CN114740130A - 一种用于校准代谢组定量分析的量谱芯片 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于校准代谢组定量分析的量谱芯片，所述芯片包括用于非靶向血浆代谢组数据校准的混合同位素内标组合物，所述组合物由64种物质组成。本发明通过研究混合同位素内标不同的配比用于血浆内源性代谢物质谱数据的校准，发现了血浆中内源性代谢物与其自身同位素内标、同类型同位素内标、保留时间临近的同位素内标、质谱信号强度接近的同位素内标进行灵活匹配可以获得最小RSD值的组合规律。

Description

一种用于校准代谢组定量分析的量谱芯片
技术领域
本发明属于代谢组学中的精准定量研究领域，涉及同位素内标组在代谢组学研究中的应用，具体涉及血浆中代表性代谢物的同位素内标组在液质联用技术(LC-MS)检测血浆代谢组中精准定量分析的应用。
背景技术
代谢组学作为生物样本中小分子代谢物定性、定量研究的有力工具，已经成为注释基因功能、揭示细胞受外源性刺激后产生的各种内源性生理、生化反应的主要手段，并广泛用于各个研究领域，包括生命科学、疾病诊断、药物研发、营养学、毒理学、环境学，植物学等领域。LC-MS是代谢组学研究最为常用的工具，其中高分辨质谱具有高覆盖、可同时定性和定量的优势，一次分析能够获取成千上万个代谢物的信息，检测数目没有上限。然而，离子化歧视、基质效应、质谱检测器的波动极大限制了LC-MS方法定量的准确性。目前基于LC-MS技术的非靶向代谢组学研究，仅用单一或几个同位素内标去校准不同类别、不同结构、不同理化性质的代谢物数据，难以获得可靠的定量结果，阻碍了生物学信息的准确获取。
实现非靶向代谢组学精准定量，最佳的手段是引进全部内源性代谢物的同位素内标。但是，小分子代谢物大多缺少市售的同位素标准品，同时还要兼顾成本问题，引入不同类型代谢物的代表性同位素标准品成为可行的策略。血浆中含量较高的代谢组主要涵盖氨基酸、脂酰肉碱、有机酸、碳水化合物、胆汁酸、溶血磷脂胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、脂肪酸、核苷酸等。这些类代谢物是当前血浆非靶向代谢组分析中检出和研究频率最高的成分。然而，目前尚未建立适用于校准这些代谢物非靶向数据的同位素内标组的应用标准。
上述血浆内源性氨基酸等成分，虽然共存于同一基质中，但它们理化性质、生理功能各异，准确获取这些类型代谢物的定量信息，通过其上升或下调的变化来深入揭示机体代谢、病理特征具有重要指导意义。目前基于LC-MS技术的非靶向血浆代谢组研究，最大的挑战是如何实现数据的精准定量，以满足不同类别复杂成分的数据校准。
发明内容
本发明的目的是在血浆样本中引入类型和浓度与血浆中主要内源性代谢物相匹配的系列同位素内标，实现血浆非靶向代谢组的全面精准定量分析。
本发明提供一种用于非靶向血浆代谢组数据校准的混合同位素内标组合物，所述混合同位素内标组包括花生四烯酸-d8、苯甲酸-d5、甜菜碱-d11、脂酰肉碱12:0-d9、脂酰肉碱14:0-d9、脂酰肉碱16:0-d3、鹅脱氧胆酸-d4、胆酸-d4、胆碱-d13、柠檬酸-d4、肌酸-d3、肌酸酐、瓜氨酸、溶血磷脂胆碱-18:1-d7、溶血磷脂酰乙醇胺-18:1-d7、脱氧胆酸-d4、谷氨酸-d5、丝氨酸-d3、富马酸-d4、戊二酸-d4、甘氨酸-d2、甘氨鹅脱氧胆酸-d9、甘氨胆酸-d4、甘氨脱氧胆酸-d4、马尿酸、次黄嘌呤、肌苷-15N4、犬尿喹啉酸、丙氨酸-d4、精氨酸-d7、天冬氨酸-d3、肉碱-d9、谷氨酰胺-d5、组氨酸-d5、亚油酸-13C18、异亮氨酸-d10、乳酸-13C3、亮氨酸-d10、赖氨酸-d9、蛋氨酸-d3、苯丙氨酸-d8、脯氨酸-d7、苏氨酸-13C4,15N、色氨酸-d8、酪氨酸-d7、缬氨酸-d8、苹果酸-d3、甲基琥珀酸-d6、棕榈酸-d31、对甲苯酚硫酸盐-d7、丙酮酸-d3、肌氨酸、溶血磷脂胆碱-18:1-d7、溶血磷脂酰乙醇胺18:1-d7、琥珀酸-d4、牛磺酸-d2、胸腺嘧啶-13C10,15N2、4-羟基脯氨酸-d3、氧化三甲胺-d9、尿素-13C,15N2、尿酸-13C,15N3、尿苷-d2、熊脱氧胆酸-d4和黄嘌呤-15N2中的至少一种。
进一步，所述混合同位素内标组合物由所述64种物质组成。
进一步，所述混合同位素内标组合物中花生四烯酸-d8、苯甲酸-d5、甜菜碱-d11、脂酰肉碱12:0-d9、脂酰肉碱14:0-d9、脂酰肉碱16:0-d3、鹅脱氧胆酸-d4、胆酸-d4、胆碱-d13、柠檬酸-d4、肌酸-d3、肌酸酐、瓜氨酸、溶血磷脂胆碱-18:1-d7、溶血磷脂酰乙醇胺-18:1-d7、脱氧胆酸-d4、谷氨酸-d5、丝氨酸-d3、富马酸-d4、戊二酸-d4、甘氨酸-d2、甘氨鹅脱氧胆酸-d9、甘氨胆酸-d4、甘氨脱氧胆酸-d4、马尿酸、次黄嘌呤、肌苷-15N4、犬尿喹啉酸、丙氨酸-d4、精氨酸-d7、天冬氨酸-d3、肉碱-d9、谷氨酰胺-d5、组氨酸-d5、亚油酸-13C18、异亮氨酸-d10、乳酸-13C3、亮氨酸-d10、赖氨酸-d9、蛋氨酸-d3、苯丙氨酸-d8、脯氨酸-d7、苏氨酸-13C4,15N、色氨酸-d8、酪氨酸-d7、缬氨酸-d8、苹果酸-d3、甲基琥珀酸-d6、棕榈酸-d31、对甲苯酚硫酸盐-d7、丙酮酸-d3、肌氨酸、溶血磷脂胆碱-18:1-d7、溶血磷脂酰乙醇胺18:1-d7、琥珀酸-d4、牛磺酸-d2、胸腺嘧啶-13C10,15N2、4-羟基脯氨酸-d3、氧化三甲胺-d9、尿素-13C,15N2、尿酸-13C,15N3、尿苷-d2、熊脱氧胆酸-d4和黄嘌呤-15N2的浓度比例为1000：200：200：100：100：100：1000：100：100：200：300：300：300：1000：1000：1000：1000：1000：50：50：50：100：100：100：50：1000：200：50：1000：500：200：1000：1200：500：5000：200：3000：500：1000：200：300：800：500：400：1000：500：100：50：500：400：1000：500：1000：1000：50：1000：50：1000：25：2000：2000：100：100：50。
上述的混合同位素内标组合物在如下中的应用也应在本发明保护范围之内
上述的混合同位素内标组合物在非靶向血浆代谢组数据校准中的应用。
上述的混合同位素内标组合物在非靶向代谢组定量中的应用。
上述的混合同位素内标组合物在制备用于校准血浆代谢组数据的混合同位素内标产品中的应用。
上述的混合同位素内标组合物在评价非靶向血浆代谢组数据质量中的应用。
本发明还提供一种血浆非靶向代谢组的定量检测方法，包括使用上述的混合同位素内标组合物对所鉴定的代谢物数据进行校准的步骤。
本发明还提供一种产品，所述产品包括上述的混合同位素内标组合物。
所述产品为用于校准代谢组定量分析的量谱芯片。
本发明通过研究混合同位素内标不同的配比用于血浆内源性代谢物质谱数据的校准，发现了血浆中内源性代谢物与其自身同位素内标、同类型同位素内标、保留时间临近的同位素内标、质谱信号强度接近的同位素内标进行灵活匹配可以获得最小RSD值的组合规律。由此可见，非靶向分析血浆代谢组中的数据处理，内源性代谢物与同位素内标合理匹配，可以显著提升数据的可靠性，并获得精准的定量结果。本发明具有重要的应用价值。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
发明概述
本发明提供一种用于非靶向血浆代谢组数据校准的混合同位素内标组合物，所述混合同位素内标组包括花生四烯酸-d8、苯甲酸-d5、甜菜碱-d11、脂酰肉碱12:0-d9、脂酰肉碱14:0-d9、脂酰肉碱16:0-d3、鹅脱氧胆酸-d4、胆酸-d4、胆碱-d13、柠檬酸-d4、肌酸-d3、肌酸酐、瓜氨酸、溶血磷脂胆碱-18:1-d7、溶血磷脂酰乙醇胺-18:1-d7、脱氧胆酸-d4、谷氨酸-d5、丝氨酸-d3、富马酸-d4、戊二酸-d4、甘氨酸-d2、甘氨鹅脱氧胆酸-d9、甘氨胆酸-d4、甘氨脱氧胆酸-d4、马尿酸、次黄嘌呤、肌苷-15N4、犬尿喹啉酸、丙氨酸-d4、精氨酸-d7、天冬氨酸-d3、肉碱-d9、谷氨酰胺-d5、组氨酸-d5、亚油酸-13C18、异亮氨酸-d10、乳酸-13C3、亮氨酸-d10、赖氨酸-d9、蛋氨酸-d3、苯丙氨酸-d8、脯氨酸-d7、苏氨酸-13C4,15N、色氨酸-d8、酪氨酸-d7、缬氨酸-d8、苹果酸-d3、甲基琥珀酸-d6、棕榈酸-d31、对甲苯酚硫酸盐-d7、丙酮酸-d3、肌氨酸、溶血磷脂胆碱-18:1-d7、溶血磷脂酰乙醇胺18:1-d7、琥珀酸-d4、牛磺酸-d2、胸腺嘧啶-13C10,15N2、4-羟基脯氨酸-d3、氧化三甲胺-d9、尿素-13C,15N2、尿酸-13C,15N3、尿苷-d2、熊脱氧胆酸-d4和黄嘌呤-15N2中的至少一种。
进一步，所述混合同位素内标组合物由所述64种物质组成。
进一步，所述混合同位素内标组合物中花生四烯酸-d8、苯甲酸-d5、甜菜碱-d11、脂酰肉碱12:0-d9、脂酰肉碱14:0-d9、脂酰肉碱16:0-d3、鹅脱氧胆酸-d4、胆酸-d4、胆碱-d13、柠檬酸-d4、肌酸-d3、肌酸酐、瓜氨酸、溶血磷脂胆碱-18:1-d7、溶血磷脂酰乙醇胺-18:1-d7、脱氧胆酸-d4、谷氨酸-d5、丝氨酸-d3、富马酸-d4、戊二酸-d4、甘氨酸-d2、甘氨鹅脱氧胆酸-d9、甘氨胆酸-d4、甘氨脱氧胆酸-d4、马尿酸、次黄嘌呤、肌苷-15N4、犬尿喹啉酸、丙氨酸-d4、精氨酸-d7、天冬氨酸-d3、肉碱-d9、谷氨酰胺-d5、组氨酸-d5、亚油酸-13C18、异亮氨酸-d10、乳酸-13C3、亮氨酸-d10、赖氨酸-d9、蛋氨酸-d3、苯丙氨酸-d8、脯氨酸-d7、苏氨酸-13C4,15N、色氨酸-d8、酪氨酸-d7、缬氨酸-d8、苹果酸-d3、甲基琥珀酸-d6、棕榈酸-d31、对甲苯酚硫酸盐-d7、丙酮酸-d3、肌氨酸、溶血磷脂胆碱-18:1-d7、溶血磷脂酰乙醇胺18:1-d7、琥珀酸-d4、牛磺酸-d2、胸腺嘧啶-13C10,15N2、4-羟基脯氨酸-d3、氧化三甲胺-d9、尿素-13C,15N2、尿酸-13C,15N3、尿苷-d2、熊脱氧胆酸-d4和黄嘌呤-15N2的质量比例为1000：200：200：100：100：100：1000：100：100：200：300：300：300：1000：1000：1000：1000：1000：50：50：50：100：100：100：50：1000：200：50：1000：500：200：1000：1200：500：5000：200：3000：500：1000：200：300：800：500：400：1000：500：100：50：500：400：1000：500：1000：1000：50：1000：50：1000：25：2000：2000：100：100：50。
上述的混合同位素内标组合物在如下中的应用也应在本发明保护范围之内
上述的混合同位素内标组合物在非靶向血浆代谢组数据校准中的应用。
上述的混合同位素内标组合物在非靶向代谢组定量中的应用。
上述的混合同位素内标组合物在制备用于校准血浆代谢组数据的混合同位素内标产品中的应用。
上述的混合同位素内标组合物在评价非靶向血浆代谢组数据质量中的应用。
本发明还提供一种血浆非靶向代谢组的定量检测方法，包括使用上述的混合同位素内标组合物对所鉴定的代谢物数据进行校准的步骤。
本发明还提供一种产品，所述产品包括上述的混合同位素内标组合物。
所述产品为用于校准代谢组定量分析的量谱芯片。
本发明首先保护用于非靶向血浆代谢组数据校准的应用，可为X1)或X2)或X3)：
X1)制备用于校准血浆代谢组数据的混合同位素内标产品；
X2)校准非靶向血浆代谢组数据；
X3)评价非靶向血浆代谢组数据质量；
上述应用中，所述“混合同位素内标”可用于非靶向血浆代谢组分析中的数据校准。更具体的，所述用于分析血浆中的内源性代谢组，具体可为用于校准氨基酸、脂酰肉碱、有机酸、碳水化合物、胆汁酸、溶血磷脂胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、脂肪酸、核苷酸等数据。
本发明还保护混合同位素内标在非靶向代谢组定性、定量分析中的应用，可为X1)或X2)或X3)或X4)：
X1)制备用于校准血浆非靶向代谢组数据的混合同位素内标；
X2)校准非靶向血浆代谢组数据；
X3)评价非靶向血浆代谢组数据质量与含量；
上述应用中，混合同位素作为内标，不仅可以定性应用，还可以定量其对应的内源性代谢物。
本发明还保护混合同位素内标的配比组合；所述产品的功能可为A1)和/或A2)：A1)混合同位素内标配方组成；A2)混合同位素内标的相对比例。
上述应用中，所述混合同位素内标类别涵盖血浆中的代表性代谢物；同时其组成比例与血浆中对应的内源性成分比例接近。
本发明还保护混合同位素内标与血浆中内源性代谢物校准组合的应用；所述产品的功能可为A1)-A4)中的至少一种：A1)同位素内标校准其对应的代谢物数据；A2)同位素内标校准其对应相同类型的代谢物数据；A3)同位素内标校准与其保留时间临近的其它类型代谢物数据；A4)同位素内标校准与其信号强度接近的其它类型代谢物数据。
本发明还保护评价混合同位素内标对血浆内源性代谢物校准后的数据质量，可为F1)或F2)。
F1)用同位素内标校准血浆中对应的内源性代谢物数据，如果校准后的RSD值与校准前比较，没有减低，则采用类别相同的其它同位素内标校准，以获得更低的RSD值，保证更为精准的定量数据。
F2)用同位素内标校准血浆中对应的内源性代谢物数据，如果用代谢物对应的同位素内标或相同类别的内标校准后的RSD值与校准前比较，没有减低，则采用保留时间临近的其它同位素内标校准，以获得更低的RSD值，保证更为精准的定量数据。
本发明还保护一种同位素内标与血浆中内源性代谢物信号强度匹配的校准数据方法，包括如下步骤：检测混合同位素内标与血浆内源性代谢物的含量和/或质谱信号强度，然后进行如下判断：如果内源性代谢物经其对应的同位素内标、同类型内标、保留时间临近的内标校准后，RSD值仍高于未校准时的数据，则采用质谱信号强度接近的其它类型同位素内标校准数据，直至获得的RSD值低于未校准时的数据。上述任一所述低于可为在统计学上的低于。上述任一所述高于可为在统计学上的高于。
实施例2
细胞内的各种生命活动，如信号释放与传导、能量传递等，都会在代谢层面得以体现，对各种内源性和外源性刺激给出应答。基于LC-MS技术的代谢组学方法已被广泛应用于多个学科领域的研究。然而，非靶向代谢组学研究的主要挑战之一是质谱数据的校准。在本发明的实施例中，引入一系列类型、含量与血浆内源性代谢物相匹配的同位素内标，校准基于非靶向LC-MS技术获取的血浆代谢组数据，通过同位素内标与代谢物类型匹配、保留时间临近、质谱信号强度匹配的方法校准数据，并依据校准后QC的RSD值减小的结果评判校准内标的选择。
一、血浆样本的选择
以228例健康人血浆样本为研究对象(收集与首都医科大学附属北京安贞医院，项目批准号2018010)。并从所有样本中取等量血浆制成混合QC样本，用于RSD值研究。
二、LC-MS样本制备
1、待测者禁食过夜后，采集5mL静脉血于含有抗凝剂的BD真空管中。
2、室温、500g离心10min。
3、取上清液50微升，并置于一个新的1.5ml离心管中
4、将配置好的混合内标液加入5％色谱级乙腈的水溶液中,二者的比例是5:95。
5、取步骤4配制的混标液200微升加入到步骤3的离心管中，涡旋10s，然后4℃、12000rpm离心10min。
6、完成步骤5后，取上清，并置于一个新的1.5ml离心管中，得代谢组提取液。
7、将步骤6得到的装有代谢组提取液的离心管置于真空离心挥干仪中挥发至干。
8、完成步骤7后，加入100微升含有5％色谱级乙腈的水溶液，涡旋复溶，然后4℃、12000rpm离心10min。
9、完成步骤8后，取上清液，置于液相小瓶中，将混合液在Agilent 1290II-5600plus(Sciex)进行LC-MS检测。。
10、仪器分别采用正、负离子模式连续检测228例健康人血浆样本，每间隔10例样品穿插一例QC样本，共检测21例血浆QC样本，非靶向LC-MS检测的数据，由MarkerView 1.3(AB Sciex,Concord,ON,Canada)软件提取一级质谱原始数据峰面积、质荷比、保留时间，生成二维数据阵(过滤掉同位素峰)；PeakView 2.2(AB Sciex,Concord,ON,Canada)提取二级质谱数据与Metabolites数据库、HMDB、METLIN、标准品比对，鉴定代谢物ID，并将已鉴定的ID归属到一级质谱二维数据阵中对应的离子，利用基于R语言的自编程序统计分析已鉴定的代谢组数据。
11、根据与代谢物类型匹配、保留时间临近、质谱信号强度匹配的原则，使用同位素对所鉴定的代谢物数据进行校准。
结果见表2，列举了480个代谢物经内标校准后的RSD值，校准后平均RSD值减小了4.5％。其中RSD值小于10％的代谢物有336个，RSD值介于10％-20％的代谢物有103个，由此可见，本发明的混合同位素内标组合物可以显著提升血浆非靶向代谢组的定量准确性。
表1：LC-MS上机液中64种混合同位素内标组成、类别与含量
Figure BDA0003616255030000071
Figure BDA0003616255030000081
表2：同位素内标校准400个代谢物前后QC的RSD数值变化
Figure BDA0003616255030000082
Figure BDA0003616255030000091
Figure BDA0003616255030000101
Figure BDA0003616255030000111
Figure BDA0003616255030000121
Figure BDA0003616255030000131
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Figure BDA0003616255030000241
Figure BDA0003616255030000251
发明人通过研究混合同位素内标不同的配比用于血浆内源性代谢物质谱数据的校准，发现了血浆中内源性代谢物与其自身同位素内标、同类型同位素内标、保留时间临近的同位素内标、质谱信号强度接近的同位素内标进行灵活匹配可以获得最小RSD值的组合规律。由此可见，非靶向分析血浆代谢组中的数据处理，内源性代谢物与同位素内标合理匹配，可以显著提升数据的可靠性，并获得精准的定量结果。本发明具有重要的应用价值。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

Claims (10)

1.一种用于非靶向血浆代谢组数据校准的混合同位素内标组合物，其特征在于，所述混合同位素内标组包括花生四烯酸-d8、苯甲酸-d5、甜菜碱-d11、脂酰肉碱12:0-d9、脂酰肉碱14:0-d9、脂酰肉碱16:0-d3、鹅脱氧胆酸-d4、胆酸-d4、胆碱-d13、柠檬酸-d4、肌酸-d3、肌酸酐、瓜氨酸、溶血磷脂胆碱-18:1-d7、溶血磷脂酰乙醇胺-18:1-d7、脱氧胆酸-d4、谷氨酸-d5、丝氨酸-d3、富马酸-d4、戊二酸-d4、甘氨酸-d2、甘氨鹅脱氧胆酸-d9、甘氨胆酸-d4、甘氨脱氧胆酸-d4、马尿酸、次黄嘌呤、肌苷-15N4、犬尿喹啉酸、丙氨酸-d4、精氨酸-d7、天冬氨酸-d3、肉碱-d9、谷氨酰胺-d5、组氨酸-d5、亚油酸-13C18、异亮氨酸-d10、乳酸-13C3、亮氨酸-d10、赖氨酸-d9、蛋氨酸-d3、苯丙氨酸-d8、脯氨酸-d7、苏氨酸-13C4,15N、色氨酸-d8、酪氨酸-d7、缬氨酸-d8、苹果酸-d3、甲基琥珀酸-d6、棕榈酸-d31、对甲苯酚硫酸盐-d7、丙酮酸-d3、肌氨酸、溶血磷脂胆碱-18:1-d7、溶血磷脂酰乙醇胺18:1-d7、琥珀酸-d4、牛磺酸-d2、胸腺嘧啶-13C10,15N2、4-羟基脯氨酸-d3、氧化三甲胺-d9、尿素-13C,15N2、尿酸-13C,15N3、尿苷-d2、熊脱氧胆酸-d4和黄嘌呤-15N2中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的混合同位素内标组合物，其特征在于，所述混合同位素内标组合物由花生四烯酸-d8、苯甲酸-d5、甜菜碱-d11、脂酰肉碱12:0-d9、脂酰肉碱14:0-d9、脂酰肉碱16:0-d3、鹅脱氧胆酸-d4、胆酸-d4、胆碱-d13、柠檬酸-d4、肌酸-d3、肌酸酐、瓜氨酸、溶血磷脂胆碱-18:1-d7、溶血磷脂酰乙醇胺-18:1-d7、脱氧胆酸-d4、谷氨酸-d5、丝氨酸-d3、富马酸-d4、戊二酸-d4、甘氨酸-d2、甘氨鹅脱氧胆酸-d9、甘氨胆酸-d4、甘氨脱氧胆酸-d4、马尿酸、次黄嘌呤、肌苷-15N4、犬尿喹啉酸、丙氨酸-d4、精氨酸-d7、天冬氨酸-d3、肉碱-d9、谷氨酰胺-d5、组氨酸-d5、亚油酸-13C18、异亮氨酸-d10、乳酸-13C3、亮氨酸-d10、赖氨酸-d9、蛋氨酸-d3、苯丙氨酸-d8、脯氨酸-d7、苏氨酸-13C4,15N、色氨酸-d8、酪氨酸-d7、缬氨酸-d8、苹果酸-d3、甲基琥珀酸-d6、棕榈酸-d31、对甲苯酚硫酸盐-d7、丙酮酸-d3、肌氨酸、溶血磷脂胆碱-18:1-d7、溶血磷脂酰乙醇胺18:1-d7、琥珀酸-d4、牛磺酸-d2、胸腺嘧啶-13C10,15N2、4-羟基脯氨酸-d3、氧化三甲胺-d9、尿素-13C,15N2、尿酸-13C,15N3、尿苷-d2、熊脱氧胆酸-d4和黄嘌呤-15N2组成。
3.根据权利要求1所述的混合同位素内标组合物，其特征在于，所述混合同位素内标组合物中花生四烯酸-d8、苯甲酸-d5、甜菜碱-d11、脂酰肉碱12:0-d9、脂酰肉碱14:0-d9、脂酰肉碱16:0-d3、鹅脱氧胆酸-d4、胆酸-d4、胆碱-d13、柠檬酸-d4、肌酸-d3、肌酸酐、瓜氨酸、溶血磷脂胆碱-18:1-d7、溶血磷脂酰乙醇胺-18:1-d7、脱氧胆酸-d4、谷氨酸-d5、丝氨酸-d3、富马酸-d4、戊二酸-d4、甘氨酸-d2、甘氨鹅脱氧胆酸-d9、甘氨胆酸-d4、甘氨脱氧胆酸-d4、马尿酸、次黄嘌呤、肌苷-15N4、犬尿喹啉酸、丙氨酸-d4、精氨酸-d7、天冬氨酸-d3、肉碱-d9、谷氨酰胺-d5、组氨酸-d5、亚油酸-13C18、异亮氨酸-d10、乳酸-13C3、亮氨酸-d10、赖氨酸-d9、蛋氨酸-d3、苯丙氨酸-d8、脯氨酸-d7、苏氨酸-13C4,15N、色氨酸-d8、酪氨酸-d7、缬氨酸-d8、苹果酸-d3、甲基琥珀酸-d6、棕榈酸-d31、对甲苯酚硫酸盐-d7、丙酮酸-d3、肌氨酸、溶血磷脂胆碱-18:1-d7、溶血磷脂酰乙醇胺18:1-d7、琥珀酸-d4、牛磺酸-d2、胸腺嘧啶-13C10,15N2、4-羟基脯氨酸-d3、氧化三甲胺-d9、尿素-13C,15N2、尿酸-13C,15N3、尿苷-d2、熊脱氧胆酸-d4和黄嘌呤-15N2的浓度比例为1000：200：200：100：100：100：1000：100：100：200：300：300：300：1000：1000：1000：1000：1000：50：50：50：100：100：100：50：1000：200：50：1000：500：200：1000：1200：500：5000：200：3000：500：1000：200：300：800：500：400：1000：500：100：50：500：400：1000：500：1000：1000：50：1000：50：1000：25：2000：2000：100：100：50。
4.权利要求1-3任一所述的混合同位素内标组合物在非靶向血浆代谢组数据校准中的应用。
5.权利要求1-3任一所述的混合同位素内标组合物在非靶向代谢组定量中的应用。
6.权利要求1-3任一所述的混合同位素内标组合物在制备用于校准血浆代谢组数据的混合同位素内标产品中的应用。
7.权利要求1-3任一所述的混合同位素内标组合物在评价非靶向血浆代谢组数据质量中的应用。
8.一种血浆非靶向代谢组的定量检测方法，其特征在于，包括使用权利要求1-3任一所述的混合同位素内标组合物对所鉴定的代谢物数据进行校准的步骤。
9.一种产品，所述产品包括1-3任一所述的混合同位素内标组合物。
10.根据权利要求9所述的产品，所述产品为用于校准代谢组定量分析的量谱芯片。
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