13基因或其部分的用途，所述用途为用于鉴定相比于不包含所述经修饰的FBXL13基因的属于茄科的等基因植物而言显示出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的属于茄科的植物。

19.SEQ ID No.9至14的序列中的一个或多个或其部分或者由其衍生的标志物的用途，所述用途为作为标志物以用于鉴定相比于不包含所述经修饰的FBXL13基因的属于茄科的等基因植物而言显示出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的属于茄科的植物。

20.在权利要求17至19中任一项之中所要求保护的用途，其中所述植物属于从由下列各项组成的组中选择的物种：茄子、番茄、马铃薯和辣椒。

21.用于产生展现出对于属于灼烧病毒属的病毒的抗性的植物的方法，其包括通过修饰内源性FBXL13基因以成为非功能性FBXL13基因来降低所述植物中FBXL13蛋白的内源水平。

22.权利要求21的方法，其中所述修饰通过种子的诱变处理来施行，所述种子的诱变处理特别是通过化学或物理手段。

23.权利要求21的方法，其中所述修饰通过CRISPR来施行。

24.权利要求21的方法，其中降低所述植物中FBXL13蛋白的内源水平通过经由基因沉默或RNAi降低所述植物的FBXL13基因的表达来完成。

25.在权利要求21至24中任一项之中所要求保护的方法，其中所述野生型FBXL13基因具有根据SEQ ID No.1-4的核苷酸序列。

26.通过在权利要求21至25中任一项之中所描述的方法而产生的植物。