CN114702444B - 一种具有抗多发性骨髓瘤作用的aha1抑制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
一种具有抗多发性骨髓瘤作用的aha1抑制剂及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114702444B CN114702444B CN202210224472.XA CN202210224472A CN114702444B CN 114702444 B CN114702444 B CN 114702444B CN 202210224472 A CN202210224472 A CN 202210224472A CN 114702444 B CN114702444 B CN 114702444B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- reaction
- compound
- aha1
- molar ratio
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
- C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D215/38—Nitrogen atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Abstract
本发明涉及一种具有抗多发性骨髓瘤作用的AHA1抑制剂及其制备方法和应用，具体涉及式(I)化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药。AHA1小分子抑制剂能影响相关信号通路而直接抑制多发性骨髓瘤(MM)细胞的增殖，同时还能够影响外泌体与肿瘤细胞及微环境的相互作用，进而抑制MM恶性增殖。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一类新型的AHA1抑制剂，以及它的制备方法和在防治多发性骨髓瘤疾病中的应用。
背景技术
多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是一种克隆性浆细胞恶性肿瘤，占所有血液肿瘤的10％以上，MM患者如果得不到及时治疗，生存期为6个月，近年来MM在中国的发病率有逐年增高趋势[Liu,J.；Liu,W.；Mi,L.；Zeng,X.；Cai,C.；Ma,J.；Wang,L.；Union forChina Lymphoma Investigators of the Chinese Society of Clinical,O.；Union forChina Leukemia Investigators of the Chinese Society of Clinical,O.Incidenceand mortality of multiple myeloma in China,2006-2016:an analysis of theGlobal Burden of Disease Study 2016.J.Hematol.Oncol.,2019,12,136.]。
目前，FDA批准的治疗MM的药物主要可分为5类：传统的化疗类和激素类药物(第1代)[Jackson,G.H.；Davies,F.E.；Pawlyn,C.；Cairns,D.A.；Striha,A.；Collett,C.；Waterhouse,A.；Jones,J.R.；Kishore,B.；Garg,M.；Williams,C.D.；Karunanithi,K.；Lindsay,J.；Wilson,J.N.；Jenner,M.W.；Cook,G.；Kaiser,M.F.；Drayson,M.T.；Owen,R.G.；Russell,N.H.；Gregory,W.M.；Morgan,G.J.；Group,U.N.H.O.C.S.Response-adaptedintensification with cyclophosphamide,bortezomib,and dexamethasone versus nointensification in patients with newly diagnosed multiple myeloma(MyelomaXI):a multicentre,open-label,randomised,phase 3trial.Lancet Haematol.,2019,6,e616-e629.]、免疫调节剂[Aguiar,P.M.；de Mendonca Lima,T.；Colleoni,G.W.B.；Storpirtis,S.Efficacy and safety of bortezomib,thalidomide,and lenalidomidein multiple myeloma:An overview of systematic reviews with meta-analyses.Crit.Rev.Oncol.Hematol.,2017,113,195-212.]和蛋白酶抑制剂(第2代)[Hari,P.；Matous,J.V.；Voorhees,P.M.；Shain,K.H.；Obreja,M.；Frye,J.；Fujii,H.；Jakubowiak,A.J.；Rossi,D.；Sonneveld,P.Oprozomib in patients with newly diagnosed multiplemyeloma.Blood Cancer J.,2019,9,66.]、单抗类[Afifi,S.；Michael,A.；Lesokhin,A.Immunotherapy:A new approach to treating multiple myeloma with daratumumaband elotuzumab.Ann.Pharmacother.,2016,50,555-568.]以及靶向药(第3代)[Ghobrial,I.M.；Liu,C.J.；Zavidij,O.；Azab,A.K.；Baz,R.；Laubach,J.P.；Mishima,Y.；Armand,P.；Munshi,N.C.；Basile,F.；Constantine,M.；Vredenburgh,J.；Boruchov,A.；Crilley,P.；Henrick,P.M.；Hornburg,K.T.V.；Leblebjian,H.；Chuma,S.；Reyes,K.；Noonan,K.；Warren,D.；Schlossman,R.；Paba-Prada,C.；Anderson,K.C.；Weller,E.；Trippa,L.；Shain,K.；Richardson,P.G.Phase I/II trial of the CXCR4 inhibitor plerixafor incombination with bortezomib as a chemosensitization strategy in relapsed/refractory multiple myeloma.Am.J.Hematol.,2019,94,1244-1253.]。上市的靶向MM小分子药物只有靶向组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂帕比司他(panobinosta)和靶向趋化因子受体4(CXCR4)抑制剂普乐沙福(plerixafor)2种药物，结构式如下：
我国MM患者治疗可选择药物相对较少，主要集中在第1代小分子化疗药物和糖皮质激素类药物，以及少数第2代免疫调节物和蛋白酶体抑制剂。第3代靶向药物仅有普乐沙福于2018年在中国上市。
帕比司他虽然开创了新一代MM治疗药物的新纪元，但其具有严重的腹泻、心律失常及心电图(ECG)变化等副作用[Yee,A.J.；Raje,N.S.Panobinostat and multiplemyeloma in 2018.Oncologist,2018,23,516-517.]。普乐沙福临床应用出现了严重的淤伤、出血或胃部不适等副作用[Ghobrial,I.M.；Liu,C.J.；Zavidij,O.；Azab,A.K.；Baz,R.；Laubach,J.P.；Mishima,Y.；Armand,P.；Munshi,N.C.；Basile,F.；Constantine,M.；Vredenburgh,J.；Boruchov,A.；Crilley,P.；Henrick,P.M.；Hornburg,K.T.V.；Leblebjian,H.；Chuma,S.；Reyes,K.；Noonan,K.；Warren,D.；Schlossman,R.；Paba-Prada,C.；Anderson,K.C.；Weller,E.；Trippa,L.；Shain,K.；Richardson,P.G.Phase I/II trialof the CXCR4inhibitor plerixafor in combination with bortezomib as achemosensitization strategy in relapsed/refractory multiplemyeloma.Am.J.Hematol.,2019,94,1244-1253.]。因此研究并开发更多有效且安全的药物，对于MM的临床治疗意义重大。
发明内容
我们研究发现Hsp90α蛋白的辅酶蛋白AHA1与MM细胞的增殖成高度相关，一方面，通过抑制AHA1，进而间接抑制Hsp90的活性，从而可以有效抑制MM细胞增殖。另一方面，AHA1小分子抑制剂还能通过抑制外泌体中AHA1表达，进而影响肿瘤细胞与微环境的相互作用，进一步通过影响相关信号通路刺激而抑制MM细胞的增殖。
本发明更是首次发现AHA1可作为多发性骨髓瘤(MM)治疗药物研发的新靶点，有望避免传统Hsp90直接抑制剂导致的副作用，通过多种作用途径(如影响外泌体中AHA1表达等)，开辟MM靶向治疗的新机制与新方法。
因此，本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术的不足，提供一种治疗MM的全新靶点及其小分子配体，亦即提供一种具有抗多发性骨髓瘤作用的AHA1抑制剂。
本发明所要解决的另一技术问题是，提供所述AHA1抑制剂的制备方法，使其易于操作。
本发明所要解决的再一技术问题是，提供所述AHA1抑制剂的用途，即在抗多发性骨髓瘤药物制备中的应用。
为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种AHA1抑制剂，所述抑制剂为如式(I)所示的化合物：
或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中：
R1选自-H；或含有0～2个氮原子、硫原子、氧原子的五元或六元芳香环；或是各种烷氧基、羧基、酰胺基、酯基取代的五元或六元芳香环；
R2选自-H、烷氧基、羟基、磺酰胺基、卤素、烷基、氨基、取代胺基、芳环、吡啶环；或含有0～2个氮原子、硫原子或氧原子的五元或六元芳香环；
R3选自羟基、磺酰胺基、酰胺基、酯基；
R4选自羟基、磺酰胺基、卤素、烷基、烷氧基、氨基、取代胺基、含有0～2个氮原子、硫原子或氧原子的五元或六元芳香环；
n为0～1的整数；
X为CH或N。
优选的，所述的化合物选自下表化合物：
表1具体化合物
本发明的另一方面涉及制备式(I)化合物的方法，包括以下步骤：
a、以取代苯甲醛为起始原料，在发烟硝酸中低温发生硝化反应，生成硝基取代苯甲酰衍生物(2-2)，备用；
b、取步骤a得到的硝基取代苯甲酰衍生物(2-2)在乙醇溶液中，经过铁粉还原得到氨基取代苯甲酰衍生物(2-3)，备用；
c、取步骤b得到的氨基取代苯甲酰衍生物(2-3)为原料，在水和冰醋酸中，与硝基乙酸乙酯反应，成环得到(2-4)，备用；
d、取步骤c得到的(2-4)在乙醇溶液中，经过铁粉还原得到(2-5)，备用；
e、将碘代芳香酸在金属钯的催化作用下与取代芳香硼酸反应得到(2-6)，备用；
f、取步骤d得到的(2-5)和步骤e得到的(2-6)，在乙腈溶液中，在PCl3催化作用下发生酰化反应得到目标化合物(I)；若通式(I)中R1为-H，则直接取市售的取代芳香酸类化合物与步骤d得到的(2-5)在乙腈溶液中，在PCl3催化作用下发生酰化反应得到目标化合物(I)。
若R3为酯基，制备方法还包括以下步骤：
g、取步骤f得到的化合物(I)，在甲醇溶液中，在三乙胺的催化下发生水解反应得到化合物(I)的羟基衍生物。
进一步的，步骤a中所用的浓硝酸为发烟硝酸，取代苯甲醛与发烟硝酸的摩尔比为1mol/500ml～1mol/900ml，反应温度为–15℃～–5℃，反应时间为1～2小时。
进一步的，步骤b中所述(2-2)与铁粉摩尔比为1：4～6，所述(2-2)与冰醋酸摩尔比为1：8～12，所述(2-2)与乙醇的用量比为1mol/10ml～1mol/20ml，反应温度为回流，反应时间为2～8小时。
进一步的，步骤c中所述(2-3)与硝基乙酸乙酯摩尔比为1：2～3，冰醋酸和水的体积比为1：1，氨基取代苯甲醛与溶剂的摩尔比为1mol/3ml～1mol/10ml，反应温度为50℃～80℃，反应时间为10～20小时。
进一步的，步骤d中所述(2-4)与铁粉摩尔比为1：4～6，所述(2-4)与冰醋酸摩尔比为1：8～12，所述(2-4)与乙醇的摩尔体积比为1mol/10ml～1mol/20ml，反应温度为回流，反应时间为2～8小时。
进一步的，步骤e中所用的碘代芳香酸与取代芳香硼酸摩尔比为1：1.5～3；催化剂为Pd(dppf)Cl2，碘代芳香酸与Pd(dppf)Cl2的摩尔比为1：0.03～0.08，反应所用的碱为碳酸钾溶液，氮气保护，反应温度为40℃～60℃，反应时间为12～24小时。
进一步的，步骤f中所述(2-5)与(2-6)的摩尔比或所述(2-5)与取代芳香酸的摩尔比均为1：1.1～1.5，反应温度为回流，反应时间为3～6小时。
本发明的另一方面涉及所述的AHA1抑制剂在防治多发性骨髓瘤疾病药物制备中的应用。
在一个实施例中，AHA1抑制剂(I)显示一定的酸性，可以把AHA1抑制剂(I)和碱金属、碱土金属氢氧化物、碱金属碳酸盐或碱土金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱土金属碳酸氢盐反应形成盐。
在一个实施例中，AHA1抑制剂(I)结构中含有氮原子，从而具有一定的弱碱性，可以与盐酸、硫酸、磷酸反应形成盐。
进一步的，将AHA1抑制剂(I)或其盐和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、喷雾剂、注射剂、微囊、软膏剂或透皮控释贴剂剂型的药物。
在一个实施例中，本发明提供的AHA1抑制剂(I)或其盐制成片剂时，把AHA1抑制剂(I)盐和载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。
在一个实施例中，本发明提供的AHA1抑制剂(I)或其盐制成胶囊剂时把AHA1抑制剂(I)盐和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。
在一个实施例中，本发明提供的AHA1抑制剂(I)或其盐制成颗粒剂时，把组合物和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。
在一个实施例中，把本发明提供的AHA1抑制剂(I)或其盐制成注射液时，取AHA1抑制剂(I)盐加入增溶剂，搅拌均匀，80℃加热30分钟，过滤，调节pH值，用垂熔玻璃漏斗或其它滤器过滤至澄明，灌装，在100至115℃灭菌30分钟制成注射液。
与现有技术相比，本发明的有益技术效果如下：
1、本发明提供的系列AHA1抑制剂(I)，通过抑制Hsp90α蛋白的辅酶蛋白AHA1可有效抑制MM细胞增殖，解决传统靶向药物毒副作用大的缺陷。
2、本发明提供的系列AHA1抑制剂(I)的制备方法，以取代苯甲醛为原料，依次经过硝化、还原、环化、酰胺化等反应，得到目标化合物，每一步反应条件温和，可操作性强，生产效率高，成本低，且成品得率高、纯度高。
本发明有益技术效果详见下文试验例。
定义
术语“卤素”或前缀“卤”，是指F，Cl，Br或I。
“烷氧基”是指基团-OR，其中，R为取代或未取代的烷基。
像本发明所描述的，取代基画一个键连接到中心的环上形成的环体系(如式I所示)代表R1、R2可以在环上任何可取代的位置取代。
本发明中所述的“药学上可接受的”是指包括任意不干扰活性成分的生物活性的有效性且对它被给予的宿主无毒性的物质。
本发明所使用的术语“前药”，代表一个化合物在体内转化为式Ⅰ所示的化合物。这样的转化受前体药物在血液中水解或在血液或组织中经酶转化为母体结构的影响。本发明前体药物类化合物可以是酯，在现有的发明中酯可以作为前体药物的有苯酯类，脂肪族(C1-24)酯类，酰氧基甲基酯类，碳酸酯，氨基甲酸酯类和氨基酸酯类。例如本发明里的一个化合物包含羟基，即可以将其酰化得到前体药物形式的化合物。其他的前体药物形式包括磷酸酯，如这些磷酸酯类化合物是经母体上的羟基磷酸化得到的。
除非其他方面表明，本发明的化合物的所有互变异构形式都包含在本发明的范围之内。另外，除非其他方面表明，本发明所描述的化合物的结构式包括一个或多个不同的原子的富集同位素。术语“互变异构体”或“互变异构的形式”是指不同能量的结构的同分异构体可以通过低能垒互相转化。这样的实例包括，但并不限于，质子互变异构体(即质子移变的互变异构体)包括通过质子迁移的互变，如酮式-烯醇式和亚胺-烯胺的同分异构化作用。原子价(化合价)互变异构体包括一些成键电子的重组互变。
本发明的化合物可以包含不对称中心或手性中心，因此存在不同的立体异构体。本发明的化合物所有的立体异构形式，包括但不限于，非对映体，对映异构体，阻转异构体，和它们的混合物，如外消旋混合物，组成了本发明的一部分。很多有机化合物都以光学活性形式存在，即它们有能力旋转平面偏振光的平面。在描述光学活性化合物时，前缀D、L或R、S用来表示分子手性中心的绝对构型。前缀d、l或(+)、(-)用来命名化合物平面偏振光旋转的符号，前缀(-)或l是指化合物是左旋的，前缀(+)或d是指化合物是右旋的。这些立体异构体的化学结构是相同的，但是它们的立体结构不一样。特定的立体异构体可以是对映体，异构体的混合物通常称为对映异构体混合物。50:50的对映体混合物被称为外消旋混合物或外消旋体，这可能导致化学反应过程中没有立体选择性或立体定向性。术语“外消旋混合物”和“外消旋体”是指等摩尔的两个对映异构体的混合物，缺乏光学活性。
用于本发明的药学上可接受的载体是指不会破坏一起调配的化含物的药理学活性的无毒载剂、佐剂或媒剂。
附图说明
图1为本发明化合物的结构通式图。
图2为本发明化合物的合成反应流程图。
图3为本发明化合物I-1与AHA1蛋白亲和力试验的试验结果图。
图4为阳性对照药对MM细胞增殖影响的试验结果图。
图5为本发明化合物I-1对MM细胞增殖影响的试验结果图。
图6为本发明化合物I-2对MM细胞增殖影响的试验结果图。
图7为本发明化合物I-3对MM细胞增殖影响的试验结果图。
图8为本发明化合物I-4对MM细胞增殖影响的试验结果图。
图9为本发明化合物I-5对MM细胞增殖影响的试验结果图。
图10为本发明化合物I-6对MM细胞增殖影响的试验结果图。
图11为本发明化合物I-7对MM细胞增殖影响的试验结果图。
图12为本发明化合物I-8对MM细胞增殖影响的试验结果图。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
本发明中，化合物的结构是通过质谱(MS)和/或核磁共振(1HNMR)设备来确定的。
本发明化合物可按照本领域常规方法，并使用合适的试剂、原料和本领域技术人员已知的纯化方法制备。下面更具体地描述本发明化合物的制备方法，但这些具体方法不对本发明构成任何限制。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便地制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易地进行。
实施例1 4-甲酰基-2-甲氧基-3-硝基苯基乙酸酯(2-2)的制备
将发烟硝酸(450mL)在-10℃下分批加入市售的乙酰香兰素2-1(98g,0.5mol)中，搅拌45分钟。将酸性溶液缓慢倒入冰水(4L)中，通过过滤收集沉淀产物。沉淀物用冰水(1L)洗涤几次并干燥。粗品经硅胶柱层析分离纯化，以体积比为4:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂为洗脱剂，得到4-甲酰基-2-甲氧基-3-硝基苯乙酸酯2-2(55g,46％)，产品为黄色固体。
实施例2 3-氨基-4-甲酰基-2-甲氧基苯基乙酸酯(2-3)的制备
将上述制备的4-甲酰基-2-甲氧基-3-硝基苯乙酸酯2-2(1.4g，5.86mmol)溶解在乙醇(88mL)中，加入还原铁粉(1.634g，29.56mmol)和冰醋酸(3.38mL，59mmol)，回流反应3.5小时。反应完毕后，过滤掉还原铁粉，减压蒸发除去溶剂，粗品经硅胶柱层析分离纯化，以体积比为6:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂为洗脱剂，得到3-氨基-4-甲酰基-2-甲氧基苯基醋酸酯2-3(800mg,57％)，产品为白色固体。
实施例3 8-甲氧基-3-硝基-2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-乙酸酯(2-4)的制备
将3-氨基-4-甲酰基-2-甲氧基苯基醋酸酯2-3(540mg,2.58mmol)、市售的硝基乙酸乙酯(0.859mL,7.75mmol)加入到冰醋酸(5mL)和水(5mL)的混合体系中，70℃回流搅拌12小时，反应完成后，冷却至室温，过滤收集沉淀物，用水洗涤，得到产品8-甲氧基-3-硝基-2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-乙酸酯2-4(920mg,59％)，产品为黄色固体。
实施例4 3-氨基-8-甲氧基-2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-乙酸酯(2-5)的制备
将上述制备的8-甲氧基-3-硝基-2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-乙酸酯2-4(443mg,1.59mmol)溶解在乙醇(24mL)中，加入还原铁粉(443mg,7.9mmol)和冰醋酸(0.91mL,15.9mmol)，回流反应3.5小时。反应完毕后，过滤掉还原铁粉，减压蒸发除去溶剂，粗品经硅胶柱层析分离纯化，以体积比为1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂为洗脱剂，得到3-氨基-8-甲氧基-2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-乙酸酯2-5(266mg,60％)，产品为黄色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.36(s,1H),7.11(d,J＝8.6Hz,1H),6.83(d,J＝8.6Hz,1H),6.74(d,J＝0.9Hz,1H),5.51(s,2H),3.75(s,3H),2.32(s,3H)。
实施例5 3'，6-二甲氧基-[1,1'-联苯]-3-羧酸(2-6-1)的制备
在室温下，取25mL圆底烧瓶，依次加入3-碘-4-甲氧基苯甲酸(139mg,0.5mmol)、3-甲氧基苯硼酸(152mg,1.0mmol)、Pd(dppf)Cl2(11mg,3.0mol％)、2M的K2CO3水溶液(0.75mL)和二氧六环(3mL)，充入氮气后常温搅拌30分钟转入55℃反应16小时。反应完毕后，冷却至室温，以乙酸乙酯稀释反应液，抽滤，浓缩，即为2-6-1粗品。柱层析分离纯化，以石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂(10：1)为洗脱剂，另加1％乙酸防止硅胶柱吸附，得3',6-二甲氧基-[1,1'-联苯]-3-羧酸2-6-1(94.2mg,73.％)，产品为黄色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.73(s,1H),7.95(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),7.83(d,J＝2.2Hz,1H),7.34(t,J＝7.9Hz,1H),7.21(d,J＝8.7Hz,1H),7.03(ddd,J＝4.1,2.9,1.3Hz,2H),6.94(ddd,J＝8.3,2.5,0.8Hz,1H),3.85(s,3H),3.79(s,3H)。
实施例6 3-(3'，6-二甲氧基-[1,1'-联苯]-3-甲酰胺)-8-甲氧基-2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-乙酸酯(I-1)的制备
在室温下，取25mL圆底烧瓶，依次加入上述所制备的2-5(40.0mg,0.16mmol)、2-6-1(45.7mg,0.18mmol)和乙腈(4mL)，室温搅拌30分钟后于0℃条件下加入一滴PCl3，加毕，转入87℃回流反应4小时。反应完毕后，冷却至室温，加入1滴冰水猝灭，减压蒸发除去溶剂。粗品经硅胶柱层析分离纯化，以二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(100：1)为洗脱剂，得到3-(3',6-二甲氧基-[1,1'-联苯]-3-甲酰胺)-8-甲氧基-2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-乙酸酯I-1的纯品(39.1mg,46.0％)，产品为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.52(s,1H),9.22(s,1H),8.96(s,1H),7.43–7.35(m,2H),7.15(d,J＝7.7Hz,1H),7.11(dd,J＝13.3,5.4Hz,2H),6.99(d,J＝8.6Hz,1H),6.95(dd,J＝8.1,2.2Hz,1H),3.99(s,3H),3.93(d,J＝12.1Hz,3H),3.88(s,3H),2.42(s,3H)。
实施例7 3-([1,1'-联苯]-3-羧酰胺)-8-甲氧基-2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-乙酸酯(I-2)的制备
在室温下，取25mL圆底烧瓶，依次加入上述所制备的2-5(40.0mg,0.16mmol)、[1,1'-联苯]-3-羧酸2-6-2(33.2mg,0.17mmol)和乙腈(4mL)，室温搅拌30分钟后于0℃条件下加入一滴PCl3，加毕，转入87℃回流反应4小时。反应完毕后，冷却至室温，加入1滴冰水猝灭，减压蒸发除去溶剂。粗品经硅胶柱层析分离纯化，以二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(100：1)为洗脱剂，得到3-([1,1'-联苯]-3-羧酰胺)-8-甲氧基-2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-乙酸酯I-2的纯品(40.0mg，54.8％)，产品为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.50(s,1H),9.32(s,1H),9.00(s,1H),8.20(d,J＝1.5Hz,1H),7.95(d,J＝7.8Hz,1H),7.83(d,J＝7.9Hz,1H),7.71–7.66(m,2H),7.62(t,J＝7.7Hz,1H),7.51(t,J＝7.6Hz,2H),7.42(dd,J＝15.5,8.0Hz,2H),7.01(d,J＝8.6Hz,1H),4.01(s,3H),2.42(s,3H)。
实施例8N-(7-羟基-8-甲氧基-2-氧代-1,2-二氢喹啉-3-基)-[1,1'-联苯]-3-甲酰胺(I-3)的制备
在室温下，取25mL圆底烧瓶，将上述制备的I-2(30mg,0.07mmol)溶解在3mL甲醇中，加入0.3mL三乙胺，常温搅拌12小时，反应完成后，减压蒸去溶剂，粗品经硅胶柱层析分离纯化，以二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(100：1)为洗脱剂，得到N-(7-羟基-8-甲氧基-2-氧代-1,2-二氢喹啉-3-基)-[1,1'-联苯]-3-甲酰胺I-3的纯品(9mg，30.0％)，产品为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.47(s,1H),9.25(s,1H),8.97(s,1H),8.20(s,1H),7.95(d,J＝7.7Hz,1H),7.82(d,J＝7.7Hz,1H),7.68(d,J＝7.4Hz,2H),7.61(s,1H),7.52(dd,J＝16.4,9.0Hz,2H),3.97(s,3H)。
实施例9 3-(4-(叔丁基)苯甲酰胺基)-8-甲氧基-2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-乙酸酯(I-4)的制备
在室温下，取25mL圆底烧瓶，依次加入上述所制备的2-5(40.0mg,0.16mmol)、对叔丁基苯甲酸(28.7mg,0.16mmol)和乙腈(4mL)，室温搅拌30分钟后于0℃条件下加入一滴PCl3，加毕，转入87℃回流反应4小时。反应完毕后，冷却至室温，加入1滴冰水猝灭，减压蒸发除去溶剂。粗品经硅胶柱层析分离纯化，以二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(100：1)为洗脱剂，得到3-(4-(叔丁基)苯甲酰胺基)-8-甲氧基-2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-乙酸酯I-4的纯品(25.0mg，36.4％)，产品为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.62(s,1H),9.25(s,1H),8.98(s,1H),7.93(d,J＝8.4Hz,2H),7.56(d,J＝8.4Hz,2H),7.39(d,J＝8.7Hz,1H),7.00(d,J＝8.6Hz,1H),4.01(s,3H),2.42(s,3H),1.39(s,9H)。
实施例10 3-(4-氟苯甲酰胺基)-8-甲氧基-2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-乙酸酯(I-5)的制备
在室温下，取25mL圆底烧瓶，依次加入上述所制备的2-5(40.0mg,0.16mmol)、对氟苯甲酸(22.6mg,0.16mmol)和乙腈(4mL)，室温搅拌30分钟后于0℃条件下加入一滴PCl3，加毕，转入87℃回流反应4小时。反应完毕后，冷却至室温，加入1滴冰水猝灭，减压蒸发除去溶剂。粗品经硅胶柱层析分离纯化，以二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(100：1)为洗脱剂，得到3-(4-氟苯甲酰胺基)-8-甲氧基-2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-乙酸酯I-5的纯品(30.0mg，47.9％)，产品为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.38(s,1H),9.20(s,1H),8.94(s,1H),8.01(dd,J＝8.8,5.2Hz,2H),7.39(d,J＝8.7Hz,1H),7.22(t,J＝8.6Hz,2H),4.01(s,3H),2.42(s,3H)。
实施例11 6-甲氧基-3'-(甲氧基羰基)-[1,1'-联苯]-3-羧酸(2-6-5)的制备
在室温下，取25mL圆底烧瓶，依次加入3-碘-4-甲氧基苯甲酸(139mg,0.5mmol)、(3-(甲氧羰基)苯基)硼酸(180mg,1mmol)、Pd(dppf)Cl2(37mg,10mol％)、2M的磷酸钾水溶液(0.75mL)和二氧六环(3mL)，充入氮气后常温搅拌30分钟转入95℃回流反应16小时。反应完毕后，冷却至室温，以乙酸乙酯萃取反应液，收集水层，调节水层pH至2，粗品析出。经柱层析分离纯化，以石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂(2：1)为洗脱剂，另加1％乙酸防止硅胶柱吸附，得2-6-5纯品，产品为淡黄色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.03(s,1H),8.05(s,1H),7.99(dd,J＝8.6,1.7Hz,1H),7.95(d,J＝7.8Hz,1H),7.86(d,J＝1.6Hz,1H),7.79(d,J＝7.7Hz,1H),7.60(t,J＝7.7Hz,1H),7.24(d,J＝8.7Hz,1H),3.88(s,3H),3.86(s,3H)。
实施例12 5'-(7-乙酰氧基-8-甲氧基-2-氧基-1,2-二氢喹啉-3-基)氨甲酰)-2'-甲氧基-1,1'-联苯]-3-羧酸甲酯(I-6)的制备
在室温下，取25mL圆底烧瓶，依次加入上述所制备的2-5(40.0mg,0.16mmol)、6-甲氧基-3'-(甲氧基羰基)-[1,1'-联苯]-3-羧酸2-6-5(46.0mg,0.16mmol)和乙腈(4mL)，室温搅拌30分钟后于0℃条件下加入一滴PCl3，加毕，转入87℃回流反应4小时。反应完毕后，冷却至室温，加入1滴冰水猝灭，减压蒸发除去溶剂。粗品经硅胶柱层析分离纯化，以二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(100：1)为洗脱剂，得到5'-(7-乙酰氧基-8-甲氧基-2-氧基-1,2-二氢喹啉-3-基)氨甲酰)-2'-甲氧基-1,1'-联苯]-3-羧酸甲酯I-6的纯品(40.0mg，46.5％)，产品为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.38(s,1H),9.20(s,1H),8.94(s,1H),8.01(dd,J＝8.8,5.2Hz,2H),7.39(d,J＝8.7Hz,1H),7.22(t,J＝8.6Hz,2H),4.01(s,3H),2.42(s,3H)。
实施例13 8-甲氧基-3-(4-甲氧基苯甲酰胺)-2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-乙酸酯(I-7)的制备
在室温下，取25mL圆底烧瓶，依次加入上述所制备的2-5(40.0mg,0.16mmol)、对甲氧基苯甲酸2-6-6(24.3mg,0.16mmol)和乙腈(4mL)，室温搅拌30分钟后于0℃条件下加入一滴PCl3，加毕，转入87℃回流反应4小时。反应完毕后，冷却至室温，加入1滴冰水猝灭，减压蒸发除去溶剂。粗品经硅胶柱层析分离纯化，以二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(100：1)为洗脱剂，得到8-甲氧基-3-(4-甲氧基苯甲酰胺)-2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-乙酸酯I-7纯品(32.0mg，49.7％)，产品为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.47(s,1H),9.20(s,1H),8.95(s,1H),7.96(d,J＝8.8Hz,2H),7.38(d,J＝8.6Hz,1H),7.02(d,J＝8.8Hz,2H),6.99(d,J＝8.6Hz,1H),4.00(s,3H),3.91(s,3H),2.42(s,4H)。
实施例14 5'-(7-羟基-8-甲氧基-2-氧基-1,2,4a，8a-四氢喹啉-3-基)氨甲酰)-2'-甲氧基-1,1'-联苯]-3-羧酸甲酯(I-8)的制备
在室温下，取25mL圆底烧瓶，将上述制备的I-6(30mg,0.06mmol)溶解在3mL甲醇中，加入0.3mL三乙胺，常温搅拌12小时，反应完成后，减压蒸去溶剂，粗品经硅胶柱层析分离纯化，以二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(100：1)为洗脱剂，得到5'-(7-羟基-8-甲氧基-2-氧基-1,2,4a，8a-四氢喹啉-3-基)氨甲酰)-2'-甲氧基-1,1'-联苯]-3-羧酸甲酯I-8的纯品(10mg，30.0％)，产品为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.61,9.99,9.43,8.58,8.12,8.03,8.03,8.01,8.01,7.99,7.98,7.91,7.90,7.86,7.84,7.65,7.63,7.62,7.33,7.32,7.29,7.27,6.83,6.81,3.89,3.89,3.80。
试验例1本发明AHA1抑制剂(I)对AHA1蛋白亲和力的实验
化合物对AHA1亲和力测试采用微量热泳动技术(MST)，仪器为诺坦普(NanoTemper)公司生产的MonolithTM NT.115系列，配套试剂盒为MonolithTM RED-NHS二代蛋白标记试剂盒。首先，根据试剂盒操作对蛋白进行标记。然后，上机检测及分析：设置AHA1样品浓度、小分子化合物的浓度梯度以及上样毛细管型号等，开始运行程序。程序结束后，通过分析软件拟合MST曲线，计算出AHA1与小分子化合物的Kd值。
结果(详见见图3)如下：化合物I-1与AHA1的亲和力Kd值为1.88μM，其与AHA1具有较强的结合力。该实验结果为后续研究结合位点，化合物构效关系提供了基础。因此本发明有希望避免直接抑制HSP90所带来的副作用，为开辟MM靶向治疗提供了新机制。
试验例2本发明AHA1抑制剂(I)对MM细胞增殖的影响
分别收集MM细胞株ARP1、H929野生型细胞；以及ARP1的AHA1OE细胞和H929的AHA1OE细胞，提取蛋白，使用Western blot检测各细胞株中AHA1蛋白的表达情况，我们发现AHA1 cDNA转染细胞后，AHA1蛋白的表达明显高于对照组，说明高表达AHA1的MM细胞株构建成功。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在570nm波长处测定其吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比，根据其测得的吸光度值(OD)，来判断活细胞数量，OD越大，细胞活性越强。具体步骤：1)处于对数生长期的H929和ARP1野生型，H929和ARP1过表达，H929和ARP1敲低的细胞株，接种在无菌96孔板中，每组设置3个复孔，加入6个浓度梯度的药物，在37℃，5％CO2的培养箱中孵育48h；2)每个孔加入新鲜配制的MTT试剂，37℃，5％CO2的培养箱中孵育4h；3)离心机中离心，每孔加入150μL DMSO；4)用酶标仪测定在570nm波长处，各孔的OD，按照下列公式计算药物对骨髓瘤细胞的生长抑制率，抑制率＝[1-(实验组OD-空白组OD)/(对照组OD-空白组OD)]×100％；绘制曲线，并求解IC50。
结果如下(详见表2-表10，及图4-图12)：以硼替佐米为阳性药，测试上述8个化合对MM细胞增殖的影响。上述合成的化合物对MM细胞具有良好的抗增殖活性，并且可以靶向结合AHA1来达到抑制MM细胞增殖的目的，在治疗多发性骨髓瘤上具有良好的开发前景。
表2 BTZ对MM细胞的抑制率
表3 I-1对MM细胞的抑制率
表4 I-2对MM细胞的抑制率
表5 I-3对MM细胞的抑制率
表6 I-4对MM细胞的抑制率
表7 I-5对MM细胞的抑制率
表8 I-6对MM细胞的抑制率
/>
表9 I-7对MM细胞的抑制率
表10 I-8对MM细胞的抑制率
尽管已经示出了和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (9)
1.一种AHA1抑制剂，所述抑制剂为如式(I)所示的化合物：
或其药学上可接受的盐；
且，所述化合物选自下表所列化合物，所述R1-4、n、X如下表所列化合物所示：
2.一种制备权利要求1所述化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、以取代苯甲醛为起始原料，在发烟硝酸中低温发生硝化反应，生成硝基取代苯甲酰衍生物(2-2)，备用；
b、取步骤a得到的硝基取代苯甲酰衍生物(2-2)在乙醇溶液中，经过铁粉还原得到氨基取代苯甲酰衍生物(2-3)，备用；
c、取步骤b得到的氨基取代苯甲酰衍生物(2-3)为原料，在水和冰醋酸中，与硝基乙酸乙酯反应，成环得到(2-4)，备用；
d、取步骤c得到的(2-4)在乙醇溶液中，经过铁粉还原得到(2-5)，备用；
e、将碘代芳香酸在金属钯的催化作用下与取代芳香硼酸反应得到(2-6)，备用；
f、取步骤d得到的(2-5)和步骤e得到的(2-6)，在乙腈溶液中，在PCl3催化作用下发生酰化反应得到目标化合物(I)；
或者，若通式(I)中R1为-H，则直接取市售的取代芳香酸类化合物与步骤d得到的(2-5)在乙腈溶液中，在PCl3催化作用下发生酰化反应得到目标化合物(I)。
3.根据权利要求2所述制备化合物的方法，其特征在于，R3为酯基，还包括以下步骤：
g、取步骤f得到的酯基类化合物(I)，在甲醇溶液中，在三乙胺的催化下发生水解反应得到酯基类化合物(I)的羟基衍生物。
4.根据权利要求2或3所述制备化合物的方法，其特征在于，步骤a中所用的浓硝酸为发烟硝酸，取代苯甲醛与发烟硝酸的摩尔体积比为1mol/500ml～1mol/900ml，反应温度为–15℃～–5℃，反应时间为1～2小时；
步骤b中所述(2-2)与铁粉摩尔比为1：4～6，所述(2-2)与冰醋酸摩尔比为1：8～12，所述(2-2)与乙醇的用量比为1mol/10ml～1mol/20ml，反应温度为回流，反应时间为2～8小时。
5.根据权利要求2或3所述制备化合物的方法，其特征在于，步骤c中所述(2-3)与硝基乙酸乙酯摩尔比为1：2～3，冰醋酸和水的体积比为1：1，氨基取代苯甲醛与溶剂的摩尔比为1mol/3ml～1mol/10ml，反应温度为50℃～80℃，反应时间为10～20小时。
6.根据权利要求2或3所述制备化合物的方法，其特征在于，步骤d中所述(2-4)与铁粉摩尔比为1：4～6，所述(2-4)与冰醋酸摩尔比为1：8～12，所述(2-4)与乙醇的摩尔体积比为1mol/10ml～1mol/20ml，反应温度为回流，反应时间为2～8小时。
7.根据权利要求2或3所述制备化合物的方法，其特征在于，步骤e中所用的碘代芳香酸与取代芳香硼酸摩尔比为1：1.5～3；催化剂为Pd(dppf)Cl2，碘代芳香酸与Pd(dppf)Cl2的摩尔比为1：0.03～0.08，反应所用的碱为碳酸钾溶液，氮气保护，反应温度为40℃～60℃，反应时间为12～24小时。
8.根据权利要求2所述制备化合物的方法，其特征在于，步骤f中所述(2-5)与(2-6)的摩尔比或所述(2-5)与取代芳香酸的摩尔比均为1：1.1～1.5，反应温度为回流，反应时间为3～6小时。
9.权利要求1所述的AHA1抑制剂在防治多发性骨髓瘤疾病药物制备中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210224472.XA CN114702444B (zh) | 2022-03-07 | 2022-03-07 | 一种具有抗多发性骨髓瘤作用的aha1抑制剂及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210224472.XA CN114702444B (zh) | 2022-03-07 | 2022-03-07 | 一种具有抗多发性骨髓瘤作用的aha1抑制剂及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114702444A CN114702444A (zh) | 2022-07-05 |
| CN114702444B true CN114702444B (zh) | 2023-09-12 |
Family
ID=82169445
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210224472.XA Active CN114702444B (zh) | 2022-03-07 | 2022-03-07 | 一种具有抗多发性骨髓瘤作用的aha1抑制剂及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114702444B (zh) |
-
2022
- 2022-03-07 CN CN202210224472.XA patent/CN114702444B/zh active Active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Kusuma, Bhaskar Reddy ; .Synthesis and biological evaluation of coumarin replacements of novobiocin as Hsp90 inhibitors.Bioorganic & Medicinal Chemistry.2014,第22卷(第4期),1441-1449. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114702444A (zh) | 2022-07-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1988091B1 (en) | Tricyclic compounds | |
| JP6324956B2 (ja) | 置換アミノインダン−およびアミノテトラリンカルボン酸ならびにその使用 | |
| JP2019522005A (ja) | 芳香族アセチレンまたは芳香族エチレン系化合物、その中間体、製造方法、薬物組成物および使用 | |
| EP2767531B1 (en) | Cyclic n,n'-diarylthioureas and n,n'-diarylureas as androgen receptor antagonists, anti-cancer agent, method for producing and using same | |
| JP2009514802A (ja) | ナトリウムチャネルモジュレーターとしてのプロリンアミド誘導体 | |
| JP2017001991A (ja) | 新規ベンズオキサゾロン化合物 | |
| AU2014209319A1 (en) | Crystalline forms of {[1-cyano-5-(4-chlorophenoxy)-4-hydroxy-isoquinoline-3-carbonyl]-amino}-acetic acid | |
| CN113387957B (zh) | 螺环吲哚酮-吡咯烷碳酸酯化合物和其组合物、制备方法及用途 | |
| WO2018072742A1 (zh) | 一种咪唑并异吲哚类衍生物的游离碱的结晶形式及其制备方法 | |
| CN114702444B (zh) | 一种具有抗多发性骨髓瘤作用的aha1抑制剂及其制备方法和应用 | |
| CN111454229A (zh) | 二氢萘并异噁唑类衍生物及其在抗肿瘤药物中的应用 | |
| EP2646417A1 (en) | Kat ii inhibitors | |
| TWI794994B (zh) | 嘧啶甲醯胺類化合物及其應用 | |
| JP5959617B2 (ja) | オタミキサバンの安息香酸塩 | |
| TW201922690A (zh) | 環－amp反應元素結合蛋白的抑制劑 | |
| CN111349077B (zh) | 一种哒嗪衍生物及其制备方法和医药用途 | |
| CZ280543B6 (cs) | Způsob výroby nových thienopyranových derivátů | |
| CN109438347B (zh) | 一种氰基喹啉类ido1抑制剂、其制备方法及应用 | |
| JP2001302669A (ja) | 三環性フタラジノン誘導体 | |
| CN114560813B (zh) | 一种苯并咪唑类mk2变构抑制剂及其制备方法和应用 | |
| TWI811901B (zh) | 一種嘧啶甲醯胺類化合物及其應用 | |
| CN114644640B (zh) | 一种嘧啶甲酰胺类化合物及其应用 | |
| CN117186001A (zh) | 一种具有抗多发性骨髓瘤活性的aha1抑制剂及其制备方法和应用 | |
| EP4273143A1 (en) | Derivative of 2,5-diketopiperazine compound, and preparation method therefor, pharmaceutical composition thereof and use thereof | |
| CN101759665A (zh) | 取代苯基哌嗪芳烷醇衍生物及其在制备镇痛药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |