CN114761410A - 吡咯并嘧啶酮类化合物及其应用 - Google Patents

吡咯并嘧啶酮类化合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了具有通式(I)所示结构的吡咯并嘧啶酮类化合物及其应用。本发明公开的化合物可以有效抑制BTK C481突变的活性，并且，这类化合物对野生型BTK细胞株增殖同样具有强有力的抑制作用，有潜力成为用作治疗B细胞淋巴瘤、自身免疫性疾病及炎症的药物，有较大的应用价值。

Description

吡咯并嘧啶酮类化合物及其应用
技术领域
本发明涉及化学医药技术领域，具体涉及一种吡咯并嘧啶酮类化合物及其应用。
背景技术
布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)属于非受体酪氨酸激酶TEC家族成员，是B细胞受体(BCR)信号通路的重要组成部分(Smith,C.I.,et al.,The Tec family of cytoplasmictyrosine kinases:mammalian Btk,Bmx,Itk,Tec,Txk and homologs in otherspecies.Bioessays,2001.23(5):p.436-46.)。在启动BCR信号后，BTK磷酸化并激活磷脂酶Cγ2(PLCγ2)，后者又激活核转录因子NF-κB(Xia,B.,et al.,Targeting Bruton'styrosine kinase signaling as an emerging therapeutic agent of B-cellmalignancies.Oncol Lett,2015.10(6):p.3339-3344.)。除T细胞和终末分化的浆细胞外，BTK在造血系统的所有细胞系中均有表达(Smith,C.I.,et al.,Expression of Bruton'sagammaglobulinemia tyrosine kinase gene,BTK,is selectively down-regulated inT lymphocytes and plasma cells.J Immunol,1994.152(2):p.557-65.)。正常表达的BTK在B淋巴细胞发育的各个阶段都是必不可少的。异常活化的BTK则通常会促进克隆增殖和恶性B淋巴细胞在骨髓、次级淋巴器官和血液中的积累，被认为是B细胞淋巴瘤疾病进展的主要机制之一(Vetrie,D.,et al.,Thegene involved in X-linked agammaglobulinaemiais a member of the src family of protein-tyrosine kinases.Nature,1993.361(6409):p.226-33.)，因此BTK抑制剂是常见的B细胞淋巴瘤治疗方案。B细胞恶性肿瘤包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)，最常见的亚型有慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡型淋巴瘤(FL)、多发性骨髓瘤(MM)、边缘区淋巴瘤(MZL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和华氏巨球蛋白血症(WM)(Wen,T.,et al.,Inhibitors targeting Bruton's tyrosine kinase in cancers:drugdevelopment advances.Leukemia,2021.35(2):p.312-332.)。除了血液瘤以外，越来越多临床试验探索BTK抑制剂在肺癌，乳腺癌、前列腺癌、肾癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌等非血液系统恶性肿瘤领域的应用(Campbell,R.,G.Chong,and E.A.Hawkes,NovelIndications for Bruton's Tyrosine Kinase Inhibitors,beyond HematologicalMalignancies.J Clin Med,2018.7(4).)。
BTK大量表达使BCR信号通路异常激活后，可使B细胞功能失调、免疫耐受状态改变，并转化为自身反应性B细胞，分泌大量自身抗体诱发自身免疫性疾病。BTK也在髓系细胞，包括单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和肥大细胞中表达。这些细胞浸润滑膜腔，并产生炎性细胞因子，加重关节炎症状。BTK抑制剂可以阻断B细胞受体依赖性细胞增殖，减少炎性因子产生(Whang,J.A.and B.Y.Chang,Bruton's tyrosine kinase inhibitors for thetreatment of rheumatoid arthritis.Drug Discov Today,2014.19(8):p.1200-4.)。因此，越来越多的BTK抑制剂开展如类风湿关节炎、银屑病、红斑狼疮、狼疮性肾炎、多发性硬化症、舍格伦综合症及哮喘等自身免疫性疾病或炎症相关临床实验(Szilveszter,K.P.,T.Nemeth,and A.Mocsai,Tyrosine Kinases in Autoimmune and Inflammatory SkinDiseases.Front Immunol,2019.10:p.1862.)。
第一个被美国食品药品监督管理局(FDA)和欧洲药品管理局(EMA)批准的小分子BTK抑制剂是依鲁替尼(Ibrutinib)，其可以与BTKATP结合口袋的半胱氨酸481位活性位点中的半胱氨酸残基(Cys481)选择性地共价结合，不可逆地抑制BTK的活性，进而抑制BCR信号通路的激活，有效阻止肿瘤迁移至适宜肿瘤生长的淋巴组织，减少B细胞恶性增殖并诱导细胞的凋亡(Food and Drug Administration(FDA).Highlights of PrescribingInformation.IMBRUVICATM(ibrutinib)capsules,for oral use.2019.(accessed 25Nov2019).)。依鲁替尼获批适应症包括既往至少接受过一种治疗的套细胞淋巴瘤(MCL)；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)/小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)；伴del(17p)的CLL/SLL；华氏巨球蛋白血症(WM)；既往接受过至少一种以抗CD20为基础的治疗，且需要系统治疗的边缘区淋巴瘤(MZL)以及≥1种系统治疗失败的慢性移植物抗宿主病(cGVHD)。依鲁替尼除了靶向BTK以外，它还可以抑制包括IL-2诱导的T细胞激酶(ITK)、tec蛋白酪氨酸激酶(tec)、BMX非受体酪氨酸激酶和表皮生长因子受体(EGFR)在内的其他激酶，这导致皮疹、腹泻等毒副作用(Wu,J.,et al.,Second-generation inhibitors of Bruton tyrosine kinase.JHematol Oncol,2016.9(1):p.80.)。随着临床实验的进展，由于依鲁替尼的副作用可控，越来越多的临床实验开始探讨依鲁替尼和其他药物联合治疗的可能性。依鲁替尼联合来那度胺和利妥昔单抗可用于治疗复发/难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者(Goy,A.,etal.,Ibrutinibplus lenalidomide and rituximab has promising activity inrelapsed/refractory non-germinal center B-cell-like DLBCL.Blood,2019.134(13):p.1024-1036.)。2020年中国临床肿瘤学会(CSCO)报道了一项名为PHOENIX的Ⅲ期随机对照临床研究，结果证实小于60岁的患者中可以看到，在利妥昔单抗，环磷酰胺，阿霉素，长春新碱和泼尼松(RCHOP)的基础上加入依鲁替尼，EFS(无病生存率)得到明显获益，并有改善的趋势，PFS和OS也有明显的获益趋势。此外，探索PD1/PD-L1抗体和依鲁替尼联合用药治疗恶性血液肿瘤和一些实体瘤的临床实验也正在进行中(Campbell,R.,G.Chong,andE.A.Hawkes,Novel Indications for Bruton's Tyrosine Kinase Inhibitors,beyondHematological Malignancies.J Clin Med,2018.7(4).)。
阿卡拉布替尼(Acalabrutinib)是第二个被FDA批准用于治疗套细胞淋巴瘤(MCL)和CLL/小淋巴细胞白血病的一种新型不可逆的BTK抑制剂(Byrd,J.C.,et al.,Acalabrutinib(ACP-196)in Relapsed Chronic Lymphocytic Leukemia.N Engl J Med,2016.374(4):p.323-32.)。与依鲁替尼相比，阿卡拉布替尼具有更高的选择性，大幅降低了EGFR、Tec的脱靶活性，导致其不良反应和耐药性发生率更低，EGFR抑制作用被认为与皮疹和严重腹泻有关，Tec抑制作用导致血小板功能障碍和出血风险增加(Clinicaltrials.gov.NCT02477696.)。除上述2款药物之外，百济神州的泽布替尼(Zanubrutinib)和诺诚健华的奥布替尼(Orelabrutinib)也先后由FDA和NMPA批准上市(Wen,T.,et al.,Inhibitors targeting Bruton's tyrosine kinase in cancers:drugdevelopment advances.Leukemia,2021.35(2):p.312-332.)。已批准的BTK抑制剂都不可逆地与BTK结合口袋中的半胱氨酸481结合；根据生化结合动力学，伊鲁替尼是最有效的BTK抑制剂，其次是泽布替尼和阿卡拉布替尼。在临床实践中，药效学和药动学的差异可能会影响抑制剂的剂量、效率和不良事件(AEs)。阿卡替尼的半衰期比每天给药一次的依鲁替尼短，快速吸收和快速消除之间的平衡可以带来快速靶点抑制，并降低脱靶问题或药物相互作用的潜在风险。
尽管BTK抑制剂已被证明是治疗几种B细胞恶性肿瘤最有效的药物之一，但也出现了原发和继发耐药的病例，通常导致预后不良。ABC-DLBCL中具有CD79A/B野生型的WM或MYD88突变的IGHV突变可能与对依鲁替尼的原发性耐药有关(Xia,B.,et al.,TargetingBruton's tyrosine kinase signaling as an emerging therapeutic agent of B-cellmalignancies.Oncol Lett,2015.10(6):p.3339-3344.)。在服用伊鲁替尼的CLL/SLL患者中，已经发现BTK的伊鲁替尼结合(BTK Cys481)、gatekeeper(BTK Thr474)和SH2(BTKThr316)结构域发生突变(Woyach,J.A.,et al.,Resistance mechanisms for theBruton's tyrosine kinase inhibitor ibrutinib.N Engl J Med,2014.370(24):p.2286-94.)。BTK Cys481突变在使用依鲁替尼治疗进展的患者中很常见(Xu,L.,et al.,Acquired mutations associated with ibrutinib resistance in Waldenstrommacroglobulinemia.Blood,2017.129(18):p.2519-2525.)。BTK Cys481突变中最常见的是BTK第481位的半胱氨酸(C)被丝氨酸(S)取代，这会阻止BTK抑制剂与ATP结合位点的巯基发生共价结合。BTK突变体C481F，C481G，C481R和C481Y在某些CLL患者中同样被发现富集，导致耐药，但发生频率远低于C481S(Woyach,J.A.,et al.,BTK(C481S)-MediatedResistance to Ibrutinib in Chronic Lymphocytic Leukemia.J Clin Oncol,2017.35(13):p.1437-1443.)。也有研究发现，PLCγ2突变(R665W、S707Y和L845F)同样可导致B细胞受体(BCR)通路活化，引起耐药(Liu,T.M.,et al.,Hypermorphic mutation ofphospholipase C,gamma2 acquired in ibrutinib-resistant CLL confers BTKindependency upon B-cell receptor activation.Blood,2015.126(1):p.61-8.)。为了解决BTK耐药难题，针对C481突变的第二代BTK抑制剂被开发出来。
LOXO-305是目前临床进展最快的一个高度选择性可逆的BTK抑制剂，不与C481产生共价结合，因此C481突变不会导致LOXO-305的活性降低，可克服人体对共价BTK抑制剂的耐药性(LOXO-305,A Next Generation Non-Covalent BTK Inhibitor,for OvercomingAcquired Resistance to Covalent BTK Inhibitors.)。在名为BRUIN的1/2期临床试验(NCT03740529)的最新数据显示，LOXO-305在121位疗效可评估的、接受过BTK抑制剂治疗的CLL和SLL患者中，ORR为62％(95％CI:53-71)。针对BTK C481突变患者的ORR(71％[17/24])与未出现该突变患者的ORR相似(66％[43/65])。在56位可评估疗效的MCL患者中，29位患者产生了应答，其中14位患者完全缓解(CR)，15位患者部分缓解(PR)，总体缓解率(ORR)为52％(95％CI:38-65)。在先前接受过共价BTK抑制剂治疗的52患者中，ORR也达到了52％(95％CI:38-66)。
ARQ 531是一款口服，有着较好的生物利用度的、强效、可逆性BTK抑制剂，能够抑制野生型和携带C481突变的BTK活性(Reiff,S.D.,et al.,The BTK Inhibitor ARQ 531Targets Ibrutinib-Resistant CLL and Richter Transformation.Cancer Discov,2018.8(10):p.1300-1315.)。2019年12月的美国血液学会年会(ASH)披露了AQR 531的临床一期数据(NCT03162536)，在剂量为>65mg QD时，9名可以被评估的CLL患者中8名达到部分缓解(PR)，缓解率高达89％。其中8名PR的患者中7名携带BTK C481突变。
发明内容
基于C481突变在第一代BTK抑制剂耐药中占比很大，且目前尚没有一款药物获批上市，本发明提供了一类新的吡咯并嘧啶酮类化合物，可以有效抑制BTK C481突变,并且，这类化合物对野生型BTK同样具有强有力的抑制作用，有潜力成为用作治疗B细胞淋巴瘤、自身免疫性疾病和炎症的药物，有较大的应用价值。
本发明包括如下具技术方案。
式(I)所示的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子：
Figure BDA0003632424340000041
其中：
含氧六元环内的虚线表示其为一个单键或者没有；
n选自：0，1，2，3或4；
p选自：0，1，2或3；
W选自：-O-，-S-，-CR4R5-；
环A选自：取代或者未取代的苯基，取代或者未取代的5-6元杂芳基，取代或者未取代的8-10元杂芳基，取代或者未取代的8-10元苯并杂环基；
并且，当环A选自取代或者未取代的8-10元杂芳基，取代或者未取代的8-10元苯并杂环基时，R1选自：H，卤素，-OH，-OR6,-NR7R8，-SR9，-S(O)R9，-S(O)2R9；
当环A选自取代或者未取代的苯基、取代或者未取代的5-6元杂芳基时，R1选自：-OR6,-NR7R10，-SR9，-S(O)R9，-S(O)2R9；
R2选自：H，卤素，C1-C6烷基；
各R3分别独立选自：H，卤素，硝基，氰基，酯基，酰基，C1-C6烷基；
R4，R5分别独立选自：H，卤素，C1-C6烷基，C3-C8环烷基；
各R6分别独立选自：R9S-取代的C1-C6烷基，R9S(O)-取代的C1-C6烷基，R9S(O)2-取代的C1-C6烷基，R21OC(O)O-取代的C1-C6烷基，氨基羰基，C1-C6烷基胺基羰基，C1-C6烷酰基，氨基取代的C1-C6烷酰基，-(M1)(M2)P＝O；M1和M2分别独立选自：-OH，C1-C3烷基；
各R7分别独立选自：H，C1-C6烷基；
R8选自：H，C1-C6烷基，CN，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，-SR9，-S(O)R9，-S(O)2R9；
各R9分别独立选自：H，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8环烷基，C3-C8环烷基甲基，卤素取代的C1-C6烷基，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，氨基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷基胺基取代的C1-C6烷基，C6-C10芳基，一个或多个R12取代的C6-C10芳基，3-10元杂环基，氨基，C1-C6烷基胺基；
R10选自：CN，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，-SR11，-S(O)R11，-S(O)2R11；
各R11分别独立选自：氨基，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，苯基、卤素取代的苯基；
各R12分别独立选自选自：卤素，硝基，氰基，C1-C6烷基；
R20选自：H，R21OC(O)O-取代的C1-C6烷基，R21C(O)O-取代的C1-C6烷基，1个或多个R22取代的5-8元杂环基，R21C(O)NH-取代的C1-C6烷基，1个或多个R23取代的C1-C6烷酰基，(M1)(M2)P(O)O-取代的C1-C6烷基；M1和M2分别独立选自：-OH，C1-C3烷基；
R21选自：C1-C6烷基，C3-C8环烷基，氨基取代的C1-C6烷基；
各R22分别独立选自：C1-C6烷基，羟基，卤素，硝基，氰基；
各R23分别独立选自：羧基，氨基，羟基，氨基羰基。
在其中一些实施例中，所述的吡咯并嘧啶酮类化合物具有式(II)或者式(III)所示结构：
Figure BDA0003632424340000061
在其中一些实施例中，环A选自：
Figure BDA0003632424340000071
其中：
m选自：0,1或2；
X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7分别独立选自CR15或N；
各R13和R15分别独立选自：H，卤素，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8环烷基，C3-C8环烷基甲基，卤素取代的C1-C6烷基，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，氨基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷基胺基取代的C1-C6烷基，C6-C10芳基，5-10元杂芳基，硝基，氰基，-OR，-N(R)2，-SR，-C(O)OR，-C(O)N(R)2，-C(O)R，-S(O)R，-S(O)2R，-S(O)2N(R)2，-N(R)C(O)R；
各R14分别独立选自：H，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8环烷基，C3-C8环烷基甲基，卤素取代的C1-C6烷基；
各R分别独立选自：H，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8环烷基，C3-C8环烷基甲基，卤素取代的C1-C6烷基，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，氨基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷基胺基取代的C1-C6烷基。
在其中一些实施例中，环A选自：
Figure BDA0003632424340000081
其中，X1、X2、X3分别独立选自CR15；X4、X5、X6、X7分别独立选自CR15或N。
在其中一些实施例中，环A选自：
Figure BDA0003632424340000082
在其中一些实施例中，各R13和R15分别独立选自：H，卤素，C1-C3烷基，C3-C6环烷基，卤素取代的C1-C3烷基，羟基取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基，氰基，-C(O)OR，-C(O)N(R)2；各R分别独立选自：H，C1-C6烷基。
在其中一些实施例中，各R13和R15分别独立选自：氢，甲基，环丙基，羟甲基，乙基，异丙基，甲氧基甲基，甲氧羰基，甲氧基，氰基，氨基羰基，一氟甲基，二氟甲基，三氟甲基，氟，氯。
在其中一些实施例中，环A选自：
Figure BDA0003632424340000091
其中，各R13分别独立选自：氢，甲基，环丙基，羟甲基，甲氧基，一氟甲基，二氟甲基，三氟甲基，氟，氯；
各R15分别独立选自：氢，氟，氯。
在其中一些实施例中，各R14分别独立选自：H，C1-C3烷基。
在其中一些实施例中，各R9分别独立选自：H，C1-C3烷基，C3-C6环烷基，卤素取代的C1-C3烷基，羟基取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基取代的C1-C3烷基，氨基取代的C1-C3烷基，C1-C3烷基胺基取代的C1-C3烷基，苯基，卤素取代的苯基，氨基，C1-C3烷基胺基。
在其中一些实施例中，各R9分别独立选自：H，甲基，乙基，二甲胺基，羟乙基，异丙基，氨基，甲胺基，甲氧基乙基，苯基，氟苯基。
在其中一些实施例中，R8选自：H，C1-C3烷基，-CN，羟基取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基取代的C1-C3烷基，-SR9-1，-S(O)R9-1，-S(O)2R9-1；
其中，各R9-1分别独立选自：羟基取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基取代的C1-C3烷基，氨基，苯基、卤素取代的苯基。
在其中一些实施例中，R8选自：H，甲基，-CN，羟乙基，-S(O)2R9-1；其中，R9-1选自：羟乙基，甲氧基乙基，氨基，苯基，对氟苯基。
在其中一些实施例中，R10选自：-CN，羟基取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基取代的C1-C3烷基，-SR11，-S(O)R11，-S(O)2R11；
各R11分别独立选自：羟基取代的C1-C3烷基，氨基，C1-C3烷氧基取代的C1-C3烷基，苯基、卤素取代的苯基。
在其中一些实施例中，R10选自：CN，羟乙基，-S(O)2R11；其中，各R11分别独立选自：羟乙基，氨基，甲氧基乙基，苯基，对氟苯基。
在其中一些实施例中，各R6分别独立选自：R9S(O)2-取代的甲基，R9S(O)2-取代的乙基，R9S(O)2-取代的C1-C3烷基，氨基羰基，C1-C3烷基胺基羰基，C1-C3烷酰基，氨基取代的C1-C6烷酰基；
其中，各R9-2分别独立选自：C1-C3烷基，C1-C3烷基胺基，羟基取代的C1-C3烷基，氨基。
在其中一些实施例中，各R6分别独立选自：甲磺酰基甲基，甲磺酰基乙基，乙磺酰基乙基，甲磺酰基丙基，二甲胺基磺酰基乙基，异丙磺酰基乙基，羟乙基磺酰基乙基，氨基磺酰基乙基，甲胺基磺酰基乙基，氨基羰基，乙酰基，2-甲基-3-氨基-丁酰基，氨基乙酰基。
在其中一些实施例中，当环A选自取代或者未取代的8-10元杂芳基，取代或者未取代的8-10元苯并杂环基时，
R1选自：-OH，-OR6，甲磺酰基，-NR7R8，氟，氯；
R6选自：R9S(O)2-取代的甲基，R9S(O)2-取代的乙基，R9S(O)2-取代的丙基，C1-C3烷酰基，氨基取代的C1-C6烷酰基；
R7选自：H，C1-C3烷基；
R8选自：H，C1-C3烷基；
各R9分别独立选自：甲基，乙基。
在其中一些实施例中，环A为苯基，
R1选自：-OR6，-NHR10，-S(O)2CH3；
R6选自：R9S(O)2-取代的甲基，R9S(O)2-取代的乙基；R9S(O)2-取代的丙基；
各R9分别独立选自：甲基，乙基，氨基，甲胺基，二甲胺基，
R10选自：-S(O)2R11；
R11选自：甲烷氧基取代的乙基，氨基。
在其中一些实施例中，R2为H；和/或，R3选自：H，氯，氟。
在其中一些实施例中，R20选自：H，R21OC(O)O-取代的C1-C3烷基，R21C(O)O-取代的C1-C3烷基，(OH)2P(O)O-取代的C1-C3烷基；
R21选自：C1-C4烷基，C5-C6环烷基。
在其中一些实施例中，所述吡咯并嘧啶酮类化合物选自：
Figure BDA0003632424340000101
Figure BDA0003632424340000111
Figure BDA0003632424340000121
Figure BDA0003632424340000131
Figure BDA0003632424340000141
Figure BDA0003632424340000151
本发明还提供了上述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子的应用。
包括职下具体技术方案。
上述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子在制备BTK抑制剂中的应用。
在其中一些实施例中，所述BTK为野生型BTK和/或C481突变型BTK。
上述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子在制备预防和/或治疗与BTK过度活化相关的疾病和/或症状的药物中的应用。
在其中一些实施例中，所述BTK为野生型BTK和/或C481突变型BTK。
在其中一些实施例中，所述与BTK过度活化相关的疾病为肿瘤、炎症或自身免疫性疾病。
在其中一些实施例中，所述肿瘤为血液肿瘤或实体瘤。
在其中一些实施例中，所述血液肿瘤为淋巴瘤、骨髓瘤、淋巴细胞白血病、急性髓系白血病。
在其中一些实施例中，所述实体瘤为肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌。
在其中一些实施例中，所述炎症或自身免疫性疾病为类风湿关节炎、红斑狼疮、狼疮性肾炎、多发性硬化症、舍格伦综合症、哮喘。
本发明还提供了一种预防和/或治疗与BTK过度活化相关的疾病和/或症状的药物组合物。
具体技术方案如下：
一种预防和/或治疗与BTK过度活化相关的疾病和/或症状的药物组合物，包括活性成分以及药学上可接受的辅料和/或载体，所述活性成分包括有上述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子。
在其中一些实施例中，所述活性成分还包含一种或多种能够预防和/或治疗肿瘤、炎症或自身免疫性疾病的第二治疗剂。
在其中一些实施例中，所述第二治疗剂选自利妥昔单抗、来那度胺、氟达拉滨、环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、强的松及PD-1/PD-L1抗体。
在其中一些实施例中，所述BTK为野生型BTK和/或C481突变型BTK。
在其中一些实施例中，所述与BTK过度活化相关的疾病为肿瘤、炎症或自身免疫性疾病。
在其中一些实施例中，所述肿瘤为血液肿瘤或实体瘤。
在其中一些实施例中，所述血液肿瘤为淋巴瘤、骨髓瘤、淋巴细胞白血病、急性髓系白血病。
在其中一些实施例中，所述实体瘤为肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌。
在其中一些实施例中，所述炎症或自身免疫性疾病为类风湿关节炎、红斑狼疮、狼疮性肾炎、多发性硬化症、舍格伦综合症、哮喘。
本发明提供的新的吡咯并嘧啶酮类化合物，可以有效抑制BTK C481突变,并且，这类化合物对野生型BTK同样具有强有力的抑制作用，有潜力成为用作治疗B细胞淋巴瘤、自身免疫性疾病和炎症的药物，有较大的应用价值。
说明书附图
图1为化合物ARQ531、1、2、10、13、14、20和21的大鼠灌胃给药(20mg/kg)的平均药时曲线图。
图2为化合物23、27、34、37、60、61和62的大鼠灌胃给药(20mg/kg)的平均药时曲线图。
图3为前药化合物110的大鼠灌胃给药(20mg/kg)的平均药时曲线图。
图4为化合物13、21、23在TMD-8移植肿瘤模型中的抗肿瘤活性。
图5为化合物21在TMD-8移植肿瘤模型中抗肿瘤量效活性。
具体实施方式
本发明所述化合物中，当任何变量(例如R等)在任何组分中出现超过一次，则其每次出现的定义独立于其它每次出现的定义。同样，允许取代基及变量的组合，只要这种组合使化合物稳定。自取代基划入环系统的线表示所指的键可连接到任何能取代的环原子上。如果环系统为多环，其意味着这种键仅连接到邻近环的任何适当的碳原子上。要理解本领域普通技术人员可选择本发明化合物的取代基及取代型式而提供化学上稳定的并可通过本领域技术和下列提出的方法自可容易获得的原料容易的合成的化合物。如果取代基自身被超过一个基团取代，应理解这些基团可在相同碳原子上或不同碳原子上，只要使结构稳定。
本文所用术语“烷基”意指包括具有特定碳原子数目的支链的和直链的饱和脂肪烃基。例如，“C1-C6烷基”中“C1-C6”的定义包括以直链或支链排列的具有1、2、3、4、5或6个碳原子的基团。例如，“C1-C6烷基”具体包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基。
术语“环烷基”指具有特定碳原子数目的单环饱和脂肪烃基。例如“环烷基”包括环丙基、环丁基、环戊基或环己基等。
术语“烷氧基”指烷基与氧直接连接的基团，即具有-O-烷基结构的基团，如-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2CH3、-O-CH2CH(CH3)2、-OCH2CH2CH2CH3、-O-CH(CH3)2等。
术语“杂环基”为饱和或部分不饱和的单环或多环环状取代基，其中一个或多个环原子选自N、O或S(O)m(其中m是0-2的整数)的杂原子，其余环原子为碳，例如：吗啉基、哌啶基、四氢吡咯基、吡咯烷基、二氢咪唑基、二氢异噁唑基、二氢异噻唑基、二氢噁二唑基、二氢噁唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢三唑基、二氢氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基等，及其N-氧化物，杂环取代基的连接可通过碳原子或通过杂原子实现。
术语“杂芳基”指含有1个或多个选自O、N或S的杂原子的芳香环，本发明范围内的杂芳基包括但不限于：喹啉基、吡唑基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、哒嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并恶唑、吲哚基等；“杂芳基”也理解为包括任何含有氮的杂芳基的N-氧化物衍生物。
术语“取代的”是指用指定取代基的基团置换特定结构中的氢基。
正如本领域技术人员所理解的，本文中所用“卤素”(“halo”)或“卤”意指氯、氟、溴和碘。
除非另有定义，烷基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环烷基取代基可为未被取代的或取代的。例如，C1-C6烷基可被一个、两个或三个选自OH、卤素、烷氧基、二烷基氨基或杂环基例如吗啉基、哌啶基等的取代基取代。
本发明包括式(Ⅰ)、式(II)或者式(III)化合物的游离形式，也包括其药学上可接受的盐及立体异构体。本文中一些特定的示例性化合物为胺类化合物的质子化了的盐。术语“游离形式”指以非盐形式的胺类化合物。包括在内的药学上可接受盐不仅包括本文所述特定化合物的示例性盐，也包括所有式(Ⅰ)、式(II)或者式(III)化合物游离形式的典型的药学上可接受的盐。可使用本领域已知技术分离所述化合物特定盐的游离形式。例如，可通过用适当的碱稀水溶液例如NaOH稀水溶液、碳酸钾稀水溶液、稀氨水及碳酸氢钠稀水溶液处理该盐使游离形式再生。游离形式在某些物理性质例如在极性溶剂中溶解度上与其各自盐形式多少有些区别，但是为发明的目的这种酸盐及碱盐在其它药学方面与其各自游离形式相当。
可通过常规化学方法自含有碱性部分或酸性部分的本发明化合物合成本发明的药学上可接受的盐。通常，通过离子交换色谱或通过游离碱和化学计算量或过量的所需盐形式的无机或有机酸在适当溶剂或多种溶剂的组合中反应制备碱性化合物的盐。类似的，通过和适当的无机或有机碱反应形成酸性化合物的盐。
因此，本发明化合物的药学上可接受的盐包括通过碱性本发明化合物和无机或有机酸反应形成的本发明化合物的常规无毒盐。例如，常规的无毒盐包括得自无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的盐，也包括自有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基一苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙基磺酸、三氟乙酸等制备的盐。
如果本发明化合物为酸性的，则适当的“药学上可接受的盐”指通过药学上可接受的无毒碱包括无机碱及有机碱制备的盐.得自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。特别优选铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。得自药学上可接受的有机无毒碱的盐，所述碱包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，取代的胺包括天然存在的取代胺、环状胺及碱性离子交换树脂例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、羟钴胺、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪,哌啶、呱咤、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。
Berg等，“Pharmaceutical Salts，”J.Pharm.Sci.’1977：66：1-19更详细描述了上文所述药学上可接受的盐及其它典型的药学上可接受的盐的制备。
由于在生理条件下化合物中脱质子化的酸性部分例如羧基可为阴离子的，而这种带有的电荷然后可被内部带有阳离子的质子化了的或烷基化的碱性部分例如四价氮原子平衡抵消，所以应注意本发明化合物是潜在的内盐或两性离子。
在一个实施方案中，本申请提供了一种利用具有式(Ⅰ)、式(II)或者式(III)所示结构的化合物及其药学可接受的盐治疗人或其它哺乳动物肿瘤、炎症或自身免疫性疾病或症状。
在一个实施方案中，本申请的化合物及其药学可接受的盐可以用于治疗或控制血液肿瘤或实体瘤；其中，血液肿瘤可以是淋巴瘤、骨髓瘤、淋巴细胞白血病、急性髓系白血病；实体瘤可以是肺癌，乳腺癌、前列腺癌、肾癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌。
在一个实施方案中，本申请的化合物及其药学可接受的盐可以用于治疗或控制炎症或自身免疫性疾病，例如：类风湿关节炎、红斑狼疮、狼疮性肾炎、多发性硬化症、舍格伦综合症及潜在疾病哮喘。
药物代谢物及前药：本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐的代谢产物，以及可以在体内转变为本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐的结构的前药，也包含在本申请的权利要求中。
联合用药：式(Ⅰ)、式(II)或者式(III)化合物可以与已知的治疗或改进相似病状的其它药物联用。联合给药时，原来药物的给药方式&剂量保持不变，而同时或随后服用式(Ⅰ)、式(II)或者式(III)化合物。当式(Ⅰ)、式(II)或者式(III)化合物与其它一种或几种药物同时服用时，优选使用同时含有一种或几种已知药物和式(Ⅰ)、式(II)或者式(III)化合物的药用组合物。药物联用也包括在重叠的时间段服用式(Ⅰ)化合物与其它一种或几种已知药物。当式(Ⅰ)、式(II)或者式(III)化合物与其它一种或几种药物进行药物联用时，式(Ⅰ)、式(II)或者式(III)化合物或已知药物的剂量可能比它们单独用药时的剂量较低。
可以与式(Ⅰ)、式(II)或者式(III)化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限为：
雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、视网膜样受体调节剂、细胞毒素/细胞抑制剂、抗增殖剂、蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、HIV蛋白激酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、血管生成抑制剂、细胞增殖及生存信号抑制剂、干扰细胞周期关卡的药物和细胞凋亡诱导剂，细胞毒类药物、酪氨酸蛋白抑制剂、EGFR抑制剂、VEGFR抑制剂、丝氨酸/苏氨酸蛋白抑制剂、Bcr-Abl抑制剂，c-Kit抑制剂,Met抑制剂,Raf抑制剂,MEK抑制剂,MMP抑制剂,拓扑异构酶抑制剂、组氨酸去乙酰化酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、CDK抑制剂，Bcl-2家族蛋白抑制剂，MDM2家族蛋白抑制剂、IAP家族蛋白抑制剂、STAT家族蛋白抑制剂、PI3K抑制剂、AKT抑制剂、整联蛋白阻滞剂、干扰素-α、白介素-12、COX-2抑制剂、p53、p53激活剂、VEGF抗体、EGF抗体、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)抗体、程序性细胞死亡1(PD-1)抗体，细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)抗体等。
在一个实施方案中，可以与式(Ⅰ)、式(II)或者式(III)化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限为：阿地白介素、阿仑膦酸、干扰素、阿曲诺英、别嘌醇、别嘌醇钠、帕洛诺司琼盐酸盐、六甲蜜胺、氨基格鲁米特、氨磷汀、氨柔比星、安丫啶、阿纳托唑、多拉司琼、aranesp、arglabin、三氧化二砷、阿诺新、5-氮胞苷、硫唑嘌呤、卡介苗或tice卡介苗、贝他定、醋酸倍他米松、倍他米松磷酸钠制剂、贝沙罗汀、硫酸博来霉素、溴尿甘、bortezomib、白消安、降钙素、阿来佐单抗注射剂、卡培他滨、卡铂、康士得、cefesone、西莫白介素、柔红霉素、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、克拉屈滨、氯屈磷酸、环磷酰胺、阿糖胞昔、达卡巴嗪、放线菌素D、柔红霉素脂质体、地塞米松、磷酸地塞米松、戊酸雌二醇、地尼白介素2、狄波美、地洛瑞林、地拉佐生、己烯雌酚、大扶康、多西他奇、去氧氟尿苷、阿霉素、屈大麻酚、钦-166-壳聚糖复合物、eligard、拉布立酶、盐酸表柔比星、阿瑞吡坦、表阿霉素、阿法依伯汀、红细胞生成素、依铂、左旋咪唑片、雌二醇制剂、17-β-雌二醇、雌莫司汀磷酸钠、炔雌醇、氨磷汀、羟磷酸、凡毕复、依托泊甙、法倔唑、他莫昔芬制剂、非格司亭、非那司提、非雷司替、氟尿苷、氟康唑、氟达拉滨、5-氟脱氧尿嘧啶核苷一磷酸盐、5-氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、福麦斯坦、1-β-D-阿糖呋喃糖胞噻啶-5’-硬脂酰磷酸酯、福莫司汀、氟维司群、丙种球蛋白、吉西他滨、吉妥单抗、甲磺酸伊马替尼、卡氮芥糯米纸胶囊剂、戈舍瑞林、盐酸格拉尼西隆、组氨瑞林、和美新、氢化可的松、赤型-羟基壬基腺嘌呤、羟基脲、替坦异贝莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、干扰素α、干扰素-α2、干扰素α-2A、干扰素α-2B、干扰素α-nl、干扰素α-n3、干扰素β、干扰素γ-la、白细胞介素-2、内含子A、易瑞沙、依立替康、凯特瑞、硫酸香菇多糖、来曲唑、甲酰四氢叶酸、亮丙瑞林、亮丙瑞林醋酸盐、左旋四咪唑、左旋亚叶酸钙盐、左甲状腺素钠、左甲状腺素钠制剂、洛莫司汀、氯尼达明、屈大麻酚、氮芥、甲钴胺、甲羟孕酮醋酸酯、醋酸甲地孕酮、美法仑、酯化雌激素、6-琉基嘌呤、美司钠、氨甲蝶呤、氨基乙酰丙酸甲酯、米替福新、美满霉素、丝裂霉素C、米托坦、米托葱醌、曲洛司坦、柠檬酸阿霉素脂质体、奈达铂、聚乙二醇化非格司亭、奥普瑞白介素、neupogen、尼鲁米特、三苯氧胺、NSC-631570、重组人白细胞介素1-β、奥曲肽、盐酸奥丹西隆、去氢氢化可的松口服溶液剂、奥沙利铂、紫杉醇、泼尼松磷酸钠制剂、培门冬酶、派罗欣、喷司他丁、溶链菌制剂、盐酸匹鲁卡品、毗柔比星、普卡霉素、卟吩姆钠、泼尼莫司汀、司替泼尼松龙、泼尼松、倍美力、丙卡巴脐、重组人类红细胞生成素、雷替曲塞、利比、依替膦酸铼-186、美罗华、力度伸-A、罗莫肽、盐酸毛果芸香碱片剂、奥曲肽、沙莫司亭、司莫司汀、西佐喃、索布佐生、唬钠甲强龙、帕福斯酸、干细胞治疗、链佐星、氯化锶-89、左旋甲状腺素钠、他莫昔芬、坦舒洛辛、他索那明、tastolactone、泰索帝、替西硫津、替莫唑胺、替尼泊苷、丙酸睾酮、甲睾酮、硫鸟嘌呤、噻替哌、促甲状腺激素、替鲁膦酸、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、曲奥舒凡、维A酸、甲氨喋呤片剂、三甲基密胺、三甲曲沙、乙酸曲普瑞林、双羟萘酸曲普瑞林、优福定、尿苷、戊柔比星、维司力农、长春碱、长春新碱、长春酰胺、长春瑞滨、维鲁利秦、右旋丙亚胺、净司他丁斯酯、枢复宁、紫杉醇蛋白质稳定制剂、acolbifene、干扰素r-lb、affinitak、氨基喋呤、阿佐昔芬、asoprisnil、阿他美坦、阿曲生坦、BAY43-9006、阿瓦斯丁、CCI-779、CDC-501、西乐葆、西妥昔单抗、克立那托、环丙孕酮醋酸酯、地西他滨、DN-101、阿霉素-MTC、dSLIM、度他雄胺、edotecarin、依氟鸟氨酸、依喜替康、芬维A胺、组胺二盐酸盐、组氨瑞林水凝胶植入物、钬-166DOTMP、伊班膦酸、干扰素γ、内含子-PEG、ixabepilone、匙孔形血蓝蛋白、L-651582、兰乐肽、拉索昔芬、libra、lonafamib、米泼昔芬、米诺屈酸酯、MS-209、脂质体MTP-PE、MX-6、那法瑞林、奈莫柔比星、新伐司他、诺拉曲特、奥利默森、onco-TCS、osidem、紫杉醇聚谷氨酸酯、帛米酸钠、PN-401、QS-21、夸西洋、R-1549、雷洛昔芬、豹蛙酶、13-顺维A酸、沙铂、西奥骨化醇、T-138067、tarceva、二十二碳六烯酸紫杉醇、胸腺素αl、嘎唑呋林、tipifarnib、替拉扎明、TLK-286、托瑞米芬、反式MID-lo7R、伐司朴达、伐普肽、vatalanib、维替泊芬、长春氟宁、Z-100和唑来麟酸或它们的组合。
在一个实施方案中，可以与式(Ⅰ)、式(II)或者式(III)化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限为：利妥昔单抗、来那度胺、氟达拉滨、环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、强的松及PD-1/PD-L1抗体。
合成方法：除在文献中已知的或在实验程序中例证的标准方法外，可采用如下合成方案(方案1-6)中的方法制备本发明化合物。结合下述的合成方案，能够对本发明中所述的化合物以及合成方法进行更好的理解。所述的合成方案描述了可以用于制备本发明中所述的化合物的方法，所述的方法仅仅是为说明目的的说明性方案描述，并不构成对本发明所具有的范围的限制。
Figure BDA0003632424340000221
方案1
Figure BDA0003632424340000231
方案2
Figure BDA0003632424340000232
方案3
Figure BDA0003632424340000241
方案4
Figure BDA0003632424340000242
方案5
Figure BDA0003632424340000251
方案6
实施例1：(4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物1)的制备(按照方案一线路制备)
步骤1a:苯并呋喃-7-醇(化合物0101-1)的制备：
Figure BDA0003632424340000252
氮气保护下，向邻香草醛(5克，32.86毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(100毫升)溶液中加入溴乙酸乙酯(8.23克，49.29毫摩尔，1.5当量)，碳酸铯(21.4克，65.72毫摩尔，2.0当量)，混合物在室温下搅拌0.5小时，然后在120℃下搅拌3.0小时。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1至20/1)纯化，得到白色固体产物7-甲氧基苯并呋喃-2-羧酸甲酯(5.3克，收率：78.28％)。
向7-甲氧基苯并呋喃-2-羧酸甲酯(5.3克，25.73毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(10毫升)溶液中加入2M氢氧化钠溶液(20毫升)，混合物在室温下搅拌过夜。反应液用4M盐酸调节至pH＝4，并用乙酸乙酯萃取。所得有机相干燥并减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝193[M+1]+.
氮气保护下，向7-甲氧基苯并呋喃-2-羧酸(4.2克，21.87毫摩尔，1.0当量)的喹啉溶液(50毫升)中加入铜粉(4.2克，65.61毫摩尔，3.0当量)，混合物在120℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝100/1至80/1)纯化，得到无色油状产物7-甲氧基苯并呋喃(2.5克，收率：77.40％)。
氮气保护下，向7-甲氧基苯并呋喃(4.5克，30.4毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷溶液中滴加三溴化硼(11.4克，45.6毫摩尔，1.5当量)，混合物在0℃下搅拌1.5小时。反应液用甲醇淬灭，加水稀释并用二氯甲烷萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝100/1至50/1)纯化，得到黄色油状产物苯并呋喃-7-醇(3.2克，收率：78.62％)。
步骤1b:4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(化合物0103-1)的制备：氮气保护下，向苯并呋喃-7-醇(0101-1)(1.39克，10.37毫摩尔，1.5当量)的N,N-二甲基甲酰胺(25毫升)溶液中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(1.3克，6.91毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(1.9克，13.82毫摩尔，2.0当量)，混合物在90℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1至10/1)纯化，得到白色固体产物4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(1.9克，收率：91.08％)。LCMS(ESI)：m/z＝303[M+1]+.
步骤1c:4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯甲酸(化合物0104-1)的制备：向4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(0103-1)(1.9克，6.29毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(5毫升)溶液中加入2M氢氧化钠溶液(15毫升)，混合物在室温下搅拌过夜。反应液用4M盐酸调节至pH＝4，并用乙酸乙酯萃取。所得有机相干燥并减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝289[M+1]+.
步骤1d：4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯甲酰氯(化合物0105-1)的制备：氮气保护下，0℃下，向4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯甲酸(0104-1)(1.7克，5.90毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(15毫升)溶液中加入草酰氯(2.25克，17.70毫摩尔，3.0当量)，N,N-二甲基甲酰胺(1毫克)，混合物在室温下搅拌过夜。反应液减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。
步骤1e：(4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-1)的制备：氮气保护下，0℃下向5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(1.45克，6.25毫摩尔，1.05当量)的四氢呋喃(15毫升)溶液中加入氢化钠(750毫克，18.75毫摩尔，3.0当量)，将混合物搅拌半小时。然后在-70℃下缓慢滴加正丁基锂(3.25毫升，8.12毫摩尔，1.3当量)并搅拌1.0小时。在-70℃下，将4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯甲酰氯(0105-1)(1.6g克，粗品)的5毫升四氢呋喃溶液滴加至反应液中并搅拌1.5小时。反应液用氯化铵溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝15/1至2/1)纯化，得到黄色固体产物(4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(700毫克，收率：28.0％)。LCMS(ESI)：m/z＝424[M+1]+.
步骤1f：((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(化合物0108-1)的制备：将((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(80毫克，0.346毫摩尔，1.0当量)的氯化氢甲醇溶液(4M溶液，2.5毫升)的混合物在室温下搅拌1小时,减压除去溶剂并在真空下干燥，残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝132[M+1]+。
步骤1g：(4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物1)的制备:往(4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-1)(600毫克，1.41毫摩尔，1.0当量)和((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(282毫克，1.69毫摩尔，1.2当量)在叔丁醇(20毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1.5毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1至10/1)纯化，得到黄色固体产物(4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)甲酮(360毫克，收率：49.3％)。MS(ES+):m/z＝519(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.57(d,J＝5.6Hz,1H),8.23(s,1H),8.01(s,1H),7.56(d,J＝12.5Hz,3H),7.32(t,J＝7.2Hz,1H),7.22–7.12(m,2H),7.10–6.93(m,2H),4.67(s,1H),4.14(s,2H),3.63(s,2H),3.12(d,J＝10.6Hz,2H),2.17(s,1H),1.77(d,J＝12.3Hz,1H),1.56(d,J＝11.8Hz,1H),1.38(d,J＝11.8Hz,1H).
实施例2：(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物2)的制备(按照方案一线路制备)
步骤2a:2-甲基苯并呋喃-7-醇(化合物0101-2)的制备
Figure BDA0003632424340000271
氮气保护下，向2-甲氧基苯酚(5克，40.3毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(120毫升)溶液中加入3-溴丙炔(5.75克，48.3毫摩尔，1.2当量)和碳酸钾(8.3克，60.4毫摩尔，1.5当量)。混合物在室温下搅拌0.5小时，然后在50℃下搅拌5.0小时。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝40/1至20/1)纯化，得到棕色油状产物1-甲氧基-2-(丙-2-炔-1-基氧基)苯(6.3克，收率：96.47％)。LCMS(ESI)：m/z＝163[M+1]+.
氮气保护下，向1-甲氧基-2-(丙-2-炔-1-基氧基)苯(6.3克，38.88毫摩尔，1.0当量)的N,N-二乙基苯胺溶液(60毫升)中加入氟化铯(7.68克，50.55毫摩尔，1.3当量)。混合物在220℃下搅拌7小时。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝100/1至80/1)纯化，得到无色油状产物7-甲氧基-2-甲基苯并呋喃(4.3克，收率：68.25％)。
氮气保护下，向7-甲氧基-2-甲基苯并呋喃(1.7克，10.49毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷溶液(30毫升)中滴加三溴化硼(3.95克，15.74毫摩尔，1.5当量)，将混合物在0℃下搅拌1.5小时。反应液用甲醇淬灭，加水稀释并用二氯甲烷萃取。将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝100/1至50/1)纯化，得到黄色油状产物2-甲基苯并呋喃-7-醇(1.1克，收率：73.33％)。
步骤2b：2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-2)的制备：氮气保护下，向2-甲基苯并呋喃-7-醇(0101-2)(1.1克，7.43毫摩尔，1.4当量)的N,N-二甲基甲酰胺(30毫升)溶液中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(1.0克，5.3毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(1.1克，7.85毫摩尔，1.5当量)。混合物在90℃下搅拌4小时。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1至10/1)纯化，得到白色固体产物2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(1.1克，收率：65.86％)。LCMS(ESI)：m/z＝317[M+1]+.
步骤2c：2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-2)的制备：向2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-2)(500毫克，1.57毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(20毫升)溶液中加入2M氢氧化钠溶液(10毫升)，混合物在室温下搅拌过夜。反应液用4M盐酸溶液调节至pH＝4，并用乙酸乙酯萃取。将所得有机相干燥并减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝303[M+1]+.
步骤2d：2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(化合物0105-2)的制备：氮气保护下，0℃下，向2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-2)(400毫克，1.32毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(15毫升)溶液中加入草酰氯(504毫克，3.97毫摩尔，3.0当量)，N,N-二甲基甲酰胺(1毫克)。混合物在室温下搅拌过夜。反应液减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。
步骤2c：(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-2)的制备：氮气保护下，0℃下向5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(300毫克，1.29毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃溶液中加入氢化钠(154毫克，3.87毫摩尔，3.0当量)，将混合物在室温搅拌1小时。然后在-70℃下缓慢滴加正丁基锂(1.12毫升，2.78毫摩尔，1.3当量)并搅拌1.0小时。然后向反应液中滴加2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(0105-2)(450毫克，粗品)的四氢呋喃溶液(5毫升)并搅拌1.5小时。反应液用氯化铵溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝15/1至2/1)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(60毫克，收率：10.6％)。
步骤2d：(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物2)的制备：往(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-2)(60毫克，0.137毫摩尔，1.0当量)和((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(282毫克，1.69毫摩尔，1.2当量)在叔丁醇(20毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1.5毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1至10/1)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(23毫克，收率：31.5％)。MS(ES+):m/z＝533(M+H)+.熔点：135～146℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.71(s,1H),8.58(d,J＝7.1Hz,1H),8.25(s,1H),7.60(s,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,1H),7.44(d,J＝7.7Hz,1H),7.30–7.16(m,2H),7.05(d,J＝7.9Hz,1H),7.00(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),6.69(s,1H),4.62(t,J＝5.5Hz,1H),4.15(dd,J＝12.9,10.5Hz,2H),3.43(dd,J＝11.8,6.4Hz,1H),3.35(d,J＝7.9Hz,2H),3.17–3.08(m,1H),2.44(s,3H),2.19(d,J＝11.9Hz,1H),1.78(d,J＝13.2Hz,1H),1.57(qd,J＝12.4,3.8Hz,1H),1.43–1.35(m,1H).
实施例3：(2-氯-4-((2-乙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物3)的制备(按照方案一线路制备)
步骤3a:2-乙基苯并呋喃-7-醇(化合物0101-3)的制备：
Figure BDA0003632424340000301
氮气保护下，向邻香草醛(4克，26.29毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(100毫升)溶液中加入2-溴丁酸乙酯(6.67克，34.17毫摩尔，1.3当量)，碳酸铯(17.14克，52.58毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌0.5小时，然后在120℃下搅拌2.0小时。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)纯化，得到黄色固体产物2-(2-甲酰基-6-甲氧基苯氧基)丁酸乙酯(7.0克，收率：100％)。
向2-(2-甲酰基-6-甲氧基苯氧基)丁酸乙酯(7.0克，26.29毫摩尔，1.0当量)的甲醇(30毫升)，水(10毫升)混合溶液中加入氢氧化钠固体(2.1克，52.63毫摩尔，2.0当量)，混合物在60℃下搅拌过夜。反应液用4M盐酸调节至pH＝4，并用乙酸乙酯萃取。所得有机相干燥并减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝239[M+1]+.
氮气保护下，向2-(2-甲酰基-6-甲氧基苯氧基)丁酸(5.6克，23.53毫摩尔，1.0当量)的醋酸酐(60毫升)溶液中加入乙酸钠(5.79克，70.59毫摩尔，3.0当量)，混合物在140℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化，得到黄色油状产物2-乙基-7-甲氧基苯并呋喃(1.5克，收率：77.40％)。
氮气保护下，向2-乙基-7-甲氧基苯并呋喃(1.4克，7.95毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷溶液中滴加三溴化硼(2.98克，11.93毫摩尔，1.5当量)，混合物在0℃下搅拌1.5小时。反应液加甲醇淬灭，加水稀释并用二氯甲烷萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝25/1至15/1)纯化，得到黄色油状产物2-乙基苯并呋喃-7-醇(890毫克，收率：69.10％)。
步骤3b：2-氯-4-((2-乙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-3)的制备：氮气保护下，向2-乙基苯并呋喃-7-醇(0101-3)(890毫克，5.49毫摩尔，1.5当量)的N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)溶液中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(688毫克，3.66毫摩尔，1.0当量)，碳酸钾(3.58克，10.98毫摩尔，3.0当量)，混合物在90℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝20/1至10/1)纯化，得到白色固体产物2-氯-4-((2-乙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(890毫克，收率：46.35％)。LCMS(ESI)：m/z＝331[M+1]+.
步骤3c：2-氯-4-((2-乙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-3)的制备：向2-氯-4-((2-乙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-3)(560毫克，1.70毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(5毫升)溶液中加入2M氢氧化钠溶液(15毫升)，混合物在室温下搅拌过夜。反应液用4M盐酸调节至pH＝4，并用乙酸乙酯萃取。所得有机相干燥并减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝317[M+1]+.
步骤3d：2-氯-4-((2-乙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(化合物0105-3)的制备：氮气保护下，0℃下，向2-氯-4-((2-乙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-3)(510毫克，1.61毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(15毫升)溶液中加入草酰氯(615毫克，4.84毫摩尔，3.0当量)，N,N-二甲基甲酰胺(1毫克)，混合物在室温下搅拌过夜。反应液减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。
步骤3e：(2-氯-4-((2-乙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-3)的制备：氮气保护下，0℃下向5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(420毫克，1.81毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(20毫升)溶液中加入氢化钠(217毫克，5.43毫摩尔，3.0当量)，将混合物在室温下搅拌1小时。然后在-70℃下缓慢滴加正丁基锂(0.94毫升，2.35毫摩尔，1.3当量)并搅拌1.0小时。在-70℃下，将2-氯-4-((2-乙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(0105-3)(520毫克，粗品)的3毫升四氢呋喃滴加至反应液中并搅拌1.5小时。反应液用氯化铵溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝15/1至2/1，10％二氯甲烷)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((2-乙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(390毫克，收率：53.0％)。LCMS(ESI)：m/z＝452[M+1]+.
步骤3f：(2-氯-4-((2-乙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物3)的制备：往(2-氯-4-((2-乙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-3)(100毫克，0.221毫摩尔，1.0当量)和((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(34.8毫克，0.265毫摩尔，1.2当量)在叔丁醇(10毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.5毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用制备薄层色谱(二氯甲烷/甲醇＝12/1)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((2-乙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(65毫克，收率：53.8％)。MS(ES+):m/z＝547(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.72(s,1H),8.58(d,J＝7.1Hz,1H),8.25(s,1H),7.59–7.54(m,2H),7.44(d,J＝7.7Hz,1H),7.24(dd,J＝12.9,5.0Hz,2H),7.08–6.98(m,2H),6.69(s,1H),4.61(t,J＝5.6Hz,1H),4.15(dd,J＝12.8,10.2Hz,2H),3.47–3.39(m,1H),3.34(dd,J＝11.7,6.3Hz,2H),3.18–3.07(m,1H),2.78(q,J＝7.4Hz,2H),2.19(d,J＝11.9Hz,1H),1.78(d,J＝13.1Hz,1H),1.64–1.49(m,1H),1.39(dd,J＝16.9,6.5Hz,1H),1.24(t,J＝7.5Hz,3H).
实施例4：(2-氯-4-((2-异丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基))4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物4)的制备(按照方案一线路制备)
步骤4a：2-异丙基苯并呋喃-7-醇(化合物0101-4)的制备:
Figure BDA0003632424340000321
向2-羟基-3-甲氧基苯甲醛(1.52克，10.0毫摩尔，1.0当量)的50毫升二甲基甲酰胺溶液加入2-溴异戊酸甲酯(2.05克，10.5毫摩尔，1.05当量)和碳酸钾(4.89克，15.0毫摩尔，1.5当量)。混合物在90℃下搅拌8小时，混合物经过硅藻土过滤，向滤液中加入30毫升2M氢氧化钠水溶液，混合物在70℃下搅拌3小时。加入乙酸乙酯，用饱和食盐水洗，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到棕色固体2-(2-甲酰基-6-甲氧基苯氧基)-3-甲基丁酸(3.0克，粗品)。MS(ES+):m/z 253(M+H)+.
向2-(2-甲酰基-6-甲氧基苯氧基)-3-甲基丁酸(3.0克，11.9毫摩尔，1.0当量)的30毫升乙酸酐溶液加入乙酸钠(2.93克，35.7毫摩尔，3.0当量)。混合物在140℃下搅拌过夜。混合物减压浓缩，加入乙酸乙酯，经饱和食盐水洗，有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝30/1到20/1)得到白色固体2-异丙基-7-甲氧基苯并呋喃(243毫克，收率：10％)。MS(ES+):m/z 191(M+H)+.
氮气保护下，在0℃下，向2-异丙基-7-甲氧基苯并呋喃(240毫克，1.2毫摩尔，1.0当量)的10毫升二氯甲烷溶液中滴加1.2毫升2M三溴化硼的二氯甲烷溶液。混合物在室温下搅拌1小时，用甲醇和水淬灭，加入二氯甲烷，经水洗，饱和食盐水洗。有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到黄色固体2-异丙基苯并呋喃-7-醇(227毫克，粗品)。MS(ES+):m/z177(M+H)+.
步骤4b：2-氯-4-((2-异丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-4)的制备:在氮气保护下，2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(195毫克，1.03毫摩尔，0.8当量)，2-异丙基苯并呋喃-7-醇(0101-4)(227毫克，1.29毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(539毫克，3.90毫摩尔，3.0当量)在5毫升二甲基甲酰胺的混合物置于90℃下搅拌过夜。加入乙酸乙酯，用饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经过硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝30/1到20/1)，得到黄色固体2-氯-4-((2-异丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(314毫克，收率：88％)。MS(ES+):m/z 345(M+H)+.
步骤4c：2-氯-4-((2-异丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-4)的制备:将2-氯-4-((2-异丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-4)(314毫克，0.91毫摩尔，1.0当量)溶解于5毫升四氢呋喃，加入8毫升2M氢氧化钠水溶液。混合物在60℃下搅拌6小时。加入3M氯化氢水溶液，调pH值到2。加入乙酸乙酯萃取，用水和饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到黄色固体2-氯-4-((2-异丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(298毫克，收率：99％)。MS(ES+):m/z 331(M+H)+.
步骤4d：2(2-氯-4-((2-异丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-4)的制备:在氮气保护下，将2-氯-4-((2-异丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-4)(232毫克，0.67毫摩尔，1.0当量)溶解于9毫升二氯甲烷和1.0毫升四氢呋喃。加入0.01毫升二甲基甲酰胺。草酰氯(254毫克，2.0毫摩尔，3.0当量)溶解于0.5毫升二氯甲烷，并在室温下加入到上述混合物中。混合物在在室温下搅拌3小时。混合物减压浓缩至干。将5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(226毫克，1.0毫摩尔，1.5当量)在氮气下溶解于25毫升无水四氢呋喃，并冷却到0℃。加入氢化钠(144毫克，3.0毫摩尔，4.5当量)，然后混合物在室温下搅拌30分钟。混合物冷却至-70℃，滴加1.6M正丁基锂的正己烷溶液(0.82毫升，1.3毫摩尔，1.95当量)。混合物在-70℃搅拌1小时。上述所得酰氯溶解于1毫升无水四氢呋喃，然后滴加到上述混合物中。混合物在-70℃下搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，加入乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗。有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝3/1到1/1)得到黄色固体2(2-氯-4-((2-异丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(164毫克，收率：40％)。MS(ES+):m/z 466(M+H)+.
步骤4e：(2-氯-4-((2-异丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基))4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物4)的制备:将2(2-氯-4-((2-异丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-4)(80毫克，0.17毫摩尔，1.0当量)，((2S,5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(32毫克，0.19毫摩尔，1.1当量)和二异丙基乙胺(89毫克，0.69毫摩尔，4.0当量)加入到10毫升叔丁醇中，混合物在90℃下搅拌过夜。混合物减压浓缩，加入乙酸乙酯萃取，经水和饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经过制备薄层色谱纯化(展开剂为：二氯甲烷/甲醇＝30/1)，得到黄色固体(2-氯-4-((3-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基))4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(53毫克，收率：54％)。MS(ES+):m/z 561(M+H)+；熔点198～200℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.72(s,1H),8.57(d,J＝7.2Hz,1H),8.24(s,1H),7.62–7.54(m,2H),7.43(dd,J＝7.7,0.9Hz,1H),7.26–7.20(m,2H),7.08–7.00(m,2H),6.67(d,J＝1.0Hz,1H),4.61(t,J＝5.6Hz,1H),4.21–4.06(m,2H),3.46–3.38(m,1H),3.37–3.30(m,2H),3.12(t,J＝11.6Hz,1H),3.06(td,J＝13.4,7.2Hz,1H),2.18(d,J＝12.4Hz,1H),1.78(d,J＝13.7Hz,1H),1.63–1.49(m,1H),1.45–1.34(m,1H),1.27(t,J＝11.2Hz,6H).
实施例5：(2-氯-4-((2-环丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物5)的制备(按照方案一线路制备)
步骤5a：2-环丙基苯并呋喃-7-醇(化合物0101-5)的制备:
Figure BDA0003632424340000341
往2-羟基-3-甲氧基苯甲醛(1.0克，6.57毫摩尔，1.0当量)和碳酸铯(2.57克，7.88毫摩尔，1.2当量)在N,N-二甲基甲酰啊(5毫升)的混合物中加入2-溴-2-环丙基乙酸乙酯(1.43克，6.90毫摩尔，1.2当量)。混合物在室温下搅拌5小时。混合物用水(40毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到淡黄色油状物2-环丙基-2-(2-甲酰基-6-甲氧基苯氧基)乙酸乙酯(1.87克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 279[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)。
往2-环丙基-2-(2-甲酰基-6-甲氧基苯氧基)乙酸乙酯(1.83克，6.57毫摩尔，1.0当量)在四氢呋喃(15毫升)和水(5毫升)的混合物中加入氢氧化钠(788毫克，19.71毫摩尔，3.0当量)。混合物在室温下搅拌2小时。混合物用水(20毫升)稀释。加入1N稀盐酸调节pH＝3。水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到白色固体2-环丙基-2-(2-甲酰基-6-甲氧基苯氧基)乙酸(1.60克，收率：98％)。LCMS(ESI)：m/z 251[M+1]+；TLC：Rf 0.3(二氯甲烷:甲醇＝10:1)。
往2-环丙基-2-(2-甲酰基-6-甲氧基苯氧基)乙酸(1.60克，6.40毫摩尔，1.0当量)在乙酸酐(12毫升)的混合物中加入乙酸钠(1.57克，19.20毫摩尔，3.0当量)。混合物在氮气氛围下加热到140℃反应3.5小时。混合物用水(60毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯30：1)纯化，得到淡黄色油状物2-环丙基-7-甲氧基苯并呋喃(864毫克，收率：72％)。LCMS(ESI)：m/z 189[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)。
往氢化钠(60％，745毫克，18.62毫摩尔，5.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)中的混合物中加入乙硫醇(1.38毫升，18.62毫摩尔，5.0当量)。混合物在室温下搅拌5分钟。加入2-环丙基-7-甲氧基苯并呋喃(700毫克，3.72毫摩尔，1.0当量)，然后将混合物在氮气氛围下加热到155℃反应1.5小时。混合物用饱和氯化铵溶液(30毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到淡黄色油状物2-环丙基苯并呋喃-7-醇(647毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 175[M+1]+；TLC：Rf 0.5(PE:乙酸乙酯＝10:1)。
步骤5b：2-氯-4-((2-环丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-5)的制备:往2-环丙基苯并呋喃-7-醇(0101-5)(648毫克，3.72毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(616毫克，4.46毫摩尔，1.2当量)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)的混合物中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(1.05克，5.58毫摩尔，1.5当量)。混合物在氮气氛围下加热到90℃反应过夜。混合物用水(30毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯20：1)纯化，得到白色固体2-氯-4-((2-环丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(1.27克，收率：100％)。LCMS(ESI)：m/z 343[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝8:1)。
步骤5c：2-氯-4-((2-环丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-5)的制备:往2-氯-4-((2-环丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-5)(1.32克，3.86毫摩尔，1.0当量)在甲醇(10毫升)和水(5毫升)的混合物中加入氢氧化钠(310毫克，7.72毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌过夜。混合物用水(30毫升)稀释。加入1N稀盐酸调节pH＝3.水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到白色固体2-氯-4-((2-环丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(1.11克，收率：87％)。LCMS(ESI)：m/z 329[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷:甲醇＝10:1)。
步骤5d：2-氯-4-((2-环丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(化合物0105-5)的制备:往2-氯-4-((2-环丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-5)(200毫克，0.61毫摩尔，1.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(2.2毫克，0.03毫摩尔，0.1当量)在二氯甲烷(8毫升)和四氢呋喃(1毫升)的混合物中加入草酰氯(0.10毫升，1.22毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌5小时。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到淡黄色油状物2-氯-4-((2-环丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(212毫克，粗品)。TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)。
步骤5e：(2-氯-4-((2-环丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-5)的制备:在氮气氛围下往氢化钠(60％，61毫克，1.52毫摩尔，2.0当量)在四氢呋喃(4毫升)的混合物中加入5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(177毫克，0.76毫摩尔，1.0当量)。混合物在室温下搅拌10分钟，然后冷却到-78℃。逐滴加入正丁基锂(2.5M己烷溶液，0.37毫升，0.91毫摩尔，1.2当量)并搅拌1小时。逐滴加入2-氯-4-((2-环丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(212毫克，0.61毫摩尔，0.8当量)的四氢呋喃(1毫升)溶液，然后在-78℃下继续搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液(30毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯2：1)，得到白色固体(2-氯-4-((2-环丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(145毫克，收率：41％)。LCMS(ESI)：m/z 464[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)。
步骤5f：(2-氯-4-((2-环丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物5)的制备:往(2-氯-4-((2-环丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-5)(80毫克，0.17毫摩尔，1.0当量)和((2S,5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(38毫克，0.22毫摩尔，1.3当量)在叔丁醇(8毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.15毫升，0.86毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下在90℃加热过夜。混合物用水(30毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(乙酸乙酯：二氯甲烷∶甲醇＝10：10：2)纯化，得到白色固体(2-氯-4-((2-环丙基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(40毫克，收率：42％)。LCMS(ESI)：m/z 559[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：142-145℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.72(s,1H),8.57(d,J＝7.1Hz,1H),8.24(s,1H),7.56(d,J＝8.2Hz,2H),7.38(d,J＝7.6Hz,1H),7.27–7.12(m,2H),7.07–6.97(m,2H),6.66(s,1H),4.60(t,J＝5.6Hz,1H),4.15(d,J＝7.8Hz,2H),3.57–3.39(m,1H),3.33(dd,J＝11.7,6.3Hz,2H),3.23–3.08(m,1H),2.18(d,J＝12.5Hz,1H),2.14–2.03(m,1H),1.78(d,J＝13.1Hz,1H),1.65–1.50(m,1H),1.45–1.32(m,1H),1.07–0.91(m,2H),0.87–0.72(m,2H).
实施例6：(2-氯-4-((2-(羟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物6)的制备(按照方案一线路制备)
步骤6a：2-(羟甲基)苯并呋喃-7-醇(化合物0101-6)的制备:
Figure BDA0003632424340000371
氮气保护下，在0℃下往7-甲氧基苯并呋喃-2-甲酸乙酯(2.9克，13.18毫摩尔，1.0当量)在二氯甲烷(30毫升)的混合物中加入2mol/L的三溴化硼(10毫升，19.77毫摩尔，1.5当量)。混合物在0℃下搅拌2小时。混合物用甲醇猝灭。混合物用水(50毫升)稀释，然后用二氯甲烷(50毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(50毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)得到黄色固体7-羟基苯并呋喃-2-甲酸乙酯(2.5克，收率：92.6％)LCMS(ESI)：m/z 207[M+1]+。
氮气保护下，在0℃下，往7-羟基苯并呋喃-2-甲酸乙酯(1.95克，9.47毫摩尔，1.0当量)在四氢呋喃(20毫升)的混合物中加入1mol/L的氢化铝锂(18.9毫升，18.93毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌3小时。向反应液加入水(2毫升)。然后向混合物加入氢氧化钠溶液(2毫升)和水(6毫升)。混合物在室温下搅拌15分钟。向混合物加入无水硫酸钠并继续搅拌15分钟。然后将混合物过滤并用乙酸乙酯(20毫升×3)洗涤。将滤液浓缩得到黄色固体2-(羟甲基)苯并呋喃-7-醇(1.07克，收率：69％)LCMS(ESI)：m/z 165[M+1]+。
步骤6b：2-氯-4-((2-(羟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-6)的制备:氮气保护下，往2-(羟甲基)苯并呋喃-7-醇(0101-6)(1.35克，8.23毫摩尔，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)的混合物中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(2.02克，10.70毫摩尔，1.3当量)和碳酸钾(1.7克，12.35毫摩尔，1.5当量)。混合物在90℃下搅拌过夜。混合物用水(100毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(75毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(75毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(甲醇：二氯甲烷＝1:20)得到黄色固体2-氯-4-((2-(羟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(1.75克，收率：69％)LCMS(ESI)：m/z 333[M+1]+。
步骤6c：(2-氯-4-((2-((甲氧基甲氧基)甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-6)的制备:氮气保护下，在0℃下往2-氯-4-((2-(羟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-6)(500毫克，1.506毫摩尔，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(389毫克，3.012毫摩尔，2.0当量)在二氯甲烷(8毫升)的混合物中加入溴甲基甲基醚(226毫克，1.807毫摩尔，1.2当量)。混合物在45℃下搅拌过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用二氯甲烷(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)得到黄色固体2-氯-4-((2-(((甲氧基甲氧基)甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(420毫克，收率：74％)LCMS(ESI)：m/z 377[M+1]+。氮气保护下，在0℃下，向5-溴-4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(286毫克，1.229毫摩尔，1.1当量)在四氢呋喃溶液(10毫升)的混合物中加入氢化钠(89毫克，2.234毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌1小时。在-70℃下往混合物逐滴加入正丁基锂(0.9毫升，1.452毫摩尔，1.3当量)，混合物在-70℃下搅拌1小时。然后向混合物缓慢加入上述制备得到的2-氯-4-((2-(((甲氧基甲氧基)甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(420毫克，1.117毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃溶液(2毫升)，混合物在-70℃下搅拌1小时。反应液用饱和氯化铵溶液(5毫升)淬灭。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)得到黄色固体(2-氯-4-((2-((甲氧基甲氧基)甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(80毫克，收率：14.4％)，LCMS(ESI)：m/z 498[M+1]+。
步骤6d：(2-氯-4-((2-(羟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物6)的制备:氮气保护下，往(2-氯-4-((2-((甲氧基甲氧基)甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-6)(80毫克，0.161毫摩尔，1.0当量)和((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(32毫克，0.193毫摩尔，1.2当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1毫升)。混合物在90℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩得到黄色固体(2-氯-4-((2-((甲氧基甲氧基)甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(126毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 593[M+1]+。将上述制备得到的(2-氯-4-((2-((甲氧基甲氧基)甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(126毫克，0.212毫摩尔，1.0当量)的氯化氢甲醇溶液(4M溶液，3毫升)的混合物在45℃下搅拌1小时。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体(2-氯-4-((2-(羟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(20毫克，收率：17.2％)。LCMS(ESI)：m/z 549[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.60(d,J＝7.2Hz,1H),8.18(s,1H),7.55–7.47(m,3H),7.27(t,J＝7.9Hz,1H),7.20(d,J＝2.3Hz,1H),7.09(d,J＝7.9Hz,1H),7.00(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),6.86(s,1H),5.55(s,1H),4.64(s,1H),4.55(s,2H),4.13(dd,J＝20.3,6.9Hz,3H),3.40(d,J＝4.5Hz,2H),3.10(t,J＝10.0Hz,1H),2.17(d,J＝11.9Hz,1H),1.77(d,J＝12.6Hz,1H),1.55(dd,J＝12.1,3.6Hz,1H),1.37(d,J＝13.4Hz,1H).
实施例7：(2-氯-4-((2-(氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物10)的制备(按照方案一线路制备)
步骤7a：2-氯-4-((2-(氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-10)的制备:在氮气保护和0℃下，向2-氯-4-((2-(羟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-6)(178毫克，0.54毫摩尔，1.0当量)的25毫升二氯甲烷溶液中加入二乙胺基三氟化硫(131毫克，0.81摩尔，1.5当量)。混合物搅拌2小时，加入水，分层，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化得到白色固体2-氯-4-((2-(氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(89毫克，收率：49％)。MS(ES+):m/z 335(M+H)+.
步骤7b：2-氯-4-((2-(氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-10)的制备:将2-氯-4-((2-(氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-10)(89毫克，0.27毫摩尔，1.0当量)溶解于4毫升四氢呋喃，加入8毫升2M氢氧化钠水溶液。混合物在40℃下搅拌8小时。加入3M盐酸水溶液，调pH值到2。加入乙酸乙酯萃取，用水和饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到白色固体2-氯-4-((2-(氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(84毫克，收率：97％)。MS(ES+):m/z 321(M+H)+.
步骤7c：(2-氯-4-((2-(氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-10)的制备:在氮气保护下，将2-氯-4-((2-(氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-10)(84毫克，0.26毫摩尔，1.0当量)溶解于5毫升二氯甲烷和1毫升四氢呋喃。加入0.01毫升N，N-二甲基甲酰胺。草酰氯(100毫克，0.79毫摩尔，3.0当量)溶解于1.0毫升二氯甲烷，并在室温下加入到上述混合物中。混合物在室温下搅拌3小时。混合物减压浓缩至干。将5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(89毫克，0.39毫摩尔，1.5当量)在氮气保护下溶解于10毫升无水四氢呋喃，并冷却到0℃。加入氢化钠(114毫克，4.4毫摩尔，6.0当量)，然后混合物在室温下搅拌30分钟。混合物冷却至-70℃，滴加1.6M正丁基锂的正己烷溶液(0.48毫升，0.77毫摩尔，1.95当量)。混合物在-70℃搅拌1小时。上述所得酰氯溶解于1.5毫升无水四氢呋喃，然后滴加到上述混合物中。混合物在-70℃下搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，加入乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗。有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备薄层色谱纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到黄色固体(2-氯-4-((2-(氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(52毫克，收率：43％)。MS(ES+):m/z 456(M+H)+.
步骤7d：(2-氯-4-((2-(氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物10)的制备:将(2-氯-4-((2-(氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(52毫克，0.11毫摩尔，1.0当量)(0107-10)，((2S,5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(21毫克，0.13毫摩尔，1.1当量)和二异丙基乙胺(89毫克，0.69毫摩尔，6.0当量)加入到10毫升叔丁醇中，混合物在90℃下搅拌过夜。将混合物减压浓缩，加入乙酸乙酯萃取，经水和饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经过制备薄层色谱纯化(展开剂为：二氯甲烷/甲醇＝30/1)，得到黄色固体(2-氯-4-((2-(氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(29毫克，收率：47％)。MS(ES+):m/z 551(M+H)+；熔点144～146℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.72(s,1H),8.58(d,J＝7.2Hz,1H),8.25(s,1H),7.70–7.53(m,3H),7.35(t,J＝7.9Hz,1H),7.30–7.17(m,3H),7.05(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),5.55(d,J＝48.3Hz,2H),4.61(s,1H),4.24–4.02(m,2H),3.40(dd,J＝22.6,15.5Hz,3H),3.12(t,J＝11.6Hz,1H),2.19(d,J＝12.2Hz,1H),1.78(d,J＝13.8Hz,1H),1.64–1.51(m,1H),1.45–1.35(m,1H).
实施例8：(2-氯-4-((2-(二氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物11)的制备(按照方案一线路制备)
步骤8a：2-氯-4-((2-(二氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-11)的制备:向2-氯-4-((2-(羟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-6)(300毫克，0.9毫摩尔，1.0当量)的40毫升二氯甲烷溶液中加入二氧化锰(1.18克，13.5摩尔，15.0当量)。混合物在室温下搅拌24小时，经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到白色固体2-氯-4-((2-甲酰基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(289毫克，粗品)。MS(ES+):m/z 331(M+H)+.向上述制备得到的2-氯-4-((2-甲酰基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(289毫克，0.87毫摩尔，1.0当量)的15毫升二氯甲烷溶液中加入二乙胺基三氟化硫(565毫克，3.5摩尔，4.0当量)。混合物在室温下搅拌2小时，加入水，分层，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝40/1至15/1)纯化得到白色固体2-氯-4-((2-(二氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(286毫克，收率：93％)。MS(ES+):m/z 353(M+H)+.
步骤8b：2-氯-4-((2-(二氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-11)的制备:将2-氯-4-((2-(二氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-11)(286毫克，0.81毫摩尔，1.0当量)溶解于10毫升四氢呋喃，加入8毫升2M氢氧化钠水溶液。混合物在50℃下搅拌16小时。加入3M氯化氢水溶液，调pH值到2。加入乙酸乙酯萃取，用水和饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到白色固体2-氯-4-((2-(二氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(293毫克，粗品)。MS(ES+):m/z 339(M+H)+.
步骤8c：(2-氯-4-((2-(二氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-11)的制备:在氮气保护下，将2-氯-4-((2-(二氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-11)(100毫克，0.30毫摩尔，1.0当量)溶解于5毫升二氯甲烷和1毫升四氢呋喃。加入0.01毫升二甲基甲酰胺。草酰氯(113毫克，0.89毫摩尔，3.0当量)溶解于1.0毫升二氯甲烷，并在室温下加入到上述混合物中。混合物在室温下搅拌3小时。混合物减压浓缩至干。将5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(101毫克，0.44毫摩尔，1.5当量)在氮气保护下溶解于8毫升无水四氢呋喃，并冷却到0℃。加入氢化钠(86毫克，1.78毫摩尔，6.0当量)，然后混合物在室温下搅拌30分钟。混合物冷却至-70℃，滴加1.6M正丁基锂的正己烷溶液(0.54毫升，0.87毫摩尔，1.95当量)。混合物在-70℃搅拌1小时。上述所得酰氯溶解于1.5毫升无水四氢呋喃，然后滴加到上述混合物中。混合物在-70℃下搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，加入乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗。有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备薄层色谱纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到黄色固体(2-氯-4-((2-(二氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(59毫克，收率：42％)。MS(ES+):m/z 474(M+H)+.
步骤8d：(2-氯-4-((2-(二氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物11)的制备:将(2-氯-4-((2-(二氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-11)(59毫克，0.13毫摩尔，1.0当量)，((2S,5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(23毫克，0.14毫摩尔，1.1当量)和二异丙基乙胺(82毫克，0.63毫摩尔，5.0当量)加入到10毫升叔丁醇中，混合物在90℃下搅拌过夜。混合物减压浓缩，加入乙酸乙酯萃取，经水和饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经过制备薄层色谱纯化(展开剂为：二氯甲烷/甲醇＝15/1)，得到黄色固体(2-氯-4-((2-(二氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(40毫克，收率：55％)。MS(ES+):m/z 569(M+H)+；熔点139～141℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.73(s,1H),8.58(d,J＝7.2Hz,1H),8.25(s,1H),7.66(d,J＝7.8Hz,1H),7.59(d,J＝8.5Hz,2H),7.51(t,J＝2.1Hz,1H),7.43–7.17(m,4H),7.09(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),4.62(t,J＝5.6Hz,1H),4.22–4.00(m,2H),3.47–3.39(m,1H),3.39–3.33(m,2H),3.13(t,J＝11.6Hz,1H),2.19(d,J＝12.1Hz,1H),1.79(d,J＝13.5Hz,1H),1.58(ddd,J＝24.1,12.4,3.9Hz,1H),1.46–1.32(m,1H).
实施例9：(2-氯-4-((2-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物13)的制备(按照方案一线路制备)
步骤9a：2-氯-4-((2-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸叔丁酯(化合物0103-13)的制备:往7-羟基苯并呋喃(0101-1)(0.60克，4.44毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(0.92克，6.66毫摩尔，1.5当量)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)的混合物中加入2-氯-4-氟苯甲酸叔丁酯(0102-1)(1.03克，4.44毫摩尔，102当量)。混合物在氮气氛围下在95℃加热过夜。混合物用水(30毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯30：1)纯化，得到淡黄色油状物4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯甲酸叔丁酯(1.23克，收率：80％)。LCMS(ESI)：m/z 345[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)。在氮气氛围和-78℃下，往二异丙胺(0.61毫升，4.34毫摩尔，1.3当量)在四氢呋喃(5毫升)的混合物中逐滴加入正丁基锂(2.5M的己烷溶液，1.74毫升，4.34毫摩尔，1.3当量)。混合物搅拌5分钟然后升到0℃搅拌5分钟。混合物重新冷却到-78℃。逐滴加入上述制备得到的4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯甲酸叔丁酯(1.15克，3.34毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(5毫升)溶液，并将混合物搅拌1.5小时。逐滴加入N-氟代双苯磺酰胺(1.37克，4.34毫摩尔，1.3当量)的四氢呋喃(5毫升)溶液。混合物在-78℃下搅拌0.5h，然后升到室温反应1小时。加入饱和氯化铵水溶液(30毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯60：1)，得到淡黄色油状物2-氯-4-((2-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸叔丁酯(783毫克，收率：65％)。LCMS(ESI)：m/z 363[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)。
步骤9b：2-氯-4-((2-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-13)的制备:往2-氯-4-((2-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸叔丁酯(0103-13)(525毫克，1.45毫摩尔，1.0当量)在二氯甲烷(10毫升)的混合物中加入三氟乙酸(3毫升)。混合物在室温下搅拌2小时。减压除去溶剂。残余物在真空下干燥，得到白色固体2-氯-4-((2-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(427毫克，收率：96％)。LCMS(ESI)：m/z 307[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷:甲醇＝10:1)。
步骤9c：2-氯-4-((2-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(化合物0105-13))的制备:往2-氯-4-((2-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-13)(200毫克，0.65毫摩尔，1.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(1.9毫克，0.03毫摩尔，0.04当量)在二氯甲烷(7毫升)的混合物中加入草酰氯(0.11毫升，1.30毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌过夜。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到淡黄色油状物2-氯-4-((2-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(212毫克，粗品)。
步骤9d：(2-氯-4-((2-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-13)的制备:在氮气氛围下往氢化钠(60％，65毫克，1.64毫摩尔，2.0当量)在四氢呋喃(3.5毫升)的混合物中加入5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(190毫克，0.82毫摩尔，1.0当量)。混合物在室温下搅拌10分钟，然后冷却到-78℃。逐滴加入正丁基锂(2.5M己烷溶液，0.39毫升，0.98毫摩尔，1.2当量)并搅拌1小时。逐滴加入2-氯-4-((2-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(0105-13)(212毫克，0.65毫摩尔，0.8当量)的四氢呋喃(1.5毫升)溶液，然后在-78℃下搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液(30毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯2：1)，得到淡黄色固体(2-氯-4-((2-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(56毫克，收率：19％)。LCMS(ESI)：m/z 442[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)。
步骤9e：(2-氯-4-((2-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物13)的制备:往(2-氯-4-((2-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-13)(56毫克，0.13毫摩尔，1.0当量)和(3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(0108-1)(28毫克，0.17毫摩尔，1.3当量)在叔丁醇(8毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.11毫升，0.64毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下加热到90℃反应过夜。混合物用水(20毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过Pre-HPLC(乙腈-0.1％三氟乙酸体系)纯化，得到白色固体(2-氯-4-((2-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(35毫克，收率：51％)。LCMS(ESI)：m/z 537[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：151-153℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.72(s,1H),8.57(d,J＝7.0Hz,1H),8.25(s,1H),7.70–7.55(m,2H),7.49(d,J＝7.7Hz,1H),7.40–7.21(m,2H),7.14(d,J＝8.0Hz,1H),7.07(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),6.47(d,J＝6.4Hz,1H),4.63(t,J＝5.4Hz,1H),4.16(d,J＝7.6Hz,2H),3.42(dd,J＝11.7,6.0Hz,3H),3.11(dd,J＝21.0,9.4Hz,1H),2.19(d,J＝11.7Hz,1H),1.78(d,J＝12.8Hz,1H),1.58(dt,J＝20.8,10.4Hz,1H),1.38(dt,J＝21.1,10.5Hz,1H).
实施例10：((2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物14)的制备(按照方案一线路制备)
步骤10a：2-氯苯并呋喃-7-醇(化合物0101-14)的制备：
Figure BDA0003632424340000441
在氮气的氛围下，在-30℃下将正丁基锂(3.24毫升,2.5摩尔/升的正己烷溶液,8.107毫摩尔，1.2当量)滴加至二异丙胺(887毫克，8.783毫摩尔，1.3当量)的20毫升四氢呋喃溶液。混合物在-30℃下搅拌30分钟。混合物冷却至室温。滴加7-甲氧基苯并呋喃(1.0克，6.756毫摩尔，1当量)的2毫升四氢呋喃溶液。混合物在-70℃下继续搅拌2小时。滴加六氯乙烷(1.92克，8.107毫摩尔，1.2当量)的2毫升四氢呋喃溶液。混合物在-70℃下搅拌1小时。然后，反应用氯化铵水溶液淬灭。混合物用乙酸乙酯萃取。有机相用亚硫酸氢钠水溶液洗。有机相用硫酸钠干燥。将有机相浓缩并用硅胶柱层析纯化(洗脱剂:石油醚)，得到白色固体产物2-氯-7-甲氧基苯并呋喃(1.18克，粗品)。MS(ESI):m/z 183(M+H)+.
在氮气的氛围下，在冰浴下将三溴化硼(19毫升，1.0摩尔/升的二氯甲烷溶液，19.35毫摩尔，3.0当量)滴加至2-氯-7-甲氧基苯并呋喃(1.18克，6.45毫摩尔，1.0当量)的5毫升四氢呋喃溶液。混合物在室温下搅拌2小时。反应用冰水溶液淬灭。混合物用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗。有机相用硫酸钠干燥。有机相浓缩并用硅胶柱层析纯化(洗脱剂:石油醚)，得到白色固体产物2-氯苯并呋喃-7-醇为(1.0克，粗品).MS(ESI):m/z 169(M+H)+.
步骤10b：2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-14)的制备：氮气保护下，向2-氯苯并呋喃-7-醇(0101-14)(927毫克，4.92毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)溶液中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(831毫克，4.92毫摩尔，1.0当量)，碳酸钾(1.35克，9.84毫摩尔，2.0当量)，混合物在90℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝100/1至30/1)纯化，得到黄色固体产物2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(1.01克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z＝338[M+1]+.
步骤10c：2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-14)的制备：向2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-14)(1.01克，2.99毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(8毫升)溶液中加入2M氢氧化钠溶液(2毫升)，混合物在40℃下搅拌过夜。反应液用4M盐酸调节至pH＝1，并过滤。残留物用水洗并干燥。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝342[M+1]+.
步骤10d：(2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-14)的制备:氮气保护下，0℃下，向2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-14)(736毫克，2.278毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷/四氢呋喃(5/5毫升)溶液中加入草酰氯(868毫克，6.834毫摩尔，3.0当量)，N,N-二甲基甲酰胺(1滴)，混合物在室温下搅拌3小时。反应液减压浓缩。残留物不经过进一步纯化直接使用。氮气保护下，0℃下向5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(529毫克，2.278毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃溶液中加入氢化钠(273毫克，6.834毫摩尔，3.0当量)，混合物在室温下搅拌1.0小时。然后在-70℃下缓慢滴加正丁基锂(1.1毫升,2.5摩尔每升的正己烷溶液,2.73毫摩尔，1.2当量)并搅拌1.0小时。上述所得残留物溶于5毫升四氢呋喃滴加至反应液中。反应液用氯化铵溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝15/1至2/1)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(470毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z＝459[M+1]+.
步骤10e：((2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物14)的制备:将((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(100毫克，0.433毫摩尔，1.0当量)的氯化氢二氧六环溶液(4摩尔每升溶液，5毫升)的混合物在室温下搅拌1小时,减压除去溶剂并在真空下干燥，残留物不经过进一步纯化直接使用。往残留物和(2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-14)(165毫克，0.36毫摩尔，1.0当量)在叔丁醇(20毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.5毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用制备高效液相色谱纯化，得到黄色固体产物((2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(50毫克，收率：25.12％)。MS(ES+):m/z＝554(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.71(s,1H),8.58(d,J＝7.2Hz,1H),8.24(s,1H),7.64–7.55(m,2H),7.50(dd,J＝7.8,0.9Hz,1H),7.35(t,J＝7.9Hz,1H),7.30(d,J＝2.4Hz,1H),7.18–7.12(m,2H),7.07(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),4.63(s,1H),4.25–4.00(m,2H),3.43(dd,J＝12.7,7.7Hz,3H),3.12(t,J＝11.6Hz,1H),2.20(dd,J＝8.9,6.2Hz,1H),1.78(d,J＝13.4Hz,1H),1.62–1.50(m,1H),1.42–1.34(m,1H).
实施例11：(2-氯-4-((3-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基))4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物16)的制备(按照方案一线路制备)
步骤11a：3-甲基苯并呋喃-7-醇(化合物0101-16)的制备：
Figure BDA0003632424340000461
向2-甲氧基苯酚(2.0克，16.0毫摩尔，1.0当量)的50毫升乙腈溶液加入溴丙酮(2.6克，19.2毫摩尔，1.2当量)和碳酸钾(4.4克，32.0毫摩尔，2.0当量)。混合物在60℃下搅拌3小时，加入乙酸乙酯，用饱和食盐水洗，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化得到黄色油状物1-(2-甲氧基苯氧基)丙-2-酮(1.9克，收率：65％)。MS(ES+):m/z 181(M+H)+.
向1-(2-甲氧基苯氧基)丙-2-酮(1.9克，10.6毫摩尔，1.0当量)的250毫升甲苯溶液加入多聚磷酸(300毫克，0.89毫摩尔，0.08当量)。混合物在120℃下搅拌过夜。反应用水淬灭，加入乙酸乙酯萃取，经饱和食盐水洗，有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝30/1到20/1)得到白色固体7-甲氧基-3-甲基苯并呋喃(741毫克，收率：43％)。MS(ES+):m/z 163(M+H)+.
气保护下，在0℃下，向7-甲氧基-3-甲基苯并呋喃(741毫克，4.58毫摩尔，1.0当量)的30毫升二氯甲烷溶液中滴加4.1毫升2M三溴化硼的二氯甲烷溶液。混合物在室温下搅拌1小时，用甲醇和水淬灭，加入二氯甲烷，经水洗，饱和食盐水洗。有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到黄色固体3-甲基苯并呋喃-7-醇(660毫克，收率：97％)。MS(ES+):m/z149(M+H)+.
步骤11b：2-氯-4-((3-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-16)的制备:在氮气保护下，2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(690毫克，3.69毫摩尔，1.0当量)，3-甲基苯并呋喃-7-醇(0101-16)(818毫克，5.53毫摩尔，1.5当量)和碳酸钾(1.53克，11.1毫摩尔，3.0当量)在10毫升二甲基甲酰胺的混合物置于90℃下搅拌过夜。加入乙酸乙酯，用饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经过硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝30/1到20/1)，得到黄色固体2-氯-4-((3-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(885毫克，收率：75％)。MS(ES+):m/z 317(M+H)+.
步骤11c：2-氯-4-((3-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-16)的制备:将2-氯-4-((3-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-16)(885毫克，2.80毫摩尔，1.0当量)溶解于14毫升四氢呋喃，加入14毫升2M氢氧化钠水溶液。混合物在40℃下搅拌6小时。加入3M氯化氢水溶液，调pH值到2。加入乙酸乙酯萃取，用水和饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到黄色固体2-氯-4-((3-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(820毫克，收率：96％)。MS(ES+):m/z 303(M+H)+.
步骤11d：2(2-氯-4-((3-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-16)的制备:在氮气保护下，将2-氯-4-((3-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-16)(60毫克，0.198毫摩尔，1.0当量)溶解于3毫升二氯甲烷和0.5毫升四氢呋喃。加入0.01毫升二甲基甲酰胺。草酰氯(76毫克，0.594毫摩尔，3.0当量)溶解于0.5毫升二氯甲烷，并在室温下加入到上述混合物中。混合物在在室温下搅拌3小时。混合物减压浓缩至干。在氮气保护下，将5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(55毫克，0.24毫摩尔，1.23当量)溶解于5毫升无水四氢呋喃，并冷却到0℃。加入氢化钠(29毫克，0.72毫摩尔，3.69当量)，然后混合物在室温下搅拌30分钟。混合物冷却至-70℃，滴加1.6M正丁基锂的正己烷溶液(0.24毫升，0.38毫摩尔，1.9当量)。混合物在-70℃搅拌1小时。上述所得酰氯溶解于1毫升无水四氢呋喃，然后滴加到上述混合物中。混合物在-70℃下搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，加入乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗。有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝3/1到1/1)得到黄色固体2(2-氯-4-((3-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(51毫克，收率：57％)。MS(ES+):m/z 438(M+H)+.
步骤11e：(2-氯-4-((3-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基))4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物16)的制备:将2(2-氯-4-((3-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-16)(50毫克，0.139毫摩尔，1.0当量)，((2S,5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(23毫克，0.139毫摩尔，1.0当量)和二异丙基乙胺(89毫克，0.69毫摩尔，5.0当量)加入到10毫升叔丁醇中，混合物在90℃下搅拌过夜。混合物减压浓缩，加入乙酸乙酯萃取，经水和饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经过制备薄层色谱纯化(展开剂为：二氯甲烷/甲醇＝30/1)，得到黄色固体(2-氯-4-((3-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基))4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(37毫克，收率：50％)。MS(ES+):m/z 533(M+H)+；熔点136～138℃。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.71(s,1H),8.57(d,J＝7.2Hz,1H),8.24(s,1H),7.81(d,J＝1.3Hz,1H),7.59(s,1H),7.56(d,J＝8.5Hz,1H),7.53(dd,J＝7.8,0.9Hz,1H),7.33(t,J＝7.8Hz,1H),7.19(dd,J＝13.2,5.1Hz,2H),6.99(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),4.62(t,J＝5.6Hz,1H),4.19–4.08(m,2H),3.47–3.39(m,1H),3.35(dd,J＝9.0,2.8Hz,2H),3.16–3.07(m,1H),2.25(d,J＝1.2Hz,3H),2.21–2.14(m,1H),1.78(t,J＝10.3Hz,1H),1.65–1.49(m,1H),1.39(ddd,J＝23.3,13.3,3.8Hz,1H).
实施例12：(2-氯-4-((6-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物17)的制备(按照方案一线路制备)
步骤12a：6-甲基苯并呋喃-7-醇(化合物0101-17)的制备:
Figure BDA0003632424340000481
往2-溴-3-甲基苯酚(1.5克，8.02毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(1.66克，12.03毫摩尔，1.5当量)在N,N-二甲基甲酰胺(8毫升)的混合物中加入2-溴-1，1-二乙氧基乙烷(1.98克，10.03毫摩尔，1.25当量)。混合物在氮气氛围下在110℃加热过夜。混合物用水(30毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到棕色油状物2-溴-1-(2,2-二乙氧基乙氧基)-3-甲基苯(2.63克，粗品)。TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)。
往2-溴-1-(2,2-二乙氧基乙氧基)-3-甲基苯(2.60克，8.58毫摩尔，1.0当量)在甲苯(30毫升)的混合物中加入多聚磷酸(3.20克，9.44毫摩尔，1.1当量)。混合物氮气氛围下在110℃加热1.5小时。用水(30毫升)稀释混合物，然后用乙酸乙酯(30毫升×2)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(30毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物经硅胶柱色谱(石油醚)纯化，得到淡黄色油状物7-溴-6-甲基苯并呋喃(1.14克，收率：63％)。TLC：Rf 0.7(石油醚)。
往7-溴-6-甲基苯并呋喃(2.17克，10.28毫摩尔，1.0当量)在二甲亚砜(30毫升)的混合物中加入Pin2B2(3.92克，15.43毫摩尔，1.5当量)，醋酸钾(3.03克，30.84毫摩尔，3.0当量))和Pd(dppf)Cl2(752毫克，1.03毫摩尔，0.1当量)。混合物在氮气氛围下在115℃加热22小时。用水(200毫升)稀释混合物，然后用乙酸乙酯(30毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(30毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯30：1)纯化，得到淡绿色固体4,4,5,5-四甲基-2-(6-甲基苯并呋喃-7-基)-1,3,2-二氧杂硼戊烷(2.0克，收率：75％)。LCMS(ESI)：m/z 259[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)。
往4,4,5,5-四甲基-2-(6-甲基苯并呋喃-7-基)-1,3,2-二氧杂硼戊烷(1.0克，3.88毫摩尔，1.0当量)在甲醇(15毫升)的混合物中滴加双氧水(30％，5毫升)。混合物在室温下搅拌两天。加入饱和亚硫酸钠溶液(20毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(20毫升×2)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯10:1)纯化，得到淡黄色油状物6-甲基苯并呋喃-7-醇(0.294克，收率：51％)。LCMS(ESI)：m/z 149[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝6:1)。
步骤12b：2-氯-4-((6-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-17)的制备:往6-甲基苯并呋喃-7-醇(0101-17)(294毫克，1.986毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(329毫克，2.384毫摩尔，1.2当量)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)的混合物中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(450毫克，2.384毫摩尔，1.2当量)。混合物在氮气氛围下在90℃加热7小时。混合物用水(40毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯30：1)纯化，得到白色固体2-氯-4-((6-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(467毫克，收率：74％)。LCMS(ESI)：m/z 317[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)。
步骤12c：2-氯-4-((6-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-17)的制备:往2-氯-4-((6-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-17)(467毫克，1.48毫摩尔，1.0当量)在四氢呋喃(5毫升)和水(2毫升)的混合物中加入氢氧化钠(177毫克，4.43毫摩尔，3.0当量)。混合物在室温下搅拌过夜。混合物用水(20毫升)稀释。加入1N稀盐酸调节pH＝3.水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到白色固体2-氯-4-((6-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(410毫克，收率：92％)。LCMS(ESI)：m/z 303[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷:甲醇＝10:1)。
步骤12d：2-氯-4-((6-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(化合物0105-17)的制备:往2-氯-4-((6-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-17)(200毫克，0.66毫摩尔，1.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(2.4毫克，0.033毫摩尔，0.1当量)在二氯甲烷(8毫升)的混合物中加入草酰氯(0.11毫升，1.32毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌5小时。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到淡黄色油状物2-氯-4-((6-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(212毫克，粗品)。TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)。
步骤12e：(2-氯-4-((6-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-17)的制备:在氮气氛围下往氢化钠(60％，66毫克，1.66毫摩尔，2.0当量)在四氢呋喃(3.5毫升)的混合物中加入5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(192毫克，0.83毫摩尔，1.0当量)。混合物在室温下搅拌10分钟，然后冷却到-78℃。逐滴加入正丁基锂(2.5M己烷溶液，0.40毫升，1.0毫摩尔，1.2当量)并搅拌1小时。逐滴加入2-氯-4-((6-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(0105-17)(212毫克，0.66毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(1.5毫升)溶液，然后在-78℃下继续搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液(20毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯3：1)，得到(2-氯-4-((6-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(150毫克，收率：41％)。LCMS(ESI)：m/z 438[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)。
步骤12f：(2-氯-4-((6-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物17)的制备:往(2-氯-4-((6-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-17)(80毫克，0.18毫摩尔，1.0当量)和((2S,5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(39.8毫克，0.24毫摩尔，1.3当量)在叔丁醇(8毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.16毫升，0.92毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下在90℃加热过夜。混合物用水(30毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(乙酸乙酯：二氯甲烷∶甲醇＝10：10：2)纯化，得到白色固体(2-氯-4-((6-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(42毫克，收率：43％)。LCMS(ESI)：m/z 533[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：175-178℃。1HNMR(DMSO-d6，500MHz)：δ12.68(s,1H),5.57(d,J＝7.0Hz,1H),8.24(s,1H),7.93(d,J＝2.0Hz,1H),7.58(s,1H),7.53(d,J＝8.5Hz,2H),7.26(d,J＝8.0Hz,1H),7.08(d,J＝2.5Hz,1H),7.01(d,J＝2.5Hz,1H),6.84-6.82(m,1H),4.63-4.60(m,1H),4.16-4.14(m,2H),3.43-3.40(m,1H),3.36-3.30(m,2H),3.13-3.09(m,1H),2.30(s,3H),2.19-2.17(m,1H),1.79-1.77(m,1H),1.60-1.52(m,1H),1.42-1.35(m,1H)。
实施例13：(2-氯-4-((6-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物18)的制备(按照方案一线路制备)
步骤13a：6-氟苯并呋喃-7-醇(化合物0101-18)的制备:往2-(6-氟苯并呋喃-7-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(1.0克，3.8毫摩尔，1.0当量)的甲醇(8毫升)溶液中加入30％H2O2(2毫升)。混合物在室温下搅拌过夜。该反应用亚硫酸氢钠溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝100/1至30/1)纯化得到6-氟苯并呋喃-7-醇(580毫克，粗品)为黄色油状物。LCMS(ESI)：m/z 313[M+1]+。
步骤13b：2-氯-4-((6-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-18)的制备：氮气保护下，向6-氟苯并呋喃-7-醇(0101-18)(796毫克，5.17毫摩尔，1.3当量)的N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)溶液中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(750毫克，3.976毫摩尔，1.0当量)，碳酸钾(1.1克，7.952毫摩尔，2.0当量)，混合物在90℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝100/1至30/1)纯化，得到白色固体产物2-氯-4-((6-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(389毫克，收率：30.63％)。LCMS(ESI)：m/z＝321[M+1]+.
步骤13c：2-氯-4-((6-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-18)的制备：向2-氯-4-((6-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-18)(389毫克，1.2毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(8毫升)溶液中加入2M氢氧化钠溶液(2毫升)，混合物在40℃下搅拌过夜。反应液用4M盐酸调节至pH＝1，并过滤。残留物用水洗并干燥。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝307[M+1]+.
步骤13d：(2-氯-4-((6-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-18)的制备:氮气保护下，0℃下，向2-氯-4-((6-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-18)(400毫克，1.307毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷/四氢呋喃(5/5毫升)溶液中加入草酰氯(498毫克，3.921毫摩尔，3.0当量)，N,N-二甲基甲酰胺(1滴)，混合物在室温下搅拌3小时。反应液减压浓缩。残留物不经过进一步纯化直接使用。氮气保护下，0℃下向5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(303.8毫克，1.307毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃溶液中加入氢化钠(157毫克，3.921毫摩尔，3.0当量)，混合物在室温下搅拌1.0小时。然后在-70℃下缓慢滴加正丁基锂(1.06毫升,1.6摩尔每升的正己烷溶液,1.699毫摩尔，1.3当量)并搅拌1.0小时。然后滴加上述所得残留物的5毫升四氢呋喃溶液。反应液用氯化铵溶液淬灭，加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝15/1至2/1)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((6-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(80毫克，收率：13.85％)。LCMS(ESI)：m/z＝443[M+1]+.
步骤13e：(2-氯-4-((6-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物18)的制备:将((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(50毫克，0.217毫摩尔，1.2当量)的氯化氢二氧六环溶液(4摩尔每升溶液，4毫升)的混合物在室温下搅拌1小时,减压除去溶剂并在真空下干燥，残留物不经过进一步纯化直接使用。往残留物和(2-氯-4-((6-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-18)(80毫克，0.181毫摩尔，1.0当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.5毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用制备高效液相色谱纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((6-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(54毫克，收率：55.67％)。MS(ES+):m/z＝537(M+H)+ 1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.70(s,1H),8.56(d,J＝7.2Hz,1H),8.24(s,1H),8.07(d,J＝2.2Hz,1H),7.64(dd,J＝8.6,4.7Hz,1H),7.59(s,1H),7.56(d,J＝8.5Hz,1H),7.39(dd,J＝11.1,8.6Hz,1H),7.25(d,J＝2.5Hz,1H),7.09(d,J＝2.2Hz,1H),6.99(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),4.61(t,J＝5.7Hz,1H),4.22–4.09(m,2H),3.41(dd,J＝7.2,5.3Hz,1H),3.35(d,J＝4.0Hz,2H),3.17–3.09(m,1H),2.16(dd,J＝20.4,17.7Hz,1H),1.78(d,J＝13.4Hz,1H),1.57(tt,J＝10.5,5.3Hz,1H),1.38(ddd,J＝16.8,13.4,3.9Hz,1H).
实施例14：(2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物20)的制备(按照方案一线路制备)
步骤14a：5-氟苯并呋喃-7-醇(化合物0101-20)的制备:
Figure BDA0003632424340000521
往2-溴-4-氟苯酚(2.5克，13.09毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(2.71克，19.64毫摩尔，1.5当量)在N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)的混合物中加入2-溴-1，1-二乙氧基乙烷(3.87克，19.64毫摩尔，1.5当量)。混合物在氮气氛围下在115℃加热过夜。混合物用水(80毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚∶乙酸乙酯20∶1)，得到淡黄色油状物2-溴-1-(2，2-二乙氧基乙氧基)-4-氟苯(4.02克，收率：100％)。TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)。
往2-溴-1-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-氟苯(4.02克，13.09毫摩尔，1.0当量)在甲苯(30毫升)的混合物中加入多聚磷酸(4.87克，14.40毫摩尔，1.1当量)。混合物在氮气氛围下在110℃加热1.5小时。用水(50毫升)稀释混合物，然后用乙酸乙酯(30毫升×2)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物经硅胶柱色谱(石油醚)纯化，得到淡黄色油状物7-溴-5-氟苯并呋喃(0.391克，收率：14％)。TLC：Rf0.7(石油醚)。
往7-溴-5-氟苯并呋喃(391毫克，1.819毫摩尔，1.0当量)在二甲亚砜(5毫升)的混合物中加入双联频哪醇硼酸酯(600毫克，2.364毫摩尔，1.3当量)，醋酸钾(536毫克，5.457毫摩尔，3.0当量))和Pd(dppf)Cl2(133毫克，0.182毫摩尔，0.1当量)。混合物在氮气氛围下在90℃加热10小时。用水(30毫升)稀释混合物，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯20：1)纯化，得到淡黄色固体2-(5-氟苯并呋喃-7-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊烷(476毫克，收率：100％)。LCMS(ESI)：m/z 263[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)。
步骤14b：2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-20)的制备:往5-氟苯并呋喃-7-醇(0101-20)(277毫克，1.819毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(301毫克，2.183毫摩尔，1.2当量)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)的混合物中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(343毫克，1.819毫摩尔，1.0当量)。混合物在氮气氛围下在90℃加热5小时。混合物用水(30毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯20：1)纯化，得到白色固体2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(355毫克，收率：61％)。LCMS(ESI)：m/z 321[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝8:1)。
步骤14c：2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-20)的制备:往2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-20)(355毫克，1.109毫摩尔，1.0当量)在四氢呋喃(5毫升)和水(2毫升)的混合物中加入氢氧化钠(133毫克，3.328毫摩尔，3.0当量)。混合物在室温下搅拌过夜。混合物用水(20毫升)稀释。加入1N稀盐酸调节pH＝3.水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到白色固体2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(200毫克，收率：59％)。LCMS(ESI)：m/z 307[M+1]+；TLC：Rf 0.3(二氯甲烷:甲醇＝20:1)。
步骤14d：2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(化合物0105-20)的制备:往2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-20)(200毫克，0.654毫摩尔，1.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(4.8毫克，0.065毫摩尔，0.1当量)在二氯甲烷(10毫升)和四氢呋喃(1.5毫升)的混合物中加入草酰氯(0.11毫升，1.307毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌4小时。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到淡黄色油状物2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(212毫克，粗品)。TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)。
步骤14e：(2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-20)的制备:在氮气氛围下往氢化钠(60％，65毫克，1.636毫摩尔，2.0当量)在四氢呋喃(3.5毫升)的混合物中加入5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(190毫克，0.818毫摩尔，1.0当量)。混合物在室温下搅拌10分钟，然后冷却到-78℃。逐滴加入正丁基锂(2.5M己烷溶液，0.39毫升，0.982毫摩尔，1.2当量)并搅拌1小时。逐滴加入2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(0105-20)(212毫克，0.654毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(1.5毫升)溶液，然后在-78℃下继续搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液(20毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯2：1)，得到(2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(99毫克，收率：27％)。LCMS(ESI)：m/z 442[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)。
步骤14f：(2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物20)的制备:往(2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-20)(99毫克，0.224毫摩尔，1.0当量)和((2S,5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(48.8毫克，0.291毫摩尔，1.3当量)在叔丁醇(10毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.20毫升，1.12毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下在90℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(乙酸乙酯：二氯甲烷∶甲醇＝10：10：2)纯化，得到白色固体(2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(56毫克，收率：47％)。LCMS(ESI)：m/z 537[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：153-156℃。1HNMR(DMSO-d6，500MHz)：δ12.72(s,1H),8.57(d,J＝7.0Hz,1H),8.25(s,1H),8.10(d,J＝2.0Hz,1H),7.64(s,1H),7.59(d,J＝8.0Hz,1H),7.40-7.38(m,1H),7.35(d,J＝2.0Hz,1H),7.13-7.09(m,2H),7.07(d,J＝2.5Hz,1H),4.63-4.61(m,1H),4.18-4.13(m,2H),3.43-3.40(m,1H),3.36-3.33(m,2H),3.14-3.10(m,1H),2.21-2.18(m,1H),1.80-1.77(m,1H),1.61-1.53(m,1H),1.43-1.35(m,1H)。
实施例15：(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物21)的制备(按照方案一线路制备)
步骤15a：5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-醇(化合物0101-21)的制备:
Figure BDA0003632424340000541
往4-氟-2-甲氧基苯酚(3.0克，21.11毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(4.37克，31.67毫摩尔，1.5当量)在N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)的混合物中加入3-溴丙炔(3.01克，25.33毫摩尔，1.2当量)。混合物在氮气氛围下加热到50℃反应过夜。混合物用水(80毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(30毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(30毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯＝60:1)纯化，得到淡黄色油状物4-氟-2-甲氧基-1-(丙-2-炔-1-基氧基)苯(3.57克，收率：94％)。TLC：Rf 0.5(石油醚：乙酸乙酯＝30:1)。
往4-氟-2-甲氧基-1-(丙-2-炔-1-基氧基)苯(3.57克，19.83毫摩尔，1.0当量)在N，N-二乙基苯胺(25毫升)的混合物中加入氟化铯(3.92克，25.78毫摩尔，1.3当量)。混合物在氮气氛围下加热到220℃反应6小时。混合物用水(80毫升)稀释。加入浓盐酸调节pH＝3，然后用乙酸乙酯(30毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(30毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯＝60:1)纯化，得到淡黄色油状物5-氟-7-甲氧基-2-甲基苯并呋喃(2.06克，收率：58％)。TLC：Rf 0.6(石油醚：乙酸乙酯＝30:1)。
0℃下往5-氟-7-甲氧基-2-甲基苯并呋喃(2.0克，11.11毫摩尔，1.0当量)在二氯甲烷(50毫升)的混合物中逐滴加入三溴化硼(2M二氯甲烷溶液，7.2毫升，14.4毫摩尔，1.3当量)。混合物升到室温并搅拌4小时。加入甲醇(10毫升)淬灭反应。加入水(50毫升)然后用二氯甲烷(30毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(30毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到棕色油状物5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-醇(2.04克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z167[M+1]+；TLC：Rf 0.3(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)。
步骤15b：2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-21)的制备:往5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-醇(0101-21)(1.90克，11.44毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(1.89克，13.73毫摩尔，1.2当量)在N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)的混合物中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(2.16克，11.44毫摩尔，1.0当量)。混合物在氮气氛围下加热到90℃反应过夜。混合物用水(50毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(30毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(30毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯50：1)纯化，得到白色固体2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(2.13克，收率：56％)。LCMS(ESI)：m/z 335[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)。
步骤15c：(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-21)的制备:在氮气氛围下往氢化钠(60％，34毫克，0.86毫摩尔，2.0当量)在四氢呋喃(3毫升)的混合物中加入5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(100毫克，0.43毫摩尔，1.0当量)。混合物在室温下搅拌10分钟，然后冷却到-78℃。逐滴加入正丁基锂(2.5M己烷溶液，0.21毫升，0.52毫摩尔，1.2当量)并搅拌1小时。逐滴加入2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-21)(100毫克，0.30毫摩尔，0.7当量)的四氢呋喃(1毫升)溶液，然后在-78℃下搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液(20毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯2：1)，得到淡黄色固体(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(80毫克，收率：58％)。LCMS(ESI)：m/z 456[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)。
步骤15d：(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物21)的制备:往(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-21)(80毫克，0.175毫摩尔，1.0当量)和(3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(0108-1)(38毫克，0.23毫摩尔，1.3当量)在叔丁醇(8毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.15毫升，0.88毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下加热到90℃反应过夜。混合物用水(30毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10：1)纯化，得到白色固体(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(36毫克，收率：38％)。LCMS(ESI)：m/z 551[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：145-148℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.73(s,1H),8.57(d,J＝6.9Hz,1H),8.24(s,1H),7.63(s,1H),7.58(d,J＝8.5Hz,1H),7.33(s,1H),7.25(d,J＝7.0Hz,1H),7.10(d,J＝8.3Hz,1H),6.97(d,J＝10.2Hz,1H),6.69(s,1H),4.62(d,J＝5.3Hz,1H),4.15(d,J＝7.5Hz,2H),3.45–3.41(m,1H),3.35(s,2H),3.12(t,J＝11.3Hz,1H),2.44(s,3H),2.19(d,J＝11.3Hz,1H),1.78(d,J＝13.3Hz,1H),1.62–1.48(m,1H),1.39(dd,J＝23.2,10.0Hz,1H).
实施例16：(4-(苯并[b]噻吩-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物25)的制备(按照方案一线路制备)
步骤16a：苯并[b]噻吩-7-醇(化合物0101-25)的制备:
Figure BDA0003632424340000571
向2-甲氧基苯硫酚(2.4克，17.1毫摩尔，1.0当量)的20毫升二甲基甲酰胺溶液加入2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(4.4克，22.2毫摩尔，1.3当量)和碳酸钾(4.7克，34.2毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌4小时，加入乙酸乙酯，用水和饱和食盐水洗，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化得到无色油状物(2,2-二乙氧基乙基)(2-甲氧基苯基)硫醚(4.5克，粗品)。MS(ES+):m/z 257(M+H)+.
向(2,2-二乙氧基乙基)(2-甲氧基苯基)硫醚(2.28克，8.9毫摩尔，1.0当量)的250毫升甲苯溶液加入多聚磷酸(300毫克，0.89毫摩尔，0.08当量)。混合物在120℃下搅拌过夜。反应用水淬灭，加入乙酸乙酯萃取，经饱和食盐水洗，有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝50/1到30/1)得到黄色固体7-甲氧基苯并[b]噻吩(470毫克，收率：32％)。MS(ES+):m/z 165(M+H)+.
将325毫克7-甲氧基苯并[b]噻吩加入到5.1克吡啶盐酸盐中，混合物密封在罐子中在160℃下加热8小时。混合物冷却至室温，加入乙酸乙酯，有机相经水和饱和食盐水洗。有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到黄色固体苯并[b]噻吩-7-醇(303毫克，粗品)。MS(ES+):m/z 151(M+H)+.
步骤16b：4-(苯并[b]噻吩-7-基氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(化合物0103-25)的制备:在氮气保护下，2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(227毫克，1.2毫摩尔，1.0当量)，苯并[b]噻吩-7-醇(0101-25)(270毫克，1.8毫摩尔，1.5当量)和碳酸钾(497毫克，3.6毫摩尔，3.0当量)在10毫升二甲基甲酰胺的混合物置于90℃下搅拌过夜。加入乙酸乙酯，用饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经过硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝30/1到20/1)，得到黄色固体4-(苯并[b]噻吩-7-基氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(422毫克，粗品)。MS(ES+):m/z 319(M+H)+.
步骤16c：4-(苯并[b]噻吩-7-基氧基)-2-氯苯甲酸(化合物0104-25)的制备:将4-(苯并[b]噻吩-7-基氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(0103-25)(422毫克，1.3毫摩尔，1.0当量)溶解于5毫升四氢呋喃，加入10毫升2M氢氧化钠水溶液。混合物在50℃下搅拌6小时。加入3M氯化氢水溶液，调pH值到2。加入乙酸乙酯萃取，用水和饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到黄色固体4-(苯并[b]噻吩-7-基氧基)-2-氯苯甲酸(378毫克，收率：93％)。MS(ES+):m/z 305(M+H)+.
步骤16d：(4-(苯并[b]噻吩-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-25)的制备:在氮气保护下，将4-(苯并[b]噻吩-7-基氧基)-2-氯苯甲酸(0104-25)(306毫克，1.0毫摩尔，1.0当量)溶解于15毫升二氯甲烷和2毫升四氢呋喃。加入0.01毫升二甲基甲酰胺。草酰氯(381毫克，3.0毫摩尔，3.0当量)溶解于2.0毫升二氯甲烷，并在室温下加入到上述混合物中。混合物在在室温下搅拌3小时。混合物减压浓缩至干。将5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(249毫克，1.1毫摩尔，1.13当量)在氮气下溶解于25毫升无水四氢呋喃，并冷却到0℃。加入氢化钠(213毫克，4.4毫摩尔，4.4当量)，然后混合物在室温下搅拌30分钟。混合物冷却至-70℃，滴加1.6M正丁基锂的正己烷溶液(0.9毫升，1.43毫摩尔，1.43当量)。混合物在-70℃搅拌1小时。上述所得酰氯溶解于1.5毫升无水四氢呋喃，然后滴加到上述混合物中。混合物在-70℃下搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，加入乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗。有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝3/1到1/1)得到黄色固体(4-(苯并[b]噻吩-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(248毫克，收率：56％)。MS(ES+):m/z 440(M+H)+.
步骤16e：(4-(苯并[b]噻吩-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物25)的制备:将(4-(苯并[b]噻吩-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-25)(100毫克，0.23毫摩尔，1.0当量)，((2S,5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(42毫克，0.25毫摩尔，1.1当量)和二异丙基乙胺(136毫克，1.05毫摩尔，5.0当量)加入到10毫升叔丁醇中，混合物在90℃下搅拌过夜。混合物减压浓缩，加入乙酸乙酯萃取，经水和饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经过制备薄层色谱纯化(展开剂为：二氯甲烷/甲醇＝30/1)，得到黄色固体(4-(苯并[b]噻吩-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(63毫克，收率：51％)。MS(ES+):m/z 535(M+H)+；熔点230～232℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.73(s,1H),8.57(d,J＝7.2Hz,1H),8.25(s,1H),7.83(d,J＝5.3Hz,1H),7.79(d,J＝7.6Hz,1H),7.61(s,1H),7.58(dd,J＝9.5,6.9Hz,2H),7.46(t,J＝7.8Hz,1H),7.30(d,J＝2.4Hz,1H),7.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.09(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),4.62(t,J＝5.6Hz,1H),4.15(ddd,J＝11.2,6.5,3.3Hz,2H),3.46–3.39(m,1H),3.36(s,2H),3.12(t,J＝11.6Hz,1H),2.24–2.13(m,1H),1.78(d,J＝13.4Hz,1H),1.62–1.51(m,1H),1.39(ddd,J＝31.2,18.8,12.2Hz,1H).
实施例17：(2-氯-4-((2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物26)的制备(按照方案二线路制备)
步骤17a：2,3-二氢苯并呋喃-7-醇(化合物0201-26)的制备：氮气保护下，向苯并呋喃-7-醇(700毫克，6.25毫摩尔，1.0当量)的甲醇(10毫升)溶液中加入钯碳(140毫克，20％)，混合物在室温下搅拌16.0小时。过滤后，所得滤液减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝135[M-1]-.
步骤17b：2-氯-4-((2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0202-26)的制备：氮气保护下，向2,3-二氢苯并呋喃-7-醇(0201-26)(830毫克，6.10毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)溶液中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(1.15克，6.10毫摩尔，1.0当量)，碳酸钾(1.68克，12.20毫摩尔，2.0当量)，混合物在90℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝20/1至10/1)纯化，得到白色固体产物2-氯-4-((2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(1.4克，收率：75.51％)。LCMS(ESI)：m/z＝305[M+1]+.
步骤17c：2-氯-4-((2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0203-26)的制备：向2-氯-4-((2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0202-26)(1.9克，6.29毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(5毫升)溶液中加入2M氢氧化钠溶液(15毫升)，混合物在室温下搅拌过夜。反应液用4M盐酸调节至pH＝4，并用乙酸乙酯萃取。所得有机相干燥并减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝291[M+1]+.
步骤17d：2-氯-4-((2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(化合物0204-26)的制备：氮气保护下，0℃下，向2-氯-4-((2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0203-26)(500毫克，1.72毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(20毫升)溶液中加入草酰氯(657毫克，5.17毫摩尔，3.0当量)，N,N-二甲基甲酰胺(1毫克)，混合物在室温下搅拌过夜。反应液减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。
步骤17e：(2-氯-4-((2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0205-26)的制备：氮气保护下，0℃下向5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(400毫克，1.72毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(15毫升)溶液中加入氢化钠(207毫克，5.17毫摩尔，3.0当量)，然后在-70℃下缓慢滴加正丁基锂(0.89毫升，2.32毫摩尔，1.3当量)并搅拌1.0小时。在-70℃下，2-氯-4-((2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(0204-26)(520毫克，粗品)溶于3毫升四氢呋喃滴加至反应液中并搅拌1.5小时。反应液用氯化铵溶液淬灭，加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝15/1至2/1)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(400毫克，收率：54.6％)。LCMS(ESI)：m/z＝426[M+1]+
步骤17f：(2-氯-4-((2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物26)的制备:往(2-氯-4-((2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0205-26)(100毫克，0.235毫摩尔，1.0当量)和((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(37毫克，0.282毫摩尔，1.2当量)在叔丁醇(10毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.5毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用制备薄层色谱(二氯甲烷/甲醇＝12/1)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(38毫克，收率：31.1％)。MS(ES+):m/z＝521(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.69(s,1H),8.58(d,J＝7.1Hz,1H),8.24(s,1H),7.61–7.51(m,2H),7.19(d,J＝7.2Hz,1H),7.07(d,J＝2.2Hz,1H),7.00(d,J＝8.0Hz,1H),6.95–6.87(m,2H),4.69–4.53(m,3H),4.18–4.05(m,2H),3.43(dd,J＝11.8,6.5Hz,1H),3.35(s,2H),3.27(d,J＝8.7Hz,2H),3.12(t,J＝11.4Hz,1H),2.19(d,J＝11.4Hz,1H),1.79(d,J＝13.0Hz,1H),1.63–1.49(m,1H),1.43–1.32(m,1H).
实施例18：(4-(苯并呋喃-4-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物27)的制备(按照方案三线路制备)
步骤18a：苯并呋喃-4-醇(化合物0301-27)的制备：
Figure BDA0003632424340000601
在0℃下，向2,6-二羟基苯甲醛(1.5克，11毫摩尔，1.0当量)和二异丙基乙胺(2.84克，22毫摩尔，2.0当量)在二氯甲烷(30毫升)中的溶液中滴加MOMBr(2.06克，16.5毫摩尔，1.5当量)。将混合物在0℃下搅拌30分钟并在室温下搅拌1小时。加入二氯甲烷以萃取并用水和盐水洗涤。将有机相干燥并浓缩，通过硅胶柱纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝20/1)，得到产物。在氮气保护下，将产物(1.8克，9.9毫摩尔，1.0当量)，2-溴乙酸乙酯(2.5克，14.8毫摩尔，1.5当量)和碳酸铯(6.45克，619.8毫摩尔，2.0当量)的N，N-二甲基甲酰胺(50毫升)的溶液在120℃下搅拌过夜。将反应溶液冷却，并用水稀释，用乙酸乙酯萃取。将有机相干燥并真空浓缩，得到呈棕色固体的产物4-(甲氧基甲氧基)苯并呋喃-2-甲酸(1.8克，收率：81.9％)。
氮气保护下，向4-(甲氧基甲氧基)苯并呋喃-2-甲酸(1.8克，8.1毫摩尔，1.0当量)的喹啉溶液(30毫升)中加入铜粉(1.56克，24.3毫摩尔，3.0当量)，混合物在120℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩得到黄色油状产物4-(甲氧基甲氧基)苯并呋喃(1.4克，粗品)。
将化合物4-(甲氧基甲氧基)苯并呋喃(1.4克，粗品)溶解在甲醇(20毫升)中，然后加入4N盐酸(20毫升)。将混合物在室温搅拌1.5小时。将反应液用水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并在真空下浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到黄色油状产物苯并呋喃-4-醇(1.08克，收率：100％)。
步骤18b：4-(苯并呋喃-4-基氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(化合物0302-27)的制备：氮气保护下，向苯并呋喃-4-醇(0301-27)(0.6克，4.48毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(30毫升)溶液中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(844毫克，4.48毫摩尔，1.0当量)，碳酸钾(1.24克，8.96毫摩尔，2.0当量)，混合物在90℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝100/1至50/1)纯化，得到白色固体产物4-(苯并呋喃-4-基氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(0.9克，收率：66.5％)。LCMS(ESI)：m/z＝303[M+1]+.
步骤18c：4-(苯并呋喃-4-基氧基)-2-氯苯甲酸(化合物0303-27)的制备：向4-(苯并呋喃-4-基氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(0302-27)(0.9克，2.97毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(2毫升)溶液中加入2M氢氧化钠溶液(6毫升)，混合物在室温下搅拌过夜。反应液用4M盐酸调节至pH＝4，并用乙酸乙酯萃取。所得有机相干燥并减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝289[M+1]+.
步骤18d：4-(苯并呋喃-4-基氧基)-2-氯苯甲酰氯(化合物0304-27)的制备：氮气保护下，0℃下，向4-(苯并呋喃-4-基氧基)-2-氯苯甲酸(0303-27)(0.59克，2.05毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷(10毫升)溶液中加入草酰氯(520.7毫克，4.1毫摩尔，2.0当量)，N,N-二甲基甲酰胺(5毫克)，混合物在室温下搅拌过夜。将反应液减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。
步骤18e：(4-(苯并呋喃-4-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0305-27)的制备:在氮气保护下，向5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(475.6毫克，2.05毫摩尔，1.0当量)在四氢呋喃(10毫升)中的混合物中添加NaH(246毫克，在0℃下为6.15毫摩尔，3.0当量)。将混合物在室温搅拌1.0小时。然后在-70℃下逐滴加入正丁基(1.54毫升，2.46毫摩尔，1.2当量)，并搅拌1.0小时。然后在-70℃下将4-(苯并呋喃-4-基氧基)-2-氯苯甲酰氯(0304-27)的四氢呋喃溶液(1毫升)滴加到反应溶液中，并搅拌1.0小时。将反应溶液用NH4Cl溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取，然后将有机相干燥并在真空下浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝5/1)，得到黄色固体产物(4-(苯并呋喃-4-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(450毫克，产率：51.9％)。LCMS(ESI)：m/z＝424[M+1]+.
步骤18f：(4-(苯并呋喃-4-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物27)的制备:往(4-(苯并呋喃-4-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0305-27(100毫克，0.236毫摩尔，0.54当量)和((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)在叔丁醇(10毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1.0毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用制备薄层色谱(二氯甲烷/甲醇＝12/1)纯化，得到黄色固体产物(4-(苯并呋喃-4-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶-5-基)甲酮(50毫克，收率：40.9％)。MS(ES+):m/z＝519(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.72(s,1H),8.58(d,J＝7.1Hz,1H),8.25(s,1H),8.02(d,J＝2.2Hz,1H),7.62(s,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,1H),7.53(d,J＝8.3Hz,1H),7.39(t,J＝8.1Hz,1H),7.25(d,J＝2.4Hz,1H),7.04(dd,J＝8.4,2.5Hz,2H),6.86–6.80(m,1H),4.61(t,J＝5.6Hz,1H),4.16(dt,J＝10.9,6.4Hz,2H),3.47–3.40(m,1H),3.39–3.33(m,2H),3.12(t,J＝11.6Hz,1H),2.19(d,J＝12.0Hz,1H),1.79(d,J＝13.6Hz,1H),1.57(dd,J＝11.9,3.8Hz,1H),1.45–1.33(m,1H).
实施例19：(4-(苯并[d]恶唑-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物28)的制备(按照方案一线路制备)
步骤19a：7-羟基苯并恶唑(化合物0101-28)的制备：
Figure BDA0003632424340000621
0℃下往2-甲氧基-6-硝基苯酚(1.0克，5.92毫摩尔，1.0当量)在二氯甲烷(30毫升)的混合物中逐滴加入三溴化硼(2M二氯甲烷溶液，4.4毫升，8.80毫摩尔，1.5当量)。混合物升到室温并搅拌过夜。加入甲醇(10毫升)淬灭反应。加入水(50毫升)然后用二氯甲烷(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到棕色油状物3-硝基邻苯二酚(1.06克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 156[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)。
往3-硝基邻苯二酚(1.0克，6.45毫摩尔，1.0当量)在甲醇(15毫升)的混合物中加入钯碳(200毫克)。混合物在氢气球压力下室温搅拌过夜。混合物过滤。滤液在减压下浓缩，得到棕色固体3-氨基邻苯二酚((806毫克，收率：100％)。LCMS(ESI)：m/z 126[M+1]+；TLC：Rf 0.3(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)。
往3-氨基邻苯二酚(806毫克，6.45毫摩尔，1.0当量)和对甲苯磺酸一水合物(123毫克，0.65毫摩尔，0.1当量)在乙醇(15毫升)的混合物中加入原甲酸三甲酯(4.79克，45.15毫摩尔，7.0当量)。混合物在氮气氛围下加热到90℃反应3小时。减压除去溶剂。残余物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯2：1)纯化，得到淡黄色固体7-羟基苯并恶唑(575毫克，收率：66％)。LCMS(ESI)：m/z 136[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)。
步骤19b：2-氯-4-氟苯甲酸叔丁酯(化合物0102-28)的制备:往2-氯-4-氟苯甲酸(2.0克，11.46毫摩尔，1.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(2滴)在二氯甲烷(20毫升)的混合物中加入草酰氯(1.94毫升，22.91毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌4小时。减压除去溶剂，并将残余物溶解于四氢呋喃(5毫升)中得到2-氯-4-氟苯甲酰氯溶液。在0℃和氮气氛围下，往叔丁醇(1.32毫升，13.75毫摩尔，1.2当量)在四氢呋喃(15毫升)的混合物中滴加正丁基锂(2.5M的己烷溶液，5.04毫升，12.61毫摩尔，1.1当量)。混合物搅拌10分钟。逐滴加入2-氯-4-氟苯甲酰氯的四氢呋喃溶液，然后将混合物在0℃下搅拌1小时。加入饱和氯化铵溶液(30毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯50：1)，得到淡黄色油状的2-氯-4-氟苯甲酸叔丁酯(1.88克，收率：71％)。TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)。
步骤19c：4-(苯并[d]恶唑-7-基氧基)-2-氯苯甲酸叔丁酯(化合物0103-28)的制备:往7-羟基苯并恶唑(0101-28)(275毫克，2.04毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(366毫克，2.65毫摩尔，1.3当量)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)的混合物中加入2-氯-4-氟苯甲酸叔丁酯(0102-28)(705毫克，3.06毫摩尔，1.5当量)。混合物在氮气氛围下在90℃加热过夜。混合物用水(30毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯8：1)纯化，得到白色固体4-(苯并[d]恶唑-7-基氧基)-2-氯苯甲酸叔丁酯(390毫克，收率：49％)。LCMS(ESI)：m/z 346[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)。
步骤19d：4-(苯并[d]恶唑-7-基氧基)-2-氯苯甲酸(化合物0104-28)的制备:往4-(苯并[d]恶唑-7-基氧基)-2-氯苯甲酸叔丁酯(0103-28)(390毫克，1.13毫摩尔，1.0当量)在二氯甲烷(7.5毫升)的混合物中加入三氟乙酸(2.5毫升)。混合物在室温下搅拌4小时。减压除去溶剂。残余物用原甲酸三甲酯(8毫升)稀释，然后将混合物加热到90℃反应2.5小时。减压除去溶剂。残余物用二氯甲烷(10毫升)稀释并过滤。收集固体并在真空下干燥，得到白色固体4-(苯并[d]恶唑-7-基氧基)-2-氯苯甲酸(256毫克，收率：78％)。LCMS(ESI)：m/z290[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷:甲醇＝10:1)。
步骤19e：4-(苯并[d]恶唑-7-基氧基)-2-氯苯甲酰氯(化合物0105-28)的制备:往4-(苯并[d]恶唑-7-基氧基)-2-氯苯甲酸(0104-28)(226毫克，0.78毫摩尔，1.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(2.3毫克，0.031毫摩尔，0.04当量)在二氯甲烷(15毫升)和四氢呋喃(15毫升)的混合物中加入草酰氯(0.13毫升，1.56毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌5小时。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到淡黄色油状物4-(苯并[d]恶唑-7-基氧基)-2-氯苯甲酰氯(241毫克，粗品)。
步骤19f：(4-(苯并[d]恶唑-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-28)的制备:在氮气氛围下往氢化钠(60％，125毫克，3.12毫摩尔，2.0当量)在四氢呋喃(3.5毫升)的混合物中加入5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(364毫克，1.56毫摩尔，1.0当量)。混合物在室温下搅拌10分钟，然后冷却到-78℃。逐滴加入正丁基锂(2.5M己烷溶液，0.75毫升，1.87毫摩尔，1.2当量)并搅拌1小时。逐滴加入4-(苯并[d]恶唑-7-基氧基)-2-氯苯甲酰氯(0105-28)(241毫克，0.78毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(1.5毫升)溶液，然后在-78℃下搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液(30毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯1：1)，得到(4-(苯并[d]恶唑-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(110毫克，收率：33％)。LCMS(ESI)：m/z 425[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝1:3)。
步骤19g：(4-(苯并[d]恶唑-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物28)的制备:往4-(苯并[d]恶唑-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-28)(90毫克，0.21毫摩尔，1.0当量)和((2S,5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(36毫克，0.28毫摩尔，1.3当量)在二甲基亚砜(3毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.19毫升，1.06毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下加热到88℃反应6小时。混合物用水(30毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10：1)纯化，得到白色固体(4-(苯并[d]恶唑-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(39毫克，收率：35％)。LCMS(ESI)：m/z 520[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：156-159℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.73(s,1H),8.79(s,1H),8.57(d,J＝7.1Hz,1H),8.25(s,1H),7.71(d,J＝7.7Hz,1H),7.62(s,1H),7.59(d,J＝8.5Hz,1H),7.46(t,J＝8.0Hz,1H),7.35(d,J＝2.4Hz,1H),7.29(d,J＝8.0Hz,1H),7.10(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),4.62(t,J＝5.6Hz,1H),4.20–4.10(m,2H),3.47–3.39(m,1H),3.39–3.34(m,2H),3.11(d,J＝11.8Hz,1H),2.19(d,J＝12.8Hz,1H),1.79(d,J＝13.5Hz,1H),1.61–1.50(m,1H),1.39(ddd,J＝30.5,16.8,7.1Hz,2H).
实施例20：(4-(((1H-吲哚-7-基)氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物29)的制备(按照方案一线路制备)
步骤20a：7-(3-氯-4-(甲氧基羰基)苯氧基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(化合物0103-29)的制备:氮气保护下，往1H-吲哚-7-醇(0101-29)(1.50克，11.27毫摩尔，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)的混合物中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(2.55克，13.52毫摩尔，1.2当量)和碳酸钾(2.46克，17.80毫摩尔，1.5当量)。混合物在90℃下搅拌过夜。混合物用水(75毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(75毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(75毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝8:1)得到黄色固体4-((1H-吲哚-7-基)氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(1.55克，收率：46％)LCMS(ESI)：m/z 302[M+1]+。将上述得到的4-((1H-吲哚-7-基)氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(500毫克，1.66毫摩尔，1.0当量)、二碳酸二叔丁酯(435毫克，1.99毫摩尔，1.2当量)、N,N-二异丙基乙胺(430毫克，3.32毫摩尔，2.0当量)和4-二甲氨基吡啶(4毫克，0.02毫摩尔，0.01当量)在二氯甲烷(8毫升)的混合物在室温下搅拌过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用二氯甲烷(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)得到黄色油状物7-(3-氯-4-(甲氧基羰基)苯氧基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(620毫克，收率：93％)LCMS(ESI)：m/z 402[M+1]+。
步骤20b：7-(3-氯-4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(化合物0107-29)的制备:氮气保护下，在0℃下向5-溴-4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(0106-1)(140毫克，0.599毫摩尔，1.2当量)在四氢呋喃溶液(5毫升)的混合物中加入氢化钠(40毫克，0.998毫摩尔，2.0当量)。混合物室温下搅拌1小时。向混合物中在-70℃下逐滴加入正丁基锂(0.41毫升，0.649毫摩尔，1.3当量)，混合物在-70℃下搅拌1小时。然后向混合物中缓慢加入7-(3-氯-4-(甲氧基羰基)苯氧基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(0103-29)(200毫克，0.499毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃溶液(2毫升)，混合物在-70℃下搅拌1小时。反应液用饱和的氯化铵溶液(5毫升)淬灭。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:3)得到黄色固体7-(3-氯-4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(80毫克，收率：31％)，LCMS(ESI)：m/z 523[M+1]+。
步骤20c：(4-(((1H-吲哚-7-基)氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物29)的制备:氮气保护下，往7-(3-氯-4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(80毫克，0.154毫摩尔，1.0当量)和((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(43毫克，0.185毫摩尔，1.2当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(2毫升)。混合物在90℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩得到黄色固体7-(3-氯-4-(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(100毫克，crude)。LCMS(ESI)：m/z 618[M+1]+。将上述得到的7-(3-氯-4-(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(100毫克，0.162毫摩尔，1.0当量)在氯化氢甲醇溶液(4M溶液，3毫升)的混合物在45℃下搅拌1小时。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体(4-(((1H-吲哚-7-基)氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(19毫克，收率：23％)。LCMS(ESI)：m/z 518[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.33(s,1H),8.60(d,J＝7.1Hz,1H),8.20(s,1H),7.51(d,J＝8.5Hz,1H),7.47(d,J＝7.8Hz,2H),7.35(t,J＝2.7Hz,1H),7.14(d,J＝2.3Hz,1H),7.04(t,J＝7.8Hz,1H),6.94(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),6.89(d,J＝7.5Hz,1H),6.54–6.47(m,1H),4.64(s,1H),4.18–4.01(m,3H),3.41(d,J＝5.8Hz,2H),3.10(t,J＝10.0Hz,1H),2.18(d,J＝11.9Hz,1H),1.82–1.74(m,1H),1.55(dd,J＝12.0,3.8Hz,1H),1.37(dd,J＝14.7,4.3Hz,1H).
实施例21：(2-氯-4-((1-甲基-1H-吲哚-7-基)氧基)苯基)[4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物30)的制备(按照方案一线路制备)
步骤21a：2-氯-4-((1-甲基-1H-吲哚-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-30)的制备:氮气保护下，往1H-吲哚-7-醇(0101-29)(1.50克，11.27毫摩尔，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)的混合物中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(2.55克，13.52毫摩尔，1.2当量)和碳酸钾(2.46克，17.80毫摩尔，1.5当量)。混合物在90℃下搅拌过夜。混合物用水(75毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(75毫升×3)萃取。合并有机层用饱和食盐水(75毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝8:1)得到黄色固体4-((1H-吲哚-7-基)氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(1.55克，收率：46％)LCMS(ESI)：m/z302[M+1]+。氮气保护下，在0℃下，往上述得到的4-((1H-吲哚-7-基)氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(500毫克，1.66毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(457毫克，3.31毫摩尔，2.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)的混合物中加入碘甲烷(353毫克，2.48毫摩尔，1.5当量)。混合物在室温下搅拌3小时。混合物用水(50毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(50毫升×3)萃取。合并有机层用饱和食盐水(50毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚：二氯甲烷＝3:2)得到黄色固体2-氯-4-((1-甲基-1H-吲哚-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(460毫克，收率：88％)LCMS(ESI)：m/z 316[M+1]+。
步骤21b：(2-氯-4-((1-甲基-1H-吲哚-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-30)的制备:氮气保护下，在0℃下向5-溴-4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(0106-1)(88毫克，0.380毫摩尔，1.2当量)在四氢呋喃溶液(5毫升)的混合物中加入氢化钠(25毫克，0.633毫摩尔，2.0当量)。混合物室温下搅拌1小时。混合物在-70℃下逐滴加入正丁基锂(0.26毫升，0.411毫摩尔，1.3当量)，混合物在-70℃下搅拌1小时。然后向混合物缓慢加入2-氯-4-((1-甲基-1H-吲哚-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-30)(100毫克，0.316毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃溶液(2毫升)，混合物在-70℃下搅拌1小时。反应液用饱和的氯化铵溶液(5毫升)淬灭。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯:二氯甲烷＝1:1:1)得到黄色固体(2-氯-4-((1-甲基-1H-吲哚-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(100毫克，收率：73％)，LCMS(ESI)：m/z 437[M+1]+。
步骤21c：(2-氯-4-((1-甲基-1H-吲哚-7-基)氧基)苯基)[4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物30)的制备:氮气保护下，往(2-氯-4-((1-甲基-1H-吲哚-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-30)(100毫克，0.229毫摩尔，1.0当量)和((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(65毫克，0.275毫摩尔，1.2当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(2毫升)。混合物在90℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体(2-氯-4-((1-甲基-1H-吲哚-7-基)氧基)苯基)[4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(67毫克，收率55％)。LCMS(ESI)：m/z 532[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.96–12.28(m,1H),8.58(d,J＝7.1Hz,1H),8.23(s,1H),7.61–7.53(m,2H),7.47(d,J＝7.5Hz,1H),7.32(d,J＝3.0Hz,1H),7.14(d,J＝2.4Hz,1H),7.05(t,J＝7.8Hz,1H),6.95(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),6.87(d,J＝7.5Hz,1H),6.51(d,J＝3.0Hz,1H),4.64(s,1H),4.14(ddd,J＝16.6,8.0,4.9Hz,2H),3.85(s,3H),3.41(d,J＝6.6Hz,3H),3.10(d,J＝11.9Hz,1H),2.18(d,J＝12.0Hz,1H),1.78(d,J＝13.5Hz,1H),1.62–1.49(m,1H),1.38(dt,J＝9.9,8.0Hz,1H).
实施例22：2-氯-4-(萘-1-基氧基)苯基)(4-((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物32)的制备(按照方案四线路制备)
步骤22a：2-氯-4-(萘-1-基氧基)苯甲酸甲酯(化合物0402-32)的制备:将2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(1.09克，5.78毫摩尔，1.0当量)，1-萘酚(1克，6.94毫摩尔，1.2当量)，碳酸钾(1.20克，8.67毫摩尔，1.5当量)溶解于15毫升N，N-二甲基甲酰胺中。氮气保护下，混合物在90℃下搅拌四小时，加入水和乙酸乙酯。分层，有机相经饱和食盐水洗，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝20/1)得到红色液体2-氯-4-(萘-1-基氧基)苯甲酸甲酯(1.64克，收率：90.7％)。
步骤22b：(2-氯-4-(萘-1-基氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0403-32)的制备:在氮气保护下，将5-溴-4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(0106-1)(372毫克，1.6毫摩尔，1.0当量)溶解于12毫升干燥四氢呋喃中，反应体系在冰浴中冷却，加入氢化钠(纯度:60％)(128毫克，3.2毫摩尔，2.0当量)，混合物在氮气保护下常温搅拌1小时。将反应体系置于干冰-乙醇浴中冷却。在-70℃下，将1.6M正丁基锂正己烷溶液(1.3毫升，2.08毫摩尔，1.3当量)滴加到上述混合物中并在-70℃搅拌1小时。将2-氯-4-(萘-1-基氧基)苯甲酸甲酯(500毫克，1.6毫摩尔，1.0当量)溶解于3毫升四氢呋喃中，将该溶液在-70℃下滴加到混合物中，搅拌1小时。用氯化铵水溶液淬灭反应，加入乙酸乙酯和水萃取，有机相减压浓缩，残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1到2/1)得到黄色固体(2-氯-4-(萘-1-基氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)甲酮(289.5毫克，产率：42％)。MS(ES+):m/z＝434(M+H)+.
步骤22c：2-氯-4-(萘-1-基氧基)苯基)(4-((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物32)的制备:将(2-氯-4-(萘-1-基氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0403-32)(100毫克，0.23毫摩尔，1.0当量)，((2S,5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(58毫克，0.35毫摩尔，1.5当量)，1毫升二异丙基乙胺溶解于10毫升叔丁醇中。氮气保护下，混合物在80℃搅拌过夜。薄层色谱指示没有原料。加入乙酸乙酯，用水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经过高效液相色谱制备(乙腈/0.1％甲酸溶液＝40％到80％)，得到黄色固体2-氯-4-(萘-1-基氧基)苯基)(4-((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(25.5毫克，收率：21％)。MS(ES+):m/z＝529(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.58(d,J＝7.1Hz,1H),8.23(s,1H),8.07–7.99(m,2H),7.85(d,J＝8.4Hz,1H),7.69–7.50(m,5H),7.31–7.21(m,2H),7.02(d,J＝8.5Hz,1H),4.65(s,1H),4.37(t,J＝4.8Hz,1H),4.14(s,2H),3.58(s,2H),3.12(d,J＝10.5Hz,1H),2.17(s,1H),1.78(d,J＝14.0Hz,1H),1.56(d,J＝11.2Hz,1H),1.38(d,J＝11.8Hz,1H).
实施例23：(2-氯-4-(喹啉-8-基氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物33)的制备(按照方案四线路制备)
步骤23a：2-氯-4-(喹啉-8-基氧基)苯甲酸甲酯(化合物0402-33)的制备:氮气保护下，往喹啉-8-醇(0401-33)(0.92克，6.36毫摩尔，1.2当量)在N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)的混合物中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(1.00克，5.30毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(1.10克，7.95毫摩尔，1.5当量)。混合物在90℃下搅拌过夜。混合物用水(75毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(75毫升×3)萃取。合并有机层用饱和食盐水(75毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得到黄色固体2-氯-4-(喹啉-8-基氧基)苯甲酸甲酯(800毫克，收率：48％)LCMS(ESI)：m/z 314[M+1]+。
步骤23b：(2-氯-4-(喹啉-8-基氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0403-33)的制备:氮气保护下，在0℃下，向5-溴-4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(0106-1)(149毫克，0.629毫摩尔，1.0当量)在四氢呋喃溶液(5毫升)的混合物中加入氢化钠(51毫克，1.28毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌1小时。在-70℃下，向混合物逐滴加入正丁基锂(0.52毫升，0.831毫摩尔，1.3当量)，混合物在-70℃下搅拌1小时。然后向混合物缓慢加入2-氯-4-(喹啉-8-基氧基)苯甲酸甲酯(0402-33)(200毫克，0.629毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃溶液(2毫升)，混合物在-70℃下搅拌1小时。反应液用饱和的氯化铵溶液(5毫升)淬灭。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:3)得到黄色固体(2-氯-4-(喹啉-8-基氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(52毫克，收率：19％)，LCMS(ESI)：m/z435[M+1]+。
步骤23c：((2-氯-4-(喹啉-8-基氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物33)的制备:氮气保护下，往(2-氯-4-(喹啉-8-基氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0403-33)(45毫克，0.104毫摩尔，1.0当量)和((2R，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇(0108-1)(29毫克，0.124毫摩尔，1.2当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(68毫克，0.52毫摩尔，5.0当量)。混合物在90℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体((2-氯-4-(喹啉-8-基氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(20毫克，收率37％)。LCMS(ESI)：m/z 530[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.89(dd,J＝4.1,1.6Hz,1H),8.59(d,J＝7.0Hz,1H),8.49(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),8.21(s,1H),7.94(d,J＝8.2Hz,1H),7.69(t,J＝7.9Hz,1H),7.64–7.59(m,2H),7.53–7.45(m,2H),7.10(d,J＝2.4Hz,1H),6.89(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),4.63(s,1H),4.13(dt,J＝11.6,5.0Hz,2H),3.41(d,J＝5.4Hz,2H),3.35(s,2H),3.11(t,J＝10.0Hz,1H),2.18(d,J＝11.7Hz,1H),1.78(d,J＝12.9Hz,1H),1.56(dd,J＝12.4,3.3Hz,1H),1.37(dd,J＝11.3,7.8Hz,1H).
实施例24：(4-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-4-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物34)的制备(按照方案二线路制备)
步骤24a：4-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-4-基氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(化合物0202-34)的制备:往苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-4-醇(0201-34)(500毫克，3.62毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(600毫克，4.34毫摩尔，1.2当量)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)的混合物中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(717毫克，3.80毫摩尔，1.05当量)。混合物在氮气氛围下加热到90℃反应3.5小时。混合物用水(30毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯20：1)纯化，得到白色固体4-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-4-基氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(583毫克，收率：53％)。LCMS(ESI)：m/z 307[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝8:1)。
步骤24b：(4-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-4-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0205-34)的制备:在氮气氛围下往氢化钠(60％，15毫克，0.378毫摩尔，2.0当量)的四氢呋喃(3毫升)的混合物中加入5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(44毫克，0.189毫摩尔，1.0当量)。混合物在室温下搅拌10分钟，然后冷却到-78℃。逐滴加入正丁基锂(2.5M己烷溶液，0.1毫升，0.25毫摩尔，1.3当量)并搅拌1小时。逐滴加入4-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-4-基氧基)-2-氯苯甲酸甲酯(0202-34)(58毫克，0.189毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(0.5毫升)溶液，然后在-78℃下继续搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液(20毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯3：1)，得到(4-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-4-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(48毫克，收率：59％)。LCMS(ESI)：m/z 428[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)。
步骤24c：(4-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-4-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物34)的制备:往(4-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-4-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0205-34)(48毫克，0.112毫摩尔，1.0当量)和((2S,5R)-5-氨基基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(24毫克，0.146毫摩尔，1.3当量)在叔丁醇(8毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(72毫克，0.56毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下在90℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(乙酸乙酯：二氯甲烷∶甲醇＝10：10：2)纯化，得到白色固体(4-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-4-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(35毫克，收率：60％)。LCMS(ESI)：m/z 523[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：153-156℃。1HNMR(DMSO-d6，500MHz)：δ12.70(s,1H),8.57(d,J＝7.0Hz,1H),8.24(s,1H),7.57(s,1H),7.55(s,1H),7.19(d,J＝2.0Hz,1H),7.04-7.02(m,1H),6.95-6.88(m,2H),6.78-6.76(m,1H),6.07(s,2H),4.63-4.60(m,1H),4.17-4.12(m,2H),3.45-3.40(m,1H),3.36-3.30(m,2H),3.14-3.10(m,1H),2.21-2.18(m,1H),1.80-1.77(m,1H),1.61-1.53(m,1H),1.43-1.35(m,1H)。
实施例25：(2-氯-4-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-5-基)氧基)苯基))(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物35)的制备(按照方案二线路制备)
步骤25a：2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-5-醇(化合物0201-35)的制备:往邻苯三酚(1.0克，7.93毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(2.74克，19.83毫摩尔，2.5当量)在乙腈(30毫升)的混合物中加入1,2-二溴乙烷(2.23克，11.90毫摩尔，1.5当量)。混合物在氮气氛围下在85℃加热过夜。减压除去溶剂。残余物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯6：1)纯化，得到白色固体2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-5-醇(232毫克，收率：19％)。LCMS(ESI)：m/z 153[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)。
步骤25b：2-氯-4-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-5-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0202-35)的制备:往2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-5-醇(0201-35)(232毫克，1.526毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(253毫克，1.831毫摩尔，1.2当量)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)的混合物中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(302毫克，1.602毫摩尔，1.05当量)。混合物在氮气氛围下加热到90℃反应3小时。混合物用水(30毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物经硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯20：1)纯化，得到白色固体2-氯-4-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-5-基)氧基)苯甲酸甲酯(180毫克，收率：37％)。LCMS(ESI)：m/z 321[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝8:1)。
步骤25c：(2-氯-4-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-5-基)氧基)苯基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0205-35)的制备:在氮气氛围下往氢化钠(60％，45毫克，1.126毫摩尔，2.0当量)在四氢呋喃(4毫升)的混合物中加入5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(131毫克，0.563毫摩尔，1.0当量)。混合物在室温下搅拌15分钟，然后冷却到-78℃。逐滴加入正丁基锂(2.5M己烷溶液，0.29毫升，0.732毫摩尔，1.3当量)并搅拌1小时。逐滴加入2-氯-4-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-5-基)氧基)苯甲酸甲酯(0202-35)(180毫克，0.563毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(1.5毫升)溶液，然后在-78℃下继续搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液(20毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯3：1)，得到(2-氯-4-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-5-基)氧基)苯基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(147毫克，收率：59％)。LCMS(ESI)：m/z 442[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)。
步骤25d：2-氯-4-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-5-基)氧基)苯基))(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物35)的制备:往(2-氯-4-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-5-基)氧基)苯基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0205-35)(70毫克，0.158毫摩尔，1.0当量)和((2S,5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(34毫克，0.205毫摩尔，1.3当量)在叔丁醇(8毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.14毫升，0.79毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下加热到90℃反应过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(乙酸乙酯：二氯甲烷∶甲醇＝10：10：2)纯化，得到白色固体2-氯-4-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-5-基)氧基)苯基))(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(55毫克，收率：65％)。LCMS(ESI)：m/z 537[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：161-163℃。1HNMR(DMSO-d6，500MHz)：δ12.69(s,1H),8.58(d,J＝6.5Hz,1H),8.24(s,1H),7.56-7.52(m,2H),7.08(s,1H),6.93-6.88(m,2H),6.84-6.82(m,1H),6.76-6.74(m,1H),4.62(s,1H),4.26-4.20(m,4H),4.16-4.06(m,3H),3.42-3.40(m,1H),3.18-3.10(m,2H),2.20-2.18(m,1H),1.79-1.77(m,1H),1.60-1.54(m,1H),1.42-1.33(m,1H)。
实施例26：(4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(((甲磺酰基)甲氧基)甲基)四氢呋喃-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物37)的制备(按照方案一线路制备)
步骤26a：(3R，6S)-6-(((甲磺酰基)甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(化合物0108-37)的制备:往乙酸(0.7毫升)在二甲亚砜(3.5毫升)的混合物中加入乙酸酐(2.2毫升)。混合物在室温下搅拌2小时。加入((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(90毫克，0.390毫摩尔，1.0当量)，然后将混合物搅拌过夜。混合物用水(30毫升)稀释。加入碳酸氢钠固体调节pH＝8。水层用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到淡黄色油状物((3R，6S)-6-(((甲硫基)甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(108毫克，收率：95％)。LCMS(ESI)：m/z 292[M+1]+。往上述得到的((3R，6S)-6-(((甲硫基甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(108毫克，0.371毫摩尔，1.0当量)在二氯甲烷(6毫升)的混合物中加入间氯过氧苯甲酸(85％，166毫克，0.815毫摩尔，2.2当量)。混合物在室温下搅拌2小时。混合物用水(20毫升)稀释。加入碳酸氢钠固体调节pH＝8。水层用二氯甲烷(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到淡黄色油状物((3R，6S)-6-(((甲磺酰基)甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(126毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 324[M+1]+。将上述得到的((3R，6S)-6-(((甲磺酰基)甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(116毫克，0.359毫摩尔，1.0当量)的氯化氢甲醇溶液(4M溶液，2毫升)的混合物在室温下搅拌1小时。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到白色固体(3R，6S)-6-(((甲磺酰基)甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(93毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 224[M+1]+。
步骤26b：(4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(((甲磺酰基)甲氧基)甲基)四氢呋喃-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物37)的制备:往(3R，6S)-6-((甲磺酰基)甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(0108-37)(48毫克，0.215毫摩尔，1.3当量)和(4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-1)(70毫克，0.165毫摩尔，1.0当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1毫升)。混合物在90℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体(4-(苯并呋喃-7-基氧基)-2-氯苯基)(4-(((3R，6S)-6-(((甲磺酰基)甲氧基)甲基)四氢呋喃-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(45毫克，收率45％)。LCMS(ESI)：m/z 611[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)，熔点：230-233℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.60(d,J＝7.2Hz,1H),8.22(s,1H),8.04(d,J＝2.0Hz,1H),7.56(dd,J＝15.1,7.6Hz,3H),7.32(t,J＝7.8Hz,1H),7.21(d,J＝2.3Hz,1H),7.17(d,J＝7.8Hz,1H),7.07(d,J＝2.1Hz,1H),7.01(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),4.72–4.61(m,2H),4.23–4.03(m,2H),3.86–3.73(m,2H),3.64–3.56(m,1H),3.13(d,J＝9.9Hz,1H),2.94(s,3H),2.19(d,J＝11.8Hz,1H),1.75(d,J＝12.4Hz,1H),1.60(dt,J＝12.3,8.4Hz,1H),1.46(dt,J＝24.0,6.5Hz,1H).
实施例27：(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-((甲基磺酰基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物42)的制备(按照方案一线路制备)
步骤27a：(3R，6S)-6-((甲基磺酰基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(化合物0108-42)的制备:混合物((2S，5R)-5-((叔丁氧基羰基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲磺酸甲酯(150毫克，0.485毫摩尔，1.0当量)，甲硫醇钠(170毫克，2.427毫摩尔，5.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)在室温下搅拌过夜。混合物用水(25毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到黄色油状物((3R，6S)-6-((甲硫基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(138毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 262[M+1]+。将上述制备得到的((3R，6S)-6-((甲硫基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(138毫克，0.528毫摩尔，1.0当量)和间氯过氧苯甲酸(183毫克，1.057毫摩尔，2.0当量)在二氯甲烷(5毫升)溶液中在室温下搅拌3小时。反应液用饱和碳酸氢钠溶液调节pH＝8。混合物用水(15毫升)稀释，然后用二氯甲烷(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到白色固体((3R，6S)-6-(((甲基磺酰基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(100毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 294[M+1]+。将上述得到的((3R，6S)-6-(((甲基磺酰基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(70毫克，0.239毫摩尔，1.0当量)在氯化氢-二氧六环溶液(4M溶液，1.5毫升)的混合物在室温下搅拌1小时。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到黄色固体(3R，6S)-6-((甲基磺酰基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(54毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 229[M+1]+。
步骤27b：(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-((甲基磺酰基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物42)的制备:往(3R，6S)-6-((甲基磺酰基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(0108-42)(105毫克，0.239毫摩尔，1.0当量)和(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-2)(105毫克，0.239毫摩尔，1.0当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(2毫升)。混合物在90℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体((2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-((甲基磺酰基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(37毫克，收率26.1％)。LCMS(ESI)：m/z 595[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)，熔点：160℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.59(d,J＝7.2Hz,1H),8.21(s,1H),7.56–7.50(m,2H),7.42(d,J＝7.7Hz,1H),7.23(t,J＝7.8Hz,1H),7.19(d,J＝2.4Hz,1H),7.04(d,J＝7.9Hz,1H),6.98(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),6.67(d,J＝0.9Hz,1H),4.19(dd,J＝10.5,2.6Hz,1H),4.16–4.04(m,1H),3.85(dd,J＝10.9,8.4Hz,1H),3.47–3.40(m,1H),3.20–3.15(m,2H),2.98(s,3H),2.42(s,3H),2.16(d,J＝11.7Hz,1H),1.87(d,J＝12.8Hz,1H),1.65(dd,J＝12.1,3.6Hz,1H),1.53(d,J＝14.2Hz,1H).
实施例28：(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(((甲基磺酰基)甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物43)的制备(按照方案一线路制备)
往(3R，6S)-6-((甲磺酰基)甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(0108-37)(85毫克，0.331毫摩尔，1.0当量)和(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-2)(145毫克，0.331毫摩尔，1.0当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(2毫升)。混合物在90℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)[4-(((3R，6S)-6-(((甲基磺酰基)甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(51毫克，收率24.8％)。LCMS(ESI)：m/z 625[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)，熔点：160℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.60(d,J＝6.8Hz,1H),8.23(s,1H),7.56(d,J＝8.3Hz,2H),7.44(d,J＝7.4Hz,1H),7.25(t,J＝7.9Hz,1H),7.21(s,1H),7.06(d,J＝7.8Hz,1H),7.01(d,J＝7.9Hz,1H),6.70(s,1H),4.68(s,2H),4.18(d,J＝8.5Hz,2H),3.82(d,J＝5.7Hz,2H),3.60(s,1H),3.14(d,J＝10.2Hz,1H),2.95(s,3H),2.44(s,3H),2.19(s,1H),1.76(d,J＝11.5Hz,1H),1.61(d,J＝11.4Hz,1H),1.47(d,J＝11.8Hz,1H).
实施例29：(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物44)的制备(按照方案一线路制备)
步骤29a：(3R，6S)-6-((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(化合物0108-44)的制备：氮气保护下，0℃下，向((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(120毫克，0.519毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(10毫升)溶液中加入叔丁醇钾(116毫克，.038毫摩尔，2.0当量)，(甲基磺酰基)乙烯(220毫克，2.078毫摩尔，4.0当量)，混合物在室温下搅拌2.0小时。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1至30/1)纯化，得到黄色油状产物(3R，6S)-6-(((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(115毫克，收率：65.7％)。LCMS(ESI)：m/z＝338[M+1]+。将上述得到的((3R，6S)-6-(((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(115毫克，0.341毫摩尔，1.0当量)的氯化氢甲醇溶液(4M溶液，2.5毫升)的混合物在室温下搅拌1小时。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到白色固体(3R，6S)-6-((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(80毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z＝238[M+1]+。
步骤29b：(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物44)的制备：往(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-2)(80毫克，0.182毫摩尔，1.0当量)和(3R，6S)-6-((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(0108-44)(64.7毫克，0.273毫摩尔，1.5当量)在叔丁醇(10毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1.5毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝12:1)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(50毫克，收率：43.0％)。MS(ES+):m/z＝639(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.61(d,J＝7.0Hz,1H),8.25(s,1H),7.62–7.51(m,2H),7.45(d,J＝7.6Hz,1H),7.30–7.16(m,2H),7.06(d,J＝7.9Hz,1H),7.01(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),6.70(s,1H),4.17(d,J＝9.2Hz,2H),3.82(dq,J＝11.7,5.7Hz,2H),3.58–3.52(m,1H),3.51–3.46(m,2H),3.38(s,2H),3.15(t,J＝10.3Hz,2H),3.01(s,3H),2.45(s,3H),2.20(d,J＝12.0Hz,1H),1.77(d,J＝13.0Hz,1H),1.61(d,J＝12.2Hz,1H),1.52–1.40(m,1H).
实施例30：(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-((2-(乙基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物45)的制备(按照方案一线路制备)
往(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物2)(100毫克，0.188毫摩尔，1.0当量)和(乙基磺酰基)乙烯(90毫克，0.751毫摩尔，4.0当量)在四氢呋喃(10毫升)的混合物中加入叔丁醇钾(42毫克，0.376毫摩尔，2.0当量)。混合物在40℃加热3小时。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-((2-(乙基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(43毫克，收率：35.2％)。MS(ES+):m/z＝653(M+H)+.熔点：122～131℃ 1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.72(s,1H),8.58(d,J＝7.1Hz,1H),8.24(s,1H),7.60(s,1H),7.56(d,J＝8.5Hz,1H),7.44(d,J＝7.6Hz,1H),7.31–7.19(m,2H),7.05(d,J＝7.8Hz,1H),7.00(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),6.69(s,1H),4.14(t,J＝11.4Hz,2H),3.85–3.74(m,2H),3.53(dd,J＝12.3,6.3Hz,1H),3.50–3.41(m,2H),3.34(d,J＝5.6Hz,2H),3.14(ddd,J＝19.4,14.4,6.6Hz,3H),2.44(s,3H),2.19(d,J＝11.7Hz,1H),1.74(d,J＝12.6Hz,1H),1.60(dt,J＝12.0,8.5Hz,1H),1.45(dt,J＝12.5,6.5Hz,1H),1.23(d,J＝7.4Hz,3H).
实施例31：N-((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-(萘-1-基氧基)苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺(化合物59)的制备(按照方案四线路制备)
步骤31a：N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺盐酸盐(化合物0108-59)的制备:0℃下往((3R，6S)-6-(氨基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(70毫克，0.304毫摩尔，1.0当量)和三乙胺(0.17毫升，1.216毫摩尔，4.0当量)在二氯甲烷(4.5毫升)的混合物中逐滴加入2-(氯磺酰基)乙酸甲酯(105毫克，0.609毫摩尔，2.0当量)的二氯甲烷(0.5毫升)溶液。将混合物升到室温然后搅拌过夜。加入饱和碳酸氢钠溶液(15毫升)淬灭反应。水层用二氯甲烷(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到淡黄色油状物2-(N-(((2S，5R)-5-((叔丁氧羰基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)氨磺酰基)乙酸甲酯(125毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 367[M+1]+。往上述得到的2-(N-(((2S，5R)-5-((叔丁氧羰基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)氨磺酰基)乙酸甲酯(111毫克，0.304毫摩尔，1.0当量)在四氢呋喃(2.5毫升)和水(1毫升)的混合物中加入氢氧化钠(36.5毫克，0.912毫摩尔，3.0当量)。混合物在室温下搅拌1.5小时。混合物用水(15毫升)稀释。加入1N稀盐酸调节pH＝5。水层用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到白色固体2-(N-(((2S，5R)-5-((叔丁氧羰基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)氨磺酰基)乙酸(100毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 353[M+1]+。往上述得到的2-(N-(((2S，5R)-5-((叔丁氧羰基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)氨磺酰基)乙酸(93毫克，0.264毫摩尔，1.0当量)在四氢呋喃(3毫升)的混合物中滴加硼烷二甲硫醚(10M二甲硫醚溶液，0.066毫升，0.66毫摩尔，2.5当量)。混合物在室温下搅拌5小时。加入水(15毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(10毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到淡黄色油状物((3R，6S)-6-(((2-羟乙基)磺酰胺基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(80毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 339[M+1]+。将上述得到的((3R，6S)-6-(((2-羟乙基)磺酰胺基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(80毫克，0.237毫摩尔，1.0当量)的氯化氢甲醇溶液(4M溶液，1.5毫升)的混合物在室温下搅拌1小时。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到白色固体N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺盐酸盐(65毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 239[M+1]+。
步骤31b：N-((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-(萘-1-基氧基)苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺(化合物59)的制备:在氮气保护下，往N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺(0108-59)(56毫克，0.237毫摩尔，1.0当量)和(2-氯-4-(萘-1-基氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0403-32)(103毫克，0.237毫摩尔，1.0当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1毫升)。混合物在90℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体N-((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-(萘-1-基氧基)苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺(28毫克，收率19％)。LCMS(ESI)：m/z 636[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)，熔点：>200℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.59(d,J＝7.2Hz,1H),8.23(s,1H),8.04(d,J＝8.2Hz,2H),7.85(d,J＝8.3Hz,1H),7.68–7.49(m,5H),7.35–7.18(m,2H),7.02(dd,J＝8.5,2.2Hz,2H),4.93(s,1H),4.16(t,J＝11.9Hz,2H),3.74(t,J＝6.1Hz,2H),3.48–3.41(m,1H),3.21–3.12(m,3H),3.02(t,J＝5.6Hz,2H),2.19(d,J＝11.4Hz,1H),1.81(d,J＝12.6Hz,1H),1.59(dd,J＝22.6,10.7Hz,1H),1.40(dd,J＝27.2,13.5Hz,1H).
实施例32：(2-氯-4-苯氧苯基)(4-(((3R，6S)-6-((甲磺酰基)甲基)四氢呋喃-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物60)的制备(按照方案五线路制备)
步骤32a：2-氯-4-苯氧基苯甲酸甲酯(化合物0502-60)的制备：氮气保护下，向苯酚(0501-60)(7.0克，74.47毫摩尔，1.4当量)的N,N-二甲基甲酰胺(100毫升)溶液中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(10.0克，53.19毫摩尔，1.0当量)，碳酸钾(14.6克，106.38毫摩尔，2.0当量)。混合物在90℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1至10/1)纯化，得到无色油状产物2-氯-4-苯氧基苯甲酸甲酯(10.5克，收率：75.53％)。LCMS(ESI)：m/z＝263[M+1]+.
步骤32b：(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0503-60)的制备：氮气保护下，0℃下向5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(3.0克，12.93毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(15毫升)溶液中加入氢化钠(1.55克，38.79毫摩尔，3.0当量)并搅拌0.5小时，然后在-70℃下缓慢滴加正丁基锂(6.72毫升，16.81毫摩尔，1.3当量)并搅拌1.0小时。在-70℃下，2-氯-4-苯氧基苯甲酸甲酯(0502-60)(3.39克，12.93毫摩尔，1.0当量)溶于8毫升四氢呋喃滴加至反应液中并搅拌1.5小时。反应液用氯化铵溶液淬灭，加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝15/1至2/1)纯化，得到粉色固体产物(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(2.8克，收率：56.4％)。LCMS(ESI)：m/z＝384[M+1]+.
步骤32c：(2-氯-4-苯氧苯基)(4-((3R，6S)-6-(((甲磺酰基)甲基)四氢呋喃-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物60)的制备：往(3R，6S)-6-((甲磺酰基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(0108-42)(83毫克，0.52毫摩尔，2.0当量)和(2-氯-4-苯氧苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0503-60)(100毫克，0.26毫摩尔，1.0当量)在叔丁醇(10毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1毫升)。混合物在90℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体(2-氯-4-苯氧苯基)(4-(((3R，6S)-6-((甲磺酰基)甲基)四氢呋喃-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(70毫克，收率：49.9％)。LCMS(ESI)：m/z 571[M+1]+；熔点：152～155℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.74(s,1H),8.60(d,J＝7.2Hz,1H),8.25(s,1H),7.62(s,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,1H),7.48(t,J＝7.9Hz,2H),7.25(t,J＝7.4Hz,1H),7.18(dd,J＝5.1,2.6Hz,3H),7.02(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),4.25–4.19(m,1H),4.18–4.10(m,1H),3.88(dd,J＝10.8,8.5Hz,1H),3.44(dd,J＝14.9,8.7Hz,1H),3.25–3.18(m,2H),2.99(s,3H),2.19(d,J＝11.7Hz,1H),1.94–1.81(m,1H),1.73–1.63(m,1H),1.61–1.49(m,1H).
实施例33：(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-(((甲基磺酰基)甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物61)的制备(按照方案五线路制备)
往(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0503-60)(90毫克，0.235毫摩尔，1.0当量)和(3R，6S)-6-(((甲磺酰基)甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(0108-37)(93毫克，0.359毫摩尔，1.5当量)在叔丁醇(8毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.21毫升，1.175毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下在90℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(乙酸乙酯：二氯甲烷∶甲醇＝10：10：2)纯化，得到白色固体(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-(((甲基磺酰基)甲氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶-5-基)甲酮(66毫克，收率：49％)。LCMS(ESI)：m/z 571[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：108-111℃。1HNMR(DMSO-d6，500MHz)：δ12.50(s,1H),8.59(d,J＝7.0Hz,1H),8.25(s,1H),7.61(s,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,1H),7.49-7.46(m,2H),7.27-7.24(m,1H),7.19-7.17(m,3H),7.03-7.01(m,1H),4.70-7.65(m,2H),4.20-4.14(m,2H),3.85-3.79(m,2H),3.62-3.58(m,1H),3.18-3.13(m,1H),2.95(s,3H),2.21-2.19(m,1H),1.77-1.74(m,1H),1.66-1.58(m,1H),1.51-1.42(m,1H)。
实施例34：(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物62)的制备(按照方案五线路制备)
往(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0503-60)(93毫克，0.243毫摩尔，1.0当量)和(3R，6S)-6-((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(0108-44)(80毫克，0.0.292毫摩尔，1.2当量)在叔丁醇(10毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1.0毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝12:1)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(50毫克，收率：35.2％)。MS(ES+):m/z＝586(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.58(d,J＝6.9Hz,1H),8.24(s,1H),7.59(s,1H),7.56(d,J＝8.4Hz,1H),7.47(t,J＝7.8Hz,2H),7.25(t,J＝7.3Hz,1H),7.17(d,J＝8.1Hz,3H),7.02(dd,J＝8.4,1.8Hz,1H),4.15(d,J＝6.4Hz,2H),3.86–3.74(m,2H),3.52(dd,J＝11.7,7.0Hz,5H),3.14(dd,J＝19.9,8.8Hz,1H),2.99(s,3H),2.18(d,J＝12.4Hz,1H),1.75(d,J＝12.1Hz,1H),1.60(dd,J＝22.1,10.4Hz,1H),1.45(dd,J＝22.5,11.1Hz,1H).
实施例35：(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-((2-(乙基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物63)的制备(按照方案五线路制备)
步骤35a：(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0504-63)的制备:氮气保护下，往((2S,5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(33毫克，0.261毫摩尔，1.0当量)和(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0503-60)(100毫克，0.261毫摩尔，1.0当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(2毫升)。混合物在90℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(70毫克，收率56％)。LCMS(ESI)：m/z477[M+1]+。
步骤35b：(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-((2-(乙基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物63)的制备:往(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0504-63)(40毫克，0.083毫摩尔，1.0当量)和(乙基磺酰基)乙烯(40毫克，0.33毫摩尔，4.0当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入叔丁醇钾(19毫克，0.166毫摩尔，2.0当量)。混合物在50℃加热3小时。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-((2-(乙基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(18毫克，收率：36.1％)。MS(ES+):m/z＝599(M+H)+.熔点：102～111℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.72(s,1H),8.59(d,J＝7.0Hz,1H),8.25(s,1H),7.61(s,1H),7.57(d,J＝8.4Hz,1H),7.48(t,J＝7.8Hz,2H),7.25(t,J＝7.3Hz,1H),7.22–7.12(m,3H),7.02(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),4.16(d,J＝7.9Hz,2H),3.80(dd,J＝10.3,5.4Hz,2H),3.53(dd,J＝12.0,6.7Hz,1H),3.50–3.40(m,2H),3.34(t,J＝5.4Hz,2H),3.18–3.07(m,3H),2.19(d,J＝11.5Hz,1H),1.75(d,J＝12.7Hz,1H),1.61(d,J＝12.0Hz,1H),1.45(d,J＝11.1Hz,1H),1.23(d,J＝7.3Hz,3H).
实施例36：2-((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)乙烷-1-磺酰胺(化合物66)的制备(按照方案五线路制备)
在0℃下，往1-(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(717毫克，4.29毫摩尔，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(1.1克，8.59毫摩尔，2.0当量)在二氯甲烷(10毫升)的混合物中逐滴加入2-氯乙烷-1-磺酰氯(700毫克，4.29毫摩尔，1.0当量)。混合物在室温下搅拌过夜。混合物用水(25毫升)稀释，然后用二氯甲烷(25毫升×3)萃取。合并有机层用饱和食盐水(25毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，柱纯化(PE:EA＝10:1到5:1)得到黄色油状物N-(2,4-二甲氧基苄基)乙烯磺酰胺(900毫克，收率：83.3％)LCMS(ESI)：m/z 258[M+1]+。在0℃下，往N-(2,4-二甲氧基苄基)乙烯磺酰胺(547毫克，2.13毫摩尔，2.0当量)和(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0504-63)((510毫克，1.065毫摩尔，1.0当量)在四氢呋喃(5毫升)的混合物中加入叔丁醇钾(238.5毫克，4.26毫摩尔，4.0当量)。混合物在室温下搅拌过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，柱纯化(PE:乙酸乙酯＝10:1到5:1)得到黄色固体2-((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)乙烷-1-磺酰胺(150毫克，～30％纯度粗品)。LCMS(ESI)：m/z 736[M+1]+。将上述得到的2-((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)乙烷-1-磺酰胺(150毫克，0.2毫摩尔，1.0当量)在二氯甲烷(2毫升)和三氟乙酸(2毫升)的混合物溶液中室温下搅拌1小时。混合物用水(15毫升)稀释，然后用二氯甲烷(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体2-((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)乙烷-1-磺酰胺(34毫克，收率：12.8％)。LCMS(ESI)：m/z 586[M+1]+；1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.73(s,1H),8.58(d,J＝7.1Hz,1H),8.25(s,1H),7.60(s,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,1H),7.48(t,J＝8.0Hz,2H),7.25(t,J＝7.4Hz,1H),7.21–7.14(m,3H),7.02(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),6.74(s,2H),4.22–4.05(m,2H),3.85–3.74(m,2H),3.59–3.49(m,1H),3.44(t,J＝5.4Hz,2H),3.27(s,2H),3.18–3.09(m,1H),2.19(d,J＝12.2Hz,1H),1.76(d,J＝12.7Hz,1H),1.60(qd,J＝12.3,3.8Hz,1H),1.51–1.39(m,1H).
实施例37：2-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲氧基)-N，N-二甲基乙烷-1-磺酰胺(化合物67)的制备(按照方案五线路制备)
往(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0504-63)(50毫克，0.104毫摩尔，1.0当量)和N，N-二甲基乙烯磺酰胺(56毫克，0.209毫摩尔，4.0当量)在四氢呋喃(5毫升)的混合物中加入叔丁醇钾(23毫克，0.208毫摩尔，2.0当量)。混合物在50℃加热3小时。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)纯化，得到黄色固体产物2-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲氧基)-N，N-二甲基乙烷-1-磺酰胺(23毫克，收率：36.1％)。MS(ES+):m/z＝614(M+H)+.熔点：105～116℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.72(s,1H),8.58(d,J＝7.1Hz,1H),8.25(s,1H),7.61(s,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,1H),7.48(t,J＝7.9Hz,2H),7.25(t,J＝7.4Hz,1H),7.18(dd,J＝5.1,2.5Hz,3H),7.02(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),4.16(d,J＝8.5Hz,2H),3.76(t,J＝6.0Hz,2H),3.57–3.52(m,1H),3.49–3.42(m,2H),3.33(d,J＝6.1Hz,2H),3.18–3.07(m,1H),2.76(d,J＝8.5Hz,6H),2.19(d,J＝11.8Hz,1H),1.76(d,J＝12.0Hz,1H),1.61(dt,J＝11.9,8.6Hz,1H),1.45(dd,J＝23.8,9.8Hz,1H).
实施例38：2-((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)-N-甲基乙烷-1-磺酰胺(化合物68)的制备(按照方案五线路制备)
在0℃下,往1-(2,4-二甲氧基苯基)-N-甲基甲胺(1.0克，5.52毫摩尔，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(1.43克，11.04毫摩尔，2.0当量)在二氯甲烷(10毫升)的混合物中逐滴加入2-氯乙烷-1-磺酰氯(0.99克，6.07毫摩尔，1.1当量)。混合物在室温下搅拌过夜。混合物用水(25毫升)稀释，然后用二氯甲烷(25毫升×3)萃取。合并有机层用饱和食盐水(25毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到黄色油状物N-(2,4-二甲氧基苄基)-N-甲基乙烯磺酰胺(1.04克，收率：69％)LCMS(ESI)：m/z 272[M+1]+。在0℃下，往N-(2,4-二甲氧基苄基)-N-甲基乙烯磺酰胺(142毫克，0.523毫摩尔，2.5当量)和(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0504-63)(100毫克，0.209毫摩尔，1.0当量)在四氢呋喃(5毫升)的混合物中加入叔丁醇钾(47毫克，0.418毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到黄色油状物2-((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-N-甲基乙烷-1-磺酰胺(173毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 750[M+1]+。将上述制备的2-((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-N-甲基乙烷-1-磺酰胺(165毫克，0.22毫摩尔，1.0当量)在二氯甲烷(3毫升)和三氟乙酸(3毫升)的混合物溶液中室温下搅拌1小时。混合物用水(15毫升)稀释，然后用二氯甲烷(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体2-((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)-N-甲基乙烷-1-磺酰胺(34毫克，收率26％)。LCMS(ESI)：m/z 600[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：135℃-138℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.67(s,1H),8.59(d,J＝7.0Hz,1H),8.24(s,1H),7.87–7.82(m,1H),7.63–7.53(m,2H),7.48(t,J＝7.9Hz,2H),7.25(t,J＝7.4Hz,1H),7.22–7.10(m,3H),7.02(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.74(d,J＝4.8Hz,1H),4.16(d,J＝5.5Hz,2H),3.75(dt,J＝17.1,8.4Hz,2H),3.61–3.49(m,1H),3.46(t,J＝7.9Hz,2H),3.31(s,2H),3.14(t,J＝11.4Hz,1H),2.59(d,J＝4.9Hz,3H),2.19(d,J＝11.5Hz,1H),1.76(d,J＝13.1Hz,1H),1.60(dd,J＝22.2,10.3Hz,1H),1.45(dd,J＝22.5,11.0Hz,1H).
实施例39：(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-((3-(甲基磺酰基)丙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物69)的制备(按照方案五线路制备)
步骤39a：((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7-(甲基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲磺酸甲酯(化合物0504-69)的制备:0℃下往(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0504-63)(56毫克，0.117毫摩尔，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(0.12毫升，0.702毫摩尔，6.0当量)在二氯甲烷(3毫升)的混合物中加入甲磺酰氯(54毫克，0.468毫摩尔，4.0当量)。将混合物升到室温然后搅拌4小时。减压除去溶剂。残余物在真空下干燥，得到淡黄色油状物((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7-(甲基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲磺酸甲酯(150毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 635[M+1]++；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10:1)。
步骤39b：(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-((3-(甲基磺酰基)丙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物69)的制备:往3-(甲基磺酰基)丙-1-醇(143毫克，1.037毫摩尔，4.2当量)在N-甲基吡咯烷酮(4毫升)的混合物中逐滴加入KHMDS(1M四氢呋喃溶液，1.04毫升，1.04毫摩尔，4.2当量)。混合物在室温下搅拌5分钟。加入((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7-(甲基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲磺酸甲酯(0504-69)(157毫克，00.247毫摩尔，1.0当量)。混合物在室温下搅拌1小时，然后加热到100℃继续反应40分钟。混合物用饱和氯化铵水溶液(30毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到白色固体(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-((3-(甲基磺酰基)丙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(20毫克，收率：14％)。LCMS(ESI)：m/z 599[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：118-121℃。1HNMR(DMSO-d6，500MHz)：δ12.68(s,1H),8.58(d,J＝7.0Hz,1H),8.52(s,1H),7.61(s,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,1H),7.49-7.46(m,2H),7.27-7.24(m,1H),7.19-7.17(m,3H),7.03-7.01(m,1H),4.21-4.10(m,2H),3.53-3.51(m,3H),3.43-3.39(m,2H),3.15-3.12(m,3H),2.98(s,3H),2.20-2.18(m,1H),1.96-1.90(m,2H),1.78-1.75(m,1H),1.64-1.56(m,1H),1.45-1.40(m,1H)。
实施例40：氨基甲酸((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基酯(化合物70)的制备(按照方案五线路制备)
步骤40a：氨基甲酸((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基酯盐酸盐(化合物0108-70)的制备:往((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(50毫克，0.216毫摩尔，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(1.5毫升)的混合物中加入羰基二咪唑(53毫克，0.325毫摩尔，1.5当量)。混合物在室温下搅拌2小时。加入氨水(25％水溶液，0.24克，1.728毫摩尔，8.0当量)。混合物再搅拌2小时。混合物用水(20毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(10毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(10毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到白色固体((3R，6S)-6-((氨基甲酰氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(52毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 275[M+1]+。上述制备得到的((3R，6S)-6-((氨基甲酰氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(52毫克，0.190毫摩尔，1.0当量)的氯化氢甲醇溶液(4M溶液，2毫升)的混合物在室温下搅拌1小时。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到白色固体氨基甲酸((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基酯盐酸盐(40毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 175[M+1]+。
步骤40b：氨基甲酸((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基酯(化合物70)的制备:往(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0503-60)(73毫克，0.19毫摩尔，1.0当量)和氨基甲酸((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基酯盐酸盐(0108-70)(40毫克，0.19毫摩尔，1.0当量)在叔丁醇(8毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.17毫升，0.95毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下在90℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(乙酸乙酯：二氯甲烷∶甲醇＝10:10:2)纯化，得到白色固体氨基甲酸((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基酯(53毫克，收率：54％)。LCMS(ESI)：m/z 522[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：223-226℃。1HNMR(DMSO-d6，500MHz)：δ12.71(s,1H),8.57(d,J＝7.0Hz,1H),8.25(s,1H),7.61(s,1H),7.56(d,J＝8.5Hz,1H),7.49-7.46(m,2H),7.26-7.23(m,1H),7.18-7.16(m,3H),7.02-7.00(m,1H),6.52(s,2H),4.18-4.12(m,2H),3.95-3.87(m,2H),3.57-3.53(m,1H),3.15-3.10(m,1H),2.20-2.18(m,1H),1.76-1.74(m,1H),1.65-1.57(m,1H),1.49-1.41(m,1H)。
实施例41：N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲基)-2-甲氧基乙烷-1-磺酰胺(化合物71)的制备(按照方案五线路制备)
步骤41a：N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-2-甲氧基乙烷-1-磺酰胺盐酸盐(化合物0108-71)的制备:0℃下往((3R，6S)-6-(氨基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(58毫克，0.25毫摩尔，1.0当量)和三乙胺(0.14毫升，1.0毫摩尔，4.0当量)在二氯甲烷(4.5毫升)的混合物中逐滴加入2-甲氧基乙烷-1-磺酰氯(79毫克，0.5毫摩尔，2.0当量)的二氯甲烷(0.5毫升)溶液。将混合物升到室温然后搅拌过夜。加入饱和碳酸氢钠溶液(15毫升)淬灭反应。水层用二氯甲烷(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到淡黄色油状物((3R，6S)-6-(((2-甲氧基乙基)磺酰氨基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(100毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 353[M+1]+。上述制备得到的((3R，6S)-6-(((2-甲氧基乙基)磺酰氨基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(88毫克，0.25毫摩尔，1.0当量)的氯化氢甲醇溶液(4M溶液，1.5毫升)的混合物在室温下搅拌1小时。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到淡黄色油状物N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-2-甲氧基乙烷-1-磺酰胺盐酸盐(72毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 253[M+1]+。
步骤41b：N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲基)-2-甲氧基乙烷-1-磺酰胺(化合物71)的制备:往(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0503-60)(64毫克，0.167毫摩尔，1.0当量)和N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-2-甲氧基乙烷-1-磺酰胺盐酸盐(0108-71)(72毫克，0.25毫摩尔，1.5当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.15毫升，0.835毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下，在90℃下加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(乙酸乙酯：二氯甲烷∶甲醇＝15：15：2)纯化，得到白色固体N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲基)-2-甲氧基乙烷-1-磺酰胺(47毫克，收率：47％)。LCMS(ESI)：m/z 600[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：127-130℃。1HNMR(DMSO-d6，500MHz)：δ12.69(s,1H),8.59(d,J＝6.5Hz,1H),8.25(s,1H),7.61(s,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,1H),7.49-7.46(m,2H),7.27-7.24(m,1H),7.19-7.17(m,3H),7.14-7.11(m,1H),7.03-7.01(m,1H),4.19-4.15(m,2H),3.67-3.65(m,2H),3.43-3.41(m,1H),3.32-3.30(m,2H),3.27(s,3H),3.17-3.12(m,1H),3.04-3.02(m,2H),2.20-2.18(m,1H),1.82-1.79(m,1H),1.63-1.56(m,1H),1.45-1.34(m,1H)。
实施例42：N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺(化合物72)的制备(按照方案五线路制备)
往(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0503-60)(60毫克，0.157毫摩尔，1.0当量)和N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺盐酸盐(0108-59)(65毫克，0.235毫摩尔，1.5当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N，N-二异丙基乙胺(0.14毫升，0.785毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下，在90℃下加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(乙酸乙酯∶甲醇＝15：1)纯化，得到白色固体N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺(12毫克，收率：13％)。LCMS(ESI)：m/z 586[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：123-126℃。1HNMR(DMSO-d6，500MHz)：δ8.59(d,J＝7.0Hz,1H),8.25(s,1H),7.60(s,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,1H),7.49-7.46(m,2H),7.27-7.24(m,1H),7.19-7.17(m,3H),7.03-6.99(m,2H),4.89-4.87(m,1H),4.18-4.14(m,2H),3.76-3.73(m,2H),3.21-3.16(m,3H),3.14-3.12(m,1H),3.04-3.02(m,2H),2.20-2.18(m,1H),1.82-1.79(m,1H),1.63-1.55(m,1H),1.45-1.40(m,1H)。
实施例43：N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-yl)甲基)磺酰二胺(化合物73)的制备(按照方案五线路制备)
步骤43a：N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)磺酰二胺盐酸盐(化合物0108-73)的制备:0℃下往氯磺酰异氰酸酯(98.5毫克，0.696毫摩尔，2.0当量)在四氢呋喃(3.5毫升)的混合物中滴加苄醇(75毫克，0.696毫摩尔，2.0当量)的四氢呋喃(0.5毫升)溶液。混合物升到室温并搅拌1.5小时。加入((3R，6S)-6-(氨基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(80毫克，0.348毫摩尔，1.0当量)和三乙胺(0.19毫升，1.392毫摩尔，4.0当量)。混合物再搅拌3小时。加入饱和碳酸氢钠溶液(20毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到淡黄色油状物((3R，6S)-6-(((N-((苄氧基)羰基)氨磺酰基)氨基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(200毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 444[M+1]+。往上述制备得到的((3R，6S)-6-(((N-((苄氧基)羰基)氨磺酰基)氨基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(200毫克，0.451毫摩尔，1.0当量)在甲醇(5毫升)的混合物中加入钯碳(40毫克)。混合物在氢气球压力下室温搅拌过夜。混合物过滤。滤液在减压下浓缩，得到白色固体((3R，6S)-6-(((氨磺酰基氨基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯((168毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 310[M+1]+。上述制备得到的((3R，6S)-6-(((氨磺酰基氨基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(168毫克，0.54毫摩尔，1.0当量)的氯化氢甲醇溶液(4M溶液，1.5毫升)的混合物在室温下搅拌1小时。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到白色固体N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)磺酰二胺盐酸盐(135毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 210[M+1]+。
步骤43b：N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-yl)甲基)磺酰二胺(化合物73)的制备:往(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0503-60)(70毫克，0.183毫摩尔，1.0当量)和N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)磺酰二胺盐酸盐(0108-73)(67毫克，0.274毫摩尔，1.5当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.16毫升，0.915毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下，在90℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物经硅胶柱色谱(二氯甲烷：甲醇20：1)纯化，得到白色固体N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-yl)甲基)磺酰二胺(35毫克，收率：34％)。LCMS(ESI)：m/z 557[M+1]+；TLC：Rf0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：216-219℃。1HNMR(DMSO-d6，500MHz)：δ12.72(s,1H),8.59(d,J＝7.0Hz,1H),8.25(s,1H),7.62(s,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,1H),7.50-7.47(m,2H),7.27-7.24(m,1H),7.19-7.17(m,3H),7.04-7.01(m,1H),6.50(s,2H),6.46-6.43(m,1H),4.18-4.16(m,2H),3.49-3.47(m,1H),3.16-3.11(m,1H),3.01-2.91(m,2H),2.21-2.19(m,1H),1.89-1.86(m,1H),1.59-1.56(m,1H),1.43-1.38(m,1H)。
实施例44：N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲基)苯磺酰胺(化合物74)的制备(按照方案五线路制备)
步骤44a：N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)苯磺酰胺盐酸盐(化合物0108-74)的制备:往((3R，6S)-6-(氨基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(110毫克，0.478毫摩尔，1.0当量)和三乙胺(0.26毫升，1.912毫摩尔，4.0当量)在二氯甲烷(5毫升)的混合物中加入苯磺酰氯(169毫克，0.957毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌过夜。减压除去溶剂。残余物经硅胶柱色谱(二氯甲烷：甲醇30：1)纯化，得到白色固体((3R，6S)-6-(苯基磺酰胺基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(151毫克，收率：85％)。LCMS(ESI)：m/z 371[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷:甲醇＝10:1)。将上述制备得到的将((3R，6S)-6-(苯基磺酰胺基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(151毫克，0.408毫摩尔，1.0当量)的氯化氢甲醇溶液(4M溶液，1.5毫升)的混合物在室温下搅拌1.5小时。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到白色固体N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)苯磺酰胺盐酸盐(125毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z271[M+1]+；TLC：Rf 0.3(二氯甲烷:甲醇＝10:1)。
步骤44b：N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲基)苯磺酰胺(化合物74)的制备:往(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0503-60)(70毫克，0.183毫摩尔，1.0当量)和N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)苯磺酰胺盐酸盐(0108-74)(74毫克，0.275毫摩尔，1.5当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.16毫升，0.914毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下在90℃下加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)纯化，得到白色固体N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲基)苯磺酰胺(40毫克，收率：35％)。LCMS(ESI)：m/z 618[M+1]+；TLC：Rf0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：133-137℃。1HNMR(DMSO-d6，500MHz)：δ12.75(s,1H),8.55-8.54(m,1H),8.24(s,1H),7.83-7.81(m,2H),7.78-7.76(m,1H),7.66-7.56(m,5H),7.49-7.46(m,2H),7.27-7.24(m,1H),7.19-7.17(m,3H),7.03-7.01(m,1H),4.13-4.08(m,2H),3.34-3.30(m,1H),3.04-2.99(m,1H),2.87-2.82(m,2H),2.18-2.13(m,1H),1.76-1.73(m,1H),1.55-1.47(m,1H),1.37-1.26(m,1H)。
实施例45：N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲基)-4-氟苯磺酰胺(化合物75)的制备(按照方案五线路制备)
步骤45a：N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-4-氟苯磺酰胺盐酸盐(化合物0108-75)的制备:往((3R，6S)-6-(氨基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(90毫克，0.391毫摩尔，1.0当量)和三乙胺(0.22毫升，1.564毫摩尔，4.0当量)在二氯甲烷(5毫升)的混合物中加入4-氟苯磺酰氯(152毫克，0.783毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌过夜。减压除去溶剂。残余物经硅胶柱色谱(二氯甲烷：甲醇30：1)纯化，得到白色固体((3R，6S)-6-(((4-氟苯基)磺酰胺基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(123毫克，收率：81％)。LCMS(ESI)：m/z 389[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷:甲醇＝10:1)。上述制备得到的((3R，6S)-6-(((4-氟苯基)磺酰胺基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(123毫克，0.317毫摩尔，1.0当量)在氯化氢甲醇溶液(4M溶液，1.5毫升)的混合物在室温下搅拌1.5小时。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到淡黄色油状物N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-4-氟苯磺酰胺盐酸盐(100毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 289[M+1]+；TLC：Rf 0.3(二氯甲烷:甲醇＝10:1)。
步骤45b：N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲基)-4-氟苯磺酰胺(化合物75)的制备:往(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0503-60)(60毫克，0.157毫摩尔，1.0当量)和N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)-4-氟苯磺酰胺盐酸盐(0108-75)(76毫克，0.235毫摩尔，1.5当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.14毫升，0.785毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下在90℃下加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(乙酸乙酯：二氯甲烷∶甲醇＝15：:15∶2)纯化，得到白色固体N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲基)-4-氟苯磺酰胺(26毫克，收率：26％)。LCMS(ESI)：m/z 636[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：140-143℃。1HNMR(DMSO-d6，500MHz)：δ12.72(s,1H),8.55(d,J＝7.0Hz,1H),8.24(s,1H),7.89-7.86(m,2H),7.82-7.80(m,1H),7.61(s,1H),7.56(d,J＝8.5Hz,1H),7.49-7.42(m,4H),7.27-7.24(m,1H),7.19-7.17(m,3H),7.03-7.02(m,1H),4.10-4.08(m,2H),3.36-3.32(m,1H),3.05-3.00(m,1H),2.90-2.82(m,2H),2.16-2.13(m,1H),1.75-1.73(m,1H),1.57-1.49(m,1H),1.39-1.31(m,1H)。
实施例46：N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲基)氰胺(化合物76)的制备(按照方案五线路制备)
步骤46a：N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)氰胺盐酸盐(化合物0108-76)的制备:0℃下往((3R，6S)-6-(氨基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(100毫克，0.435毫摩尔，1.0当量)和乙酸钠(107毫克，1.304毫摩尔，3.0当量)的甲醇(4毫升)的混合物中逐滴加入溴化氰(92毫克，0.870毫摩尔，2.0当量)的甲醇(1毫升)溶液。将混合物升到室温然后搅拌过夜。加入饱和碳酸氢钠溶液(20毫升)淬灭反应。水层用二氯甲烷(20毫升×3)萃取。合并的有机层用食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到白色固体((3R，6S)-6-(氰胺基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(75毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 256[M+1]+。上述制备得到的((3R，6S)-6-(氰胺基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(75毫克，0.294毫摩尔，1.0当量)的氯化氢甲醇溶液(4M溶液，1.5毫升)的混合物在室温下搅拌1小时。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到白色固体N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)氰胺盐酸盐(56毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z156[M+1]+。
步骤46b：N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲基)氰胺(化合物76)的制备:往(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0503-60)(70毫克，0.183毫摩尔，1.0当量)和N-(((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)氰胺盐酸盐(0108-76)(52毫克，0.275毫摩尔，1.5当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.16毫升，0.915毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下在90℃下加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(乙酸乙酯：二氯甲烷∶甲醇＝15：:15∶3)纯化，得到白色固体N-(((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃2-基)甲基)氰胺(22毫克，收率：24％)。LCMS(ESI)：m/z 503[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：136-139℃。1HNMR(DMSO-d6，500MHz)：δ12.73(s,1H),8.59(d,J＝7.0Hz,1H),8.25(s,1H),7.61(s,1H),7.56(d,J＝8.5Hz,1H),7.49-7.46(m,2H),7.26-7.25(m,1H),7.18-7.17(m,3H),7.03-7.01(m,1H),6.84-6.82(m,1H),4.19-4.14(m,2H),3.46-3.44(m,1H),3.18-3.14(m,1H),3.07-3.03(m,1H),2.97-2.93(m,1H),2.20-2.18(m,1H),1.78-1.76(m,1H),1.65-1.58(m,1H),1.48-1.42(m,1H)。
实施例47：(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-(((2-羟乙基)氨基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物77)的制备(按照方案五线路制备)
往(2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-苯氧基苯甲酰基)-7-(甲基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲磺酸甲酯(054-6(74毫克，0.117毫摩尔，1.0当量)和碘化钠(9毫克，0.059毫摩尔，0.5当量)在乙腈(6毫升)的混合物中加入乙醇胺(71毫克，1.17毫摩尔，10.0当量)。混合物在氮气氛围下在80℃加热过夜。减压除去溶剂。残余物用水(15毫升)稀释并过滤。收集固体然后通过制备薄层色谱(乙酸乙酯：甲醇＝5：1)纯化，得到白色固体(2-氯-4-苯氧基苯基)(4-(((3R，6S)-6-(((2-羟乙基)氨基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(30毫克，收率：49％)。LCMS(ESI)：m/z522[M+1]+；TLC：Rf 0.3(二氯甲烷：甲醇＝8：1)；熔点：126-129℃。1HNMR(DMSO-d6，500MHz)：δ8.62-8.61(m,2H),8.25(s,1H),7.62(s,1H),7.56(d,J＝7.5Hz,1H),7.50-7.47(m,2H),7.27-7.22(m,1H),7.19-7.17(m,3H),7.03-7.01(m,1H),5.12(s,1H),4.24-4.21(m,2H),3.74-3.72(m,1H),3.66(s,2H),3.23-3.20(m,2H),3.11-3.09(m,1H),2.98-2.94(m,3H),2.22-2.20(m,1H),1.83-1.80(m,1H),1.67-1.62(m,1H),1.51-1.46(m,1H)。
实施例48：(2-氯-4-((2-(甲氧基甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物7)的制备(按照方案一线路制备)
步骤48a：2-氯-4-((2-(甲氧基甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-7)的制备:氮气保护下，在0℃下往2-氯-4-((2-(羟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-6)(250毫克，0.753毫摩尔，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)的混合物中加入氢化钠(61毫克，1.503毫摩尔，2.0当量)和碘甲烷(161毫克，1.130毫摩尔，1.5当量)。混合物在室温下搅拌2小时。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)得到黄色固体2-氯-4-((2-(甲氧基甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(150毫克，收率：57.7％)LCMS(ESI)：m/z 347[M+1]+。
将上述得到的2-氯-4-((2-(甲氧基甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(150毫克，0.753毫摩尔，1.0当量)的氢氧化钠溶液(4毫升)和四氢呋喃(2毫升)混合物在室温下搅拌过夜。调节混合物的pH＝6。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩得到黄色固体2-氯-4-((2-(甲氧基甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(148毫克，粗品)LCMS(ESI)：m/z333[M+1]+。
步骤48b：(2-氯-4-((2-(甲氧基甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-7)的制备:氮气保护下，将2-氯-4-((2-(甲氧基甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-7)(240毫克，0.723毫摩尔，1.0当量)、N,O-二甲基羟胺盐酸盐(106毫克，1.084毫摩尔，1.5当量)、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(330毫克，0.867毫摩尔、1.2当量)、三乙胺(366毫克，3.614毫摩尔，5.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)的混合物在室温下搅拌4小时。混合物用水(25毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝2:3)得到黄色固体2-氯-N-甲氧基-4-((2-(甲氧基甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)-N-甲基苯甲酰胺(160毫克，收率：59％)LCMS(ESI)：m/z 376[M+1]+。氮气保护下，在0℃下，往5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(2.0克，8.6毫摩尔，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(40毫升)的混合物中加入氢化钠(688毫克，17.2毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌0.5h。在0℃下往混合物中加入2-(三甲基硅烷基)乙氧甲基氯(1.9克，11.2毫摩尔，1.3当量)。混合在室温下反应1小时。混合物用水(200毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(50毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(50毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)得到白色固体5-溴-4-氯-7-(((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.86克，收率：60％)LCMS(ESI)：m/z 362[M+1]+。氮气保护下，在-70℃下，向5-溴-4-氯-7-(((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(310毫克，0.426毫摩尔，2.0当量)在四氢呋喃溶液(5毫升)的混合物中逐滴加入正丁基锂(0.7毫升，1.107毫摩尔，2.6当量)，混合物在-70℃下搅拌1小时。然后往混合物缓慢加入上述得到的2-氯-N-甲氧基-4-((2-(甲氧基甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)-N-甲基苯甲酰胺(160毫克，0.426毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃溶液(2毫升)，混合物在-70℃下搅拌1小时。反应液用饱和的氯化铵溶液(5毫升)淬灭。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)得到黄色固体(2-氯-4-((2-(甲氧基甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(120毫克，收率：47.2％)，LCMS(ESI)：m/z 598[M+1]+。
步骤48c：(2-氯-4-((2-(甲氧基甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物7)的制备:氮气保护下，往(2-氯-4-((2-(甲氧基甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-7)(120毫克，0.201毫摩尔，1.0当量)和((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(40毫克，0.241毫摩尔，1.2当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(2毫升)。混合物加热到90℃反应过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩得到黄色固体(2-氯-4-(((2-(甲氧基甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7-(((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(58毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 693[M+1]+。
往上述得到的(2-氯-4-(((2-(甲氧基甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7-(((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(50毫克，0.072毫摩尔，1.0当量)在二氯甲烷(2毫升)的混合物中加入三氟乙酸(1毫升)。混合物在室温下搅拌1小时。反应液浓缩后在残液中加入甲醇和氨水。混合物在室温下搅拌过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝20:1)纯化，得到黄色固体(2-氯-4-((2-(甲氧基甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(35毫克，收率：87.5％)。LCMS(ESI)：m/z563[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.48(s,1H),8.23(s,1H),7.77(d,J＝6.8Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.57(d,J＝7.6Hz,1H),7.33(t,J＝7.7Hz,1H),7.25(s,1H),7.18–7.11(m,2H),7.09–7.01(m,2H),4.64(s,1H),4.54(s,2H),4.14(d,J＝21.1Hz,1H),3.98(d,J＝8.5Hz,1H),3.39(d,J＝5.3Hz,1H),3.29(s,3H),3.27–3.22(m,1H),3.17(d,J＝4.7Hz,1H),3.06(t,J＝10.5Hz,1H),2.02(d,J＝10.7Hz,1H),1.74(d,J＝12.7Hz,1H),1.53(d,J＝12.4Hz,1H),1.32(d,J＝12.8Hz,1H).
实施例49：7-(3-氯-4-(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)苯并呋喃-2-甲腈(化合物9)的制备(按照方案六线路制备)
步骤49a：7-羟基苯并呋喃-2-甲酰胺(化合物0101-9)的制备:
Figure BDA0003632424340000951
向2-羟基-3-甲氧基苯甲醛(912毫克，6.0毫摩尔，1.0当量)和溴乙腈(792毫克，6.6毫摩尔，1.1当量)在40毫升N，N-二甲基甲酰胺的混合物中加入碳酸铯(5.8克，18.0毫摩尔，3.0当量)。混合物在室温下搅拌过夜，加入乙酸乙酯，用水和饱和食盐水洗，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2/1到1/1)纯化得到黄色固体7-甲氧基苯并呋喃-2-甲酰胺(440毫克，收率：38％)。MS(ES+):m/z192(M+H)+.
在氮气保护下，向上述得到的7-甲氧基苯并呋喃-2-甲酰胺(600毫克，3.1毫摩尔，1.0当量)的50毫升二氯甲烷溶液中加入2M三溴化硼的二氯甲烷溶液(2.82毫升，5.6毫摩尔，1.8当量)。混合物在室温下搅拌3小时。反应用氯化铵溶液淬灭，加入二氯甲烷萃取，经饱和食盐水洗，有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝2/1到1/2)得到黄色固体7-羟基苯并呋喃-2-甲酰胺(500毫克，收率：90％)。MS(ES+):m/z178(M+H)+.
步骤49b：7-(3-氯-4-甲酰基苯氧基)苯并呋喃-2-甲酰胺(化合物0602-9)的制备:在氮气保护下，7-羟基苯并呋喃-2-甲酰胺(0101-9)(500毫克，2.8毫摩尔，1.0当量)，2-氯-4-氟苯甲醛(0601-9)(533毫克，3.36毫摩尔，1.2当量)和碳酸钾(1.16克，8.4毫摩尔，3.0当量)在25毫升N，N-二甲基甲酰胺的混合物置于90℃下搅拌3小时。加入乙酸乙酯，用饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经过硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝3/1到1/1)，得到黄色固体7-(3-氯-4-甲酰基苯氧基)苯并呋喃-2-甲酰胺(740毫克，收率：83％)。MS(ES+):m/z 316(M+H)+.
步骤49c：7-(3-氯-4-((4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)(羟基)甲基)苯氧基)苯并呋喃-2-甲腈(化合物0603-9)的制备:在氮气保护下，7-(3-氯-4-甲酰基苯氧基)苯并呋喃-2-甲酰胺(0602-9)(300毫克，0.95毫摩尔，1.0当量)溶解于10毫升干燥N，N-二甲基甲酰胺。混合物冷却到0℃。加入三聚氯氰(1.23克，6.66毫摩尔，7.0当量)，然后在0℃下搅拌3小时。加入乙酸乙酯，用饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经过硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)，得到黄色固体7-(3-氯-4-甲酰基苯氧基)苯并呋喃-2-甲腈(128毫克，收率：45％)。MS(ES+):m/z 298(M+H)+.
氮气保护下，将5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(114毫克，0.50毫摩尔，1.5当量)溶解于10毫升无水四氢呋喃，并冷却到-70℃。滴加1.6M正丁基锂的正己烷溶液(0.79毫升，1.26毫摩尔，3.8当量)。混合物在-70℃下搅拌1小时。将上述得到的7-(3-氯-4-甲酰基苯氧基)苯并呋喃-2-甲腈(100毫克，0.34毫摩尔，1.0当量)溶解于0.5毫升无水四氢呋喃，然后滴加到上述混合物中。混合物在-70℃下搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，加入乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗。有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝3/1到1/1)得到黄色固体7-(3-氯-4-((4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)(羟基)甲基)苯氧基)苯并呋喃-2-甲腈(41毫克，收率：26％)。MS(ES+):m/z 451(M+H)+.
步骤49d：7-(3-氯-4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)苯并呋喃-2-甲腈(化合物0107-9)的制备:7-(3-氯-4-((4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)(羟基)甲基)苯氧基)苯并呋喃-2-甲腈(0603-9)(41毫克，0.089毫摩尔，1.0当量)溶解于6毫升二甲基亚砜，然后加入2-碘酰基苯甲酸(125毫克，0.443毫摩尔，5.0当量)。混合物在室温下搅拌过夜。加入水淬灭反应，加入乙酸乙酯萃取，有机相用水洗，经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到黄色固体7-(3-氯-4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)苯并呋喃-2-甲腈(40毫克，粗品)。MS(ES+):m/z 449(M+H)+.
步骤49e：7-(3-氯-4-(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)苯并呋喃-2-甲腈(化合物9)的制备:将7-(3-氯-4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)苯并呋喃-2-甲腈(0107-9)(40毫克，0.091毫摩尔，1.0当量)，((2S,5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(18毫克，0.11毫摩尔，1.2当量)和二异丙基乙胺(35毫克，0.27毫摩尔，3.0当量)加入到10毫升叔丁醇中，混合物在90℃下搅拌过夜。混合物减压浓缩，加入乙酸乙酯萃取，经水和饱和食盐水洗，有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经过制备薄层色谱纯化(展开剂为：二氯甲烷/甲醇＝25/1)，得到黄色固体7-(3-氯-4-(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)苯并呋喃-2-甲腈(20毫克，收率：33％)。MS(ES+):m/z544(M+H)+；熔点：135～137℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.73(s,1H),8.57(d,J＝7.2Hz,1H),8.24(d,J＝11.4Hz,2H),7.75–7.70(m,1H),7.63(s,1H),7.60(d,J＝8.5Hz,1H),7.48(t,J＝7.9Hz,1H),7.41(dd,J＝7.9,0.8Hz,1H),7.36(d,J＝2.4Hz,1H),7.11(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),4.62(t,J＝5.6Hz,1H),4.21–4.09(m,2H),3.42(dd,J＝11.6,6.2Hz,1H),3.40–3.34(m,2H),3.13(t,J＝11.6Hz,1H),2.22–2.12(m,1H),1.79(d,J＝13.6Hz,1H),1.58(dd,J＝11.9,4.0Hz,1H),1.43–1.37(m,1H).
实施例50：((2-氯-4-((4-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物19)的制备(按照方案一线路制备)
步骤50a：4-氟苯并呋喃-7-醇(化合物0101-19)的制备：
Figure BDA0003632424340000971
氮气保护下，将5-氟-2-甲氧基苯酚(2.0克，14.08毫摩尔，1.0当量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(3.6克，18.3毫摩尔，1.3当量)，碳酸钾(3.89克，28.16毫摩尔，2.0当量)和碘化钾(0.2克，10％质量比)的N,N-二甲基甲酰胺(30毫升)混合物在90℃下搅拌过夜。冷却到室温后，反应用水(30毫升)淬灭并加入乙酸乙酯(60毫升)萃取。有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-氟-1-甲氧基苯(3.1克，产率：86.1％)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
氮气保护下，将上述得到的2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-氟-1-甲氧基苯(3.1克，12.01毫摩尔，1.0当量)，和多聚磷酸(10.2克，30.03毫摩尔，2.5当量)的1,2-二氯乙烷(50毫升)混合物回流过夜。冷却到室温后，反应用水(50毫升)淬灭，加入二氯甲烷(100毫升)萃取。有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，滤液减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚)得到黄色油状4-氟-7-甲氧基苯并呋喃(1.1克，产率：55.3％)。MS(ES+):m/z＝167(M+H)+.
在氮气保护下，向上述得到的4-氟-7-甲氧基苯并呋喃(1.1克，6.62毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷(15毫升)溶液中加入三溴化硼(2.49克，9.94毫摩尔，1.5当量)，混合物在0℃下搅拌2小时。反应液加甲醇淬灭，加水稀释并用二氯甲烷萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝120/1至50/1)纯化，得到黄色油状产物4-氟苯并呋喃-7-醇(880毫克，收率：88.0％)。MS(ES+):m/z＝153(M+H)+.
步骤50b：2-氯-4-((4-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-19)的制备:氮气保护下，向4-氟苯并呋喃-7-醇(0101-19)(600毫克，3.95毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)溶液中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(1.12克，5.92毫摩尔，1.5当量)，碳酸钾(1.09克，7.90毫摩尔，2.0当量)。混合物在90℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝40/1至5/1)纯化，得到白色固体产物2-氯-4-((4-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(950毫克，收率：75.2％)。MS(ES+)：m/z＝321[M+1]+.
步骤50c：2-氯-4-((4-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-19)的制备：向2-氯-4-((4-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-19)(950毫克，2.97毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(5毫升)溶液中加入2M氢氧化钠溶液(5毫升)，然后将混合物搅拌在室温下搅拌过夜。反应液用4M盐酸调节至pH＝4，并用乙酸乙酯萃取。所得有机相干燥并减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝307[M+1]+.
步骤50d：2-氯-4-((4-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(化合物0105-19)的制备：氮气保护下，0℃下，向2-氯-4-((4-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-19)(410毫克，4.02毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(8毫升)溶液中加入草酰氯(510毫克，4.02毫摩尔，3.0当量)，N,N-二甲基甲酰胺(10毫克)，混合物在室温下搅拌过夜。反应液减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。
步骤50e：(2-氯-4-((4-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-19)的制备：氮气保护下，0℃下，向5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(300毫克，1.3毫摩尔，0.9当量)的四氢呋喃(5毫升)溶液中加入钠氢(165毫克，4.11毫摩尔，3.0当量)，然后在-70℃下缓慢滴加正丁基锂并搅拌1.0小时。-70℃下，将2-氯-4-((4-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(0105-19)(400毫克，粗品)的5毫升四氢呋喃溶液滴加至反应液中并搅拌1.5小时。反应液加氯化铵溶液淬灭，加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝20/1至1/1)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((4-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(120毫克，收率：18.8％)LCMS(ESI)：m/z＝443[M+1]+.
步骤50f：((2-氯-4-((4-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物19)的制备：往(2-氯-4-((4-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-19)(80毫克，0.18毫摩尔，1.0当量)和((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(28.6毫克，0.21毫摩尔，1.2当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.5毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝100/1至10/1)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((4-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(65毫克，收率：67.0％)。MS(ES+):m/z＝538(M+H)+.熔点：152-163℃；1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.70(s,1H),8.57(d,J＝6.9Hz,1H),8.24(s,1H),8.10(s,1H),7.61–7.50(m,2H),7.20(ddd,J＝29.5,13.3,5.3Hz,4H),7.05–6.95(m,1H),4.61(s,1H),4.15(d,J＝7.4Hz,2H),3.45–3.38(m,1H),3.34(d,J＝7.5Hz,2H),3.12(t,J＝11.3Hz,1H),2.18(d,J＝11.5Hz,1H),1.78(d,J＝12.9Hz,1H),1.57(dd,J＝22.5,10.5Hz,1H),1.38(dd,J＝23.0,9.9Hz,1H).
实施例51：(2-氯-4-((2-氯-5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基))氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物23)的制备(按照方案一线路制备)
步骤51a：2-氯-4-((2-氯-5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-23)的制备:
Figure BDA0003632424340000991
往2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-20)(1.0克，3.27毫摩尔，1.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(2滴)在二氯甲烷(12毫升)的混合物中加入草酰氯(0.55毫升，6.54毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌过夜。减压除去溶剂，并将残余物溶解于四氢呋喃(5毫升)中得到2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯溶液。在0℃和氮气氛围下，往叔丁醇(1.57毫升，4.25毫摩尔，1.3当量)在四氢呋喃(10毫升)的混合物中滴加正丁基锂(2.5M的己烷溶液，1.57毫升，3.92毫摩尔，1.2当量)。混合物搅拌15分钟。逐滴加入2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯的四氢呋喃溶液，然后将混合物在0℃下搅拌0.5小时。加入饱和氯化铵溶液(30毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(30毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(30毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯60：1)，得到淡黄色油状物2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸叔丁酯(0.629克，收率：53％)。LCMS(ESI)：m/z 363[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝30:1)。
在氮气氛围和-78℃下，往上述得到的2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸叔丁酯(407毫克，1.12毫摩尔，1.0当量)在四氢呋喃(7毫升)的混合物中逐滴加入N,N-二异丙基胺基锂(2.0M的四氢呋喃溶液，0.79毫升，1.58毫摩尔，1.4当量)。混合物搅拌1小时。逐滴加入六氯乙烷(373毫克，1.58毫摩尔，1.4当量)的四氢呋喃(1毫升)溶液，然后将混合物在-78℃下搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液(30毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯100：1)，得到淡黄色油状物2-氯-4-((2-氯-5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸叔丁酯(370毫克，收率：83％)。LCMS(ESI)：m/z 397[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝30:1)。
往上述得到的2-氯-4-((2-氯-5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸叔丁酯(370毫克，0.93毫摩尔，1.0当量)在二氯甲烷(8毫升)的混合物中加入三氟乙酸(2.5毫升)。混合物在室温下搅拌4小时。减压除去溶剂。残余物在真空下干燥，得到白色固体2-氯-4-((2-氯-5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(252毫克，收率：80％)。LCMS(ESI)：m/z 341[M+1]+；TLC：Rf 0.3(二氯甲烷:甲醇＝20:1)。
步骤51b：2-氯-4-((2-氯-5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(化合物0105-23)的制备:往2-氯-4-((2-氯-5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-23)(252毫克，0.74毫摩尔，1.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(1.6毫克，0.022毫摩尔，0.03当量)在二氯甲烷(6毫升)和四氢呋喃(1毫升)的混合物中加入草酰氯(0.16毫升，1.85毫摩尔，2.5当量)。混合物在室温下搅拌过夜。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到淡黄色油状物2-氯-4-((2-氯-5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(266毫克，粗品)。
步骤51c：(2-氯-4-((2-氯-5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-23)的制备:在氮气氛围下往氢化钠(60％，76毫克，1.90毫摩尔，2.0当量)在四氢呋喃(4毫升)的混合物中加入5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(220毫克，0.95毫摩尔，1.0当量)。混合物在室温下搅拌10分钟，然后冷却到-78℃。逐滴加入正丁基锂(2.5M己烷溶液，0.57毫升，1.42毫摩尔，1.5当量)并搅拌1小时。逐滴加入2-氯-4-((2-氯-5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(0105-23)(273毫克，0.76毫摩尔，0.8当量)的四氢呋喃(2毫升)溶液，然后在-78℃下搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液(30毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯2：1)，得到淡黄色固体(2-氯-4-((2-氯-5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(119毫克，收率：33％)。LCMS(ESI)：m/z 476[M+1]+；TLC：Rf 0.5(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)。
步骤51d：(2-氯-4-((2-氯-5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基))氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物23)的制备:往(2-氯-4-((2-氯-5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-23)(119毫克，0.25毫摩尔，1.0当量)和(3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(54毫克，0.33毫摩尔，1.3当量)在叔丁醇(10毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.22毫升，1.25毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下在90℃加热过夜。混合物用水(20毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(乙酸乙酯：二氯甲烷∶甲醇＝10：10：2)纯化，得到白色固体(2-氯-4-((2-氯-5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基))氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(70毫克，收率：49％)。LCMS(ESI)：m/z 571[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：163-166℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.74(s,1H),8.57(d,J＝6.7Hz,1H),8.25(s,1H),7.77–7.57(m,2H),7.43(s,1H),7.33(d,J＝8.1Hz,1H),7.25–7.05(m,3H),4.62(d,J＝5.5Hz,1H),4.16(d,J＝7.2Hz,2H),3.46–3.33(m,3H),3.19–3.04(m,1H),2.20(d,J＝11.6Hz,1H),1.79(d,J＝12.7Hz,1H),1.63–1.50(m,1H),1.39(dd,J＝27.9,15.8Hz,1H).
实施例52：(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-((3-(甲基磺酰基)丙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物46)的制备
Figure BDA0003632424340001011
往(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物2)(146毫克，0.27毫摩尔，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(0.20毫升，1.10毫摩尔，4.0当量)在二氯甲烷(6毫升)的混合物中加入甲磺酰氯(78毫克，0.69毫摩尔，2.5当量)。混合物在室温下搅拌2小时。加入饱和碳酸氢钠溶液(20毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到淡黄色固体((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-7-(甲基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯(173毫克，收率：92％)。TLC：Rf0.6(二氯甲烷：甲醇＝10:1)。
往3-(甲基磺酰基)丙-1-醇(129毫克，0.93毫摩尔，4.2当量)在N-甲基吡咯烷酮(4毫升)的混合物中逐滴加入六甲基二硅基胺基钾(KHMDS)(1M四氢呋喃溶液，0.93毫升，0.93毫摩尔，4.2当量)。混合物在室温下搅拌10分钟。加入((2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-7-(甲基磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯(153毫克，0.22毫摩尔，1.0当量)。混合物在室温下搅拌1h然后加热到100℃反应40分钟。加入饱和氯化铵水溶液(20毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到白色固体2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R，6S)-6-((3-(甲基磺酰基)丙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(18毫克，收率：13％)。LCMS(ESI)：m/z 653[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：136-139℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.36(s,1H),8.58(d,J＝7.1Hz,1H),8.24(s,1H),7.64–7.52(m,2H),7.44(d,J＝7.6Hz,1H),7.29–7.18(m,2H),7.05(d,J＝7.9Hz,1H),7.00(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),6.69(s,1H),4.15(d,J＝8.6Hz,2H),3.52(t,J＝6.2Hz,3H),3.40(ddd,J＝14.6,10.4,5.1Hz,2H),3.18–3.09(m,3H),2.98(s,3H),2.19(d,J＝11.9Hz,1H),1.97–1.87(m,2H),1.77(d,J＝12.4Hz,1H),1.59(dd,J＝12.1,3.6Hz,1H),1.50–1.38(m,1H).
实施例53：(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物49)的制备(按照方案一线路制备)
往(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮)(0107-21)(50毫克，0.109毫摩尔，1.0当量)和(3R，6S)-6-((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(0108-49)(44.6毫克，0.163毫摩尔，1.5当量)在叔丁醇(10毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1.5毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(41毫克，收率：57.34％)。MS(ES+):m/z＝657(M+H)+.1HNMR(500MHz,MeOD)δ8.89(d,J＝7.3Hz,1H),8.22(s,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,1H),7.44(s,1H),7.16(d,J＝1.5Hz,1H),7.11(dd,J＝8.3,1.6Hz,1H),7.04(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),6.81(dd,J＝9.9,1.7Hz,1H),6.55(s,1H),4.26(dt,J＝10.7,7.9Hz,2H),3.98–3.86(m,2H),3.62(d,J＝8.7Hz,1H),3.55(d,J＝4.8Hz,2H),3.35(dd,J＝12.4,8.2Hz,2H),3.26(t,J＝10.1Hz,1H),3.10–2.96(m,3H),2.42(s,3H),2.31(d,J＝12.3Hz,1H),1.82(d,J＝13.8Hz,1H),1.77–1.66(m,1H),1.64–1.54(m,1H).
实施例54：(2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(((甲磺酰基)乙氧基)甲基)-四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物52)的制备
在氮气的保护下，在冰水浴下，往((2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物14)(46毫克，0.083毫摩尔，1.0当量)和甲基乙烯基砜(26.5毫克，0.25毫摩尔，3.0当量)的四氢呋喃(5毫升)混合物中加入叔丁醇钾(18.6毫克，0.166毫摩尔，2.0当量)。混合物搅拌1小时。反应用饱和氯化铵水溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用厚制备薄层色谱板纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(((甲磺酰基)乙氧基)甲基)-四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(27毫克，收率：50.39％)。MS(ES+):m/z＝643(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.73(s,1H),8.58(d,J＝7.1Hz,1H),8.25(s,1H),7.67–7.56(m,2H),7.50(dd,J＝7.8,0.9Hz,1H),7.41–7.27(m,2H),7.24–7.11(m,2H),7.07(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),4.19–3.98(m,2H),3.92–3.71(m,2H),3.63–3.43(m,3H),3.36(t,J＝5.7Hz,2H),3.22–3.11(m,1H),2.96(d,J＝45.9Hz,3H),2.26–2.06(m,1H),1.75(dd,J＝11.1,3.7Hz,1H),1.61(dd,J＝11.9,3.8Hz,1H),1.51–1.40(m,1H).
实施例55：(2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃)-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物55)的制备
0℃下，往(2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物20)(60毫克，0.11毫摩尔，1.0当量)和甲基乙烯基砜(35毫克，0.34毫摩尔，3.0当量)在四氢呋喃(4.5毫升)的混合物中加入叔丁醇钾(25毫克，0.22毫摩尔，2.0当量)。混合物在0℃下搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液(20毫升)淬灭反应。水层用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到白色固体(2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-((2-(甲基磺酰基)乙氧基)甲基)四氢-2H-吡喃)-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(43毫克，收率：60％)。LCMS(ESI)：m/z 643[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：132-135℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.73(s,1H),8.58(d,J＝7.1Hz,1H),8.25(s,1H),8.10(d,J＝2.0Hz,1H),7.64(s,1H),7.59(d,J＝8.5Hz,1H),7.48–7.25(m,2H),7.15–6.96(m,3H),4.20–4.09(m,2H),3.81(dt,J＝11.5,5.9Hz,2H),3.64–3.50(m,1H),3.47(dd,J＝4.6,3.2Hz,2H),3.36(t,J＝5.6Hz,2H),3.14(t,J＝11.7Hz,1H),2.99(d,J＝7.3Hz,3H),2.20(d,J＝11.8Hz,1H),1.76(d,J＝13.0Hz,1H),1.71–1.50(m,1H),1.50–1.39(m,1H).
实施例56：(2-氯-4-((5-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物78)的制备(按照方案六线路制备)
步骤56a：5-甲基苯并呋喃-7-醇(化合物0101-78)的制备
Figure BDA0003632424340001041
氮气保护下，将2-溴-4-甲基苯酚(7.0克，37.43毫摩尔，1.0当量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷11.06克，56.14毫摩尔，1.5当量)，碳酸钾(7.76克，56.14毫摩尔，1.5当量)的N,N-二甲基甲酰胺(50毫升)的混合物在120℃下搅拌过夜。冷却到室温后，反应加水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到黄色油状物2-溴-1-(二乙氧基甲氧基)-4-甲基苯(12.0克,粗品)。该产品不需要进一步纯化，直接用于下一步。
氮气保护下，将上述得到的2-溴-1-(二乙氧基甲氧基)-4-甲基苯(12.0克，38.18毫摩尔，1.0当量)和多聚磷酸(32.0克，95.45毫摩尔，2.5当量)的1,2-二氯乙烷(100毫升)混合物在90℃搅拌过夜。冷却到室温后，反应加水淬灭，用二氯甲烷萃取。有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝50/1至20/1)，得到黄色油状物7-溴-5-甲基苯并呋喃(5.3克，收率：65.79％)。
氮气保护下，将上述得到的7-溴-5-甲基苯并呋喃(2.20克，10.42毫摩尔，1.0当量)，硼酸三异丙酯(2.94克，15.63毫摩尔，1.5当量)的四氢呋喃(20毫升)混合物在-78℃中搅拌。逐滴加入正丁基锂(1.6摩尔每升，9.8毫升，15.63毫摩尔，1.5当量)，然后在-78℃下搅拌2小时。反应用饱和氯化铵溶液进行淬火，用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真减压浓缩。残留物经硅胶层析纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯＝5/1至4/1)，得到黄色固体(5-甲基苯并呋喃-7-基)硼酸(1.10克，收率：59.98％)
氮气保护下，将上述得到的(5-甲基苯并呋喃-7-基)硼酸(1.1克，6.25毫摩尔，1.0当量)，过氧化氢溶液(30％，10毫升)，甲醇(20毫升)的混合物在室温下搅拌过夜。反应液加水稀释并用亚硫酸钠溶液淬灭。混合物用乙酸乙酯萃取，有机相加饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝5/1至4/1)，得到棕色固体5-甲基苯并呋喃-7-醇(410毫克，收率：44.32％)。LCMS(ESI)：m/z＝149[M+1]+.
步骤56b：2-氯-4-((5-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲醛(化合物0602-78)的制备：氮气保护下，5-甲基苯并呋喃-7-醇(0101-78)(410毫克，2.77毫摩尔，1.0当量)，2-氯-4-氟苯甲醛(0601-9)(394毫克，2.49毫摩尔l，0.9当量)，碳酸钾(573毫克，4.15毫摩尔，1.5当量)的N，N-二甲基甲酰胺(10毫升)混合物在90℃下搅拌1.5小时。反应液加水稀释，用乙酸乙酯萃取，有机相加饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到黄色油状产物2-氯-4-((5-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲醛(500毫克，收率：69.97％)。LCMS(ESI)：m/z＝287[M+1]+.
步骤56c：(2-氯-4-(5-甲基苯并呋喃-7-基)氧苯基)(4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲醇(化合物0603-78)的制备：在氮气保护下，5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(323毫克，1.39毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃混合物在-78℃下搅拌。逐滴加入叔丁基锂(1.6摩尔每升，2.6毫升，4.18毫摩尔，3.0当量)，然后在-78℃下搅拌2小时。在-78℃下，2-氯-4-((5-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲醛(0602-78)(400毫克，1.39毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(3毫升)溶液滴加至反应液中并搅拌1小时。反应用饱和氯化铵溶液进行淬火，用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物经硅胶层析纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯＝2/1至1/1)，得到粉色固体(2-氯-4-(5-甲基苯并呋喃-7-基)氧)苯基)(4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲醇(240毫克，收率:39.33％)。LCMS(ESI)：m/z＝440[M+1]+.
步骤56d：(2-氯-4-(5-甲基苯并呋喃-7-基)氧苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-78)的制备：将(2-氯-4-(5-甲基苯并呋喃-7-基)苯基)(4-氯-7H-氧吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲醇(0603-78)(240毫克，0.55毫摩尔，1.0当量)和2-碘酰基苯甲酸(764毫克，2.73毫摩尔，5.0当量)的N-甲基吡咯烷酮(10毫升)混合物在常温中搅拌6小时。混合物加水稀释，用2摩尔每升的氢氧化钠溶液洗涤，用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠上干燥并减压浓缩，残留物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯＝2/1)，得到黄色固体(2-氯-4-(5-甲基苯并呋喃-7-基)氧)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(119毫克，收率49.51％)。LCMS(ESI)：m/z＝438[M+1]+.
步骤56e：(2-氯-4-((5-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物78)的制备:氮气保护下，往(2-氯-4-((5-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-78)(119毫克，0.27毫摩尔，1.0当量)和((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(82毫克，0.36毫摩尔，1.3当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.24毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取。有机相加饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用厚制备薄层色谱(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到黄色固体(2-氯-4-((5-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(103毫克，收率：71.71％)。LCMS(ESI)：m/z＝533[M+1]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.82(d,J＝7.1Hz,1H),8.34(s,1H),7.58(d,J＝2.1Hz,1H),7.39(d,J＝8.5Hz,1H),7.36(s,1H),7.27(s,1H),7.11(d,J＝2.3Hz,1H),6.98(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),6.88(s,1H),6.76(d,J＝2.1Hz,1H),4.37(t,J＝8.8Hz,2H),3.68(dd,J＝11.3,2.8Hz,1H),3.63–3.46(m,2H),3.38–3.25(m,1H),2.34(d,J＝8.5Hz,1H),2.01(dd,J＝12.3,6.4Hz,1H),1.62(d,J＝3.5Hz,2H),1.33(s,1H).
实施例57：(2-氯-4-((5-甲氧基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物79)的制备(按照方案一线路制备)
步骤57a：5-甲氧基苯并呋喃-7-醇(化合物0101-79)的制备：
Figure BDA0003632424340001061
氮气保护下，向3-溴-2-羟基-5-甲氧基苯甲醛(5克，21.6毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(30毫升)溶液中加入2-溴乙酸乙酯(5.43克，32.5毫摩尔，1.5当量)，碳酸铯(14.11克，43.3毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌2.0小时，然后在120℃下搅拌2.0小时。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)纯化，得到黄色固体产物7-溴-5-甲氧基苯并呋喃-2-甲酸乙酯(3.34克，收率：51.78％)。LCMS(ESI)：m/z＝299[M-1]-.
向上述得到的7-溴-5-甲氧基苯并呋喃-2-甲酸乙酯(3.34克，11.21毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(8毫升)溶液中加入4M NaOH溶液(16毫升)，混合物搅拌在室温下搅拌过夜。反应液用4M盐酸调节至pH＝4，并用乙酸乙酯萃取。所得有机相干燥并减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝271[M-1]-.
氮气保护下，向上述得到的7-溴-5-甲氧基苯并呋喃-2-羧酸(2.71克，10.04毫摩尔，1.0当量)的喹啉(30毫升)溶液中加入铜粉(3.22克，50.19毫摩尔，5.0当量)，混合物搅拌在125℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，过滤。将滤液干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚)纯化，得到黄色油状产物7-溴-5-甲氧基苯并呋喃(1.35克，收率：59.73％)。
氮气保护下，将上述得到的混合物7-溴-5-甲氧基苯并呋喃(1.25克，5.53毫摩尔，1.0当量)，双联硼酸频那醇酯(1.83克，5.53毫摩尔，1.0当量)，醋酸钾(1.63克，16.59毫摩尔，3.0当量)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(0.4克，0.55毫摩尔，0.1当量)的二甲基亚砜溶液(20毫升)在90℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到黄色固体产物2-(5-甲氧基苯并呋喃-7-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊烷(450毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z＝275[M+1]+.
氮气保护下，将混合物2-(5-甲氧基苯并呋喃-7-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊烷(450毫克，1.28毫摩尔，1.0当量)，双氧水(4毫升)，甲醇(8毫升)在室温下搅拌过夜。反应液加水稀释并用亚硫酸钠溶液淬灭。混合物用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩得到黄色固体产物5-甲氧基苯并呋喃-7-醇(210毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z＝165[M+1]+.
步骤57b：2-氯-4-((5-甲氧基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-79)的制备：氮气保护下，将2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0101-79)(345毫克，1.83毫摩尔，1.5当量)，碳酸钾(253毫克，1.83毫摩尔，1.5当量)加入到5-甲氧基苯并呋喃-7-醇(0102-1)(200毫克，1.22毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(6毫升)溶液中。混合物在90℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝20/1至10/1)纯化，得到黄色油状产物2-氯-4-((5-甲氧基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(390毫克，收率：96.53％)。LCMS(ESI)：m/z＝333[M+1]+.
步骤57c：2-氯-4-((5-甲氧基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-79)的制备：向2-氯-4-((5-甲氧基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(380毫克，1.15毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(6毫升)溶液中加入2M氢氧化钠溶液(12毫升)，混合物在室温下搅拌过夜。反应液用4M盐酸调节至pH＝4，并用乙酸乙酯萃取。所得有机相干燥并减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝319[M+1]+.
步骤57d：2-氯-4-((5-甲氧基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(化合物0105-79)的制备：氮气保护下，0℃下，向2-氯-4-((5-甲氧基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-79)(200毫克，0.63毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷溶液(5毫升)溶液中滴加草酰氯(240毫克，1.89毫摩尔，3.0当量)，N,N-二甲基甲酰胺(1毫克)。混合物在室温下搅拌过夜。反应液减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。
步骤57e：(2-氯-4-((5-甲氧基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-79)的制备：氮气保护下，0℃下向5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(161毫克，0.69毫摩尔，1.1当量)的四氢呋喃(5毫升)溶液中加入氢化钠(50毫克，1.26毫摩尔，2.0当量)，混合物在室温下搅拌1小时。然后在-70℃下缓慢滴加正丁基锂(0.52毫升，0.82毫摩尔，1.3当量)并搅拌1.0小时。在-70℃下，将2-氯-4-((5-甲氧基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(0105-79)(211毫克，粗品)的3毫升四氢呋喃溶液滴加至反应液中并搅拌1.5小时。反应液用氯化铵溶液淬灭，加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至2/1，10％二氯甲烷)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((5-甲氧基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(51毫克，收率：17.89％)。LCMS(ESI)：m/z＝454[M+1]+.
步骤57f：(2-氯-4-((5-甲氧基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物79)的制备：往(2-氯-4-((5-甲氧基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-79)(51毫克，0.112毫摩尔，1.0当量)和((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(19毫克，0.112毫摩尔，1.0当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(2毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用制备薄层色谱(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到黄色固体(2-氯-4-((5-甲氧基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(37毫克，收率：60.66％)。MS(ES+):m/z＝549(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.60(d,J＝7.1Hz,1H),8.20(s,1H),8.02(d,J＝1.9Hz,1H),7.56–7.46(m,2H),7.15(d,J＝2.2Hz,1H),7.00(dd,J＝8.7,2.1Hz,2H),6.95(d,J＝1.9Hz,1H),6.83(d,J＝1.9Hz,1H),4.65(s,1H),4.14(t,J＝9.5Hz,2H),3.94(s,3H),3.48–3.36(m,3H),3.11(t,J＝9.9Hz,1H),2.18(d,J＝12.2Hz,1H),1.78(d,J＝12.9Hz,1H),1.55(dd,J＝13.9,10.1Hz,1H),1.38(dd,J＝23.1,9.6Hz,1H).
实施例58：7-(3-氯-4-(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)苯并呋喃-5-甲腈(化合物80)的制备(按照方案六线路制备)
步骤58a：7-羟基苯并呋喃-5-甲腈(化合物0101-80)的制备：
Figure BDA0003632424340001081
氮气保护下，向5-溴-2-羟基-3-甲氧基苯甲醛(6克，25.97毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(100毫升)溶液中加入2-溴乙酸乙酯(5.2克，31.17毫摩尔，1.2当量)，碳酸铯(16.93克，51.94毫摩尔，2.0当量)，混合物在室温下搅拌2.0小时，然后在120℃下搅拌2.0小时。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)纯化，得到黄色固体产物5-溴-7-甲氧基苯并呋喃-2-甲酸乙酯(3.64克，收率：46.9％)。
向上述得到的5-溴-7-甲氧基苯并呋喃-2-甲酸乙酯(3.64克，26.29毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(8毫升)溶液中加入4M NaOH溶液(24毫升)，混合物在室温下搅拌过夜。反应液用4M盐酸调节至pPH＝4，并用乙酸乙酯萃取。所得有机相干燥并减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝269[M-1]-.
氮气保护下，向上述得到的5-溴-7-甲氧基苯并呋喃-2-羧酸(6.34克，23.39毫摩尔，1.0当量)的喹啉(100毫升)溶液中加入铜粉(7.6克，116.97毫摩尔，5.0当量)，混合物搅拌在135℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，过滤。将滤液干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝100/1至10/1)纯化，得到黄色油状产物5-溴-7-甲氧基苯并呋喃(3.54克，收率：66.79％)。
氮气保护下，向上述得到的5-溴-7-甲氧基苯并呋喃(2.21克，9.73毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷溶液(300毫升)中加入三溴化硼(3.66克，14.60毫摩尔，1.5当量)，混合物在0℃下搅拌10分钟，然后在室温下搅拌过夜。反应液加甲醇淬灭，加水稀释并用二氯甲烷萃取。将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至3/1)纯化，得到黄色固体产物5-溴苯并呋喃-7-醇(1.35克，收率：65.21％)。
氮气保护下，向上述得到的5-溴苯并呋喃-7-醇(1.66克，7.79毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷溶液(50毫升)中加入咪唑(1.06克，15.58毫摩尔，2.0当量)，叔丁基二甲基氯硅烷(1.76克，11.68毫摩尔，1.5当量)。混合物在室温下搅拌3.0小时。反应液加水稀释并用二氯甲烷萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至4/1)纯化，得到黄色油状((5-溴苯并呋喃-7-基)氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(2.0克，收率：78.5％)。
氮气保护下，向上述得到的((5-溴苯并呋喃-7-基)氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(2.3克，7.03毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(40毫升)溶液中加入氰化锌(2.06克，17.57毫摩尔，2.5当量)，四三苯基膦钯(813毫克，0.703毫摩尔，0.1当量)，混合物在100℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至2/1)纯化，得到黄色固体产物7-羟基苯并呋喃-5-甲腈(1.12克，收率：100％)。LCMS(ESI)：m/z＝158[M-1]-.
步骤58b：7-(3-氯-4-甲酰基苯氧基)苯并呋喃-5-甲腈(化合物0602-80)的制备：氮气保护下，向7-羟基苯并呋喃-5-甲腈(0101-80)(155克，0.97毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液中加入2-氯-4-氟苯甲醛(0601-9)(184毫克，1.16毫摩尔，1.2当量)，碳酸钾(200克，1.46毫摩尔，1.5当量)。混合物在90℃下搅拌2.5小时。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)纯化，得到白色固体产物7-(3-氯-4-甲酰基苯氧基)苯并呋喃-5-甲腈(235毫克，收率：81.6％)。
步骤58c：7-(3-氯-4-((4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)(羟基)甲基)苯氧基)苯并呋喃-5-甲腈(化合物0603-80)的制备：氮气保护下，在-70℃下向5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(229毫克，0.99毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(20毫升)溶液中缓慢滴加正丁基锂(1.55毫升，2.48毫摩尔，2.5当量)并搅拌1.0小时。在-70℃下，7-(3-氯-4-甲酰基苯氧基)苯并呋喃-5-甲腈(0602-80)(235毫克，0.79毫摩尔，0.8当量)溶于1毫升四氢呋喃滴加至反应液中并搅拌1.0小时。反应液加氯化铵溶液淬灭，加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/1，10％二氯甲烷)纯化，得到粉色固体产物7-(3-氯-4-((4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)(羟基)甲基)苯氧基)苯并呋喃-5-甲腈(95毫克，收率：70.0％)。LCMS(ESI)：m/z＝451[M+1]+.
步骤58d：7-(3-氯-4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)苯并呋喃-5-甲腈(化合物0107-80)的制备：向7-(3-氯-4-((4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)(羟基)甲基)苯氧基)苯并呋喃-5-甲腈(0603-80)(90毫克，0.2毫摩尔，1.0当量)的N-甲基吡咯烷酮(8毫升)溶液中加入2-碘酰基苯甲酸(280毫克，1.0毫摩尔，5.0当量)，混合物搅拌在室温下搅拌过夜。反应液加碳酸氢钠溶液调至pH＝8，并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用厚制备薄层色谱(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到无色油状产物7-(3-氯-4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)苯并呋喃-5-甲腈(88毫克，收率：98.0％)。
步骤58e：7-(3-氯-4-(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)苯并呋喃-5-甲腈(化合物80)的制备：往7-(3-氯-4-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)苯并呋喃-5-甲腈(0107-80)(80毫克，0.178毫摩尔，1.0当量)和((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-80)(28.2毫克，0.214毫摩尔，1.2当量)在叔丁醇(8毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.5毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用制备薄层色谱(二氯甲烷/甲醇＝9/1)纯化，得到黄色固体产物7-(3-氯-4-(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基)苯氧基)苯并呋喃-5-甲腈(46毫克，收率：47.6％)。MS(ES+):m/z＝544(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.72(s,1H),8.57(d,J＝7.2Hz,1H),8.32–8.22(m,2H),8.13(d,J＝1.3Hz,1H),7.75–7.51(m,3H),7.42(d,J＝2.4Hz,1H),7.25–7.09(m,2H),4.62(t,J＝5.6Hz,1H),4.23–4.09(m,2H),3.43(t,J＝5.4Hz,1H),3.39–3.32(m,2H),3.22–3.09(m,1H),2.20(d,J＝12.0Hz,1H),1.79(d,J＝13.6Hz,1H),1.58(dd,J＝11.9,3.7Hz,1H),1.39(dt,J＝23.6,14.9Hz,1H).
实施例59：(2-氯-4-((2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(2-chloro-4-((2-methyl-5-(trifluoromethyl)benzofuran-7-yl)oxy)phenyl)(4-(((3R,6S)-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3-yl)amino)-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)methanone(化合物81)的制备(按照方案一线路制备)
步骤59a：2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-醇(化合物0101-81)的制备：
Figure BDA0003632424340001111
氮气保护下，向2-溴-4-(三氟甲基)苯酚(4克，16.59毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(40毫升)溶液中加入3-溴丙-1-炔(2.37克，19.92毫摩尔，1.2当量)，碳酸钾(3.44克，24.90毫摩尔，1.5当量)，混合物在50℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化，得到黄色油状产物2-溴-1-(丙-2-炔-1-基氧基)-4-(三氟甲基)苯(4.57克，收率：99.13％)。
氮气保护下，向上述得到的2-溴-1-(丙-2-炔-1-基氧基)-4-(三氟甲基)苯(4.56克，16.4毫摩尔，1.0当量)的N,N-二乙基苯胺(40毫升)溶液中加入氟化铯(3.24克，21.32毫摩尔，1.3当量)，混合物在220℃下搅拌8小时。反应液加水稀释并用1摩尔的盐酸溶液调节到pH＝6。混合物用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚)纯化，得到黄色油状产物7-溴-2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃(3.17克，收率：69.52％)。
氮气保护下，在-70℃下，向上述得到的7-溴-2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃(1.5克，5.40毫摩尔，1.0当量)，硼酸三异丙酯(1.32克，7.01毫摩尔，1.3当量)的四氢呋喃(15毫升)溶液中缓慢加入正丁基锂(3.4毫升，8.63毫摩尔，1.6当量)并在-70℃下搅拌1小时。然后混合物在室温下搅拌4小时。反应液加水稀释并用1摩尔的盐酸溶液调节到pH＝6。混合物用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化，得到黄色油状产物(2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)硼酸(910毫克，收率：68.94％)。LCMS(ESI)：m/z＝245[M+1]+.
氮气保护下，将上述得到的(2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)硼酸(1.02克，4.18毫摩尔，1.0当量)，双氧水(5毫升)，甲醇(10毫升)的混合物在室温下搅拌过夜。反应液加水稀释并用亚硫酸钠溶液淬灭。混合物用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩得到黄色固体产物2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-醇(210毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z＝217[M+1]+.
步骤59b：2-氯-4-((2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(化合物0103-81)的制备：氮气保护下，向2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-醇(0101-81)(930毫克，4.31毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)溶液中加入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(0102-1)(810毫克，4.74毫摩尔，1.1当量)，碳酸钾(890克，6.46毫摩尔，1.5当量)，混合物在90℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝20/1至10/1)纯化，得到白色油状产物2-氯-4-((2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(890毫克，收率：46.35％)。LCMS(ESI)：m/z＝385[M+1]+.
步骤59c：2-氯-4-((2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(化合物0104-81)的制备：向2-氯-4-((2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸甲酯(0103-81)(700毫克，1.83毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(15毫升)溶液中加入2M氢氧化钠溶液(30毫升)，混合物搅拌在室温下搅拌过夜。反应液用4M盐酸调节至pH＝4，并用乙酸乙酯萃取。所得有机相干燥并减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝371[M+1]+.
步骤59d：2-氯-4-((2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(化合物0105-81)的制备：氮气保护下，0℃下，向2-氯-4-((2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酸(0104-81)(300毫克，0.81毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(8毫升)溶液中滴加草酰氯(314毫克，2.43毫摩尔，3.0当量)，N,N-二甲基甲酰胺(1毫克)。混合物在室温下搅拌过夜。反应液减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。
步骤59e：(2-氯-4-((2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物0107-81)的制备：氮气保护下，0℃下向5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0106-1)(235毫克，1.01毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(5毫升)溶液中加入氢化钠(81毫克，2.02毫摩尔，2.0当量)，混合物在室温下搅拌1小时。然后在-70℃下缓慢滴加正丁基锂(0.82毫升，1.31毫摩尔，1.3当量)并搅拌1.0小时。在-70℃下，2-氯-4-((2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰氯(0105-81)(315毫克，粗品)溶于3毫升四氢呋喃滴加至反应液中并搅拌1.5小时。反应液加氯化铵溶液淬灭，加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝15/1至1/1，10％二氯甲烷)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(140毫克，收率：34.23％)。LCMS(ESI)：m/z＝506[M+1]+.
步骤59f：(2-氯-4-((2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物81)的制备：往(2-氯-4-((2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-81)(50毫克，0.10毫摩尔，1.0当量)和((2S，5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-1)(19毫克，0.11毫摩尔，1.1当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(2毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用制备薄层色谱(二氯甲烷/甲醇＝12/1)纯化，得到黄色固体(2-氯-4-((2-甲基-5-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(45毫克，收率：75.63％)。MS(ES+):m/z＝601(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.70(s,1H),8.58(d,J＝7.0Hz,1H),8.23(s,1H),7.88(s,1H),7.61–7.55(m,2H),7.47–7.34(m,2H),7.13–7.03(m,1H),6.83(t,J＝9.9Hz,1H),4.64(s,1H),4.23–4.07(m,2H),3.41(d,J＝6.9Hz,3H),3.11(dd,J＝16.0,6.4Hz,1H),2.48(d,J＝8.9Hz,3H),2.19(d,J＝12.0Hz,1H),1.78(d,J＝13.7Hz,1H),1.56(tt,J＝12.2,6.3Hz,1H),1.39(ddd,J＝20.0,13.2,6.5Hz,1H).
实施例60：(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-((3R，6S)-6-(羟甲基)-3,6-二氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物83)的制备
将((3R，6S)-6-(羟甲基)-3,6-二氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0108-83)(200毫克，0.873毫摩尔，1.0当量)在氯化氢-甲醇溶液(4M溶液，5毫升)中的混合物在室温下搅拌1小时,减压除去溶剂并在真空下干燥。将残留物和(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-2)(100毫克，0.228毫摩尔，1.0当量)溶解在叔丁醇(5毫升)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.3毫升)。将混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝50/1至10/1)纯化，得到黄色固体产物(2-氯-4-((2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-((3R，6S)-6-(羟甲基)-3,6-二氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(60毫克，收率：49.5％)。MS(ES+):m/z＝532(M+H)+.熔点：212-220℃。1HNMR(500MHz,DMSO)δ12.73(s,1H),8.71(d,J＝7.8Hz,1H),8.26(s,1H),7.67–7.52(m,2H),7.43(d,J＝7.7Hz,1H),7.32–7.16(m,2H),7.11–6.91(m,2H),6.69(s,1H),6.00(t,J＝7.5Hz,2H),4.92–4.64(m,2H),4.29–4.07(m,2H),3.46(dtd,J＝16.1,11.3,6.3Hz,3H),2.43(s,3H).
实施例61：(2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)-3,6-二氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物84)的制备
将((3R,6S)-6-(羟甲基)-3,6-二氢-2H-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0108-83)(24毫克，0.105毫摩尔，1.0当量)在氯化氢-二氧六环溶液(4摩尔每升溶液，2毫升)的混合物在室温下搅拌1小时,减压除去溶剂并在真空下干燥，残留物不经过进一步纯化直接使用。往残留物和(2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-14)(40毫克，0.078毫摩尔，1.0当量)在叔丁醇(10毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.5毫升)。混合物在90℃加热过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用厚制备薄层色谱板纯化，得到黄色固体(2-氯-4-((2-氯苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)-3,6-二氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(13毫克，收率：27.08％)。MS(ES+):m/z＝551(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.74(s,1H),8.71(d,J＝7.8Hz,1H),8.27(s,1H),7.68–7.56(m,2H),7.50(dd,J＝7.8,0.9Hz,1H),7.37–7.27(m,2H),7.21–7.11(m,2H),7.07(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),6.15–5.85(m,2H),4.94–4.71(m,2H),4.36–4.10(m,2H),3.54–3.38(m,3H).
实施例62：(2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)-3,6-二氢-2H-吡喃-3-)基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物85)的制备
往(2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-20)(80毫克，0.18毫摩尔，1.0当量)和((2S,5R)-5-氨基-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基)甲醇盐酸盐(0108-83)(39毫克，0.24毫摩尔，1.3当量)在叔丁醇(8毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.16毫升，0.91毫摩尔，5.0当量)。混合物在氮气氛围下加热到90℃反应过夜。混合物用水(20毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(乙酸乙酯：二氯甲烷∶甲醇＝10：10：2)纯化，得到白色固体(2-氯-4-((5-氟苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)-3,6-二氢-2H-吡喃-3-)基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(45毫克，收率：46％)。LCMS(ESI)：m/z 535[M+1]+；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：252-255℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.74(s,1H),8.71(d,J＝7.8Hz,1H),8.27(s,1H),8.10(d,J＝2.0Hz,1H),7.66(s,1H),7.59(d,J＝8.5Hz,1H),7.45–7.23(m,2H),7.18–6.89(m,3H),6.14–5.85(m,2H),4.93–4.63(m,2H),4.25–4.00(m,2H),3.50–3.39(m,3H).
实施例63：1-(5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基环己基碳酸酯(化合物95)的制备
氮气保护下，将(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基))氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物21)(100毫克，0.182毫摩尔，1.0当量)和1-氯乙基环己基碳酸酯(76毫克，0.364毫摩尔，2.0当量)，碳酸铯(120毫克，0.364毫摩尔，2.0当量)，碘化钾(4毫克，0.018毫摩尔，0.1当量)的N,N-二甲基乙酰胺(5毫升)的混合物在50℃下搅拌过夜。混合物用水稀释，然后用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝40:1)纯化，得到黄色固体1-(5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基环己基碳酸酯(46毫克，收率：35.11％)。LCMS(ESI)：m/z＝721[M+1]+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.57(d,J＝7.2Hz,1H),8.32(s,1H),7.92(s,1H),7.60(d,J＝8.5Hz,1H),7.35(d,J＝2.3Hz,1H),7.28(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.11(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.04–6.93(m,2H),6.71(s,1H),4.62(t,J＝5.5Hz,1H),4.51(dd,J＝8.3,4.1Hz,1H),4.21–4.08(m,2H),3.42(dd,J＝11.4,5.5Hz,1H),3.34(dd,J＝12.6,5.9Hz,2H),3.13(t,J＝11.1Hz,1H),2.45(s,3H),2.19(d,J＝11.5Hz,1H),1.78(dd,J＝36.4,17.8Hz,6H),1.58(dd,J＝16.1,7.5Hz,3H),1.31(dddd,J＝38.8,33.0,15.9,6.3Hz,9H).
实施例64：新戊酸(5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-4-((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基酯(化合物96)的制备
氮气保护下，将(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基))氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物21)(35毫克，0.064毫摩尔，1.0当量)和新戊酸氯甲酯(20毫克，0.127毫摩尔，2.0当量)，碳酸钾(120毫克，0.191毫摩尔，3.0当量)，碘化钾(2毫克，0.006毫摩尔，0.1当量)的N,N-二甲基乙酰胺(5毫升)混合物在50℃下搅拌3小时。混合物用水稀释，然后用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝40:1)纯化，得到黄色固体新戊酸(5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-4-((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基酯(24毫克，收率：57.14％)。LCMS(ESI)：m/z＝665[M+1]+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.53(d,J＝7.1Hz,1H),8.34(s,1H),7.84(s,1H),7.62(d,J＝8.5Hz,1H),7.36(d,J＝2.2Hz,1H),7.29(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),7.11(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),6.99(dd,J＝10.1,2.2Hz,1H),6.71(s,1H),6.11(s,2H),4.64(t,J＝5.5Hz,1H),4.16(d,J＝6.7Hz,2H),3.46–3.40(m,1H),3.36(s,2H),3.18–3.11(m,1H),2.44(s,3H),2.20(d,J＝11.9Hz,1H),1.79(d,J＝13.3Hz,1H),1.59(d,J＝12.2Hz,1H),1.39(d,J＝13.6Hz,1H),1.07(s,9H).
实施例65：(5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基二氢磷酸(化合物97)的制备在氮气保护下，向(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基))氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物21)(100毫克，0.18毫摩尔，1.0当量)和氯甲基磷酸二叔丁酯(95毫克，0.36毫摩尔，2.0当量)在3毫升N-甲基吡咯烷酮的混合物中加入碳酸铯(178毫克，0.55毫摩尔，3.0当量)和碘化钾(30毫克，0.18毫摩尔，1.0当量)。混合物在室温下搅拌过夜。加入乙酸乙酯，用水和饱和食盐水洗。有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备薄层色谱(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝13/1)纯化得到黄色固体((5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-4-(((3R,6S)-6-(羟甲基))四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)磷酸二叔丁酯(64毫克，收率：45％)。MS(ES+):m/z 773(M+H)+.
将上述得到的((5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-4-(((3R,6S)-6-(羟甲基))四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)磷酸二叔丁酯(64毫克，0.083毫摩尔，1.0当量)溶解于4毫升二氯甲烷中，加入0.5毫升三氟乙酸。混合物在室温下搅拌3小时。混合物减压浓缩至干。用水搅拌残留物，抽滤，收集固体。固体在减压下干燥，得到黄色固体(5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基二氢磷酸(35毫克，收率：63％)。MS(ES+):m/z 661(M+H)+；熔点：170～172℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.56(d,J＝7.1Hz,1H),8.33(s,1H),7.82(s,1H),7.60(d,J＝8.5Hz,1H),7.34(d,J＝1.9Hz,1H),7.28(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.09(dd,J＝8.5,1.9Hz,1H),7.00(dd,J＝10.2,2.0Hz,1H),6.70(s,1H),5.85(d,J＝10.0Hz,2H),4.62(s,1H),4.16(d,J＝6.7Hz,2H),3.53(s,3H),3.11(s,1H),2.44(s,3H),2.20(d,J＝11.7Hz,1H),1.79(d,J＝12.8Hz,1H),1.59(d,J＝15.5Hz,1H),1.39(d,J＝19.1Hz,1H).
实施例66：乙酸((2S,5R)-5-((5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基酯(化合物106)的制备
氮气保护下，往(2-氯-4-(5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-21)(50毫克，0.11毫摩尔，1.0当量)和乙酸((2S,5R)-5-氨基四氢-2H-吡喃-2-基)甲基酯三氟乙酸盐(0108-106)(粗品，0.28毫摩尔，2.5当量)在叔丁醇(5毫升)的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(85毫克，0.66毫摩尔，6.0当量)。混合物加热至90℃反应过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取。有机相加饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用厚制备薄层色谱(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到白色固体产物乙酸((2S,5R)-5-((5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基酯(32毫克，收率：49.06％)。LCMS(ESI)：m/z＝593[M+1]+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.75(s,1H),8.58(d,J＝7.0Hz,1H),8.25(s,1H),7.64(s,1H),7.59(d,J＝8.5Hz,1H),7.34(d,J＝2.2Hz,1H),7.26(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.10(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),6.98(dd,J＝10.3,2.3Hz,1H),6.70(s,1H),4.16(dd,J＝14.3,7.6Hz,2H),4.06–3.97(m,2H),3.66–3.57(m,1H),3.16(t,J＝11.7Hz,1H),2.44(s,3H),2.20(d,J＝12.1Hz,1H),2.04(s,3H),1.77(d,J＝12.5Hz,1H),1.62(dd,J＝11.9,3.6Hz,1H),1.53–1.39(m,1H).
实施例67：(2S，5R)-5-(5-(2-氯-4-(5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)-7-基)氧基)苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基L-缬氨酸酯(化合物109)的制备
将(2-氯-4-(5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧苯基)(4-((3r，6s)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7-(2-三甲基硅基乙氧基)甲基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物21)(100毫克，0.15毫摩尔，1.0当量)与N-叔丁氧羰基-L-缬氨酸(64毫克，0.29毫摩尔，2.0当量)，N,N'-二环己基碳二亚胺(47毫克，0.225毫摩尔，1.5当量)和4-二甲氨基吡啶(28毫克，0.225毫摩尔，1.5当量)的二氯甲烷(8毫升)混合物，在室温下搅拌过夜。反应液加水稀释后用二氯甲烷萃取。将有机相干燥并减压浓缩。残留物用厚制备薄层色谱(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化，得到白色固体产物(2S,5R)-5-(5-(2-氯-4-(5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)-7-(2-三甲基硅基乙氧基)-甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基(叔丁氧羰基)-L-缬氨酸(86毫克，收率：65.23％)。LCMS(ESI)：m/z＝880[M+1]+.
上述得到的(2S,5R)-5-(5-(2-氯-4-(5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)-7-(2-三甲基硅基乙氧基)-甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基(叔丁氧羰基)-L-缬氨酸(86毫克，0.098毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷(3毫升)溶液加三氟乙酸(3毫升)，在室温下搅拌反应过夜。反应液减压浓缩，向混合物中加入甲醇(6毫升)和氨水(1.5毫升)，并在室温下搅拌1小时。混合物加水稀释并用乙酸乙酯萃取。有机相加饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用厚制备薄层色谱(二氯甲烷/甲醇＝12/1)纯化，得到黄色固体产物(2S，5R)-5-(5-(2-氯-4-(5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)-7-基)氧基)苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基L-缬氨酸酯(56毫克，收率：87.90％)。LCMS(ESI)：m/z＝650[M+1]+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.58(d,J＝6.8Hz,1H),8.25(s,1H),7.63(s,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),7.33(d,J＝2.0Hz,1H),7.26(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.10(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),6.98(dd,J＝10.3,2.3Hz,1H),6.70(s,1H),4.23–4.04(m,4H),3.60(d,J＝5.5Hz,1H),3.18–3.14(m,2H),2.44(s,3H),2.21(d,J＝11.3Hz,1H),1.86(dd,J＝12.5,6.5Hz,1H),1.78(d,J＝12.2Hz,1H),1.62(d,J＝12.1Hz,1H),1.50(d,J＝14.6Hz,1H),0.87(dd,J＝24.1,6.8Hz,6H).
实施例68：((2S,5R)-5-((5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基甘氨酸酯2,2,2-三氟乙酸盐(化合物110)的制备
氮气保护下，向(叔丁氧羰基)甘氨酸(150毫克，0.856毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(8毫升)溶液中加入N,N'-羰基二咪唑(166毫克，1.03毫摩尔，1.2当量)，混合物在75℃下搅拌3.0小时，减压除去溶剂。氮气保护下，向残留物(粗品)的N,N-二甲基甲酰胺(4毫升)溶液中加入(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基))氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物21)(100毫克，0.182毫摩尔，0.21当量)和碳酸钾(75.3毫克，0.545毫摩尔，0.63当量)，然后将混合物在65℃下搅拌1.5小时。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝60/1至20/1)纯化，得到黄色油状((2S,5R)-5-((5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基(叔丁氧基羰基)甘氨酸酯(115毫克，收率：65.7％)。LCMS(ESI)：m/z＝708[M+1]+.
往上述得到的((2S,5R)-5-((5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基(叔丁氧基羰基)甘氨酸酯(120毫克，0.169毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷(10毫升)的溶液中加入三氟乙酸(2.0毫升)。混合物在室温下反应1.0小时。将反应液减压浓缩得到黄色固体((2S,5R)-5-((5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-2-基)甲基甘氨酸酯2,2,2-三氟乙酸盐(102毫克，收率：83.6％)。MS(ES+):m/z＝608(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),8.70(d,J＝6.8Hz,1H),8.26(d,J＝22.8Hz,4H),7.69(s,1H),7.58(d,J＝8.5Hz,1H),7.35(d,J＝2.0Hz,1H),7.26(dd,J＝8.5,2.1Hz,1H),7.11(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),6.97(dd,J＝10.2,2.1Hz,1H),6.70(s,1H),4.19(dd,J＝19.5,7.5Hz,4H),3.90(d,J＝3.8Hz,2H),3.75–3.56(m,1H),3.19(t,J＝11.5Hz,1H),2.44(s,3H),2.23(d,J＝11.2Hz,1H),1.80(d,J＝12.3Hz,1H),1.66(d,J＝12.1Hz,1H),1.55(d,J＝11.2Hz,1H).
实施例69：(4-(((3R,6S)-6-(氨基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)甲酮(化合物111)的制备
氮气保护下，往混合物(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基))氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物21)(70毫克，0.127毫摩尔，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(83毫克，0.636毫摩尔，5.0当量)的二氯甲烷(5毫升)混合物中滴加甲磺酰氯(75毫克，0.636毫摩尔，5.0当量)，混合物在室温下搅拌过夜。混合物用水稀释，然后用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝20:1)纯化，得到黄色固体甲磺酸(2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-7-(甲基磺酰基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢呋喃-2H-吡喃-2-基)甲基酯(100毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z＝707[M+1]+.
将上述得到的甲磺酸(2S，5R)-5-((5-(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯甲酰基)-7-(甲基磺酰基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)四氢呋喃-2H-吡喃-2-基)甲基酯(80毫克，0.113毫摩尔，1.0当量)和氨水(3毫升)的N-甲基吡咯烷酮(3毫升)混合物在闷罐中在90℃下搅拌过夜。混合物用水稀释，然后用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到(4-(((3R,6S)-6-(氨基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)甲酮(25毫克，收率：40.32％)。LCMS(ESI)：m/z＝550[M+1]+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.81(s,1H),8.61(d,J＝7.2Hz,1H),8.26(s,1H),8.02(s,2H),7.65(s,1H),7.58(d,J＝8.5Hz,1H),7.35(d,J＝2.3Hz,1H),7.26(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),7.18–7.02(m,1H),6.98(dd,J＝10.3,2.3Hz,1H),6.70(s,1H),4.21(dt,J＝11.6,8.6Hz,2H),3.64(t,J＝9.6Hz,1H),3.20(dd,J＝18.5,8.5Hz,1H),2.99(s,1H),2.82(s,1H),2.45(s,3H),2.22(d,J＝11.9Hz,1H),1.82(d,J＝11.4Hz,1H),1.72–1.58(m,1H),1.58–1.41(m,1H).
实施例70：(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-((二甲基氨基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物113)的制备
氮气保护下，将(3R,6S)-6-((二甲基氨基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(0108-113)(61.2毫克，0.315毫摩尔，1.2当量)，(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(0107-21)(70毫克，0.154毫摩尔，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(59毫克，0.462毫摩尔，3.0当量)在叔丁醇(5毫升)中的混合物在90℃搅拌过夜。混合物用水(15毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-(((3R,6S)-6-((二甲基氨基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(38毫克，收率42.6％)。LCMS(ESI)：m/z 578[M+1]+ 1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.71(s,1H),8.58(d,J＝7.0Hz,1H),8.25(s,1H),7.64(s,1H),7.59(d,J＝8.5Hz,1H),7.34(d,J＝2.3Hz,1H),7.26(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.10(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),6.98(dd,J＝10.2,2.3Hz,1H),6.70(s,1H),4.15(d,J＝6.6Hz,2H),3.52(d,J＝9.8Hz,1H),3.16(t,J＝11.8Hz,1H),2.46–2.35(m,5H),2.26(s,6H),2.19(d,J＝9.6Hz,1H),1.81(d,J＝13.1Hz,1H),1.65–1.53(m,1H),1.43–1.36(m,1H).
实施例71：(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-((3R，6S)-6-(氟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物114)的制备
氮气保护下，往(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-((3R，6S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(化合物21)(50毫克，0.09毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷(5毫升)的混合物中滴加二乙胺基三氟化硫(14毫克，0.18毫摩尔，2.0当量)，混合物在常温下搅拌4小时。混合物用水稀释，然后用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝30:1)纯化，得到黄色固体(2-氯-4-((5-氟-2-甲基苯并呋喃-7-基)氧基)苯基)(4-((3R，6S)-6-(氟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-7H吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)甲酮(14毫克，收率：28.％)。LCMS(ESI)：m/z＝553[M+1]+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.74(s,1H),8.59(d,J＝7.0Hz,1H),8.26(s,1H),7.64(s,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.34(d,J＝2.0Hz,1H),7.25(dd,J＝8.5,2.1Hz,1H),7.10(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.98(dd,J＝10.2,2.1Hz,1H),6.70(s,1H),4.57–4.27(m,2H),4.25–4.08(m,2H),3.75–3.57(m,1H),3.19(t,J＝10.1Hz,1H),2.44(s,3H),2.22(d,J＝12.2Hz,1H),1.75(d,J＝12.7Hz,1H),1.64(qd,J＝12.2,3.6Hz,1H),1.48(qd,J＝12.8,3.7Hz,1H).
生物活性试验
本发明所用的对照化合物为ARQ 531，结构如下：
Figure BDA0003632424340001201
一、酶活性抑制实验
1.实验材料
Figure BDA0003632424340001202
Figure BDA0003632424340001211
2.实验方法
1)构建BTK-C481S酶(Methods Mol Biol.2011；722:157-66)
a.委托苏州金唯智生物科技有限公司合成BTK-C481S全长序列，并与pcDNA3.1-3xFLAG载体进行连接；
b.将连接了BTK-C481S全长序列的pcDNA3.1-3xFLAG质粒转染293T细胞使其表达3X FLAG-BTK-C481S蛋白；
c.利用
Figure BDA0003632424340001212
M2 Affinity Gel及3X
Figure BDA0003632424340001213
Peptide对BTK-C481S蛋白进行纯化后将其保存于缓冲液(50mM Tris-HCl,pH 7.4,150mM NaCl,0.1nM EDTA,2mM DTT,0.1mM PMSF,25％glycerol)中。
2)BTK-C481S酶活性抑制实验
采用ADP-Glokinase激酶检测试剂盒，通过定量激酶反应过程中产生的ADP量来测定其活性。首先，在激酶反应后，添加等体积的ADP-GloTM试剂以终止激酶反应并耗尽剩余的ATP。其次，添加激酶检测试剂，同时将ADP转化为ATP，并使用荧光素酶/荧光素反应测量新合成的ATP。通过使用ATP到ADP的转换曲线，可以建立发光信号强度与ADP浓度的联系，产生的发光信号与生成的ADP浓度成正比，并与激酶活性相关。
实验方法为将待测化合物用DMSO溶解后用激酶缓冲液(40mM Tris,pH 7.4,10mMMgCl2,0.1mg/ml BSA,1mM DTT)稀释，96孔微孔板中加入1ul不同浓度的待测化合物(起始浓度为1000nM，4倍稀释，共6个浓度)及2ul BTK-C481S酶，同时设置无化合物及无激酶对照孔。室温孵育30分钟后，加入预先混合好的1ul 125μMATP和1ul 0.2mg/ml Poly(Glu,Tyr)底物，混匀后30℃孵育1小时。加入5ulADP-GloTM试剂终止激酶反应，室温孵育40分钟后，加入10ul激酶检测试剂，室温孵育30～60分钟。用BioTek Synergy H1微孔板检测仪对发光信号进行测量。
以无化合物对照孔的发光信号强度作为最大信号值，无激酶对照孔的发光信号强度作为最小信号值，计算化合物对激酶的抑制率，抑制率％＝(最大信号值-化合物孔信号值)/(最大信号值-最小信号值)×100％。以化合物浓度为横坐标，抑制率为纵坐标，使用Graphpad prism7软件拟合S形剂量-反应曲线并计算IC50。
3.实验结果
计算出上述实验中各化合物的半数抑制浓度(IC50)，结果如表1所示。
二、肿瘤细胞增殖抑制实验
1.实验材料
RPMI1640培养基 GIBCO，#C11875500BT
胎牛血清(FBS) Biological Industries，#040011ACS
IL-3 PEPROTECH,#213-13
CellTiter-Glo发光细胞活力检测试剂盒 Promega，#G7573
Scepter自动细胞计数仪 Millipore，#PHCC00000
2.细胞株(所有人源细胞都已经过STR数据鉴定)
细胞株名称 突变位点 种属 来源
TMD-8 WT 人 上海翰森生物医药科技有限公司
3.实验方法
肿瘤细胞增殖抑制实验
将细胞离心重悬后用Scepter自动细胞计数仪测定细胞密度。将TMD-8细胞密度调整为44,000个每毫升，96孔培养板中每孔加入90微升，置于37℃、5％CO2培养箱培养24小时。加入不同浓度的待测化合物。细胞在10％胎牛血清存在下与化合物一起培养72小时。使用发光细胞活力检测试剂盒(详见厂家说明书)测定ATP的含量来评估细胞生长抑制。简要来讲，每个孔中加入30μl CellTiter-Glo试剂，摇板10分钟，诱导细胞裂解，用微孔板检测仪检测记录荧光信号。从二甲基亚砜处理72小时的细胞得到最大的信号值。从单独的培养基(细胞数为零)得到最小信号值。抑制率％＝(最大信号值-化合物信号值)/(最大信号值-最小信号值)×100％。以化合物浓度为横坐标，抑制率为纵坐标，使用Graphpadprism7软件拟合S形剂量-反应曲线并计算IC50。
4.实验结果
计算出上述实验中各化合物的半数抑制浓度(IC50)，结果如表1所示。
表1.化合物对酶及对肿瘤细胞增殖的抑制活性
Figure BDA0003632424340001231
Figure BDA0003632424340001241
其中：I>300nM,300nM≥II>100nM,100nM≥III>50nM,50nM≥IV>20nM,V≤20nM。
从上表中可以看出，本发明的部分化合物对BTK-C481S突变的酶活性与ARQ 531相比有更强的抑制作用，同时本发明的部分化合物与ARQ 531相比对BTK野生型肿瘤具有更强的抗肿瘤增殖活性。
三、药代动力学(PK)实验
1.实验方法
雄性SD大鼠，体重180-350克，试验前禁食过夜。待测化合物溶解在30％磺丁基-β-环糊精(SBE-β-CD)和1N HCl中，以20mg/kg单次灌胃给药。给药后15分钟、30分钟和1、2、4、6、8及24小时尾端断口取血，每时间点约0.3ml，置于含K2-EDTA的离心管中，离心处理(2000g，10分钟，4℃)取血浆，储存在-70℃至-80℃的超低温冰箱中。50μL的血浆样品用135μL乙腈(含内标1μg/mL)涡旋混合进行蛋白沉淀，离心，取上清进行LC-MS/MS分析。
2.实验结果
本发明提供的吡咯并嘧啶酮类化合物各化合物在大鼠经口服给药后，吸收良好，血液暴露量较高，结果见图1、2和表2。本发明的吡咯并嘧啶酮类化合物的Tmax为0.67-4.67小时，Cmax为936.3-5843.3ng/ml，AUC0-24h为3260.8-92108.8ng/ml*h。前药化合物110在大鼠经口服给药后，自身血液暴露量较低，但代谢产物活性化合物21暴露量高，显示前药具有良好的吸收并经吸收后代谢生成活性代谢产物(表3，图3)。Cmax是指最大血药浓度，T1/2为半衰期，AUC0-24是指0-24小时时间-浓度曲线下面积，AUC0-inf是指0-Inf时间-浓度曲线下面积。
表2.大鼠灌胃给药(20mg/kg)药代动力学参数
Figure BDA0003632424340001251
Figure BDA0003632424340001261
表3.前药化合物110经大鼠灌胃给药(20mg/kg)后药代动力学参数
Figure BDA0003632424340001262
四、药效实验
1.实验方法
1.1化合物13、21和23在TMD-8人弥漫大B淋巴瘤细胞异种移植小鼠皮下模型中的抗肿瘤活性实验。
NOD-SCID小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，饲养于屏障系统动物房。当TMD-8细胞培养到足够数量时，收集细胞并用DPBS洗2遍，最后细胞用不含血清的RPMI1640培养基和基质胶1:1(v/v)(sigma,E1270)悬浮接种。只有大于90％的存活率(台盼蓝排斥)的单细胞悬液才可用于注射。采用1mL的注射器和26G注射器针头，将悬浮在0.2mL不含血清的培养基和基质胶中的400万个细胞注入每只小鼠右侧翼皮下区域并小心避开血管。在植入2周后即可测量出肿瘤大小。使用游标卡尺测量肿瘤的大小，并用以下公式计算肿瘤体积：肿瘤体积＝(长×宽2)/2。当TMD-8肿瘤体积达到平均237mm3左右时，将动物分为5个口服给药组，即赋形剂对照组、ARQ531阳性对照组(最大耐受剂量70mg/kg)和化合物13给药治疗组、化合物21给药治疗组、化合物23给药治疗组，化合物13的剂量第1天-第5天为100mg/kg，第6天-第28天为70mg/kg，以及化合物21和23的剂量均为100mg/kg(n＝3/组)，每天给药一次。将化合物分别溶解在30％磺丁基-β-环糊精(SBE-β-CD)以及1.0摩尔等值的盐酸中(pH 4-5)，终浓度分别为10/7mg/mL灌胃给药，连续给药28天。
1.2化合物21在TMD-8人弥漫大B淋巴瘤细胞异种移植小鼠皮下模型中的剂量依赖实验。
NOD-SCID小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，饲养于屏障系统动物房。当TMD-8细胞培养到足够数量时，收集细胞并用DPBS洗2遍，最后细胞用不含血清的RPMI1640培养基和基质胶1:1(v/v)(sigma,E1270)悬浮接种。只有大于90％的存活率(台盼蓝排斥)的单细胞悬液才可用于注射。采用1mL的注射器和26G注射器针头，将悬浮在0.2mL不含血清的培养基和基质胶中的1000万个细胞注入每只小鼠右侧翼皮下区域并小心避开血管。在植入2周后即可测量出肿瘤大小。使用游标卡尺测量肿瘤的大小，并用以下公式计算肿瘤体积：肿瘤体积＝(长×宽2)/2。当TMD-8肿瘤体积达到平均184mm3左右时，将动物分为5个口服给药组，即赋形剂对照组、ARQ531阳性对照组(最大耐受剂量70mg/kg)和化合物21剂量25/50/100mg/kg给药组(n＝8/组)，每天给药一次。将化合物分别溶解在30％磺丁基-β-环糊精(SBE-β-CD)以及1.0摩尔等值的盐酸中(pH4-5)，终浓度分别为7/2.5/5.0/10.0mg/mL灌胃给药，连续给药19天。
2.实验结果
2.1化合物13、21、23在TMD-8异种移植小鼠皮下肿瘤模型中的抗癌活性。阳性对照化合物ARQ531的剂量为70mg/kg、化合物13的剂量第1天-第5天为100mg/kg，第6天-第28天为70mg/kg、化合物21和23的剂量均为100mg/kg，连续给药28天，每天一次，赋形剂对照组由于肿瘤体积过大在第15天结束该组动物实验，其他给药组动物给药至第21天时达到最大肿瘤抑制率，ARQ531阳性对照化合物和化合物13、21、23给药治疗组相对肿瘤增值率T/C值分别为-96.2％和-99.6％、-100.0％、-98.8％，继续给药至第29天时相对肿瘤增值率T/C值分别为-79.0％和-96.8％、-97.9％、-75.6％，停止给药并继续观察肿瘤生长至第39天结束实验。给药过程中，除ARQ531阳性对照化合物和化合物13给药组有动物因体重下降明显停药外，化合物21和23给药组动物均未见明显临床症状或体重下降(结果见表4和图4)。
结果显示，化合物13、21、23均能显著抑制TMD-8肿瘤生长，其中化合物21抑制效果最好且耐受性良好。
2.2化合物21抑制TMD-8异种移植肿瘤生长的量效关系。化合物21每天给药一次，连续口服给药19天后，剂量25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg给药组相对肿瘤增殖率T/C值分别为51.5％(p<0.05)、-43.6％(p<0.001)、-98.3％(p<0.001)，肿瘤重量抑制率分别为46.3％、96.0％、99.8％；ARQ531阳性对照化合物以剂量70mg/kg每天给药一次，连续口服给药19天后，相对肿瘤增殖率T/C值为-67.6％(p<0.001)，肿瘤重量抑制率为98.4％。化合物21剂量50mg/kg给药组有一只动物在给药的第15天发现死亡，大体解剖未见异常，其余动物及剂量25mg/kg和100mg/kg动物与同期赋形剂对照组比均没有出现明显的临床症状且体重变化不明显(结果见表5和图5)。
结果显示，化合物21呈剂量依赖性抑制TMD-8肿瘤生长且耐受性良好。
表4.在TMD-8异种移植肿瘤模型中化合物12、21、23的抗肿瘤活性及对动物体重的影响
Figure BDA0003632424340001281
备注1:BWC＝body weight changed(体重变化率)，计算公式为：体重变化率(％)＝(WT-W0)/W0 x 100。WT：测量当天的动物体重，W0：给药前动物体重。
表5.在TMD-8异种移植肿瘤模型中化合物21抗肿瘤量效关系及对动物体重的影响
Figure BDA0003632424340001282
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对以下实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (32)

1.式(I)所示的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子：
Figure FDA0003632424330000011
其中：
含氧六元环内的虚线表示其为一个单键或者没有；
n选自：0，1，2，3或4；
p选自：0，1，2或3；
W选自：-O-，-S-，-CR4R5-；
环A选自：取代或者未取代的苯基，取代或者未取代的5-6元杂芳基，取代或者未取代的8-10元杂芳基，取代或者未取代的8-10元苯并杂环基；
并且，当环A选自取代或者未取代的8-10元杂芳基，取代或者未取代的8-10元苯并杂环基时，R1选自：H，卤素，-OH，-OR6，-NR7R8，-SR9，-S(O)R9，-S(O)2R9；
当环A选自取代或者未取代的苯基、取代或者未取代的5-6元杂芳基时，R1选自：-OR6,-NR7R10，-SR9，-S(O)R9，-S(O)2R9；
R2选自：H，卤素，C1-C6烷基；
各R3分别独立选自：H，卤素，硝基，氰基，酯基，酰基，C1-C6烷基；
R4，R5分别独立选自：H，卤素，C1-C6烷基，C3-C8环烷基；
各R6分别独立选自：R9S-取代的C1-C6烷基，R9S(O)-取代的C1-C6烷基，R9S(O)2-取代的C1-C6烷基，R21OC(O)O-取代的C1-C6烷基，氨基羰基，C1-C6烷基胺基羰基，C1-C6烷酰基，氨基取代的C1-C6烷酰基，-(M1)(M2)P＝O；M1和M2分别独立选自：-OH，C1-C3烷基；
各R7分别独立选自：H，C1-C6烷基；
R8选自：H，C1-C6烷基，CN，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，-SR9，-S(O)R9，-S(O)2R9；
各R9分别独立选自：H，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8环烷基，C3-C8环烷基甲基，卤素取代的C1-C6烷基，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，氨基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷基胺基取代的C1-C6烷基，C6-C10芳基，一个或多个R12取代的C6-C10芳基，3-10元杂环基，氨基，C1-C6烷基胺基；
R10选自：CN，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，-SR11，-S(O)R11，-S(O)2R11；
各R11分别独立选自：氨基，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，苯基、卤素取代的苯基；
各R12分别独立选自选自：卤素，硝基，氰基，C1-C6烷基；
R20选自：H，R21OC(O)O-取代的C1-C6烷基，R21C(O)O-取代的C1-C6烷基，1个或多个R22取代的5-8元杂环基，R21C(O)NH-取代的C1-C6烷基，1个或多个R23取代的C1-C6烷酰基，(M1)(M2)P(O)O-取代的C1-C6烷基；M1和M2分别独立选自：-OH，C1-C3烷基；
各R21分别独立选自：C1-C6烷基，C3-C8环烷基，氨基取代的C1-C6烷基；
各R22分别独立选自：C1-C6烷基，羟基，卤素，硝基，氰基；
各R23分别独立选自：羧基，氨基，羟基，氨基羰基。
2.根据权利要求1所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，所述的吡咯并嘧啶酮类化合物具有式(II)或者式(III)所示结构：
Figure FDA0003632424330000021
3.根据权利要求1或2所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，环A选自：
Figure FDA0003632424330000031
其中：
m选自：0,1或2；
X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7分别独立选自CR15或N；
各R13和R15分别独立选自：H，卤素，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8环烷基，C3-C8环烷基甲基，卤素取代的C1-C6烷基，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，氨基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷基胺基取代的C1-C6烷基，C6-C10芳基，5-10元杂芳基，硝基，氰基，-OR，-N(R)2，-SR，-C(O)OR，-C(O)N(R)2，-C(O)R，-S(O)R，-S(O)2R，-S(O)2N(R)2，-N(R)C(O)R；
各R14分别独立选自：H，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8环烷基，C3-C8环烷基甲基，卤素取代的C1-C6烷基；
各R分别独立选自：H，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8环烷基，C3-C8环烷基甲基，卤素取代的C1-C6烷基，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，氨基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷基胺基取代的C1-C6烷基。
4.根据权利要求3所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，环A选自：
Figure FDA0003632424330000041
其中，X1、X2、X3分别独立选自CR15；X4、X5、X6、X7分别独立选自CR15或N。
5.根据权利要求4所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，环A选自：
Figure FDA0003632424330000042
6.根据权利要求3所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，
各R13和R15分别独立选自：H，卤素，C1-C3烷基，C3-C6环烷基，卤素取代的C1-C3烷基，羟基取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基，氰基，-C(O)OR，-C(O)N(R)2；
各R分别独立选自：H，C1-C6烷基。
7.根据权利要求6所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，各R13和R15分别独立选自：氢，甲基，环丙基，羟甲基，乙基，异丙基，甲氧基甲基，甲氧羰基，甲氧基，氰基，氨基羰基，一氟甲基，二氟甲基，三氟甲基，氟，氯。
8.根据权利要求3所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，环A选自：
Figure FDA0003632424330000051
其中，各R13分别独立选自：氢，甲基，环丙基，羟甲基，甲氧基，一氟甲基，二氟甲基，三氟甲基，氟，氯；
各R15分别独立选自：氢，氟，氯。
9.根据权利要求3所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，各R14分别独立选自：H，C1-C3烷基。
10.根据权利要求1或2所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，各R9分别独立选自：H，C1-C3烷基，C3-C6环烷基，卤素取代的C1-C3烷基，羟基取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基取代的C1-C3烷基，氨基取代的C1-C3烷基，C1-C3烷基胺基取代的C1-C3烷基，苯基，卤素取代的苯基，氨基，C1-C3烷基胺基。
11.根据权利要求10所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，各R9分别独立选自：H，甲基，乙基，二甲胺基，羟乙基，异丙基，氨基，甲胺基，甲氧基乙基，苯基，氟苯基。
12.根据权利要求1或2所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，R8选自：H，C1-C3烷基，CN，羟基取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基取代的C1-C3烷基，-SR9-1，-S(O)R9-1，-S(O)2R9-1；
其中，各R9-1分别独立选自：羟基取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基取代的C1-C3烷基，氨基，苯基、卤素取代的苯基。
13.根据权利要求12所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，R8选自：H，甲基，-CN，羟乙基，-S(O)2R9-1；其中，各R9-1分别独立选自：羟乙基，甲氧基乙基，氨基，苯基，对氟苯基。
14.根据权利要求1或2所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，R10选自：-CN，羟基取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基取代的C1-C3烷基，-SR11，-S(O)R11，-S(O)2R11；
各R11分别独立选自：羟基取代的C1-C3烷基，氨基，C1-C3烷氧基取代的C1-C3烷基，苯基、卤素取代的苯基。
15.根据权利要求14所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，R10选自：-CN，羟乙基，-S(O)2R11；其中，R11选自：羟乙基，氨基，甲氧基乙基，苯基，对氟苯基。
16.根据权利要求1或2所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，各R6分别独立选自：R9-2S-取代的C1-C3烷基，R9- 2S(O)-取代的C1-C3烷基，R9-2S(O)2-取代的C1-C3烷基，氨基羰基，C1-C3烷基胺基羰基，C1-C3烷酰基，氨基取代的C1-C6烷酰基；
其中，各R9-2分别独立选自：C1-C3烷基，C1-C3烷基胺基，羟基取代的C1-C3烷基，氨基。
17.根据权利要求16所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，各R6分别独立选自：甲磺酰基甲基，甲磺酰基乙基，乙磺酰基乙基，甲磺酰基丙基，二甲胺基磺酰基乙基，异丙磺酰基乙基，羟乙基磺酰基乙基，氨基磺酰基乙基，甲胺基磺酰基乙基，氨基羰基，乙酰基，2-甲基-3-氨基-丁酰基，氨基乙酰基。
18.根据权利要求1或2所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，当环A选自取代或者未取代的8-10元杂芳基，取代或者未取代的8-10元苯并杂环基时，
R1选自：-OH，-OR6，甲磺酰基，-NR7R8，氟，氯；
R6选自：R9S(O)2-取代的甲基，R9S(O)2-取代的乙基，R9S(O)2-取代的丙基，C1-C3烷酰基，氨基取代的C1-C6烷酰基；
R7选自：H，C1-C3烷基；
R8选自：H，C1-C3烷基；
各R9分别独立选自：甲基，乙基。
19.根据权利要求1或2所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，环A为苯基，
R1选自：-OR6，-NHR10，-S(O)2CH3；
R6选自：R9S(O)2-取代的甲基，R9S(O)2-取代的乙基；R9S(O)2-取代的丙基；
各R9分别独立选自：甲基，乙基，氨基，甲胺基，二甲胺基，
R10选自：-S(O)2R11；
R11选自：甲烷氧基取代的乙基，氨基。
20.根据权利要求1或2所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，R2为H；和/或，R3选自：H，氯，氟。
21.根据权利要求1或2所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，R20选自：H，R21OC(O)O-取代的C1-C3烷基，R21C(O)O-取代的C1-C3烷基，(OH)2P(O)O-取代的C1-C3烷基；
R21选自：C1-C4烷基，C5-C6环烷基。
22.根据权利要求1所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，所述吡咯并嘧啶酮类化合物选自：
Figure FDA0003632424330000071
Figure FDA0003632424330000081
Figure FDA0003632424330000091
Figure FDA0003632424330000101
Figure FDA0003632424330000111
23.权利要求1-22任一项所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子在制备BTK抑制剂中的应用。
24.根据权利要求23所述的应用，其特征在于，所述BTK为野生型BTK和/或C481突变型BTK。
25.权利要求1-22任一项所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子在制备预防和/或治疗与BTK过度活化相关的疾病和/或症状的药物中的应用。
26.根据权利要求25所述的应用，其特征在于，所述BTK为野生型BTK和/或C481突变型BTK。
27.根据权利要求25所述的应用，其特征在于，所述与BTK过度活化相关的疾病为肿瘤、炎症或自身免疫性疾病。
28.根据权利要求27所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为血液肿瘤或实体瘤；所述炎症或自身免疫性疾病为类风湿关节炎、红斑狼疮、狼疮性肾炎、多发性硬化症、舍格伦综合症、哮喘。
29.根据权利要求28所述的应用，其特征在于，所述血液肿瘤为淋巴瘤、骨髓瘤、淋巴细胞白血病、急性髓系白血病；所述实体瘤为肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌。
30.一种预防和/或治疗与BTK过度活化相关的疾病和/或症状的药物组合物，其特征在于，包括活性成分以及药学上可接受的辅料和/或载体，所述活性成分包括有权利要求1-22任一项所述的吡咯并嘧啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子。
31.根据权利要求30所述的药物组合物，其特征在于，所述活性成分还包含一种或多种能够预防和/或治疗肿瘤、炎症或自身免疫性疾病的第二治疗剂。
32.根据权利要求31所述的药物组合物，其特征在于，所述第二治疗剂选自利妥昔单抗、来那度胺、氟达拉滨、环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、强的松及PD-1/PD-L1抗体。
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