CN114774532A - 一种口腔正畸时辰施力生物标志物及其应用 - Google Patents
一种口腔正畸时辰施力生物标志物及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114774532A CN114774532A CN202210388407.0A CN202210388407A CN114774532A CN 114774532 A CN114774532 A CN 114774532A CN 202210388407 A CN202210388407 A CN 202210388407A CN 114774532 A CN114774532 A CN 114774532A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- orthodontic
- biomarker
- application
- force application
- time
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 title claims abstract description 17
- 230000003239 periodontal effect Effects 0.000 claims description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 239000003596 drug target Substances 0.000 claims description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000002057 chronotropic effect Effects 0.000 claims 2
- 108700013048 CCL2 Proteins 0.000 claims 1
- 102000000018 Chemokine CCL2 Human genes 0.000 claims 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 18
- 230000008859 change Effects 0.000 abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 12
- 239000003550 marker Substances 0.000 abstract description 7
- 230000027288 circadian rhythm Effects 0.000 abstract description 5
- 238000012937 correction Methods 0.000 abstract description 4
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002411 adverse Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 39
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 29
- 101150052909 CCL2 gene Proteins 0.000 description 28
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 15
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 210000002379 periodontal ligament Anatomy 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 8
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 6
- 238000010603 microCT Methods 0.000 description 6
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 4
- 210000001847 jaw Anatomy 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 4
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003559 RNA-seq method Methods 0.000 description 3
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 3
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 3
- 230000002060 circadian Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 2
- 206010061274 Malocclusion Diseases 0.000 description 2
- HZEWFHLRYVTOIW-UHFFFAOYSA-N [Ti].[Ni] Chemical compound [Ti].[Ni] HZEWFHLRYVTOIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 210000002050 maxilla Anatomy 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229910001000 nickel titanium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 2
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 2
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 206010021033 Hypomenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M Pentobarbital sodium Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)[N-]C1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000005482 chemotactic factor Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 210000004283 incisor Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 210000004373 mandible Anatomy 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 229960002275 pentobarbital sodium Drugs 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000009323 psychological health Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Dental Tools And Instruments Or Auxiliary Dental Instruments (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明提供了一种口腔正畸时辰施力生物标志物及其应用，属于生物与医药技术领域。本发明根据颅颌面组织生理活动存在昼夜节律变化规律提出了一种全新的口腔正畸时辰治疗方法，筛选出临床上能够指示正畸患者个性化最佳施力时间的标志物Ccl2，在不同患者该标志物表达高峰值的时间点施加正畸力，帮助口腔医生更科学、合理地安排患者的正畸施力计划，以缩短正畸疗程，减轻伴发的不良并发症，辅助构建一种高效、健康的新型矫治模式，从而实现个性化精准治疗，引领口腔正畸学的技术革新。
Description
技术领域
本发明属于生物与医药技术领域，尤其涉及一种口腔正畸时辰施力生物标志物及其应用。
背景技术
近年来，我国口腔错颌畸形的发病率逐年上升，严重影响着患者的口颌功能和身心健康。随着医疗技术的发展和患者需求的提高，我国正畸市场高速增长，2020年我国正畸病例达到310万例，正畸市场规模达到79亿美元。然而，目前的正畸治疗方案仍存在很多不足，如矫治疗程较长、牙齿移动速率较慢，易伴发牙根吸收、牙齿松动等问题，常常造成患者的不适和困扰。
市面上现有的正畸加速方法多采用各类正畸加速器装置，但由于使用过程中异物感明显、佩戴方法复杂等，常常出现患者依从性较低，牙齿移动加速效果不明显等问题，故而尚未得到有效推广应用。因此，优化牙颌面畸形矫治施力策略、实现错颌畸形的健康高效矫治是促进口腔正畸技术再次质变的关键，是口腔正畸学领域亟待解决的难点和热点问题。
颅颌面组织的生理活动呈现出昼夜节律变化规律，研究报道，在模式大鼠实验中，光照期和黑暗期施力对骨改建的影响不同。时辰治疗的策略虽已在外科手术、内科给药等方面有所应用，但较少应用于口腔正畸领域。
生物标志物(Biomarker)是一种可衡量生理活动发展的指标，目前在疾病早期诊断、疾病预防等领域使用较多，但暂未有生物标志物应用在口腔正畸施力领域的相关研究和报道。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种口腔正畸时辰施力生物标志物及其应用。由于颅颌面组织生理活动呈现出昼夜节律变化规律，本发明提出了一种全新的口腔正畸时辰治疗策略，筛选出临床上能够指示正畸患者最佳施力时间的标志物——Ccl2，根据不同患者Ccl2表达的变化规律，确定不同患者的个性化最适施力时间，在该标志物表达高峰值所在的时间点施加正畸力，从而加速正畸牙移动，缩短正畸疗程，并减轻不良并发症，实现口腔正畸个性化精准治疗。本发明能够帮助医生更科学、合理地安排患者的正畸加力计划，构建了一种高效、健康的新型矫治模式，引领口腔正畸学的技术革新。
为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：
本发明提供了一种口腔正畸时辰施力生物标志物，所述生物标志物为炎症趋化因子Ccl2。
本发明还提供了一种用于确定口腔正畸最佳施力时间的试剂盒，所述试剂盒包括检测Ccl2表达量的试剂。
本发明还提供了一种所述口腔正畸时辰施力生物标志物在制备口腔正畸试剂盒中的应用。
本发明还提供了一种所述口腔正畸时辰施力生物标志物基因在制备口腔正畸试剂盒中的应用。
本发明还提供了一种所述口腔正畸时辰施力生物标志物基因在作为口腔正畸试剂盒药物靶标中的应用。
所述Ccl2基因序列的GenBank编号为Gene ID:6347。
优选的，具体应用步骤如下：步骤1)按时间点收集患者牙周脱落细胞并提取RNA；步骤2)检测多时间点Ccl2表达量；步骤3)确定不同患者Ccl2表达峰值所在的时间点，在Ccl2表达峰值的时间点施加正畸力。
与现有技术相比，本发明具有如下技术效果：
本发明首次提出了使用Ccl2作为标志物在口腔正畸领域的新应用。通过在牙周膜组织Ccl2表达峰值的时间点施加正畸力，指导正畸矫治工作，加速颌骨改建及正畸牙移动，缩短正畸疗程。同时根据不同患者Ccl2表达变化趋势，确定个性化正畸最适施力时间，从而成功构建了一种便捷高效、安全新型的正畸矫治新模式，实现了个性化精准治疗。
附图说明
图1是实施例2中大鼠牙周膜组织通过余弦分析得出的具有昼夜节律表达模式的基因的热图；
图2是实施例2中正常光照环境下大鼠牙周膜组织Ccl2的昼夜节律震荡图以及RNA-seq与qRT-PCR分析得出的大鼠牙周膜组织中Ccl2 mRNA水平变化；
图3是实施例3中不同时间点施加正畸力后大鼠牙周膜组织中Ccl2的表达变化情况；
图4是实施例3中正常光照环境下，不同时间点施力后大鼠上颌第一磨牙Micro-CT图像；
图5是实施例3中大鼠上颌第一磨牙移动距离分析(使用Kruskal-Wallis检验分析数据)及相关性分析；
图6是两种不同光照环境下大鼠牙周膜组织Ccl2表达变化情况及对应时间点施力后大鼠上颌第一磨牙Micro-CT图像。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和本质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。以下实施例中使用的试剂、试剂盒和仪器均可由市售获得，实施例中使用的方法如无特别说明，与常规使用的方法一致。
下面结合实施例，对本发明的技术方案进行进一步详细阐述。
实施例1 牙周膜组织的收集和RNA的提取
大鼠牙周膜组织的收集
(1)构建正常光照环境的大鼠模型，收集牙周膜组织标本：将6～8周雄性SD大鼠在12小时光照/12小时黑暗的光照循环环境中饲养两周以适应环境；以每天的开灯时间为ZT0，分别在ZT0、ZT3、ZT6、ZT9、ZT12、ZT15、ZT18、ZT21、ZT24共9个时间点处死大鼠，收取新鲜的大鼠上下颌骨后立即浸泡在组织RNA保存液中保存；
(2)拔牙：将步骤(1)中收集到的大鼠上下颌骨标本用眼科剪去除牙龈组织，使用7号手术刀片将大鼠的磨牙从牙槽骨中挺出，浸泡于新的RNA保存液中；
(3)刮取牙周膜组织：将培养皿置于冰上，用移液枪其中滴加适量RNA保存液，取出步骤(2)中拔下来的大鼠磨牙浸泡其中，左手持显微镊将牙齿固定，右手用手术刀片将大鼠的牙周膜组织刮下，用移液枪将带有牙周膜组织碎屑的RNA保存液收集放入新的1.5mL的EP管中，放回-80℃冰箱中保存待用。
提取牙周膜组织的RNA
(1)裂解组织：将提取的牙周膜组织样品从-80℃冰箱中取出，置于冰上解冻，待RNA保存液融化后，将EP管放入4℃低温离心机中，以1000rpm的转速离心5分钟，离心完成后去上清留取组织沉淀，向每个装有组织沉淀的EP管中加入1mL的RNAisolater裂解液，放入全自动组织研磨机中，待组织被充分研磨碎裂后，将EP管取出放在冰上静置15分钟；
(2)将200μL氯仿添加到装有组织碎屑的EP管中，盖紧管盖后剧烈震荡EP管30秒，将EP管放在冰上静置10分钟；
(3)将EP管放入低温离心机中，调温度为4℃，以12000rpm的转速离心15分钟；
(4)离心结束后，吸取上清400μL(注意不要吸入下方的杂质)，移入准备好的新的1.5mL EP管中；
(5)向EP管中加入与吸取的上清液等体积(400μL)的异丙醇，轻轻上下颠倒EP管使液体充分混匀后，置于冰上静置10分钟；
(6)将EP管放入低温离心机中，调温度为4℃，以12000rpm的转速离心10分钟；
(7)离心结束后，弃上清取沉淀(注意不要把沉淀倒掉)，加入1mL 75％的乙醇溶液(按照无水乙醇：ddH2O＝3：1的比例配制)后，将EP管放入4℃低温离心机中继续离心，转速7500rpm，离心时间5分钟；
(8)弃上清取沉淀，向EP管中加入1mL无水乙醇后，继续放入4℃低温离心机中离心，转速7500rpm，离心时间5分钟；
(9)弃上清取沉淀，将EP管盖打开后，在室温环境下放置RNA沉淀5～10分钟以待液体挥发，干燥完成后，加入20μL的DEPC水使样品充分溶解。
RNA-seq
将从收集到的多时间点大鼠牙周膜组织中提取得到的RNA样品委托北京诺禾致源科技股份有限公司进行转录组测序及分析。
RNA浓度测定及逆转录反应
(1)使用NanoDrop ND-1000分光光度计对提取的样品RNA的浓度及纯度进行测定：检测前需用DEPC水清洗探头3次，每次1μL。在仪器配套的软件中选择RNA浓度检测模式，取1uL的DEPC水作为空白组进行校准后，分别取1uL的样品RNA溶液进行测定。检测完成后需再用DEPC水清洗探头3次，每次1μL；
(2)按照HiScript II Q Select RT SuperMix for qPCR逆转录试剂盒的说明书中所描述的方法，将提取得到的RNA样品进行逆转录，以得到更为稳定的cDNA样品：
1)去除基因组DNA：在200μL的EP管中加入4μL的“4×gDNAwiper Mix”试剂，同时根据检测出的RNA样品浓度在100～1000ng范围内选择适当的RNA模板量并计算出相应RNA量所需的体积加入EP管中，并补充“RNase-free ddH2O”至16μL。离心机将液体甩至EP管底部并混匀后，放入设置反应温度为42℃、反应时间为2分钟的PCR仪中进行反应；
2)将RNA样品进行逆转录：去除基因组DNA反应结束后，在原来的EP管中继续加入4μL的“5×qRT SuperMix II”试剂，离心机将液体甩至EP管底部并混匀后，将反应程序设置为“37℃——15分钟，85℃——5秒”后进行逆转录反应。待反应完成后，将逆转录得到的cDNA样品置于-20℃冰箱中长期保存。
实施例2 检测Ccl2的表达
qRT-PCR检测
(1)根据说明书，以实施例1中逆转录反应得到的cDNA样品为模板，使用ChamQSYBR qPCRMasterMix试剂盒进行qRT-PCR反应。扩增反应体系如表1所示：
表1 qRT-PCR反应体系
(2)根据目的基因和样品数量配制试剂并在96孔板中点样后，将PlatemaxCyclerSeal Sealing膜粘贴于96孔板表面以防止反应时试剂蒸发。离心30秒将试剂甩至96孔板底部。
(3)将96孔板放入ABI 7300实时PCR系统中，按照如表2所示的扩增反应程序进行实时荧光定量PCR反应。
表2 qRT-PCR反应程序
(4)待反应结束后，采用2-△△Ct法，以GAPDH作为内参基因，利用StepOne Software软件对结果进行分析，对样品基因的mRNA水平进行量化。
(5)通过余弦分析大鼠牙周膜组织RNA，得出的具有昼夜节律表达模式的基因热图，结果如图1所示。采用RNA-seq与qRT-PCR分析正常光照环境下ZT0、ZT3、ZT6、ZT9、ZT12、ZT15、ZT18、ZT21、ZT24大鼠牙周膜组织中Ccl2的mRNA水平，结果如图2所示。
由图1～图2可知：Ccl2在牙周组织中的表达具有昼夜节律性。
实施例3 大鼠实验效果
构建大鼠正畸牙齿移动模型
(1)按照40mg/kg的剂量给大鼠腹腔注射戊巴比妥钠，麻醉动物；
(2)在上颌的第一磨牙和第二磨牙之间穿过同样直径的结扎丝，在第一磨牙近中侧连接上一个镍钛螺旋弹簧，弹簧的另一头也同样连接上结扎丝；
(3)在正畸加力开始前，我们使用测力计来确定50g力大小下弹簧的拉伸长度，并用高速涡轮手机在同侧的中切牙颈部磨出倒凹用以固定结扎丝，连接于镍钛拉簧另一端。
Micro-CT分析检测正畸牙齿移动距离
收集大鼠上颌骨，去除附着于骨组织上的软组织，4％多聚甲醛溶液固定72h后，更换为无水乙醇浸泡标本。使用Micro-CT(SkyScan 1176,Bruker)进行分辨率为9μm的扫描，并利用InstaRecon/NRecon ResearchWorkplace软件来重建断层扫描图像并进行量化。
实验效果验证
(1)在不同时间点施加正畸力后，采用实施例2所述的检测方法检测大鼠牙周膜组织中Ccl2的表达变化情况，结果如图3所示。
由图3可知：施加正畸力后，大鼠牙周膜组织中Ccl2的表达变化规律较为明显，所以初筛为正畸加力时辰的检测指标。
(2)进一步的，时辰加力组在Ccl2表达峰值、谷值所在的时间点分别施加正畸力，对照组，即传统加力组(非时辰加力)，选取避开峰、谷值所在的几个时间点施力，观察大鼠上颌第一磨牙近中移动效果，测量大鼠第一磨牙近中移动距离，并使用Kruskal-Wallis检验分析数据。其中大鼠上颌第一磨牙Micro-CT图像及分析如图4～图5所示。
由图4～图5可知：与对照组和Ccl2谷值时间点施力组相比，在Ccl2表达峰值所在的时间点施加正畸力，大鼠上颌第一磨牙近中移动效果更为显著。且Ccl2的表达与近中移动距离具有相关性。
(3)构建两种非正常光照循环环境，A组于上午6时～下午6时为光照环境，下午6时～次日上午6时为黑暗环境，B组上午9时～下午9时为光照环境，上午9时～下午9时为黑暗环境，光照时间模式如图6-A、图6-D所示。采用实施例2所述的检测方法检测大鼠牙周膜组织中Ccl2的表达变化情况结果如图6-B、图6-E所示。同时根据不同节律模式下大鼠牙周膜组织Ccl2表达的昼夜变化规律，实验组，即时辰加力组分别在各组Ccl2表达峰值、谷值所在的时间点分别施加正畸力，对照组，即传统加力组(非时辰加力)，避开峰、谷值所在时间点施力，观察大鼠上颌第一磨牙近中移动效果，结果如图6-C、图6-F(大鼠上颌第一磨牙Micro-CT图像)所示。
由图6可知：在不同光照模式下，Ccl2的表达仍具有一定的节律变化规律。而且两组节律模式大鼠在各组Ccl2表达峰值所在的时间点施加正畸力后，大鼠上颌第一磨牙近中移动效果更为显著。以上结果说明，通过Ccl2的表达确定最佳施力时辰的方法可应用于不同节律模式大鼠模型，于个性化最佳施力时间点施力可更好地促进正畸牙移动的效果。
综上可知，根据颅颌面组织生理活动呈现出昼夜节律变化规律，本发明提出了一种全新的口腔正畸治疗方法——时辰治疗策略，筛选出临床上能够指示正畸患者最佳施力时间的标志物Ccl2，通过在多时间点对该标志物进行定量检测，确定不同患者最佳施力时间。于该标志物表达高峰值的时间点施加正畸力，可缩短了口腔正畸疗程，减轻了不良并发症。本发明可帮助医生更科学、合理地安排患者的正畸施力计划，辅助构建了一种高效、健康的新型矫治模式，从而实现了口腔正畸个性化精准治疗，引领口腔正畸学的技术革新。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (6)
1.一种口腔正畸时辰施力生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为炎症趋化因子Ccl2。
2.一种用于确定口腔正畸最佳施力时间的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测Ccl2表达量的试剂。
3.权利要求1所述的口腔正畸时辰施力生物标志物在制备口腔正畸试剂盒中的应用。
4.权利要求1所述的口腔正畸时辰施力生物标志物基因在制备口腔正畸试剂盒中的应用。
5.权利要求1所述的口腔正畸时辰施力生物标志物基因在作为口腔正畸试剂盒药物靶标中的应用。
6.根据权利要求3～5任一所述的应用，其特征在于，具体应用步骤如下：
步骤1)按时间点收集患者牙周脱落细胞并提取RNA；
步骤2)检测多时间点Ccl2表达量；
步骤3)确定不同患者Ccl2表达峰值所在的时间点，在Ccl2表达峰值的时间点施加正畸力。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210388407.0A CN114774532B (zh) | 2022-04-13 | 2022-04-13 | 一种口腔正畸时辰施力生物标志物及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210388407.0A CN114774532B (zh) | 2022-04-13 | 2022-04-13 | 一种口腔正畸时辰施力生物标志物及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114774532A true CN114774532A (zh) | 2022-07-22 |
| CN114774532B CN114774532B (zh) | 2024-06-14 |
Family
ID=82429556
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210388407.0A Active CN114774532B (zh) | 2022-04-13 | 2022-04-13 | 一种口腔正畸时辰施力生物标志物及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114774532B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070122795A1 (en) * | 2005-09-14 | 2007-05-31 | Tetsuya Shiraishi | Information processing apparatus, information processing method, information processing system, program, and recording medium |
| CN110029170A (zh) * | 2019-05-16 | 2019-07-19 | 复旦大学 | 一种肿瘤样本免疫检查点相关基因的mRNA检测引物组、试剂盒和方法 |
-
2022
- 2022-04-13 CN CN202210388407.0A patent/CN114774532B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070122795A1 (en) * | 2005-09-14 | 2007-05-31 | Tetsuya Shiraishi | Information processing apparatus, information processing method, information processing system, program, and recording medium |
| CN110029170A (zh) * | 2019-05-16 | 2019-07-19 | 复旦大学 | 一种肿瘤样本免疫检查点相关基因的mRNA检测引物组、试剂盒和方法 |
Non-Patent Citations (8)
| Title |
|---|
| JONAS CAPELLI JR ET, AL.: "Matrix metalloproteinases and chemokines in the gingival crevicular fluid during orthodontic tooth movement", EUR J ORTHOD ., vol. 33, no. 6, 31 December 2011 (2011-12-31) * |
| M ZENG ET, AL.: "Orthodontic Force Induces Systemic Inflammatory Monocyte Responses", J DENT RES ., vol. 94, no. 9, 30 November 2015 (2015-11-30) * |
| SILVANA RODRIGUES DE ALBUQUERQUE TADDEI ET, AL.: "Role of CCR2 in orthodontic tooth movement.", AM J ORTHOD DENTOFACIAL ORTHOP ., vol. 141, no. 2, 31 December 2012 (2012-12-31) * |
| 乔婷;陈杰;: "大鼠实验性牙移动中Integrin-αm的表达变化", 菏泽医学专科学校学报, no. 04, 15 December 2010 (2010-12-15) * |
| 李光辉，潘晓岗: "参与正畸牙移动的相关因子研究进展", 口腔医学, vol. 35, no. 6, 30 June 2015 (2015-06-30) * |
| 罗薇: "趋化因子CCL2/受体CCR2信号轴激活调控正畸牙移动疼痛的实验研究", 中华口腔医学杂志, vol. 49, no. 8, 9 August 2014 (2014-08-09) * |
| 邢洪波等: "CC趋化因子受体2缺失降低正畸牙齿运动中破骨细胞和成骨细胞活性的研究", 海军医学杂志, vol. 40, no. 4, 31 July 2019 (2019-07-31), pages 315 * |
| 陈昌晖;: "正畸微种植体植入早期牙周组织凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达及意义", 中国卫生检验杂志, no. 10, 25 May 2018 (2018-05-25) * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114774532B (zh) | 2024-06-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102711654B (zh) | 牙齿矫正的装置 | |
| Hashem et al. | Geometric analysis of root canals prepared by four rotary NiTi shaping systems | |
| PradeepKumar et al. | Root canal preparation does not induce dentinal microcracks in vivo | |
| Versiani et al. | Influence of shaft design on the shaping ability of 3 nickel-titanium rotary systems by means of spiral computerized tomography | |
| Kessler-Liechti et al. | Stability measurements of 1-stage implants in the edentulous mandible by means of resonance frequency analysis. | |
| RU2360604C1 (ru) | Способ диагностики аномалий зубочелюстной системы | |
| Tanalp | A critical analysis of research methods and experimental models to study apical extrusion of debris and irrigants | |
| Hu et al. | Comparison of technical, biological, and esthetic parameters of ceramic and metal-ceramic implant-supported fixed dental prostheses: A systematic review and meta-analysis | |
| Jing et al. | Prevalence of and risk factors for alveolar fenestration and dehiscence in the anterior teeth of Chinese patients with skeletal Class III malocclusion | |
| RU68273U1 (ru) | Заборник содержимого зубодесневой борозды или кармана для цитологического исследования | |
| Yoshino et al. | Risk Factors Affecting Third Molar Autotransplantation during 5 and 10 Years A Retrospective Clinical Survey | |
| CN114774532B (zh) | 一种口腔正畸时辰施力生物标志物及其应用 | |
| Nanavati et al. | Comparative evaluation of apically extruded debris during pulpectomy procedure in primary molar teeth using two different rotary systems and hand files: an in vitro study | |
| CN108929903A (zh) | 用于慢性牙周炎筛查、诊断、疗效评价的标志物及试剂盒 | |
| Yesenovna et al. | INFLAMMATORY COMPLICATIONS OF DENTAL IMPLANTATION IN THE LONG PERIOD | |
| Rosas-Díaz et al. | Repeatability and reproducibility of a modified Lekholm and Zarb bone quality classification based on cone beam computed tomography | |
| Howell | A study into the relationship between dental development and cervical vertebral maturation in UK subjects | |
| Kyllar et al. | Gingival thickness in dogs: Association with age, gender, and dental arch location | |
| RU2778203C1 (ru) | Способ оценки степени стираемости зубов | |
| Yengoyan et al. | Endodontic Surgery/Apicoectomy | |
| Consolaro et al. | The tooth has pulp vitality and has a periapical lesion: Criteria for diagnosis and treatment | |
| RU2564126C1 (ru) | Способ качественного определения адаптационной способности к мостовидным конструкциям ортопедических протезов по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента с новообразованиями челюстно-лицевой области | |
| Salgau et al. | A review of causes, diagnostics and effects of periimplantitis. | |
| Потапчук et al. | RETROSPECTIVE ANALYSIS OF THE DEGREE OF REDUCTION OF PERI-IMPLANT BONE TISSUE DURING IMMEDIATE AND DELAYED DENTAL IMPLANTATION PROTOCOLS | |
| RU2564128C1 (ru) | Способ качественного определения адаптационной способности к бюгельным конструкциям ортопедических протезов по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента с новообразованиями челюстно-лицевой области |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |