CN114686557A - 用于评估食物过敏的肠道菌群生物标志物及其用途和试剂盒 - Google Patents

用于评估食物过敏的肠道菌群生物标志物及其用途和试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种用于评估食物过敏的肠道菌群生物标志物及其用途和试剂盒。所述标志物包括下列的至少之一：拟普雷沃菌属(Alloprevotella)、Candidatus_Saccharimonas、Colidextribacter、Enterorhabdus、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39、理研菌属(Rikenella)；所述试剂盒包含用于检测上述标志物的试剂。该标志物可诊断食物过敏或是否易患食物过敏，并且，该标志物可以用于评估受试者过敏治疗效果。

Description

用于评估食物过敏的肠道菌群生物标志物及其用途和试剂盒
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体地，本发明涉及一种用于评估食物过敏的肠道菌群生物标志物及其用途和试剂盒，更具体地，本发明涉及一种标志物、肠道菌群作为标志物在制备试剂盒中的用途、试剂在制备试剂盒中的用途、试剂盒、药物组合物及其在制备药物中的用途。
背景技术
食物过敏是由免疫系统介导的机体对食物蛋白的不良反应，是在全球范围内威胁人类健康的公共卫生问题，各种食物都可能具有致敏性，其中最主要的八大类食物是牛奶、鸡蛋、花生、坚果、大豆、小麦、鱼和贝类。食物过敏患者可出现消化道、呼吸道、皮肤等一系列症状，严重地危及生命。
因此，亟需提供一种准确检测过敏的技术。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提供了一种标志物、肠道菌群作为标志物在制备试剂盒中的用途、试剂在制备试剂盒中的用途、试剂盒、药物组合物及其在制备药物中的用途，本发明的标志物可诊断食物过敏或是否易患食物过敏，并且，该标志物可以用于评估受试者过敏治疗效果。
本发明是基于发明人的下列发现而完成的：
肥胖会导致机体低水平的炎症状态，从而影响机体的免疫反应、肠道屏障功能以及肠道菌群组成。证据表明，高脂饮食导致的肥胖会破坏肠道屏障、导致机体炎症，从而加剧食物过敏(Gu,Y.L.,Guo,X.Y.,Sun,S.F.&Che,H.L.High-fat diet-induced obesityaggravates food allergy by intestinal barrier destruction andinflammation.International Archives of Allergy and Immunology,doi:10.1159/000517866(2021))。此外，母亲肥胖会影响子代的生长发育，导致子代机体的功能和代谢受损，但目前尚缺乏母亲肥胖对子代食物过敏影响的研究。
人体肠道内定植着大量微生物，包括细菌、古细菌、真核生物、病毒和寄生虫等多种类型，他们与宿主构成一个相互关联的整体。正常定植在人体肠道的菌群及其分泌物构成肠道生物屏障，可以通过激活宿主免疫、竞争性抑制病原菌的定植、产生抗菌物质、产生有机酸及短链脂肪酸、并诱导适度的炎症反应以维持肠道健康。肠道菌群的组成是动态变化的，外界环境、饮食方式等各种因素都会影响肠道菌群的结构。在正常生理状态下，机体的肠道菌群维持稳态；一旦肠道菌群被内源或外源物质破坏会导致肠道微生态失调，从而引起一系列身体机能的变化。
基于此，发明人通过对健康和食物过敏人群/动物的肠道菌群组成进行检测，发现健康和食物过敏人群/动物的肠道菌群组成存在显著差异；发明人还发现，亲本肥胖会影响子代肠道菌群的组成及功能，进一步可能会对子代食物过敏的易感性及严重程度产生影响。此外，发明人通过对普通饮食母鼠子代健康小鼠、普通饮食母鼠子代过敏小鼠、高脂饮食母鼠子代过敏小鼠的粪便菌群进行分析，发现普通饮食母鼠子代健康小鼠、普通饮食母鼠子代过敏小鼠和高脂饮食母鼠子代过敏小鼠的粪便菌群存在显著差异。因此，发明人通过对各组小鼠的肠道菌群微生物进行筛选，最终发现拟普雷沃菌属(Alloprevotella)、Candidatus_Saccharimonas、Colidextribacter、Enterorhabdus、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39、理研菌属(Rikenella)可作为诊断食物过敏或者是否易患食物过敏的标志物，此外，后续通过采用拟普雷沃菌属的代表菌株(Alloprevotella tannerae)对小鼠进行灌胃，可缓解小鼠的过敏现象；采用理研菌属的代表菌株(Rikenella microfusus)对小鼠进行灌胃，可加剧小鼠的过敏现象。因此，本发明的标志物可用于诊断食物过敏或是否易患食物过敏，对于加深对食物过敏的认识、实现对食物过敏的无创诊断和靶向治疗具有重要意义。
在本发明的一个方面，本发明提出了一种标志物。根据本发明的实施例，所述标志物包括下列的至少之一：拟普雷沃菌属、Candidatus_Saccharimonas、Colidextribacter、Enterorhabdus、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39、理研菌属。发明人经过大量实现发现，上述标志物对该标志物可用于诊断食物过敏或是否易患食物过敏，具有准确性高等优点。
根据本发明的实施例，所述标志物进一步包括拟普雷沃菌属和任选地Candidatus_Saccharimonas、Colidextribacter、Enterorhabdus、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39、理研菌属中的至少之一。发明人经过试验发现，通过检测患者机体内上述标志物的丰度，可进一步提高诊断食物过敏或是否易患食物过敏的准确性，尤其是能够诊断亲本肥胖引起的子代食物过敏或易患食物过敏。
需要说明的是，本申请中所提到的“患者”或“受试者”均为子代。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种肠道菌群作为标志物在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于诊断食物过敏或是否易患食物过敏，所述肠道菌群包括下列的至少之一：拟普雷沃菌属、Candidatus_Saccharimonas、Colidextribacter、Enterorhabdus、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39、理研菌属。发明人通过对过敏组和非过敏组的肠道菌群进行分析，找出不同组之间的差异细菌，并通过大量实验对差异细菌进行筛选及其验证，最终发现上述肠道菌群作为标志物，可准确诊断食物过敏或是否易患食物过敏；并且，试剂盒具有检测准确度高、操作方便等优点。
根据本发明的实施例，所述试剂盒进一步用于诊断亲本肥胖引起的子代食物过敏或易患食物过敏，所述肠道菌群包括拟普雷沃菌属和任选地Candidatus_Saccharimonas、Colidextribacter、Enterorhabdus、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39、理研菌属中的至少之一。发明人经过试验发现，采用上述微生物组合作为标志物，可进一步提高诊断亲本肥胖引起的子代食物过敏或易患食物过敏的准确性。
根据本发明的实施例，所述标志物选自拟普雷沃菌属，所述受试者的粪便中所述标志物丰度低于正常水平，是所述受试者患有食物过敏或易患食物过敏的指示；所述受试者的粪便中所述标志物丰度不低于正常水平，是所述受试者未患有食物过敏或不易患食物过敏的指示；其中，所述正常水平为预先获知未患有食物过敏的机体粪便中所述肠道菌群丰度。发明人经过实验发现，通过检测受试者粪便样本中拟普雷沃菌属丰度，并与正常水平个体中拟普雷沃菌属丰度进行比较，可准确诊断食物过敏或是否易患食物过敏。
需要说明的是，在本申请中所提到的“未患有食物过敏的机体”均是指健康个体。
根据本发明的实施例，所述标志物包括选自拟普雷沃菌属、Colidextribacter、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39中的至少之一；所述受试者的粪便中所述标志物丰度低于正常水平，是所述受试者患有食物过敏或易患食物过敏的指示；所述受试者的粪便中所述标志物丰度不低于正常水平，是所述受试者未患有食物过敏或不易患食物过敏的指示；其中，所述正常水平为预先获知未患有食物过敏的机体粪便中所述肠道菌群丰度。发明人经过实验发现，当受试者的亲本为肥胖者时，通过检测受试者粪便样本中上述微生物的丰度，并与正常水平个体中的丰度进行比较，因此，该试剂盒可准确诊断亲本肥胖引起的子代的食物过敏或是否易患食物过敏。
根据本发明的实施例，所述标志物包括选自Candidatus_Saccharimonas、Enterorhabdus、理研菌属中的至少之一；所述受试者的粪便中所述标志物丰度高于正常水平，是所述受试者患有食物过敏或易患食物过敏的指示；所述受试者的粪便中所述标志物丰度不高于正常水平，是所述受试者未患有食物过敏或不易患食物过敏的指示；其中，所述正常水平为预先获知未患有食物过敏的机体粪便中所述肠道菌群丰度。发明人经过实验发现，当受试者的亲本为肥胖者时，通过检测受试者粪便样本中上述微生物的丰度，并与正常水平个体中的丰度进行比较，因此，该试剂盒可准确诊断亲本肥胖引起的子代的食物过敏或是否易患食物过敏。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种试剂在制备试剂盒中的用途。根据本发明的实施例，所述试剂用于检测前述标志物，所述试剂盒用于诊断食物过敏或是否易患食物过敏。发明人通过大量实验发现，采用试剂检测前述标志物，基于个体的标志物检测结果，可准确诊断食物过敏或是否易患食物过敏；并且，试剂盒具有检测准确度高、操作方便等优点。
根据本发明的实施例，所述试剂盒进一步用于诊断亲本肥胖引起的子代食物过敏或易患食物过敏，所述标志物进一步包括拟普雷沃菌属和任选地Candidatus_Saccharimonas、Colidextribacter、Enterorhabdus、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39、理研菌属中的至少之一。
根据本发明的实施例，所述标志物选自拟普雷沃菌属，所述受试者的粪便中所述标志物丰度低于正常水平，是所述受试者患有食物过敏或易患食物过敏的指示；所述受试者的粪便中所述标志物丰度不低于正常水平，是所述受试者未患有食物过敏或不易患食物过敏的指示；其中，所述正常水平为预先获知未患有食物过敏的机体粪便中所述肠道菌群丰度。发明人经过实验发现，通过检测受试者粪便样本中拟普雷沃菌属丰度，并与正常水平个体中拟普雷沃菌属丰度进行比较，可准确诊断食物过敏或是否易患食物过敏。
根据本发明的实施例，所述标志物包括选自拟普雷沃菌属、Colidextribacter、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39中的至少之一；所述受试者的粪便中所述标志物丰度低于正常水平，是所述受试者患有食物过敏或易患食物过敏的指示；所述受试者的粪便中所述标志物丰度不低于正常水平，是所述受试者未患有食物过敏或不易患食物过敏的指示；其中，所述正常水平为预先获知未患有食物过敏的机体粪便中所述肠道菌群丰度。发明人经过实验发现，当受试者的亲本为肥胖者时，通过检测受试者粪便样本中上述微生物的丰度，并与正常水平个体中的丰度进行比较，因此，该试剂盒可准确诊断亲本肥胖引起的子代的食物过敏或是否易患食物过敏。
根据本发明的实施例，所述标志物包括选自Candidatus_Saccharimonas、Enterorhabdus、理研菌属中的至少之一；所述受试者的粪便中所述标志物丰度高于正常水平，是所述受试者患有食物过敏或易患食物过敏的指示；所述受试者的粪便中所述标志物丰度不高于正常水平，是所述受试者未患有食物过敏或不易患食物过敏的指示；其中，所述正常水平为预先获知未患有食物过敏的机体粪便中所述肠道菌群丰度。发明人经过实验发现，当受试者的亲本为肥胖者时，通过检测受试者粪便样本中上述微生物的丰度，并与正常水平个体中的丰度进行比较，因此，该试剂盒可准确诊断亲本肥胖引起的子代的食物过敏或是否易患食物过敏。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种试剂盒。根据本发明的实施例，所述试剂盒包含用于检测前述标志物的试剂。发明人通过大量实验发现，采用试剂检测前述标志物，基于个体的标志物检测结果，可准确诊断食物过敏或是否易患食物过敏；并且，试剂盒具有检测准确度高、操作方便等优点。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种药物组合物。根据本发明的实施例，所述药物组合物包括：调控肠道菌群丰度的制剂，所述肠道菌群包括下列的至少之一：拟普雷沃菌属、Candidatus_Saccharimonas、Colidextribacter、Enterorhabdus、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39、理研菌属。发明人经过试验发现，通过制剂对过敏患者肠道中的上述微生物的丰度进行调节，可有效缓解或治疗患者的过敏症状。
根据本发明的实施例，所述调控肠道菌群丰度的制剂包括：拟普雷沃菌属、Colidextribacter和NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39中的至少之一。发明人经过大量实验发现，采用上述微生物制得的制剂，可提高施用者肠道内上述微生物的丰度，从而有效的缓解或治疗患者的过敏症状。
根据本发明的实施例，所述药物组合物进一步包括药物上可接受的辅料。
根据本发明的实施例，所述辅料包括选自填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂、芳香剂、助悬剂、水分调节剂、酸味剂以及助流剂的至少之一。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种前述药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗食物过敏。发明人经过实验发现，采用上述药物组合物可调控肠道菌群丰度，使患者的肠道菌群达到平衡状态，可有效缓解或治疗患者的过敏症状。
根据本发明的实施例，所述药物用于治疗亲本肥胖引起的子代食物过敏，所述制剂用于调控下列至少之一的肠道菌群丰度：拟普雷沃菌属和任选地Candidatus_Saccharimonas、Colidextribacter、Enterorhabdus、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39、理研菌属中的至少之一。
根据本发明的实施例，所述药物组合物为提高肠道菌群丰度的制剂，所述肠道菌群选自拟普雷沃菌属。由此，通过提高子代肠道中拟普雷沃菌属的丰度，可有效缓解和治疗过敏症状。
根据本发明的实施例，受试者的亲本肥胖，所述药物组合物为提高肠道菌群丰度的制剂，所述肠道菌群包括拟普雷沃菌属、Colidextribacter、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39中的至少之一。由此，通过提高亲本肥胖引起的子代肠道中上述微生物的丰度，可有效缓解和治疗亲本肥胖引起的子代过敏症状。
根据本发明的实施例，受试者的亲本肥胖，所述制剂为降低肠道菌群丰度的制剂，所述肠道菌群包括选自Candidatus_Saccharimonas、Enterorhabdus、理研菌属中的至少之一。由此，通过降低亲本肥胖引起的子代肠道中上述微生物的丰度，可有效缓解和治疗亲本肥胖引起的子代过敏症状。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种诊断食物过敏或易患食物过敏的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：检测待测样本中肠道菌群，得到上述标志物的丰度；基于所述标志物的丰度，确定所述待测样本所对应的待测者是否患有食物过敏或易患食物过敏。由此，可准确对待测者是否患有食物过敏或易患食物过敏进行诊断。
根据本发明的实施例，所述方法进一步用于诊断亲本肥胖引起的子代食物过敏或易患食物过敏，所述标志物进一步包括拟普雷沃菌属和任选地Candidatus_Saccharimonas、Colidextribacter、Enterorhabdus、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39、理研菌属中的至少之一。
根据本发明的实施例，所述标志物选自拟普雷沃菌属，所述待测者的粪便中所述标志物丰度低于正常水平，是所述待测者患有食物过敏或易患食物过敏的指示；所述待测者的粪便中所述标志物丰度不低于正常水平，是所述待测者未患有食物过敏或不易患食物过敏的指示；其中，所述正常水平为预先获知未患有食物过敏的机体粪便中所述肠道菌群丰度。
根据本发明的实施例，所述标志物包括选自拟普雷沃菌属、Colidextribacter、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39中的至少之一；所述待测者的粪便中所述标志物丰度低于正常水平，是所述待测者患有食物过敏或易患食物过敏的指示；所述待测者的粪便中所述标志物丰度不低于正常水平，是所述待测者未患有食物过敏或不易患食物过敏的指示；其中，所述正常水平为预先获知未患有食物过敏的机体粪便中所述肠道菌群丰度。
根据本发明的实施例，所述标志物包括选自Candidatus_Saccharimonas、Enterorhabdus、理研菌属中的至少之一；所述待测者的粪便中所述标志物丰度高于正常水平，是所述待测者患有食物过敏或易患食物过敏的指示；所述待测者的粪便中所述标志物丰度不高于正常水平，是所述待测者未患有食物过敏或不易患食物过敏的指示；其中，所述正常水平为预先获知未患有食物过敏的机体粪便中所述肠道菌群丰度。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种治疗食物过敏的方法。根据本发明的实施例，向受试者施用药学上可接受量的上述药物组合物。发明人经过实验发现，采用上述药物组合物可调控肠道菌群丰度的制剂，使患者的肠道菌群达到平衡状态，可有效缓解或治疗患者的过敏症状。
在本文中，术语“治疗(treatment或treating)”包括抑制、延迟、检查、缓解、减弱、限制、减少、压制、抵制或治愈疾病(术语“疾病”包括但不限于病状、病症、损伤或健康问题)，或者这种状态和/或这种状态的症状的发展、进程或进展。术语“疗法”在本文理解为与术语“治疗”同义。
在本文中，术语“防止(prevention)”、“预防(prophylaxis)”或“阻止(preclusion)”在本发明的背景下是同义使用的，并且是指避免或减少感染、经历、患有或具有疾病的风险或者这种状态和/或这种状态的症状的发展或进展。治疗或预防疾病可以是部分或完全的。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1为本发明实施例1中ND-BLG和HFD-BLG注射过敏原后第28天的过敏症状评分、腹泻率和肛温的测定结果；
图2为本发明实施例1中ND-BLG和HFD-BLG注射过敏原后第28天的血清中IgE和IgG1的含量的测定结果；
图3为本发明实施例1中不同组的PCoA分析图；
图4为本发明实施例1中不同组在属水平的相对丰度柱形图；
图5为本发明实施例1中ND-CON与ND-BLG相比相对丰度差异显著的菌与过敏生理指标的相关性分析图；
图6为本发明实施例1中ND-CON与HFD-BLG相比相对丰度差异显著的菌与过敏生理指标的相关性分析图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
造模与粪便样本的采集：将BALB/c小鼠分随机分为对照组及高脂组。对照组小鼠饲喂普通饲料(即为非肥胖亲本)，高脂组小鼠饲喂高脂饲料(即为肥胖亲本)，连续喂养10周至肥胖模型造模成功，将按雌鼠和雄鼠按2:1的比例合笼，次日清晨观察阴拴，查到阴拴的计为妊娠期第一天。仔鼠出生后，将每窝仔鼠标准化。子鼠长至4周龄后，选择雌性仔鼠进行过敏造模，分为四组，每组15只，分别为普通饮食母鼠子代对照组(ND-CON)、普通饮食母鼠子代致敏组(ND-BLG)、高脂饮食母鼠子代致敏组(HFD-BLG)。以β-乳球蛋白(BLG)为过敏原，在00、07、14、21天向致敏组小鼠腹腔注射200μL/每只鼠的过敏原，对照组注射生理盐水，28天后用50mg的BLG激发，记录子鼠的过敏症状评分，并且检测其腹泻率、肛温以及血清中IgE、IgG1的含量，过敏症状的评分标准参见表1，过敏症状评分、腹泻率、肛温以及血清中IgE、IgG1的含量的检测结果参见图1-2，其中ND-Sham为普通饮食母鼠子代假手术的对照组。图1(A)中，与ND-Sham组相比，ND-BLG和HFD-BLG组小鼠的过敏症状评分均显著增加(p<0.01)，但两组没有显著性差异；图1(B)中，与ND-Sham组相比，ND-BLG和HFD-BLG组小鼠的腹泻率显著增加(p<0.01)但两组没有显著性差异；图1(C)中，在激发后60min内，ND-BLG组和HFD-BLG组小鼠的肛温均低于ND-Sham组，但两组的肛温没有明显差别。图2(A)中，与ND-Sham组相比，ND-BLG和HFD-BLG组小鼠血清IgE的含量均显著升高(p<0.01)，表明BLG致敏导致小鼠血清中IgE的含量增加；HFD-BLG组小鼠血清IgE的含量显著高于ND-BLG组(p<0.05)，表明母亲肥胖导致子代小鼠过敏后血清中IgE的含量呈现更高水平。图2(B)中，与ND-Sham组相比，ND-BLG和HFD-BLG组小鼠血清IgG1的含量均显著升高(p<0.01)，表明BLG致敏导致小鼠血清中IgG1的含量增加；但HFD-BLG组和ND-BLG组小鼠血清IgG1的含量均无无显著性差异。因此，结果显示过敏子鼠模型构建成功。将子鼠处死，处死前一天采用灭菌过的EP管收集小鼠粪便，用液氮快速冷冻后立即于-80℃冻存，等待下一步分析。
表1小鼠过敏症状评分标准
Figure BDA0003534751120000091
粪便DNA的抽提：采用DNA抽提试剂盒对上述收集的小鼠粪便中的基因组DNA抽提，使用NanoDrop2000法检验DNA的纯度和浓度，通过琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性，检测参数为1％琼脂糖凝胶，5V/cm电压，电泳20min。
PCR扩增：确保样品DNA质检合格后，进行PCR扩增。选择引物为338F：ACTCCTACGGGAGGCAGCAG，806R：GGACTACHVGGGTWTCTAAT，其中，H可为A、C或T，V可为A、C或G，W可为A或T。采用TransGen AP221-02：TransStart Fastpfu DNA聚合酶，20μL反应体系：
5×FastPfu Buffer 4μL
2.5mM dNTPs 2μL
338F(5μM) 0.8μL
806R(5μM) 0.8μL
DNA聚合酶(FastPfu Polymerase) 0.4μL
牛血清蛋白(BSA) 0.2μL
模板DNA 10ng
PCR反应参数：a.1×(95℃条件下3min)；b.循环数×(95℃条件下30s；退火温度30s；72℃条件下45s)；c.72℃条件下10min，10℃直至最终。
文库构建：根据Illumina MiSeq平台标准操作步骤将纯化扩增后的片段构建PE2*300的文库。
16S rDNA高通量测序：利用Illumina公司的Miseq PE300平台进行测序(上海美吉生物医药科技有限公司)。
数据分析：为了保证数据的准确性与可靠性，需将测序得到的原始数据进行进一步处理。首先需要根据overlap关系进行拼接，同时对序列质量进行质控和过滤，区分样本后方可后续分析。采用Flash和Qiime软件对原始数据进行拼接与过滤，使用Uparse软件对样本OTU进行聚类分析，采用Mothur软件进行alpha多样性分析，通过多变量统计学方法主坐标分析判定样本的beta多样性。将ND-CON、ND-BLG和HFD-BLG组进行PCoA分析，具体参见图3。
组间差异菌的分析：分析物种的群落组成，绘制属水平上的群落组成柱形图，以直观展示样本中各优势物种的相对丰度，具体参见图4。采用单因素方差分析ANOVA的Kruskal-Wallis检验计算多组间统计学显著性。进一步选择各组间含量差异显著的菌，绘制相对丰度柱形图。
差异菌与过敏生理指标的相关性分析：通过ELISA试剂盒测定小鼠血清IgE和肥大细胞蛋白酶1的含量，将其含量与各组在属水平上的差异菌的相对丰度进行斯皮尔曼相关性分析，如图5所示，拟普雷沃菌属的相对丰度与MMCP-1含量呈显著负相关；如图6所示，与IgE和/或MMCP-1含量呈显著正相关的菌包括Candidatus_Saccharimonas、Enterorhabdus、理研菌属，提示这些菌可能与亲本肥胖引起的子代的食物过敏相关，与IgE和/或MMCP-1含量呈显著负相关的菌包括Colidextribacter、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39，并且在ND-CON和ND-BLG两组的上述菌中均不存在差异性。其中，图5和图6中，*代表p<0.05，**代表p<0.01。
实施例2：Alloprevotella tannerae菌株作用的验证
采用实施例1的方法构建普通饮食母鼠子代致敏小鼠，选择拟普雷沃菌属的代表性的菌株Alloprevotella tannerae，对小鼠进行灌胃，结果发现在食物过敏原致敏后，小鼠的过敏反应症状加重，因此，表明拟普雷沃菌属具有作为诊断普通饮食母鼠子代过敏标志物的潜力。
实施例3：Rikenella microfusus菌株作用的验证
采用实施例1的方法构建高脂饮食母鼠子代致敏小鼠，选择理研菌属的代表性的菌株Rikenella microfusus，对小鼠进行灌胃，结果发现在食物过敏原致敏后，小鼠的过敏反应症状加重，因此，表明理研菌属具有作为诊断高脂饮食母鼠子代过敏标志物的潜力。
实施例4
1、样品收集
分别采集普通母亲子代的非过敏和食物过敏患者，以及亲本为肥胖的食物过敏患者的粪便。其中，食物过敏的患者均经过医学诊断确认，收集受试者的粪便进行分析。所有符合以上标准的个体均进行详细的信息登记，以了解其病史、家族史、用药史及生活习惯等，且均签署了知情同意书。
普通母亲子代的非过敏组：母亲身体健康，无肥胖及其它代谢性疾病，子代身体健康，年龄为2-10岁，取样前2周内未服用过抗生素及其它免疫治疗类药物。排除标准：病人基本信息不完善、存在其它基础性疾病或免疫系统疾病。
普通母亲子代的食物过敏组：母亲身体健康，无肥胖及其它代谢性疾病，子代诊断为食物过敏，年龄为2-10岁，取样前2周内未服用过抗生素及其它免疫治疗类药物。排除标准：病人基本信息不完善、未能明确诊断、存在其它基础性疾病或免疫系统疾病。
肥胖母亲子代的食物过敏组：母亲诊断为肥胖，子代诊断为食物过敏，年龄为2-10岁，取样前2周内未服用过抗生素及其它免疫治疗类药物。排除标准：病人基本信息不完善、未能明确诊断、存在其它基础性疾病或免疫系统疾病。
2、16s rDNA测序测序
16S rDNA高通量测序：利用Illumina公司的Miseq PE300平台进行测序(上海美吉生物医药科技有限公司)。其他步骤具体参见实施例1。
3、数据分析
为了保证数据的准确性与可靠性，需将测序得到的原始数据进行进一步处理。首先需要根据overlap关系进行拼接，同时对序列质量进行质控和过滤，区分样本后方可后续分析。分析各组间相对丰度差异显著的菌，并与之前所确定的肠道菌群标志物进行对比。
4、实验结果
经分析后发现，各组样本肠道菌群的组成存在显著差异。与普通母亲子代的非过敏组相比，普通母亲子代的食物过敏组肠道菌群中拟普雷沃菌属的相对丰度显著下降；与普通母亲子代的非过敏组相比，肥胖母亲子代的食物过敏组肠道菌群拟普雷沃菌属Colidextribacter、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39的相对丰度菌显著下降，且Candidatus_Saccharimonas、Enterorhabdus、理研菌属的相对丰度均显著上升。
实施例5：生物标志物验证
为了验证本例得到的生物标志物，本例另外采用了独立的受试群体，即第一群体进行验证。第一群体中，各有30位非肥胖母亲子代的过敏患者和30位非肥胖母亲子代的非过敏患者。将拟普雷沃菌属作为生物标志物在第一群体样本中进行检测，得到该菌的相对丰度在非肥胖母亲子代的过敏患者中显著降低(p<0.05)，根据标志物预测的概率，得到ROC曲线，结果表明，拟普雷沃菌属作为生物标志物具有较高的鉴别能力，能够用于检测非肥胖母亲子代的过敏状况。
实施例6：生物标志物验证
为了验证本例得到的生物标志物，本例另外采用了独立的受试群体，即第二群体进行验证。第二群体中，各有30位肥胖母亲子代的过敏患者和30位肥胖母亲子代的非过敏患者。将理研菌属作为生物标志物在第二群体样本中进行检测，得到该菌的相对丰度在肥胖母亲子代的过敏患者中显著升高(p<0.05)，根据标志物预测的概率，得到ROC曲线，结果发现，理研菌属作为生物标志物具有较高的鉴别能力，能够用于检测肥胖母亲子代的过敏状况。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种标志物，其特征在于，包括下列的至少之一：
拟普雷沃菌属、Candidatus_Saccharimonas、Colidextribacter、Enterorhabdus、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39、理研菌属；
任选地，所述标志物进一步包括拟普雷沃菌属和任选地Candidatus_Saccharimonas、Colidextribacter、Enterorhabdus、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39、理研菌属中的至少之一。
2.肠道菌群作为标志物在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于诊断食物过敏或是否易患食物过敏，所述肠道菌群包括下列的至少之一：
拟普雷沃菌属、Candidatus_Saccharimonas、Colidextribacter、Enterorhabdus、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39、理研菌属；
任选地，所述试剂盒进一步用于诊断亲本肥胖引起的子代食物过敏或易患食物过敏，所述肠道菌群包括拟普雷沃菌属和任选地Candidatus_Saccharimonas、Colidextribacter、Enterorhabdus、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39、理研菌属中的至少之一。
3.试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂用于检测权利要求1所述的标志物，所述试剂盒用于诊断食物过敏或是否易患食物过敏；
任选地，所述试剂盒进一步用于诊断亲本肥胖引起的子代食物过敏或易患食物过敏。
4.根据权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述标志物选自拟普雷沃菌属；
所述受试者的粪便中所述标志物丰度低于正常水平，是所述受试者患有食物过敏或易患食物过敏的指示；
所述受试者的粪便中所述标志物丰度不低于正常水平，是所述受试者未患有食物过敏或不易患食物过敏的指示；
其中，所述正常水平为预先获知未患有食物过敏的机体粪便中所述肠道菌群丰度。
5.根据权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述标志物包括选自拟普雷沃菌属、Colidextribacter、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39中的至少之一；
所述受试者的粪便中所述标志物丰度低于正常水平，是所述受试者患有食物过敏或易患食物过敏的指示；
所述受试者的粪便中所述标志物丰度不低于正常水平，是所述受试者未患有食物过敏或不易患食物过敏的指示；
其中，所述正常水平为预先获知未患有食物过敏的机体粪便中所述肠道菌群丰度。
6.根据权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述标志物包括选自Candidatus_Saccharimonas、Enterorhabdus、理研菌属中的至少之一；
所述受试者的粪便中所述标志物丰度高于正常水平，是所述受试者患有食物过敏或易患食物过敏的指示；
所述受试者的粪便中所述标志物丰度不高于正常水平，是所述受试者未患有食物过敏或不易患食物过敏的指示；
其中，所述正常水平为预先获知未患有食物过敏的机体粪便中所述肠道菌群丰度。
7.一种试剂盒，其特征在于，包含用于检测权利要求1所述的标志物的试剂。
8.一种药物组合物，其特征在于，包括：调控肠道菌群丰度的制剂，所述肠道菌群包括下列的至少之一：
拟普雷沃菌属、Candidatus_Saccharimonas、Colidextribacter、Enterorhabdus、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39、理研菌属；
任选地，所述调控肠道菌群丰度的制剂包括：拟普雷沃菌属、Colidextribacter和NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39中的至少之一；
任选地，所述药物组合物进一步包括药物上可接受的辅料。
9.权利要求8所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗食物过敏；
任选地，所述药物用于治疗亲本肥胖引起的子代食物过敏。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述药物组合物为提高肠道菌群丰度的制剂，所述肠道菌群选自拟普雷沃菌属；
任选地，受试者的亲本肥胖，所述药物组合物为提高肠道菌群丰度的制剂，所述肠道菌群包括拟普雷沃菌属、Colidextribacter、NK4A214_group、norank_f_norank_o_RF39中的至少之一；
任选地，受试者的亲本肥胖，所述制剂为降低肠道菌群丰度的制剂，所述肠道菌群包括选自Candidatus_Saccharimonas、Enterorhabdus、理研菌属中的至少之一。
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