CN114748442B - 层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料的制备方法及其应用 - Google Patents

层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料的制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于材料合成和生物医药技术领域，具体涉及一种层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料的制备方法及其应用；具体方法为：采用差速离心结合细胞超声破碎从同源性肿瘤细胞中提取细胞膜，使之与纳米尺寸的层状WS2/Au混合孵育，通过静电吸附作用得到肿瘤细胞膜修饰的层状二硫化钨/金纳米粒复合材料；本发明构建的层状二硫化钨/金纳米粒@细胞膜复合材料具备高载药量及光热性能，且具有优异的免疫逃逸能力及同源肿瘤细胞靶向递送性能，能够避免被网状内皮细胞识别清除，并提高对同源肿瘤的治疗效果。

Description

层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料的制备方法及其应用
技术领域
本发明属于材料合成和生物医药技术领域，具体涉及一种层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料的制备方法及其在抗肿瘤药物载体方面的应用。
背景技术
癌症已经成为当代人类身体健康最大的威胁之一。合成纳米颗粒凭借载药率高、粒径可控、可持续释药等特点成为现今的研究热点。除了提高药物的治疗效果，癌症的治疗手段也得到了改进。从传统的手术、化疗、放疗阶段进入了光热治疗时代。其中，它使用的材料须具有优良的光热转化效率，且生物相容性高、毒性低。
二硫化钨是一种性质优良的层状二维纳米材料，比表面积大、易于吸收转化光热，对其进行表面修饰可改善稳定性。金纳米粒子因其形状大小可调性和高稳定性的特点成为纳米领域的热门材料，在药物载体方面有很大优势。此外，金纳米粒可通过等离子体共振效应产生近红外光热转换效应。
然而，随着对纳米药物更加深入的探究，研究者们发现纳米颗粒在体内易团聚并遭受吞噬作用，也无法通过一些特异性较高的生物屏障，其临床应用受到了极大的限制。此外，外源性的纳米粒子会激活体内的免疫识别系统，导致重复给药时免疫清除加快。提高载体的生物相容性及靶向递送能力，并降低其免疫原性就成为了解决这一问题的关键环节。
发明内容
本发明提供一种层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料的制备方法，所述复合材料以纳米尺寸的WS2/Au复合材料为基体，将肿瘤细胞破碎离心得到细胞膜囊泡，通过静电吸附作用制备得到WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料复合材料，实现高效DOX负载，药物pH敏感性及光热敏感性释放及光照产热。肿瘤同源肿瘤细胞膜的包裹无免疫原性，并能够有效改善WS2/Au 在生理条件下的聚集现象，减少血浆蛋白吸附，并起到增强免疫逃逸及同源肿瘤自靶向递送的作用。
本发明提供的层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料制备方法，按照以下步骤进行：
(1)将市售的纳米尺寸层状WS2分散液用超声波细胞破碎仪超声使之分散均匀，得到处理后的WS2分散液；
(2)将氯金酸加入步骤(1)处理后的WS2分散液，磁力搅拌，并在搅拌状态下滴加硼氢化钠溶液，控制滴加速度，滴加后继续搅拌一段时间；将搅拌反应的溶液离心弃去上清液，所得沉淀用纯水超声分散，即为WS2/Au溶液；
(3)在肿瘤细胞中加入胰酶消化，并加入细胞培养液吹打细胞，得到含细胞的培养液，经离心弃去上清液，得到沉淀为所需细胞；
(4)用细胞超声破碎仪超声破碎步骤(3)中得到的细胞，超声离心取出上清液，再次超声分散，得到肿瘤细胞膜分散液；
(5)将步骤(2)得到的WS2/Au分散液和步骤(4)中的肿瘤细胞膜分散液按一定比例混合，置于恒温振荡器搅拌过夜，然后离心弃去上清液，取沉淀加入PBS溶液，超声分散使之分散均匀，得到层状WS2/Au@肿瘤细胞膜分散液，即为层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料。
优选的，步骤(1)中所述超声是在冰水浴中进行，超声功率为150W-300W，超声时间为0.1h-1.0h；所述处理后的WS2分散液中WS2片径小于500nm；所述WS2分散液的浓度 0.1-2mg/ml。
优选的，步骤(2)中所述氯金酸与WS2的质量比为1:10-5:10，硼氢化钠与氯金酸质量比为1:5-1:1，硼氢化钠溶液浓度0.5-2mg/ml，所述WS2/Au分散液的浓度0.1-1mg/ml。
优选的，步骤(2)中所述控制滴加速度低于6mg/h；所述继续搅拌一段时间为2h以上。
优选的，步骤(3)中所述肿瘤细胞为MCF-7、Hela、HepG2或A549肿瘤细胞的任意一种，所述肿瘤细胞入胰酶消化前生长于75cm2细胞培养瓶中，贴壁生长；所述胰酶与细胞培养液的用量比为1ml：5-10ml；所述细胞培养液为1640培养液或DMEM培养液。
优选的，步骤(3)中所述离心转速1000rpm/min-2000rpm/min，离心时间2min-10min。
优选的，步骤(4)中所述离心转速5000rpm/min-13000rpm/min，离心时间10min-30min；所述超声破碎和再次超声分散均是在冰水浴条件下进行，超声功率为100W-300W，超声时间为0.1h-1.0h；所述肿瘤细胞膜分散液的浓度为100mg/ml。
优选的，步骤(5)中所述肿瘤细胞膜分散液中的肿瘤细胞膜和WS2/Au分散液中层状二硫化钼的质量比为10:1-100:1。
优选的，步骤(5)中所述恒温振荡器搅拌过夜的温度为37℃，恒温振荡器震荡速率为 50-150转/分；所述超声分散的超声功率为100W-300W，超声时间为0.1h-1.0h，冰水浴条件；所述WS2/Au@肿瘤细胞膜分散液的浓度0.1-2mg/ml(以WS2质量计算)。
本发明所制备的层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料应用于抗肿瘤药物载体方面。
与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：
1)采用具有高效抗肿瘤药物负载性能及良好光热敏感性的WS2/Au作为药物载体。在激光辐射下，光热材料可以将光能转化为热能，热能作用于肿瘤细胞，对其造成不可逆的细胞损伤，达到消除肿瘤的目的。化疗及光热疗的联合应用起到更好的肿瘤治疗效果。
2)肿瘤细胞膜是通过同型细胞膜黏附，普通的细胞膜不能实现这一点。而且，使用普通细胞膜还需要对其表面进行复杂的物理化学修饰来降低它的免疫原性。但是，被肿瘤细胞膜包被的纳米颗粒具有的最重要的优势是，复刻了靶细胞的抗原外部。肿瘤细胞天生就具有躲避人体抗原，自行转移的功能。依赖肿瘤细胞表面的膜蛋白，也就具有了免疫逃逸和同源结合能力，能更有选择性地将药理学药剂递送到肿瘤细胞中，并增强抗癌活性，实现主动靶向。
3)采用37℃震荡孵育及细胞破碎超声联合的方法制备WS2/Au@肿瘤细胞膜分散液。震荡孵育利于细胞膜在WS2/Au表面的吸附，细胞破碎超声利于控制细胞膜及WS2/Au@肿瘤细胞膜的粒径。较于常规的挤出法，操作简单，重现性好。
附图说明
图1是实施例1中WS2/Au的TEM图。
图2中第一列是实施例1中WS2/Au在纯水(左)、pH为7.4的PBS缓冲液(中)和含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液(右)经过24h和48h的稳定性图片；
第二列是实施例1中和WS2/Au@细胞膜在纯水(左)、pH为7.4的PBS缓冲液(中)和含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液(右)经过24h和48h的稳定性图片。
图3是实施例5中DOX(左)、WS2/Au-DOX(中)、WS2/Au@细胞膜-DOX(右)在pH 为7.4的PBS缓冲液中24h和48h的稳定性图片。
图4是WS2/Au-DOX和WS2/Au@细胞膜-DOX在不同pH下的药物释放图。
图5WS2/Au@细胞膜(0.2mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml)的光热升温曲线图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1：
(1)将市售的纳米尺寸层状WS2粉末分散于纯水中，用超声波细胞破碎仪，在冰水浴条件下，超声功率300W条件下超声0.5h使之分散均匀，成为小尺寸层状WS2(片径小于500nm)；得到WS2分散液的浓度为1mg/ml；
(2)取2mg氯金酸快速加入10ml WS2分散液(1mg/ml)中搅拌混合；磁力搅拌30分钟后，在磁力搅拌状态下逐滴加入硼氢化钠溶液1ml(1mg/ml)，加速度为3mg/h继续搅拌 8h；将反应完成的溶液离心弃去上清液，除掉未反应的杂质，所得沉淀用纯水超声分散，即为WS2/Au分散液，浓度为1mg/ml。
(3)MCF-7肿瘤细胞贴壁生长后，加入1ml胰酶消化，并加入10ml 1640细胞培养液吹打细胞，得到含细胞的培养液，置于离心管中以转速1500rpm/min，离心5min，离心弃去上清液，得到沉淀为所需细胞，精确称取其重量；
(4)用细胞超声破碎仪，在冰水浴条件下，超声功率300W条件下超声0.5h，超声破碎步骤(3)中得到的细胞，超声后以离心转速10000rpm/min，离心30min，离心弃去底部黑色细胞核沉淀，取出上清液，再次在冰水浴条件下，超声功率300W条件下超声0.5h，超声分散即得到肿瘤细胞膜分散液(100mg/ml，按照肿瘤细胞质量计算)；
(5)将步骤(2)得到的WS2/Au分散液2ml(1mg/ml)和步骤(4)中的肿瘤细胞膜1 ml(100mg/ml)混合，置于恒温振荡器搅拌过夜(37℃)，震荡速率为100转/分，然后离心弃去上清液，沉淀用PBS溶液分散并用细胞破碎超声使之分散均匀，超声功率300W，超声时间0.3h，冰水浴，得到的分散液，即为层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料，简记为WS2/Au@ 细胞膜(0.5mg/ml，以WS2质量计算)。
图1为实施例1制备的WS2/Au分散液中WS2/Au的TEM图片。球状的金纳米粒子均匀的附着在WS2的表面，粒径在10nm以内，且没有明显的团聚现象，表明金纳米粒子已经成功的沉积在WS2表面。WS2/Au的粒径为178.3±4.5nm，细胞膜的粒径为140.5±3.3nm。 WS2/Au@细胞膜粒径273.6±2.8nm，表明WS2/Au的表面成功地被肿瘤细胞膜修饰。WS2/Au、细胞膜和WS2/Au@细胞膜的电位图，用于表征载体分散体系的稳定性。WS2/Au的电位为-42.6 mV，细胞膜-31.5mV，WS2/Au@细胞膜的为-32.4mV。细胞膜和WS2/Au@细胞膜的表面电位很接近，说明WS2/Au被细胞膜均匀地修饰，即包裹在WS2/Au外表面。BSA是一种抗蛋白质吸附材料，利于提高材料的生物相容性。WS2/Au的BSA吸附性为121.3％，WS2/Au@ 细胞膜吸附性为45.3％。相比WS2/Au，WS2/Au@细胞膜的BSA吸附性较低，这说明肿瘤细胞膜修饰在WS2/Au表面，已经覆盖掉了大部分的蛋白质的吸附位点，增加了材料的抗蛋白吸附能力，利于减少免疫清除。如图2所示，稳定性实验结果表明，经过24h和48h后， WS2/Au在三种介质中有明显的沉淀，而WS2/Au@细胞膜则分散液澄清无沉淀，所以，说明修饰后的载体材料在生理环境下分散性和稳定性都增加。
实施例2：
(1)将市售的纳米尺寸层状WS2粉末分散于纯水中，用超声波细胞破碎仪，在冰水浴条件下，超声功率250W条件下超声0.7h使之分散均匀，成为小尺寸层状WS2(片径小于500nm)；得到WS2分散液的浓度为0.1mg/ml；
(2)取2mg氯金酸快速加入8ml WS2分散液(1mg/ml)中搅拌混合；磁力搅拌30分钟后，在磁力搅拌状态下逐滴加入硼氢化钠溶液0.8ml(0.5mg/ml)，加速度为4mg/h继续搅拌8h；将反应完成的溶液离心弃去上清液，除掉未反应的杂质，所得沉淀用纯水超声分散，即为WS2/Au分散液，浓度为0.1mg/ml。
(3)Hela肿瘤细胞贴壁生长后，加入1ml胰酶消化，并加入10ml DMEM细胞培液吹打细胞，得到含细胞的培养液，置于离心管中以转速2000rpm/min，离心3min，离心弃去上清液，得到沉淀为所需细胞，精确称取其重量；
(4)用细胞超声破碎仪，在冰水浴条件下，超声功率150W条件下超声1h，超声破碎步骤(3)中得到的细胞，超声后以离心转速13000rpm/min，离心30min，离心弃去底部黑色细胞核沉淀，取出上清液，再次在冰水浴条件下，超声功率150W条件下超声1h，超声分散即得到肿瘤细胞膜分散液(100mg/ml，按照肿瘤细胞质量计算)；
(5)将步骤(2)得到的WS2/Au分散液2ml(1mg/ml)和步骤(4)中的肿瘤细胞膜0.04ml(100mg/ml)混合，置于恒温振荡器搅拌过夜(37℃)，震荡速率为50转/分，然后离心弃去上清液，沉淀用PBS溶液分散并用细胞破碎超声使之分散均匀，超声功率100W，超声时间1h，冰水浴，得到层状WS2/Au@肿瘤细胞膜分散液(0.1mg/ml，以WS2质量计算)，即为层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料，简记为WS2/Au@细胞膜。
粒径测量结果表明，WS2/Au的粒径为231.3±1.8nm，WS2/Au@细胞膜粒径288.5±2.1nm。 WS2/Au的电位为-41.6mV，细胞膜-29.8mV，WS2/Au@细胞膜为-31.5mV。
实施例3：
(1)将市售的纳米尺寸层状WS2粉末分散于纯水中，用超声波细胞破碎仪，在冰水浴条件下，超声功率200W条件下超声0.9h使之分散均匀，成为小尺寸层状WS2(片径小于500nm)；得到WS2分散液的浓度为1.5mg/ml；
(2)取2mg氯金酸快速加入3ml WS2分散液(1.5mg/ml)中搅拌混合；磁力搅拌30分钟后，在磁力搅拌状态下逐滴加入硼氢化钠溶液1ml(1.6mg/ml)，加速度为4mg/h继续搅拌8h；将反应完成的溶液离心弃去上清液，除掉未反应的杂质，所得沉淀用纯水超声分散，即为WS2/Au分散液，浓度为0.4mg/ml。
(3)A549肿瘤细胞贴壁生长后，加入1ml胰酶消化，并加入10ml DMEM细胞培液吹打细胞，得到含细胞的培养液，置于离心管中以转速1000rpm/min，离心8min，离心弃去上清液，得到沉淀为所需细胞，精确称取其重量；
(4)用细胞超声破碎仪，在冰水浴条件下，超声功率100W条件下超声1h，超声破碎步骤(3)中得到的细胞，超声后以离心转速5000rpm/min，离心30min，离心弃去底部黑色细胞核沉淀，取出上清液，再次在冰水浴条件下，超声功率100W条件下超声1h，超声分散即得到肿瘤细胞膜分散液(100mg/ml，按照肿瘤细胞质量计算)；
(5)将步骤(2)得到的WS2/Au分散液2ml(0.4mg/ml)和步骤(4)中的肿瘤细胞膜0.8ml(100mg/ml)混合，置于恒温振荡器搅拌过夜(37℃)，震荡速率为80转/分，然后离心弃去上清液，沉淀用PBS溶液分散并用细胞破碎超声使之分散均匀，超声功率200W，超声时间0.5h，冰水浴，得到层状WS2/Au@肿瘤细胞膜分散液(1mg/ml，以WS2质量计算)，即为层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料，简记为WS2/Au@细胞膜。
粒径测量结果表明，WS2/Au的粒径为234.6±4.3nm，WS2/Au@细胞膜粒径281.7±1.5nm。 WS2/Au的电位为-46.8mV，细胞膜-33.7mV，WS2/Au@细胞膜为-34.5mV。
实施例4：
(1)将市售的纳米尺寸层状WS2粉末分散于纯水中，用超声波细胞破碎仪，在冰水浴条件下，超声功率150W条件下超声1h使之分散均匀，成为小尺寸层状WS2(片径小于500nm)；得到WS2分散液的浓度为2mg/ml；
(2)取2mg氯金酸快速加入10ml WS2分散液(2mg/ml)中搅拌混合；磁力搅拌30分钟后，在磁力搅拌状态下逐滴加入硼氢化钠溶液0.4ml(2mg/ml)，加速度为2mg/h继续搅拌8h；将反应完成的溶液离心弃去上清液，除掉未反应的杂质，所得沉淀用纯水超声分散，即为WS2/Au分散液，浓度为0.8mg/ml。
(3)HepG2肿瘤细胞贴壁生长后，加入1ml胰酶消化，并加入10ml 1640细胞培养液吹打细胞，得到含细胞的培养液，置于离心管中以转速1750rpm/min，离心4min，离心弃去上清液，得到沉淀为所需细胞，精确称取其重量；
(4)用细胞超声破碎仪，在冰水浴条件下，超声功率200W条件下超声0.8h，超声破碎步骤(3)中得到的细胞，超声后以离心转速8000rpm/min，离心25min，离心弃去底部黑色细胞核沉淀，取出上清液，再次在冰水浴条件下，超声功率200W条件下超声0.8h，超声分散即得到肿瘤细胞膜分散液(100mg/ml，按照肿瘤细胞质量计算)；
(5)将步骤(2)得到的WS2/Au溶液2ml(0.8mg/ml)和步骤(4)中的肿瘤细胞膜0.16ml(100mg/ml)混合，置于恒温振荡器搅拌过夜(37℃)，震荡速率为150转/分，然后离心弃去上清液，沉淀用PBS溶液分散并用细胞破碎超声使之分散均匀，超声功率150W，超声时间0.8h，冰水浴，得到层状WS2/Au@肿瘤细胞膜分散液(2mg/ml，以WS2质量计算)，即为层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料，简记为WS2/Au@细胞膜。
粒径测量结果表明，WS2/Au的粒径为203.4±2.1nm，WS2/Au@细胞膜粒径198.3±1.6nm。 WS2/Au的电位为-43.8mV，细胞膜-33.1mV，WS2/Au@肿瘤细胞膜为-34.6mV。
性能考察：
(1)负载阿霉素(DOX)的氧化石墨烯-同源肿瘤细胞膜复合材料的制备；
将实施例1中WS2/Au分散液和即为层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料与DOX溶液按质量比1:2混合，再用PBS缓冲液(pH为7.4)定容，37℃恒温水浴振荡箱振荡24h，得到 WS2/Au-DOX和WS2/Au@细胞膜-DOX；取出后离心测紫外，计算出WS2/Au的载药量为 86.79％，WS2/Au@细胞膜的载药量为78.83％，两种材料的载药量相似，所以细胞膜的修饰并没有影响载体对药物的负载能力。由图3所得WS2/Au@细胞膜-DOX的稳定性和分散性都优于WS2/Au-DOX。综上所述，修饰后的载体材料更加适合作为药物载体。
(2)负载阿霉素的WS2/Au@细胞膜复合材料的药物释放考察
采用透析法对上述性能考察的步骤(1)中得到的WS2/Au-DOX和WS2/Au@细胞膜-DOX体外释药情况进行考察，释放介质为pH为7.4/5.0的PBS缓冲液。载药离心后得到的沉淀用1ml PBS溶解，然后将1ml的DOX、WS2/Au-DOX、WS2/Au@细胞膜-DOX分散液分别加入透析袋中，两端扎紧，将其分别浸没在20ml的PBS缓冲液中，放置在37℃恒温振荡箱中振荡并计时。取样时将管中的透析袋转移至对应标号的预热好的PBS空白管，将剩余溶出介质取出，再装入pH值相同的PBS作为空白管。取出的介质用荧光分光光度计(参数设定值： Ex＝488nm，Em＝591nm，狭缝10nm)测定其荧光强度，计算DOX的累计释放量。
如图4所示，在pH为5.0的PBS缓冲液中，WS2/Au@细胞膜-DOX和WS2/Au-DOX的释药量都高于在pH为7.4的PBS缓冲液中的释药量。肿瘤微环境更偏向于酸性，更接近于 pH为5.0的PBS缓冲液，而人体组织更偏向于pH为7.4的PBS缓冲液，这些生理条件都有利于药物在肿瘤位置的释放而减少对正常组织的破坏。WS2/Au-DOX与WS2/Au@细胞膜 -DOX的总累计释药量类似，说明细胞膜修饰不影响药物释放。
(3)WS2/Au@细胞膜复合材料的光照升温及光热药物释放考察
用pH为7.4的PBS缓冲液将实施例1中WS2/Au及WS2/Au@细胞膜稀释到不同浓度，用近红外激光(2W/cm2，808nm)照射10min，记录不同时间点各个浓度分散液的温度变化并作图。考察WS2/Au-DOX和WS2/Au@细胞膜-DOX分散液在激光照射下的释药情况。载完药的样品分散液离心后，弃去上清液，用1ml PBS溶液溶解沉淀。处理好的样品用激光照射(2W/cm2，808nm)10min后，放入37℃恒温振荡箱中振荡30min后，离心30min(13000 rpm/min)，取上清液0.8ml于新的离心管中，PBS稀释测定；在原管中补上0.8ml各组对应的PBS缓冲液后重复上述操作，分别在振荡1h、2h、4h取待测样品，用荧光分光光度计测定，计算DOX的累积释药量。
如图5所示，WS2/Au@细胞膜的升温速度与材料浓度成正比，最高浓度材料达到的最高温度在50℃左右，足以杀死肿瘤细胞，这些数据可以表明WS2/Au@细胞膜载体具有良好的光热转化性能，可以作为理想的光热剂。并且根据WS2/Au@细胞膜-DOX在不同pH以及光照条件下的释药结果可知，在pH为5.0的PBS缓冲液中，WS2/Au@细胞膜-DOX和 WS2/Au-DOX的释药量都高于在pH为7.4的PBS缓冲液中的释药量，且光照下释药量要多于不光照的释药量，这表示WS2/Au@细胞膜具有良好的光热释药性能。
(4)WS2/Au@细胞膜复合材料的细胞摄取考察
将实施例1中WS2/Au(0.5mg/mL)和WS2/Au@细胞膜(0.5mg/mL)分别与MCF-7细胞及RAW 264.7细胞孵育2h后，将细胞消化离心，沉淀用混合酸(高氯酸:硝酸＝1:3)消解。处理完毕后用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-OES)测定Mo元素含量。结果表明，RAW 264.7细胞中WS2/Au和WS2/Au@细胞膜中Mo的摄取量分别为63.7μg/mL和19.8μg/mL，表明细胞膜修饰后的WS2/Au大大降低了巨噬细胞对材料的吞噬能力。同时，MCF-7细胞对WS2/Au 和WS2/Au@细胞膜中Mo的摄取量分别为13.5μg/mL和57.8μg/mL。结果表明，MCF-7细胞膜囊泡的修饰增强了WS2/Au复合材料的同源肿瘤细胞靶向性。
应当指出，以上所述具体实施方式可以使本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。因此,本领域技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或者等同替换；而一切不脱离本发明的精神和技术实质的技术方案及其改进，其均应涵盖在本发明专利的保护范围当中。

Claims (10)

1.层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将纳米尺寸层状WS2分散液用超声波细胞破碎仪超声使之分散均匀，得到处理后的WS2分散液；
(2)将氯金酸加入步骤(1)处理后的WS2分散液，磁力搅拌，并在搅拌状态下滴加硼氢化钠溶液，控制滴加速度，滴加后继续搅拌一段时间；将搅拌反应的溶液离心弃去上清液，所得沉淀用纯水超声分散，即为WS2/Au分散液；
(3)在肿瘤细胞中加入胰酶消化，并加入细胞培养液吹打细胞，得到含细胞的培养液，经离心弃去上清液，得到沉淀为所需细胞；
(4)用细胞超声破碎仪超声破碎步骤(3)中得到的细胞，超声离心取出上清液，再次超声分散，得到肿瘤细胞膜分散液；
(5)将步骤(2)得到的WS2/Au分散液和步骤(4)中的肿瘤细胞膜分散液按一定比例混合，置于恒温振荡器搅拌过夜，然后离心弃去上清液，取沉淀加入PBS溶液，超声分散使之分散均匀，得到层状WS2/Au@肿瘤细胞膜分散液，即为层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料。
2.根据权利要求1所述的层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料的制备方法，其特征在于，优选的，步骤(1)中所述超声是在冰水浴中进行，超声功率为150W-300W，超声时间为0.1h-1.0h；所述处理后的WS2分散液中WS2片径小于500nm；所述WS2分散液的浓度0.1-2mg/ml。
3.根据权利要求1所述的层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述氯金酸与WS2的质量比为1:10-5:10，硼氢化钠与氯金酸质量比为1:5-1:1，硼氢化钠溶液浓度0.5-2mg/ml，所述WS2/Au分散液的浓度0.1-1mg/ml；所述控制滴加速度低于6mg/h；所述继续搅拌一段时间为2h以上。
4.根据权利要求1所述的层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述肿瘤细胞为MCF-7、Hela、HepG2或A549肿瘤细胞的任意一种，所述肿瘤细胞入胰酶消化前生长于75cm2细胞培养瓶中，贴壁生长；所述胰酶与细胞培养液的用量比为1ml：5-10ml；所述细胞培养液为1640培养液或DMEM培养液。
5.根据权利要求1所述的层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述离心转速1000rpm/min-2000rpm/min，离心时间2min-10min。
6.根据权利要求1所述的层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述离心转速5000rpm/min-13000rpm/min，离心时间10min-30min；所述超声破碎和再次超声分散均是在冰水浴条件下进行，超声功率为100W-300W，超声时间为0.1h-1.0h；所述肿瘤细胞膜分散液的浓度为100mg/ml。
7.根据权利要求1所述的层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(5)中所述肿瘤细胞膜分散液中的肿瘤细胞膜和WS2/Au分散液中层状二硫化钼的质量比为10:1-100:1。
8.根据权利要求1所述的层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(5)中所述恒温振荡器搅拌过夜的温度为37℃，恒温振荡器震荡速率为50-150转/分；所述超声分散的超声功率为100W-300W，超声时间为0.1h-1.0h，冰水浴条件；所述WS2/Au@肿瘤细胞膜分散液的浓度0.1-2mg/ml，以WS2质量计算。
9.根据权利要求1-8任一项所述方法制备的层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料。
10.根据权利要求9所述的层状WS2/Au@肿瘤细胞膜复合材料用于抗肿瘤药物载体方面的应用。
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