CN114766424B - 恒河猴成瘾模型的制备方法 - Google Patents
恒河猴成瘾模型的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114766424B CN114766424B CN202110100225.4A CN202110100225A CN114766424B CN 114766424 B CN114766424 B CN 114766424B CN 202110100225 A CN202110100225 A CN 202110100225A CN 114766424 B CN114766424 B CN 114766424B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- rhesus
- addiction
- addictive
- behavior
- rhesus monkeys
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 title claims abstract description 79
- 206010012335 Dependence Diseases 0.000 title claims abstract description 42
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000006399 behavior Effects 0.000 claims description 54
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 36
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 36
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 claims description 22
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 20
- UPXRTVAIJMUAQR-UHFFFAOYSA-N 4-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound C1C(C(O)=O)N(C(=O)OC(C)(C)C)CC1NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 UPXRTVAIJMUAQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229960004184 ketamine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 15
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 12
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 claims description 11
- 238000000465 moulding Methods 0.000 claims description 11
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000009227 behaviour therapy Methods 0.000 claims description 9
- 238000013459 approach Methods 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 210000003128 head Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 claims description 8
- 208000007271 Substance Withdrawal Syndrome Diseases 0.000 claims description 7
- 230000007704 transition Effects 0.000 claims description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 5
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims description 5
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims description 5
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 claims description 4
- 210000001217 buttock Anatomy 0.000 claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 4
- 210000004709 eyebrow Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 4
- 230000003068 static effect Effects 0.000 claims description 4
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 claims description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 3
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 16
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 abstract description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 206010013663 drug dependence Diseases 0.000 description 7
- 208000011117 substance-related disease Diseases 0.000 description 7
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 6
- 235000019788 craving Nutrition 0.000 description 5
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 241000218158 Clematis Species 0.000 description 2
- 241000208202 Linaceae Species 0.000 description 2
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- KKBZGZWPJGOGJF-OQKDUQJOSA-N 2-[4-[(z)-2-chloro-1,2-diphenylethenyl]phenoxy]-n,n-diethylethanamine;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC(OCCN(CC)CC)=CC=C1C(\C=1C=CC=CC=1)=C(/Cl)C1=CC=CC=C1 KKBZGZWPJGOGJF-OQKDUQJOSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N Heroin Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)OC(C)=O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4OC(C)=O GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 230000016571 aggressive behavior Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013528 artificial neural network Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- GKIRPKYJQBWNGO-OCEACIFDSA-N clomifene Chemical compound C1=CC(OCCN(CC)CC)=CC=C1C(\C=1C=CC=CC=1)=C(\Cl)C1=CC=CC=C1 GKIRPKYJQBWNGO-OCEACIFDSA-N 0.000 description 1
- 229960003608 clomifene Drugs 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 229960002069 diamorphine Drugs 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000008451 emotion Effects 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000001722 neurochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/02—Breeding vertebrates
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Infusion, Injection, And Reservoir Apparatuses (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
本发明提供了一种恒河猴成瘾模型的制备方法及验证成瘾程度的方法。本发明通过对比无处理对照组恒河猴与成瘾模型组恒河猴的行为区别，检验恒河猴成瘾程度，另外，本发明还发现氯胺酮致恒河猴成瘾与过度应激有关。
Description
技术领域
本发明涉及动物模型构建及评价领域，特别涉及一种恒河猴成瘾模型的制 备方法及验证成瘾程度的方法。
背景技术
毒品成瘾是当今世界的一个严重社会问题，危害极大。吸毒已经成为全世 界越来越严重的公共健康问题，据联合国麻醉品管制局2013年公布的数字，世 界上吸毒人员超过5000万人，每年有几十万瘾君子因吸毒丧命。氯胺酮具有一 定的致幻作用和成瘾性，被广泛滥用于各种娱乐场所。近几年来，非法滥用氯 胺酮的人数呈现快速增长趋势，这一问题已引起许多国家的普遍关注。盐酸氯 胺酮注射液作为兽用麻醉剂，管控相对宽松，因价格低廉而作为“平价海洛因”在青少年中蔓延。
毒品戒断会出现严重的戒断症状，这是一种慢性复发性脑疾病。戒毒是由 脱毒、防复吸和回归社会三个密切联系的环节构成。其中，脱毒和防复吸是评 估戒毒药物药效的关键。毒品成瘾涉及的神经网络较为复杂，其有效治疗也一 直是医学界的一个难题，因此建立药物成瘾的实验动物模型就显得尤为重要。
与其他实验室物种相比，非人类灵长类动物(NHP)的系统发育、解剖学、 生理学、神经化学和行为与人类更为相似。目前，从临床到实验室转化的成瘾 模型主要选择的是啮齿类动物，虽然啮齿类动物成瘾模型为机制研究做出了重 大贡献，但与小鼠相比，恒河猴更适合研究药物成瘾，该模型可与人类共享复 杂的情感功能、遗传，神经和表型基础。然而，针对灵长类动物毒品戒断的评 价标准尚未形成共识，本发明根据反复注射氯胺酮导致的恒河猴行为改变提出 非人灵长类动物成瘾模型的构建及验证成瘾程度的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种恒河猴成瘾模型的制备方法及验证成瘾程度的 方法。
根据本发明的一个方面，本发明提供一种恒河猴成瘾模型的制备方法，其 特征在于，包括如下步骤：
(a)急性造模阶段给药期：连续14日，每日两次，每次按5-10mg/kg(优选 约8mg/kg)体重的恒定剂量，给恒河猴肌肉注射盐酸氯胺酮注射液；
(b)急性造模阶段过渡期：随后1日，上午按步骤(a)的剂量，给恒河猴 肌肉注射盐酸氯胺酮注射液，下午给恒河猴肌肉注射等体积的生理盐水；
(c)急性造模阶段强制戒断期：随后3日，每日两次，每次给恒河猴肌肉 注射等体积的生理盐水；
(d)巩固模型阶段给药期：随后5日，每日两次，每次按步骤(a)的剂量， 给恒河猴肌肉注射盐酸氯胺酮注射液；
(e)巩固模型阶段过渡期：随后1日，上午按步骤(a)的剂量，给恒河猴 肌肉注射盐酸氯胺酮注射液，下午给恒河猴肌肉注射等体积的生理盐水；
(f)巩固模型阶段强制戒断期：随后5日，每日两次，每次给恒河猴肌肉注 射等体积的生理盐水，造模结束。
根据本发明，恒河猴为成年恒河猴。优选地，恒河猴居住在侧面有挡板、 后部可通过拉杆推拉的单笼中。恒河猴无法彼此观察，只能通过声音交流。优 选地，操作员与恒河猴互相适应一段时间，比如30天。
根据本发明，优选地，设置无处理对照组，将恒河猴随机分为无处理对照 组和成瘾模型组。
优选地，本发明的制备方法进一步包括检验恒河猴成瘾程度的步骤：造模 后的第0天、1天、第7天、第14天对恒河猴进行6-10次/天行为测试用于计算当 天的成瘾行为分数：操作员手持带针头保护套的注射器展示5秒，触碰但不拉动 拉杆，如果恒河猴配合，则用带针头保护套的注射器按压进行假注射；比较无 处理对照组和成瘾模型组恒河猴的行为差异来判断成瘾模型组恒河猴是否存在 索药、易激惹、攻击、规避危险的成瘾行为；记录成瘾行为出现次数，用索药和规避危险行为持续时间对成瘾行为出现次数占测试总次数的百分数进行修正 后得行为测试评分，其中，索药行为持续时间每增加1秒评分增加1分，规避危险行为持续时间每增加2秒评分减少1分；行为测试评分小于25分为不成瘾，25 分至50分为轻度成瘾，50分至75分为中度成瘾，高于75分为重度成瘾。
根据本发明，与无处理对照组恒河猴相比，成瘾模型组恒河猴的索药表现 为下述任意一项或多项行为：
见到操作员手持注射器触摸拉杆后主动展示臀部静止不动；
见到操作员手持注射器触摸拉杆后立即靠近，侧身站立贴近笼子前端；
见到注射器并在操作员触摸拉杆后立即靠近，侧身趴下贴近笼子前端。
根据本发明，与无处理对照组恒河猴相比，成瘾模型组恒河猴的易激惹表 现为下述任意一项或多项行为：
接受假注射后上下窜跳跺脚；
接受假注射后呲牙、皱眉，摇笼制造声响；
接受假注射后将前肢伸出笼抓取注射器。
根据本发明，与无处理对照组恒河猴相比，成瘾模型组恒河猴的攻击表现 为下述行为：
接受假注射后将前肢伸出笼攻击操作员。
根据本发明，与无处理对照组恒河猴相比，成瘾模型组恒河猴的规避危险 表现为下述任意一项或多项行为：
扭头向侧面刻意避免直接面对注射器的行为减少；
低头直接避免直视注射器的行为减少；
躲到笼子后部远离注射器的行为减少；
见到注射器身体后倾、倒退的行为减少。
优选地，本发明的制备方法进一步包括验证恒河猴成瘾程度与皮质醇过量 释放导致的过度应激之间存在相关性的步骤：在造模后的第0、1、7天测定无处 理对照组和成瘾模型组恒河猴血浆中皮质醇含量，并进行统计分析。
本发明的有益效果是：本发明通过对亚麻醉剂量氯胺酮肌肉注射给药恒河 猴所产生的成瘾症状进行了系统观察，并用恒河猴建立成瘾模型的可行性进行 了研究，结果显示肌肉注射亚麻醉剂量氯胺酮一段时间后可诱导恒河猴产生成 瘾症状，建立了稳定的非人灵长类成瘾动物模型。并且本发明通过分析得出氯 胺酮致恒河猴成瘾与过度应激有关，为后续进行氯胺酮成瘾机制和毒品戒断研究提供基础。
附图说明
图1.无处理对照组恒河猴与氯胺酮成瘾组恒河猴第1次独立实验第0天的行 为测试评分
图2.无处理对照组恒河猴与氯胺酮成瘾组恒河猴第2次独立实验第0天的行 为测试评分
图3.无处理对照组恒河猴与氯胺酮成瘾组恒河猴第3次独立实验第0天的行 为测试评分
图4.无处理对照组恒河猴与氯胺酮成瘾组恒河猴三次独立实验第0、1、7、 14天的行为测试评分
图5.无处理对照组恒河猴与氯胺酮成瘾组恒河猴第1次独立实验第0天血浆 中皮质醇浓度
图6.无处理对照组恒河猴与氯胺酮成瘾组恒河猴第2次独立实验第0天血浆 中皮质醇浓度
图7.无处理对照组恒河猴与氯胺酮成瘾组恒河猴第3次独立实验第0天血浆 中皮质醇浓度
图8.无处理对照组恒河猴与氯胺酮成瘾组恒河猴三次独立实验第0、1、7 天血浆中皮质醇浓度
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说 明本发明而不用于限制本发明的范围。此外，应理解，在阅读了本发明所记载 的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式 同样落于本发明所限定的范围。
实施例1
1.实验动物
健康雄性恒河猴4只，体重9.5-15千克，清洁级。实验动物从家庭笼中移入 宽敞的洁净级动物房中单笼饲养30天，室温为30℃，相对湿度为70％，单笼尺 寸为60厘米×70厘米×100厘米，笼子侧面安装无窗口的不锈钢隔板，同侧 相邻笼无法互相观察，可通过笼子顶部互相接触；对侧笼中视野无障碍，不可 互相接触。室内光线主要是自然日光和影像记录时短时间的白炽灯灯光。4只恒 河猴一日三餐吃普通猴子专用饲料，下午加餐应季水果。笼内自由饮水。
2.毒品成瘾的动物模型的建立
4只恒河猴随机分为两组，无处理对照组1只，氯胺酮成瘾组3只，进行3次 独立重复实验。无处理对照组恒河猴正常饲养，不进行肌肉注射盐酸氯胺酮注 射液处理，氯胺酮成瘾组(成瘾模型组)恒河猴除正常饲养外，肌肉注射盐酸 氯胺酮注射液，包括如下步骤：
(a)急性造模阶段给药期：连续14日，每日两次，每次按8mg/kg体重的恒 定剂量，给恒河猴肌肉注射盐酸氯胺酮注射液；
(b)急性造模阶段过渡期：随后1日，上午按步骤(a)的剂量，给恒河猴 肌肉注射盐酸氯胺酮注射液，下午给恒河猴肌肉注射等体积的生理盐水；
(c)急性造模阶段强制戒断期：随后3日，每日两次，每次给恒河猴肌肉 注射等体积的生理盐水；
(d)巩固模型阶段给药期：随后5日，每日两次，每次按步骤(a)的剂量， 给恒河猴肌肉注射盐酸氯胺酮注射液；
(e)巩固模型阶段过渡期：随后1日，上午按步骤(a)的剂量，给恒河猴 肌肉注射盐酸氯胺酮注射液，下午给恒河猴肌肉注射等体积的生理盐水；
(f)巩固模型阶段强制戒断期：随后5日，每日两次，每次给恒河猴肌肉注 射等体积的生理盐水。
3.检验恒河猴成瘾程度
在造模后第0天、第1天、第7天、第14天分别对无处理对照组、成瘾模型组 恒河猴进行6次/天行为测试：操作员手持带针头保护套的注射器展示5秒，触碰 但不拉动拉杆，如果恒河猴配合，则用带针头保护套的注射器按压进行假注射。
比较无处理对照组和模型组恒河猴的行为差异来判断模型组恒河猴是否存 在索药、易激惹、攻击、规避危险的成瘾行为；记录成瘾行为出现次数，用索 药和规避危险行为持续时间对成瘾行为出现次数占测试总次数的百分数进行修 正后得行为测试评分，其中，索药行为持续时间每增加1秒评分增加1分，规避 危险行为持续时间每增加2秒评分减少1分；行为测试评分小于25分为不成瘾，25分至50分为轻度成瘾，50分至75分为中度成瘾，高于75分为重度成瘾。
与无处理对照组恒河猴相比，成瘾模型组恒河猴的索药表现为下述任意一 项或多项行为：
见到操作员手持注射器触摸拉杆后主动展示臀部静止不动；
见到操作员手持注射器触摸拉杆后立即靠近，侧身站立贴近笼子前端；
见到注射器并在操作员触摸拉杆后立即靠近，侧身趴下贴近笼子前端。
与无处理对照组恒河猴相比，成瘾模型组恒河猴的易激惹表现为下述任意 一项或多项行为：
接受假注射后上下窜跳跺脚；
接受假注射后呲牙、皱眉，摇笼制造声响；
接受假注射后将前肢伸出笼抓取注射器。
根据本发明，与无处理对照组恒河猴相比，成瘾模型组恒河猴的攻击表现 为下述行为：
接受假注射后将前肢伸出笼攻击操作员。
根据本发明，与无处理对照组恒河猴相比，成瘾模型组恒河猴的规避危险 表现为下述任意一项或多项行为：
扭头向侧面刻意避免直接面对注射器的行为减少；
低头直接避免直视注射器的行为减少；
躲到笼子后部远离注射器的行为减少；
见到注射器身体后倾、倒退的行为减少。
行为测试后结果发现，成瘾模型组恒河猴相比无处理对照组表现出更高频 率的索药行为，具体表现为以下一种或多种行为：见到操作员手持注射器触摸 拉杆后主动展示臀部静止不动；见到操作员手持注射器触摸拉杆后立即靠近， 侧身站立贴近笼子前端；见到注射器并在操作员触摸拉杆后立即靠近，侧身趴 下贴近笼子前端。相较于无处理对照组恒河猴，成瘾模型组恒河猴更易被激惹，表现为下述任意一项或多项行为：接受假注射后上下窜跳跺脚；接受假注射后 呲牙、皱眉，摇笼制造声响；接受假注射后将前肢伸出笼抓取注射器。相较于 无处理对照组恒河猴，成瘾模型组恒河猴更容出现攻击行为，表现为接受假注 射后将前肢伸出笼攻击操作员。相较于无处理对照组恒河猴，成瘾模型组恒河 猴的规避危险减少，表现为下述任意一项或多项行为：扭头向侧面刻意避免直 接面对注射器行为减少；低头直接避免直视注射器行为减少；躲到笼子后部远离注射器的行为减少；见到注射器身体后倾、倒退的行为减少。
行为测试评分检验恒河猴成瘾程度的结果表明，成瘾模型组恒河猴成瘾评 分(Mean±SEM，n＝3)第0天和第1天均为100.0±0.0，第7天为99.7±0.3，第14天为92.0±8.0，在造模后存在强烈的复吸渴望和易激惹情绪。无处理对照组 恒河猴的行为测试评分均低于25分，成瘾程度为不成瘾；毒品成瘾组恒河猴测 试评分均高于90分，成瘾程度为重度成瘾。差异显著(p＜0.001)。见图1-4。
实施例2
1.标本采集
造模后第0、1、7天上午8:00-9:00进行行为测试后使用舒泰50对各组恒河猴 进行麻醉(0.2ml/只)，然后采集静脉血，分离血浆于-80℃冷冻保存，用于生化 测试。
2.血浆中皮质醇含量测定
3.统计与分析
氯胺酮成瘾组皮质醇浓度(Mean±SEM，n＝3)在第0天为306.76±19.47 ng/ml，第1天为347.62±27.11ng/ml，第7天为316.31±8.78ng/ml。结果表 明，与无处理对照组恒河猴相比，成瘾模型组恒河猴血浆中皮质醇浓度显著升 高，且具有统计学差异(p＜0.05)。见图5-8。
Claims (12)
1.一种恒河猴成瘾模型的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)急性造模阶段给药期：连续14日，每日两次，每次按5-10mg/kg体重的恒定剂量，给恒河猴肌肉注射盐酸氯胺酮注射液；
(b)急性造模阶段过渡期：随后1日，上午按步骤(a)的剂量，给恒河猴肌肉注射盐酸氯胺酮注射液，下午给恒河猴肌肉注射等体积的生理盐水；
(c)急性造模阶段强制戒断期：随后3日，每日两次，每次给恒河猴肌肉注射等体积的生理盐水；
(d)巩固模型阶段给药期：随后5日，每日两次，每次按步骤(a)的剂量，给恒河猴肌肉注射盐酸氯胺酮注射液；
(e)巩固模型阶段过渡期：随后1日，上午按步骤(a)的剂量，给恒河猴肌肉注射盐酸氯胺酮注射液，下午给恒河猴肌肉注射等体积的生理盐水；
(f)巩固模型阶段强制戒断期：随后5日，每日两次，每次给恒河猴肌肉注射等体积的生理盐水，造模结束。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，每次按8mg/kg体重的恒定剂量，给恒河猴肌肉注射盐酸氯胺酮注射液。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，恒河猴为成年恒河猴。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，恒河猴无法彼此观察，只能通过声音交流。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，恒河猴居住在侧面有挡板、后部可通过拉杆推拉的单笼中。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，设置无处理对照组，将恒河猴随机分为无处理对照组和成瘾模型组。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，进一步包括检验恒河猴成瘾程度的步骤：造模后的第0天、1天、第7天、第14天对恒河猴进行6-10次/天行为测试用于计算当天的成瘾行为分数：操作员手持带针头保护套的注射器展示5秒，触碰但不拉动拉杆，如果恒河猴配合，则用带针头保护套的注射器按压进行假注射；比较无处理对照组和成瘾模型组恒河猴的行为差异来判断成瘾模型组恒河猴是否存在索药、易激惹、攻击、规避危险的成瘾行为；记录成瘾行为出现次数，用索药和规避危险行为持续时间对成瘾行为出现次数占测试总次数的百分数进行修正后得行为测试评分，其中，索药行为持续时间每增加1秒评分增加1分，规避危险行为持续时间每增加2秒评分减少1分；行为测试评分小于25分为不成瘾，25分至50分为轻度成瘾，50分至75分为中度成瘾，高于75分为重度成瘾。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，与无处理对照组恒河猴相比，成瘾模型组恒河猴的索药表现为下述任意一项或多项行为：
见到操作员手持注射器触摸拉杆后主动展示臀部静止不动；
见到操作员手持注射器触摸拉杆后立即靠近，侧身站立贴近笼子前端；
见到注射器并在操作员触摸拉杆后立即靠近，侧身趴下贴近笼子前端。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，与无处理对照组恒河猴相比，成瘾模型组恒河猴的易激惹表现为下述任意一项或多项行为：
接受假注射后上下窜跳跺脚；
接受假注射后呲牙、皱眉，摇笼制造声响；
接受假注射后将前肢伸出笼抓取注射器。
10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，与无处理对照组恒河猴相比，成瘾模型组恒河猴的攻击表现为下述行为：
接受假注射后将前肢伸出笼攻击操作员。
11.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，与无处理对照组恒河猴相比，成瘾模型组恒河猴的规避危险表现为下述任意一项或多项行为：
扭头向侧面刻意避免直接面对注射器的行为减少；
低头直接避免直视注射器的行为减少；
躲到笼子后部远离注射器的行为减少；
见到注射器身体后倾、倒退的行为减少。
12.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，进一步包括验证恒河猴成瘾程度与皮质醇过量释放导致的过度应激之间存在相关性的步骤：在造模后的第0、1、7天测定无处理对照组和成瘾模型组恒河猴血浆中皮质醇含量，并进行统计分析。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110100225.4A CN114766424B (zh) | 2021-01-22 | 2021-01-22 | 恒河猴成瘾模型的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110100225.4A CN114766424B (zh) | 2021-01-22 | 2021-01-22 | 恒河猴成瘾模型的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114766424A CN114766424A (zh) | 2022-07-22 |
| CN114766424B true CN114766424B (zh) | 2023-06-27 |
Family
ID=82407735
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110100225.4A Active CN114766424B (zh) | 2021-01-22 | 2021-01-22 | 恒河猴成瘾模型的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114766424B (zh) |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1081034C (zh) * | 1997-03-07 | 2002-03-20 | 潘心富 | 一种双胍基氢化嘌呤环类化合物的戒毒药 |
| AU2014202047A1 (en) * | 2007-08-06 | 2014-05-01 | Biotie Therapies, Inc. | Methods for treating dependence |
| CN103877096B (zh) * | 2014-04-10 | 2016-06-29 | 安徽医科大学 | 盐酸氯卡色林在制备抑制阿片类物质成瘾和戒断反应的药物中的应用 |
| TWI648049B (zh) * | 2016-05-25 | 2019-01-21 | National Health Research Institutes | 用於減低ｋ他命之致精神病狀副作用及成癮疾患的方法與組成物 |
| CN107801692A (zh) * | 2017-10-23 | 2018-03-16 | 昆明医科大学 | 一种氯胺酮诱导精神分裂症动物模型及其机制研究 |
| CN111165428B (zh) * | 2019-11-01 | 2021-12-28 | 江汉大学 | 一种嚼食槟榔成瘾的动物模型的构建方法及其应用 |
| CN111135170A (zh) * | 2020-01-23 | 2020-05-12 | 上海交通大学 | 乌甲素类化合物治疗成瘾物质心理依赖的用途 |
-
2021
- 2021-01-22 CN CN202110100225.4A patent/CN114766424B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114766424A (zh) | 2022-07-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Malin et al. | Naloxone precipitates nicotine abstinence syndrome in the rat | |
| Walsh et al. | Effects of naltrexone on response to intravenous cocaine, hydromorphone and their combination in humans. | |
| Isola et al. | Nicotine abstinence in the mouse | |
| Bravo et al. | Divergent behavioral responses in protracted opioid withdrawal in male and female C57BL/6J mice | |
| Schaefer et al. | Changes in response rates and reinforcement thresholds for intracranial self-stimulation during morphine withdrawal | |
| Jovaiša et al. | Effects of ketamine on precipitated opiate withdrawal | |
| Savvas et al. | The effect of methadone on emotional reactivity | |
| JPH04290832A (ja) | 競合的ｎｍｄａレセプター拮抗体の新用途 | |
| Cohen et al. | Anxiolytic effects of nicotine in a rodent test of approach–avoidance conflict | |
| Shen et al. | Varied behavioral responses induced by morphine in the tree shrew: a possible model for human opiate addiction | |
| Martellotta et al. | Intravenous self-administration of gamma-hydroxybutyric acid in drug-naive mice | |
| Tomek et al. | Social influences in animal models of opiate addiction | |
| CN114766424B (zh) | 恒河猴成瘾模型的制备方法 | |
| Kasten et al. | Developing a model of limited-access nicotine consumption in C57Bl/6J mice | |
| Elliott et al. | Adolescent and adult female rats differ in sensitivity to nicotine's activity effects | |
| Henningfield et al. | Clinical procedures for the assessment of abuse potential | |
| Houtsmuller et al. | Manipulation of cigarette craving through rapid smoking: Efficacy and effects on smoking behavior | |
| Stickney et al. | Social housing promotes recovery of wheel running depressed by inflammatory pain and morphine withdrawal in male rats | |
| Vann et al. | Dose, duration, and pattern of nicotine administration as determinants of behavioral dependence in rats | |
| Lal et al. | Alleviation of narcotic withdrawal syndrome by conditional stimuli | |
| Waller et al. | Potentiation of lethality in mice by combinations of pentazocine and tripelennamine | |
| Knott et al. | Naltrexone alteration of the nicotine-induced EEG and mood activation response in tobacco-deprived cigarette smokers. | |
| Guzman et al. | Heroin attenuates the negative consequences of cocaine in a runway model of self-administration | |
| White et al. | Naltrexone-induced conditioned place aversion following a single dose of morphine in the rat | |
| Tkacs et al. | Hypoglycemia activates arousal-related neurons and increases wake time in adult rats |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |